CN116287211A - STRA6和miR-1249-5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用 - Google Patents

STRA6和miR-1249-5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种STRA6和miR‑1249‑5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用，涉及生物技术领域。经发明人研究发现，子宫腺肌症患者血管平滑肌细胞膜上维A酸转运相关蛋白STRA6特异性高表达，而进一步研究发现STRA6的表达由miR‑1249‑5p介导，在雌激素作用下，miR‑1249‑5p可以直接靶向STRA6基因3'‑UTR调控细胞内维甲酸代谢影响血管平滑肌功能参与子宫腺肌症发生。因此，通过检测STRA6基因和miR‑1249‑5p的表达量能够实现子宫腺肌症的诊断。

Description

STRA6和miR-1249-5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种STRA6和miR-1249-5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用。
背景技术
近年来，子宫腺肌症(adenomyosis,AM)的发生率明显上升，在30-50岁妇女中发生率为15-50％，在子宫内膜异位症不孕患者中发生率高达90％。腺肌症目前缺乏有效的治疗方法，诊断标准非常有限，常常诊断会延误，有的甚至长达10年之久。鉴此，阐明AM的发生机制对改善患者临床症状，提高妊娠率并挖掘有效的靶向治疗药物具有重要的理论意义和临床应用价值。
最近的研究结果表明MicroRNAs(miRs)在发育，信号传导，凋亡及细胞增殖发生等方面起到很重要的调节作用。研究已经证实组织中存在几百种的miRNAs，这些小分子RNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性。现有成熟技术，包括定性和定量miRNA分子的技术表明利用miRNAs作为分子生物标志物的方法比传统的特异蛋白分子标记方法将更加有效，为生物标志物开拓了新视角。miRs在血管损伤，粥样硬化等血管性病变过程中通过调节其目标基因来调控血管的收缩和合成功能。Kuokkanen等证实人子宫内膜中雌激素参与了miRNA表达调控。
然而对于子宫腺肌症的检测上，仍存在以下缺点：
1、现有研究基于血清学miRNAs作为生物标志物进行诊断和监测AM发生，但是基于特定miRNAs及靶向蛋白用于子宫腺肌症检测、诊断和治疗相关药物潜在靶点的开发尚未见报道；
2、现有公开单一基因及其表达产物作为子宫疾病诊治的分子标志物。通过检测组织中该基因及其表达产物的含量可以判断受试者是否患有子宫疾病或者诊断受试者是否存在患有子宫相关疾病的风险。这种方法具有较为显著的局限性，细胞生理代谢调控精密，往往受到细胞内外环境因素等影响。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供STRA6在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用。
本发明的第二目的在于提供miR-1249-5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用。
本发明的第三目的在于提供一种用于诊断子宫腺肌症的试剂，以解决上述问题中的至少一种。
本发明的第四目的在于提供STRA6的抑制剂在制备治疗子宫腺肌症的药物中的应用。
本发明的第五目的在于提供一种治疗子宫腺肌症的药物。
第一方面，本发明提供了STRA6在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用，所述STRA6为STRA6基因的mRNA或蛋白。
作为进一步技术方案，所述产品包括试剂或试剂盒，通过检测受试者体内STRA6基因的mRNA或蛋白的表达量来诊断子宫腺肌症。
第二方面，本发明提供了miR-1249-5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用，所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
作为进一步技术方案，所述产品包括试剂或试剂盒，通过检测受试者体内miR-1249-5p的表达量来诊断子宫腺肌症。
