CN116158497A - 一种适用于离乳幼猴的猴粮及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种适用于离乳幼猴的猴粮及其制备方法，所述猴粮包括以下质量百分数的组分：玉米30％～35％、豆粕12％～20％、小麦12％～20％、土豆淀粉6％～12％、膳食纤维1％～5％、鸡肉粉1％～5％、鱼肉粉5％～10％、鱼油2％～5％、奶粉3％～10％、花生3％～8％、血浆蛋白粉3％～7％、石粉0.05％～0.1％、氯化胆碱0.02％～0.05％、氯化钠0.05％～0.1％、复合预混料3％～4％和0.01％灭活益生菌组剂；其中，所述灭活益生菌组剂包含罗伊氏乳杆菌。本发明的猴粮能够有效促进离乳幼猴的生长发育，减少幼猴腹泻情况。

Description

一种适用于离乳幼猴的猴粮及其制备方法
技术领域
本发明属于动物饲料领域，具体涉及一种适用于离乳幼猴的猴粮及其制备方法。
背景技术
实验动物是生命科学的基础和重要的支撑条件之一，它涉及到医药、化工、农业、轻工、环保、航天、商检、军工等诸多领域，被人们形象地称为“活的试剂”。实验动物的标准化程度直接影响到生命科学领域中研究成果的确立、研究水平的高低和研究产品的质量。实验动物饲养过程中，饲料是影响实验动物质量的关键因素，其营养成分的好坏及均衡与否直接影响到实验动物的生长发育和动物实验的结果与水平。
在很多的药物或者食品的试验中，通常会选择猴子作为试验对象，以便能够得到最接近人类反应的试验效果。由此，对用于试验的试验猴的数量需求巨大，需要专门饲养繁殖，获得符合质量标准要求的猴用于动物试验。实验猴的健康状况，除了养殖环境外，在很大程度上与养殖使用的饲料及其营养有很大关系。
幼猴在4/5月龄时，可能会由于母猴奶水不足或质量不佳，导致幼猴会抓取猴粮进行采食。至其6月龄时便正式离乳，与其他相似月龄的幼猴合笼。由于当前主流猴粮都为直径1.8～2.5cm，长度1.4～3cm左右，颗粒对离乳幼猴体积较大、相对硬度较高，且幼猴消化系统发育尚不完善，影响幼猴对营养的消化吸收。
幼猴在离乳初期，由于离开母猴、饮食改变等原因，容易应激，导致腹泻等症状出现，但由于实验动物饲料标准GB14924.2和GB14924.3对各营养素和微生物数有严格的要求，常规的短期高锌、益生菌调节肠道等都无法实施。部分幼猴由于经常拉稀变成僵猴，肠壁薄，光吃不长，影响幼猴的生长发育，甚至可能导致幼猴死亡。因此，开发一种适应于离乳幼猴食用的猴粮，具有十分重要的意义。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种一种适用于离乳幼猴的猴粮，能够有效促进离乳幼猴的生长发育，减少幼猴腹泻情况。
本发明还提出一种上述猴粮的制备方法。
根据本发明的一个方面，提出了一种适用于离乳幼猴的猴粮，其特征在于，包括以下质量百分数的组分：玉米30％～35％、豆粕12％～20％、小麦12％～20％、土豆淀粉6％～12％、膳食纤维1％～5％、鸡肉粉1％～5％、鱼肉粉5％～10％、鱼油2％～5％、奶粉3％～10％、花生3％～8％、血浆蛋白粉3％～7％、石粉0.05％～0.1％、氯化胆碱0.02％～0.05％、氯化钠0.05％～0.1％、复合预混料3％～4％和0.01％灭活益生菌组剂；其中，所述灭活益生菌组剂包含罗伊氏乳杆菌。
根据本发明的一种具体的实施方式，至少具有以下有益效果：本发明的离乳幼猴猴粮能够有效促进离乳幼猴的生长发育，减少幼猴腹泻情况；本发明的猴粮原料营养全面均衡、安全性高、易消化吸收，尤其添加了灭活益生菌组剂等，改善离乳幼猴的肠道微生态平衡，提高饲粮的消化利用率，增强了幼猴的免疫机能使得离乳幼猴过程中降低腹泻发生率，维护机体健康的同时不影响试验的正常进行。
在本发明中，使用灭活益生菌组剂，具有以下优势：
(1)安全性高：大量使用益生菌活菌有可能引起细菌感染、产生有害代谢物、超敏反应等问题，相比而言灭活益生菌因其活性丧失处于更加稳定的状态，不会在宿主体内生长繁殖，因此具有更高的安全性。
(2)稳定性高：灭活益生菌对保存和运输条件以及保质期有严格的要求，目前市场上大部分活菌益生菌均需在低温(4℃)下运输和保存，保质期也仅为几天至十几天。另一方面其进入消化道内，很容易受到胃酸、胆汁及消化酶等的影响，不能到达肠道发挥作用。相比较灭活益生菌制品则没有要求。
