CN116251110A - β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用 - Google Patents

β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116251110A
CN116251110A CN202211445944.0A CN202211445944A CN116251110A CN 116251110 A CN116251110 A CN 116251110A CN 202211445944 A CN202211445944 A CN 202211445944A CN 116251110 A CN116251110 A CN 116251110A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lactic acid
glucopyranosyl
beta
ethyl acetate
acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211445944.0A
Other languages
English (en)
Inventor
范辉
曾煜晗
王丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Pharmaceutical University
Original Assignee
Guangdong Pharmaceutical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Pharmaceutical University filed Critical Guangdong Pharmaceutical University
Priority to CN202211445944.0A priority Critical patent/CN116251110A/zh
Publication of CN116251110A publication Critical patent/CN116251110A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7024—Esters of saccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本申请公开了β‑D‑吡喃葡萄糖基‑乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用，属于药物用途技术领域。本申请公开了β‑D‑吡喃葡萄糖基‑乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用，所述的代谢性疾病为高脂血症、糖尿病、脂肪肝、肥胖、高血压和心脑血管病中的一种或几种；所述炎症为过敏性脑脊髓炎、炎症性肠病、类风湿性关节炎、脓毒症、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、高尿酸血症和银屑病中的一种或几种，本身请通过相关研究证明β‑D‑吡喃葡萄糖基‑乳酸及其衍生物对代谢性疾病和炎症具有潜在的预防和治疗效果。

Description

β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、 炎症药物中的应用
技术领域
本发明属于药物用途技术领域，特别涉及β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用。
背景技术
炎症性肠病(IBD)是慢性特发性非特异性和复发性胃肠道疾病，主要分为两种类型。克罗恩病和溃疡性结肠炎(UC)[1]。溃疡性结肠炎局限于结肠，以体重减轻、腹泻和腹痛为特征，影响所有年龄的人。尽管病因和发病机制仍不清楚，但人们普遍认为它是遗传学和免疫学、微生物和环境因素的结果[2-4]。巨噬细胞作为单核细胞的成熟形式，参与了先天和适应性免疫。它们通常是先天免疫的第一道防线[5]。一旦病原体突破上皮屏障，侵入肠粘膜，它们可以被巨噬细胞用Toll样受体、模式识别受体(PRRs)等识别，进一步诱发一系列的通路反应，如NLRP3炎症体，最后导致细胞膜破裂，细胞因子白介素1b(IL-1b)和IL-18，细胞内容物被释放出来。这种类型的炎症性细胞死亡被称为"热死病"[6-7]。像其他先天性免疫反应一样，热解作用有利于宿主对细菌、真菌和病毒感染的自我防御[8]。然而，失调的热化作用通过破坏肠道上皮屏障和通过促进Th17细胞产生IL-17和Th1细胞产生γ-干扰素(IFN-γ)来诱导适应性免疫失调，密切地促进了UC的发展[9-10]。已经证明，抑制巨噬细胞的热化作用可能是治疗实验性结肠炎的一种新策略[11-12]。免疫细胞可以通过代谢重新编程来调节其功能。羟基酸中的乳酸作为一种代谢底物，已被重新认识为调节性免疫细胞功能中的一个活跃信号[13-14]，以前的研究已经揭示了疾病组织中的免疫细胞如何对代谢物的局部积累做出反应的各种机制。乳酸大多以离子形式存在于肠道中，主要由单羧酸转运体1(MCT1)吸收和利用[15]。此外，乳酸通过与肠道巨噬细胞表面的GPR81受体结合，下调环AMP(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)信号，进一步抑制促炎症因子的表达[16]。乳酸可以保护心脏和缺血的神经元，促进成人海马神经发生，并抑制器官损伤后的炎症[17]。乳酸还能促进巨噬细胞中组蛋白H3赖氨酸的乳化，并通过增加Arg-1和其他M2类巨噬细胞基因的表达改变巨噬细胞的极化状态[18]。在癌症方面，在缺氧和高浓度的细胞外乳酸的条件下，乳酸可以被运送到细胞内作为代谢底物使用。以前的研究表明，乳酸能增加TH1细胞的分化和干扰素-γ(IFNγ)的产生[19]，并促进肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的M2样极化和VEGF的表达，部分是由HIF1α的激活所介导的[20]。后一项研究提出了一个有趣的想法，即乳酸具有平衡HIF1α和糖酵解代谢物的炎症作用的稳态功能。Liu等人[21]扩展了我们对肿瘤中高乳酸浓度如何促进M2型促肿瘤TAM表型的理解。巨噬细胞对乳酸的吸收激活了哺乳动物雷帕霉素复合物1(mTORC1)介导的信号，导致转录因子TFEB及其下游靶基因的表达减少，包括编码空泡质子泵D2亚单位的Atp6v0d2，它使溶酶体酸化并促进蛋白质降解。ATP6V0D2的表达减弱导致HIF2α的溶酶体降解减少，从而诱导其目标基因的表达，包括Veg f和M2类同源基因Mrc1、Arg1和Retnla。这种ATP6V0D2-HIF2α途径在病理学上是相关的，因为Atp6v0d2-/-小鼠表现出异常的血管化和肿瘤体积的增加，这些都被HIF2α的抑制所逆转。因此，巨噬细胞内乳酸浓度的增加通过激活HIF1α3和HIF2α4的不同机制促进了M2型肿瘤生长的表型。最近的一项研究5进一步支持了乳酸的抑制作用，该研究显示，肿瘤酸中毒部分是由有氧糖酵解产生的乳酸和质子的输出导致的，它诱导了促进肿瘤生长的调节性TAM表型。2019年发表的一篇论文显示，细胞内乳酸浓度的增加抑制了细胞质RIG-I样受体(RLR)[22]对IFNβ的诱导。RLR信号的抑制与酸性pH值无关，是由乳酸分子直接与RLR适配体线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)跨膜域结合介导的，MAVS被固定在线粒体膜上。