CN116157140A

CN116157140A - 具有肾酶促效剂活性的稳定胜肽

Info

Publication number: CN116157140A
Application number: CN202180059466.7A
Authority: CN
Inventors: 盖瑞·德西尔; 亚瑟·菲利克斯; 华莱士·戴尔曼; 安东尼·巴雷特; 贝瑞·伯科威茨
Original assignee: Besso Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Besso Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-05-29
Filing date: 2021-05-28
Publication date: 2023-05-23
Also published as: WO2021243117A3; US20230190883A1; EP4157307A2; WO2021243117A2; JP2023527441A

Abstract

公开具有肾酶促效剂活性并可用于治疗包括那些与SARS‑CoV‑2有关的疾病诸如AKI和AP的稳定胜肽。

Description

具有肾酶促效剂活性的稳定胜肽

引用EFS-WEB提交的序列表

名为“8712-0001WO SEQUENCE LISTING_seq_ST25”的序列表的ASCII文本文件的内容，大小为70kb，创建于2021年5月21日，并通过EFS-Web与本申请一起以电子方式提交，在此全部引用作为参考。

相关申请的引用

本申请要求2020年5月29日提交的美国临时申请第63/032,055号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本公开涉及一种稳定的胜肽，表现出组织保护活性并可用于治疗肾脏或胰腺疾病如急性肾损伤或急性胰腺损伤，特别是与SARS-CoV-2有关或加重的肾脏疾病或胰腺损伤。

背景技术

提供以下讨论只是为了帮助读者理解本公开并且不被承认描述或构成其现有技术。

肾酶(“RNLS”)由肾脏分泌并具有多种生物学功能。参见，例如，美国专利第7,700,095号；第7,858,084号；第7,932,067号；和第10,066,025号；和PCT专利申请US18/67608，其全部内容并入本文，如同在本文中完全复制一样。如上述美国专利第10,066,025号和Wang,etal.J.Am.Soc.Nephrol.2014Jun；25(6):1226-1235中所述，投药重组或生物分离的肾酶已显示可治疗特定疾病和病况。已经表明，RNLS通过细胞信号传导机制独立于其氧化酶功能来预防急性肾损伤(Wang et al 2014)。

急性肾损伤(AKI)和急性胰腺炎(AP)分别至少占住院COVID-19患者的1/3和1/5，并且在重症患者中更常见。肾酶(RNLS)是一种独特的循环蛋白，可有效提高细胞存活率并减少炎症，从而治疗诸如AKI和/或AP的肾脏疾病。

然而，整个肾酶链A的合成和投药既麻烦又昂贵，并且可能从氧化酶功能和细胞信号传导功能中传达复杂的药理特性(Wang et al,2014)。表现出肾酶促效剂活性，特别是具有细胞信号传导组织修复功能的稳定合成胜肽会是非常需要的。本公开提供这样的胜肽。

发明内容

本发明是关于图1显示的衍生自肾酶链A(1-342)(SEQ ID NO:1)的稳定胜肽。胜肽包含至少肾酶A(1-342)的第220至229位残基，其中Cys²²⁰被选自以下的氨基酸残基取代：

其中R¹和R²独立地是H；任选地被羟基取代的C₁至C₈正烷基；任选地被羟基取代的C3至C8支链烷基；任选地被羟基取代的C₄至C₈双支链烷基；任选地在任何一或多个位置被羟基或甲基或两者取代C₃至C₆环烷基，并且包括所有结构上可行的立体异构实体；任选地在任何位置被羟基或甲基或两者取代并且R¹和R²可以连接在一起作为(CH₂)_n任选地在任何位置被甲基或羟基或两者取代的CH₂-C₃至C₆环烷基，其中n是2、3、4或5；并且

其中Y是任选地在任何一或多个位置被甲基或羟基或两者取代的(CH₂)_n，条件是带有氨基的碳可以只被甲基取代，其中n是2、3、4、5；顺-或反-1,2-环丙二基、顺-或反-1,2-环丁二基、顺-或反-1,3-环丁二基、顺-或反-1,2-环戊二基、顺-或反-1,3-环戊二基、顺-或反-1,2-环己二基、顺-或反-1,3-环己二基，或顺-或反-1,4-环己二基，任选地在任何一或多个位置被甲基或羟基或两者取代，条件是带有氨基的碳可以只被甲基取代并且包括所有结构上可行的非对映异构实体。

这种修饰提高胜肽的生物学效能并使它们稳定，避免潜在的原位二聚化和/或寡聚化。优选地，X²²⁰选自Ser、Ala、Leu、Val、Ile、Nle、β-Ala、Aib、环丙基-甘氨酸和(环丙基甲基)-甘氨酸。

额外的氨基酸残基可以添加在X²²⁰的NH₂-端对应于图1相应位置所示的肾酶A的205至219位置序列中的部分或全部氨基酸残基或Lys²²⁹的COOH-端对应于图1相应位置所示的肾酶A的230至253位置序列中的部分或全部氨基酸残基。此外，长链的聚(乙)二醇[PEG]或双-聚(乙)二醇[双-PEG]具有不同的平均分子量，例如5000和20,000amu之间，或本领域已知的类似聚合物(如下所述)可以连接到X²²⁰的NH₂-端或较长片段的NH₂-端或Lys²²⁹的COOH-端或较长片段的COOH-端。

表述“对应于肾酶A的205至219位置序列中的部分或全部氨基酸残基”是指所添加的氨基酸残基可包含序列中来自219位置、218位置和219位置、217位置至219位置、216位置至219位置，依此类推，从201位置至219位置的残基。类似地，表述“对应于肾酶A的230至253位置序列中的部分或全部氨基酸残基”是指所添加的氨基酸残基可包含序列中来自230位置、230位置至231位置、230位置至232位置，依此类推，从230位置至253位置的残基。

本公开还提供治疗肾脏疾病(包括AKI和AP)和由SARS-CoV-2引起的肾脏疾病的方法。

附图说明

图1描述肾酶链A(1-342)。

图2显示肾酶促效剂胜肽10(BP 1002)减少急性胰腺炎小鼠模型的损伤。

图3显示肾酶促效剂对抗顺铂致死的活性。

图4显示肾酶促效剂胜肽81减少顺铂诱发的肾损伤。

图5显示肾酶促效剂BP-1002降低对SARS-CoV-2胜肽的炎症反应。

图6显示胜肽10(BP 1002)的抗炎作用。

图7显示胜肽10的抗炎作用的另一种呈现。

图8显示胜肽81的抗炎作用。

图9显示胜肽10(BP 1002)的比较抗炎作用。

图10显示COVID-19患者肾酶水平降低与死亡率之间的相关性。

图11显示肾酶促效剂胜肽10(BP-1002)提高COVID-19小鼠模型的存活率。

图12显示用肾酶促效剂胜肽10(BP-1002)治疗在严重病毒感染模型中保护肾酶缺陷小鼠。

图13显示胜肽10(BP-1002)在天青蛋白诱发的严重胰腺炎模型中有效减少坏死。

图14显示胜肽10(BP-1002)降低cronin 1的水平，cronin 1是炎性细胞的标志物。

具体实施方式

根据本公开，提供合成胜肽、包含胜肽的医药组合物以及使用合成胜肽和医药组合物治疗人类疾病的方法。

发明人已经发现肾酶链A序列内的特定胜肽片段表现出肾酶促效剂活性。然而，他们还发现这些胜肽不稳定，因此不适合用作治疗剂。他们已经发现胜肽片段的不稳定性可以通过用不同的适当选择的氨基酸取代肾酶链A(1-342)位置220的半胱氨酸残基来消除。此外，与未修饰的片段相比，修饰的胜肽片段具有更高的效力。