(3)便捷性：在使用过程中，灭活益生菌制剂对菌的数量没有限制。而活菌制剂通常须达到一定数量的活菌数才可发挥疗效。有研究指出使用益生菌活菌时，要获得预期的结果，食品中活菌最低添加数量在106CFU/g或最低平均日摄入量为108CFU/g，以补偿活菌在通过胃肠道过程中的消耗，能够提供足够活细胞定植于宿主肠道。然而若过量添加又可能引起一些不良反应，因此益生菌活菌制剂使用量较难控制。
(4)调节离乳幼猴肠道，保护优势菌群，提高肠道免疫力，减少换食及应激引起的腹泻，降低僵猴出现率，提高经济效益。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述离乳幼猴的适用年龄为4月龄～12月龄的幼猴。优选的，所述离乳幼猴的适用年龄为6月龄～9月龄的幼猴。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述离乳幼猴为实验用猴，实验用猴种类为食蟹猴或猕猴等。
在本发明的一些实施方式中，所述罗伊氏乳杆菌的菌株为XT02，保藏编号为：CCTCC NO：M2022926。菌株XT02分离自健康幼年食蟹猴粪便中，经鉴定为罗伊氏乳杆菌，该菌株对离乳幼猴具有较好的效果。
在本发明中，罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)广泛存在于动物肠道中，可抑制胃肠道病原菌繁殖，调节动物免疫机能，降低动物应激，减少动物发病率，调节肠道菌群，预防或减轻腹泻，同时还具有提高饲料利用效率，促进动物生长，降低料重比等重要作用。
在本发明的一些实施方式中，所述罗伊氏乳杆菌的含量为1×1010CFU/g～1×1011CFU/g。优选的，所述罗伊氏乳杆菌的含量为1×1010CFU/g～5×1010CFU/g；更优选的，所述罗伊氏乳杆菌的含量为2×1010CFU/g。
在本发明的一些实施方式中，所述灭活益生菌组剂还包含枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述灭活益生菌组剂中，罗伊氏乳杆菌：枯草芽孢杆菌：植物乳杆菌的含量比为(100～300)：1：1。优选的，罗伊氏乳杆菌：枯草芽孢杆菌：植物乳杆菌的含量比为(250～150)：1：1；进一步优选的，罗伊氏乳杆菌：枯草芽孢杆菌：植物乳杆菌的含量比为200：1：1。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述灭活益生菌组剂中，罗伊氏乳杆菌含量为2.0×1010CFU/g，枯草芽孢杆菌含量为1.0×108CFU/g，植物乳杆菌1.0×108CFU/g。
优选的，所述灭活益生菌组剂还包含稀释剂；其中，所述稀释剂包含膨润土和甘露寡糖，和/或所述稀释剂的含量为10％。在具体的实施例中，未灭活益生菌组剂：罗伊氏乳杆菌含量为2.0×1010CFU/g，枯草芽孢杆菌含量为1.0×108CFU/g，植物乳杆菌1.0×108CFU/g，稀释剂为膨润土+甘露寡糖(占10％)。
在本发明的一些实施方式中，所述玉米为膨化玉米；和/或所述豆粕为膨化豆粕；和/或所述小麦为膨化小麦。在原料组分中，对玉米、豆粕和小麦等谷物原料提前熟化处理，能够减少抗营养因子，有益于幼猴吸收。
在本发明的一些实施方式中，所述猴粮中还包括香菇多糖；优选的，所述香菇多糖的添加量为所述猴粮重量的0.5～1％。香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的β-(1-3)-D-葡聚糖，主链由β-(1-3)-连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由β-(1-6)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。本实施例中的香菇多糖和灭活益生菌组剂共同使用，起到了协同增效的作用。
