CN116286516A - 一种耐锰、高效除锰细菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物技术领域，公开了一种耐锰、高效除锰细菌及其应用，耐锰、高效除锰细菌的分类命名为SerratiamarcescensQZB‑1，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo:61777，保藏日期为2021年07月21日；耐锰、高效除锰细菌QZB‑1从广西酸性红壤中筛选纯化得到；在pH5.5，35℃和150r/min条件下培养48h后，耐锰、高效除锰细菌株QZB‑1对18mMMn(II)的去除率最优。本发明筛选纯化得到的耐锰、高效除锰细菌QZB‑1可耐受高达364mM的Mn(II)，对18mMMn(II)的去除率高达98.4％。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种耐锰、高效除锰细菌及其应用。
背景技术
目前，锰占地壳岩石圈元素含量的0.085％，故正常土壤中Mn(II)的含量极低，但在酸性土壤(pH<5.5)广泛分布的南方，土壤中溶解出的过量Mn(II)会破坏植物细胞代谢，阻止其他矿物质元素的吸收和转移，成为限制作物正常生长发育和产量的重要因子之一。近年来，南方农田土壤酸化程度逐渐加大，土壤中Mn(II)含量不断增加，土壤锰毒胁迫程度不断加深，寻找合适的解毒方法迫在眉睫。
传统的重金属修复方法如化学沉淀法、离子交换法、过滤法、膜分离法以及氧化还原法等具有成本高，处理效果不稳定，且易造成二次污染的缺点。生物修复技术具有成本低，操作简单，处理效果好且对环境无二次污染的优点，不仅能够快速有效地除去土壤中的重金属且不会改变环境的理化性质，是一种环保的修复技术。已有研究发现，长期处于重金属污染土壤中的微生物不仅可以抵抗重金属的胁迫，还会通过表面吸附、胞外沉淀以及胞内解毒等作用减少土壤重金属含量，达到修复污染的作用。由于微生物繁殖速度快，生物量大，可快速去除重金属，因此微生物修复技术成为近年研究的热点。
微生物可通过吸附或将Mn(II)氧化为锰氧化物沉淀从而降低土壤中Mn(II)的毒性。不同细菌转化锰的机制不同，包括表面吸附、直接氧化和间接氧化。目前认为可能参与锰氧化催化的酶主要有多铜氧化酶、锰过氧化物酶和锰过氧化氢酶，由于耐锰微生物种类复杂多样，其体内氧化催化的酶种类不尽相同，因此关于耐锰菌对Mn(II)的生物氧化机制尚无统一结论。孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、土微菌属(Pedomicrobium)、披毛菌属(Gallionella)、纤发菌属(Leptothrix)和氨基杆菌属(Aminobacter)等属中陆续报道发现了一些可高效去除Mn(II)的耐锰细菌。其中仅有假单胞菌属、芽孢杆菌属、土微菌属和纤发菌属细菌作为模式菌株。因此，筛选新型耐锰细菌并探索氧化Mn(II)机制显得尤为重要。
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：
(1)传统重金属修复方法如化学沉淀法、离子交换法、过滤法、膜分离法以及氧化还原法等具有成本高，处理效果不稳定，且易造成二次污染的缺点。
(2)由于耐锰微生物种类复杂多样，其体内氧化催化的酶种类不尽相同，因此现有技术中关于耐锰菌对Mn(II)的生物氧化机制尚无统一结论。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种耐锰、高效除锰细菌及其应用。
本发明是这样实现的，一种耐锰、高效除锰细菌，分类命名为SerratiamarcescensQZB-1，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo:61777，保藏日期为2021年07月21日。
进一步，耐锰、高效除锰细菌QZB-1从广西酸性红壤中筛选纯化得到；
在pH5.5，35℃和150r/min条件下培养48h后，耐锰、高效除锰细菌株SerratiamarcescensQZB-1对18mMMn(II)的去除率最优。
本发明的另一目的在于提供一种鉴定所述的耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法，鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法包括：将在pH7.1的LB液体培养基中活化好的菌株QZB-1接种至含0～364mMMn(II)的pH5.5的LB液体培养基中，培养48h后测定菌液OD600、pH以及培养液中Mn(II)的含量；
其中，OD600由紫外分光光度计在波长600nm测定，pH用玻璃电极法测定，Mn(II)的含量用电感耦合等离子体发射光谱仪测定。
