CN116200391A - 结合新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体及其应用 - Google Patents

结合新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种结合新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的Spike蛋白的核酸适配体及其应用。所述核酸适配体包括SEQ ID NO 1、2或3所示的核苷酸序列等；所述核酸适配体以及其联合物、衍生物均能特异性的结合SARS‑CoV‑2(野生型或突变体)的Spike蛋白，阻断Spike蛋白与TLR4蛋白之间的相互作用，抑制SARS‑CoV‑2病毒感染过程引发的炎症反应；具有亲和力高、稳定性强、分子量小、免疫原性低等优点；本发明可应用在新型冠状病毒的检测、标记、成像、诊断和治疗领域。

Description

结合新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体及 其应用
技术领域
本发明涉及生物技术及医药学领域，特别是涉及一种结合新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的Spike蛋白(棘突糖蛋白)的核酸适配体及其应用。
背景技术
新型冠状病毒命名为SARS-CoV-2(Severe Acute Respiratory SyndromeCoronavirus 2)，其蛋白结构中主要含有刺突糖蛋白(Spike Glycoprotein，S)，包膜蛋白(Envelope，E)和膜蛋白(Membrane，M)，核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N)。
新型冠状病毒会诱发机体产生特异性天然免疫反应。特异性天然免疫反应包括抗细菌样天然免疫亢进和抗病毒样天然免疫抑制。抗细菌样天然免疫的亢进会造成患者体内的细胞因子风暴，最终导致脓毒症样表型。Zhao等人从分子机制角度解释新型冠状病毒特征天然免疫表型，发现新型冠状病毒的Spike蛋白可以直接结合并激活模式识别受体TLR4(Toll-like Receptor 4)。将模式受体被激活后，会引起细胞内细胞因子风暴，如IL-1B、IL-6、TNF-α、IFN-β等表达量增加，最终导致患者脓毒症表型。因此，针对新型冠状病毒的Spike蛋白与TLR4蛋白特异性阻断药物的开发成为了治疗新冠肺炎患者病变为脓毒症重要靶点。
核酸适配体(Aptamers)是利用体外筛选技术获得的一类单链DNA或RNA分子，它们是具有高亲和力和高特异性的配体，能结合的靶标有碳水化合物、细胞、核酸、肽、蛋白质小分子与病毒。与生物体内的天然抗体相比，核酸适配体的获得是通过化学方法合成及修饰，无需动物免疫，还可通过筛选过程控制其与靶标的亲和力和特异性，因此，核酸适配体又被称为“化学抗体”，具有分子量小，免疫原性低的优点。目前未见将核酸适配体用于阻断Spike蛋白和TLR4相互作用的报道，也未见用于抑制免疫因子产生的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种能够特异性地、高亲和力地阻断SARS-CoV-2病毒Spike蛋白和TLR4相互作用的核酸适配体，使其能特异性抑制SARS-CoV-2病毒感染过程引发的炎症反应，同时还提供该核酸适配体的相关应用。
为了解决上述技术问题，本发明利用体外筛选技术筛选核酸适配体，经过共12轮的筛选富集，进行高通量测序，最终得到了能特异性地，高亲和力地结合Spike蛋白的核酸适配体(ST-6：SEQ ID NO 1)，随后基于ST-6进行改造，这些核酸适配体均能够特异性地、高亲和力地阻断Spike蛋白和TLR4相互作用。这些核酸适配体均能抑制Spike蛋白刺激细胞产生炎症因子的能力且能抑制SARS-CoV-2刺激细胞产生炎症因子的能力。基于此，产生了本发明，在本发明中：
一方面，本发明提供了一种结合新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体，包括以下序列：
(1)SEQ ID NO 1、2或3所示的核苷酸序列；
Figure BDA0003383673970000021
(2)与(1)中所示的核苷酸序列具有至少50％以上(50％-99％，比如，60％以上，70％以上，80％以上，85％以上，90％以上，95％以上，98以上等)同源性且能结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的核苷酸序列；例如将SEQ ID NO:1、2、3中的任一个所示的核苷酸序列删除部分序列或增加部分序列。
