CN116195601B

CN116195601B - 一种复合菌剂及其制备方法和应用

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Publication number: CN116195601B
Application number: CN202211543223.3A
Authority: CN
Inventors: 邱磊; 李欣朋; 郑昊; 赵先炎; 杨雅婷; 胡文效
Original assignee: Qilu University of Technology
Current assignee: Qilu University of Technology
Priority date: 2022-12-02
Filing date: 2022-12-02
Publication date: 2024-04-02
Anticipated expiration: 2042-12-02
Also published as: CN116195601A

Abstract

本发明涉及生物农药技术领域，具体是一种复合菌剂及其制备方法和应用，复合菌剂中，按照重量份包括：白僵菌孢子粉20～40份，甲壳素30～45份，聚谷氨酸25～45份，牡蛎壳粉20～40份，所述白僵菌孢子粉的含孢量为(2.5～4.0)×10¹⁰个/g，且孢子萌发率大于87％。白僵菌可以有效防治葡萄常见虫害。甲壳素、牡蛎壳粉能提供给葡萄生长发育所需要的养分，为葡萄提供钙离子，还可以做白僵菌孢子粉萌发的增效剂，提高白僵菌的驱虫效果。聚谷氨酸不仅可以促进生长还具有保湿的能力，可以在根毛处形成一层薄膜防止水分流失，促进葡萄对养分的吸收。

Description

一种复合菌剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物农药技术领域，具体是一种复合菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

球孢白僵菌属于子囊菌门、肉座菌目、虫草菌科、白僵菌属，是广谱性昆虫病原真菌，主要进行无性生殖产生孢子，也可进行有性生殖并产生实体。白僵菌作为昆虫病原真菌的典型代表，因其寄主不易产生抗体且容易人工培养等优点，被广泛应用于害虫的防治且被认为是最具开发潜力的一种昆虫病原真菌。白僵菌对防治玉米螟、松毛虫、小蔗螟、盲蝽、谷象、柑橘红蜘蛛和蚜虫等农林害虫，其能有效控制虫口数量，同时不伤害其他天敌昆虫和有益生物，同时其容易大量生产，防止成本具有竞争力，因而具有广泛的发展前景。

葡萄种植过程中的常见虫害有多种，如绿盲蝽、葡萄透翅蛾、葡萄短须螨等。但其中对葡萄影响最大的为绿盲蝽，已成为葡萄种植过程中的主要虫害，绿盲蝽的成、若虫均可刺吸葡萄嫩叶、嫩芽、幼果等幼嫩组织，吸取植株组织内的汁液，严重影响葡萄的营养生长，给果农造成重大的经济损失。目前，葡萄虫害防治过程中使用的防虫产品，基本仅能针对单一的虫害进行防治或杀灭，如中国专利文献CN 104322347 A、CN 104322346 A和CN104350962A，均公开了适用于单一葡萄虫害的防治方法，无法实现对葡萄虫害的广谱防治效果，且现有葡萄虫害防治方法中药物使用量大，会造成农药残留。因此，研发一种能够有效防治多种葡萄虫害的生物农药成为了亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是为克服现有技术的缺陷，提供一种复合菌剂及其制备方法和应用，有效防治葡萄虫害，并同时能促进葡萄的生长，提高葡萄产量及葡萄品质。

为实现上述技术效果，本发明采用下述技术方案：

一种复合菌剂，按照重量份包括：白僵菌孢子粉20～40份，甲壳素30～45份，聚谷氨酸25～45份，牡蛎壳粉20～40份，所述白僵菌孢子粉的含孢量为(2.5～4.0)×10¹⁰个/g，且孢子萌发率大于87％。

优选的，白僵菌为球孢白僵菌菌株BbQLU1，保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号：CGMCC NO.11618。

优选的，为了更好的溶于水，用于叶面喷施，所述牡蛎壳粉的粒径为100～120目，生态甲壳素的粒径为150～180目。

优选的，所述生态甲壳素中，包括甲壳素、聚谷氨酸、有机质，按重量份计，甲壳素30～45份、聚谷氨酸25～45份、有机质20～40份。

本发明还提供了上述复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：

将牡蛎壳粉与白僵菌孢子粉、生态甲壳素混匀，即得复合菌剂。

优选的，牡蛎壳粉的制备方法为：将牡蛎壳经高温烘烤后研磨至粉末。

优选的，所述牡蛎壳的烘烤温度为700～900℃；进一步优选的，所述牡蛎壳的烘烤温度为800℃。

优选的，所述白僵菌孢子粉的制备方法如下：

在SDAY平板培养基上接种球孢白僵菌BbQLU1，并在28℃条件下培养7～9天，当培养基表面包裹一层淡黄色或黄色的孢子粉时，在35℃除湿36h后即得白僵菌孢子粉。

优选的，SDAY培养基每升组分包括：40g葡萄糖、20g琼脂、10g蛋白胨、10g酵母浸膏，余量水。

本发明还提供了上述复合菌剂或由上述制备方法制得的复合菌剂的应用，用于对葡萄虫害的防治，具体的，用于防治绿盲蝽、金龟子、斑衣蜡蝉、葡萄透翅蛾、葡萄根瘤蚜等葡萄虫害。

优选的，应用中，应用方式包括根施和喷施。

进一步优选的，根施方式具体为：在葡萄坐果期，离葡萄树根部10～20cm处进行根施，葡萄的种植密度在265株～275株/亩，根施时为通过挖10～15cm深沟壑进行根施，每亩中复合菌剂的用量为3.0～4.0kg。

进一步优选的，喷施方式具体为：在葡萄坐果期，将复合菌剂与水混匀形成悬浊液，每1kg复合菌剂与100～120L水混合，葡萄的种植密度在265株～275株/亩，每亩中悬浊液的喷洒量为20～30L。

本发明的有益效果为：

1.本发明提供的复合菌剂具有广谱的杀虫效果，对葡萄虫害的防治效果明显，防治的葡萄虫害包括绿盲蝽、金龟子、斑衣蜡蝉、葡萄透翅蛾、葡萄根瘤蚜等，尤其是对绿盲蝽的防治效果显著，本发明提供的复合菌剂成分组成具有一定的协同作用，有效提高了复合菌剂的杀虫效果。

2.本发明提供的复合菌剂能够有效提供葡萄的产量和品质，并且能够改善葡萄种植的土壤环境。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。

实施例中使用的药品及试剂，若无特殊说明，则为已上市普通产品，实施例中未详加说明的内容，均按本领域现有技术。

如生态甲壳素购自北京博威神农科技有限公司。

实施例1

牡蛎壳预处理：为了验证不同温度锻造对牡蛎壳中有效氮磷钾含量的影响，将废弃牡蛎壳进行冲洗、晾晒，后在马弗炉经700℃、800℃、850℃、900℃高温锻造2h，将得到的牡蛎壳磨粉过120目筛。

对经四种温度锻造的牡蛎壳粉进行有效氮磷钾含量的测定，见表一。

表一牡蛎壳粉氮磷钾含量

可降解氮和速效钾的测定方法采用国标《肥料中氮、磷、钾的自动分析仪测定法》GB/T22923-2008给出的方法，有效磷的测定方法采用国标《复混肥料中有效磷含量的测定》GB/T8573-2017给出的方法。

从表一中实验数据可知，经过800℃与850℃锻造的牡蛎壳，所具有的可降解氮、有效磷、速效钾含量较多，能为葡萄带来更多营养成分。但由表格数据可知，当温度由700℃升高到800℃后，可降解氮与有效磷的含量实现了显著提升，而速效钾的含量并未因升温产生显著提升，而温度由800℃升高至850℃后，各有效成分的含量均未因煅烧温度的提升而产生大幅提升，升温至900℃各成分含量下降，800℃即为温度上升趋势的拐点，在此温度之前有效成分含量随温度升高而显著提升，在此温度之后有效成分含量并无显著变化，因此，煅烧温度为800℃即为最优煅烧温度。

实施例2

一种复合菌剂，按照重量份包括：白僵菌孢子粉20份，生态甲壳素38份，牡蛎壳粉39份。

白僵菌为球孢白僵菌菌株BbQLU1，保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号：CGMCC NO.11618。

所述牡蛎壳粉的粒径为100～120目，生态甲壳素的粒径为150～180目。

所述生态甲壳素中，包括甲壳素、聚谷氨酸、有机质，按重量份计，甲壳素30～45份、聚谷氨酸25～45份、有机质20～40份。

白僵菌孢子粉的制备方法如下：

(1)将称取的40g葡萄糖、20g琼脂、10g蛋白胨、10g酵母浸膏加入1000ml蒸馏水，按照同等比例配制制萨氏培养基(SDAY)，经高压灭菌锅处理20min，冷却到50℃，在超净台中将培养基导入到无菌培养皿中。

(2)在SDAY平板培养基上接种球孢白僵菌BbQLU1，并在28℃条件下培养7～9天，当培养基表面包裹一层淡黄色或黄色的孢子粉时，用吸水纸或烘过的报纸覆盖，在35℃除湿36h后取出，制得白僵菌抱子粉，白僵菌抱子粉的含孢量2.5×10¹⁰个/g。