220位置的氨基酸可以选自以下的氨基酸的残基：

本发明的胜肽包含肾酶A片段，包括如上所述的X²²⁰的位置220-229，并且在位置220-229的一侧或任一侧的肾酶A的适当位置包含额外的氨基酸，胜肽的长度通常从约49个氨基酸至约20个氨基酸残基变化，尽管它们可以根据需要更长。

此外，各种平均分子量(例如，500至20,000amu)的聚(乙)二醇(PEG)或双-聚(乙)二醇(双-PEG)可以连接到胜肽的任一端以促进胜肽的更长期活性，如药学领域所熟知的。聚(乙)二醇是一种两亲聚合物，由重复的环氧乙烷单元组成，可以组装成直链或支链结构，形成一系列具有不同构型和分子量的PEGs。PEG必须被激活才能共价缀合到生物医药化合物(包括胜肽和蛋白质)中的适当位点，从而提升它们的药理学和药物特性。除了提高溶解度外，与PEG的结合可以保护生物医药化合物免受宿主免疫系统的影响，从而降低免疫原性和抗原性并延长生物半衰期。所得聚乙二醇化药物可以减少剂量和频率使用而不会降低功效。PEG有多种平均分子量可供选择，并且可以在一端进行功能化(另一端通常被保护为甲氧基)。或者，聚合物的两端都可以被官能化，从而产生可用于连接两个实体的同型双功能或异型双功能衍生物。Roberts,Adv.Drug Deliv.Rev.,54,459(2002)描述第一代和第二代PEG衍生物的回顾，这些衍生物具有更多样和更有效的官能基团用于与胜肽和蛋白质的缀合。第三代聚乙二醇化剂已经开发出来，其中聚合物已经支化，可以提供额外的优势来保护蛋白质免受蛋白水解并进一步降低免疫原性和抗原性。尽管[PEG]通常用于与胜肽和蛋白质缀合，但也可以使用其他适当功能化的聚合物，包括但不限于碳水化合物部分，它们具有适当的柔韧性，并且已由Sola and Griebenow,J.Pharm.Sci.,98,1223(2009)和Witteloostuijn,Pedersen,and Jensen,ChemMedChem,11,2474(2016)回顾过，两者通过引用并入本文。

在本发明的胜肽的位置220进行取代的选定氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、β-丙氨酸、环丙基-甘氨酸、(环丙基甲基)-甘氨酸和其他疏水性氨基酸作为所述氨基酸的D-氨基酸对映体。此外，Lys²²⁹可以用其D-异构体取代，以提供额外的稳定性。其他氨基酸，包括Lys²⁰⁵、Arg²²²、Lys²³⁰和/或Arg²³¹也可以被相应的D-氨基酸取代，以类似地增强对酶促降解的稳定性。

在一个实施例中，提供包含R-X²²⁰-Ile²²¹-Arg²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-R'的胜肽，

其中上标代表肾酶A链中的位置(1-342)，R选自Ac-Ala-Gly-Thr-、Ac-Gly-Thr-、Ac-Thr-、Ac-、Ac-Z、H-、H-Z、B-Z-和B，其中Z选自该肾酶A链205-219位置的一或多个氨基酸残基，R'选自-NH₂、Z'-NH₂、-B和Z'-B，其中Z'选自该肾酶A链230-253位置的一或多个氨基酸残基，B是PEG或双-PEG，并且X是选自以下的氨基酸的残基：

其中R¹和R²独立地是H；任选地被羟基取代的C₁至C₈正烷基；任选地被羟基取代的C3至C8支链烷基；任选地被羟基取代的C₄至C₈双支链烷基；任选地在任何一或多个位置被羟基或甲基或两者取代C₃至C₆环烷基；任选地在任何位置被羟基或甲基或两者取代并且R¹和R²可以连接在一起作为(CH₂)_n任选地在任何位置被甲基或羟基或两者取代的CH₂-C₃至C₆环烷基，其中n是2、3、4或5；并且

其中Y是任选地在任何一或多个位置被甲基或羟基或两者取代的(CH₂)_n，条件是带有氨基的碳可以只被甲基取代，其中n是2、3、4、5；1,2-环丙二基、1,2-环丁二基、1,3-环丁二基、1,2-环戊二基、1,3-环戊二基、1,2-环己二基、1,3-环己二基，1,4-环己二基，任选地在任何一或多个位置被甲基或羟基或两者取代，条件是带有氨基的碳可以只被甲基取代并且条件是胜肽包含至少20个氨基酸残基。

在另一个实施立中提供具有以下序列的胜肽：

R-Lys²⁰⁵-Ile²⁰⁶-Asp²⁰⁷-Val²⁰⁸-Pro²⁰⁹-Trp²¹⁰-Ala²¹¹-Gly²¹²-Gln²¹³-Tyr²¹⁴-Ile²¹⁵-Thr²¹⁶-Ser²¹⁷-Asn²¹⁸-Pro²¹⁹-X²²⁰-Ile²²¹-Arg²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-Lys²³⁰-Arg²³¹-Asn²³²-Ile²³³-Glu²³⁴-Ser²³⁵-Ser²³⁶-Glu²³⁷-Ile²³⁸-Gly²³⁹-Pro²⁴⁰-Ser²⁴¹-Leu²⁴²-Val²⁴³-Ile²⁴⁴-His²⁴⁵-Thr²⁴⁶-Thr²⁴⁷-Val²⁴⁸-Pro²⁴⁹-Phe²⁵⁰-Gly²⁵¹-Val²⁵²-Thr²⁵³-R'，其中R选自Ac-Ala-Gly-Thr-、Ac-Gly-Thr-、Ac-Thr-、Ac-、H-和PEG，R'选自-Tyr-Leu-Glu-NH₂、Tyr-Leu-NH₂、-Tyr-NH₂、-NH₂、-OH和PEG，并且X²²⁰选自Gly、Ser、Ala、Leu、Val、Ile、Nle、β-Ala环丙基-Gyl、(环丙基甲基)-Gly和Aib。

因此，本发明的胜肽包括：[X²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂(SEQ ID NO:2)、[X²²⁰]-Ac-肾酶A(214-253)-NH₂，(SEQ ID NO:3)、[X²²⁰]-Ac-肾酶A(214-240)-NH₂(SEQ IDNO:4)，和[X²²⁰]-Ac-肾酶A(205-253)-NH₂(SEQ ID NO:5),其中X选自甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、环丙基-甘氨酸、(环丙基甲基)-甘氨酸和β-丙氨酸。

本发明的代表性化合物包括但不限于：

[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂(SEQ ID NO:6)

[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(214-253)-NH₂(SEQ ID NO:7)

[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(214-240)-NH₂(SEQ ID NO:8)

