CN116173228A - 可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器。本发明利用DNA纳米桶、正二十面体或截顶正二十面体(足球状)等DNA折纸结构，修饰与靶分子特异性结合的清除元件，从而得到可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器，该核酸纳米捕获器能够在体内外高效清除靶分子从而影响下游生物学效应，具体可用于增强细胞免疫功能，以及联合现有的抗肿瘤药物制备抗肿瘤的功能产品，生物学实验结果表明，靶向清除TGF‑β1蛋白的框架核酸纳米捕获器联合免疫检查点抑制剂具有良好的抗肿瘤效果，并且在体内安全无毒。本发明的框架核酸纳米捕获器显示出良好的医用前景。

Description

可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器

技术领域

本发明涉及可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器，特别涉及DNA纳米框架(DNA nanoframework，DNF)对具有生物活性的靶分子的体内体外清除，从而达到调节下游生物学信号的目的，属于DNA纳米技术领域。

背景技术

生物体内存在着多种微量但极为重要的效应分子，在复杂的生物体环境中发挥多种功能，例如具有运输脂质作用的低密度脂蛋白，起信号传输作用的多种细胞因子以及神经递质，凝血过程中的凝血因子等。当这些效应分子量维持在平衡状态时，机体的各项生理活动正常运行，当其处于失衡状态时，表示机体稳态被打破，多种病理过程随之而来。通过对处于失衡状态的效应分子进行调节，使其重新回到平衡状态，从而引起一系列下游病理生理状态的重构。

以细胞因子为例，细胞因子一般是由受到刺激的细胞产生，主要为免疫细胞。细胞因子具有高效性，在微摩尔甚至皮摩尔都可以起作用，细胞因子发挥着强大的免疫调节作用，对人类的生理和病理变化至关重要。细胞因子作为分子信使，允许免疫系统细胞彼此通信，以产生对靶抗原的协调，在许多疾病中具有调节和效应功能。但是在临床中，细胞因子治疗性药物的开发受到多种问题的阻碍。目前，细胞因子疗法主要面临以下几个方面的挑战：1)细胞因子广泛的细胞多效性引起机体系统性炎症反应；2)由于脱靶效应引起的细胞因子毒性反应；3)较为短暂的半衰期。

DNA纳米技术可以实现对分子在纳米级别的精确操纵，微摩尔或皮摩尔数量级的体内效应分子刚好可以完美适配DNA纳米技术的精确操纵范围，将其调整到安全范围内，避免大幅度调节引起系统性毒性反应。并且可以对DNA框架核酸纳米结构进行定制化外部修饰，增强其位置靶向性，从而降低小分子抑制剂或单克隆抗体等的毒性反应。因此，利用DNA纳米技术构建DNA纳米清除装置进行靶分子的调控是可行且非常有意义的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：为了解决细胞因子疗法引起系统性炎症反应及毒性大的问题，本发明提供了一类DNA框架核酸纳米结构用以对循环中起负性免疫调节作用的细胞因子进行定量清除从而达到调控机体免疫反应的目的。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器，所述核酸纳米捕获器为修饰有清除元件的DNA折纸结构；所述清除元件为能够与靶分子特异性结合的核酸适配体、多肽和抗体中的任意一种；所述靶分子为免疫抑制性细胞因子(起负性免疫调节作用的细胞因子)；

所述DNA折纸结构为利用DNA折纸技术搭建而成的DNA纳米桶、正二十面体或截顶正二十面体(足球状)结构，其是通过环状长序列的重组M13噬菌体基因组DNA单链(p7560)和短序列的订书钉链及用于修饰清除元件的捕获订书钉链(锚定序列)按照碱基互补配对原则杂交组装而成。

所述三维立体结构所有的边上的“订书钉链”都可被选为修饰位点，选定的修饰位点向结构内部或外部伸出一段锚定序列用于搭载清除元件。所述DNA折纸结构的分子量约5×10⁶Dalton，外接球直径大于30纳米，且结构内外可以明确区分。较以往的若干条单链组装的框架结构，如正四面体、长方体等，折纸结构尺寸更大、可修饰位点更多，可进行数量位置可控的精确修饰。

优选地，所述靶分子为转化生长因子(TGF-β1)，血管内皮生长因子(VEGF)，白介素6(IL-6)，白介素10(IL-10)，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和脂多糖(LPS)中的任意一种。