实施例3

一种复合菌剂的制备方法，

将白僵菌孢子粉、生态甲壳素和牡蛎壳粉混匀，其中，白僵菌孢子粉40份，生态甲壳素59份，牡蛎壳粉34份。

白僵菌孢子粉的制备方法同实施例2。

实施例4

一种复合菌剂的制备方法，

将白僵菌孢子粉、生态甲壳素和牡蛎壳粉混匀，其中，白僵菌孢子粉30份，生态甲壳素40份，牡蛎壳粉25份。

白僵菌孢子粉的制备方法同实施例2。

实验例

复合菌剂中白僵菌孢子萌发率实验：

对实施例2-4制得的复合菌剂在25℃条件下，进行24h培养后，测定孢子萌发率，数据统计如下：

表二白僵菌孢子萌发率

孢子萌发率的统计方法为将复合菌剂置于灭过菌的试管中加蒸馏水，震荡制成孢子悬浮液，分别吸取100μl接种到SDAY培养基上，每组实施例重复实验3次，每个载玻片取十个视野计算表萌发率，有明显芽管长出的记为一个萌发。

由表二数据可知，本发明提供的复合菌剂中孢子萌发率均在87％以上，能够实现良好萌发。同时，实施例2提供的复合菌剂中，因生态甲壳素与白僵菌孢子粉的重量份数之比最大，提供了最好的促进萌发效果，因此实施例2得到的萌发率最高，实施例3和实施例4的萌发率随生态甲壳素与白僵菌孢子粉的重量份数之比的下降而下降，但仍均保持在87％以上。

应用例

为进一步说明复合菌剂所带来的有益效果，对实施例给出的复合菌剂的肥效进行测试，测试地点为山东省威海市台依湖国际酒庄生态文化区，该区域葡萄种植密度约为270株/亩。

测试方法如下：

处理组1：采用台依湖生态酒庄300葡萄种植区，在葡萄坐果期，在离葡萄树根部10cm处，挖一条10cm深的沟壑，将实施例2中的复合菌剂均匀施加，每亩用量为3.5kg，共根施3亩；

处理组2：采用台依湖生态酒庄300葡萄种植区，在葡萄坐果期，将实验组1中制备的复合菌剂的悬浊液，每1kg复合菌剂与110L水混合，喷施在葡萄叶片，每亩用量约为25L，共喷施3亩；

处理组3：采用台依湖生态酒庄301葡萄种植区，在葡萄坐果期，使用由布氏白僵菌(购自盐城市神微微生物菌种科技有限公司)制备的孢子粉制得的复合菌剂(除了孢子粉种类不同，其他组分与实施例2均相同)进行根施，具体根施方式与处理组1相同，共根施3亩；

处理组4：采用台依湖生态酒庄301葡萄种植区，在葡萄坐果期，使用由布氏白僵菌(购自盐城市神微微生物菌种科技有限公司)制备的孢子粉制得的复合菌剂(除了孢子粉种类不同，其他组分与实施例2均相同)进行喷施，具体喷施方式与处理组2相同，共喷施3亩；

处理组5：采用台依湖生态酒庄302葡萄种植区，在葡萄坐果期，使用实施例2提供的方法制备仅含白僵菌孢子粉和生态甲壳素的复合菌剂，具体根施方式与处理组1相同，共根施3亩；

处理组6：采用台依湖生态酒庄302葡萄种植区，在葡萄坐果期，使用实施例2提供的方法制备仅含白僵菌孢子粉和牡蛎壳粉的复合菌剂，具体根施方式与处理组1相同，共根施3亩；

处理组7：采用台依湖生态酒庄303葡萄种植区，在葡萄坐果期，仅使用实施例2制备的白僵菌孢子粉，具体根施方式与处理组1相同，共根施3亩；

处理组8：采用台依湖生态酒庄303葡萄种植区，在葡萄坐果期，使用现有葡萄虫害防治药剂(购自潍坊莱利生物化工有限公司)，共喷施3亩；

空白处理组：不施用任一种菌剂或农药，面积共计3亩。

对种植期间虫害情况及采摘葡萄进行测试，结果统计如下，见表三，

表三虫害情况及葡萄品质

注：第一种虫害为绿盲蝽；第二～N种虫害为葡萄透翅蛾、金龟子、斑衣蜡蝉等。

不同处理组的驱虫效果试验，每个处理组调查100株，观察尚有的害虫数量，与空白处理组进行对比，计算驱虫率。每个处理组随机采摘100粒葡萄，将葡萄破碎过滤取汁，葡萄糖度的测定使用糖量计，测得百粒葡萄粒径并取平均值，称重100粒葡萄并重复三次取平均值测得百粒重，葡糖可溶固形物度使用手持糖度计法测得。

由实验数据可知，

处理组1与处理组2相比，区别在于葡萄对肥料的利用率，数据说明根施与喷施之间仍存在效果差距，这是因为根部施肥能提高葡萄对营养物质的吸收，单靠叶面喷肥，不能满足作物生长对养分的需要，叶面喷施可做追肥的方法。叶面喷施防虫较于根施效果较差，是由于天气原因遇到降雨会导致菌剂被冲刷，防虫效果减弱，且部分害虫位于根部，喷施防虫效果较差。

处理组1与处理组3、4相比，虽然布氏白僵菌对蛴螬(即金龟子)有一定的驱虫效果，但对葡萄主要虫害绿盲蝽的驱虫效果并不明显，说明使用本发明中的白僵菌菌株，具有更良好且更广谱的葡萄虫害防治效果；

处理组1与处理组5相比，由于处理组5仅使用白僵菌孢子粉和生态甲壳素，生态甲壳素虽具有一定促进白僵菌孢子萌发的作用，但由于缺少了牡蛎壳粉的吸附作用，从而导致土壤中的重金属及酸性土壤影响孢子萌发，因此驱虫效果并不佳。

处理组1与处理组6相比，由于处理组6仅使用白僵菌孢子粉和牡蛎壳粉，因缺少生态甲壳素对白僵菌孢子萌发的促进作用，从而导致驱虫效果较差。

处理组1与处理组7相比，由于处理组7仅使用白僵菌孢子粉，由于没有生态甲壳素进行促进萌发，所以驱虫效果并不好，同时，由于未掺杂甲壳素和牡蛎壳粉，同时驱虫效果较差，从而导致该处理组产出的葡萄品质及产量也是最差。

处理组1与处理组8相比，使用现有葡萄虫害防治药剂虫害防治效果较差，且防治虫害单一，从而导致了葡萄产量受其他类型虫害影响，而本申请提供的白僵菌复合菌剂能有效防止葡萄大部分虫害；同时，由于没能提供营养物质，处理组8产出的葡萄品质和产量仅优于处理组7。

本发明提供的复合菌剂具有广谱的杀虫效果，对葡萄虫害的防治效果明显，防治的葡萄虫害包括绿盲蝽、金龟子、斑衣蜡蝉、葡萄透翅蛾、葡萄根瘤蚜等，尤其是对绿盲蝽的防治效果显著，本发明提供的复合菌剂成分组成具有一定的协同作用，有效提高了复合菌剂的杀虫效果。本发明提供的复合菌剂能够有效提供葡萄的产量和品质，并且能够改善葡萄种植的土壤环境。

Claims

1.一种复合菌剂，其特征在于，按照重量份包括：白僵菌孢子粉20～40份，生态甲壳素30～60份，牡蛎壳粉20～40份，

所述白僵菌孢子粉的含孢量为(2.5～4.0)×10¹⁰个/g，且孢子萌发率大于87％；

白僵菌为球孢白僵菌菌株BbQLU1，保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号：CGMCC NO.11618；

所述生态甲壳素中，包括甲壳素、聚谷氨酸和有机质，按重量份计，甲壳素30～45份、聚谷氨酸25～40份、有机质20～35份。

2.如权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述牡蛎壳粉的粒径为100～120目，生态甲壳素的粒径为150～180目。

3.如权利要求1-2任一所述的复合菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将牡蛎壳粉与白僵菌孢子粉和生态甲壳素混匀，即得复合菌剂。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述牡蛎壳粉的制备方法为：将牡蛎壳经高温烘烤后研磨至粉末；

所述牡蛎壳的烘烤温度为600～1000℃。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述牡蛎壳的烘烤温度为800℃。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述白僵菌孢子粉的制备方法如下：

在SDAY培养基平板上接种球孢白僵菌BbQLU1，28℃条件下培养7～9天，在35℃除湿36h后即得白僵菌孢子粉；

SDAY培养基每升组分包括：40g葡萄糖、20g琼脂、10g蛋白胨、10g酵母浸膏，余量水。

7.如权利要求1-2任一所述的复合菌剂或权利要求3-6任一所述的制备方法制得的复合菌剂的应用，其特征在于，用于对葡萄虫害的防治；

所述葡萄虫害包括：绿盲蝽、金龟子、斑衣蜡蝉、葡萄透翅蛾、葡萄根瘤蚜。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，应用方式为根施；

根施方法如下：在葡萄坐果期，离葡萄树根部10～20cm处进行根施，葡萄的种植密度在265株～275株/亩，根施时为通过挖10～15cm深沟壑进行根施，每亩中复合菌剂的用量为3.0～4.0kg。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，应用方式为喷施；

喷施方法如下：在葡萄坐果期，将复合菌剂与水混匀形成悬浊液，每1kg复合菌剂与100～120L水混合，葡萄的种植密度在265株～275株/亩，每亩中悬浊液的喷洒量为20～30L。