第三方面，本发明提供了一种用于诊断子宫腺肌症的试剂，所述试剂包括用于检测STRA6基因的mRNA的引物、用于检测STRA6基因的蛋白的生物大分子或用于检测miR-1249-5p的引物中的至少一种；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
作为进一步技术方案，所述生物大分子包括抗体或抗体功能片段。
第四方面，本发明提供了STRA6的抑制剂在制备治疗子宫腺肌症的药物中的应用，所述抑制剂抑制STRA6基因的表达。
作为进一步技术方案，所述抑制剂包括如下Ⅰ)-Ⅱ)中的至少一种：
Ⅰ)miR-1249-5p；
Ⅱ)含有miR-1249-5p的编码基因的重组载体；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
第五方面，本发明提供了一种治疗子宫腺肌症的药物，所述药物包括抑制STRA6基因表达的抑制剂。
作为进一步技术方案，所述抑制剂包括如下Ⅰ)-Ⅱ)中的至少一种：
Ⅰ)miR-1249-5p；
Ⅱ)含有miR-1249-5p的编码基因的重组载体；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
经发明人研究发现，子宫腺肌症(AM)患者血管平滑肌细胞膜上维A酸(RetinoicAcid，RA)转运相关蛋白STRA6(stimulated by retinoic acid gene6homolog)特异性高表达，而进一步研究发现STRA6的表达由miR-1249-5p介导，在雌激素作用下，miR-1249-5p可以直接靶向STRA6基因3'-UTR调控细胞内维甲酸代谢影响血管平滑肌功能参与AM发生。因此，通过检测STRA6基因和miR-1249-5p的表达量能够实现子宫腺肌症的诊断。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为差异miRNA火山图；
图2为差异miRNA聚类热图；
图3为差异RNA火山图；
图4为差异mRNA差异表达基因通路示意图；
图5为250nM雌激素处理HA-VSMC差异miRNA与mRNA互相作用；
图6为荧光素酶报告基因实验检测miR-1249-5p与STRA6的靶向作用；
图7为STRA6在AM患者子宫内膜螺旋动脉血管平滑肌细胞中表达检测；
图8为小鼠实验子宫解剖图；
图9小鼠实验子宫组织HE染色图；
图10小鼠实验子宫免疫组化染色图。
具体实施方式
下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
第一方面，本发明提供了STRA6在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用，所述STRA6为STRA6基因的mRNA或蛋白。
经发明人研究发现，与健康受试者相比，STRA6基因的mRNA或蛋白在子宫腺肌症患者中差异表达上调，STRA6基因的mRNA或蛋白的表达量与子宫腺肌症相关，通过检测STRA6基因的mRNA或蛋白的表达量能够实现多囊卵巢综合征的诊断。
在一些优选的实施方式中，所述产品包括试剂或试剂盒，通过检测受试者体内STRA6基因的mRNA或蛋白的表达量来诊断子宫腺肌症。
第二方面，本发明提供了miR-1249-5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用，所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示：
GGGAGGAGGGAGGAGATGGGCCAAGTTCCCTCTGGCTGGAACG CCCTTCCCCCCCTTCTTCACCTG(SEQ ID NO.1)。
经发明人研究发现，STRA6的表达由miR-1249-5p介导，与健康受试者相比，miR-1249-5p在子宫腺肌症患者中差异表达下调，miR-1249-5p的表达量与子宫腺肌症相关，通过检测STRA6基因的mRNA或蛋白的表达量能够实现多囊卵巢综合征的诊断。
在一些优选的实施方式中，所述产品包括试剂或试剂盒，通过检测受试者体内miR-1249-5p的表达量来诊断子宫腺肌症。
第三方面，本发明提供了一种用于诊断子宫腺肌症的试剂，所述试剂包括用于检测STRA6基因的mRNA的引物、用于检测STRA6基因的蛋白的生物大分子或用于检测miR-1249-5p的引物中的至少一种；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明提供的试剂通过特异性识别STRA6基因的mRNA的引物以实现对STRA6基因mRNA表达量的检测，通过特异性识别STRA6基因的蛋白的生物大分子以实现对STRA6基因蛋白表达量的检测，或者通过特异性识别miR-1249-5p的引物以实现对miR-1249-5p表达量的检测。本发明提供的试剂通过检测STRA6基因的mRNA的表达量、STRA6基因的蛋白的表达量或者miR-1249-5p的表达量来诊断子宫腺肌症。