本发明还提供了上述可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器的制备方法，包括：利用DNA折纸技术搭建DNA折纸结构，将核酸适配体、多肽或抗体装配到锚定序列的互补序列上，对所述DNA折纸结构进行内部修饰清除基元；

其中，所述核酸适配体的装配方法包括：直接将需要修饰的核酸序列加在互补序列的末端，并利用分子杂交的方法通过互补序列与锚定序列结合将需要装配的核酸分子固定在结构内部；

所述多肽或抗体的装配方法包括：利用生物正交反应、化学反应或者蛋白偶联反应将蛋白或多肽与互补序列连接，并利用分子杂交的方法通过互补序列与锚定序列结合将多肽或抗体固定在结构内部。

所述生物正交反应包括但不局限于点击化学反应；所述化学反应包括但不局限于马来酰亚胺-巯基的迈克尔加成反应等化学反应；所述偶联反应包括但不局限于利用生物素-链亲和素、Ni-NTA-Histag、抗体-抗原、核酸适配体-蛋白、DNA结合蛋白(例如锌指蛋白)、SPDP、Sulfo-SMCC、SNAP-tag、Hag-tag的偶联作用。

本发明还提供了上述可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器在体外清除靶分子中的应用。

本发明还提供了上述可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器在制备增强免疫细胞免疫功能的产品中的应用。

本发明还提供了一种靶向清除TGF-β1蛋白的框架核酸纳米捕获器，为修饰有核酸适配体T8-1-3的DNA折纸结构；所述核酸适配体T8-1-3能够特异性结合TGF-β1蛋白；

所述DNA折纸结构为利用DNA折纸技术搭建而成的DNA纳米桶、正二十面体或截顶正二十面体(足球状)结构，其是通过环状长序列的重组M13噬菌体基因组DNA单链(p7560)和短序列的订书钉链及用于修饰清除元件的捕获订书钉链(锚定序列)按照碱基互补配对原则杂交组装而成。

本发明还提供了上述靶向清除TGF-β1蛋白的框架核酸纳米捕获器在制备增强免疫细胞免疫功能的产品中的应用。

本发明还提供了上述靶向清除TGF-β1蛋白的框架核酸纳米捕获器联合免疫检查点抑制剂aPD-L1在制备抗肿瘤产品中的应用。

优选地，所述的框架核酸纳米捕获器为为修饰有核酸适配体T8-1-3的DNA纳米桶折纸结构。

优选地，所述肿瘤包括肺癌、结直肠癌、胃癌、黑色素瘤、肾细胞癌和霍奇金淋巴瘤中的任意一种。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

(1)本发明提供的可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器基于特定的DNA折纸结构，可搭载不同数量的适配体、多肽、抗体等清除元件，具有高度的可设计性和对靶蛋白的定量清除能力，并且在框架内部进行锚点修饰清除元件，能够在限域空间内获得较高的局部浓度，并对内部分子起到保护作用，是非常良好的可进行生物医学应用的纳米材料；

(2)本发明的核酸纳米捕获器在细胞和动物层面均能成功引起下游生物学效应，在体内清除靶分子后不会引起系统性炎症与毒性，从而较好的改善了传统小分子抑制剂所引起的毒性反应，通过生物学实验结果表明，本发明的核酸纳米捕获器结合免疫检查点抑制剂处理荷瘤小鼠，具有明显的抑瘤效果，肿瘤体积明显减小，解剖后瘤重显著降低，该核酸纳米捕获器显示出良好的医用前景。

附图说明

图1为本发明所用的DNA纳米框架结构的结构示意图及不同特点列表；

图2为本发明实施例中将清除元件修饰于三种不同DNA纳米框架结构的退火程序列表；

图3为本发明的框架核酸纳米捕获器可进行特异性清除的靶分子列表；

图4为本发明实施例中构建的核酸纳米捕获器及其捕获蛋白后的示意图及电镜图；

图5为本发明实施例中，以三种DNA纳米框架结构修饰核酸适配体T8-1-3构建而成的核酸纳米捕获器特异性清除免疫抑制性细胞因子转化生长因子TGF-β1为例，进行体内体外清除的示意图；