(3)由(1)或(2)所示的核苷酸序列在体内或体外转录形成、且能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的核糖核苷酸序列RNA序列；
上述SARS-CoV-2为可为野生型，也可以是突变株(如Delta，Lambda突变株等)。
作为本发明进一步地改进，可以对上述核酸适配体进行常规的改造修饰，修饰方法可包括以下任意一种或多种：磷酸化、氨基化、甲基化、巯基化、同位素化、将氧替代为硫、将氧替代为硒。本领域技术人员可以理解，经过上述改造修饰后所得到的序列也应能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白，以满足使用需求。也就是说，经过上述修饰后的核酸适配体，都具有原核酸适体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能，都可应用于与SARS-CoV-2的Spike蛋白结合。
另一方面，本发明还提供了一种核酸适配体的联合物，该联合物是在上述的核酸适配体上连接其它物质得到的、能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体联合物；该核酸适配体联合物主要是用于检测、标记、成像、诊断和/或治疗，本领域技术人员可以理解，连接的其它物质也是与检测、标记、成像、诊断和/或治疗相关的物质。例如，其它物质可以是本领域中常规的如下物质中的任意一种或多种：DNA、RNA、荧光标记物如Cy3、生物素、Protac、地高辛、小肽、纳米发光材料、生物小分子、治疗性物质、放射性物质、siRNA或酶标记等。上述其它物质的与核酸适配体的连接方式可以采用以下任意一种或多种：如T4DNA ligase连接、PCR连接、生物合成连接等。本领域技术人员可以理解，经过上述连接后所得到的序列也应能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白，以满足使用需求。也就是说，经过上述连接的核酸适配体的联合物，都包含并且不改变原核酸适体的分子结构、理化性质和功能，都可应用于与SARS-CoV-2的Spike蛋白结合。
另一方面，本发明还提供了一种核酸适配体的衍生物，本领域技术人员可以理解，在得到核酸适配体的基础上，基于其分子结构、理化性质和功能，本领域技术人员可以对其进行各种常规改造，以使其满足不同的使用要求。比如，可以以上述核酸适配体或核酸适配体的联合物的核苷酸序列为主体骨架进行改造，通过改造得到的能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的硫代磷酸脂类衍生物；又比如，可以以上述核酸适配体或核酸适配体的联合物的核苷酸序列为基础进行合成、通过合成得到能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的肽核酸。当然，上述改造都属于本领域的常规改造，前提改造后不改变原核酸适配体的理化性质和功能，都可应用于与SARS-CoV-2的Spike蛋白结合。
再一方面，本发明提供了前述核酸适配体、核酸适配体的联合物、核酸适配体的衍生物的应用，所述应用为以下任一种：
1)分离纯化SARS-CoV-2的Spike蛋白；
2)标记SARS-CoV-2的Spike蛋白；
3)SARS-CoV-2的Spike蛋白的成像；
4)富集SARS-CoV-2的Spike蛋白；
5)定量或定性检测SARS-CoV-2的Spike蛋白；
6)制备SARS-CoV-2的Spike蛋白的抑制剂；
7)制备靶向SARS-CoV-2的Spike蛋白的试剂或药物；
8)制备阻断SARS-CoV-2的Spike蛋白与TLR4蛋白之间结合的抑制剂；
9)制备用于诊断或治疗SARS-CoV-2引发的肺炎感染或炎症相关疾病的试剂或药物；
10)制备用于检测、标记、成像、诊断或治疗SARS-CoV-2的试剂盒。
还有一方面，本领域技术人员可以理解，基于前述发现，本发明还可对应提供一种试剂盒类的应用产品，该试剂盒包含上述核酸适配体或核酸适配体的联合物或核酸适配体的衍生物，来满足不同的使用需求。
还有一方面，本领域技术人员可以理解，基于前述发现，本发明还可对应提供一种药物类的应用产品，该药物包含包含上述核酸适配体或核酸适配体的联合物或核酸适配体的衍生物，来满足不同的使用需求。
本发明提供了结合新冠病毒(SARS-CoV-2)Spike蛋白的核酸适配体及其应用。该核酸适配体、其联合物和衍生物能特异性的结合SARS-CoV-2(野生型或突变体)的Spike蛋白，阻断Spike蛋白与TLR4蛋白之间的相互作用，具有亲和力高、稳定性强，分子量小，免疫原性低等优点，且可特异性抑制SARS-CoV-2病毒感染过程引发的炎症反应及由此引发的脓毒血症等疾病，本发明应用在新冠病毒的检测、标记、成像、诊断和治疗领域。
附图说明
上述仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，以下结合附图与具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
图1是评估ST-6结合Spike蛋白的亲和能力图，其中Ka为结合常数，Kd为解离常数，KD为亲和常数；
图2是评估基于ST-6改造的序列与Spike蛋白结合的亲和能力图；其中(a)为ST-6-1与Spike蛋白结合的亲和能力图；(b)为ST-6-2与Spike蛋白结合的亲和能力图；
图3是评估ST-6(a)、ST-6-1(b)、ST-6-2(c)的特异性图；
图4是评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2在10％FBS中稳定性图；
图5是评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制SARS-CoV-2Spike蛋白与TLR4结合能力图；
图6是评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制SARS-CoV-2突变体(Delta，Lambda)的Spike蛋白与TLR4结合能力；其中(a)为抑制SARS-CoV-2突变体Delta的Spike蛋白与TLR4结合能力图；(b)为抑制SARS-CoV-2突变体Lambda的Spike蛋白与TLR4结合能力图；
图7是评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制Spike蛋白刺激细胞产生炎症因子的能力；其中(a)为抑制Spike蛋白刺激细胞产生炎症因子IL-1B的能力图；(b)为抑制Spike蛋白刺激细胞产生炎症因子IL-6的能力图；(c)为抑制Spike蛋白刺激细胞产生炎症因子TNF-α的能力图；(d)为抑制Spike蛋白刺激细胞产生炎症因子IFN-β的能力图；
图8是评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制SARS-CoV-2刺激细胞产生炎症因子的能力。
具体实施方式
以下以具体实施例来说明本发明的方案，但并非是对本发明的技术方案的限制，本领域技术人员应该理解，依然可以对发明进行修改或等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的保护范围之中。
以下实施例中的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为常规生化试剂，可通过商业途径购买得到。
本发明利用体外筛选技术筛选核酸适配体，筛选策略为竞争性筛选，在三轮之后，加入Ni-beads进行负筛，在6轮之后，加入tRNA和BSA进行压力筛选，在9轮之后加入TLR4蛋白进行竞争性洗脱结合的DNA序列。经过共12轮的筛选富集后，进行高通量测序，测序共约80000条序列，对于富集度最高的序列进行ELISA验证，最终得到了能特异性地，高亲和力地结合Spike蛋白的核酸适配体(ST-6：SEQ ID NO 1)，随后基于ST-6进行改造，获得了ST-6-1(SEQ ID NO 2)、再基于ST-6-1进一步改造获得了ST-6-2(SEQ ID NO 3)。这些核酸适配体均能够特异性地、高亲和力地阻断Spike蛋白和TLR4相互作用。这些核酸适配体均能抑制Spike蛋白刺激细胞产生炎症因子的能力且能抑制SARS-CoV-2刺激细胞产生炎症因子的能力。下面对此进行展开说明。
Figure BDA0003383673970000061
Figure BDA0003383673970000071
实施例1：评估评估ST-6结合Spike蛋白的亲和能力
使用分子相互作用系统Pall forteBio Octet K2进行ST-6的KD值测定。将生物素标记的浓度为100nM核酸适配体固定在生物传感器上，使用Spike蛋白作为分析物，经过固化，结合，解离等步骤，传感器所接收的光吸收值变化换算出相应的速率，经过计算得出核酸适配体与分析物Spike蛋白之间的亲和力常数KD值，如图1所示，使用不同浓度的S蛋白与ST-6进行结合，从下往上S蛋白的浓度分别为25nM,50nM，75nM，100nM，最终得出ST-6对于S蛋白的KD值约为35.62nM。说明ST-6与Spike蛋白有着很高的亲和力。其中Ka为2.594×104(1/Ms)，Kd为9.242×10-4(1/s)，KD为35.62±2.65(nM)。
