CN116327791A - 一种治疗和预防新型冠状病毒的组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及一种治疗和预防新型冠状病毒的组合物，该组合物的活性成分及其重量份为：厚朴酚55.7‑223份，伪麻黄碱10.7‑43份，番泻苷A 5.2‑20.6份，槲皮素4.3‑17.2份，苯甲酰芍药苷2.5‑10.3份，异甘草素0.43‑1.72份，黄芪甲苷1.3‑5.2份。该组合物具有治疗或预防新型冠状病毒的作用。

Description

一种治疗和预防新型冠状病毒的组合物及其制备方法
技术领域：本申请属于中药领域，尤其涉及治疗新型冠状病毒领域。
背景技术：
新型冠状病毒是一种高度传染性的包膜阳性-RNA病毒，可致呼吸道疾病、发热和肺炎的发生。中药复方(TCMFs)的研发得到了大力支持，广泛用于COVID-19的预防治疗。化湿败毒方为抗COVID-19著名中药复方，由14味中药组成，包括君药：麻黄，广藿香，石膏；臣药：苦杏仁，半夏，厚朴，苍术，草果，茯苓；佐药：黄芪，南葶苈子，大黄；使药：甘草。化湿败毒方，临床研究表现方药可促进SARS-CoV-2RNA清除，肺部混浊吸收，减轻炎症，改善流感样症状，具有潜在的抗病毒和抗炎活性。前期研究已初步鉴定了化湿败毒方中有217种化学成分。为了进一步研究化湿败毒方中的活性成分，通过前期的化学、药理学相关研究，确定其活性成分，并进行体内外药效学实验确定了活性成分的组合物，用于治疗和预防新型冠状病毒。
发明内容：为了得到化湿败毒方中的活性成分组合物，本申请通过大量的化学、药理学相关研究，最终筛选得到一种治疗和预防新型冠状病毒的组合物。
本申请涉及的治疗和预防新型冠状病毒组合物的活性成分及其重量份为：厚朴酚55.7-223份，伪麻黄碱10.7-43份，番泻苷A 5.2-20.6份，槲皮素4.3-17.2份，苯甲酰芍药苷2.5-10.3份，异甘草素0.43-1.72份，黄芪甲苷1.3-5.2份；或为厚朴酚100-180份，伪麻黄碱20-35份，番泻苷A 8.4-15.8份，槲皮素7.5-15.2份，苯甲酰芍药苷4.5-9.6份，异甘草素0.56-1.35份，黄芪甲苷2.1-4.5份；或为厚朴酚100份，伪麻黄碱20份，番泻苷A 8.4份，槲皮素7.5份，苯甲酰芍药苷4.5份，异甘草素0.56份，黄芪甲苷2.1份；或为厚朴酚180份，伪麻黄碱35份，番泻苷A 15.8份，槲皮素15.2份，苯甲酰芍药苷9.6份，异甘草素1.35份，黄芪甲苷4.5份；或为厚朴酚111.5份，伪麻黄碱21.5份，番泻苷A 10.3份，槲皮素8.6份，苯甲酰芍药苷5.15份，异甘草素0.86份，黄芪甲苷2.6份。
本申请所述组合物制成药物时的剂型为颗粒剂、片剂、胶囊、口服液或注射剂等。
本申请所述治疗和预防新型冠状病毒的药物，将上述组合物与药学上可接受的载体或赋形剂制成药物制剂；
本申请所述的组合物或药物在制备治疗或预防新型冠状病毒的药物中的应用。
本申请所述组合物具有预防或治疗新型冠状病毒的作用。
本申请所述厚朴酚，伪麻黄碱，番泻苷A，槲皮素，苯甲酰芍药苷，异甘草素，黄芪甲苷可由中药材采用本领域提取方法提取制备得到，或市售商品直接购买得到。
下面，通过具体实施例来阐述本申请的技术方案。
附图说明：
图1组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2(hACE2)转基因小鼠体重的影响
图2组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2(hACE2)转基因小鼠病毒载量的影响
图3组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中趋化因子MCP-1的影响
图4组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中趋化因子MIP-1α的影响
图5组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中趋化因子IP-10的影响
图6组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中炎症因子TNF-α的影响
图7组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中炎症因子IL-6的影响
图8组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中炎症因子IFN-γ的影响