在本发明的一些实施例中，所述复合预混料包括以下重量分数的组分：次粉20～50％、磷酸氢钙20～40％、蛋氨酸5～12％、赖氨酸5～12％、微量元素5～10％、食盐2～8％、复合维生素1～5％、硫酸亚铁0.1～2％、酵母硒0.01～0.1％、乳酸锌0.01～0.1％和柠檬酸锌0.01～0.1％。
在本发明的一些优先的实施例中，所述复合维生素中：维生素A 1400～2800万IU/kg；维生素D 150～430万IU/kg；维生素E 12～24万IU/kg；维生素K3 20～40g/kg；维生素B140～80g/kg；维生素B2 12～24g/kg；维生素B6 12～24g/kg；烟酸60～90g/kg；泛酸24～40g/kg；叶酸4～6g/kg；生物素200～400mg/kg；维生素B12 30～60mg/kg；抗氧化剂300～500mg/kg；水分＜8wt％。
根据本发明的再一个方面，提出了上述猴粮的制备方法，包括以下步骤：
S1、制备灭活益生菌组剂；
S2、将玉米、豆粕、小麦混合粉碎后得到第一混合料，将第一混合料进行第一次膨化处理得到熟化原料；
S3、将步骤S2中所述熟化原料、鸡肉粉、鱼肉粉、奶粉、复合预混料、石粉、鱼油、氯化胆碱、氯化钠和灭活益生菌组剂混合得到第二混合料，将第二混合料进行第二次膨化处理得到所述猴粮；其中，所述第二次膨化处理为在130℃、0.5MPa蒸汽下进行调质，料温达到92℃后进行膨化制粒。
在本发明中，猴粮的加工工艺使用膨化技术。膨化技术又称挤压技术，它是将一般的挤压与蒸煮的功能合并于一机完成的。物料挤压蒸煮过程在螺杆挤压机中进行，即把含有淀粉或蛋白质的粉状原料，在一个加热的机筒内由转动的螺杆进行输送挤压；高温、高压和机械剪切力的联合作用，使淀粉糊化、蛋白质变性、酶钝化，同时也使杀菌充分：最后使物料在各种形状的膜具中成型、膨胀并被旋转的刀片切割成需要的长度。经过实施例2的膨化加工制备工艺获得的猴粮具有更佳的食用体验，且利于消化吸收。
在本发明中，使用膨化工艺，具有以下优势：
(1)消化率高：原料采用膨化工艺进行前处理能破坏和软化原料纤维结构中的细胞壁，提高淀粉糊化度，改善饲料的消化利用率。
(2)菌落总数少：膨化过程中产生的高温高压促沙门氏菌、大肠杆菌等有害菌全部杀死，并降低原料本身的菌落总数，大幅提高离乳幼猴粮卫生指标。
(3)膨化度好：使用膨化原料进一步提高离乳幼猴粮膨化度，改善酥脆度，提高离乳幼猴粮适口性。
(4)可溶性好：对于个别牙齿状况不佳的离乳幼猴可通过泯或者含等动作将猴粮湿润化开，降低采食难度。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述步骤S1包括以下步骤：
S11、菌液制备：将枯草芽孢杆菌单菌落、植物乳杆菌单菌落、罗伊氏乳杆菌单菌落接种于培养基中，37℃条件下培养12h后，调整菌液浓度备用；
S12、固态益生菌组剂制备：将载体与菌悬液以2：3的比例混合后烘干，得到固态益生菌组剂；优选的，所述载体包含膨润土和甘露寡糖中的至少一种；
S13、灭活益生菌组剂制备：通过CO60辐照35kGy将所述固态益生菌组剂进行灭活，得到灭活益生菌组剂。
在本发明的一些更优选的实施方式中，具体的制备方法包括以下步骤：
1)挑取3wt％枯草芽孢杆菌单菌落、3wt％植物乳杆菌单菌落、4wt％罗伊氏乳杆菌单菌落接种于包含2.5％玉米淀粉、3％豆粕、2％葡萄糖的培养基中，在初始pH为5.5、装液量30ml，温度37℃条件下培养，培养12h后采用菌落平板计数法调整菌液浓度。
2)以膨润土和甘露寡糖作为烘干载体，将载体与菌悬液以2:3的比例混合后，于50℃鼓风烘干6h，得到固态益生菌菌剂。
3)灭活益生菌组剂的制备：通过CO60辐照35kGy将固态益生菌菌剂进行灭活，得到固态灭活益生菌菌剂。
在本发明的一些优选的实施方式中，经过膨化工艺生产最终制备得到的猴粮，其形状为边长10mm的三角形。所述猴粮采用三角形便于幼猴抓握采食，减少浪费；该形状大小也会使得幼猴粮更加酥脆，方便幼猴咀嚼，有利于其牙齿健康。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：
图1为本发明实施例1中罗伊氏乳杆菌M2022926的菌株细胞形态图；
图2为本发明实施例3中幼猴6月龄～9月龄饲喂猴粮的生长发育体重变化图。