进一步，初始OD600设置为0.1。
进一步，培养条件为150r/min、30℃。
进一步，不同形态锰的测定方法包括：取5mL菌悬液，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为培养基中剩余的Mn(II)浓度；离心后的菌体用等体积的50mmol/LCuSO4溶液复溶，振荡反应过夜；待吸附的Mn(II)彻底被Cu2 +置换出后，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被吸附的Mn(II)浓度；再将离心后沉淀用等体积的20mmol/L盐酸羟胺处理10h以上，将高价态的锰氧化物还原成Mn(II)；于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被生物氧化成生物氧化锰的Mn(II)浓度。
进一步，鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法还包括：将在pH7.1的LB液体培养基中活化好的菌株QZB-1接种至含18mMMn(II)的LB液体培养基中培养2d，分析不同的温度、pH以及溶解氧条件下菌株QZB-1对Mn(II)的去除特性，并定时取样测定OD600值、pH以及菌液中Mn(II)的含量。
进一步，初始OD600设置为0.1。
进一步，不同温度依次设置为：10、20、30、35和40℃，pH依次设置为：3.0、4.0、5.0、5.5和6.0，溶解氧依次设置为：0、50、100、150和200r/min。
本发明的另一目的在于提供一种所述的耐锰、高效除锰细菌在除锰中的应用，耐锰、高效除锰细菌在除锰中的应用为去除酸性土壤中的Mn(II)。
结合上述的技术方案和解决的技术问题，本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
第一，针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：
本发明从广西酸性红壤中筛选纯化得到1株耐锰细菌Serratiamarcescens QZB-1，并分析该菌株对Mn(II)的耐受性及环境因子对去除Mn(II)的影响。在不含锰培养基中，菌株在培养12h后进入稳定期；在不同初始锰浓度的培养基中，菌株QZB-1的稳定期都有不同程度的延后；在Mn(II)为364mM时，菌株QZB-1生长受到锰的强烈抑制，但在28h后菌株继续生长；在Mn(II)浓度为18mM时菌株去除锰效果最好，除锰率达91.8％；于Mn(II)浓度18mM下分析不同初始pH对菌株QZB-1除锰效果的影响，菌株在初始pH5.5时除锰率最高，达94.4％；在Mn(II)浓度18mM和pH5.5条件下分析温度对菌株QZB-1除锰效果的影响，菌株QZB-1在35℃时生物量最大且除锰率最高，达98.4％。
另外，研究Mn(II)浓度在18mM、pH5.5和35℃条件下，培养基中溶解氧含量对菌株QZB-1生长及除锰效果的影响；在转速为0～150r/min范围内，菌液浓度随溶氧量的增加而提高，且除锰率相应升高；菌株在转速为150r/min时生长最好，除锰率最高，达到98.4％。在菌株生长24h内，培养基中游离态锰含量迅速减少，24h时培养基中已有92.2％Mn(II)被去除；吸附态锰与生物氧化锰含量在24h内同步增加，吸附态锰含量高于生物氧化锰含量，菌株QZB-1去除锰的机制包括吸附和氧化两种，且主要通过吸附作用去除培养基中的Mn(II)。
第二，把技术方案看做一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点，具体描述如下：
实验结果表明，本发明提供的耐锰、高效除锰细菌SerratiamarcescensQZB-1可耐受高达20000mg/L的Mn(II)；在pH5.5，35℃和150r/min条件下培养48h后，菌株SerratiamarcescensQZB-1对18mMMn(II)的去除率高达98.4％；同时菌株QZB-1通过吸附和氧化作用去除Mn(II)，且吸附作用占主导地位。
第三，作为本发明的权利要求的创造性辅助证据，还体现在以下几个重要方面：
本发明的技术方案转化后的预期收益和商业价值为：可解决土壤锰胁迫问题及水体锰污染问题，做成菌剂后可高效应用，获得巨大商业价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例提供的耐锰、高效除锰细菌及其应用流程图；
图2是本发明实施例提供的不同Mn(II)浓度下菌株QZB-1的生长曲线图；
图3是本发明实施例提供的不同Mn(II)浓度下菌株QZB-1除锰效果图；
图4是本发明实施例提供的不同初始pH对除锰率的影响示意图；
图5是本发明实施例提供的不同初始温度对除锰率的影响示意图；
图6是本发明实施例提供的培养基中溶解氧含量对菌株QZB-1生长及除锰效果的影响示意图；
图7是本发明实施例提供的不同形态锰浓度变化示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种耐锰、高效除锰细菌及其应用，下面结合附图对本发明作详细的描述。
本发明实施例提供的耐锰、高效除锰细菌的分类命名为SerratiamarcescensQZB-1，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo:61777，保藏日期为2021年07月21日。
本发明实施例提供的耐锰、高效除锰细菌QZB-1从广西酸性红壤中筛选纯化得到；在pH5.5，35℃和150r/min条件下培养48h后，耐锰、高效除锰细菌株SerratiamarcescensQZB-1对18mMMn(II)的去除率最优。
如图1所示，本发明实施例提供的鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法包括以下步骤：
S101，将在pH7.1的LB液体培养基中活化好的菌株QZB-1接种至含0-364Mn(II)的pH5.5的LB液体培养基中；
S102，初始OD600设置为0.1，将菌株QZB-1在150r/min、30℃的条件下培养48h后测定菌液OD600、pH以及培养液中Mn(II)的含量；
S103，利用紫外分光光度计在波长600nm测定OD600，利用玻璃电极法测定pH，利用电感耦合等离子体发射光谱仪测定Mn(II)的含量。
本发明实施例提供的不同形态锰的测定方法包括：取5mL菌悬液于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为培养基中剩余的Mn(II)浓度；离心后的菌体用等体积的50mmol/LCuSO4溶液复溶，振荡反应过夜；待吸附的Mn(II)彻底被Cu2+置换出后，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被吸附的Mn(II)浓度；将离心后沉淀用等体积的20mmol/L盐酸羟胺处理10h以上，将高价态锰氧化物还原成Mn(II)；于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被生物氧化成生物氧化锰的Mn(II)浓度。
本发明实施例提供的鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法还包括：将在pH7.1的LB液体培养基中活化好的菌株QZB-1接种至含18mMMn(II)的LB液体培养基中培养2d，初始OD600设置为0.1；分析不同的温度、pH以及溶解氧条件下菌株QZB-1对Mn(II)的去除特性，并定时取样测定OD600值、pH以及菌液中Mn(II)的含量。
本发明实施例提供的不同温度依次设置为：10、20、30、35和40℃；
pH依次设置为：3.0、4.0、5.0、5.5和6.0；
溶解氧依次设置为：0、50、100、150和200r/min。
为了证明本发明的技术方案的创造性和技术价值，该部分是对权利要求技术方案进行具体产品上或相关技术上的应用实施例。
本发明的应用实施例提供了一种耐锰、高效除锰细菌在除锰中的应用，耐锰、高效除锰细菌在除锰中的应用为去除酸性土壤中的Mn(II)和水体中的Mn(II)。
本发明从广西酸性红壤中筛选纯化得到1株耐锰细菌Serratiamarcescens QZB-1，并分析该菌株对Mn(II)的耐受性及环境因子对该菌株去除Mn(II)的影响。
将在LB液体培养基(pH7.1)中活化好的菌株QZB-1接种至含0～364mM Mn(II)的LB液体培养基(pH5.5)中(初始OD600为0.2)，150r/min，30℃条件下培养48h后测定菌液OD600、pH及培养液中Mn(II)的含量。OD600由紫外分光光度计在波长600nm测定。pH用玻璃电极法测定。Mn(II)的含量用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-500)测定。
不同形态锰的测定方法：取5mL菌悬液，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为培养基中剩余的Mn(II)浓度；离心后的菌体用等体积的50mmol/LCuSO4溶液复溶，振荡反应过夜，待吸附的Mn(II)彻底被Cu2+置换出后，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被吸附的Mn(II)浓度；再将离心后沉淀用等体积的20mmol/L盐酸羟胺处理10h以上，将高价态的锰氧化物还原成Mn(II)，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被生物氧化成生物氧化锰的Mn(II)浓度。
将在LB液体培养基(pH7.1)中活化好的菌株QZB-1接种至含18mMMn(II)的LB液体培养基中(初始OD600为0.2)培养2d，分析不同的温度(10、20、30、35和40℃)、pH(3.0、4.0、5.0、5.5和6.0)及溶解氧(0、50r/min、100r/min、150r/min和200r/min)条件下菌株QZB-1对Mn(II)的去除特性。定时取样测定OD600值、pH及菌液中Mn(II)的含量。
菌株QZB-1在不同初始Mn(II)浓度下的生长曲线如图2所示。在不含锰培养基中，菌株在培养12h后进入稳定期。在不同初始锰浓度的培养基中，菌株QZB-1的稳定期都有不同程度的延后。在Mn(II)为364mM时，菌株QZB-1生长受到锰的强烈抑制，但在28h后菌株继续生长。图3为培养48h后不同初始Mn(II)浓度下菌株QZB-1对Mn(II)的去除效果，在Mn(II)浓度为18mM时菌株去除锰效果最好，除锰率达91.8％。
于Mn(II)浓度18mM下分析不同初始pH对菌株QZB-1除锰效果的影响(见图4)，菌株在初始pH5.5时除锰率最高，达94.4％。
在Mn(II)浓度18mM和pH5.5条件下分析温度对菌株QZB-1除锰效果的影响(见图5)，菌株QZB-1在35℃时生物量最大且除锰率最高，达98.4％。
图6表明Mn(II)浓度在18mM、pH5.5和35℃条件下，培养基中溶解氧含量对菌株QZB-1生长及除锰效果的影响。在转速为0～150r/min范围内，菌液浓度随溶氧量的增加而提高，且除锰率相应升高。菌株在转速为150r/min时生长最好，除锰率达到最高98.4％。
不同形态锰在菌株QZB-1不同生长阶段的含量变化如图7所示，在菌株生长24h内，培养基中游离态锰含量迅速减少，24h时培养基中已有92.2％Mn(II)被去除。吸附态锰与生物氧化锰含量在24h内同步增加，吸附态锰含量高于生物氧化锰含量，可推测，菌株QZB-1去除锰的机制包括吸附和氧化两种，其中菌株主要通过吸附作用去除培养基中的Mn(II)。24h后游离态锰含量缓慢减少，吸附态锰和生物氧化锰量增加不明显。推测是培养基中细菌逐渐衰亡，吸附和氧化作用减弱所致。
SerratiamarcescensQZB-1可耐受高达364mM的Mn(II)；在pH5.5，35℃和150r/min条件下培养48h后，菌株QZB-1对18mMMn(II)的去除率高达98.4％。菌株QZB-1通过吸附和氧化作用去除Mn(II)，其中吸附作用占主导地位。
如图2所示，步骤：将在LB液体培养基(pH7.1)中活化好的菌株QZB-1接种至含0-364mMMn(Ⅱ)的LB液体培养基(pH5.5)中(初始OD600为0.2)，150r/min，30℃条件下培养48h后测定菌液OD600
如图3所示，步骤：将在LB液体培养基(pH7.1)中活化好的菌株QZB-1接种至含0-364mMMn(Ⅱ)的LB液体培养基(pH5.5)中(初始OD600为0.2)，150r/min，30℃条件下培养48h后测定pH及培养液中Mn(Ⅱ)的含量。
步骤：将在LB液体培养基(pH7.1)中活化好的菌株QZB-1接种至含18mMMn(Ⅱ)不同pH(3.0、4.0、5.0、5.5和6.0)的LB液体培养基中(初始OD600为0.2)在150rpm转速、温度30℃下培养48h后测定菌液OD600、pH及培养液中Mn(Ⅱ)的含量
如图5所示，步骤：将在LB液体培养基(pH7.1)中活化好的菌株QZB-1接种至含18mMMn(Ⅱ)pH为5.5的LB液体培养基中(初始OD600为0.2)放置在不同温度(10、20、30、35和40℃)的150rpm摇床中培养48h后测定菌液OD600、pH及培养液中Mn(Ⅱ)的含量如图6所示，步骤：将在LB液体培养基(pH7.1)中活化好的菌株QZB-1接种至含18mMMn(Ⅱ)pH为5.5的LB液体培养基中(初始OD600为0.2)放置在30℃摇床中以不同转速(0、50r/min、100r/min、150r/min和200r/min)培养48h后测定菌液OD600、pH及培养液中Mn(Ⅱ)的含量