在一些优选的实施方式中，miR-1249-5p的扩增引物如下：
hsa-mir-1249(40168-1)-P1：
TGTGGAAAGGACGCGGGATCCCAGGACTTTGGTGGATGTCGG(SEQ ID NO.2)；
hsa-mir-1249(40168-1)-P2：
CAGCGGTTTAAACTTAAGCTAAAAAAGAGGCAAAAGGGATCCAC AG(SEQ ID NO.3)。
蛋白的检测剂可选用本领域技术人员所公知的试剂，例如能够与该蛋白发生抗原抗体反应，且标记有荧光标记的生物大分子等。
在一些优选的实施方式中，所述生物大分子包括抗体或抗体功能片段。
第四方面，本发明提供了STRA6的抑制剂在制备治疗子宫腺肌症的药物中的应用，所述抑制剂抑制STRA6基因的表达。
经发明人研究发现，抑制STRA6基因的表达有助于促进子宫腺肌症的治疗。
在一些优选的实施方式中，所述抑制剂包括如下Ⅰ)-Ⅱ)中的至少一种：
Ⅰ)miR-1249-5p；
Ⅱ)含有miR-1249-5p的编码基因的重组载体；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
经发明人研究发现，STRA6的表达由miR-1249-5p介导，miR-1249-5p为STRA6的抑制剂。
需要说明的是，本发明中，STRA6的抑制剂，可以包括miR-1249-5p、含有miR-1249-5p的编码基因的重组病毒或含有miR-1249-5p的编码基因的重组载体中的一种或两种或以上。
第五方面，本发明提供了一种治疗子宫腺肌症的药物，所述药物包括抑制STRA6基因表达的抑制剂。
经发明人研究发现，抑制STRA6基因的表达有助于促进子宫腺肌症的治疗，本发明提供的药物包括抑制STRA6基因表达的抑制剂，能够抑制STRA6基因的表达，因此能够用于子宫腺肌症的治疗。
在一些优选的实施方式中，所述抑制剂包括如下Ⅰ)-Ⅱ)中的至少一种：
Ⅰ)miR-1249-5p；
Ⅱ)含有miR-1249-5p的编码基因的重组载体；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
需要说明的是，本发明提供的治疗子宫腺肌症的药物，可以包括miR-1249-5p、含有miR-1249-5p的编码基因的重组病毒或含有miR-1249-5p的编码基因的重组载体中的一种或两种或以上。
下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1
材料与方法
一、资料来源
收集2019年10月-2020年11月期间于北京协和医院接受子宫切除手术治疗的患者的子宫组织，其中AM患者8名为研究组，对照组7名。AM患者纳入标准：①生育年龄女性，月经规律；②经全子宫切除手术及病理证实为子宫腺肌病患者；③术前3月内无激素治疗病史；④签署知情同意书。排除标准：①绝经后女性；②不能除外恶性疾病者；③同时合并其他激素相关性疾病。对照组的纳入标准:①已婚的生育年龄女性，月经规律；②无痛经、性交痛及慢性盆腔痛等症状；③育龄期CINIII及宫颈原位癌需行全子宫切除的患者；④术前3月内未应用激素类药物。排除标准：①绝经后女性；②术前有盆腔疼痛症状；③不能除外其他激素相关性疾病。
本研究入选患者均签署了知情同意书，实验流程获得北京协和医院学术与伦理学委员会批准。
二、研究方法
1.细胞培养：胸主动脉平滑肌细胞系(HA-VSMC)购自美国ATCC公司。将HA-VSMC接种在含体积分数10％胎牛血清、100mg/L链霉素、100kU/L青霉素的DNEM培养基中，分别设置0、250nmol/L雌激素处理组，其中0nmol/L雌激素为对照组，置于37℃、含体积分数5％CO2的细胞培养箱中孵育24小时后收集细胞进行相关实验。
2.子宫组织收集：所取组织用磷酸盐缓冲液洗去表面血污，将子宫螺旋动脉从子宫组织中分离出来，清除干净结缔组织和脂肪组织。于体积分数10％中性福尔马林固定液中固定4-6小时。常规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋。