用于制备上述离乳幼猴猴粮中添加的罗伊氏乳杆菌的菌株已进行保藏，其为XT02，其分类命名为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，其保藏编号为CCTCC NO：M2022926，保藏日期为2022年6月20日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏单位地址为中国，武汉，武汉大学。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1：罗伊氏乳杆菌XT02及其功能测试
本实施例从健康食蟹猴粪便中提取分离得到了一株新型的罗伊氏乳杆菌的菌株，命名为XT02，该罗伊氏乳杆菌的保藏标号为M2022926，于2022年6月20日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其分离鉴定过程及菌株性质研究如下：
1.1罗伊氏乳杆菌XT02的提取、分离及鉴定
保藏的罗伊氏乳杆菌M2022926为健康食蟹猴粪便中提取分离而来，该罗伊氏乳杆菌的培养过程如下：将菌株种子液(109CFU/ml)2.5ml接种于250ml MRS培养基(乳酸细菌培养基)进行发酵培养，培养条件为：pH 5.5、温度37℃、无抗生素厌氧条件下进行培养24～48h，采用菌落平板计数法调整菌液浓度至2×1010CFU/ml，将罗伊氏乳杆菌液于4℃保存备用。
观察菌落特征，利用革兰氏染色，镜检，观察细胞形态(图1)。从图1中可见，革兰氏染色阳性，细胞呈杆状。
提取菌株DNA，按照大连宝生物公司DNA提取试剂盒(akaRa 2.0)说明书方法提取细菌DNA，对所获得乳酸菌保守序列进行扩增并测序，引物合成及测序，对16S rRNA序列进行同源性比较。对罗伊氏乳杆菌M2022926的16S rRNA基因进行系统发育分析，确定它与罗伊氏乳杆菌的亲缘关系密切。
1.2罗伊氏乳杆菌的性能鉴定实验
(1)耐酸性实验
取0.5ml上述发酵获得的罗伊氏乳杆菌菌液分别接种至pH 1.5、pH 2.0、pH 2.5、pH3.0的100ml MRS液体培养基中，并以不接菌的MRS液体培养基作为对照，37℃培养2-4h后，分别在1h、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与原活菌数进行比较。实验结果显示，罗伊氏乳杆菌在pH值为3.0的液体培养基活菌存活率大于90％，在pH值为2.5的液体培养基活菌存活率仍大于70％。
(2)益生性(抑菌性)实验
配制LB固体培养基，121℃灭菌30min。将浓度为109CFU/ml的病原菌(金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌)分别接种于培养基，37℃培养24h备用。用无菌棉签将0.1ml病原菌培养液均匀涂抹在固体LB培养基上，用无菌镊子将孔内琼脂块挑出放入10ml小管中。取0.5ml上述发酵获得的罗伊氏乳杆菌菌液加入各小管中，37℃培养24h，观察有无抑菌环。结果表明均产生益菌环，罗伊氏乳杆菌菌液对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌均有良好的抑制作用。
(3)抗逆性验证
将50μl上述发酵获得的罗伊氏乳杆菌菌液接种在10ml MRS液体培养基中，37℃下培养24h。取另外的50μl上述发酵获得的罗伊氏乳杆菌菌液在水浴锅中加热20-30min，接种在10ml MRS液体培养基中，37℃下培养24h，计算罗伊氏乳杆菌加热前后的活菌数量。实验结果表明，加热后活菌存活率达到了约95％。
由上述实验结果可知，罗伊氏乳杆菌其具有优异的耐酸性、抗菌能力以及抗逆性，特别适于制备灭活罗伊氏乳杆菌，并添加至动物饲料中。
实施例2：猴粮配方及其制备方法
本实施例制备了一种适用于离乳幼猴的猴粮，具体组分配方及制备过程如下：
2.1猴粮配方
本实施例的猴粮由以下表1所示组分配方组成：
表1.离乳幼猴猴粮配方
Figure SMS_1
Figure SMS_2