如图7所示，步骤：将在LB液体培养基(pH7.1)中活化好的菌株QZB-1接种至含18mMMn(Ⅱ)pH为5.5的LB液体培养基中(初始OD600为0.2)放置在30℃摇床中以150r/min培养，并定期取样测定菌液OD600、pH及培养液中不同形态Mn的含量。不同形态锰的测定方法包括：取5mL菌悬液，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为培养基中剩余的Mn(II)浓度；离心后的菌体用等体积的50mmol/LCuSO4溶液复溶，振荡反应过夜；待吸附的Mn(II)彻底被Cu2+置换出后，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被吸附的Mn(II)浓度；再将离心后沉淀用等体积的20mmol/L盐酸羟胺处理10h以上，将高价态的锰氧化物还原成Mn(II)；于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被生物氧化成生物氧化锰的Mn(II)浓度。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种耐锰、高效除锰细菌，其特征在于，耐锰、高效除锰细菌的分类命名为Serratiamarcescens QZB-1，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:61777，保藏日期为2021年07月21日。
2.如权利要求1所述的耐锰、高效除锰细菌，其特征在于，耐锰、高效除锰细菌QZB-1从广西酸性红壤中筛选纯化得到；
在pH 5.5，35℃和150r/min条件下培养48h后，耐锰、高效除锰细菌株Serratiamarcescens QZB-1对18mM Mn(II)的去除率最优。
3.一种鉴定如权利要求1～2任意一项所述的耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法，其特征在于，鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法包括：将在pH 7.1的LB液体培养基中活化好的菌株QZB-1接种至含0～364mM Mn(II)的pH 5.5的LB液体培养基中，培养48h后测定菌液OD600、pH以及培养液中Mn(II)的含量；其中，OD600由紫外分光光度计在波长600nm测定，pH用玻璃电极法测定，Mn(II)的含量用电感耦合等离子体发射光谱仪测定。
4.如权利要求3所述的鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法，其特征在于，初始OD600设置为0.1。
5.如权利要求3所述的鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法，其特征在于，培养条件为150r/min、30℃。
6.如权利要求3所述的鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法，其特征在于，不同形态锰的测定方法包括：取5mL菌悬液，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为培养基中剩余的Mn(II)浓度；离心后的菌体用等体积的50mmol/L CuSO4溶液复溶，振荡反应过夜；待吸附的Mn(II)彻底被Cu2+置换出后，于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被吸附的Mn(II)浓度；再将离心后沉淀用等体积的20mmol/L盐酸羟胺处理10h以上，将高价态的锰氧化物还原成Mn(II)；于10000r/min、4℃条件下离心10min，上清液用0.45μm滤膜过滤后测溶液中Mn(II)，为被生物氧化成生物氧化锰的Mn(II)浓度。
7.如权利要求3所述的鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法，其特征在于，鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法还包括：将在pH 7.1的LB液体培养基中活化好的菌株QZB-1接种至含18mM Mn(II)的LB液体培养基中培养2d，分析不同的温度、pH以及溶解氧条件下菌株QZB-1对Mn(II)的去除特性，并定时取样测定OD600值、pH以及菌液中Mn(II)的含量。
8.如权利要求7所述的鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法，其特征在于，初始OD600设置为0.1。
9.如权利要求7所述的鉴定耐锰、高效除锰细菌对Mn(II)的耐受性以及环境因子对去除Mn(II)影响的方法，其特征在于，不同温度依次设置为：10、20、30、35和40℃，pH依次设置为：3.0、4.0、5.0、5.5和6.0，溶解氧依次设置为：0、50、100、150和200r/min。
10.一种如权利要求1～2任意一项所述的耐锰、高效除锰细菌在除锰中的应用，其特征在于，耐锰、高效除锰细菌在除锰中的应用为去除酸性土壤和水体中的Mn(II)。
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