3.免疫组织化学检测方法：将石蜡包埋的子宫组织做4μm厚度切片，常规脱蜡，并用体积分数3％过氧化氢15分钟封闭内源性过氧化物酶，体积分数10％山羊血清封闭30分钟，阻断非特异性染色。EDTA抗原修复液微波加热处理。滴加抗STRA6(Abcam，1:200)多克隆抗体，37℃孵育1小时。滴加辣根过氧化物酶标记的抗兔二抗，37℃孵育30分钟。滴加DAB工作液显微镜下显色。苏木素复染，氨水返蓝，梯度酒精脱水，中性树胶封片，显微镜下观察并拍照。由2位经验丰富的病理医师进行双盲阅片，每张切片上观察5个高倍视野(X200)，分别对镜下阳性细胞的百分比和染色强度给予评分。
4.miRNA-seq建库：提取HA-VSMC细胞总RNA，Qubit精确定量浓度；Nanodrop检测OD260/280和OD260/230的比值分析RNA纯度；保证各组RNA样品浓度≥200ng/μL，总量≥2μg，OD260/280值在1.8～2.2之间，OD260/230≥2.0，且Agilent 2100Bioanalyzer检测的RIN≥7，以保证下游高质量small RNA-seq文库的构建。行3’和5’接头的连接；逆转录合成一链cDNA；PCR扩增、引入特异性标签；PAGE分离纯化miRNA文库；利用高分辨率的聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)来分离插入片段大小在22-24nt的miRNA文库：PAGE胶块切割回收文库产物。应用Qubit准确定量文库浓度，应用Agilent 2100Bioanalyzer确定文库片段大小分布，采用Illumina高通量测序平台，双端测序策略对文库进行测序。对原始测序序列进行过滤后用于后续分析。
5.mRNA-seq建库:取适量总RNA从中去除rRNA后纯化、片段化；逆转录合成一链cDNA；向合成一链cDNA的体系中加入二链合成预混体系3’末端加“A”反应；测序接头连接；文库片段筛选，PCR扩增cDNA文库后磁珠纯化。应用Qubit准确定量文库浓度，应用Agilent2100Bioanalyzer确定文库片段大小分布后上机测序。采用Illumina高通量测序平台，2×150bp双端测序策略对文库进行测序。测序得到的原始测序序列，里面含有一些带接头的、低质量的reads，为了保证信息分析质量，使用TrimGalore方法(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/trim_galore/)对raw reads进行过滤，得到clean reads用于后续分析。
6.共转染：使用共转染试剂lipo3000将miR-1249-5p过表达质粒或miR-1249-5p空载质粒、靶基因野生型(STRA6野生型)或突变型(STRA6突变型)以及海肾素荧光载体转染至293T细胞中，24-28后在荧光显微镜下观察转染效率。
接种细胞：取对数生长期细胞(生长状态良好)均匀接种于24孔板中，孔板置于细胞培养箱(37℃、5％的CO2)中培养24h，使转染时细胞贴壁良好且密度达50％左右；
稀释Lipo3000：每孔用25ul Opti稀释1.5ul Lipo3000，充分混匀。
稀释质粒：每孔用25ul Opti-MEM稀释质粒(miR-1249-5p过表达质粒或miR-1249-5p空载质粒1ug、靶基因野生型或突变型0.2ug、海肾素荧光载体0.04ug)，再加2ulLipo3000。
制备混合液：将稀释的质粒加入到稀释的Lipo3000中，轻轻吹打混匀，室温孵育15min。
将24孔板中的液体吸出，用PBS清洗2次，吸净24孔板中液体，加入无双抗无血清培养基。
将转染复合物依次加入预先接种好细胞的24孔板中，每孔最终反应体系500ul，轻轻混匀；6-8小时换液，换成含双抗和血清的完全培养基。
将24孔板置于细胞培养箱(37℃、5％的CO2)中培养。
7.Luciferase检测
配制Dual-
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萤光素酶检测试剂C：Dual-/>
Figure BDA0004143910650000102
萤光素酶缓冲液+Dual-/>
Figure BDA0004143910650000103
萤光素酶底物。
配制Dual-
Figure BDA0004143910650000104
Stop&/>
Figure BDA0004143910650000105
检测试剂D：实验前，计算所需的Dual-/>
Figure BDA0004143910650000106
Stop&
Figure BDA0004143910650000107
检测试剂的量。用Dual-/>
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Figure BDA0004143910650000109