乳酸盐与MAVS的结合减弱了其在线粒体的定位、与RIG-I的相互作用、聚集和下游信号传导以及Ifnb激活。抑制RLR的信号传导在生物学上很重要，因为通过遗传或药物靶向糖酵解酶乳酸脱氢酶来阻断乳酸的产生，导致干扰素的产生和病毒清除的增强。这项研究确定了MAVS是乳酸的直接传感器，并表明乳酸也可以通过抑制反平衡的促炎症干扰素介导的途径间接促进同源巨噬细胞的极化。2019年还发现了另一个令人惊讶的乳酸盐直接目标--组蛋白中的赖氨酸残基[23]。乳酸盐是骨骼肌和包括脂肪组织在内的其他器官释放的一种重要的代谢中间物，在胰岛素的影响下，葡萄糖会转化为乳酸盐。研究人员[24]表明，乳酸能激活G蛋白偶联受体GPR81，该受体在脂肪细胞中表达，并通过Gi依赖性抑制腺苷酸环化酶而介导抗脂肪分解作用。Kashan Ahmed使用GPR81缺陷的小鼠，证明该受体不参与密集运动期间的脂肪分解调节。然而，在缺乏GPR81的小鼠中，胰岛素诱导的脂肪分解抑制和胰岛素诱导的脂肪细胞cAMP水平下降强烈地减少，尽管胰岛素依赖的脂肪细胞释放的乳酸在野生型和GPR81缺陷的小鼠中是可比的。因此，乳酸及其受体GPR81意外地在自分泌和旁分泌循环中发挥作用，以介导胰岛素诱导的抗脂肪溶解作用。这些数据表明，乳酸能以类似激素的方式直接调节代谢过程，揭示了乳酸在胰岛素抗脂肪作用的一个新机制。
因乳酸在体内生物利用度极差，因此以乳酸作为先导化合物进行结构修饰，通过与葡萄糖连接形成β-糖苷键形成前药以期增加乳酸的生物利用度，增加乳酸的血药浓度以此对炎症型肠病、代谢性疾病进行治疗。
参考文献：
[1].Kobayashi T,Siegmund B,Le Berre C,et al.Ulcerative Colitis.NatRev Dis Prim[Internet](2020)；
[2].Ray G,Longworth MS.Epigenetics,DNA Organization,and InflammatoryBowel Disease.Inflammation Bowel Dis(2019)25(2):235–47.
[3].Piovani D,Danese S,Peyrin-Biroulet L,Nikolopoulos GK,Lytras T,Bonovas S.Environmental Risk Factors for Inflammatory Bowel Diseases:AnUmbrella Review of Meta-Analyses.Gastroenterol[Internet](2019)157(3):647–659.e4.
[4].Fiocchi C.Immunopathogenesis of IBD:Current State of the Art.NatRev Gastroenterol Hepatol[Internet](2016)13(1):13–27.
[5].Gren ST,Grip O.Role of Monocytes and Intestinal Macrophages inCrohn’s Disease and Ulcerative Colitis.Inflammation Bowel Dis(2016)22(8):1992–8.
[6].Van Opdenbosch N,Lamkanfi M.Caspases in Cell Death,Inflammation,and Disease.Immun[Internet](2019)50(6):1352–64.
[7].He WT,Wan H,Hu L,et al.Gasdermin D Is an Executor of Pyroptosisand Required for Interleukin-1b Secretion.Cell Res[Internet](2015)25(12):1285–98.
[8].Zhou CB,Fang JY.The Role of Pyroptosis in Gastrointestinal Cancerand Immune Responses to Intestinal Microbial Infection.Biochim Biophys ActaRev Cancer[Internet](2019)1872(1):1–10.
[9].Nowarski R,Jackson R,Gagliani N,et al.Epithelial IL-18EquilibriumControls Barrier Function in Colitis.Cell(2015)163(6):1444–56.
[10].Liu L,Dong Y,Ye M,et al.The Pathogenic Role of NLRP3Inflammasome Activation in Inflammatory Bowel Diseases of Both Mice andHumans.J Crohns Colitis(2017)11(6):737–50.
[11].Shao BZ,Wang SL,Pan P,et al.Targeting NLRP3 Inflammasome inInflammatory Bowel Disease:Putting Out the Fire of Inflammation.Inflammation(2019)42(4):1147–59.
[12].Ruiz PA,Morón B,Becker HM,et al.Titanium Dioxide NanoparticlesExacerbate DSS-Induced Colitis:Role of the NLRP3 Inflammasome.Gut(2017)66(7):1216–24.
[13].Lee YS,Kim TY,Kim Y,et al.Microbiota-Derived Lactate AcceleratesIntestinal Stem-Cell-Mediated Epithelial Development.Cell Host Microbe[Internet](2018)24(6):833–846.e6.
[14].Iatsenko I,Boquete JP,Lemaitre B.Microbiota-Derived LactateActivates Production of Reactive Oxygen Species by the Intestinal NADPHOxidase Nox and Shortens Drosophila Lifespan.Immun(2018)49(5):929942.e5.
[15].Erdmann P,Bruckmueller H,Martin P,et al.Dysregulation of MucosalMembrane Transporters and Drug-Metabolizing Enzymes in Ulcerative Colitis.JPharm Sci(2019)108(2):1035–46.
[16].Ranganathan P,Shanmugam A,Swafford D,et al.GPR81,a Cell-SurfaceReceptor for Lactate,Regulates Intestinal Homeostasis and Protects Mice FromExperimental Colitis.J Immunol(2018)200(5):1781–9.
