CN116178506B - 一种订书肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药多肽技术领域，具体涉及一种订书肽及其在制备用于预防、处理、治疗或减轻抗菌和/或抗炎类相关疾病的药物中的用途。本发明订书肽的氨基酸序列短、结构简单、合成方便、抗菌/抗炎活性高，可用于微生物感染引起的疾病的预防与治疗，对皮肤创伤的治愈有良好的效果。

Description

一种订书肽及其用途
技术领域
本发明属于生物医药多肽技术领域，具体涉及一种订书肽及其在制备用于预防、处理、治疗或减轻抗菌和/或抗炎类相关疾病的药物中的用途。
背景技术
皮肤创伤一般是指出现了外力的直接损伤或者是软组织感染所引起的损伤，会造成局部出现炎症性反应，引起局部的红肿或者是疼痛化脓等症状。常见皮肤损伤后，传统的炎症征象(红、肿、热)是由血管内液体和血液渗漏和局部淋巴引流阻塞引起的。由于细胞的损伤，一些血管活性物质，如组胺，血清素和儿茶酚胺被释放出来，引起短暂的血管收缩，而后血管舒张，使液体和细胞进入血管外损伤部位。在临床中，现有的治疗手段多以抗生素为主，抗生素已经成为了皮肤损伤最广泛的一类药物，然而随着抗生素大量的应用，细菌的抗药性成为此类治疗手段的主要问题，同时细菌感染引起人体自身炎症反应，也会延缓皮肤愈合以及导致伤口疤痕的存在。日常生活中常见的烫伤、烧伤和溃疡等皮肤伤害也多以抗菌为主，未得到妥善的处理，因而存在着尚未得到满足的临床需求。
因此，新型抗菌/抗炎类药物成为国内外人类医学、营养学、食品学和免疫学等领域研究和开发的热点，而生物抗菌肽的开发，有望解决细菌耐药的问题，同时具备抗炎作用的抗菌肽将有效满足皮肤创伤领域中的临床需求，因而有着广阔的开发和应用前景。
人凝血酶C端衍生序列TCP(Thrombin-derived C-terminalpeptides)最初是由凝血因子选择性水解成大小约2kDa的凝血酶衍生C端肽，其长度为25个氨基酸，含有两个作用靶点，除了与细菌表面的LPS作用外，还可与人白细胞表面分化抗原CD14上疏水袋进行结合。在人类体内体外发挥抗内毒素的功能，阻止脓毒症引发休克等问题。现有研究表明，TCP-25在能在体外有效抑制金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性铜绿假单胞菌以及皮下感染假单胞菌，减少体内巨噬细胞对血清脂肪酶(LPS)反应，在促进伤口愈合以及减少疤痕增生上具有一定的治疗潜力。因此TCP-25具有双靶点作用机制属于抗菌抗炎能同时进行的。其在特异性，临床疗效以及毒副作用方面具有优势。因此，基于TCP-25双重作用机制、高广谱抑菌性、低毒性等多种特点上，本发明提供了一种订书肽，有望开发一种具有抗菌/抗炎前景的创面愈合药物。
发明内容
以下仅概况说明本发明的一些方面，并不局限于此。这些方面和其他部分在后面有更完整的说明。本说明书中的所有参考文献通过整体引用与此。当本说明书的公开内容与引用文献有差异时，以本说明书的公开内容为准。
本发明的目的是要针对皮肤创伤治疗存在的尚未得到满足的临床需求的问题，提供一种新型的具备抗菌和/或抗炎的订书肽。
第一方面，本发明提供一种订书肽或其药学上可接受的盐，所述订书肽为分子内环状多肽，其氨基酸序列包含如下式(I)所示的序列：
X0-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10
(I)
其中：
X0为G-K-Y-G-F-Y-T-H-V-F-R-L-K-K-W-；
X1～X10各自独立的选自任意氨基酸；
X1～X10中氨基酸可通过键形成环；
所述环含有5～10个氨基酸。
在一些实施方式中，所述环含有5个氨基酸。
在一些实施方式中，所述X1～X10各自独立的选自I、Q、E、C、K、V、D、F、G或上述氨基酸的d型或其衍生物；优选的，所述X1～X10各自独立的选自Phe、DPhe、Trp、DTrp、Tyr、DTyr、Thi、DThi、Bip、DBip、Nva、DNva、Aib、DAib、Pip、DPip、hPhe、DhPhe、hTrp、DhTrp、hTyr、DhTyr、hHis、DhHis、1-Nal、2-Nal、Dip、1-DNal、2-DNal、DDip。
在一些实施方式中，所述X1为I，X2选自E、Q或C，X6选自K、D、E或C，其中，X2与X6通过键形成环。
在一些实施方式中，所述X1为I，X2为Q，X3选自K、E或C，X7选自K、Q或C，其中，X3与X7通过键形成环。
在一些实施方式中，所述X1、X5为I，X2为Q，X3为K，X4为V，X7为Q，X8为F，X9为G，X6和X10各自独立的选自K、D、E或C，其中，X6与X10通过键形成环。
在一些实施方式中，所述键为二硫键、酰胺键、碳氢键、二硫代氨基C1-6烷基、硫醚键或烯烃硫醚键；优选的，所述键为如下所示的结构之一：
一方面，本发明提供一种碳氢订书肽或其药学上可接受的盐，其特征在于，具有如下之一的结构：