上述复合预混料包括以下重量分数的组分：次粉20～50％、磷酸氢钙20～40％、蛋氨酸5～12％、赖氨酸5～12％、微量元素5～10％、食盐2～8％、复合维生素1～5％、硫酸亚铁0.1～2％、酵母硒0.01～0.1％、乳酸锌0.01～0.1％和柠檬酸锌0.01～0.1％。
其中，复合维生素中：维生素A 1400～2800万IU/kg；维生素D 150～430万IU/kg；维生素E12～24万IU/kg；维生素K3 20～40g/kg；维生素B1 40～80g/kg；维生素B212～24g/kg；维生素B6 12～24g/kg；烟酸60～90g/kg；泛酸24～40g/kg；叶酸4～6g/kg；生物素200～400mg/kg；维生素B12 30～60mg/kg；抗氧化剂300～500mg/kg；水分＜8wt％。
2.2猴粮制备方法
(1)制备灭活益生菌
A)菌液制备
挑取3wt％枯草芽孢杆菌单菌落、3wt％植物乳杆菌单菌落、4wt％罗伊氏乳杆菌单菌落接种于包含2.5％玉米淀粉、3％豆粕、2％葡萄糖的培养基中，在初始pH为5.5、装液量30ml，温度37℃条件下培养，培养12h后采用菌落平板计数法调整菌液浓度。
B)固态益生菌的制备
以膨润土和甘露寡糖作为烘干载体，将载体与菌悬液以2：3的比例混合后，于50℃鼓风烘干6h，得到固态益生菌菌剂。
C)固态灭活益生菌的制备
通过CO60辐照35kGy将固态益生菌菌剂进行灭活，得到固态灭活益生菌菌剂。
(3)饲料的制备，离乳幼猴粮的生产工艺主要由原料接收清理、配料、混合、粉碎、二次混合、调质、膨化、烘干冷却、输送、分级、清理、成品包装等工段组成。
饲料原料在接收前，先经过抽样质检合格，其营养含量、颜色、味道符合验收标准，无霉变等。经投料口用斗式提升机提升到原料仓，在进入原料仓前分别通过初清筛和永磁筒，除去线头、粉尘、碎石、铁屑等杂物。可理解的是，饲料的制备总量可根据实际设备的产能进行调整，但各组分的重量分数不变。
将自动称量的玉米、豆粕、小麦由提升机转入初混合机混合5分钟，然后转入待粉碎仓，准备粉碎。粉碎后物料颗粒粒径为0.1～0.2mm，得到第一混合料。将第一混合料送入膨化机进行前熟化，膨化机有一副螺杆和螺套，第二混合料进入膨化腔内以后，在螺杆套之间受到挤压，摩擦，剪切等作用，其内部压力不断升高，最大达4MPa,温度不断上升，最高可达140℃。在3～7分钟的时间内，温度和压力急剧升高，第二混合料的组织结构发生变化，粗纤维破坏，杀死沙门菌等有害菌。高温高压的混合料从出料口出来，其压力突然释放，水分放生部分闪蒸，冷却后物料呈疏松，多孔的结构。整个前熟化过程进行10分钟。
熟化后的原料再进行二次粉碎，添加其余原料组分鸡肉粉、鱼肉粉、奶粉、复合预混料、石粉、鱼油、氯化胆碱、氯化钠和灭活的复合益生菌剂，进行二次混合，混合5min得到第二混合料；将第二混合料在130℃、0.5Mpa蒸汽下进行调质，料温达到92℃后进行膨化制粒，环模模孔直径7mm，成型后70℃(在另外一些实施例中，烘干温度可在60～80℃温度范围内选择)烘干20min，冷却后分级包装。
2.3实验猴粮的制备
根据上述实施例2.1的猴粮配方和2.2的猴粮制备方法，分别制备出在原料比例范围内的实验猴粮，并通过测试和对比验证几组猴粮均具有类似的较好效果，原料配方有利于膨化加工，制备得到的实验猴粮的配方组分如下表2所示：
表2.实验猴粮配方
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Figure SMS_4
在后续实验中，使用本实施例的组分和方法制备得到的上述猴粮，分别记为“实验猴粮1”、“实验猴粮2”、“实验猴粮3”、“实验猴粮4”，后续实验过程中主要使用实验猴粮1进行进一步的验证。
实施例3：猴粮效果验证
在本实施例中，对实施例2制备得到的实验猴粮，以及对灭活益生菌组剂、膨化工艺和适用猴子类型进行进一步验证。
首先，参照实施例2的原料配方与制备了以下对照猴粮：
1)采用不添加灭活益生菌组剂但其它原料组成与“实验猴粮1”一致，且采用相同制备方法，制备得到对照猴粮1；
2)采用与“实验猴粮1”相同的初始原料，但不对玉米、豆粕和小麦进行第一步膨化处理，其它制备步骤与“实验猴粮1”相同，制备得到对照猴粮2。