[17].Wang J,Cui Y,Yu Z,et al.Brain Endothelial Cells Maintain LactateHomeostasis and Control Adult Hippocampal Neurogenesis.Cell Stem Cell[Internet](2019)25(6):754–67.e9.
[18].Zhang D,Tang Z,Huang H,et al.Metabolic Regulation of GeneExpression by Histone Lactylation.Nat[Internet](2019)574(7779):575–80.
[19].Peng,M.et al.Aerobic glycolysis promotes T helper 1 celldifferentiation through an epigenetic mechanism.Science 354,481–484(2016).
[20].Colegio,O.R.et al.Functional polarization of tumour-associatedmacrophages by tumour-derived lactic acid.Nature 513,559–563(2014).
[21].Liu,N.et al.Lactate inhibits ATP6V0d2 expression in tumor-associated macrophages to promote HIF-2α-mediated tumorprogression.J.Clin.Invest.129,631–646(2019).
[22].Zhang,W.et al.Lactate is a natural suppressor of RLR signalingby targeting MAVS.Cell 178,176–189(2019).
[23].Zhang,D.et al.Metabolic regulation of gene expression by histonelactylation.Nature 574,575–580(2019).
[24].Kashan Ahmed(Ahmed K.et alAn autocrine lactate loop mediatesinsulin-dependent inhibition of lipolysis through GPR81.Cell Metab.2010 Apr7；11(4):311-9.
发明内容
基于乳酸在维持机体稳态及正常生理代谢中的重要作用，本发明一方面提供了β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病药物中的应用。
所述代谢性疾病为高脂血症、糖尿病、脂肪肝、肥胖、高血压和心脑血管病中的一种或几种；
本申请另一方面提供了β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗炎症药物中的应用。
所述炎症为过敏性脑脊髓炎、炎症性肠病、类风湿性关节炎、脓毒症、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、高尿酸血症和银屑病中的一种或几种。
所述的药物中还包括其他药学上可接受的助剂、载体或稀释剂；
所述的药物剂型选自素片、薄膜包衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、口服溶液或口服混悬液。
所述的β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸的衍生物为β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物的立体异构体、互变异构体、药物上可接受的盐、溶剂化物或其前药。
本申请该提供了所述的β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸的制备方法，所述的制备方法为：以葡萄糖为原料制得糖基三氯乙酰亚胺酸酯，再以D-乳酸和溴化苄为原料制得乳酸苄酯，最后将乳酸苄酯和糖基三氯乙酰亚胺酸酯反应，再脱去苄基得目标化合物。
具体包括以下步骤：
(1)取D-乳酸溶解于N,N二甲基甲酰胺中，搅拌下用注射器加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)中搅拌30min后，在0℃搅拌下缓慢加入溴化苄和碘化钾，室温条件下搅拌18h后，将反应液与乙酸乙酯、水混合，分层后取有机相，随后将水相用乙酸乙酯萃取4次，合并有机相，有机相用3倍体积的水洗涤，去除有机相中的DMF，用饱和氯化钠溶液清洗并用无水硫酸钠干燥，通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到得白色透明液体Bn-Lac；
(2)将醋酸酐和醋酸钠混合90℃加热回流，完全溶解后缓慢加入D-葡萄糖90℃反应4h，冷却至室温，超声加入冰水，抽滤，得白色固体，无水乙醇重结晶得白色固体Glu1。
(3)将步骤(2)中得到的Glu1溶于无水二氯甲烷中，0℃下加入BF3-Et2O，硫苯酚，室温反应5h，加入饱和碳酸氢钠停止反应，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤，旋干有机层，得黄色油状物Glu2，通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝3：2)纯化得到Glu2；
(4)将步骤(3)中得到的Glu2溶于无水甲醇中，加入30％甲醇钠/甲醇溶液，反应15h完成后，通过柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝10：1)纯化，加入Amberlite IR 120调节pH至中性，过滤，旋干溶剂，真空干燥得Glu3；
(5)将步骤(4)中得到的Glu3溶于无水N,N二甲基甲酰胺中，0℃下加入NaH分次加入反应混合物中。0℃搅拌30min，，向反应混合物中加入苄基溴，搅拌该混合物22h。向溶液中缓慢加入冷蒸馏水；用二氯甲烷提取水相。用蒸馏水和饱和氯化钠水溶液清洗收集的有机相。在Na2SO4上干燥收集的有机相。在减压下蒸发溶剂。通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)纯化得到Glu4。
(6)将步骤(5)中得到的Glu4溶于无水二氯甲烷中，在0℃下加入三氯乙腈和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯，反应2h完成后,通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)Glu5；
(7)将步骤(6)中得到的Glu5放入圆底烧瓶中，加入20ml无水二氯甲烷溶解，冰浴下加入步骤(1)制得的Bn-Lac，氮气保护下加入TMSOTf，在-20℃下反应2h后，加入饱和氯化钠水溶液和少量三乙胺淬灭反应，无水硫酸钠干燥，浓缩后通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝30:1)纯化，得无色透明液体Glu6，
(8)将步骤(7)中得到的Glu6溶于99％甲醇中，加入10％Pd-C加压常温氢化24h，离心除去Pd-C，旋干滤液并用甲醇-乙酸乙酯重结晶得Glu7，即为β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸。
具体反应流程为：
Figure SMS_1
/>
(a)DMF,KI,DBU,rt.,overnight；(b)Ac2O/AcONa,90℃,reflux,4h；(c)BF3-Et2O,Ph-SH,DCM,rt.,5h；(d)MeOH/MeONa,rt.,15h；(e)0℃,NaH,DMF,30min,Bn-Br,rt.,22h；(f)CCl3CN,DBU,DCM,0℃rt.,2h；(g)Bn-Lac,TMSOTf,DCM,N2,0℃–rt.,,2h；(h)Pd/C,H2,MeOH,24h.
