CN1162535C - 变性蛋白质复性装置 - Google Patents

Abstract

一种变性蛋白质复性装置，包括储液及反应装置、数控泵、中空纤维柱，单板机、电脑、气体容器瓶、废液瓶等，反应装置包括复性反应罐和搅拌器，使搅拌力大、均匀，很少起泡，可有效防止蛋白变性，该罐还装有控制反应液的温度、压力、pH值、溶氧等仪表和电极，有效监控各反应参数，使操作容易重复，中空纤维柱结构改进使其内蛋白质溶液中变性剂的浓度保持较小变化，保证蛋白质有较高的复性，复性反应的收率可达80%左右，并能完全满足GMP规范的要求。

Description

变性蛋白质复性装置

本发明涉及生物技术领域。尤指一种对可逆变性蛋白恢复其生物活性的变性蛋白复性装置或从包涵体蛋白质获得有活性蛋白质的复性装置。

多种有巨大经济价值的蛋白质在自然界中或者含量很低，或者提取成本很高，或者根本无法提纯，分子生物学技术及基因工程技术的应用革命性地改变了这一局面，使大量获得各种蛋白质成为现实。其中，由于大肠杆菌遗传背景较为清楚，且其生长周期短，容易培养，成本低，因此大肠杆菌系统作为表达外源蛋白质的一个有效体系已用于大规模生产目的蛋白质，如白介素-2系列，干扰素系列、CSF系列等，既实现了很好的经济效益，又带来很大的社会效益。可是，以大肠杆菌为宿主的体系表达的外源蛋白质通常以包涵体形式存在，虽然包涵体内目的蛋白质比较纯，但不具备正确的空间构象，此时一般以不可溶的无活性蛋白颗粒存在。此外，目的蛋白具有正确的一级结构，但不具备正确的高级结构，因而没有生物活性。为了得到有活性的目的蛋白质，要把包涵体用变性剂溶解，然后控制各种因素的消长变化，即按蛋白质不同复性阶段各种内在规律的特点创造一个适宜的复性环境，在一定条件下逐步除去变性剂，使蛋白质正确折叠，恢复其天然构象，得到有活性的蛋白质，也即变性蛋白质或变性的包涵体蛋白质的复性。以往，变性蛋白质的复性或是在透析袋内进行，或是大体积稀释以获得具生物活性的蛋白质，这种方式操作烦琐，时间长，活性产物得率低，且影响后续分离纯化，因而无法大规模生产。

在现有技术中变性蛋白的复性虽然采用了中空纤维柱以透滤方式除去变性剂，但中空纤维柱的设计为内压式，则由于纤维膜管较细(内管1mm以下)，当变性蛋白溶液在膜管内流动时，变性剂的浓度降低非常快，而此时蛋白质来不及复性将会聚集进而沉淀，堵塞膜管，降低透滤效率，或者破坏中空纤维柱；此外，现有技术中变性蛋白的复性反应装置设计比较简单，对溶液的pH、溶氧及温度等均不监测，搅拌速度及复性时的补料液均无法很好控制；因此复性操作过程繁琐且难控制，复性操作重复性不高，无法较好地满足GMP规范要求。

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种适应性强，集成度高，能增强对变性蛋白质复性反应过程的监控，复性操作过程易于重复，可满足GMP规范要求的变性蛋白质复性装置。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种变性蛋白质复性装置，其中，其主要包括储液装置、反应装置、数控泵，中空纤维柱，单板机、电脑，废液瓶、压力表、一气体容器瓶和第一、第二和第三电磁阀，其特征在于，储液装置包括一个或多个储液瓶、储液瓶通过管道与第一电磁阀的出入口连通；

反应装置包括一复性反应罐和一搅拌器，复性反应罐其盖形顶部除在其上安装搅拌器外，还设有一第一进液口、一第二进液口、一进气口和一出气口，其中，所述复性反应罐第一进液口通过管道与第一电磁阀的出入口相连通，所述复性反应罐第二进液口通过管道与第二电磁阀的出入口相连通，所述复性反应罐从进气口插入进气管，而该进气管的进口与所需输送某种气体容器瓶的进气阀出口连接，并在进气管上设有夹子，所述复性反应罐出气口连接其上带有夹子和压力传感器的出气管，复性反应罐其半球形的底部设有若干出口，和若干位于不同位置上的安装电极的安装部；