实施例2：评估基于ST-6改造的序列与Spike蛋白结合的亲和能力
通过分析ST-6(80nt)序列的二级结构，基于该序列进行剪短优化。我们尝试找到决定该核酸适配体的核心序列，便先将筛选时固定的上下游引物(ST-6(SEQ ID NO 1)中的带下划线部分的序列)去除，得到了ST-6-1，共40nt。通过实验验证其阻断S-TLR4相互作用的能力还被保留。因此，接下来尝试了更短的序列，将ST-6-1中富含G碱基的序列保留下来，最终剪短为ST-6-2,共27nt。
使用分子相互作用系统Pall forteBio Octet K2进行ST-6-1，ST-6-2的KD值测定。将生物素标记的核酸适配体固定在生物传感器上，使用Spike蛋白作为分析物，经过固化，结合，解离等步骤，传感器所接收的光吸收值变化换算出相应的速率，经过计算得出核酸适配体与分析物Spike蛋白之间的亲和力常数KD值，如图2所示，使用不同浓度的S蛋白与ST-6-1、ST-6-2进行结合，从下往上S蛋白的浓度分别为25nM,50nM，75nM，100nM，最终得出ST-6-1的KD值为79.44nM，ST-6-2的KD值为80.02nM。说明ST-6-1,ST-6-2与Spike蛋白也有着较高的亲和力。其中ST-6-1的Ka为3.144×104(1/Ms)，Kd为2.498×10-3(1/s)，KD为79.44±1.29(nM)；其中ST-6-2的Ka为2.591×104(1/Ms)，Kd为2.074×10-3(1/s)，KD为80.02±0.82(nM)。
实施例3：评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2与Spike蛋白结合的特异性
通过ELISA实验来验证ST-6,ST-6-1,ST-6-2与Spike蛋白结合的特异性。将Spike蛋白，RBD蛋白，IgG蛋白，PDGF-AA蛋白，BSA蛋白，ACE2蛋白，TLR4蛋白包被在96孔板上，空白对照(Blank)组只加入包被液，再将带生物素标记的核酸适配体与这些蛋白结合30min后，洗杂3次。加入HRP-链霉亲和素孵育30min后，洗杂3次，再加入TMB反应，终止后在OD450nm处进行测量吸光值。如图3所示，结果显示，ST-6,ST-6-1,ST-6-2与Spike蛋白结合有较高的特异性。
实施例4：评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2在10％FBS中的稳定性
为了评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2在血清中的稳定性，我们检测了ST-6,ST-6-1,ST-6-2不同时间段(3h，6h，12h，24h，48h)在10％FBS中降解情况。如图4所示，与随机序列RS相比，ST-6,ST-6-1,ST-6-2在10％FBS中表现出了良好的稳定性。1×PBS为磷酸盐缓冲溶液，FBS为胎牛血清。RS-80nt,RS-40nt,RS-27nt为不同适配体对应长度的随机单链DNA。实施例5：评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制SARS-CoV-2Spike蛋白与TLR4结合能力
使用竞争性ELISA的方法来评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2在体外抑制Spike蛋白与TLR4蛋白的结合能力。一共有三种策略来验证其抑制能力。第一种为预防策略(pretention)，先将Spike蛋白包被在高吸附96孔板上，再将一定浓度的核酸适配体与Spike蛋白进行孵育30min，洗杂三次。接着将TLR4蛋白加入微孔板中，孵育30min进行结合，洗杂三次，最后使用TLR4蛋白特异性抗体进行检测结合在Spike蛋白上的余量；第二种为竞争策略，将核酸适配体与TLR4蛋白同时加入包被好Spike蛋白的微孔板中进行竞争性结合，再将二者去除，洗杂三次，最后使用TLR4蛋白特异性抗体进行检测结合在Spike蛋白上的余量；第三种为替代策略，先将TLR4蛋白与Spike蛋白进行孵育30min，洗杂三次，再将一定浓度的核酸适配体加入微孔板中进行结合，洗杂三次，最后使用TLR4蛋白特异性抗体进行检测结合在Spike蛋白上的余量；如图5所示，三种策略的结果都显示，与随机序列RS相比，ST-6,ST-6-1,ST-6-2对于Spike与TLR4的结合约有50％-70％的抑制效果，说明ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制Spike蛋白与TLR4蛋白的相互作用。