如果没有其它说明，本发明的化合物理解为包括游离态和其盐。术语“盐”表示以无机和/或有机酸和碱形成酸式和/或碱式盐。另外，术语“盐可包括两性离子(内盐)，如当式I化合物含有碱性片段如胺或吡啶或咪唑环，和酸式片段如羧酸。药物上可接受的(即非毒性、生理学上可接受的)盐是优选的，如可接受的金属和胺盐，其中阳离子没有显著贡献毒性或盐的生物活性。然而，其它盐可是有用的，如在制备过程中采用分离或纯化步骤，因此也包含于本发明范围中。式I化合物的盐可以如式I化合物与一定量的酸或碱形成，如等量，在媒介中如在其中盐可沉淀或其水媒介中，然后进行冻干作用。
示例性的酸式加成盐包括乙酸盐(如与乙酸或三卤素乙酸形成，如三氟乙酸)、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊丙酸盐、双葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐(与盐酸形成)、氢溴酸盐(与氢溴酸形成)、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐(与马来酸形成)、甲磺酸盐(与甲磺酸形成)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(如与硫酸形成的那些)、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐如甲苯磺酸盐、十一酸盐及其类似物。
示例性碱式盐包括铵盐、碱金属盐如钠、钾、钙和锌盐；碱土金属盐如钙和镁盐；钡、锌和铝盐；与有机碱形成的盐(如有机胺)如三烷基胺如三乙胺、普鲁卡因、二苄胺、N-苄基-β-苯乙胺、1-二苯羟甲胺、N,N'-双苄乙二胺、去氢枞胺、N-乙基哌啶、苄胺、二环己胺或类似药物上可接受的胺和与氨基酸的盐如精氨酸、赖氨酸及其类似物。碱式含氮基团可与试剂季铵化如低级烷基卤化物(如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘化物)、二烷基硫酸盐(如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐)、长链卤化物(如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯、溴和碘化物)、芳烷基卤化物(如苄基和苯乙基溴化物)和其它物质。优选的盐包括单盐酸盐、硫酸氢盐、甲磺酸盐、磷酸盐或硝酸盐。
短语“药物上可接受的”指的是那些化合物、材料、组合物和/或剂型，在完好的医疗评价范围内，适合用于与人类和动物的组织接触，而没有额外的毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，具有相称的合理收益/风险比例。
此处用到的“药物上可接受的盐”指的是公开化合物的衍生物，其中父系化合物是以酸或其碱式盐修饰。药物上可接受盐的实例包括但不限于碱式基团如胺的无机或有机酸式盐；和酸式基团如羧酸的碱或有机盐。药物上可接受的盐包括传统的非毒性盐或父系化合物形成季铵盐，如由非毒性无机或有机酸。例如，这些传统的非毒性盐包括那些衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硫磺酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；和由有机酸制备的盐如乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、帕莫酸、马来酸、羟基马来酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙氧苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸和羟乙磺酸及其类似物。
本发明药物上可接受的盐可由含有碱式或酸式片段的父系化合物，通过常规化学方法合成。通常地，这些盐可由这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量比的适合碱或酸在水或有机溶剂，或其两种混合物中进行制备；通常地，非水媒介如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。
本发明化合物的所有立体异构体是被考虑的，既以混合物或纯或基本纯的形式。立体异构体可包括通过一个或多个手性原子的取代的光学异构体的化合物，以及通过限制旋转一个或多个键(阻转异构体)的光学异构体化合物。本发明化合物的定义包括所有可能立体异构体和其混合物。其尤其包括外消旋形式和具有特别活性的分离光学异构体。通过物理方法拆分外消旋形式，例如分布结晶、分离或立体异构衍生物的结晶或通过手性柱色谱分离。通过常规方法由外消旋盐得到独立的光学异构体如与光学活性的酸形成的盐，然后结晶。
本发明化合物的前药和溶剂化物也是被考虑的。术语“前药”表示化合物，基于施予受体，通过代谢性或化学方法经历化学反应生成式I化合物，和/或盐和/或其溶剂化物。在体内转化以提供生物活性试剂(即式I化合物)的任何化合物是本发明范围和精神内的前药。乳酸及其衍生物具有高毒性、低选择性、低水溶性的缺点，这些缺点限制了乳酸及其衍生物作为抗肿瘤药物应用于临床。糖类是一种亲水性较强的极性化合物，当糖类作为辅助基团被引入到化疗药物中时，往往能够改变药物的理化性质，提高水性，降低化疗药物的毒性，从而提高化疗药物的选择性。
“药物上可接受的载体”一般指的是通常在该领域中接受的，可传递生物活性试剂至动物，尤其是哺乳动物。配制药物上可接受载体，根据本领域普通技术人员所熟知的许多因素。这些包括没有限制被配制的活性试剂的类型和特性；含试剂组合物施予的受体；组合物施予途径；和定向治疗指示。药物上可接受的载体包括水性和非水性液态媒介，以及多种固态和半固态剂型。这些载体包括许多不同组分和添加剂，除了活性试剂之外，这些额外组分由于多种原因包含于配方中，如活性试剂、粘合剂等的稳定性，这是本领域普通技术人员所熟知的。
本发明式I化合物可以治疗症状的任何适合方式施予，取决于位点专一治疗或传递药物的量。局部投药通常优选皮肤相关疾病，癌性或癌性前症状的系统性治疗，但其它传递模式也是考虑的。例如口服施予化合物，如以片剂、胶囊、颗粒、粉末或包括糖浆剂的液体配方形式；局部如以溶液、悬浮液、凝胶或软膏；舌下给药；脸颊地；胃肠外给药如通过皮下、静脉注射、肌肉注射或胸骨内注射或灌注术(如无菌水或非水溶液或悬浮液)；经鼻的如通过吸入喷雾；局部地如以乳液或软膏形式；经直肠地如以栓剂形式；或脂质体地。可施予含非毒性、药物上可接受赋形剂或稀释剂的剂量单位配方。可以立即释放或延缓释放的形式施予所述化合物。立即释放或延缓释放可以适合的药物组合物获得，在部分延缓释放的实例中，使用设备如皮下移植或渗透泵。
口服施予的示例性组合物包括悬浮液，其可含有如用于传输的微晶纤维素、作为悬浮剂的海藻酸或海藻酸钠、作为粘度增强剂的甲基纤维素和现有技术中已知的那些甜味剂或调味剂；立即释放的片剂可含有如微晶纤维素、磷酸二钙盐、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或其它赋形剂、粘合剂、膨胀剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂如现有技术中已知的那些。本发明化合物也可通过舌下和/或颊部施予进行口服传递，如压模、压缩或冻干片剂。示例性组合物可包括快速溶解的稀释剂如甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精类。包含在这些配方中也可以是高分子量赋形剂如纤维素