缓冲液以1:100将Dual-/>
Figure BDA00041439106500001010
Stop&/>
Figure BDA00041439106500001011
底物稀释至一个新的容器中。
将培养有细胞的24孔从培养箱中取出，放置几分钟使培养板平衡至室温。
检测萤火虫萤光素酶活性：用移液器向各孔中加入与培养基等体积的C检测试剂(对于24孔板向生长在300μl培养基的细胞中加入300μl C检测试剂)，混合均匀。待细胞充分裂解后，将所有样品转移至不透光的96孔白板中检测。
检测海肾萤光素酶活性：向各孔中加入与初始培养基体积相同的D检测试剂75μl，D检测试剂需在加入C检测试剂之后4小时以内加入。等待至少10分钟后检测海肾萤光素酶信号。
计算各孔主报告基因与内参报告基因信号的比值。使用对照组的比值将各实验组的比值进行归一化。
三、统计学方法
结果采用SPSS 24.0统计软件进行分析。计量资料以均数±标准差
Figure BDA0004143910650000112
表示。各组间采用单因素方差分析比较。P≤0.05为差异具有统计学意义。
结果
一、miRNA-seq差异表达分析
1.根据已知的和新预测的miRNA的表达水平，利用R软件包DESeq2筛选出差异表达的miRNA，P<0.05且log2(fold change)≠0被定义为两组之间的差异表达miRNA，其中log2(fold change)>0标记为上调miRNA(Up)；log2(fold change)<0标记为下调miRNA(Down)，具有显著差异的miRNA数目统计如下表所示。见表1。
表1显著差异的miRNA数目在HA-VSMC各组间的统计
Figure BDA0004143910650000111
250nM雌激素处理组较对照组比较，共有56个miRNA发生显著性变化，其中上调32个，下调24个；上调包括ocu-miR-660-3p，ocu-miR-328-3p,ocu-miR-29c-3p等；下调包括ocu-miR-1249-5p，ocu-miR-671-5p，ocu-miR-365-5p，ocu-miR-152-5p等。结果如图1何图2所示。其中图1为差异miRNA火山图，红色点表示处理组相对于对照样本control表达量上调的miRNA，绿色点表示下调miRNA；图2为差异miRNA聚类热图，红色表示基因在样品中高表达，绿色表示基因在样品低表达。
二、mRNA-seq差异表达分析
采用Deseq2软件分析差case组(处理组)与control组(对照组)的差异表达基因。Type为筛选结果，满足P<0.05且|log2(fold change)|>1的为差异基因，其中log2(foldchange)>1标记为上调基因(Up)；log2(fold change)<-1标记为下调基因(Down)，显著差异基因数目见表2。
表2.显著差异基因数目统计表
Figure BDA0004143910650000121
250nM雌激素处理组较对照组比较，共有89个mRNA发生显著性变化，其中上调47个，下调42个；上调包括LGALS2、ETV3L、WDR17、STRA6等；下调包括NRXN2、SRL、PTPRO等。结果如图3和图4所示。其中图3为差异RNA火山图，红色点表示处理组相对于对照样本control表达量上调的mRNA，绿色点表示下调mRNA；图4为差异mRNA差异表达基因通路示意图，红色表示处理组相对于对照样本control差异显著基因，纵坐标表示差异基因所在通路。
三、差异miRNA与差异RNA调控互作预测
ocu-miR-1249-5p随着雌激素浓度的增加该miRNA的表达量越低，其靶向基因STRA6 mRNA表达量随着浓度的增加而增加。软件预测miR-1249-5p与STRA6结合位置及结合力大小的结果如图5所示，表明miR-1249-5p与STRA6理论存在靶向调控关系。
四、miR-1249-5p与STRA6存在靶向作用
采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-1249-5p与STRA6 3'-UTR靶向关系。结果显示，靶基因野生型对照组和靶基因野生型miR-1249-5p质粒组的标准化荧光强度比较，差异具有统计学意义(P<0.05)，靶基因突变型对照组和靶基因突变型miR-1249-5p质粒组的标准化荧光强度比较，差异不具有统计学意义(P＞0.05)，即miR-1249-5p与STRA6存在靶向作用。结果如图6所示。
五、ocu-miR-1249-5p靶向STRA6基因在AM患者子宫内膜动脉的表达情况