图9组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中炎症因子IL-17的影响
图10组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中炎症因子IL-10的影响
图11组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中炎症因子IL-12的影响
图12组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织中炎症因子IL-1α的影响
图13 SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠模型对照组肺组织病理HE染色结果，表现为中度间质性肺炎(200×)
图14组合物对SARS-CoV-2感染人类ACE2转基因小鼠肺组织病理HE染色结果，表现为轻度间质性肺炎(200×)
具体实施方式：
实施例1：
一种组合物，其原料药为：厚朴酚111.5mg，伪麻黄碱21.5mg，番泻苷A 10.3mg，槲皮素8.6mg，苯甲酰芍药苷5.15mg，异甘草素0.86mg，黄芪甲苷2.6mg，组合物制备成口服液的制备方法包括：依次称取上述各活性成分，充分混匀，添加药学可接受的载体制备成口服液。
实施例2：
一种组合物，其原料药为：厚朴酚180mg，伪麻黄碱35mg，番泻苷A 15.8mg，槲皮素15.2mg，苯甲酰芍药苷9.6mg，异甘草素1.35mg，黄芪甲苷4.5mg，组合物制备成颗粒剂的制备方法包括：依次称取上述各活性成分，充分混匀，添加药学可接受的载体制备成颗粒剂。
实施例3：
一种组合物，其原料药为：厚朴酚100mg，伪麻黄碱20mg，番泻苷A 8.4mg，槲皮素7.5mg，苯甲酰芍药苷4.5mg，异甘草素0.56mg，黄芪甲苷2.1mg，组合物制备成胶囊剂的制备方法包括：依次称取上述各活性成分，充分混匀，添加药学可接受的载体制备成胶囊剂。
实施例4：
一种组合物，其原料药为：厚朴酚55.7mg，伪麻黄碱10.7mg，番泻苷A 5.2mg，槲皮素4.3mg，苯甲酰芍药苷2.5mg，异甘草素0.43mg，黄芪甲苷1.3mg，组合物制备成片剂的制备方法包括：依次称取上述各活性成分，充分混匀，添加药学可接受的载体制备成片剂。
实施例5：
一种组合物，其原料药为：厚朴酚223mg，伪麻黄碱43mg，番泻苷A 20.6mg，槲皮素17.2mg，苯甲酰芍药苷10.3mg，异甘草素1.72mg，黄芪甲苷5.2mg，组合物制备成注射剂的制备方法包括：依次称取上述各活性成分，充分混匀，添加药学可接受的载体制备成注射剂。
药效学实验1：组合物对新冠病毒性肺炎的效果
2.1材料与方法
伦理声明小鼠感染性操作均在生物安全三级实验室内进行，所有实验程序均经中国医学科学院医学实验动物研究所&北京协和医院比较医学中心动物保护与使用委员会批准(BLL21008)。
病毒：SARS-CoV-2/human/CHN/Delta-2/2021(Genbank：OM061695)由中国医学科学院医学实验动物研究所提供。
2.2动物实验
6～8周龄SPF级别hACE2小鼠由中国医学科学院医学实验动物科学研究所提供，小鼠随机分为两组(n＝6)，分别为空白溶剂组(空白溶剂灌胃组设为模型组)，组合物组(剂量为37.4mg/kg)(即本申请实施例1制备得到的口服液)，连续灌胃5天；组合物组灌胃给相应药物，空白溶剂组给予溶剂，连续灌胃给药5天。小鼠经麻醉后经鼻滴入SARS-CoV-2病毒1×105TCID50/ml，每天观察感染小鼠，记录体重、临床症状和对外部刺激的反应。感染后5天处死小鼠，取肺进行病毒载量分析、细胞因子和趋化因子检测、病理检查检测。
2.3检测
实时荧光定量PCR进行病毒载量分析
组织应用试剂盒RNeasy kit(Qiagen)提取总RNA并进行逆转录。qRT-PCR采用以下循环方案和引物进行：50℃2min，95℃2min，95℃15s，60℃30s，循环40次，此后运行溶解曲线程序95℃15s，60℃1min，95℃45s。用于检测SARS-CoV-2的引物如下：正向引物，5′-TCGTTTCGGAAGAGACAGGT-3′；反向引物，5′-GCGCAGTAAGGATGGCTAGT-3′。
细胞因子和趋化因子检测
使用LEGEND plexTM小鼠炎性因子试剂盒(13-plex)分析细胞因子和趋化因子。取25μL肺组织匀浆，与捕获微球共孵育，洗掉未结合的抗体和样本后，加入生物素标记的检测抗体，最后加入SA-PE与生物素结合发出荧光，通过流式仪分析每一种微球上PE的荧光强度来定量分析样本中可溶蛋白含量，采用LEGENDplexTM数据分析软件进行数据采集和分析。