图6是本发明实施例中以三种DNA纳米框架结构修饰核酸适配体T8-1-3构建而成的核酸纳米捕获器在体外细胞培养体系中清除TGF-β1后增强免疫细胞杀伤功能的实验结果图；a：共聚焦显微图；b:流式细胞术定量分析与靶分子共孵育后各组的死亡肿瘤细胞比例；c:流式细胞术定量分析PBMC体系中各组处理后的死亡肿瘤细胞比例；d：流式细胞术定量分析T细胞体系中各组处理后的死亡肿瘤细胞比例；*：p<0.05，**：p<0.01；ns：无显著性差异；

图7为本发明实施例中以三种DNA纳米框架结构修饰核酸适配体T8-1-3构建而成的核酸纳米捕获器在荷瘤小鼠体内清除TGF-β1效率结果图；a：静脉注射BA后不同时间点血液中TGF-β1的含量测定结果；b:三种DNA纳米清除装置清除靶分子TGF-β1的结果对比；*：p<0.05，**：p<0.01；ns：无显著性差异；

图8是本发明实施例以纳米桶结构修饰核酸适配体T8-1-3构建而成的核酸纳米捕获器在荷瘤小鼠体内联合免疫检查点抑制剂使用后的抑瘤实验结果图；a：小鼠给药方案示意图；b:各处理组小鼠肿瘤体积生长曲线；c:各处理组小鼠肿瘤质量；d：各处理组肿瘤组织图片；e：各处理组小鼠重量；f：各处理组肿瘤组织中TGF-β1蛋白含量的测定结果；*：p<0.05，**：p<0.01；***：p<0.001；ns：无显著性差异。

具体实施方式

为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。

本发明涉及基于DNA折纸框架结构构建的框架核酸纳米捕获器，通过在DNA折纸框架结构内部搭载适配体、多肽、抗体等清除元件构建完整的可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器，在体内体外水平对环境中特定靶分子进行清除，并产生下游生物学效应。

实施例可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器(DNA纳米清除装置)的构建

DNA纳米清除装置的构建是基于一类DNA纳米框架结构，所述DNA纳米框架结构为具有内外拓扑特性的自封闭空间三维立体结构，包括DNA纳米桶、正二十面体、截顶正二十面体(足球状)结构等。具体包括以下步骤：

步骤1：构建DNA纳米桶、正二十面体、足球状等DNA框架结构。该步骤可利用2D/3D图像呈现所述结构示意图，然后运用DNA纳米结构专业设计软件Tiamat和caDNAno设计对框架DNA进行设计。步骤1后还包含以下步骤：输入重组M13噬菌体p7560基因组序列(该基因组序列来源于NCBI数据库)，将软件生成订书钉链序列导出，进行序列合成。

步骤2：在步骤1的基础上进一步构建DNA框架结构的变体，建立内部可修饰位点；

步骤3：对步骤2构建的DNA框架结构进行结构组装和纯化，利用超速离心、超滤浓缩法获得结构单体，去除未结合的订书钉链以及二聚体、多聚体等杂质；

DNA框架结构组装完成后，应用琼脂糖凝胶电泳对结构进行初步鉴定。并应用透射电子显微镜和原子力显微镜对结构的大小、完整性，以及是否符合设计进行评估。

其中，超速离心法是在超速离心机中，应用强大的离心力分离、制备、分析物质的方法。根据分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带，达到彼此分离的目的。其沉降的速度既与其分子的大小和密度有关，也与溶液的分子密度和粘度及其分子的形状有关。最常用的有沉降速度法和沉降平衡法。

超滤是利用半透膜的微孔结构实现对物质的选择性分离和回收的膜分离方法。超滤截留颗粒直径0.002～0.1m之间，超滤膜孔径大小的切割分子量在1,000～500,000之间，超滤操作压力一般在0.1～0.6MPa之间。当溶液以某流速流经具有一定孔径的超滤膜表面时，在外界压力的作用下，超滤允许小于截留分子量的小分子物质、无机盐和溶质等通过，形成滤过液(简称滤液)，同时截留下胶体、蛋白质、微生物及大分子有机物等大于膜截留分子量的物质，形成浓缩液，达到浓缩结构的目的。

琼脂糖凝胶电泳是基因工程中最基本的技术，该技术操作简单而迅速，现广泛应用于核酸的研究中。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。