免疫组织化学染色显示，与对照组(Control)相比，AM患者子宫内膜螺旋动脉血管平滑肌细胞中STRA6的表达明显增加，具有统计学差异(P＜0.05)，结果如图7所示。
六、腺肌症动物模型构建
怀孕的ICR小鼠(孕龄约15-16天)分娩后，每只母鼠及其幼鼠关在同一个笼子里。从出生后第1天到第4天(PNDs)，通过口服管饲法，每天给予雌性新生儿1μg/g体重的他莫昔芬(TAM)，混悬于花生油/卵磷脂/炼乳混合物(2:0.2:3v/v/v)或相同体积的溶剂中。出生后第5-7周，向小鼠的两个子宫角连续注射10μl SiRNA1，记为adenomyosis+stra6 siRNA1组(siRNA1干扰腺肌症模型组)，向小鼠的两个子宫角连续注射10μl SiRNA2，记为adenomyosis+stra6 siRNA2组(siRNA2干扰腺肌症模型组)。每周2次，持续3周。观察STRA6干扰能否改善腺肌症发生。所有小鼠在出生后第8周处死，结果发现siRNA干扰组子宫增厚情况明显改善。相较于对照组小鼠子宫，子宫腺肌病小鼠的子宫腔增大，黏膜层相对增厚，内环和外纵平滑肌肌层均变薄肌层内可见子宫腺。小RNA干扰组处理后，子宫腔有缩小，肌层完整性增加，肌间腺体数量减少，表明通过小RNA抑制STRA6，对于子宫腺肌症具有一定的治疗作用。结果如图8，9，10所示。图8为小鼠实验子宫解剖图，从左至右分别为对照组，腺肌症模型组，siRNA1干扰腺肌症模型组和siRNA2干扰腺肌症模型组(蓝色箭头指向子宫组织)。
图9为小鼠实验子宫组织HE染色图，分别取自对照组，腺肌症模型组，siRNA1干扰腺肌症模型组和siRNA2干扰腺肌症模型组。EM代表子宫内膜，MM代表子宫肌层。分别观察肌间子宫腺体的数量及子宫腺体浸润肌层的深度。
图10为小鼠实验子宫免疫组化染色图，分别取自对照组，腺肌症模型组，siRNA1干扰腺肌症模型组和siRNA2干扰腺肌症模型组。用CK8，α-SMA和E-cadherin作为抗体杂交，分别观察各蛋白阳性富集面积与体积大小。
SiRNA1的序列为：UAGGUUGCUGAAGAGGACC(dT)(dT)(SEQ ID NO.4)；
SiRNA2的序列为：UUGUACUGGAUACCAAAGG(dT)(dT)(SEQ ID NO.5)。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.STRA6在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用，其特征在于，所述STRA6为STRA6基因的mRNA或蛋白。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂或试剂盒，通过检测受试者体内STRA6基因的mRNA或蛋白的表达量来诊断子宫腺肌症。
3.miR-1249-5p在制备诊断子宫腺肌症的产品中的应用，其特征在于，所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂或试剂盒，通过检测受试者体内miR-1249-5p的表达量来诊断子宫腺肌症。
5.一种用于诊断子宫腺肌症的试剂，其特征在于，所述试剂包括用于检测STRA6基因的mRNA的引物、用于检测STRA6基因的蛋白的生物大分子或用于检测miR-1249-5p的引物中的至少一种；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，所述生物大分子包括抗体或抗体功能片段。
7.STRA6的抑制剂在制备治疗子宫腺肌症的药物中的应用，其特征在于，所述抑制剂抑制STRA6基因的表达。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抑制剂包括如下Ⅰ)-Ⅱ)中的至少一种：
Ⅰ)miR-1249-5p；
Ⅱ)含有miR-1249-5p的编码基因的重组载体；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
9.一种治疗子宫腺肌症的药物，其特征在于，所述药物包括抑制STRA6基因表达的抑制剂。
10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述抑制剂包括如下Ⅰ)-Ⅱ)中的至少一种：
Ⅰ)miR-1249-5p；
Ⅱ)含有miR-1249-5p的编码基因的重组载体；
所述miR-1249-5p的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
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