Figure SMS_2
或聚乙烯二醇(PEG)；有助于粘膜附着的赋形剂如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)和/或马来酸酐共聚物(如/>
Figure SMS_3
)；和控制释放的试剂如聚丙烯酸共聚物(如CARBOPOL/>
Figure SMS_4
)。也可加入润滑剂、助流剂、香料、着色剂和稳定剂有助于制备和使用。
喷雾法或吸入施予的示例性组合物包括溶液，所述溶液可含有苄基醇或其它适合防腐剂、提高吸收性和/或生物活性的吸收促进剂、和/或其它可溶性或分散性试剂如现有技术中已知的那些。
肠胃外施药的示例性组合物包括注射溶液或悬浮液，其可含有如适合的非毒性、肠胃可接受稀释剂或溶剂，如甘露醇、1,3-丁二醇、水、格林氏溶液、等渗氯化钠溶液，或其它适合的分散或润湿和悬浮试剂，包括合成的单或甘油二酯类，和脂肪酸包括油酸。
直肠给药的示例性组合物包括栓剂，其可含如适合的非刺激性赋形剂，如可可脂、合成甘油酯类或聚乙烯二醇类，在普通温度下为固体，但溶解和/或溶入肠胃内释放药物。
治疗有效量的本发明化合物可由本领域普通技术人员确定，并对哺乳动物而言包括示例性剂量约从0.05至1000mg/kg；1-1000mg/kg；1-50mg/kg；5-250mg/kg；250-1000mg/kg，按照每天每千克体重的活性化合物量，其可以单一剂量或以单独的分开剂量形式施予，如每天从1到4倍。可以理解的是，对于特别受体的特殊剂量水平和药剂频率可改变病取决于多种因素，包括使用的特殊化合物活性、所述化合物代谢稳定性和作用长度、年龄、体重、一般健康状况、受体性别和饮食、施予模式和时间、排泄速率、药物组合和特殊疾病的严重程度。用于治疗的优选受体包括动物，最优人类、狗、猫、马及其类似物。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中用到的所有原料和溶剂均购自Sigma Biochemical and Organic Compounds for Research and Diagnostic ClinicalReagents公司。
实施例1β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物的制备方法
包括下述步骤：
(1)取D-乳酸(1ml，13.43mmol)溶解于N,N二甲基甲酰胺(DMF)(10ml)中，0℃搅拌下用注射器加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(2ml，13。42mmol)中搅拌30min后，在搅拌下缓慢加入溴化苄(3.86ml，31.60mmol)和碘化钾(2.68g，16.12mmol)，室温条件下搅拌18h后，将反应液与乙酸乙酯、水混合，分层后取有机相，随后将水相用乙酸乙酯萃取4次，合并有机相，有机相用3倍体积的水洗涤，去除有机相中的DMF，用饱和氯化钠溶液清洗并用无水硫酸钠干燥，通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到得白色透明液体Bn-Lac；
(2)将醋酸酐(9.4ml，100mmol)和醋酸钠(1.0g，13mmol)混合90℃加热回流，完全溶解后缓慢加入D-葡萄糖(2.78mmol)90℃反应4h，冷却至室温，超声加入冰水，抽滤，得白色固体，无水乙醇重结晶得白色固体Glu1。
(3)将步骤(2)中得到的17g Glu1溶于无水二氯甲烷中，0℃下加入BF3-Et2O(16.6ml，130.7mmol)，硫苯酚(6.67ml，65.3mmol)，室温反应5h，加入饱和碳酸氢钠停止反应，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤，旋干有机层，得黄色油状物Glu2。通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝3：2)纯化得到Glu2。
(4)将步骤(3)中得到的Glu2溶于无水甲醇中，加入30％甲醇钠/甲醇溶液，反应15h完成后，通过柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝10：1)纯化，加入Amberlite IR 120调节pH至中性，过滤，旋干溶剂，真空干燥得Glu3；
(5)将步骤(4)中得到的Glu3(3.06g)溶于无水N,N二甲基甲酰胺(150ml)中，0℃下加入NaH(60％，4.49g，112mmol)分次加入反应混合物中。0℃搅拌30min，，向反应混合物中加入苄基溴(19.2g，112.26mmol),搅拌该混合物22h。向溶液中缓慢加入冷蒸馏水(100ml)。用二氯甲烷(3×50mL)提取水相。用蒸馏水(2×50mL)和饱和氯化钠水溶液(1×50mL)清洗收集的有机相。在Na2SO4上干燥收集的有机相。在减压下蒸发溶剂。通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)纯化得到Glu4。
(6)将步骤(5)中得到的Glu4(1.0g，1.9mmol)溶于无水二氯甲烷(10ml)中，在0℃下加入三氯乙腈(1.71ml，18.99mmol)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.17ml,1.14mmol)，反应2h完成后,通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)Glu5；
(7)将步骤(5)中得到的Glu5(1g，1.49mmol)放入圆底烧瓶中，加入20ml无水二氯甲烷溶解，冰浴下加入步骤(1)制得的Bn-Lac(0.24ml，2.22mmol)，氮气保护下加入TMSOTf(0.183ml，2.22mmol)，在-20℃下反应2h后，加入饱和氯化钠水溶液和少量三乙胺淬灭反应，无水硫酸钠干燥，浓缩后通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝30:1)纯化，得无色透明液体Glu6，
(8)将步骤(7)中得到的Glu6(1.0g，1.45mmol.)溶于99％甲醇中，加入10％Pd-C(200mg)加压常温氢化24h，离心除去Pd-C，旋干滤液并用甲醇-乙酸乙酯重结晶得Glu7，即为β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸。
所述的β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸的结构式为：
Figure SMS_5
所述的β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸的核磁氢谱数据为：
1H NMR(500MHz,Deuterium Oxide)δ4.92(d,J＝3.8Hz,1H),4.35(q,J＝7.0Hz,1H),3.76(dd,J＝12.1,2.2Hz,1H),3.68–3.58(m,4H),3.45(dd,J＝9.9,3.8Hz,1H),3.33–3.29(m,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H).