实施例6：评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制SARS-CoV-2突变体(Delta，Lambda)的Spike蛋白与TLR4结合能力
为了评估核酸适配体是否对SARS-CoV-2突变株的Spike蛋白也能抑制其与TLR4蛋白的相互作用，同样使用竞争性ELISA实验来进行验证。具体实验过程与实施例5相同，只将野生型的Spike蛋白换为突变体Delta的Spike蛋白或Lambda的Spike蛋白。如图6所示，根据结果显示，与空白对照(Blank)相比，ST-6,ST-6-1,ST-6-2对于Delta的Spike蛋白或Lambda的Spike蛋白与TLR4的结合约有60％-70％的抑制效果，说明ST-6,ST-6-1,ST-6-2是Delta的Spike蛋白或Lambda的Spike蛋白对于TLR4蛋白的抑制性核酸适配体。
实施例7：评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制Spike蛋白刺激细胞产生炎症因子的能力
使用人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)来进行验证ST-6,ST-6-1,ST-6-2在细胞水平上抑制Spike蛋白引发炎症的能力。根据文献报道SARS-CoV-2的Spike-Tri蛋白能通过与细胞膜上的TLR4受体相互作用，引发细胞内炎症因子风暴，即炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α，IFN-β等炎症因子的表达水平增加。使用核酸适配体在细胞水平进行炎症因子抑制实验，分别通过实例3中的三种策略进行了实验。第一种，在体外先将Spike蛋白与ST-6,ST-6-1,ST-6-2在室温孵育10min，而后再加入至THP-1细胞中，刺激2h后，将细胞收集提取其总RNA后进行逆转录为cDNA，再进行qPCR实验，检测相关炎症因子的变化。第二种，不在体外进行预孵育，直接将Spike蛋白与ST-6,ST-6-1,ST-6-2同时加入THP-1细胞中，刺激2h后，将细胞收集提取其总RNA后进行逆转录为cDNA，再进行qPCR实验，检测相关炎症因子的变化。第三种，先将Spike蛋白加入THP-1细胞0.5h后，加入ST-6,ST-6-1,ST-6-2，再刺激1.5h，将细胞收集提取其总RNA后进行逆转录为cDNA，再进行qPCR实验，检测相关炎症因子的变化。如图7所示，根据三种策略的定量结果显示,与随机序列RS相比，说明ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制Spike蛋白在细胞水平上引发炎症因子表达的能力。
实施例8：评估ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制SARS-CoV-2刺激细胞产生炎症因子的能力
为了更清楚验证ST-6,ST-6-1,ST-6-2在病毒水平上抑制SARS-CoV-2引发炎症的能力，进行了ST-6,ST-6-1,ST-6-2一系列浓度梯度抑制实验。在体外先将核酸适配体分别与SARS-CoV-2孵育10min后，再加入THP-1细胞中，刺激2h后，将细胞收集提取其总RNA后进行逆转录为cDNA，再进行qPCR实验，检测相关炎症因子的变化。如图8所述，根据定量结果显示,与随机序列RS相比，ST-6,ST-6-1,ST-6-2对于炎症因子的变化约有70％-80％的抑制效果，说明ST-6,ST-6-1,ST-6-2抑制SARS-CoV-2引发炎症因子表达的能力。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，本领域技术人员利用上述揭示的技术内容做出些许简单修改、等同变化或修饰，均落在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 四川大学
<120> 结合新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 80