一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含本发明任一所述的订书肽。在一些实施方案中，本发明所述的药物组合物进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂和媒介物的至少一种。
另一方面，本发明涉及所述的订书肽或药物组合物在制备用于预防、处理、治疗或减轻疾病的药物中的用途，其中，所述的药物用于预防、处理、治疗或减轻细菌感染或炎症感染疾病。
在一些实施方式中，所述细菌感染和/或炎症感染疾病包括但不限于皮肤感染、皮肤创口感染、烧伤感染、烫伤感染、肺炎、肺结核、糖尿病足、扁桃体炎、细菌性痢疾、脑膜炎、猩红热、咽喉炎、支气管炎、胃炎、阑尾炎、肾小球肾炎、心内膜炎、心包炎、膀胱炎、盆腔炎、子宫颈炎。
本发明的有益效果是：本发明所述的订书肽具有显著的抗菌/抗炎作用，与靶点的亲和力高，最低抑菌浓度MIC值很低，抑菌圈直径较大；本发明的订书肽的环状结构有利于提高多肽稳定性，并不会对哺乳动物细胞产生明显的细胞毒性。
附图说明
图1：化合物9的MS图
图2：化合物9的HPLC图
图3：化合物18的MS图
图4：化合物18的HPLC图
图5：多肽化合物对LPS激活TLR4细胞荧光素报告基因表达的抑制作用
具体实施方式
术语“订书肽”是指一种化合物，其包含通过多个肽键连接的多个氨基酸残基以及至少一个形成大环的接头，其在同一分子内的第一天然存在或非天然存在的氨基酸残基(或类似物)和第二天然存在或非天然存在的氨基酸残基(或类似物)之间形成大环。订书肽包括下述的实施方案，其中形成大环的接头将第一氨基酸残基(或类似物)的α-碳连接到第二氨基酸残基(或类似物)的α-碳上。
术语“线性肽”被理解为涉及一种与订书肽相同长度的多肽，其包含与订书肽对应的野生型序列的等同天然氨基酸。
术语“肽”或“多肽”的含义是被本专业领域的技术人员所熟知的。通常情况下，肽或多肽是两个或多个氨基酸由酰胺键链接，酰胺键则由一个氨基酸的氨基与相邻氨基酸的羧基构成。本文所述的多肽可包含天然存在的氨基酸或者非天然存在的氨基酸。可被修饰成其类似物，衍生物，功能模拟物，伪肽等诸如此类包含至少两个氨基酸的化合物。除非指明N-端或C-末端具有特定的修饰，否则一个包含特定氨基酸序列的多肽，则包括不加修饰的和修饰的氨基和/或羧基末端，这是被本领域的专业技术人员所熟知的。一个特定的氨基酸序列的多肽可以包括修饰的氨基酸和/或额外的氨基酸，除非N-和/或C-末端包含妨碍进一步添加氨基酸的修饰。这样的修改包括，例如，N-末端的乙酰化和/或C-末端的酰胺化。
本发明的多肽可以通过改造修饰，形成多肽衍生物。正如本领域技术人员所熟知的，可以对多肽进行各种改造修饰。典型的改造修饰包含但不限于，N-末端乙酰化、C-末端酰胺化、d型氨基酸替换、非天然氨基酸替换、脂肪酸修饰或以上各种修饰改造的组合。本发明包括任何被众所周知的多肽的修饰改造。例如，多肽衍生物可以包括对于多肽的化学修饰，如烷基化、酰基化、氨基甲酰化、碘化或其他任何产生多肽衍生物的改造修饰。多肽的改造修饰可以包含改造过的氨基酸，例如，羟基脯氨酸或羧基谷氨酸，并且可以包括以非肽键相连的氨基酸。
对于本发明的多肽的其它修饰改造可采用非天然氨基酸对多肽中的天然氨基酸进行取代，非天然氨基酸包含但不限于，2-氨基脂肪酸(Aad)、3-氨基脂肪酸(βAad)、β-丙氨酸，β-氨基丙酸(βAla)、2-氨基丁酸(Abu)、4-氨基丁酸、哌啶羧酸(4Abu)、6-氨基己酸(Acp)、2-氨基庚酸(Ahe)、2-氨基异丁酸(Aib)、3-氨基异丁酸(βAib)、2-氨基庚二酸(Apm)、2,4-二氨基丁酸(Dbu)、锁链素(Des)，2,2'-二氨基庚二酸(Dpm)，2,3-二氨基丙酸(Dpr)，N乙基甘氨酸(EtGly)、N-乙基天冬酰胺(EtAsn)，羟赖氨酸(Hyl)、异羟赖氨酸(aHyl)、3-羟脯氨酸(3Hyp)、4-羟基脯氨酸(4Hyp)、异锁链素(Ide)、异-异亮氨酸(aIle)、N-甲基甘氨酸(MeGly)、N-甲基异亮氨酸(MeIle)、6-N-甲基赖氨酸(MeLys)、N-甲基缬氨酸(MeVal)、正缬氨酸(Nva)、正亮氨酸(Nle)和鸟氨酸(Orn)。当然，所有被修饰改造的α-氨基酸可以被相应的β-，γ-或ω-氨基羧酸所取代。
术语“氨基酸”是指含有氨基和羧基的分子。合适的氨基酸包括但不限于天然存在的氨基酸的D-和L-异构体，以及通过有机合成或其它代谢途径制备的非天然存在的氨基酸。如本文所用，术语氨基酸包括但不限于α-氨基酸、天然氨基酸、非天然氨基酸和氨基酸类似物。
术语“天然存在的氨基酸”是指在自然界中合成的肽中常见的20种L-氨基酸中的任何一种，即丙氨酸(Ala或A)、精氨酸(Arg或R)、天冬酰胺(Asn或N)、天冬氨酸(Asp或D)、半胱氨酸(Cys或C)、谷氨酸(Glu或E)、谷氨酰胺(Glu或Q)、甘氨酸(Gly或G)、组氨酸(His或H)、异亮氨酸(Ile或I)、亮氨酸(Leu或L)、赖氨酸(Lys或K)、甲硫氨酸(Met或M)、 苯丙氨酸(Phe或F)、脯氨酸(Pro或P)、丝氨酸(Ser或S)、苏氨酸(Thr或T)、色氨酸(Trp或W)、 酪氨酸(Tyr或Y)和缬氨酸(Val或V)的L-异构体。