所述中空纤维柱的入口与数控泵的出口连通，出口通过管道与第二电磁阀的出入口连通，在第二电磁阀和中空纤维柱之间的管道上可设有压力表和夹子，所述复性反应罐底部的出口之一和数控泵的进口之间通过管道相连地接有第三电磁阀；

在所述第一电磁阀和复性反应罐第一进液口之间的管道上装有蠕动泵。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，在所述复性反应罐底部的出口为2个，其中，一个为收集复性蛋白溶液的出口，另一个为变性蛋白循环液出口，所述第三电磁阀与复性反应罐底部连接的出口为变性蛋白循环液出口，所述安装部有3个，各为带外螺纹的凸起，并在其上安装溶氧电极、PH电极和温度电极。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述复性反应罐的底部为半球形，半球形上部圆柱面上设一保温套，该保温套为保温水套。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述中空纤维柱包括：一管柱，该管柱含圆柱形容室，其上下壁上各设有复性蛋白溶液的出入口，二各自安装在圆柱形容室两头的上下环氧树脂隔离层，并将圆柱形容室分隔为上下废液/清洗液室和中间复性蛋白液室，在管柱的上下壁和环氧树脂隔离层之间的管柱周壁上设有一反向清洗液入口和一废液/清洗液出口，许多根安装在二环氧树脂隔离层之间的中空纤维膜管将上下废液/清洗液室连通，所述废液瓶通过带有夹子的管道与管柱的下废液/清洗液室连通。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述上下环氧树脂隔离层呈漏斗状，其斗口各与管柱复性蛋白溶液的出入口连通，斗壁分别向着容室的内壁倾斜，使其与管柱内周壁形成一小于90°的倾斜角；

所述中空纤维膜管由一支持层及一功能选择层组成，其中，支持层在中空纤维膜管的内侧，功能选择层在中空纤维膜管的外侧。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述复性反应罐的体积为5-150公升，为玻璃钢材质。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述中空纤维柱具有若干个，其以串联相连接。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述中空纤维柱设有若干个，其以并联相连接。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述中空纤维膜管的材质为聚砜材料，功能选择层膜的分子截流值为MW10,001-50,000Dalton。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述进气管呈直角状，其水平段可为直管或曲管，并在其表面上均匀设置若干直径0.5mm以下的小孔。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述搅拌器为叶片式的，搅拌器上部装有搅拌传感器。

如以上所述的变性蛋白质复性装置，其中，所述出气管上装有压力传感器。

本发明与现有技术相比优点和积极效果非常明显，从上可见，由于本变性蛋白质复性装置，主要包括储液装置、反应装置、数控泵、中空纤维柱、储液瓶、废液瓶、压力表、电磁阀等；其中，反应装置的复性反应罐采用搅拌器可使搅拌力大，快和搅拌均匀、很少起泡，从而较大地增加复性反应罐的体积和有效防止蛋白变性，复性反应罐还装有控制反应液的温度、压力、pH值、溶氧等仪表和电极，可有效监控各种反应参数，使变性操作十分可靠，容易重复实现；中空纤维柱选用呈漏斗状的树脂隔离层和外压式中空纤维膜管，在应用中，可使中空纤维柱内蛋白质溶液中变性剂的浓度保持较小的变化，使蛋白质不会沉淀，从而保证蛋白质有较高的复性；特别整个变性蛋白复性装置由控制软件、电脑进行监测及控制，复性反应的各参数可精确测定并易于重复，反应进行得快、收率可达80％左右，并能完全满足GMP规范的要求。

本发明采用稀释和透滤两种手段，且自动控制整个装置，因此使蛋白质的复性过程更易控制，复性既能小量地进行，又可大规模地进行。

以下结合附图及附图给出的实例对本发明作进一步说明；

图1为本发明的结构示意图；

图2为本发明自控部分工作原理示意图；

图3为复性反应罐结构示意图；

图4为中空纤维柱的结构剖视图；

图5为图4的A-A剖视图；

图6为图4的B放大图，表示中空纤维柱中纤维膜管的结构；

图7为本变性蛋白复性装置操作过程示意图。

请参阅图1所示，为本发明的结构示意图，其主要包括储液装置、反应装置、一数控泵3，一中空纤维柱4，一单板机5、一电脑6，一废液瓶7、一压力表8、一气体容器瓶15和第一、第二和第三电磁阀11、17和18等，其中，第一电磁阀11为四通阀，具有三个进液口35、36、37和一出液口38，第二电磁阀17和第三电磁阀18是一个三通阀，具有三个出入口39、39′，40、40′和41、41′，以上三电磁阀的流量最大可达100毫升/分；

储液装置包括储液瓶2，其数量按照所需复性液的种类和其它需要而定，在本实施例中为三个，即12瓶、13瓶和14瓶，12瓶和13瓶各装复性液1和复性液2、14瓶装包涵体溶液，而12瓶、13瓶和14瓶的各瓶口可通过管道各自与第一电磁阀11的三个进液口35、36、37连通；

请参阅图3所示，反应装置包括一复性反应罐1、一搅拌器24，其中，复性反应罐1最好为圆柱球底形的罐，其最大容积100L，复性操作体积可为1L-100L，而以5-50L为最佳。复性反应罐的主要材质可以是不锈钢，玻璃钢，而以玻璃钢为最佳。复性反应罐还具有一保温套1-B，该保温套位于半球形上部的圆柱面上，并为保温水套(图中未显示)，但也可是其它加热或制冷式保温套。复性反应罐1其盖顶部设有一第一进液口101、一第二进液口102、一进气口103和一出气口104，其中，所述复性反应罐第一进液口101通过其上装有蠕动泵34的管道与第一电磁阀11的出液口38相连通，所述复性反应罐第二进液口102通与第二电磁阀17的出入口40和41之一连通，所述复性反应罐从进气口103插入进气管29，所述复性反应罐出气口104连接其上带有夹子32的出气管31，出气管31上装有压力传感器19，复性反应罐1其半球形的底部设有二个出口105、106，并在这些出口装有开关50、25，而其中出口105为收集复性蛋白溶液出口，另一个为变性蛋白循环液出口，和三个位于不同位置上的待安装电极的安装部107、108和109，该安装部各为带内螺纹的凸起。所述搅拌器24为多层叶片式的，安装在复性反应罐的盖形顶部的中间并位于复性反应罐内，此外，搅拌器24上部，即处于复性反应罐的顶部以下的部位还装有搅拌传感器20，顶部则装配有其驱动电动机。

在复性反应罐进气口103中所插入的进气管29呈直角状，其水平段可为直管或曲管，并在其表面上均匀设置若干直径0.5mm以下的小孔30。

所述气体容器瓶15是所需输送某种气体容器瓶，在本实施例中为氧气瓶，其上装有进气阀33，进气阀33的出口与进气管29的进口连通，并在进气管29上设有夹子16。

所述数控泵3用于控制流速和流量，其最大流速可达100毫升/分。

请参阅图4-6所示，所述中空纤维柱4包括：一管柱41，该管柱用塑料制成，其内含圆柱形容室，其上下壁上各设有复性蛋白溶液的出入口401、402，二各自安装在圆柱形容室两头的上下环氧树脂隔离层42、43，并将圆柱形容室分隔为上下废液/清洗液室403、404和中间复性蛋白液室405，在管柱41的上下壁和环氧树脂隔离层42、43之间的管柱周壁上设有一上下废液/清洗液出口406、407，许多根安装在二环氧树脂隔离层42、43之间的中空纤维膜管44将上下废液/清洗液室403、404连通。中空纤维膜管44的材质为聚砜材料，其由一支持层45及一功能选择层46组成，其中，支持层45在中空纤维膜管44的内侧，功能选择层46在中空纤维膜管44的外侧，其中，功能选择层26选用膜的分子截流值范围为MW1,000-10,000Dalton和MW10,001-50,000Dalton，中空纤维柱膜管的具体选择由目的蛋白的分子量大小决定或者系统的工作方式决定；中空纤维柱根据不同用途的情形采用多个，其可串联或者并联使用。

由于中空纤维柱4的支持层在内侧，功能选择层在外侧，这样，使复性蛋白溶液中的变性因素在管外在一定的压力作用下透滤流向膜管内，复性蛋白溶液内变性剂不会形成明显的浓度梯度，可大大减少蛋白质在复性过程中形成的沉淀，有利于蛋白质的充分复性；同时，复性蛋白溶液从纤维膜管外流动，可降低操作压力，减少蛋白质在膜管上的吸附；也有利于复性操作完成后蛋白溶液的完全放出，以及反向清洗时膜管上的沉淀蛋白的充分被洗出，从而达到提高蛋白的复性收率及使中空纤维柱较好地再生的效果。

同时，由于中空纤维柱4容室的上下环氧树脂隔离层分别向容室内倾斜，使其与管柱内壁面形成一小于90°的夹角，因而可减少容室的死角，便于复性操作完成后蛋白溶液的放出，以及反向清洗时沉淀蛋白的充分洗出。

所述中空纤维柱4的入口401与数控泵3的出口连通，出口402通过管道与第二电磁阀17的输入口39连通。

此时，第三电磁阀18的出入口40′通过管道与数控泵3的进口连通，出入口39′通过管道与复性反应罐底部的出口106连通。

本发明还具有二储液桶43、45，其中一个装清洗液，一个为空桶备作储装废液，第二电磁阀17和第三电磁阀18的另一出入口41或41′可直接用管道通入储液桶43、45中。第二电磁阀17和第三电磁阀18的工作原理，其中，通常出入口39或39′与出入口40或40′连通，出入口39或39′与出入口41或41′接通。

所述废液瓶7通过带有夹子9的管道与管柱41的下废液/清洗液室403连通。

压力表8安装在第二电磁阀17和中空纤维柱4之间的管道上，并且在此管道上夹上夹子10。

另外，本发明还包括一溶氧电极21、一PH电极22和一温度电极23，它们各自安装在复性反应罐的三个安装部107、108和109上。

请参阅图2所示，为本发明自控部分操作过程原理图，其中，虚线为电缆线的布线和与本装置有关部分连接。本装置控制中枢在电脑，其直接控制数控泵3，电磁阀11、17和18，通过单板机控制复性反应罐1等的具体关系如下：

所述单板机5设有本装置所需的控制电路，并通过电缆线与如下器件相连：溶氧电极21，pH电极22，温度电极23，压力传感器19，搅拌传感器20，进气阀33，蠕动泵34；监控复性反应罐1的温度、pH、溶氧、通气量、搅拌速度及补料等；其可单独控制复性反应罐上述各参数，也可接受电脑指令，并控制复性反应罐上述各参数。

所述电脑6其上装有控制卡，并提供足够的电缆线插入接口和其它接口，如pc机486以上机型，电缆线插入接口通过各电缆线分别与单板机5、数控泵3、电磁阀11、电磁阀17和电磁阀18相连；控制软件工作于WinowsNT操作系统平台上，其基本特征是，监控数控泵的开、关及流量，监控各电磁阀的开、关，通过单板机5控制复性反应罐1中复性反应液的温度、溶氧、pH、及搅拌速度等。

通常储气瓶15一般是氧气瓶，储液罐12、13和14以及废液瓶7可以是塑料容器或不锈钢容器或玻璃容器，以塑料容器或不锈钢容器为最好；压力表8为普通的水压表；把各容器接通的各连接管可以是耐压的硅胶管或不锈钢管；夹子9、10、16、32可以是普通的夹子，开关50、25为一开关；