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agcagcacag aggtcagatg agggcatcaa aggggggagg gcgggtggat tggatgccga 60
cctatgcgtg ctaccgtgaa 80
<210> 2
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
agggcatcaa aggggggagg gcgggtggat tggatgccga 40
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggggagggcg ggtggattgg atgccga 27

Claims (8)

1.结合新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体，其特征在于，包括以下序列：
(1)SEQ ID NO 1、2或3所示的核苷酸序列；或，
(2)与(1)中所示的核苷酸序列具有至少50％以上同源性且能结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的核苷酸序列；或，
(3)由(1)或(2)所示的核苷酸序列在体内或体外转录形成、且能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的RNA序列；
所述SARS-CoV-2为野生型或突变株。
2.根据权利要求1所述的结合新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体被修饰且修饰后所得到的序列能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白；
所述修饰包括以下任意一种或多种：磷酸化、氨基化、甲基化、巯基化、同位素化、将氧替代为硫、将氧替代为硒。
3.核酸适配体的联合物，其特征在于，为在权利要求1或2所述的结合新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体上连接其它物质得到的、能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的核酸适配体联合物；
所述核酸适配体联合物用于检测、标记、成像、诊断和/或治疗。
4.根据权利要求3所述的核酸适配体的联合物，其特征在于，所述其它物质包括以下任意一种或多种：DNA、RNA、荧光标记物、生物素、Protac、地高辛、小肽、纳米发光材料、生物小分子、治疗性物质、放射性物质、siRNA或酶标记；
连接方式采用以下任意一种或多种：T4 DNA ligase连接、PCR连接、生物合成连接。
5.核酸适配体的衍生物，其特征在于，为使用权利要求1或2所述的核酸适配体或权利要求3或4所述的核酸适配体的联合物为主体进行改造得到的、能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的硫代磷酸脂类衍生物；
或，为使用权利要求1或2所述的核酸适配体或权利要求3或4所述的核酸适配体的联合物进行合成得到的、能特异性结合SARS-CoV-2的Spike蛋白的肽核酸。
6.权利要求1或2所述的核酸适配体或权利要求3或4所述的核酸适配体的联合物或权利要求5所述的核酸适配体的衍生物应用，其特征在于，所述应用为以下任一种：
1)分离纯化SARS-CoV-2的Spike蛋白；
2)标记SARS-CoV-2的Spike蛋白；
3)SARS-CoV-2的Spike蛋白的成像；
4)富集SARS-CoV-2的Spike蛋白；
5)定量或定性检测SARS-CoV-2的Spike蛋白；
6)制备SARS-CoV-2的Spike蛋白的抑制剂；
7)制备靶向SARS-CoV-2的Spike蛋白的试剂或药物；
8)制备阻断SARS-CoV-2的Spike蛋白与TLR4蛋白之间结合的抑制剂；
9)制备用于诊断或治疗SARS-CoV-2引发的肺炎感染或炎症相关疾病的试剂或药物；
10)制备用于检测、标记、成像、诊断或治疗SARS-CoV-2的试剂盒。
7.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或2所述的核酸适配体或权利要求3或4所述的核酸适配体的联合物或权利要求5所述的核酸适配体的衍生物。
8.一种药物，其特征在于，包含权利要求1或2所述的核酸适配体或权利要求3或4所述的核酸适配体的联合物或权利要求5所述的核酸适配体的衍生物。
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