试验例1β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸具有降低体外炎症的效应
1.实验方法
以1μg/mL脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系诱导炎症反应3h、24h，并同时利用相同浓度的乳酸(Lac)、β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物Gly-Lac(20mM)进行干预。刺激结束后，收集细胞采用RT-qPCR法测定炎症因子白细胞介素6(IL-6)，肿瘤坏死因子α(TNF-α)及单核细胞趋化因子1(MCP-1)的表达水平。
2.实验结果
如表1所示，将相同浓度的Lac、Gly-Lac(20mM)作用于LPS诱导的体外炎症模型，采用RT-qPCR法测定炎症因子IL-6、TNF-α和MCP-1的表达水平。结果显示，LPS刺激RAW264.7细胞3h TNF-α和刺激RAW264.7细胞24h MCP-1和IL-6表达水平较正常组显著上调(P＜0.01)；与模型组相比，Gly-Lac高低浓度组均能显著降低IL-6、TNF-α和MCP-1的表达，差别有统计学意义(p<0.01)；提示Gly-Lac具有抗炎的效应。
表1高低浓度Lac及Gly-Lac对LPS诱导的体外炎症的影响(±s，n＝6)
Figure SMS_6
注：与空白对照组相比，##P<0.01，###P<0.001；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.01。
综上所述，本发明是实例制备的Gly-Lac具有抑制由LPS诱导的炎症并作用明显且效果优于乳酸。
试验例2β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸具有治疗由硫酸葡聚糖钠盐诱导的小鼠结肠炎的作用
1.实验方法
1.1动物模型：
取C57BL/6小鼠40只，适应性饲养1周，小鼠被随机分配到四组，分为空白组(PBS)、硫酸葡聚糖钠盐组(DSS)、乳酸钠组(DSS+Lac)和β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸组(DSS+Gly-Lac)。每笼10只小鼠被安置在室温下(标准光照周期，12/12-h光照/黑暗)，可以自由获得食物和水。处理方法维持了7天。DSS+PBS、DSS+Lac和DSS+Gly-Lac组的小鼠在饮用水中接受2％(w/v)的DSS，而PBS组的小鼠接受普通饮用水，给药组每天灌胃15mM的Lac或Gly-Lac。同时，每天记录小鼠的体重和粪便。根据表2对其疾病活动指数(DAI)进行评分。小鼠的粪便被收集在无菌Eppendorf管中，并保存在-80℃。最后一天，小鼠在麻醉状态下颈椎脱位，采血，切除结肠并测量其长度，将组织固定在4％多聚甲醛溶液中或储存在-80℃，直到进一步分析。
1.2测定指标
疾病指数测定：每天记录小鼠的体重和粪便，并根据表2对其疾病活动指数(DAI)进行评分。
表2疾病活动指数(DAI)计分系统。
评分 体重下降百分比 粪便黏稠度 粪便便血
0 0 正常 阴性
1 1-5％ 软便 浅蓝
2 5-10％ 黏液样便 蓝色
3 10-20％ 稀释状便 深蓝
4 >20％ —— 肉眼血便
细胞因子测定：为了量化血清中的细胞因子，选择了三个个相关的细胞因子，白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)。用ELISA法进行测定，以每毫升纳克数表示。
2.测定结果
2.1β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸能减轻DSS诱发的结肠炎的临床症状
在DSS诱导的急性结肠炎模型小鼠中评估了口服β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物的效果。与水+PBS组相比，用DSS处理的小鼠的体重随时间推移而下降。此外，DSS诱导的体重下降在DSS+LAC和DSS+Gly-Lac组中得到有效缓解，这表明乳酸和β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物处理明显地防止了DSS引起的体重下降(表3)。此外，DAI的结果与体重变化的结果一致(表3)。DSS处理还缩短了最后一天的结肠长度(表3)。结肠缩短与DSS引起的结肠炎症和水肿呈正相关。此外，脾脏指数(脾脏/体重)反映了结肠炎的严重程度。与对照组相比，乳酸和β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物的治疗明显延长了结肠的长度，降低了脾脏指数(表3)。因此，β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸治疗明显改善了DSS结肠炎小鼠的疾病症状。
表3乳酸和葡萄糖乳酸对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发的小鼠结肠炎的影响(±s，n＝6)
组别 体重损失比 疾病指数 脾脏指数 结肠长度
CON 0.47％±0.012％ —— 0.0042±0.0004 8.22±0.51
DSS 24.09％±2.803％## 11.14±0.11## 0.0052±0.001### 5.23±0.73##
DSS+Lac 16.42％±3.219％** 7.64±0.16** 0.0046±0.00069** 6.91±0.39
DSS+Gly-Lac 17.19％±0.469％** 5.96±0.09** 0.0047±0.00045** 7.07±0.43*
注：与空白对照组相比，##P<0.01，##P<0.001；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
2.2β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物调节DSS诱导的结肠炎的免疫反应
为了进一步证实Gly-Lac抗炎特性，分析了血清中促炎和抗炎介质的水平。DSS组的TNF-α和IL-1β的水平比对照组高。与DSS组相比，β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸治疗同样降低了促炎症的TNF-α、IL-6和IL-1β的水平(P<0.05)(表4)。这些结果表明，在DSS诱导的结肠炎中β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物显示了肠道抗炎活性。
表4乳酸和葡萄糖乳酸对小鼠血清中炎症细胞因子的影响(±s，n＝6)
Figure SMS_7
注：与空白对照组相比，##P<0.01,####P<0.0001；与模型组相比，**P<0.01,****P<0.0001。
综上所述，这些结果表明，β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸在DSS诱导的结肠炎中显示了肠道抗炎活性。