请参阅图7所示，并结合图2和3对本发明的具体实施作一简要说明：

将工程菌发酵结束后的发酵液离心，离心收集沉淀即细胞，超声破碎细胞，离心收集包涵体并洗涤之。用标准缓冲液校准pH电极22并把其及溶氧电极21、温度电极23安装到复性反应罐1及单板机5上相应位置。用变性剂溶解包涵体后，调整电磁阀11接通储液瓶14，启动蠕动泵34，通过管道28将包涵体溶解液导入复性反应罐1，控制反应罐的温度为8-12℃。打开夹子16，设定进气量为1升每分，手动调节夹子32，控制罐压为0.1兆帕。设定反应液pH为6.5，搅拌速度50rpm。调整电磁阀11，使该阀输入口35与输出口38接通，启动蠕动泵34，调节其流速，从瓶12导入复性液1，流量为4升每小时。同时，打开开关25，适当拧紧夹子9和10，调整电磁阀17、18，使其出入口39、39′与出入口40、40′接通，启动数控泵3，调节其流速，此时，压力表8显示0.02兆帕，而流入废液瓶7的废液流量为4升每小时。

当复性液A用完时，调整电磁阀11，其输入口36与输出口38接通，从储液瓶13导入复性液2，其他条件保持不变。

当复性液B导入完毕，关闭进气阀33、电磁阀11及蠕动泵34，拧紧夹子32。调节夹子10的松紧，放松夹子9，调节数控泵3，使流入废液瓶7中的废液流量为40升每小时，浓缩复性反应液。

浓缩完毕，停止数控泵。打开开关6，从出口42处放出已浓缩的复性蛋白溶液以备后续处理。

当复性反应罐1内的溶液全部放出后，停止搅拌。调整电磁阀17，出入口39和出入口41接通，连接管与出入口41连接，而管44接入储液瓶43内洗涤缓冲液中，同时，全松夹子10，拧紧夹子9，设定数控泵3反转，洗涤中空纤维柱4及数控泵3及相应管道，洗涤回收液由出口42处放出回收。

洗涤完毕，停止数控泵3。调整电磁阀18，使其输入口39′与输出口41′接通，拧松夹子9。储液瓶43内溶液换为清洗液，清洗中空纤维柱4及数控泵3及相应管道，废液从管流入桶45。清洗完毕，调整电磁阀，清洗相应管道，废液由出口42处流出。然后，暂停数控泵3，储液瓶43内溶液分别按顺序换为蒸馏水、20％酒精，启动数控泵3；最后停止数控泵3，关闭电磁阀17和18，拧紧夹子9关闭开关25，使此段管道、数控泵3、中空纤维柱4及电磁阀17和18内充满20％酒精。

同上所述，清洗管道27。清洗管道28、蠕动泵34及复性反应罐1等，管道28及蠕动泵34用20％酒精保存；复性反应罐1清洗完毕后，从出口42处排出所有废液，关闭开关50；最后，关闭单板机5及电脑6。

以上所述之变性蛋白的复性装置，除可应用于包涵体蛋白质的复性操作以外，还可应用于以下几个方面：

无用蛋白的复性；无用蛋白指的是在包涵体蛋白质复性操作过程中产生的没有复性的、变性的、以聚集沉淀形式存在的蛋白质。

蛋白质的化学修饰改造：蛋白质的化学修饰改造是获得新型功能蛋白质的一种强有力的手段，比如胶原酶、IL-2、rhTPO等通过PEG修饰，既可以降低其免疫原性，又可以延长其在人体内的半衰期，从而大大增强了被修饰蛋白质的使用价值及适用范围。在蛋白质的化学修饰改造过程中，修饰剂的加入及除去均应得到一定的控制。上述装置在蛋白质的化学修饰改造、蛋白质溶液体系的转换及蛋白质溶液的浓缩等方面也有一定的应用潜力。

应用到酶反应器，组合到水相或有机相的酶反应装置中；其特点可以概括为：酶与反应物及产物容易分离；酶、反应物与产物容易分离；酶反应可以连续进行；等等。

Claims (12)

1.一种变性蛋白质复性装置，其特征在于：其主要包括储液装置、反应装置、数控泵(3)，中空纤维柱(4)，单板机(5)、电脑(6)，废液瓶(7)、压力表(8)、一气体容器瓶(15)和第一、第二和第三电磁阀(11、17和18)；

储液装置包括一个或多个储液瓶(2)、储液瓶(2)通过管道与第一电磁阀(11)的出入口连通；

反应装置包括一复性反应罐(1)和一搅拌器(24)，复性反应罐(1)其盖形顶部除在其上安装搅拌器(24)外，还设有一第一进液口(101)、一第二进液口(102)、一进气口(103)和一出气口(104)，其中，所述复性反应罐第一进液口(101)通过管道与第一电磁阀(11)的出入口相连通，所述复性反应罐第二进液口(102)通过管道与第二电磁阀(17)的出入口相连通，所述复性反应罐从进气口(103)插入进气管(29)，而该进气管的进口与所需输送某种气体容器瓶(15)的进气阀(33)出口连接，并在进气管(29)上设有夹子(16)，所述复性反应罐出气口(104)连接其上带有夹子(32)和压力传感器(19)的出气管(31)，复性反应罐(1)其半球形的底部(1-A)设有若干出口，和若干位于不同位置上的安装电极的安装部；

所述中空纤维柱(4)的入口(401)与数控泵(3)的出口连通，出口(402)通过管道与第二电磁阀(17)的出入口连通，在第二电磁阀(17)和中空纤维柱(4)之间的管道上可设有压力表(8)和夹子(10)，所述复性反应罐(1)底部的出口之一和数控泵(3)的进口之间通过管道相连地接有第三电磁阀(18)；

在所述第一电磁阀(11)和复性反应罐(1)第一进液口(101)之间的管道上装有蠕动泵(34)。

2.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：在所述复性反应罐底部(1-A)的出口为2个，其中，一个为收集复性蛋白溶液的出口(105)，另一个为变性蛋白循环液出口(106)，所述第三电磁阀(18)与复性反应罐底部(1-A)连接的出口为变性蛋白循环液出口(106)，所述安装部有3个，各为带外螺纹的凸起，并在其上安装溶氧电极(21)、PH电极(22)和温度电极(23)。

3.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述复性反应罐(1)的底部为半球形，半球形上部圆柱面上设一保温套(1-B)，该保温套为保温水套。

4.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述中空纤维柱(4)包括：一管柱(41)，该管柱含圆柱形容室，其上下壁上各设有复性蛋白溶液的出入口(401、402)，二个各自安装在圆柱形容室两头的上下环氧树脂隔离层(42、43)，并将圆柱形容室分隔为上下废液/清洗液室(403、404)和中间复性蛋白液室(405)，在管柱(41)的上下壁和环氧树脂隔离层(42、43)之间的管柱周壁上设有一反向清洗液入口(406)和一废液/清洗液出(407)，许多根安装在二环氧树脂隔离层(42、43)之间的中空纤维膜管(44)将上下废液/清洗液室(403、404)连通，所述废液瓶(7)通过带有夹子(9)的管道与管柱(41)的下废液/清洗液室(403)连通。

5.根据权利要求4所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述上下环氧树脂隔离层(42、43)呈漏斗状，其斗口各与管柱(41)复性蛋白溶液的出入口(401、402)连通，斗壁分别向着容室的内壁倾斜，使其与管柱(41)内周壁形成一小于90°的倾斜角；

所述中空纤维膜管(44)由一支持层(45)及一功能选择层(46)组成，其中，支持层(45)在中空纤维膜管(44)的内侧，功能选择层(46)在中空纤维膜管(44)的外侧。

6.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述复性反应罐(1)的体积为5-150公升，为玻璃钢材质。

7.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述中空纤维柱(4)具有若干个，其以串联相连接。

8.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述中空纤维柱(4)设有若干个，其以并联相连接。

9.根据权利要求4所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述中空纤维膜管(44)的材质为聚砜材料，功能选择层(46)膜的分子截流值为MW10,001-50,000Dalton。

10.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述进气管(29)呈直角状，其水平段可为直管或曲管，并在其表面上均匀设置若干直径0.5mm以下的小孔(30)。

11.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述搅拌器(24)为叶片式的，搅拌器(24)上部装有搅拌传感器(20)。

12.根据权利要求1所述的变性蛋白质复性装置，其特征在于：所述出气管(31)上装有压力传感器(19)。

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