然后，针对实施例2制备得到的实验猴粮1和上述制备得到的对照猴粮1、对照猴粮2进行以下实验，进行效果验证。
3.1幼猴生长发育实验
本实施例采用实验猴粮1～4和对照猴粮1～2，分别饲喂离乳幼猴，即本发明的实验组和对照组。在饲喂期间对离乳幼猴进行采食情况、腹泻率、精神状态、营养物质消化率进行观测和评估。
对实验猴粮1、对照猴粮1和对照猴粮2三组猴粮进行干物质检测，三组试验离乳幼猴粮的干物质、粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、粗灰分、钙和磷基本一致。
表3.营养成分表
项目 实验猴粮1 对照猴粮1 对照猴粮2
干物质，％ 94.5 93.7 94.8
粗蛋白，％ 23.5 23.9 23.4
粗纤维，％ 3.6 3.4 3.1
粗脂肪，％ 5.65 3.53 5.48
粗灰分，％ 5.2 5.2 5.5
钙，％ 1.2 1.3 1.2
磷，％ 0.84 0.82 0.81
动物分组及饲养：本实施例通过饲喂本款离乳幼猴粮和不含灭活益生菌剂的但其他原料组成一致的离乳幼猴粮来评价其对离乳幼猴的生长和营养表观消化率的影响。每种饲料各测试6只(初始体重1.0～1.4kg，其中6月龄时母猴约重1.1kg，公猴约重1.3kg，每组母猴3只、公猴3只)，单笼喂养，测试的周期为3月(6月龄～9月龄)。
饲养方式：对每只猴每日早上和下午喂用猴粮各1份，每次每份约50g。
检测使用的方法和主要仪器：粗蛋白测定，定氮法，凯氏定氮仪；粗纤维测定，干燥法，粗纤维测定仪；粗脂肪测定，干燥法，粗执法测定仪。检测方法按照国标中饲料检测的相关标准进行。其中：饲料中粗蛋白质的测定GB/T6432-1994、饲料中粗脂肪的测定GB/T6433-1994。
1)消化实验：在试验第75天，进行消化试验，猴粮的表观消化率(表观消化率是指某种养分在被动物摄入前的含量和在粪便中含量的差值)如下表4所示：
表4.猴粮营养表观消化率
Figure SMS_5
Figure SMS_6
在为期3个月的试验中，可以观测到幼猴对于通过实施例2膨化技术制备工艺制备得到的猴粮(实验猴粮1、对照猴粮1)抓取食用更为方便、口感更佳，且其消化利用效果更好。增加了灭菌益生菌组剂后的猴粮对比不加灭菌益生菌组剂的猴粮，也更有利于营养物质的吸收。
2)生长发育监测：每月称重1次直至9月龄止。同时注意观察各组动物的体态、毛色、食欲、粪便、器官分泌物及消化道症等，从而判断动物生长发育和健康状况。体重值以i±s表示，用SPSS 10.0进行单因素方差分析比较差异的显著性。
表5.幼猴生长发育结果(体重测量结果)
组别 初始体重 7月龄 8月龄 9月龄 增重比例
实验猴粮1 1.15±0.12kg 1.23±0.16kg 1.35±0.14kg 1.51±0.25kg 31.3％
实验猴粮2 1.12±0.17kg 1.22±0.17kg 1.33±0.13kg 1.47±0.21kg 31.2％
实验猴粮3 1.22±0.21kg 1.25±0.16kg 1.33±0.21kg 1.55±0.16kg 27.0％
实验猴粮4 1.21±0.16kg 1.27±0.22kg 1.32±0.17kg 1.53±0.19kg 26.4％
对照猴粮1 1.18±0.13kg 1.15±0.18kg 1.22±0.19kg 1.33±0.22kg 12.7％
对照猴粮2 1.19±0.24kg 1.19±0.14kg 1.26±0.22kg 1.34±0.15kg 12.6％
开始时由于幼猴断奶应激大，饲喂猴粮的第一周实验组和对照组的体重均减轻，但实验组猴粮饲喂一周后，幼猴基本没有腹泻等断奶应激现象，体重增长良好。对照组的断奶应激改善较缓慢，体重增重少。实验结果表明，实验猴粮1～4均具有较好的增重和生长发育效果，对照猴粮1和对照猴粮2中均出现有僵猴，且幼猴的生长发育状态不佳。
3)肠道菌群检测：每月取幼猴粪便(实验猴粮1和对照猴粮1组别的实验猴)进行肠道菌群检测直至9月龄止。下表6为幼猴粪便中的大肠杆菌进行测量和计数的结果。
表6.幼猴肠道中大肠杆菌含量(log10CFU/g)
组别 初始检测 7月龄 8月龄 9月龄
实验猴粮1 6.16±0.09 5.53±0.08 5.04±0.07 4.61±0.03
对照猴粮1 6.23±0.12 6.04±0.04 6.31±0.05 6.28±0.07
实验结果证明实验猴粮对幼猴肠道中大肠杆菌含量有明显的抑制作用，能够显著降低大肠杆菌含量，而未添加灭菌益生菌组剂的猴粮对肠道中大肠杆菌含量无变化，说明添加灭菌益生菌组剂能够调节肠道内菌群含量，优化肠道内菌群生态。
3.2幼猴腹泻治疗实验
选取12只9月龄的健康且体格一致的离乳幼猴分为3组，每组4只，其中试验组用番泻叶诱导腹泻。
表7.试验处理
组别 数量 处理
试验组1 4只 诱导腹泻后饲喂实验猴粮1
试验组2 4只 诱导腹泻后饲喂对照猴粮1
试验组3 4只 诱导腹泻后饲喂对照猴粮2
灌服番泻叶诱导9月龄幼猴腹泻试验，腹泻症状可稳定持续3～4天，第5天可自行痊愈。三个试验组幼猴口服番泻叶8h内：表现精神沉郁、排便次数增多、粪便水分增加、粪便粘稠的情况。
在整个口服番泻叶期间：试验组2和实验组3离乳幼猴的采食量和饮水量均较对照组有所降低，精神沉郁、水样腹泻、食欲降低、体重减轻、较安静少动。试验组1离乳幼猴食欲正常、粪便形态较软、水分增加，体重基本不变。实验结果如下表7所示，其中，记录了三组幼猴在第3天时仍表现精神沉郁、水样腹泻、食欲下降的幼猴数量，以及第5天时每组幼猴平均体重变化量值。
表8.番泻叶诱导实验结果
组别 精神沉郁 水样腹泻 食欲降低 体重变化量
试验组1 0 0 0 +3％
试验组2 4 4 3 -6％
试验组3 4 3 4 -4％
3.3猴粮适用年龄测试
本实施例使用实验猴粮1的和对照猴粮1对不同年龄段实验猴进行饲喂，观测其生长发育情况，本实验分别对离乳幼猴(6～9月龄)、成年猴(3～4岁)、老年猴(18～19岁)各四只(雌雄各半)进行饲喂，测量饲喂3月后的体重增重比例。测试结果如下表所示：
表9.不同年龄段实验猴饲喂的体重增重变化
组别 离乳幼猴 成年猴 老年猴
实验猴粮1 +31％ +5％ +2％
对照猴粮1 +12％ +6％ +1％
从以上实验结果证明，对于成年猴和老年猴，实验猴粮的效果与对照猴粮的饲喂效果差异不大，相对于成年猴、老年猴，实验猴粮1用于离乳幼猴能够对其生长发育有更为明显的促进作用，且在实验过程中观测得到能较大程度抑制腹泻、及出现僵猴的情况，效果更佳。
实施例4：灭活益生菌组剂配方优化实验
4.1罗伊氏乳杆菌的含菌量优化
本实施例对灭活益生菌组剂的含菌量及配比进行进一步的优化验证。
(1)首先，对灭活益生菌含菌量中罗伊氏乳杆菌的含菌量初步优化：1012、1011、1010、109、108CFU/g。
制备含菌量分别为：1012、1011、1010、109、108CFU/g的测试猴粮(依次命名为测试猴粮1～5)，通过如实施例3.2的番泻叶诱导试验构建腹泻的幼猴体系(每组4只，雌雄各半)，测试不同含菌量下猴粮的止泻效果，结果如下表8所示：
表10.不同含菌量下的止泻效果
组别 精神沉郁 水样腹泻 食欲降低 体重变化量
测试猴粮1 1 1 2 0
测试猴粮2 0 0 0 +3％
测试猴粮3 0 0 0 +4％
测试猴粮4 1 2 2 -2％
测试猴粮5 3 4 4 -4％
实验证明1011和1010CFU/g的菌含量有最好的效果。
(2)进一步优化：含菌量分别为5×1011、1×1011、5×1010、2×1010、1×1010、5×109CFU/g进行测试。证明5×1010～1×1010CFU/g之间有最好的效果，其中，2×1010CFU/g效果最佳。
4.2组合菌剂效果及比例优化
使用仅有罗伊氏乳杆菌的灭活益生菌和罗伊氏乳杆菌/枯草芽孢杆菌/植物乳杆菌组合的菌剂进行对比。进一步优化三种菌剂的比例。
得到罗伊氏乳杆菌含量为2.0×1010CFU/g，枯草芽孢杆菌含量为1.0×108CFU/g，植物乳杆菌1.0×108CFU/g的效果最佳。
实施例5：香菇多糖协同增效作用
实验猴粮5：在上述实验猴粮1的基础上，另添加猴粮重量1％的香菇多糖与灭活益生菌组剂混合，进行猴粮制备。
对照猴粮3：添加与实验猴粮5相同量的香菇多糖，但不添加灭活益生菌组剂。实验猴粮5和对照猴粮3的制备方法均与实验猴粮1相同。