2.4统计分析
所有数据均使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad software，Inc)进行分析。组间比较采用双尾非配对t检验。以*p＜0.05，**p＜0.01确定差异有统计学意义。
2.5结果：
模型对照组和治疗组在感染5天后(days post infection，dpi)的平均体重减轻率分别为：模型对照组感染后体重下降，5dpi体重平均下降率为4.86％；组合物组5dpi体重平均下降率为2.69％。(见附图1)。
模型对照组肺组织平均病毒载量为106.84copies/ml。组合物组肺组织平均病毒载量为106.35copies/ml，与模对照组比较，下降0.491g值。(见附图2)。
小鼠感染后5天，组合物组与模型组比较，肺组织中趋化因子MCP-1、MIP-1α、IP-10以及炎症因子TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-12、IL-17、IL-10、IL-1α均下降。(见附图3-12)。
在肺部病理改变方面，模型对照组表现为中度间质性肺炎，而组合物给药后显著改善肺部炎症(见附图14)。模型对照组6例(6/6)肺组织呈中度间质性肺炎改变(见附图13)；组合物组4例(4/6)肺组织呈轻度间质性肺炎改变，2例(2/6)肺组织呈中度间质性肺炎改变。
药效学实验2：组合物对人冠状病毒肺炎的效果
试验场所：中国中医科学院中药研究所生物安全实验室(ABSL-2实验室)
1.试验材料
1.1受试药物
本申请实施例1制备得到的组合物口服溶液。
1.2实验动物
SPF级ICR小鼠，雌雄各半，体质量13～15g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：110011211113827874/110011211113827747，许可证号：SCXK(京)2021-0006。饲养条件：ABSL-2实验室，-20Pa，温度22±1℃，湿度40～50％。
1.3病毒毒株及细胞
1.3.1病毒毒株：人类冠状病毒(HCoV-229E)，购于美国ATCC，本实验室传代，-80℃冰箱保存。
1.3.2细胞株：人胚肺上皮细胞(MRC-5)购自北京北纳创联生物技术研究院，本室传代，液氮保存。
1.4实验试剂
Figure SMS_1
1.5试验仪器
仪器名称 型号 生产厂家 仪器用途
A2型生物安全柜 Thermo MSC1.8 美国Thermo公司 动物感染、解剖
电子天平 YP1002 MAX100g 上海越平科学仪器有限公司 称量小鼠体重
智能人工气候箱 宁波江南仪器厂 RXZ-380B型 动物造模
电子分析天平 AR1140 MAX110g 美国Ohaus公司 称量药物、试剂
电子天平 AL204 MAX210g 梅特勒-托利多仪器公司 称量组织重量
IVC小鼠饲养笼 ZJ-4 苏州冯氏股份有限公司 饲养小鼠
Real-Time PCR仪 Applied biosystems QuantStudio 5 核酸检测
八连排管迷你离心机 Kylin-Bell Lab LX-300 核酸检测
迷你涡旋振荡器 海门市其林贝尔仪器公司 OL-901 核酸检测
多功能酶标仪 德国PerkinElmer公司 Enspire型 炎性因子检测
流式细胞仪 美国BD公司 FACSAriaTMllu型 T、B淋巴细胞检测
离心机 德国eppendorf公司 Centrifuge 5430 离心细胞
低温高速离心机 德国eppendorf公司 Eppendorf-5810R 离心血清及肺组织
2.试验方法
2.1剂量设计及药物配制
2.1.1受试药物：根据推荐剂量方案，将剂量换算为小鼠用量后，采用74.8mg/kg、37.4mg/kg、18.7mg/kg和9.35mg/kg。按0.2ml/10g体重/次灌胃给药，1次/日，连续3天。
2.2病毒传代
取已长成单层MRC-5细胞的25cm2培养瓶，倒掉培养液，用细胞维持液冲洗细胞面3遍后，加入HCoV-229E的病毒液200μl，置37℃5％CO2培养箱中培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，共72-96h，直至80％细胞出现明显病变(CPE)后，将细胞培养瓶置于-80℃低温冰箱冻存，病毒液反复冻融3次后，用于检测病毒毒力。
2.3病毒滴度测定