“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基所取代的氨基酸取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，K、R、H)、酸性侧链(例如，D、E)、不带电荷的极性侧链(例如，G、N、Q、S、T、Y、C)、非极性侧链(例如，A、V、L、I、P、F、M、W)、β-分支侧链(例如，T、V、I)和芳族侧链(例如，Y、F、W、H)的氨基酸。因此，例如，多肽中预测非必需氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基取代。可接受的取代的其它实例是基于电子等排考虑的取代(例如，正亮氨酸取代甲硫氨酸)或其它性质(例如，2-噻吩基丙氨酸取代苯丙氨酸)。
本发明的多肽可以使用本领域技术人员所熟知的方法制备，包括众所周知的化学合成的方法。因此，当多肽或其衍生物包含一个或多个非标准氨基酸，则极有可能是通过化学合成法制备而来。除了使用化学合成的方法制备多肽或其衍生物，还可以通过编码核酸表达来制备。这对于制备只含有天然氨基酸的多肽或其衍生物特别适用，在这种情况下可以使用众所周知的核酸编码多肽序列的制备方法(参见Sambrook etal.,Molecula rCloning:ALa bora tory Manua l,Third Ed.,Cold Spring Ha rbor Laboratory,NewYork(2001)；Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,JohnWiley and Sons,Baltimore,MD(1999))。多肽可以在生物体中表达，并通过公知的纯化技术进行纯化。
术语“亚烷基”是指二价烷基(即-R-)。
术语“烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的直链或支链的烃链。烯基部分含有指定数目的碳原子。例如，C2-C10表示在该基团中含有2-10个(含端值)碳原子。
术语“炔基”是指具有一个或多个碳-碳三键的直链或支链的烃链。
关于序列同一性。根据本领域已知的方法，序列同一性是通过序列比对计算的。为了确定两个氨基酸序列的同一性百分比，比对序列以进行最佳比较。例如，可以在第一氨基酸序列的序列中引入空位以便与第二氨基酸序列最佳比对。然后比较相应氨基酸位置的氨基酸残基。当第一序列中的位置被第二序列中相应位置的相同氨基酸残基占据时，分子在该位置是相同的。两个序列之间的百分比同一性是序列共有的相同位置数的函数。因此％同一性＝相同位置数/重叠位置的总数乘以100。
在该比较中，序列可以是相同的长度或可以是不同的长度。用于确定比较窗口的最佳序列比对可以通过Smith和Waterman的局部同源性算法(J.Theor.Biol.,1981)，通过Needleman和Wunsch的同源性比对算法(J.Mol.Biol,1972)，通过Pearson和Lipman的方法寻找相似性(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1988)来进行，通过这些算法的计算机化实施(威斯康星遗传学软件包7.0版中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetic ComputerGroup，575，Science Drive，Madison，Wisconsin)或者例如使用公共可用的计算机软件例如BLAST。当使用这种软件时，优选使用默认参数，例如空位罚分或延伸罚分。选择由各种方法产生的最佳比对(即整个比较窗口范围内产生最高的同一性百分比)。
在具体的实施方案中，订书肽的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少90％、93％或95％序列同一性，且所述氨基酸序列的第1-24位氨基酸残基与SEQ ID NO:1的第1-24位氨基酸残基相同。
术语“药物组合物”，本发明涉及包括治疗有效量的本发明的多肽以及药学可接受载体或赋形剂的药物组合物。如本发明所用，“药学可接受载体”或“药学可接受赋形剂”包括任何和所有的溶剂、分散介质、涂层、抗菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂和生理学可相容的类似物。药学可接受载体或赋形剂的例子包括以下的一种或更多种：水、盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇和类似物以及其组合。在任何情况下，优选地在组合物中其包括等渗剂，例如，糖，多元醇，例如甘露醇、山梨糖醇，或氯化钠。也可以包括药学可接受的物质，例如润湿量或微量的辅助物质，例如提高抗体或抗体部分的存放时间和有效性的润湿或乳化剂、防腐剂或缓冲剂。任选地，可以包括崩解剂，例如交联聚乙烯基吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。除赋形剂之外，药物组合物还可以包括以下的一种或更多种：载体蛋白质例如血清白蛋白、缓冲剂、结合剂、甜味剂和其他调味剂；着色剂和聚乙二醇。