[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-253)-NH₂(SEQ ID NO:9)

[Val²²⁰]-Ac-肾酶A(214-240)-NH₂(SEQ ID NO:10)

[Ser²²⁰]-Ac-肾酶A(214-253)-NH₂(SEQ ID NO:11)

[Ala²²⁰,D-Lys²²⁹]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂(SEQ ID NO:12)

[Ser²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂(SEQ ID NO:13)

[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(214-234)-NH₂(SEQ ID NO:14)

[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(220-239)-NH₂(SEQ ID NO:15)

[Gly²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂(SEQ ID NO:16)

[Gly²²⁰]-Ac-肾酶A(214-253)-NH₂(SEQ ID NO:17)

[环丙基-Gly²²⁰]-Ac-肾酶A(205-253)-NH₂(SEQ ID NO:18)

[(环丙基甲基)-Gly²²⁰]-Ac-肾酶A(214-240)-NH₂(SEQ ID NO:19)

本发明的聚乙二醇化胜肽的一代表性实例是[双-PEG₅₀₀₀]-Lys²⁰⁵-Ile²⁰⁶-Asp²⁰⁷-Val²⁰⁸-Pro²⁰⁹-Trp²¹⁰-Ala²¹¹-Gly²¹²-Gln²¹³-Tyr²¹⁴-Ile²¹⁵-Thr²¹⁶-Ser²¹⁷-Asn²¹⁸-Pro²¹⁹-Ala²²⁰-Ile²²¹-Arg²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-Lys²³⁰-Arg²³¹-Asn²³²-Ile²³³-Glu²³⁴-Ser²³⁵-Ser²³⁶-Glu²³⁷-Ile²³⁸-Gly²³⁹-Pro²⁴⁰-NH₂。(SEQ ID NO:20)

胜肽通常使用固相合成来制备，诸如Merrifield,J.Am.Chem.Soc.,85,2149(1963)所描述的，尽管可以使用普通技术人员已知的其他等效化学合成，包括液相合成或使用重组技术的生物生产。固相合成是从胜肽的C-端开始，通过将NH₂-保护的氨基酸与合适的树脂偶联。起始材料是通过将N^α-9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)氨基酸的COOH-端连接到市售的4,4'-二甲氧基二苯甲基-胺(Mbh)-柄上来制备的，后者与固相树脂连接。使用碳二亚胺/HOBt介导的反应逐步延长所需的胜肽链，进行固相合成和与Fmoc-氨基酸(包括适当保护的三功能氨基酸侧链)的偶联。侧链保护基团的最终裂解和C-端酰胺部分的释放是通过在清除剂存在下用三氟乙酸处理实现的。通过制备型高效液相色谱法(>95％纯度)纯化胜肽，并通过氨基酸分析和质谱法进行表征。下面提供关于本申请胜肽合成的具体细节。

如本文所用，术语“包含”旨在表示组合物和方法包括所列举的元素，但不排除其他元素。当用于定义组合物和方法时，“基本上由...组成”是指排除对组合物或方法具有任何重要意义的其他元素。“由...组成”是指排除超过要求保护的组合物和实质性方法步骤的其他成分的微量元素。由这些过渡术语中的每一个定义的实施例都在本公开的范围内。因此，旨在方法和组合物可以包括额外的步骤和组分(包含)或选择地包括不重要的步骤和组合物(基本上由...组成)或选择地只意在所述的方法步骤或组合物(由...组成)。

如本文所用，“约”是指正负10％。

如本文所用，“可选的”或“可选地”是指随后描述的事件或情况可能会或可能不会发生，并且描述包括所述事件或情况发生的情况和不发生的情况。

如本文所用，术语“个体”、“患者”或“受试者”可以是个体生物、脊椎动物、哺乳动物(例如，牛、犬、猫或马)或人。在优选的实施例中，个体、患者或受试者是人。

如本文所用，短语“治疗有效量”和“治疗水平”分别是指受试者中的胜肽剂量或血浆浓度，其提供特定的药理作用，在需要这种治疗的受试者中投药胜肽时，即，减少、改善或消除肾脏疾病的影响或症状。需要强调的是，药物的治疗有效量或治疗水平并不总是有效治疗本文所述的病况/疾病，即使这样的剂量被那些本领域技术人员认为是治疗有效量。治疗有效量可根据投药途径和剂型、受试者的年龄和体重、和/或受试者的病况，包括治疗开始时淀粉样变性的类型和阶段，以及其他因素而变化。

如本文所用的关于肾脏疾病的术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指减少、改善或消除疾病或病况的一或多种症状或影响。

“治疗反应”是指肾脏疾病的至少一项指标有所改善。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指与医药化合物(例如，嵌合肽)混合的材料，用于如“Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Delivery Systems”,第十版(2014)中所述对患者投药。

缩略语

本文使用以下缩略语：“Ac”–乙酰基,-NH₂–酰胺，AKI–急性肾损伤，AP–急性胰腺炎，PMCA4b–质膜ATPase 4b；RNLS—肾酶。

氨基酸用IUPAC缩略语表示，如下：丙氨酸(Ala；A)、精氨酸(Arg；R)、天冬酰胺(Asn；N)、天冬氨酸(Asp；D)、半胱氨酸(Cys；C)、谷氨酰胺(Gln；Q)、谷氨酸(Glu；E)、甘氨酸(Gly；G)、组氨酸(His；H)、异亮氨酸(Ile；I)、亮氨酸(Leu；L)、赖氨酸(Lys；K)、甲硫氨酸(Met；M)、苯丙氨酸(Phe；F)、脯氨酸(Pro；P)、丝氨酸(Ser；S)、苏氨酸(Thr；T)、色氨酸(Trp；W)、酪氨酸(Tyr；Y)、缬氨酸(Val；V)、正亮氨酸(Nle)和2-氨基丁酸(Aib)。

表述“[X²²⁰]–Ac-肾酶A(205-240)-NH₂”是指一种胜肽，其包含肾酶A在205-240位置的氨基酸和在220位置的氨基酸“X”，酰基在胜肽的NH₂端和氨基在COOH端。因此，表述表示胜肽：Ac-Lys²⁰⁵-Ile²⁰⁶-Asp²⁰⁷-Val²⁰⁸-Pro²⁰⁹-Trp²¹⁰-Ala²¹¹-Gly²¹²-Gln²¹³-Tyr²¹⁴-Ile²¹⁵-Thr²¹⁶-Ser²¹⁷-Asn²¹⁸-Pro²¹⁹-X²²⁰-Ile²²¹-Arg²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-Lys²³⁰-Arg²³¹-Asn²³²-Ile²³³-Glu²³⁴-Ser²³⁵-Ser²³⁶-Glu²³⁷-Ile²³⁸-Gly²³⁹-Pro²⁴⁰-NH₂。

(SEQ ID NO:06)。当X是Ala时，该化合物有时在本文中称为“胜肽10”或“BP-1002”。

本发明其他胜肽的类似表述具有相应含义。

医药配方

适用于本文所述方法的医药组合物可包括一或多种所公开的胜肽和药学上可接受的载体或稀释剂。

组合物可以配制用于静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内、局部、口服、带扣、鼻腔、肺部或吸入、眼部、阴道或直肠投药。在一些实施例中，胜肽被配制用于静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内投药或靶向组织递送，诸如在溶液、悬浮液、乳剂、脂质体配方等中。医药组合物可以配制成速释组合物、缓释组合物、延迟释放组合物等，使用本领域已知的技术。

用于各种剂型的药理学上可接受的载体是本领域已知的。例如，固体制剂的赋形剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂是已知的；用于液体制剂的溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂和舒缓剂是已知的。在一些实施例中，医药组合物包括一或多种附加组分，例如一或多种防腐剂、抗氧化剂、稳定剂和类似物。

此外，所公开的医药组合物可以配制成溶液、微乳液、脂质体或其他适合高药物浓度的有序结构。载体可以是溶剂或分散介质，含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇和类似物)，和其合适的混合物。适当的流动性可以通过例如使用诸如卵磷脂的涂层、通过在分散体的情况下保持所需的粒度以及通过使用表面活性剂来保持。在一些实施例中，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨糖醇或氯化钠。可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶，来延长可注射组合物的吸收。

无菌可注射溶液可通过将所需量的活性化合物与上文列举的一种成分或成分的组合根据需要掺入适当的溶剂中，然后进行无菌微滤来制备。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体中来制备分散体，该载体含有基本分散介质和来自上面列举的那些所需的其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，其产生活性成分的粉末加上来自其先前无菌过滤溶液的任何额外所需成分。

本公开的医药组合物可以与作为肾脏疾病、胰腺疾病或组织损伤的当前护理标准的一部分的其他治疗剂组合投药，特别是那些可以受益于过度免疫炎症调节的治疗剂。例如，作为选择性多巴胺1受体促效剂被发现的非诺多泮已用于急性肾损伤，并可与主题胜肽一起用于治疗。

治疗方法

在本发明中，将至少一种胜肽投药于患有肾脏疾病，包括AKI和AP的患者(例如，人类患者)。在一些实施例中，治疗有效量的胜肽与药学上可接受的载体一起投药。合适的药学上可接受的载体是本领域众所周知的，如下文所讨论的。典型的投药途径是非经肠道投药(例如，静脉内、皮下或肌肉内)，这是医学领域的技术人员所熟知的。当然，其他投药途径也是可能的。投药可以是单剂量或多剂量。胜肽的投药量和投药频率可由医师针对特定患者进行优化。

SARS-CoV-2病毒感染会导致发病率和死亡率，并表现出特定的组织损伤模式。发生在特定组织中的急性炎症损伤可以扩散到全身并导致多重器官衰竭和死亡。例如，重症急性胰腺炎的一个关键特征是多重器官损伤的发展，肺和肾在继发性器官列表中居首位。肾损伤也发生在不太严重的急性胰腺炎发作中，但在这种情况下会迅速逆转。与许多类型的急性损伤有关，这个提议是一个器官的损伤会导致另一个器官的功能障碍。很大一部分COVID-19患者，尤其是重症患者，预计会表现出不同的组织损伤模式。SARS-CoV-2感染会损伤肾脏；它最显着的作用是对近端肾小管，即肾酶(RNLS)合成部位。预计肾脏感染SARS-CoV-2会降低循环RNLS水平，这将使目标组织对病毒和其他因素造成的损伤敏感。我们预计肾脏和胰腺将成为关键的病理靶点；较低的血浆RNLS水平会增加肾损伤并使胰腺对AP敏感。这些器官的损伤将进一步降低血浆RNLS水平并驱动负反馈回路。

临床研究表明，SARS-CoV-2感染经常发生肾损伤和急性胰腺炎。尽管对SARS-CoV-2感染自然史的临床研究才刚刚出现，但不同的损伤模式正在出现。在一项55名患者的有限研究中，17％的患者观察到急性胰腺炎的证据，肾功能不全的发生率为8％。这个住院队容似乎主要患有中度而非重度疾病。另一项研究报告称，COVID-19患者的血肌酐水平与严重程度相对应，据报道，多达1/3的住院患者发生了COVID-19患者的肾损伤。在52名严重SARS-CoV-2感染患者中，17％需要透析。潜在肾脏疾病(一种与血浆RNLS水平降低相关的疾病)的存在大大增加死于SARS-CoV-2的风险。一项病理学研究报告SARS-COV-2对近端肾小管细胞(RNLS产生部位)的损伤。

对SARS-COV-2感染的炎症反应：根据临床发现，SARS-COV-2疾病分为以下几个阶段：I)初始病毒反应II)肺部阶段和III)过度炎症。一项记录轻度和重度SARS-COV-2疾病患者的这些反应时间进程的研究发现，在两周的疗程中，只有重症患者的血清IL6水平显着升高。相关的是，升高的血浆IL6是AP严重程度的标志物，也可能损伤肾脏。IL6和其前驱物IL1正在SARS-COV-2感染的治疗试验中进行检查。另一个观察结果是，被认为对抑制病毒感染很重要的干扰素-γ(IFN-γ)水平在轻度和重度疾病中都被抑制。

肾酶在AKI和AP模型中充当促存活因子。RNLS是一种37kD的分泌蛋白，主要由肾近端肾小管细胞产生，但也在其他组织中产生。其主要细胞靶点是广泛分布的质膜钙输出蛋白，即质膜钙ATPase 4b(PMCA4b)。RNLS在细胞AP模型和其他组织中的保护功能需要激活PMCA4b。通过使用选择性PMCA4b抑制剂和基因缺失模型，我们发现RNLS需要PMCA4b才能具有保护性细胞作用。

本文提供治疗需要此类治疗的患者(例如人类患者)的肾脏疾病、AKI和AP，包括与SARS-CoV-2有关的肾脏疾病的方法，包含以有效治疗疾病的量对该患者投药一或多种所公开的胜肽与药学上可接受的载体。

治疗有效剂量和给药方案

在一些实施例中，治疗有效剂量的胜肽可以在三个月内投药不超过一次、两次、三次或四次。

前述方法的治疗有效剂量和给药方案可以变化，如那些本领域技术人员容易理解的那样。可以调整给药方案以提供最佳的期望反应。例如，在一些实施例中，可以投药单一剂量的胜肽，而在一些实施例中，可以随时间投药几个分开的剂量，或者可以根据情况指示在随后的给药中按比例减少或增加剂量。例如，在一些实施例中，所公开的胜肽可以通过皮下、静脉内或肌肉内注射每周一次或两次投药。在一些实施例中，所公开的胜肽可以通过皮下、静脉内或肌肉内注射每月一次或两次投药。在一些实施例中，所公开的胜肽可以通过皮下、静脉内或肌肉内注射每年一次或两次投药。在一些实施例中，所公开的胜肽可以每周一次、每隔一周一次、每三周一次、每四个星期一次、每月一次、每隔一个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每五个月、每六个月一次、每七个月一次、每八个月一次、每九个月一次、每十个月一次、每十一个月一次、每年两次或每年一次投药，视患者的情况或病况而定。

向患者投药的胜肽的治疗有效剂量(无论是以单剂量还是多剂量投药)应该足以治疗肾脏疾病或AP。这种治疗有效量可以通过评估患者的症状变化来确定。

示例性剂量可根据接受治疗的个体的体型和健康状况以及接受治疗的病况而变化。在一些实施例中，公开的胜肽的有效量是约2,200mg；但是，在某些情况下，剂量可更高或更低。在一些实施例中，治疗有效量可以是50至5000mg、60至约4500mg、70至4000mg、80至3500mg、90至3000mg、100至2500mg、150至2000mg、200至1500mg、250至1000mg，或介于两者之间的任何剂量。例如，在一些实施例中，治疗有效量可以是约50、约60、约70、约80、约90、约100、约150、约200、约250、约300、约350、约400、约450、约500、约550、约600、约650、约700、约750、约800、约850、约900、约950、约1000、约1100、约1200、约1300、约1400、约1500、约1600、约1700、约1800、约1900、约2000、约2100、约2200、约2300、约2400、约2500、约2600、约2700、约2800、约2900、约3000、约3100、约3200、约3300、约3400、约3500、约3600、约3700、约3800、约3900、约4000、约4100、约4200、约4300、约4400、约4500、约4600、约4700、约4800、约4900、约5000或更多mg。

类似地，在一些实施例中，胜肽的有效量是约25mg/kg；但是，在一些实施例中，浓度可更高或更低。在一些实施例中，有效量可以是约1-50mg/kg、约5-40mg/kg、约10-30mg/kg或约15-25mg/kg或介于两者之间的任何值。例如，在一些实施例中，有效量可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、26、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50或更多mg/kg。

所公开的治疗方法也可以根据情况需要与其他已知的治疗方法相结合。例如，肾酶促效剂可能会抵消潜在的“细胞因子风暴”，这种风暴会导致SARS-CoV-2和其他潜在的呼吸道病毒疾病的过度组织损伤和死亡。例如，H1N1流感大流行导致了广泛的肾脏损害。以下实施例反映当前文献中的SARS-CoV-2。

潜在的药物组合

药物/诊断依据评论/参考组合？潜力

备注：“组合？”代表着名疗法与RNLS或RNLS促效剂的可能组合

前述方法的治疗有效剂量和给药方案可以变化，如那些本领域技术人员容易理解的那样。可以调整给药方案以提供最佳的期望反应。例如，在一些实施例中，可以投药单次剂量的胜肽，而在一些实施例中，可以随时间投药几个分开的剂量，或者可以根据情况指示在随后的给药中按比例减少或增加剂量。例如，在一些实施例中，所公开的胜肽可以通过皮下、静脉内或肌肉内注射每周一次或两次投药。在一些实施例中，所公开的胜肽可以通过皮下、静脉内或肌肉内注射每月一次或两次投药。在一些实施例中，所公开的胜肽可以通过皮下、静脉内或肌肉内注射每年一次或两次投药。在一些实施例中，所公开的胜肽可以每周一次、每隔一周一次、每三周一次、每四个星期一次、每月一次、每隔一个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每五个月、每六个月一次、每七个月一次、每八个月一次、每九个月一次、每十个月一次、每十一个月一次、每年两次或每年一次投药，视患者的情况或病况而定。

实施例：胜肽合成

胜肽是在ChemMatrix Rink Amide树脂上合成的，在APEX 396自动合成仪上使用标准Fmoc-合成方案。去除Fmoc-保护组：将树脂在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中溶胀30分钟，在50℃下用20％哌啶-DMF处理8分钟，并用DMF洗涤3次。对于偶联反应：将Fmoc-保护的氨基酸、6-氯-1-羟基苯并三唑(Cl-HOBt)、二异丙基-碳二亚胺(DCI)和N-甲基-2-吡咯烷(NMP)添加到树脂中。将混合物在50℃下涡旋20分钟。之后，树脂用DMF洗涤一次。重复Fmoc-脱保护和偶联步骤的循环，直到组装最后一个氨基酸残基。去除最终的Fmoc-保护基团后，将树脂用20％乙酸酐-NMP处理20分钟，然后用DMF、二氯甲烷(DCM)洗涤，并风干。使用三氟乙酸(TFA)混合物[95％ TFA、2.5％水和2.5％三异丙基硅烷(TIS)]将胜肽从树脂上切割3小时。加入冰冷的无水乙醚沉淀粗胜肽，用无水乙醚洗涤3次，并真空干燥。下面给出具体代表性合成的一些实例。

[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-CONH₂(胜肽10)：如上所述通过固相合成进行合成。通过高效液相色谱(HPLC)确定其纯度>95％，并通过质谱和氨基酸分析证实。

[Ser²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-CONH₂:如上所述通过固相合成进行合成。通过高效液相色谱(HPLC)确定其纯度>95％，并通过质谱和氨基酸分析证实。

[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(214-240)-CONH₂:如上所述通过固相合成进行合成。通过高效液相色谱(HPLC)确定其纯度>95％，并通过质谱和氨基酸分析证实。

Ac-肾酶A(205-240)-CONH₂:如上所述通过固相合成进行合成。通过高效液相色谱(HPLC)确定其纯度>95％，并通过质谱和氨基酸分析证实。

[Ala²²⁰]-Ac肾酶A(205-253)-CONH₂:如上所述通过固相合成进行合成。通过高效液相色谱(HPLC)确定其纯度>95％，并通过质谱和氨基酸分析证实。

肾酶A(205-240)-OH(胜肽81)：如上所述使用2-氯三苯甲基树脂代替Rink-Amide树脂通过固相合成进行合成。通过高效液相色谱(HPLC)确定其纯度>95％，并通过质谱和氨基酸分析证实。

实施例：测试

肾酶促效剂减少实验性AP的损伤：使用RNLS促效剂[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂(胜肽10)的体内研究显示对AP反应有希望和显着的影响(图2)。虽然我们发现对最早的反应没有影响(未显示)，它们与腺泡细胞相关，主要由炎症细胞介导的后期反应(6小时)表明胜肽10倾向于降低活性胰蛋白酶(2A)的水平，显着减少组织嗜中性粒细胞(2B)，并减少由OPA-1和Parkin水平确定的线粒体损伤(2C,D)。这表明胜肽10在减少AP最初1-2小时后的胰腺炎损伤具有更好的作用。这可能代表对AP发病机制的核心炎症通路的抑制；一个可能的目标是炎症激活(图5)。由于大多数AP患者在发病后很久才出现，而发病后期的反应对确定AP严重程度最为重要，因此即使在疾病过程的晚期，胜肽10的有益作用也应该具有治疗价值。在这种情况下，我们已经表明，在雨蛙肽AP开始后2小时和精氨酸AP诱导后12小时给予RNLS促效剂可减少损伤。

RNLS胜肽促效剂减少肾脏模型的损伤：我们发现RNLS胜肽促效剂在肾损伤模型中也具有保护作用。我们已经表明，本发明的胜肽[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂消除了顺铂诱发的培养肾细胞损伤。在图3中，我们显示胜肽减少了培养的近端肾小管细胞系中的损伤。我们还表明，这种RNLS促效剂胜肽可减少临床前小鼠模型中的肾缺血再灌注损伤(图3)。此类RNLS促效剂的数据如下所示。