负染色技术是一种制备电子显微镜样品图像呈现复反差的技术。用于观察样品中的颗粒性物质或生物大分子。用金属盐对铺展在载网上的样品进行染色，使整个载网都铺上一层重金属盐，而有凸出颗粒的地方则没有染料沉积。染色后，在电镜下观察时，被观察的对象为亮的，背景为暗的。

图1为是实施例涉及的DNA纳米框架结构的结构示意图及其物理性状展示；实施例中设计并合成了三种DNA框架核酸纳米结构：DNA barrel framework(DBF)，DNA soccerframework(DSF)，DNA icosahedron framework(DIF)，此三种结构均以重组M13噬菌体p7560作为框架长链(模板链)，订书钉链结合到模板链后形成的双链相互重叠，三种结构在不同的维度上各具特点，DBF由12条双链DNA构成，可以向内或外各伸出150条锚定序列，DBF具有最大的窗口口径和内部搭载数量，有利于物质的结合与释放；DSF每条边由两条双链构成，可以向内或外各伸出90条锚定序列，具有最大的内部空间和适中的窗口口径，有利于内部物质的荷载；DIF每条边由四条双链构成，可以向内或外各伸出30条锚定序列，具有最强的刚性，不易发生形变，并经过我们后续试验的证实，其具有良好的体液稳定性。

将核酸适配体、多肽、抗体等清除元件装配到锚定序列的互补序列上，利用折纸结构特定位置上(选定的修饰位点上)订书钉链向结构内部延伸出相应锚定序列，三种结构内部的锚定序列与装配有清除元件的互补序列按照碱基互补配对原则经过不同的退火程序(如图2所示)，从而连接上能够与靶分子特异性结合的适配体等清除元件，我们成功合成了三种结构，并对其进行了琼脂糖凝胶电泳和透射电镜的表征，三种结构在琼脂糖凝胶上表现出单一条带并具有不同的迁移速率，电镜结果显示生长出的结构与我们的设计完全相符。

其中，本实施例中三种DNA纳米框架结构的锚定序列与锚定序列的互补序列如下列SEQ ID NO：1～2所示：

锚定序列(SEQ ID NO：1)：CTTCACACCACACTCCATCTA；

锚定序列的互补序列(SEQ ID NO：2)：TAGATGGAGTGTGGTGTGAAG。

图3是DNA纳米清除装置可进行特异性清除的靶分子列表，通过装载不同的捕获元件，可对多种不同的靶分子进行清除，包括但不限于图中所示靶分子。

图4是三种DNA框架结构修饰特异性结合TGF-β1蛋白的核酸适配体T8-1-3为例构建的DNA纳米清除装置及其捕获蛋白后的示意图及电镜图。DNA纳米清除装置由两部分组成，搭载平台(DNA框架结构，DONs)与清除元件。本实施例仅以用上述三种各具特点的DONs作为搭载平台，可特异性结合TGF-β1蛋白的适配体T8-1-3作为清除元件为例，清除元件也可以选择与靶分子特异性结合的抗体或多肽，例如血管内皮生长因子VEGF的特异性结合多肽：ESKHDC(SEQ ID NO：3)；白介素10(IL-10)的特异性结合多肽：KRIWFIPRSS(SEQ ID NO：4)。对T8-1-3的亲和力与特异性进行确认后，将其组装入结构内部，我们发现三种DONs结合蛋白后的表现各不相同。DONs内部留有捕获序列，T8-1-3序列5’端延伸出的捕获序列的互补序列可以通过碱基互补配对将其组装入DONs内部，以纳米桶框架结构构建的DNA纳米清除装置记为BA，以正二十面体框架结构构建的DNA纳米清除装置记为IA，以足球状框架结构构建的DNA纳米清除装置记为SA。我们用电镜直接观察结构的状态，如图3所示，DBF由于窗口口径大，我们能够直接观察到在桶壁内部有高密度蛋白存在，桶壁内部有环状高密度蛋白存在；DSF在电镜下，结构整体呈现挛缩状态，内部较为致密；DIF也呈现出内部致密影像但结构大小形状未发生改变。因此，三种结构由于其物理性状的区别，在与TGF-β1蛋白孵育后呈现出不同的状态。

实施例2DNA纳米清除装置在体内外清除靶分子的应用

(1)DNA纳米清除装置在细胞层面调节靶分子影响下游生物学信号的应用

步骤1：在本发明实施例中，以靶向清除TGF-β1蛋白为例；筛选高表达靶蛋白的细胞株，提取人外周血单核细胞PBMC；

步骤2：使用DNA纳米清除装置控制外周靶分子水平后，对免疫细胞和筛选得到的细胞株的内部生物信号表达变化进行考察；

步骤3：完成步骤2后，进一步对细胞生物学功能进行考察；在本发明实施例中，应用DNA纳米清除装置清除环境中TGF-β1后，观察PBMC对肿瘤细胞系A375细胞的杀伤作用变化；

图5为本发明实施例中，以三种DNA纳米框架结构修饰核酸适配体T8-1-3构建而成的核酸纳米捕获器特异性清除免疫抑制性细胞因子转化生长因子TGF-β1为例，进行体内体外清除的示意图.

图6是本发明实施例中以三种DNA纳米框架结构修饰核酸适配体T8-1-3构建而成的核酸纳米捕获器在体外细胞培养体系中清除TGF-β1后增强免疫细胞杀伤功能的实验结果图。我们首先需要对PBMC进行预处理，共分为5个平行组：未处理组，加入extra TGF-b1组，加入extra TGF-b和BA组，加入extra TGF-b和SA组，加入extra TGF-b和IA组。加入extra TGF-b的目的是模拟肿瘤患者体内较高的血TGF-b水平，达到对循环和淋巴组织内免疫细胞的刺激。预处理后，将PBMC加入到提前准备好的A375细胞中，共孵育8小时后进行共聚焦和流式细胞术观察；共聚焦显微图如图6a所示，流式细胞术定量结果如图6b-c所示(包括单纯与靶分子进行共孵育的结果以及在PBMC体系中的结果)，加入extra TGF-b后死亡肿瘤细胞数目明显减少，但当加入BA/SA/IA对TGF-b进行清除后，PBMC中具有杀伤肿瘤细胞能力的免疫细胞比例增多，对肿瘤细胞杀伤能力恢复，死亡肿瘤细胞数目增多。PBMC引起的肿瘤细胞杀伤属于非特异性杀伤，为了验证清除环境中的TGF-b对于免疫系统的特异性杀伤恢复同样有效，我们使用了在膜表面特异性表达肿瘤细胞抗原相关T细胞嵌合受体(TCR)的T细胞(TCR-T)进行上述实验，同样我们发现使用DNA纳米清除装置后，TCR-T细胞的肿瘤杀伤能力明显恢复，并且BA的加入使TCR-T的肿瘤杀伤能力较对照组有了显著提升，如图6d所示。

(2)DNA纳米清除装置在模式动物水平清除循环细胞因子调节免疫反应的应用

本次实验以应用DNA纳米清除装置清除MC38荷瘤小鼠体内的转化生长因子TGF-β1蛋白为例，我们对小鼠进行尾静脉注射不同药物后取血测量TGF-β1蛋白水平，对DNA纳米清除装置的体内捕获效率进行评价。如图7所示，我们使用BA检测了不同时间点静脉注射后血液中TGF-β1的含量，发现注射后循环中TGF-β1蛋白水平不断降低，在2小时左右稳定在最低，8小时左右开始上升。我们同时对三种DNA纳米清除装置的捕获和清除能力进行了对比，在保持捕获元件量相同的情况下，小鼠尾静脉注射不同DNA纳米清除装置两小时后取血进行ELISA，与PBS与Free aptamer组相比，注射DNA纳米清除装置组小鼠TGF-β1蛋白明显降低，其中BA效果最好。

实施例3DNA纳米清除装置联合免疫检查点抑制剂的应用

为了验证循环内免疫抑制性细胞因子含量下降后对机体免疫反应的影响，我们联合了免疫检查点抑制剂aPD-L1进行抗肿瘤治疗。针对体内抑瘤效果评价，我们构建了MC38小鼠皮下瘤模型。将所有小鼠随机分为5个组：PBS组，Free T8-1-3组，BA组，aPD-L1组，BA+aPD-L1组，当肿瘤体积达到150mm³时隔日给药，共给药7次，在使用aPD-L1的治疗组中aPD-L1共计给药两次，总体规划如图所示。每次给药前对小鼠肿瘤大小、体重进行监测，所有小鼠在最后一次治疗结束24小时后安乐死。在进行实验之前，我们测定了荷瘤小鼠和正常鼠循环中的TGF-b值，根据二者差值加入BA，目的是将荷瘤小鼠循环中TGF-b调节至正常小鼠循环内水平。

如图8所示，与对照PBS组相比，Free T8-1-3组未对小鼠肿瘤体积产生影响，BA组和aPD-L1组可以看到微弱的抑瘤作用，但抑瘤效果并没有随着时间延长而增强，肿瘤增长依旧十分迅速。但是，BA与aPD-L1联用组可以看到明显的抑瘤效果，肿瘤体积明显减小，解剖后瘤重显著降低。我们对解剖出的完整肿瘤组织提取组织间液进行TGF-β1蛋白含量检测，如图7所示，注射DNA Nano-scavengers的两组TGF-β1蛋白水平明显降低，而只注射aPD-L1组小鼠虽然有轻微肿瘤抑制作用但并未看到TGF-β1蛋白水平降低，因此我们可以认为BA成功将荷瘤小鼠体内TGF-β1水平调节至正常，联合免疫检查点疗法对肿瘤增殖起到了抑制作用。此外，小鼠体重在给药过程中保持平稳并且HE染色显示肝肾组织结构正常，说明DNA纳米清除装置在体内安全无毒。

以上实验充分的说明了本发明基于DNA框架结构构建的DNA纳米清除装置特异性清除靶分子能够有效引起下游生物学效应，与药物联用显示出具有良好的医用前景。

上述实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器，其特征在于，所述核酸纳米捕获器为修饰有清除元件的DNA折纸结构；所述清除元件为能够与靶分子特异性结合的核酸适配体、多肽和抗体中的任意一种；所述靶分子为免疫抑制性细胞因子；

所述DNA折纸结构为利用DNA折纸技术搭建而成的DNA纳米桶、正二十面体或截顶正二十面体结构，其是通过环状长序列的重组M13噬菌体基因组DNA单链和短序列的订书钉链及用于修饰清除元件的捕获订书钉链按照碱基互补配对原则杂交组装而成。

2.如权利要求1所述的可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器，其特征在于，所述靶分子为转化生长因子，血管内皮生长因子，白介素6，白介素10，氧化低密度脂蛋白和脂多糖中的任意一种。

3.权利要求1或2所述的可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器的制备方法，其特征在于，包括：利用DNA折纸技术搭建DNA折纸结构，将核酸适配体、多肽或抗体装配到锚定序列的互补序列上，对所述DNA折纸结构进行内部修饰清除基元；

其中，所述核酸适配体的装配方法包括：直接将需要修饰的核酸序列加在互补序列的末端，并利用分子杂交的方法通过互补序列与锚定序列结合将需要装配的核酸分子固定在结构内部；

所述多肽或抗体的装配方法包括：利用生物正交反应、化学反应或者蛋白偶联反应将蛋白或多肽与互补序列连接，并利用分子杂交的方法通过互补序列与锚定序列结合将多肽或抗体固定在结构内部。

4.权利要求1或2所述的可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器在体外清除靶分子中的应用。

5.权利要求1或2所述的可特异性清除靶分子的框架核酸纳米捕获器在制备增强免疫细胞免疫功能的产品中的应用。

6.一种靶向清除TGF-β1蛋白的框架核酸纳米捕获器，其特征在于，为修饰有核酸适配体T8-1-3的DNA折纸结构；所述核酸适配体T8-1-3能够特异性结合TGF-β1蛋白；

所述DNA折纸结构为利用DNA折纸技术搭建而成的DNA纳米桶、正二十面体或截顶正二十面体结构，其是通过环状长序列的重组M13噬菌体基因组DNA单链和短序列的订书钉链及用于修饰清除元件的捕获订书钉链按照碱基互补配对原则杂交组装而成。

7.权利要求6所述的靶向清除TGF-β1蛋白的框架核酸纳米捕获器在制备增强免疫细胞免疫功能的产品中的应用。

8.权利要求6所述的靶向清除TGF-β1蛋白的框架核酸纳米捕获器联合免疫检查点抑制剂aPD-L1在制备抗肿瘤产品中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的框架核酸纳米捕获器为修饰有核酸适配体T8-1-3的DNA纳米桶折纸结构。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、结直肠癌、胃癌、黑色素瘤、肾细胞癌和霍奇金淋巴瘤中的任意一种。

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