使用实验猴粮1、实验猴粮5、对照猴粮1和对照猴粮3进行幼猴腹泻治疗实验。选取16只9月龄的健康且体格一致的离乳幼猴分为4组，每组4只，用番泻叶诱导腹泻。分别饲喂实验猴粮1、实验猴粮5、对照猴粮1和对照猴粮3，观察第2天和第3天幼猴情况，和第5天的体重变化情况。
表11.第二天幼猴情况
组别 精神沉郁 水样腹泻 食欲降低
实验猴粮1 2 2 1
实验猴粮5 0 0 0
对照猴粮1 4 4 4
对照猴粮3 4 4 4
表12.第三天幼猴情况和第五天体重变化
组别 精神沉郁 水样腹泻 食欲降低 体重变化量
实验猴粮1 0 0 0 +4％
实验猴粮5 0 0 0 +6％
对照猴粮1 3 4 4 -6％
对照猴粮3 4 3 3 -5％
从上述结果可知，使用实验猴粮5具有更快的应激性腹泻治疗效果，说明香菇多糖与灭菌益生菌组剂配合使用能够使灭菌益生菌组剂的起效更快，具有协同增效的作用。
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

Claims (10)

1.一种适用于离乳幼猴的猴粮，其特征在于，包括以下质量百分数的组分：玉米30％～35％、豆粕12％～20％、小麦12％～20％、土豆淀粉6％～12％、膳食纤维1％～5％、鸡肉粉1％～5％、鱼肉粉5％～10％、鱼油2％～5％、奶粉3％～10％、花生3％～8％、血浆蛋白粉3％～7％、石粉0.05％～0.1％、氯化胆碱0.02％～0.05％、氯化钠0.03％～0.1％、复合预混料3％～4％和0.01％灭活益生菌组剂；
其中，所述灭活益生菌组剂包含罗伊氏乳杆菌。
2.根据权利要求1所述的猴粮，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌的菌株为XT02，保藏编号为：CCTCC NO：M2022926。
3.根据权利要求1所述的猴粮，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌的含量为1×1010CFU/g～1×1011CFU/g。
4.根据权利要求1所述的猴粮，其特征在于，所述灭活益生菌组剂还包含枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌。
5.根据权利要求4所述的猴粮，其特征在于，所述灭活益生菌组剂中，罗伊氏乳杆菌：枯草芽孢杆菌：植物乳杆菌的含量比为(100～300)：1：1。
6.根据权利要求5所述的猴粮，其特征在于，所述灭活益生菌组剂中，罗伊氏乳杆菌含量为2.0×1010CFU/g，枯草芽孢杆菌含量为1.0×108CFU/g，植物乳杆菌1.0×108CFU/g。
7.根据权利要求1所述的猴粮，其特征在于，所述玉米为膨化玉米；和/或所述豆粕为膨化豆粕；和/或所述小麦为膨化小麦。
8.根据权利要求1所述的猴粮，其特征在于，所述猴粮中还包括香菇多糖；优选的，所述香菇多糖的添加量为所述猴粮重量的0.5～1％。
9.一种如权利要求1～8所述的猴粮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、制备灭活益生菌组剂；
S2、将玉米、豆粕、小麦混合粉碎后得到第一混合料，将第一混合料进行第一次膨化处理得到熟化原料；
S3、将步骤S2中所述熟化原料、鸡肉粉、鱼肉粉、奶粉、复合预混料、石粉、鱼油、氯化胆碱、氯化钠和灭活益生菌组剂混合得到第二混合料，将第二混合料进行第二次膨化处理得到所述猴粮；其中，所述第二次膨化处理为在130℃、0.5MPa蒸汽下进行调质，料温达到92℃后进行膨化制粒。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括以下步骤：
S11、菌液制备：将枯草芽孢杆菌单菌落、植物乳杆菌单菌落、罗伊氏乳杆菌单菌落接种于培养基中，37℃条件下培养12h后，调整菌液浓度备用；
S12、固态益生菌组剂制备：将载体与菌悬液以2:3的比例混合后烘干，得到固态益生菌组剂；
S13、灭活益生菌组剂制备：通过CO60辐照35kGy将所述固态益生菌组剂进行灭活，得到灭活益生菌组剂。
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