试验例3β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸具有降低体外肝细胞脂肪变性的效应
1.实验方法
游离脂肪酸(FFA)诱导人正常肝细胞LO2细胞脂肪变性模型的建立，待LO2细胞铺满皿底时，以每孔2×105个细胞的密度接种于6孔板中，于37℃、5％CO2条件下培养24后，实验分组，即：正常对照组、模型组、乳酸(Lac)的低浓度组1.5mM和高浓度组15mM和β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸(Gly-Lac)的低浓度组1.5mM和高浓度组15mM。正常对照组：用含10％胎牛血清DMEM培养基培养；模型组：加入含FFA培养基培养；给药组加入含FFA培养基培养和各高低浓度化合物。在各实验条件下培养24h。
甘油三酯(TG)/蛋白含量的测定，(l)吸弃孔中剩余的培养液，以PBS洗涤1-2遍，加入胰蛋白酶溶液消化细胞，并制成细胞悬液，将各孔细胞悬浮液平均分成两份(细胞①、细胞②)，分别移入1.5mL EP管中；(2)4℃PBS洗涤细胞两次，4℃，1000rpm离心5min，弃上清；(3)EP管于吸水纸上吸净管内残留液体，细胞①管加入100μL异丙醇，振荡摇匀置于冰盒中；细胞②管中加入100μLPBS，振荡摇匀置于冰盒中；(4)4℃下经超声波细胞粉碎机裂解细胞，4℃，13500rpm离心10min，收集上清液，用甘油三酯试剂盒(严格按照说明书进行操作测定)测定细胞①上清中的TG含量，BCA蛋白定量试剂盒(严格按照说明书进行操作测定)测定细胞②蛋白含量，换算成TG/蛋白含量的比值。
2.实验结果
如表5所示，将高低浓度的Lac、Gly-Lac(1mM、10mM)作用于LO2细胞24h，采用甘油三酯试剂盒测定细胞内甘油三酯含量。结果显示，模型组与空白组比较，细胞内甘油三酯含量显著高于空白组；与模型组相比，Lac高低浓度组、Gly-Lac高低浓度组均能显著降低细胞内甘油三酯含量，差别有统计学意义(p<0.01)；Gly-Lac高剂量组降低效果大于低剂量组，提示，β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物具有降低体外肝细胞脂肪变性的效应，可呈剂量依赖性抑制FFA诱导的细胞内脂质沉积。
表5高浓度和低浓度乳酸及葡萄糖乳酸对肝细胞内甘油三酯积累的影响(±s，n＝6)
Figure SMS_8
Figure SMS_9
注：与空白对照组相比,####P<0.0001；与模型组相比，**P<0.01,****P<0.0001。
综上所述，本发明是实例制备的化合物具有β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸(Gly-Lac)可以改善患结肠炎小鼠的结肠的病理变化，下调促炎细胞因子，改善脾脏指数并且具有降低体外肝细胞脂肪变性的效应。
以上是结合具体实施例对本发明进一步的描述，但这些实施例仅仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述代谢性疾病为高脂血症、糖尿病、脂肪肝、肥胖、高血压和心脑血管病中的一种或几种。
3.β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗炎症药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述炎症为过敏性脑脊髓炎、炎症性肠病、类风湿性关节炎、脓毒症、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、高尿酸血症和银屑病中的一种或几种。
5.根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于：所述的药物中还包括其他药学上可接受的助剂、载体或稀释剂。
6.根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于：所述的药物剂型选自素片、薄膜包衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、口服溶液或口服混悬液。
7.根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于：所述的β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸的衍生物为β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸化合物的立体异构体、互变异构体、药物上可接受的盐、溶剂化物或其前药。
8.根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于：所述的β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸的制备方法为：以葡萄糖为原料制得糖基三氯乙酰亚胺酸酯，再以D-乳酸和溴化苄为原料制得乳酸苄酯，最后将乳酸苄酯和糖基三氯乙酰亚胺酸酯反应，再脱去苄基得目标化合物。
9.根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于：所述的β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)取D-乳酸溶解于N,N二甲基甲酰胺中，搅拌下用注射器加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)中搅拌30min后，在搅拌下缓慢加入溴化苄和碘化钾，室温条件下搅拌18h后，将反应液与乙酸乙酯、水混合，分层后取有机相，随后将水相用乙酸乙酯萃取4次，合并有机相，有机相用3倍体积的水洗涤，去除有机相中的DMF，用饱和氯化钠溶液清洗并用无水硫酸钠干燥，通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到得白色透明液体Bn-Lac；
(2)将醋酸酐和醋酸钠混合90℃加热回流，完全溶解后缓慢加入D-葡萄糖90℃反应4h，冷却至室温，超声加入冰水，抽滤，得白色固体，无水乙醇重结晶得白色固体Glu1；
(3)将步骤(2)中得到的Glu1溶于无水二氯甲烷中，0℃下加入BF3-Et2O，硫苯酚，室温反应5h，加入饱和碳酸氢钠停止反应，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤，旋干有机层，得黄色油状物Glu2，通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝3：2)纯化得到Glu2；
(4)将步骤(3)中得到的Glu2溶于无水甲醇中，加入30％甲醇钠/甲醇溶液，反应15h完成后，通过柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝10：1)纯化，加入Amberlite IR 120调节pH至中性，过滤，旋干溶剂，真空干燥得Glu3；