组合物可以是许多种形式，例如，液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(如可注射溶液和可输注溶液)、分散液或悬浮液、片剂、丸药、粉末、脂质体和栓剂。优选的形式将取决于既定的给药途径和治疗应用。在一个实施方式中，组合物是可注射或可输注液体的形式，例如类似于用抗体对人进行被动免疫使用的那些形式。在一个实施方式中，给药方式是肠胃外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)、在一个实施方式中，通过静脉内注射或输注给予多肽。在另一实施方式中，通过肌肉内或皮下注射给予多肽。
其他适合用于该药物组合物的给药途径包括，但不限于，直肠、透皮、阴道、透粘膜或肠内给药。
本发明的“药学上可接受的盐”，即可药用盐可以用常规化学方法由多肽、碱性或酸性部分来合成。一般而言，该类盐可以通过使这些多肽的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些多肽的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应通常在水或有机溶剂或二者的混合物中进行。一般地，在适当的情况中，需要使用非水性介质如乙醚、 乙酸乙酯、 乙醇、异丙醇或乙腈。在例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”， 第20版，MackPublishing Company， Easton， Pa.， (1985)； 和“药用盐手册： 性质、 选择和应用(Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties， Selection， and Use)”， Stahl andWermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)中可找到另外一些适宜盐的列表。
可药用盐可以是可药用的酸加成盐，可由本发明的多肽与无机酸和/或有机酸作用所形成，例如，与无机酸，如盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸或硫酸等形成的盐；与有机酸，如乙酸、三氟乙酸、丙酸、丙二酸、草酸、马来酸、富马酸、苹果酸、柠檬酸、葡糖酸、扁桃酸、酒石酸、硬脂酸、琥珀酸、磺基水杨酸、乳酸、苯甲酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸或萘二磺酸等形成的盐。
可药用盐可以是可药用的碱加成盐，可由本发明的多肽与无机碱和/或有机碱作用所形成。可以由其衍生得到盐的无机碱包括，例如铵盐和周期表的I族至XII族的金属。在某些实施方案中，该盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。可以由其衍生得到盐的有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺包括天然存在的取代的胺、环状胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括，例如，异丙胺、苄星青霉素(benzathine)、胆碱盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺(meglumine)、哌嗪和氨丁三醇。
另外，本发明公开的多肽、包括它们的盐，也可以以它们的水合物形式或包含其溶剂(例如乙醇，DMSO，等等)的形式存在，并可用于结晶。本发明公开化合物可以与药学上可接受的溶剂(包括水)固有地或通过设计形成溶剂化物；因此，本发明化合物包括溶剂化的和未溶剂化的形式。
实施例
实施例1：化合物9的合成
本公开提供的多肽化合物及其衍生物采用固相合成的方法合成其直链前体，其中AA21谷氨酸的侧链羧基和AA25赖氨酸的侧链氨基在固相上利用四三苯基膦钯催化脱保护后，在N-甲基吗啉的弱碱性条件下形成酰胺键。合成载体为2-Chlotrityl Resin树脂。合成过程中，首先将2-Chlotrityl Resin树脂在二氯甲烷(DCM)中充分溶胀，然后耦连第一位氨基酸Fmoc-Lys(Alloc)-OH。耦连后用甲醇进行capping。该固相载体与活化后氨基酸衍生物重复缩合→洗涤→去保护Fmoc→洗涤→下一轮氨基酸缩合的操作合成至第五位氨基酸Fmoc-Glu(OAll)-OH，然后钯催化条件下脱去Alloc，OAll保护基，AA21谷氨酸的侧链羧基和AA25赖氨酸的侧链氨基在固相上形成酰胺键。接着在该固相载体与活化后氨基酸衍生物重复缩合→洗涤→去保护Fmoc→洗涤→下一轮氨基酸缩合的操作以达到所要合成的多肽链长度。最后用三氟乙酸：水：三异丙基硅烷：苯甲硫醚(90：2.5：2.5：5：，v：v：v：v)的混合溶液与树脂反应将多肽从固相载体上裂解下来，再由冷冻甲基叔丁基醚沉降后得到目标多肽粗品。多肽粗品在0.1％三氟乙酸的乙腈/水的体系由C-18反相制备色谱柱纯化分离后得到多肽及其衍生物的纯品。