取已长成单层MRC-5细胞的培养板，倒掉培养液，用细胞维持液冲洗细胞面3遍后，按10倍稀释接种不同滴度的HCoV-229E病毒液，10-1～10-8共8个稀释度，100μl/孔，每个浓度4个复孔，同时设正常细胞对照。置37℃5％CO2培养箱中培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，共72～96h，记录各孔的细胞病变情况。按Reed-Muench法计算50％细胞病变浓度(TCID50)。
2.4分组及检测
取ICR小鼠80只，按体重等级随机分为正常对照组、单纯229E感染对照组、单纯寒湿刺激对照组(以下简称寒湿证模型组)、寒湿疫毒袭肺病证结合模型组(以下简称疫毒袭肺模型组)、组合物74.8mg/kg组、组合物37.4mg/kg组、组合物18.7mg/kg组、组合物9.35mg/kg组，每组10只，雌雄各半。除正常对照组和229E感染组外，其余小鼠每天置于90±3％相对湿度，无风，温度4±2℃的人工气候箱中，每次4小时刺激后取出，连续7天。
除正常对照组和寒湿证模型组外，其余小鼠于寒湿刺激第5天，用异氟烷轻度麻醉后，以100TCID50HCOV-229E病毒液滴鼻感染，50μl/只；正常对照组及寒湿证模型组用无病毒培养液滴鼻。感染当天各给药组开始给药，给药容积0.2ml/10g体重，每日1次，连续3天；正常对照组、寒湿证模型组、229E感染组、疫毒袭肺模型组在同等情况下给予蒸馏水灌胃。感染第4天称重后处死取肺称重观察并检测下列指标：
2.4.1肺指数及抑制率：小鼠处死取肺称重，按下述公式计算肺指数及肺指数抑制率
肺指数＝[肺湿重(g)/体重(g)]×100
Figure SMS_2
2.4.2肺组织中核酸检测(RT-PCR法)：小鼠解剖后将肺组织分装在裂解介质中，置于-80℃低温冰箱中保存，检测时从-80℃低温冰箱中取出，每管加入1ml TRIzol Reagent，置于震荡裂解仪上裂解20-25s，取下后室温孵育10min，4℃，12000rpm，离心10min；将澄清上清液移入新的1.5ml离心管中；加入0.2ml氯仿，盖紧管盖，用力摇动离心管15s，室温孵育2-3min至液体分层；4℃，12000rpm，离心15min；将透明上清液小心移入新的1.5ml离心管中，加入0.5ml异丙醇，混匀，室温孵育30min；4℃，12000rpm，离心10min；弃去上清，用1ml75％乙醇轻洗沉淀(使白色沉淀轻轻飘起)；4℃，7500rpm，离心5min；吸尽上清液，短暂干燥RNA沉淀5-10min；用30μl DEPC水溶解沉淀，-80℃低温冰箱保存。
对照品核酸处理：DEPC-H2O作为阴性对照。阳性对照品进行10、100、1000倍梯度稀释。
试剂配制：取n×18μl HCoV-229E核酸荧光PCR检测混合液，n×1μl内部对照品，与n×1μl RT-PCR酶(n为反应管数)，振荡混匀数秒，3000rpm离心数秒。
加样：取上述混合液20μl置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5μl分别加入PCR管中，盖紧管盖，离心数秒使所有液体置于底部，立即进行PCR扩增反应。
循环参数设置为：45℃×10min；95℃×15min；再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环40次；单点荧光检测在60℃，反应体系为25μl。
2.4.3小鼠血清胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)及肺组织中炎性因子检测(Elisa法)：血清样本：小鼠摘眼球取血，放置在室温静置30min，3000rpm离心10min，吸取上清至新的EP管内-20℃保存。检测时按照试剂盒说明书操作，酶标仪450nm吸光度检测各指标。
肺组织匀浆液样本：小鼠取肺组织称重后，分装收集小鼠肺组织，-4℃保存。称量50mg肺组织加入500μL生理盐水后，使用超声细胞破碎仪匀浆组织，使用低温高速离心机4℃1000rpm离心10分钟。吸取上清液后分装，保存于-80℃冰箱贮存备用。检测时按照试剂盒说明书操作，酶标仪450nm吸光度检测各指标。