(5)将步骤(4)中得到的Glu3溶于无水N,N二甲基甲酰胺中，0℃下加入NaH分次加入反应混合物中，0℃搅拌30min，向反应混合物中加入苄基溴，搅拌该混合物22h，向溶液中缓慢加入冷蒸馏水；用二氯甲烷提取水相，用蒸馏水和饱和氯化钠水溶液清洗收集的有机相，在Na2SO4上干燥收集的有机相，在减压下蒸发溶剂；通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)纯化得到Glu4；
(6)将步骤(5)中得到的Glu4溶于无水二氯甲烷中，在0℃下加入三氯乙腈和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯，反应2h完成后，通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)Glu5；
(7)将步骤(6)中得到的Glu5放入圆底烧瓶中，加入20ml无水二氯甲烷溶解，冰浴下加入步骤(1)制得的Bn-Lac，氮气保护下加入TMSOTf，在-20℃下反应2h后，加入饱和氯化钠水溶液和少量三乙胺淬灭反应，无水硫酸钠干燥，浓缩后通过柱色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝30:1)纯化，得无色透明液体Glu6；
(8)将步骤(7)中得到的Glu6溶于99％甲醇中，加入10％Pd-C加压常温氢化24h，离心除去Pd-C，旋干滤液并用甲醇-乙酸乙酯重结晶得Glu7，即为β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的制备方法的反应方程式为：
Figure FDA0003949605110000031
/>
CN202211445944.0A 2022-11-18 2022-11-18 β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用 Pending CN116251110A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211445944.0A CN116251110A (zh) 2022-11-18 2022-11-18 β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211445944.0A CN116251110A (zh) 2022-11-18 2022-11-18 β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116251110A true CN116251110A (zh) 2023-06-13

Family

ID=86681626

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211445944.0A Pending CN116251110A (zh) 2022-11-18 2022-11-18 β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116251110A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6986022B2 (ja) Ｆｘｒアゴニストを使用するための方法
CN102439011B (zh) Toll样受体调节剂和疾病的治疗
RU2700415C1 (ru) Ингибиторы репликации вирусов гриппа
US11547681B2 (en) N-acylethanolamide derivatives and uses thereof
US9862721B2 (en) Tetrahydrocarboline derivative
JP2018203749A (ja) Ｒｎａおよび／またはｄｎａ含有ウイルスにより引き起こされる疾患と合併症の治療および予防のための薬剤としてのアミド化合物、およびその使用
CN107438613B (zh) 用于预防或治疗感觉毛细胞死亡的化合物和方法
US10752625B2 (en) Method of making tetrahydronaphthyridinyl nonanoic acid compounds
US11149005B2 (en) Organic amine ester derivative drug of 2-(α-hydroxypentyl)benzoic acid
US20240124409A1 (en) Guaianolide sesquiterpene lactone derivatives and pharmaceutical use thereof
US20230065479A1 (en) Liver-targeting compound having thyroid hormone receptor agonist characteristics and pharmaceutical composition thereof
JP2021533078A (ja) 新規のグルタミニルシクラーゼ阻害剤及び様々な疾患の治療におけるそれらの使用
CN116251110A (zh) β-D-吡喃葡萄糖基-乳酸及其衍生物在制备治疗代谢性疾病、炎症药物中的应用
US9193673B2 (en) Derivatives of mesalazine, process of their preparation and their use in the treatment of intestinal inflammatory diseases
JP5698741B2 (ja) １３ａ−（Ｓ）脱酸チロホリニンの塩、医薬組成物と用途
US11396510B2 (en) GABAA receptor ligand
JP7295145B2 (ja) 神経変性疾患を治療するための医薬及びその使用
CN112592379A (zh) 一种β-D-葡萄糖短链脂肪酸酯化合物及其制备方法和应用
US20230381174A1 (en) Thionoester-derivative of rabeximod for the treatment of inflammatory and autoimmune disorders
JP5575927B2 (ja) ペントキシフィリンの便秘の予防または治療における応用
WO2024061251A1 (zh) 一种4-tmap治疗或缓解抑郁症的用途
CN114478464B (zh) 一种炎症小体选择性抑制剂及其合成方法和应用
KR101499286B1 (ko) 시난디온 ａ를 포함하는 항염증용 조성물
CA2717495A1 (en) Fullerene therapies for inflammation
CN116554144A (zh) 一种sj系列芳基苯胺类化合物及其制备方法与医药用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination