CN116144598B - 一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基及其应用 - Google Patents

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Abstract

一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基及其应用，所属生物技术领域，培养基成分包括基础培养基、增殖培养基添加剂、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂；增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊。本发明的培养基在培养前期采用添加生长因子和丙谷二肽配合雷帕霉素促进神经干细胞增殖，中期采用胎牛血清白蛋白包合物释放神经元分化促进剂，后期采用胎牛血清白蛋白微囊进一步释放神经胶质细胞分化促进剂，能够实现安全良好的增殖和分化效果。

Description

一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基及其应用。
背景技术
神经干细胞是具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。神经干细胞主要包括神经管上皮细胞、放射状胶质神经元和神经母细胞。其中，神经管上皮细胞的分裂能力最强，存在于胚胎时期，分化能够产生放射状胶质神经元和神经母细胞；放射状胶质神经元能够分化产生新的放射状胶质神经元、神经元前体细胞或胶质细胞；神经母细胞是成年人体中主要存在的神经干细胞，分化能够产生神经前体细胞、神经元和各类神经胶质细胞。神经干细胞对神经系统的损伤和神经退行性疾病都有直接或间接的治疗作用，因此，体外培养扩增和分化神经干细胞具有很大的医疗价值。另外，神经干细胞作为生物医学工程以及体外模型研究中的种子细胞，也需要进行体外增殖或分化培养，以供研究。
目前，培养扩增和分化神经干细胞的数量不高，制备效率低，从神经组织中进行原代分离，会受到组织来源的限制，例如神经管上皮细胞分化是需要获得多个胚胎，用胰蛋白酶消化传代神经干细胞的常规方法培养神经干细胞，采用Neurobasal培养基配合明胶预处理过的培养瓶进行贴壁培养，扩增和分化数量较少，进行多次培养扩增才能获得一定量神经干细胞；而由其它种类成体干细胞分化而来的神经前体细胞，由于成体干细胞本身分化能力有限，难以完全再生功能性神经干细胞，在功能上又存在限制性。因此，增殖和分化神经干细胞的质量和数量是本领域需要解决的问题，因为干细胞的来源途径就是几种，难以再扩展，因此目前提高增殖和分化主要是从方法和培养基方面进行改进。
培养基是作用于神经干细胞的培养过程中所需要的特殊培养环境，以达到神经干细胞的贴壁或增殖效果。目前，干细胞培养分为有饲养层培养和无饲养层培养两大类，培养体系不同，所用到的培养基自然也会有所差别。通常情况下，促进扩增的培养基需要抑制分化，防止分化后不适合长期扩增培养；另外，培养基中牛血清的添加量影响着分化方向，促进神经干细胞向神经胶质细胞分化需要高浓度牛血清，而神经干细胞向神经元分化则需要采用低浓度牛血清，由于培养基环境条件互相制约，因此，几乎没有能够同时达到良好增殖和分化效果的培养基。
发明内容
针对现有神经干细胞体外培养难以同时达到良好的增殖和分化效果的问题，本发明提供一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基及其应用，培养前期采用添加生长因子和丙谷二肽配合雷帕霉素促进神经干细胞增殖，中期采用胎牛血清白蛋白包合物释放神经元分化促进剂，后期采用胎牛血清白蛋白微囊进一步释放神经胶质细胞分化促进剂，完成良好的增殖和分化效果。其具体技术方案如下：
一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，培养基成分包括增殖培养基、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，增殖培养基包括基础培养基和增殖培养基添加剂；增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊。
上述技术方案中，基础培养基为RPMI1640培养基、DMEM/F12培养基、高糖DMEM培养基或α-MEM培养基。
上述技术方案中，培养基成分包括基础培养基12～15g、非必需氨基酸8～10μg、谷氨酰胺200～250mg、表皮生长因子10～20μg、碱性成纤维细胞生长因子5～10μg、维生素C葡萄糖苷20～30mg、维生素E10～20μg、黄体酮3～5μg、叶酸4～6μg、丙谷二肽3～5μg、雷帕霉素30000～35000IU、胎牛血清白蛋白包合物80～150mg、胎牛血清白蛋白微囊1～3g、去离子水1L。
上述技术方案中，胎牛血清白蛋白包合物的制备方法为，将饱和量β-环糊精加入蒸馏水，在40～50℃条件下制成饱和溶液，降温至25℃以下，过滤得到饱和滤液；然后将胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物加入到饱和滤液中，混合均匀，冰水浴冷却1～1.2h，过滤得到滤饼，即胎牛血清白蛋白包合物。
上述技术方案中，胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合质量比为，胎牛血清白蛋白冻干粉:Psora-4＝2:(1～1.5)。
上述技术方案中，胎牛血清白蛋白微囊的制备方法为，向胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物中加入相对于混合物1～1.2质量倍量明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液至润湿，微球混合研磨，得到研磨润湿物，然后再加入相对于研磨润湿物3～5质量倍量的明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液，混匀，去除沉淀物，然后静置成囊，加入1～2体积倍量的去离子水稀释，转至冰水浴搅拌，静置待微囊沉降完全，除去上清液，得到胎牛血清白蛋白微囊。
上述技术方案中，胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合质量比为，胎牛血清白蛋白冻干粉:多聚-L-赖氨酸:梓醇＝5:(1～2):(1～2)。
上述技术方案中，明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液的添加配比为，明胶水溶液:阿拉伯胶水溶液＝2:1，明胶水溶液质量浓度为5％，阿拉伯胶水溶液质量浓度为10％。
上述技术方案中，微球混合研磨为加入直径为0.5～1mm的半导体级石英球研磨混合2～5min。
上述技术方案中，胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min。
上述技术方案中，非必须氨基酸为精氨酸:丝氨酸:脯氨酸＝(1～2):(1～2):(1～2)。
上述技术方案中，培养基应用于神经干细胞的增殖和分化。
本发明的一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基及其应用，与现有技术相比，有益效果为：
一、本发明培养基在培养前期采用添加生长因子和丙谷二肽配合雷帕霉素促进神经干细胞增殖，增殖效果明显，在增殖后的条件下进行分化，同时提高增殖和分化量。
二、本发明培养基在中期采用胎牛血清白蛋白包合物释放神经元分化促进剂，其中，低浓度的胎牛血清白蛋白和Psora-4能够促进神经元分化；此外，本发明培养基采用β-环糊精和胎牛血清白蛋白包合，在加入培养基后，Psora-4能够先进行分散，促进细胞先向神经元分化；胎牛血清白蛋白和β-环糊精结合，使胎牛血清白蛋白释放时间长，能够保证持续的促进神经元分化。
三、本发明培养基在后期采用胎牛血清白蛋白微囊进一步释放神经胶质细胞分化促进剂，完成良好的胶质细胞的分化效果。后期提高胎牛血清白蛋白的浓度能够促进星型胶质细胞分化，梓醇能够促进少突胶质细胞分化；另外，本发明培养基采用胎牛血清白蛋白微囊，延长分化促进剂的释放时间，给中期的神经元分化留有足够分化时间，温和释放能够具有良好的分化过渡；微囊释放，使梓醇能够先进行释放，促进少突胶质细胞分化；胎牛血清白蛋白与明胶和阿拉伯胶结合，释放速度慢，最后进行促进星型胶质细胞分化。
四、本发明培养基设计包合物和微囊方式释放，能够使神经元、少突胶质细胞、星型胶质细胞进行过渡分步分化，减少同时分化的互相影响，分化效果更好；此外，分步分化的同时还能够促进细胞增殖，新增殖的细胞能够参与后续步骤的细胞分化，提高分化率。
五、本发明设计胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min，具有灭杀作用，提高胎牛血清白蛋白安全性，极利于细胞的增殖和分化安全性。
具体实施方式
下面结合具体实施案例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，培养基成分包括增殖培养基、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，增殖培养基包括基础培养基和增殖培养基添加剂；增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊。
本实施例具体的培养基成分为：DMEM/F12基础培养基15g、非必需氨基酸10μg、谷氨酰胺250mg、表皮生长因子20μg、碱性成纤维细胞生长因子10μg、维生素C葡萄糖苷30mg、维生素E20μg、黄体酮5μg、叶酸6μg、丙谷二肽5μg、雷帕霉素35000IU、胎牛血清白蛋白包合物150mg、胎牛血清白蛋白微囊3g、去离子水1L。非必须氨基酸为精氨酸:丝氨酸:脯氨酸＝(1～2):(1～2):(1～2)。
其中，胎牛血清白蛋白包合物的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:Psora-4＝2:1.5的质量配比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物，备用；将饱和量β-环糊精加入蒸馏水，在50℃条件下制成饱和溶液，降温至25℃以下，过滤得到饱和滤液；然后将胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物加入到饱和滤液中，混合均匀，冰水浴冷却1.2h，过滤得到滤饼，即胎牛血清白蛋白包合物。
其中，胎牛血清白蛋白微囊的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射10min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:多聚-L-赖氨酸:梓醇＝5:2:1的质量比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物，备用；向胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物中加入相对于混合物1.2质量倍量明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液至润湿，微球混合研磨，得到研磨润湿物，然后再加入相对于研磨润湿物5质量倍量的明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液，混匀，去除沉淀物，然后静置成囊，加入2体积倍量的去离子水稀释，转至冰水浴搅拌，静置待微囊沉降完全，除去上清液，得到胎牛血清白蛋白微囊。明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液的添加配比为，明胶水溶液:阿拉伯胶水溶液＝2:1，明胶水溶液质量浓度为5％，阿拉伯胶水溶液质量浓度为10％。微球混合研磨为加入直径为1mm的半导体级石英球研磨混合5min。
采用本实施例培养基对神经干细胞进行培养：将ES细胞按照1×104个/孔接种到多孔板上，在增殖培养基中培养至3天后，加入一级分化培养添加剂，培养至4天后加入二级分化培养添加剂。
对比例1：常规DMEM/F12培养基，培养时间相同。
对比例2：不添加一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，其它成分及比例与本实施例培养基相同，培养时间为3天，测定增殖量，作为测定分化率分母。
第6天以MTT比色法确定细胞的增殖率，以对比例1的为基准，判断增殖率的变化，本实施例在对比例1的基础上增值率增加了120％。以免疫荧光定量PCR方法确定细胞的分化率的表达，以对比例2的增殖量为基准，测定分化率；增殖的神经干细胞中，神经元分化率为27％，星型胶质细胞分化率为29％，少突胶质细胞分化率为25％；测定分化率的算法为：分化率＝分化细胞/对比例2增殖量。
实施例2
一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，培养基成分包括增殖培养基、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，增殖培养基包括基础培养基和增殖培养基添加剂；增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊。
本实施例具体的培养基成分为：RPMI1640基础培养基12g、非必需氨基酸8μg、谷氨酰胺200mg、表皮生长因子10μg、碱性成纤维细胞生长因子5μg、维生素C葡萄糖苷20mg、维生素E10μg、黄体酮3μg、叶酸4μg、丙谷二肽3μg、雷帕霉素30000IU、胎牛血清白蛋白包合物80mg、胎牛血清白蛋白微囊1g、去离子水1L。非必须氨基酸为精氨酸:丝氨酸:脯氨酸＝(1～2):(1～2):(1～2)。
其中，胎牛血清白蛋白包合物的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:Psora-4＝2:1的质量配比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物，备用；将饱和量β-环糊精加入蒸馏水，在40℃条件下制成饱和溶液，降温至25℃以下，过滤得到饱和滤液；然后将胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物加入到饱和滤液中，混合均匀，冰水浴冷却1h，过滤得到滤饼，即胎牛血清白蛋白包合物。
其中，胎牛血清白蛋白微囊的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:多聚-L-赖氨酸:梓醇＝5:1:2的质量比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物，备用；向胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物中加入相对于混合物1质量倍量明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液至润湿，微球混合研磨，得到研磨润湿物，然后再加入相对于研磨润湿物3质量倍量的明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液，混匀，去除沉淀物，然后静置成囊，加入1体积倍量的去离子水稀释，转至冰水浴搅拌，静置待微囊沉降完全，除去上清液，得到胎牛血清白蛋白微囊。明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液的添加配比为，明胶水溶液:阿拉伯胶水溶液＝2:1，明胶水溶液质量浓度为5％，阿拉伯胶水溶液质量浓度为10％。微球混合研磨为加入直径为0.5mm的半导体级石英球研磨混合2min。
采用本实施例培养基对神经干细胞进行培养：将神经干细胞按照1×104个/孔接种到多孔板上，在增殖培养基中培养至3天后，加入一级分化培养添加剂，培养至4天后加入二级分化培养添加剂。
对比例1：常规RPMI1640培养基，培养时间相同。
对比例2：不添加一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，其它成分及比例与本实施例培养基相同，培养时间为3天，测定增殖量，作为测定分化率分母。
第6天以MTT比色法确定细胞的增殖率，以对比例1的为基准，判断增殖率的变化，本实施例在对比例1的基础上增值率增加了70％。以免疫荧光定量PCR方法确定细胞的分化率的表达，以对比例2的增殖量为基准，测定分化率；增殖的神经干细胞中，神经元分化率为24％，星型胶质细胞分化率为25％，少突胶质细胞分化率为22％；测定分化率的算法为：分化率＝分化细胞/对比例2增殖量。
实施例3
一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，培养基成分包括增殖培养基、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，增殖培养基包括基础培养基和增殖培养基添加剂；增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊。
本实施例具体的培养基成分为：高糖DMEM基础培养基12g、非必需氨基酸10μg、谷氨酰胺200mg、表皮生长因子20μg、碱性成纤维细胞生长因子5μg、维生素C葡萄糖苷30mg、维生素E10μg、黄体酮5μg、叶酸4μg、丙谷二肽5μg、雷帕霉素30000IU、胎牛血清白蛋白包合物150mg、胎牛血清白蛋白微囊1g、去离子水1L。非必须氨基酸为精氨酸:丝氨酸:脯氨酸＝(1～2):(1～2):(1～2)。
其中，胎牛血清白蛋白包合物的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:Psora-4＝2:1.5的质量配比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物，备用；将饱和量β-环糊精加入蒸馏水，在40℃条件下制成饱和溶液，降温至25℃以下，过滤得到饱和滤液；然后将胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物加入到饱和滤液中，混合均匀，冰水浴冷却1h，过滤得到滤饼，即胎牛血清白蛋白包合物。
其中，胎牛血清白蛋白微囊的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射5min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:多聚-L-赖氨酸:梓醇＝5:1:2的质量比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物，备用；向胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物中加入相对于混合物1质量倍量明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液至润湿，微球混合研磨，得到研磨润湿物，然后再加入相对于研磨润湿物5质量倍量的明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液，混匀，去除沉淀物，然后静置成囊，加入1体积倍量的去离子水稀释，转至冰水浴搅拌，静置待微囊沉降完全，除去上清液，得到胎牛血清白蛋白微囊。明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液的添加配比为，明胶水溶液:阿拉伯胶水溶液＝2:1，明胶水溶液质量浓度为5％，阿拉伯胶水溶液质量浓度为10％。微球混合研磨为加入直径为1mm的半导体级石英球研磨混合2min。
采用本实施例培养基对神经干细胞进行培养：将神经干细胞按照1×104个/孔接种到多孔板上，在增殖培养基中培养至3天后，加入一级分化培养添加剂，培养至4天后加入二级分化培养添加剂。
对比例1：常规高糖DMEM培养基，培养时间相同。
对比例2：不添加一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，其它成分及比例与本实施例培养基相同，培养时间为3天，测定增殖量，作为测定分化率分母。
第6天以MTT比色法确定细胞的增殖率，以对比例1的为基准，判断增殖率的变化，本实施例在对比例1的基础上增值率增加了90％。以免疫荧光定量PCR方法确定细胞的分化率的表达，以对比例2的增殖量为基准，测定分化率；增殖的神经干细胞中，神经元分化率为28％，星型胶质细胞分化率为30％，少突胶质细胞分化率为26％；测定分化率的算法为：分化率＝分化细胞/对比例2增殖量。
实施例4
一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，培养基成分包括增殖培养基、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，增殖培养基包括基础培养基和增殖培养基添加剂；增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊。
本实施例具体的培养基成分为：α-MEM基础培养基15g、非必需氨基酸8μg、谷氨酰胺250mg、表皮生长因子10μg、碱性成纤维细胞生长因子10μg、维生素C葡萄糖苷20mg、维生素E20μg、黄体酮3μg、叶酸6μg、丙谷二肽3μg、雷帕霉素35000IU、胎牛血清白蛋白包合物80mg、胎牛血清白蛋白微囊3g、去离子水1L。非必须氨基酸为精氨酸:丝氨酸:脯氨酸＝(1～2):(1～2):(1～2)。
其中，胎牛血清白蛋白包合物的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:Psora-4＝2:1.5的质量配比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物，备用；将饱和量β-环糊精加入蒸馏水，在40℃条件下制成饱和溶液，降温至25℃以下，过滤得到饱和滤液；然后将胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物加入到饱和滤液中，混合均匀，冰水浴冷却1.2h，过滤得到滤饼，即胎牛血清白蛋白包合物。
其中，胎牛血清白蛋白微囊的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射8min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:多聚-L-赖氨酸:梓醇＝5:2:1的质量比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物，备用；向胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物中加入相对于混合物1.2质量倍量明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液至润湿，微球混合研磨，得到研磨润湿物，然后再加入相对于研磨润湿物3质量倍量的明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液，混匀，去除沉淀物，然后静置成囊，加入2体积倍量的去离子水稀释，转至冰水浴搅拌，静置待微囊沉降完全，除去上清液，得到胎牛血清白蛋白微囊。明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液的添加配比为，明胶水溶液:阿拉伯胶水溶液＝2:1，明胶水溶液质量浓度为5％，阿拉伯胶水溶液质量浓度为10％。微球混合研磨为加入直径为0.5mm的半导体级石英球研磨混合5min。
采用本实施例培养基对神经干细胞进行培养：将神经干细胞按照1×104个/孔接种到多孔板上，在增殖培养基中培养至3天后，加入一级分化培养添加剂，培养至4天后加入二级分化培养添加剂。
对比例1：常规α-MEM基础培养基，培养时间相同。
对比例2：不添加一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，其它成分及比例与本实施例培养基相同，培养时间为3天，测定增殖量，作为测定分化率分母。
第6天以MTT比色法确定细胞的增殖率，以对比例1的为基准，判断增殖率的变化，本实施例在对比例1的基础上增值率增加了110％。以免疫荧光定量PCR方法确定细胞的分化率的表达，以对比例2的增殖量为基准，测定分化率；增殖的神经干细胞中，神经元分化率为26％，星型胶质细胞分化率为28％，少突胶质细胞分化率为25％；测定分化率的算法为：分化率＝分化细胞/对比例2增殖量。
实施例5
一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，培养基成分包括增殖培养基、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，增殖培养基包括基础培养基和增殖培养基添加剂；增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊。
本实施例具体的培养基成分为：DMEM/F12基础培养基13g、非必需氨基酸9μg、谷氨酰胺220mg、表皮生长因子14μg、碱性成纤维细胞生长因子6μg、维生素C葡萄糖苷22mg、维生素E14μg、黄体酮4μg、叶酸5μg、丙谷二肽4μg、雷帕霉素32000IU、胎牛血清白蛋白包合物100mg、胎牛血清白蛋白微囊2g、去离子水1L。非必须氨基酸为精氨酸:丝氨酸:脯氨酸＝(1～2):(1～2):(1～2)。
其中，胎牛血清白蛋白包合物的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:Psora-4＝2:1.2的质量配比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物，备用；将饱和量β-环糊精加入蒸馏水，在42℃条件下制成饱和溶液，降温至25℃以下，过滤得到饱和滤液；然后将胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物加入到饱和滤液中，混合均匀，冰水浴冷却1h，过滤得到滤饼，即胎牛血清白蛋白包合物。
其中，胎牛血清白蛋白微囊的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射4min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:多聚-L-赖氨酸:梓醇＝5:1:1.5的质量比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物，备用；向胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物中加入相对于混合物1质量倍量明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液至润湿，微球混合研磨，得到研磨润湿物，然后再加入相对于研磨润湿物4质量倍量的明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液，混匀，去除沉淀物，然后静置成囊，加入1.5体积倍量的去离子水稀释，转至冰水浴搅拌，静置待微囊沉降完全，除去上清液，得到胎牛血清白蛋白微囊。明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液的添加配比为，明胶水溶液:阿拉伯胶水溶液＝2:1，明胶水溶液质量浓度为5％，阿拉伯胶水溶液质量浓度为10％。微球混合研磨为加入直径为0.8mm的半导体级石英球研磨混合3min。
采用本实施例培养基对神经干细胞进行培养：将ES细胞按照1×104个/孔接种到多孔板上，在增殖培养基中培养至3天后，加入一级分化培养添加剂，培养至4天后加入二级分化培养添加剂。
对比例1：常规DMEM/F12培养基，培养时间相同。
对比例2：不添加一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，其它成分及比例与本实施例培养基相同，培养时间为3天，测定增殖量，作为测定分化率分母。
第6天以MTT比色法确定细胞的增殖率，以对比例1的为基准，判断增殖率的变化，本实施例在对比例1的基础上增值率增加了76％。以免疫荧光定量PCR方法确定细胞的分化率的表达，以对比例2的增殖量为基准，测定分化率；增殖的神经干细胞中，神经元分化率为28％，星型胶质细胞分化率为26％，少突胶质细胞分化率为20％；测定分化率的算法为：分化率＝分化细胞/对比例2增殖量。
实施例6
一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，培养基成分包括增殖培养基、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，增殖培养基包括基础培养基和增殖培养基添加剂；增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊。
本实施例具体的培养基成分为：DMEM/F12基础培养基14g、非必需氨基酸9μg、谷氨酰胺240mg、表皮生长因子18μg、碱性成纤维细胞生长因子8μg、维生素C葡萄糖苷25mg、维生素E15μg、黄体酮4μg、叶酸4μg、丙谷二肽4μg、雷帕霉素33000IU、胎牛血清白蛋白包合物120mg、胎牛血清白蛋白微囊2g、去离子水1L。非必须氨基酸为精氨酸:丝氨酸:脯氨酸＝(1～2):(1～2):(1～2)。
其中，胎牛血清白蛋白包合物的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:Psora-4＝2:1.5的质量配比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物，备用；将饱和量β-环糊精加入蒸馏水，在45℃条件下制成饱和溶液，降温至25℃以下，过滤得到饱和滤液；然后将胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物加入到饱和滤液中，混合均匀，冰水浴冷却1h，过滤得到滤饼，即胎牛血清白蛋白包合物。
其中，胎牛血清白蛋白微囊的制备方法为：胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射8min，按胎牛血清白蛋白冻干粉:多聚-L-赖氨酸:梓醇＝5:1.5:1的质量比，进行混合，制备胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物，备用；向胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物中加入相对于混合物1质量倍量明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液至润湿，微球混合研磨，得到研磨润湿物，然后再加入相对于研磨润湿物4质量倍量的明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液，混匀，去除沉淀物，然后静置成囊，加入1.5体积倍量的去离子水稀释，转至冰水浴搅拌，静置待微囊沉降完全，除去上清液，得到胎牛血清白蛋白微囊。明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液的添加配比为，明胶水溶液:阿拉伯胶水溶液＝2:1，明胶水溶液质量浓度为5％，阿拉伯胶水溶液质量浓度为10％。微球混合研磨为加入直径为0.6mm的半导体级石英球研磨混合4min。
采用本实施例培养基对神经干细胞进行培养：将ES细胞按照1×104个/孔接种到多孔板上，在增殖培养基中培养至3天后，加入一级分化培养添加剂，培养至4天后加入二级分化培养添加剂。
对比例1：常规DMEM/F12培养基，培养时间相同。
对比例2：不添加一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，其它成分及比例与本实施例培养基相同，培养时间为3天，测定增殖量，作为测定分化率分母。
第6天以MTT比色法确定细胞的增殖率，以对比例1的为基准，判断增殖率的变化，本实施例在对比例1的基础上增值率增加了82％。以免疫荧光定量PCR方法确定细胞的分化率的表达，以对比例2的增殖量为基准，测定分化率；增殖的神经干细胞中，神经元分化率为25％，星型胶质细胞分化率为32％，少突胶质细胞分化率为34％；测定分化率的算法为：分化率＝分化细胞/对比例2增殖量。

Claims (8)

1.一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，其特征在于，培养基成分包括增殖培养基、一级分化培养添加剂和二级分化培养添加剂，所述增殖培养基包括基础培养基和增殖培养基添加剂；所述增殖培养基添加剂包括非必需氨基酸、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维生素C葡萄糖苷、维生素E、黄体酮、叶酸、丙谷二肽和雷帕霉素；所述一级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白包合物；所述二级分化培养添加剂为胎牛血清白蛋白微囊；
所述胎牛血清白蛋白包合物的制备方法为，将饱和量β-环糊精加入蒸馏水，在40～50℃条件下制成饱和溶液，降温至25℃以下，过滤得到饱和滤液；然后将胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合物加入到饱和滤液中，混合均匀，冰水浴冷却1～1.2h，过滤得到滤饼，即胎牛血清白蛋白包合物；
所述胎牛血清白蛋白微囊的制备方法为，向胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合物中加入相对于混合物1～1.2质量倍量明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液至润湿，微球混合研磨，得到研磨润湿物，然后再加入相对于研磨润湿物3～5质量倍量的明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液，混匀，去除沉淀物，然后静置成囊，加入1～2体积倍量的去离子水稀释，转至冰水浴搅拌，静置待微囊沉降完全，除去上清液，得到胎牛血清白蛋白微囊。
2.根据权利要求1所述的一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，其特征在于，所述基础培养基为RPMI1640培养基、DMEM/F12培养基、高糖DMEM培养基或α-MEM培养基。
3.根据权利要求1或2所述的一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，其特征在于，所述培养基成分包括基础培养基12～15g、非必需氨基酸8～10μg、谷氨酰胺200～250mg、表皮生长因子10～20μg、碱性成纤维细胞生长因子5～10μg、维生素C葡萄糖苷20～30mg、维生素E10～20μg、黄体酮3～5μg、叶酸4～6μg、丙谷二肽3～5μg、雷帕霉素30000～35000IU、胎牛血清白蛋白包合物80～150mg、胎牛血清白蛋白微囊1～3g、去离子水1L。
4.根据权利要求3所述的一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，其特征在于，所述胎牛血清白蛋白冻干粉和Psora-4的混合质量比为，胎牛血清白蛋白冻干粉:Psora-4＝2:(1～1.5)。
5.根据权利要求4所述的一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，其特征在于，所述胎牛血清白蛋白冻干粉、多聚-L-赖氨酸和梓醇的混合质量比为，胎牛血清白蛋白冻干粉:多聚-L-赖氨酸:梓醇＝5:(1～2):
(1～2)；所述明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液的添加配比为，明胶水溶液:阿拉伯胶水溶液＝2:1，所述明胶水溶液质量浓度为5％，所述阿拉伯胶水溶液质量浓度为10％；所述微球混合研磨为加入直径为0.5～1mm的半导体级石英球研磨混合2～5min。
6.根据权利要求5所述的一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，其特征在于，所述胎牛血清白蛋白冻干粉采用γ射线照射3～10min。
7.根据权利要求1所述的一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基，其特征在于，所述非必须氨基酸为精氨酸:丝氨酸:脯氨酸＝(1～2):
(1～2):(1～2)。
8.根据权利要求1所述的一种促进神经干细胞增殖和分化的培养基的应用，其特征在于，所述培养基应用于神经干细胞的增殖和分化。
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Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007020611A2 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 ECBIO - Investigação e Desenvolvimento em Biotecnologia, S.A. Adult human neural stem/progenitor cells from the olfactory epithelium and olfactory lamina propria, isolation method, proliferation and differentiation in serum free culture medium and utilization for transplantation
CN102283818A (zh) * 2010-06-20 2011-12-21 段明华 多肽和蛋白质类药物口服肠溶胶囊及其制备方法
WO2013059582A2 (en) * 2011-10-20 2013-04-25 Nupotential, Inc. Small molecule inhibitors of histone deacteylases
CN103656613A (zh) * 2012-09-20 2014-03-26 天津嘉宏科技有限公司 一种新型多肽药物制剂的制备方法
CN104762263A (zh) * 2015-03-16 2015-07-08 中国科学院广州生物医药与健康研究院 神经干细胞分化培养基及应用
CN105062972A (zh) * 2015-07-28 2015-11-18 浙江奥瑞健生物技术有限公司 一种神经干细胞培养基及利用其进行的人神经干细胞体外长期培养扩增方法
CN107201339A (zh) * 2017-06-28 2017-09-26 温州市鹿城区中津先进科技研究院 神经干细胞培养基
KR20180054439A (ko) * 2016-11-15 2018-05-24 광주과학기술원 세포 3d 배양 방법
CN109517794A (zh) * 2018-12-10 2019-03-26 济宁医学院 Gd:Fe3O4@RA纳米粒子诱导神经干细胞定向分化为神经元细胞的方法
CN109536448A (zh) * 2018-12-10 2019-03-29 济宁医学院 一种多功能负载维甲酸的钆参杂四氧化三铁复合纳米粒子
AU2019100414A4 (en) * 2019-04-16 2019-05-30 Jilin University Deer Placenta Active Protein as well as Its Extraction Method and Application
CN110484492A (zh) * 2019-08-27 2019-11-22 广州准优生物科技有限公司 内皮祖细胞培养制剂、培养液及内皮祖细胞分离培养方法
CN110684735A (zh) * 2019-11-13 2020-01-14 安徽科门生物科技有限公司 一种快速增殖神经干细胞培养基
CN112779220A (zh) * 2021-04-01 2021-05-11 河南循远生物科技有限公司 一种用于神经干细胞扩增的培养基
CN114457016A (zh) * 2022-03-10 2022-05-10 华科星河(北京)生物科技有限公司 一种用于培养神经干细胞的无血清培养基及其用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120164114A1 (en) * 2010-12-17 2012-06-28 Abbot Stewart Treatment of immune-related diseases and disorders using amnion derived adherent cells

Patent Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007020611A2 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 ECBIO - Investigação e Desenvolvimento em Biotecnologia, S.A. Adult human neural stem/progenitor cells from the olfactory epithelium and olfactory lamina propria, isolation method, proliferation and differentiation in serum free culture medium and utilization for transplantation
CN102283818A (zh) * 2010-06-20 2011-12-21 段明华 多肽和蛋白质类药物口服肠溶胶囊及其制备方法
WO2013059582A2 (en) * 2011-10-20 2013-04-25 Nupotential, Inc. Small molecule inhibitors of histone deacteylases
CN103656613A (zh) * 2012-09-20 2014-03-26 天津嘉宏科技有限公司 一种新型多肽药物制剂的制备方法
CN104762263A (zh) * 2015-03-16 2015-07-08 中国科学院广州生物医药与健康研究院 神经干细胞分化培养基及应用
CN105062972A (zh) * 2015-07-28 2015-11-18 浙江奥瑞健生物技术有限公司 一种神经干细胞培养基及利用其进行的人神经干细胞体外长期培养扩增方法
KR20180054439A (ko) * 2016-11-15 2018-05-24 광주과학기술원 세포 3d 배양 방법
CN107201339A (zh) * 2017-06-28 2017-09-26 温州市鹿城区中津先进科技研究院 神经干细胞培养基
CN109517794A (zh) * 2018-12-10 2019-03-26 济宁医学院 Gd:Fe3O4@RA纳米粒子诱导神经干细胞定向分化为神经元细胞的方法
CN109536448A (zh) * 2018-12-10 2019-03-29 济宁医学院 一种多功能负载维甲酸的钆参杂四氧化三铁复合纳米粒子
AU2019100414A4 (en) * 2019-04-16 2019-05-30 Jilin University Deer Placenta Active Protein as well as Its Extraction Method and Application
CN110484492A (zh) * 2019-08-27 2019-11-22 广州准优生物科技有限公司 内皮祖细胞培养制剂、培养液及内皮祖细胞分离培养方法
CN110684735A (zh) * 2019-11-13 2020-01-14 安徽科门生物科技有限公司 一种快速增殖神经干细胞培养基
CN112779220A (zh) * 2021-04-01 2021-05-11 河南循远生物科技有限公司 一种用于神经干细胞扩增的培养基
CN114457016A (zh) * 2022-03-10 2022-05-10 华科星河(北京)生物科技有限公司 一种用于培养神经干细胞的无血清培养基及其用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
血清预培养促进神经干细胞的增殖;历俊华等;中国康复理论与实践(第5期);第339-340页 *

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