2.4.4小鼠外周血T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞比例流式检测：小鼠摘眼球取血，向装有10ml 1×PBS的15ml离心管中加入3滴血(约150μl)，1600rpm，5min，室温离心；用移液管小心弃去上清，每管加入1ml红细胞裂解液重悬细胞沉淀，室温裂解约5-10min至液体从浑浊变澄清，加入10ml PBS终止裂解，2000rpm，5min，4℃离心，弃上清。细胞沉淀用10mlPBS重悬，2000rpm，5min，4℃离心，弃上清，用200μl封闭液(含5％FBS的PBS)重悬，并将细胞悬液转移至1.5ml ep管中，4℃封闭30min。避光于封闭液中配制流式抗体如下：FITC标记抗小鼠CD3e、PE标记抗小鼠CD19，PerCP-Cy5.5标记抗小鼠CD4、APC标记抗小鼠CD8a，每一管细胞的配制体积为：抗体各0.3μl，封闭液50μl。
细胞悬液4℃，2000rpm，离心5min，弃上清。加入流式抗体，每管50μl，4℃避光孵育30min，加入1ml PBS，4℃，2000rpm，离心5min，弃上清。用200μl含2％FBS的PBS重悬细胞，转移至流式管中，上机检测。
2.4.5小鼠肺组织病理检测
小鼠取肺后，将肺组织固定于10％福尔马林溶液中，48小时后取出流水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，HE染色，中性树胶封片，显微镜下观察、照相。光学显微镜下观察小鼠肺部有无病理形态学改变，进行组间比较。
镜下观察标准：
“-”：小鼠肺间质未见有瘀血、水肿，肺内细支气管周围未见有炎症渗出，组织结构正常。
“+”：小鼠肺间质未见有渗出，肺泡未见有增大，肺间质有散在瘀血，有少量渗出，细胞未见有增生；肺内细支气管未见有明显炎症渗出。结构正常。
“++”：小鼠肺组织肺泡未见有明显增大，肺间质有散在的红血球渗出，间质有小片状炎性渗出；细支气管周围有小片状炎性渗出，以淋巴细胞为主，少量嗜酸细胞。
“+++”：小鼠肺间质内有大片状炎症渗出，以组织细胞、淋巴细胞、嗜酸细胞为主，小血管内瘀血，血管膜变性，内膜细胞移位，排列紊乱。肺内细支气管周围炎症渗出。
“++++”：小鼠肺间质大面积出血、炎症渗出，细胞增生、肥大，淋巴细胞、嗜酸性细胞明显增多。小血管嗜酸性变，内膜细胞移位，排列紊乱，细胞大小不均匀，病变较重、较弥漫。肺内细支气管周围明显炎症渗出，以淋巴细胞为主。
2.5统计学方法：单因素方差分析组间比较。
3.结果
3.1组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠肺指数的影响
表1结果所示：小鼠在寒湿环境和人冠状病毒229E感染双重刺激后，肺指数明显升高，与正常组比较有显著性差异(p＜0.01)，小鼠给药后，组合物各剂量组均能显著将降低小鼠肺指数，与模型组比较有显著性差异(p＜0.01)，表明组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺证小鼠病证结合模型具有明显的治疗作用。
表1组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠肺指数的影响
Figure SMS_3
注：与正常对照组比较##p＜0.01；与疫毒袭肺模型组比较**p＜0.01。
3.2组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠肺部病毒载量的影响
表2结果显示：正常组和单纯寒湿刺激组的小鼠肺部几乎没有病毒核酸的表达，而229E感染组和寒湿疫毒袭肺组小鼠肺组织中病毒核酸高表达。给药后，组合物各剂量组均能不同程度降低小鼠肺组织中病毒载量，与模型组比较有显著性差异(p＜0.01)。
表2组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠肺组织病毒载量的影响
Figure SMS_4
注：与正常对照组比较##p＜0.01；与疫毒袭肺模型组比较**p＜0.01。
3.3组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠肺组织中炎症因子的影响
表3结果显示：小鼠经过寒湿+人冠状病毒229E双重刺激后，体内IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ均显著升高，与正常组比较有显著性差异(p＜0.01)，组合物各剂量组的各项炎症因子显著降低，与模型组比较有显著性差异(p＜0.01)。
表3组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠肺部炎症因子的影响
Figure SMS_5
注：与正常对照组比较##p＜0.01；与疫毒袭肺模型组比较**p＜0.01，*p＜0.05。
3.4组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠血清中证型因子的影响
表4结果显示：寒湿和人冠状病毒229E双重刺激会使小鼠胃动素含量明显升高、胃泌素含量明显降低。与正常组比较有显著性差异(p＜0.01)，小鼠给药后，组合物各剂量组均能够有效改善寒湿疫毒侵袭导致的胃肠道反应，有效改善胃动素、胃泌素紊乱的情况，与模型组比较有显著性差异(p＜0.01)。
表4组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠血清中证型因子的影响
Figure SMS_6
注：与正常对照组比较##p＜0.01；与疫毒袭肺模型组比较**p＜0.01。
3.5组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠外周血淋巴细胞的影响
表5结果显示：人冠状病毒寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠外周血CD8+T细胞比例显著降低，与正常组比较有显著性差异(p＜0.01)。给药干预后，组合物74.8mg/kg组能够显著缓解其降低，与模型组比较有显著性差异(p＜0.05，p＜0.01)。
表5组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠外周血淋巴细胞的影响
Figure SMS_7
注：与正常对照组比较##p＜0.01；与疫毒袭肺模型组比较*p＜0.05。
3.6组合物对人冠状病毒炎寒湿疫毒袭肺小鼠肺组织及支气管病变的影响
表6结果显示：病理学镜下观察，人冠状病毒寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠肺间质内有大片状炎症渗出，小血管内瘀血，血管膜变性，内膜细胞移位，排列紊乱，肺内细支气管周围炎症渗出明显，病变等级与正常对照组比较有显著性差异(p＜0.01)。小鼠给药后，组合物各剂量组能够减轻支气管炎症渗出状况，红肿相对消退，并且缓解病毒感染所致肺泡、肺间质渗出炎症及红血球渗出情况，使淤血病变相对减轻，病变等级与模型组比较有显著性差异(p＜0.05，p＜0.01)。
表6-1组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠支气管的影响
Figure SMS_8
表6-2组合物对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠肺组织的影响
Figure SMS_9
/>

Claims (8)

1.一种治疗和预防新型冠状病毒的组合物，其活性成分及其重量份为：厚朴酚55.7-223份，伪麻黄碱10.7-43份，番泻苷A 5.2-20.6份，槲皮素4.3-17.2份，苯甲酰芍药苷2.5-10.3份，异甘草素0.43-1.72份，黄芪甲苷1.3-5.2份。
2.如权利要求1所述的治疗和预防新型冠状病毒的组合物，其活性成分及其重量份为：厚朴酚100-180份，伪麻黄碱20-35份，番泻苷A 8.4-15.8份，槲皮素7.5-15.2份，苯甲酰芍药苷4.5-9.6份，异甘草素0.56-1.35份，黄芪甲苷2.1-4.5份。
3.如权利要求2所述的治疗和预防新型冠状病毒的组合物，其活性成分及其重量份为：厚朴酚100份，伪麻黄碱20份，番泻苷A 8.4份，槲皮素7.5份，苯甲酰芍药苷4.5份，异甘草素0.56份，黄芪甲苷2.1份。
4.如权利要求2所述的治疗和预防新型冠状病毒的组合物，其活性成分及其重量份为：厚朴酚180份，伪麻黄碱35份，番泻苷A 15.8份，槲皮素15.2份，苯甲酰芍药苷9.6份，异甘草素1.35份，黄芪甲苷4.5份。
5.如权利要求2所述的治疗和预防新型冠状病毒的组合物，其活性成分及其重量份为：厚朴酚111.5份，伪麻黄碱21.5份，番泻苷A 10.3份，槲皮素8.6份，苯甲酰芍药苷5.15份，异甘草素0.86份，黄芪甲苷2.6份。
6.如权利要求1-5任一项所述的治疗和预防新型冠状病毒的组合物，该组合物制成药物的剂型为颗粒剂、片剂、胶囊、口服液或注射剂。
7.一种治疗和预防新型冠状病毒的药物，其特征为，将权利要求1-5任一项所述的治疗和预防新型冠状病毒的组合物与药学上可接受的载体或赋形剂制成药物制剂。
8.权利要求1-6中任意一项所述的组合物或权利要求7所述的药物在制备治疗或预防新型冠状病毒的药物中的应用。
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