图4显示RNLS促效剂肾酶A(205-240)-OH(胜肽81)减少顺铂诱发的治疗后的肾损伤。这种毒性的一个关键指标是肾脏质量的减少；这是限定于当给予肾酶A(205-240)-OH时。更显着的是胜肽对顺铂诱发的肾损伤所见的肾功能降低的影响。如在图4的右图中所见，顺铂治疗17天后血浆肌酸酐水平增加4倍；RNLS促效剂将其降低到正常范围。这一初步数据表明，RNLS促效剂可以减少对肾细胞的损伤，并且在体内AKI模型中也有效。

RNLS促效剂[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂降低COVID19诱发的先天免疫反应(图5)：我们发现RNLS促效剂可以具有抗炎作用。放大的炎症反应介导严重的胰腺炎、肾损伤和SARS-CoV-2感染。对于SARS-CoV-2，这些可以通过对病毒抗原的反应引发。为了解决这个问题，我们将健康捐献者的血液暴露于来自Miltenyi Biotec的三种主要SARS-CoV-2衣壳蛋白(SARS-CoV-2蛋白S、M或N)中所含的胜肽混合物，血液样品中浓度为0.19nM。为此，以50μg/ml添加缓冲液模拟对照或RNLS胜肽。培育3小时后，通过ELISA测定样品的细胞因子产生，并通过二因子变异数分析(2way ANOVA)/杜凯氏(Turkey's)比较进行比较。如图5所示，SARS-CoV-2胜肽在不同程度上刺激了细胞因子反应；尽管胜肽S和M对每个反应都给出了稳健的反应(P<0.01)，但胜肽N几乎没有反应(未显示)。SARS-CoV-2胜肽S和M都增加了干扰素-γ的水平；这种反应被RNLS促效剂[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂显着降低。由于干扰素-γ被认为对抑制病毒生长很重要，因此需要避免这种RNLS促效剂效应，并在下文讨论。然而，观察到其他潜在的有益影响。因此，[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂胜肽10抑制SARS-CoV-2胜肽诱导的TNF-α、IL1-β和IL6增加(p<0.01)。这些先天免疫反应与引起肾脏和胰腺损伤有关。它们还被认为是过度炎症状态的核心，这种状态是严重SARS-CoV-2感染的特征，并导致许多人死亡。

RNLS促效剂[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂ 表现出抗炎活性，如卡拉胶诱导的脚掌水肿所确定的。

本试验是评价供试品抗炎功效的快速体内模型。小鼠中的CPE模型定量评估了足底下注射卡拉胶引起的水肿的抑制作用。标准测试时间是6小时，在0、2、4和6小时测量水肿—这里的结果显示测试时间是10小时。卡拉胶诱导的炎症涉及多形核白细胞从循环系统外渗到炎症部位。随后在间质组织内释放髓过氧化物酶和其他细胞因子，导致血浆渗出到炎症部位。增加的脚掌体积通过排水量测量。消炎药可减轻脚掌水肿。图6和7中显示的结果(两种不同格式的相同数据)表明胜肽10，[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂，在模型中具有抗炎作用。

流程：

1.接收(SOP 1910、SOP 1920)和检疫(SOP 560)125只CD-1小鼠(查尔斯河实验室，雄性，5-6周龄)。

2.给动物贴耳标(SOP 810)，称重，并根据平均体重分为9组，每组10只动物和5组，每组7只动物。

3.准备3％卡拉胶溶液：

1)使用前至少提前2周准备。

2)称出600mgλ-卡拉胶到玻璃烧杯中。

3)加入20ml去离子水。

4)用温和的热搅拌直到卡拉胶完全溶解。

5)将溶液冷却至环境温度。

6)储存在4-8℃。

4.在使用前，肾酶胜肽以干粉形式储存在-20℃。

第0天

a.在无菌盐水(载剂)中制备测试材料。

b.在给药当天，将肾酶胜肽溶解。

c.在给药前一天检查卡拉胶溶液的透明度(无可见的污染迹象)。

1)使卡拉胶与环境温度平衡。

d.在实验室笔记本中记录鼠标重量。

e.测量并记录脚掌初始脚掌体积：

1)将装有水的烧杯放在天平上，并归零。

2)将右后肢放在装有水的烧杯中，放在秤上，跗关节的顶部位于水的半月板中心。记录秤上的读数。

3)每次测量后必须擦干脚，因为湿脚会改变读数。

4)重新衡量测量之间的比例以说明水量的减少。

f.如表1所示，在施用卡拉胶之前30分钟，通过皮下(SC，SOP 1610)注射以10mg/kg施用载剂和测试材料。

表1：组治疗

还进行了测试以比较胜肽10与在位置220上没有丙氨酸取代的相应胜肽片段(胜肽81)对炎症的抑制作用。结果显示在图8和9和下表2中，其中数字表示相对于对照组的百分比变化，*表示<<0.05统计显着性。

表2：结果

结果表明胜肽10[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂比胜肽81Ac-肾酶A(205-240)-OH更具活性且活性更长，胜肽10比胜肽81更稳定一致。注意胜肽10的活性更符合标准地塞米松和吲哚美辛。结果来自同一组使用相同方案进行的可比较但不同的实验，但药物有所不同，如图所示。请注意，例如在2小时时，胜肽10和胜肽81均有活性，但只有胜肽10的活性时间更长。

此外，肾酶活性降低与COVID-19死亡率增加相关，如图10所示，而肾酶促效剂BP-1002治疗对COVID-19、其他感染和炎症具有有益作用，如图11-14所示。

本文引用的所有参考文献都通过引用并入本文，就好像它们的全部内容一样。

在本说明书的描述和权利要求中，词语“包含(comprise)”和该词语的变体，例如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”并不旨在排除其他特征、添加剂、组分、整数或步骤，而是除非另有明确说明,这些词语的范围应广义解释，使其具有包容性而非排他性。

尽管本发明的组合物和方法已经通过说明性实施例的方式在本公开中进行了描述，但是应当理解，本发明不限于此并且可以在不背离本领域技术人员已知的情况下进行变化由所附权利要求限定的本发明的教导。

序列表

<110> 贝索制药有限责任公司

<120> 具有肾酶促效剂活性的稳定胜肽

<130> 8712-0001-1

<160> 20

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 342

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Met Ala Gln Val Leu Ile Val Gly Ala Gly Met Thr Gly Ser Leu Cys