实验试剂
步骤1：耦连第一位氨基酸Fmoc-Lys(Alloc)-OH
将84mg(0.1mmol)2-Chlorotrityl chloride树脂在DCM中充分溶胀1h。加入Fmoc-Lys(Alloc)-OH(0.08mmol)和二异丙基乙胺(DIEA,0.32mmol)在室温反应2h。反应完成后加入DCM：甲醇：DIEA(85:10:5，v:v:v)室温10min进行capping。反应后用DCM洗树脂3次，DMF洗3次。
步骤2：部分直链前体肽链合成
化合物9的直链前体肽链G-K-Y-G-F-Y-T-H-V-F-R-L-K-K-W-I-Q-K-V-I-E-Q-F-G-K
依照直链前体序列从羧基端第二位G到氨基端的顺序合成至第五位氨基酸Fmoc-Glu(OAll)-OH，合成后氨基端不脱Fmoc保护基。
每一个耦连周期进行如下：
·20％哌啶/DMF(20％v/v，10mL)进行Fmoc-去保护两次，每次8min。
·DMF冲洗树脂6-8次直到中性pH。
·用DMF溶解0.5mmol Fmoc-AA,0.5mmol 6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)和1mmol 4-甲基吗啉(NMM),加入树脂室温反应1h。
·下一个氨基酸耦连之前用DMF冲洗树脂4-6次。
部分直链多肽合成后用DMF冲洗树脂5次，DCM冲洗树脂5次。
步骤3：脱OAll,Alloc保护基
将树脂在DCM中溶胀1h后，排干液体。接着将二甲基巴比妥酸(0.4mmol)溶于5mlDCM(含0.1MOxyma)中，称取四三苯基膦钯(0.1mmol)加入到反应器中并将上述溶液抽取至反应器中，避光震荡反应2h。重复反应一次。反应后用DMF(含0.1M Oxyma)洗8次，再DCM(含0.1M Oxyma)洗5次。抽干，真空干燥。
步骤4：分子内酰胺键关环
将树脂在DMF中溶胀1h后，排干液体。将六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP,0.32mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBt,0.32mmol)，N-甲基吗啉(NMM,0.32mmol)溶于5ml DMF中，混匀。将上述溶液加入到反应器中，震荡反应4h。重复一次。反应后用DMF洗6-8次。
步骤5：直链前体肽链合成(G-K-Y-G-F-Y-T-H-V-F-R-L-K-K-W-I-Q-K-V-I-E-Q-F-G-K)
形成酰胺键后，接着从第六位氨基酸Ile按照从羧基端到氨基端的顺序合成，完成所有氨基酸偶联。
每一个耦连周期进行如下：
·20％哌啶/DMF(20％v/v，10mL)进行Fmoc-去保护两次，每次8min。
·DMF冲洗树脂6-8次直到中性pH。
·用DMF溶解0.5mmol Fmoc-AA,0.5mmol 6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)和1mmol 4-甲基吗啉(NMM),加入树脂室温反应1h。
·下一个氨基酸耦连之前用DMF冲洗树脂4-6次。
直链多肽合成后用DMF冲洗树脂5次，DCM冲洗树脂5次。树脂在真空中抽干。
步骤6：直链前体肽链切割
将新鲜配制的切割鸡尾酒(8mL)三氟乙酸：水：三异丙基硅烷：苯甲硫醚(90：2.5：2.5：5：，v：v：v：v)加入到步骤5所得树脂中，在室温下振荡反应2小时。反应结束后将反应溶液过滤，并用三氟乙酸洗涤树脂，与反应溶液合并，用4倍体积冷MTBE沉淀得到粗品。用MTBE洗涤粗品3次，放入真空中抽干。
步骤7：多肽的纯化制备
将多肽粗品用20％乙腈水溶液溶解后，经过0.45um膜过滤后用反相高效液相色谱系统进行分离，缓冲液为A(0.1％三氟乙酸，水溶液)和B(0.1％三氟乙酸，乙腈)。其中，色谱柱为BR C-18(赛分)反相色谱柱，纯化过程中色谱仪检测波长设定为230nm，流速为15mL/min，梯度为30-60％乙腈in 40min。收集产物相关馏分，HPLC鉴定纯度后将>95％的馏分合并，冻干，获得多肽纯品。
步骤8：检测与表征方法
将步骤7的多肽纯品通过分析性高效液相色谱和液相色谱/质谱联用确定纯度及化合物形成分子内酰胺键。
实施例2.化合物18的制备
本公开提供的多肽化合物及其衍生物采用固相合成的方法合成其直链前体，在Grubbs催化剂催化下烯烃发生复分解反应形成分子内碳氢键。合成载体为Fmoc-Glu(OtBu)-Wang Resin树脂。合成过程中，首先将Fmoc-Glu(OtBu)-Wang Resin树脂在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中充分溶胀，然后在该固相载体与活化后氨基酸衍生物重复缩合→洗涤→去保护Fmoc→洗涤→下一轮氨基酸缩合的操作以达到所要合成的多肽链长度，最后用三氟乙酸：水：三异丙基硅烷：苯甲硫醚(90：2.5：2.5：5：，v：v：v：v)的混合溶液与树脂反应将多肽从固相载体上裂解下来，再由冷冻甲基叔丁基醚沉降后得到直链前体的固体粗品。固体粗品在溶剂二氯甲烷中在Grubbs催化剂催化下形成分子内碳氢键，旋蒸除去溶剂得到目标多肽粗品。多肽粗品在0.1％三氟乙酸的乙腈/水的体系由C-18反相制备色谱柱纯化分离后得到多肽及其衍生物的纯品。
实验试剂
步骤1：直链前体肽链合成(G-K-Y-G-F-Y-T-H-V-F-R-L-K-K-W-X-Q-K-V-X-D-Q-F-G-E，其中X为(S)-2-(4-pentenyl)alanine。
将320mg(0.1mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-Wang Resin树脂在DMF中充分溶胀1h。之后将依照的直链前体序列从羧基端第二位G到氨基端的顺序合成。每一个耦连周期进行如下：
·20％哌啶/DMF(20％v/v，10mL)进行Fmoc-去保护两次，每次8min。
·DMF冲洗树脂6-8次直到中性pH。
·用DMF溶解0.5mmol Fmoc-AA,0.5mmol 6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)和1mmol 4-甲基吗啉(NMM),加入树脂室温反应1h。
·下一个氨基酸耦连之前用DMF冲洗树脂4-6次。
直链多肽合成后用DMF冲洗树脂5次，DCM冲洗树脂5次。树脂在真空中抽干。
步骤2：直链前体肽链切割
将新鲜配制的切割鸡尾酒(10mL)三氟乙酸：水：三异丙基硅烷：苯甲硫醚(90：2.5：2.5：5：，v：v：v：v)加入到步骤1所得树脂中，在室温下振荡反应2小时。反应结束后将反应溶液过滤，并用三氟乙酸洗涤树脂，与反应溶液合并，用4倍体积冷MTBE沉淀得到粗品。用MTBE洗涤粗品3次，放入真空中抽干。
步骤3：分子内碳氢键形成
将步骤2得到的粗品用10ml DCM溶解充分，室温下加入Grubbs二代催化剂(0.03mmol)，在无氧条件下室温搅拌，反应4h。反应结束后，采用减压旋转蒸发仪蒸干，得到目标多肽固体。
步骤4：多肽的纯化制备
将步骤3得到的多肽固体用20％乙腈溶解充分，再经过0.45um膜过滤后用反相高效液相色谱系统进行分离，缓冲液为A(0.1％三氟乙酸，水溶液)和B(0.1％三氟乙酸，乙腈)。其中，色谱柱为BR C-18(赛分)反相色谱柱，纯化过程中色谱仪检测波长设定为230nm，流速为15mL/min，梯度为30-60％乙腈in 40min。收集产物相关馏分，HPLC鉴定纯度后将>95％的馏分合并，冻干，获得多肽纯品。
步骤5：检测与表征方法
将步骤4的多肽纯品通过分析性高效液相色谱和液相色谱/质谱联用确定纯度及化合物形成分子内碳氢键。
发明人对化合物9和化合物18进行了一系列的改造(包括一个或多个氨基酸的增加或替换)，改造后的多肽化合物1-17，可得到这些多肽及多肽衍生物的具体序列和结构。由湖南中晟全肽生化有限公司进行如实施例1或2相似的合成及纯化，其纯度>95％。
生物学评价
实施例3分子最低抑菌浓度MIC功能测试
本发明通过测定分子对大肠杆菌ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 29213的最低抑菌浓度MIC(Minimal inhibitory concentrations)来确定化合物抑菌活性。
用于最小抑菌浓度测试的细菌冻存于-80℃低温冰箱，使用时提前2天复苏。用无菌接种环刮取少许冻存的液菌在TSA固体培养基平皿上划线接种，放入普通培养箱中35±2℃培养20小时左右。用无菌接种环从上述培养皿中挑取5-10个形态相似的菌落，再次划线接种于相应固体培养基平皿上。随后放入普通培养箱中35±2℃培养20小时左右。从固体培养皿中挑取5-10个细菌单菌落重悬于500μl的无菌生理盐水(0.9％NaCl)中，再用分光光度计调节OD 600至～0.15。使用平衡至室温的1.02x CAMHB(含0.02％BSA)将细菌稀释300倍达到接种浓度～2x 105CFU/ml。
备选多肽用DMSO溶解成3.2mg/ml备用液，依次用DMSO进行两倍梯度稀释，11个稀释度。转移2μl的多肽化合物到试验板的相应孔中，加入98μl以上备好的细菌接种物至试验板中。化合物的最高检测浓度为256μg/ml。试验板放入离心机800rpm离心30秒，再在振板机上400rpm振1分钟混匀后放入普通培养箱中35±2℃培养20小时。将试验板置于读板设备上，调节反射镜观察记录每个孔中细菌生长情况。同时用QCount系统对每块试验板拍照，用SpectraMaxplus 384读取每个孔中细菌的OD600值。测试结果如下表1所示：
表1：化合物最低抑菌浓度MIC(Minimal inhibitory concentrations)
从表1中数据可知，本发明提供的化合物对大肠杆菌ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 29213，对大肠杆菌ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 29213最低抑菌浓度MIC(Minimal inhibitory concentrations)在16-128μg/mL之间。
实施例4径向扩散法检测(Radial DiffusionAssay,RDA)功能测试
本发明通过测定分子对大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 29213和铜绿假单胞菌ATCC 27853的产生的抑菌圈直径大小以评估不同多肽的抗菌活性。
细菌冻存于-80℃低温冰箱，使用时提前2天复苏。使用无菌接种环刮取少许冻存的细菌并在TSA固体培养基平皿上划线接种，放入培养箱中35±2℃培养20小时左右。分别从固体培养皿中挑取若干细菌单菌落重悬于1mL的TSB中，使用分光光度计调节OD 600至1.0。重悬菌以1:100比例重新接种至10mL TSB中，于37℃下200rpm培养至对数中期。培养物以4000rpm离心10分钟后弃上清，将沉淀重悬于等体积的10mM Tris缓冲液(pH＝7.4)中。使用分光光度计调节OD 600至～0.15。将待测化合物稀释至0.8mg/mL后分别用于铜绿假单胞菌、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的检测。配置TSB浓度为0.03％(W/V)，低电渗琼脂糖浓度为1％(W/V)，Tween-20浓度为0.02％(V/V)的底层琼脂，高压灭菌后冷却至42～46℃。在底层琼脂中以1:300比例加入OD600为0.15的细菌，混匀后倒入培养皿内，于室温下凝固。使用凝胶打孔器在培养皿上打9个直径为4mm的加样孔，按图1向孔中加入6μL待测化合物(0.8mg/mL)，于37℃下孵育3h使样品充分扩散至底层琼脂中。配置TSB浓度为6％(W/V)，低电渗琼脂糖浓度为1％(W/V)的顶层琼脂，高压灭菌后冷却至42～46℃，向上述培养皿中加入15mL顶层琼脂，充分凝固后至于37℃下培养20h左右。其中，将含铜绿假单胞菌的琼脂倒置于15cm的培养皿上以使含菌的底层琼脂接触空气，从而使细菌充分生长。将接种细菌液用液体培养基从10-1依次稀释至10-3。将100μl上述细菌稀释液均匀涂布于TSA平皿中。待培养基被TSA吸收10分钟后，反转平皿在培养箱中35±2℃培养20小时。使用QCount系统对每块培养皿拍照，测量并记录每个抑菌圈的直径。结果如表2所示。
表2：化合物抗菌活性--径向扩散法检测(Radial DiffusionAssay,RDA)
从表2中数据可知，本发明提供的化合物对大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 29213和铜绿假单胞菌ATCC 27853的抗菌效果较好，对大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 29213和铜绿假单胞菌ATCC 27853抗菌圈的直径在4.5-9.0mm之间。
实施例5多肽对LPS激活TLR4细胞荧光素报告基因表达的抑制作用
实验细胞为南京科佰生物科技有限公司生产HEK293/TLR4/NF-kB-Luc细胞(Cat：CBP74128)，根据细胞培养要求进行细胞复苏及培养。检测试剂盒选用One-StepLuciferase Assay System(Bioscience Cat：60690)，根据说明书进行试剂配制及使用。
HEK293/TLR4/NF-kB-Luc细胞在培养基(MEM，10％FBS，1％Non-essential aminoacids(NEAA)，1mM Napyruvate，100μg/ml Hygromycin B，1％Puromycin)中培养生长。细胞生长密度达到培养瓶的80-90％，先用DPBS润洗细胞，再用0.25％胰酶(含0.5mM EDTA)消化细胞；收集细胞悬液至离心管，1000rpm离心3min，移除上清培养基；加入6-8ml新鲜生长培养基重悬细胞，按照1：3～1：8的比列进行传代，放于37℃，5％CO2培养箱中培养。传代后每2-3天进行换液或传代。
将HEK293/TLR4/NF-kB-Luc细胞传代扩增至所需细胞数量，将细胞消化重悬后，按照6000cells/孔，25μl/孔，将细胞悬液铺板至384孔白色透底细胞培养板中，放于37℃，5％CO2培养4d后用于样品检测。
确定LPS使用浓度：
脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)用灭菌水溶解为5mg/ml，用1×Loadingbuffer稀释LPS，浓度为60μg/ml(6×)，依次用1×Loading buffer进行3倍梯度稀释，共12个浓度。转移5μl稀释后的LPS溶液到已孵育4d的384孔白色透底细胞培养板，37℃孵育6h，提前1小时将Luciferase Assay System试剂按照100:1的体积比稀释A液和B液，向上述细胞板加入30μl/孔Luciferase Assay System试剂，室温避光，350rpm振荡15min。使用酶标仪Cytation5检测化学发光活性，LPS的EC80范围值为0.06-0.1μg/ml，选用EC80浓度进行实验。
多肽对LPS激活TLR4细胞luciferase报告基因的抑制作用：
多肽用灭菌水溶解为500μM，用1×Loadingbuffer稀释多肽，浓度为120μM(12×)，依次用1×Loading buffer进行3倍梯度稀释，共7个浓度。用1×Loadingbuffer将LPS稀释为1.2μg/ml(12×)。
取25μl梯度稀释后不同浓度的多肽(12×)与25μl LPS(12×)等体积预混；取5μl多肽和LPS预混液加入已孵育4d的384孔白色透底细胞板，37℃孵育6h。提前1小时将Luciferase Assay System试剂按照100:1的体积比将A液和B液混合，向上述细胞板加入30μl/孔Luciferase Assay System试剂，室温避光，350rpm振荡15min，使用酶标仪Cytation5检测化学发光活性。具体数值如表3所述(其中TCP-25的IC50值为6.81±1.4μm)。
表3：化合物对LPS激活TLR4细胞荧光素报告基因表达的抑制作用(IC50)
序号 与TCP-25的活性倍数
9 1.15
18 2.24
由表3可知，本发明的化合物与阳性组(TCP-25)相比较抗炎效果明显，IC50值显著低于阳性对照组，活性倍数高于阳性对照组1.15～2.24倍之间。
数据处理：将实验组、只加入1×Loading buffer的阴性对照组和只加入LPS的阳性对照组所得数据，按照如下公式，进行计算分析：
由图5可知，本发明的化合物与阳性组相比较抗炎效果明显，IC50值低于阳性对照组。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述的实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变形或替换，这些等同的变形或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims (3)

1.一种订书肽或其药学上可接受的盐，其特征在于，具有如下之一的结构：
2.一种药物组合物，包含权利要求1所述的订书肽或其药学上可接受的盐。
3.权利要求1所述的订书肽或其药学上可接受的盐或权利要求2所述的药物组合物在制备用于预防、处理、治疗或减轻细菌感染或炎症感染疾病的药物中的用途。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117756904B (zh) * 2023-12-22 2024-05-24 潍坊医学院 一种订书肽及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109260462A (zh) * 2018-08-24 2019-01-25 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种凝血酶原突变体蛋白及其编码核酸的应用
CN110248953A (zh) * 2016-12-22 2019-09-17 蒙彼利埃大学 新型订书肽及其用途
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Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110248953A (zh) * 2016-12-22 2019-09-17 蒙彼利埃大学 新型订书肽及其用途
CN109260462A (zh) * 2018-08-24 2019-01-25 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种凝血酶原突变体蛋白及其编码核酸的应用
CN113336840A (zh) * 2020-03-02 2021-09-03 武汉帕肽生物医药有限责任公司 订书肽、其制备方法和用途
KR20220061503A (ko) * 2020-11-06 2022-05-13 서울대학교산학협력단 결핵균 독소-항독소 시스템을 표적으로 하는 항균 스테이플 펩타이드 및 이의 용도

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
订书肽的合成与应用;高帅等;化学进展;第26卷(第1期);100-109 *
订书肽的合成与活性研究进展;李博等;药学学报;第52卷(第5期);685−698 *

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