1 5 10 15

Ala Ala Leu Leu Arg Arg Gln Thr Ser Gly Pro Leu Tyr Leu Ala Val

20 25 30

Trp Asp Lys Ala Asp Asp Ser Gly Gly Arg Met Thr Thr Ala Cys Ser

35 40 45

Pro His Asn Pro Gln Cys Thr Ala Asp Leu Gly Ala Gln Tyr Ile Thr

50 55 60

Cys Thr Pro His Tyr Ala Lys Lys His Gln Arg Phe Tyr Asp Glu Leu

65 70 75 80

Leu Ala Tyr Gly Val Leu Arg Pro Leu Ser Ser Pro Ile Glu Gly Met

85 90 95

Val Met Lys Glu Gly Asp Cys Asn Phe Val Ala Pro Gln Gly Ile Ser

100 105 110

Ser Ile Ile Lys His Tyr Leu Lys Glu Ser Gly Ala Glu Val Tyr Phe

115 120 125

Arg His Arg Val Thr Gln Ile Asn Leu Arg Asp Asp Lys Trp Glu Val

130 135 140

Ser Lys Gln Thr Gly Ser Pro Glu Gln Phe Asp Leu Ile Val Leu Thr

145 150 155 160

Met Pro Val Pro Glu Ile Leu Gln Leu Gln Gly Asp Ile Thr Thr Leu

165 170 175

Ile Ser Glu Cys Gln Arg Gln Gln Leu Glu Ala Val Ser Tyr Ser Ser

180 185 190

Arg Tyr Ala Leu Gly Leu Phe Tyr Glu Ala Gly Thr Lys Ile Asp Val

195 200 205

Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Cys Ile Arg Phe Val

210 215 220

Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro

225 230 235 240

Ser Leu Val Ile His Thr Thr Val Pro Phe Gly Val Thr Tyr Leu Glu

245 250 255

His Ser Ile Glu Asp Val Gln Glu Leu Val Phe Gln Gln Leu Glu Asn

260 265 270

Ile Leu Pro Gly Leu Pro Gln Pro Ile Ala Thr Lys Cys Gln Lys Trp

275 280 285

Arg His Ser Gln Val Thr Asn Ala Ala Ala Asn Cys Pro Gly Gln Met

290 295 300

Thr Leu His His Lys Pro Phe Leu Ala Cys Gly Gly Asp Gly Phe Thr

305 310 315 320

Gln Ser Asn Phe Asp Gly Cys Ile Thr Ser Ala Leu Cys Val Leu Glu

325 330 335

Ala Leu Lys Asn Tyr Ile

340

<210> 2

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> X是甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、

正亮氨酸、环丙基-甘氨酸、(环丙基甲基)-甘氨酸，或

β-丙氨酸

<400> 2

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Xaa

1 5 10 15

Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Glu Ile Gly Pro

35

<210> 3

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

正亮氨酸、环丙基-甘氨酸、(环丙基甲基)-甘氨酸，或

β-丙氨酸

<400> 3

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Xaa Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro Ser Leu Val Ile His

20 25 30

Thr Thr Val Pro Phe Gly Val Thr

35 40

<210> 4

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

正亮氨酸、环丙基-甘氨酸（环丙基甲基）-甘氨酸，或

β-丙氨酸

<400> 4

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Xaa Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro

20 25

<210> 5

<211> 49

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

正亮氨酸、环丙基-甘氨酸、(环丙基甲基)-甘氨酸，或

β-丙氨酸

<400> 5

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Xaa

1 5 10 15

Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Glu Ile Gly Pro Ser Leu Val Ile His Thr Thr Val Pro Phe Gly Val

35 40 45

Thr

<210> 6

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 6

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Ala

1 5 10 15

Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Glu Ile Gly Pro

35

<210> 7

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 7

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Ala Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro Ser Leu Val Ile His

20 25 30

Thr Thr Val Pro Phe Gly Val Thr

35 40

<210> 8

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 8

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Ala Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro

20 25

<210> 9

<211> 49

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 9

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Ala

1 5 10 15

Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Glu Ile Gly Pro Ser Leu Val Ile His Thr Thr Val Pro Phe Gly Val

35 40 45

Thr

<210> 10

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 10

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Val Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro

20 25

<210> 11

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 11

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Ser Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro Ser Leu Val Ile His

20 25 30

Thr Thr Val Pro Phe Gly Val Thr

35 40

<210> 12

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (25)..(25)

<223> X是D-赖氨酸

<400> 12

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Ala

1 5 10 15

Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Xaa Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Glu Ile Gly Pro

35

<210> 13

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 13

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Ser

1 5 10 15

Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Glu Ile Gly Pro

35

<210> 14

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 14

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Ala Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu

20

<210> 15

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 15

Ala Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser

1 5 10 15

Ser Glu Ile Pro

20

<210> 16

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 16

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Gly

1 5 10 15

Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Glu Ile Gly Pro

35

<210> 17

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<400> 17

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Gly Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro Ser Leu Val Ile His

20 25 30

Thr Thr Val Pro Phe Gly Val Thr

35 40

<210> 18

<211> 49

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> X是环丙基-甘氨酸

<400> 18

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Xaa

1 5 10 15

Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Glu Ile Gly Pro Ser Leu Val Ile His Thr Thr Val Pro Phe Gly Val

35 40 45

Thr

<210> 19

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> X是（环丙基甲基）-甘氨酸

<400> 19

Tyr Ile Thr Ser Asn Pro Xaa Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys

1 5 10 15

Lys Arg Asn Ile Glu Ser Ser Glu Ile Gly Pro

20 25

<210> 20

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于智人的序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 双PEG5000连接到赖氨酸的N端

<400> 20

Lys Ile Asp Val Pro Trp Ala Gly Gln Tyr Ile Thr Ser Asn Pro

1 5 10 15

Ala Ile Arg Phe Val Ser Ile Asp Asn Lys Lys Arg Asn Ile Glu Ser

20 25 30

Ser Glu Ile Gly Pro

35

Claims

1.一种胜肽，包含：

R-X²²⁰-Ile²²¹-Arg²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-R'；

其中Y是任选地在任何一或多个位置被甲基或羟基或两者取代的(CH₂)_n，带有氨基的碳可以只被甲基取代，其中n是2、3、4、5；顺-或反-1,2-环丙二基、顺-或反-1,2-环丁二基、顺-或反-1,3-环丁二基、顺-或反-1,2-环戊二基、顺-或反-1,3-环戊二基、顺-或反-1,2-环己二基、顺-或反-1,3-环己二基，或顺-或反-1,4-环己二基，任选地在任何一或多个位置被甲基或羟基或两者取代，带有氨基的碳可以只被甲基取代并且包括所有结构上可行的非对映异构实体。

2.根据权利要求1所述的胜肽，是：

R-Lys²⁰⁵-Ile²⁰⁶-Asp²⁰⁷-Val²⁰⁸-Pro²⁰⁹-Trp²¹⁰-Ala²¹¹-Gly²¹²-Gln²¹³-Tyr²¹⁴-Ile²¹⁵-Thr²¹⁶-Ser²¹⁷-Asn²¹⁸-Pro²¹⁹-X²²⁰-Ile²²¹-Arg²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-Lys²³⁰-Arg²³¹-Asn²³²-Ile²³³-Glu²³⁴-Ser²³⁵-Ser²³⁶-Glu²³⁷-Ile²³⁸-Gly²³⁹-Pro²⁴⁰-Ser²⁴¹-Leu²⁴²-Val²⁴³-Ile²⁴⁴-His²⁴⁵-Thr²⁴⁶-Thr²⁴⁷-Val²⁴⁸-Pro²⁴⁹-Phe²⁵⁰-Gly²⁵¹-Val²⁵²-Thr²⁵³-R'，其中R选自Ac-Ala-Gly-Thr-、Ac-Gly-Thr-、Ac-Thr-、Ac-、H-、PEG和双-PEG，R'选自-Tyr-Leu-Glu-NH₂、Tyr-Leu-NH₂、-Tyr-NH₂、-NH₂、-OH和PEG，X²²⁰选自Gly、Ser、Ala、Leu、Val、Ile、Nle、β-Ala环丙基-Gyl、(环丙基甲基)-Gly和Aib。

3.根据权利要求2所述的胜肽，其中R是Ac-。

4.根据权利要求3所述的胜肽，其中R'是-NH₂。

5.根据权利要求4所述的胜肽，其中X²²⁰是Ala。

6.根据权利要求1所述的胜肽，是[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-253)-NH₂。

7.根据权利要求1所述的胜肽，是R-Lys²⁰⁵-Ile²⁰⁶-Asp²⁰⁷-Val²⁰⁸-Pro²⁰⁹-Trp²¹⁰-Ala²¹¹-Gly²¹²-Gln²¹³-Tyr²¹⁴-Ile²¹⁵-Thr²¹⁶-Ser²¹⁷-Asn²¹⁸-Pro²¹⁹-X²²⁰-Ile²²¹-Arg²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-Lys²³⁰-Arg²³¹-Asn²³²-Ile²³³-Glu²³⁴-Ser²³⁵-Ser²³⁶-Glu²³⁷-Ile²³⁸-Gly²³⁹-Pro²⁴⁰-R'。

8.根据权利要求7所述的胜肽，其中R代表Ac-Ala-Gly-Thr-、Ac-Gly-Thr-、Ac-Thr–、Ac-，或H-。

9.根据权利要求7所述的胜肽，其中R代表直链的聚(乙)二醇[PEG]或双-聚(乙)二醇[双-PEG]，平均分子量在500和20,000amu之间。

10.根据权利要求7所述的胜肽，其中R'代表-Ser-Leu-Val-NH₂、-Ser-Leu-NH₂、-Ser-NH₂、-NH₂或-OH。

11.根据权利要求7所述的胜肽，其中R'代表直链的聚(乙)二醇[PEG]，平均分子量在500和20,000amu之间。

12.根据权利要求7所述的胜肽，是[双-PEG₅₀₀₀]-Lys²⁰⁵-Ile²⁰⁶-Asp²⁰⁷-Val²⁰⁸-Pro²⁰⁹-Trp²¹⁰-Al a²¹¹-Gly²¹²-Gln²¹³-Tyr²¹⁴-Ile²¹⁵-Thr²¹⁶-Ser²¹⁷-Asn²¹⁸-Pro²¹⁹-Ala²²⁰-Ile²²¹-Arg²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Il e²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-Lys²³⁰-Arg²³¹-Asn²³²-Ile²³³-Glu²³⁴-Ser²³⁵-Ser²³⁶-Glu²³⁷-Ile²³⁸-Gly²³⁹-Pro²⁴⁰-NH₂。

13.根据权利要求7所述的胜肽，其中X²²⁰代表Gly、Ser、Ala、Leu、Val、Ile、Nle、β-Ala、环丙基-Gyl、(环丙基甲基)-Gly或Aib。

14.根据权利要求13所述的胜肽，其中R是Ac-。

15.根据权利要求14所述的胜肽，其中R'是-NH₂。

16.根据权利要求15所述的胜肽，其中X²²⁰是Ala。

17.根据权利要求16所述的胜肽，是[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(205-240)-NH₂。

18.根据权利要求1所述的胜肽，是R-Tyr²¹⁴-Ile²¹⁵-Thr²¹⁶-Ser²¹⁷-Asn²¹⁸-Pro²¹⁹-X²²⁰-Ile²²¹-Ar g²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-Lys²³⁰-Arg²³¹-Asn²³²-Ile²³³-Glu²³⁴-Ser²³⁵-Ser²³⁶-Glu²³⁷-Ile²³⁸-Gly²³⁹-Pro²⁴⁰-R'。

19.根据权利要求18所述的胜肽，其中R代表Ac-Ala-Gly-Thr-或Ac-Gly-Thr-或Ac-Thr-或Ac-或H-。

20.根据权利要求18所述的胜肽，其中R代表直链的聚(乙)二醇[PEG]，平均分子量在500和20,000amu之间。

21.根据权利要求18所述的胜肽，其中R'代表-Ser-Leu-Val-NH₂或-Ser-Leu-NH₂或-Ser-NH₂或-NH₂或-OH。

22.根据权利要求18所述的胜肽，其中R'代表直链的聚(乙)二醇[PEG]，平均分子量在500和20,000amu之间。

23.根据权利要求18所述的胜肽，其中X²²⁰代表Gly、Ser、Ala、Leu、Val、Ile、Nle、β-Ala、环丙基-Gyl、(环丙基甲基)-Gly或Aib。

24.根据权利要求23所述的胜肽，其中R是Ac-。

25.根据权利要求24所述的胜肽，其中R'是-NH₂。

26.根据权利要求25所述的胜肽，其中X²²⁰是Ala。

27.根据权利要求26所述的胜肽，是[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(214-240)-NH₂。

28.根据权利要求1所述的胜肽，是R-Tyr²¹⁴-Ile²¹⁵-Thr²¹⁶-Ser²¹⁷-Asn²¹⁸-Pro²¹⁹-X²²⁰-Ile²²¹-Ar g²²²-Phe²²³-Val²³⁴-Ser²²⁵-Ile²²⁶-Asp²²⁷-Asn²²⁸-Lys²²⁹-Lys²³⁰-Arg²³¹-Asn²³²-Ile²³³-Glu²³⁴-Ser²³⁵-Ser²³⁶-Glu²³⁷-Ile²³⁸-Gly²³⁹-Pro²⁴⁰-Ser²⁴¹-Leu²⁴²-Val²⁴³-Ile²⁴⁴-His²⁴⁵-Thr²⁴⁶-Thr²⁴⁷-Val²⁴⁸-Pro²⁴⁹-Phe²⁵⁰-Gly²⁵¹-Val²⁵²-Thr²⁵³-R'。

29.根据权利要求28所述的胜肽，其中R代表Ac-Ala-Gly-Thr-或Ac-Gly-Thr-或Ac-Thr-或Ac-或H-。

30.根据权利要求28所述的胜肽，其中R代表聚(乙)二醇[PEG]的直链，平均分子量在500和20,000amu之间。

31.根据权利要求28所述的胜肽，其中R'代表-Ser-Leu-Val-NH₂或-Ser-Leu-NH₂或-Ser-NH₂或-NH₂或-OH。

32.根据权利要求28所述的胜肽，其中R'代表聚(乙)二醇[PEG]的直链，平均分子量在500和20,000amu之间。

33.根据权利要求28所述的胜肽，其中X²²⁰代表Gly、Ser、Ala、Leu、Val、Ile、Nle、β-Ala、环丙基-Gyl、(环丙基甲基)-Gly或Aib。

34.根据权利要求33所述的胜肽，其中R是Ac-。

35.根据权利要求34所述的胜肽，其中R'是-NH₂。

36.根据权利要求35所述的胜肽，其中X²²⁰是Ala。

37.根据权利要求36所述的胜肽，是[Ala²²⁰]-Ac-肾酶A(214-253)-NH₂。

38.一种治疗在需要此类治疗的患者的急性肾损伤或急性胰腺炎的方法，包含对该患者投药一治疗有效量的根据权利要求1所述的胜肽。

39.一种医药组合物，包含与一药学上可接受的载体混合的根据权利要求1所述的胜肽。