CN116115696A - 提高机体冷习服能力的中药组合物及其制备方法、用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药技术领域，具体公开一种提高机体冷习服能力的中药组合物及其制备方法、用途，该中药组合物按重量份数计由以下原料组成：元胡20～40份、乳香10～20份、当归10～20份、龙骨40～60份、血竭15～25份、冰片10～30份。本发明提供的提高机体冷习服能力的中药组合物，能够明显提高机体冷习服能力，其与鹿茸多肽、葛根多肽配合使用，提高机体冷习服能力的效果更加显著。

Description

提高机体冷习服能力的中药组合物及其制备方法、用途
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体公开一种提高机体冷习服能力的中药组合物及其制备方法、用途。
背景技术
极寒环境超越人体生理耐受极限时，人体作业能力降低，导致发生不同程度的冻伤，严重时危机生命。冷应激是恒温动物对寒冷环境所产生的应答反应的综合，其主要特征是垂体—肾上腺皮质轴功能增强或机体稳态调节的易化作用的加强，过强和长期的应激会给机体带来严重的损害。目前没有提高机体冷习服能力并避免或延缓冻伤发生的药物。
中药中含有与提高机体抗应激原能力有关的有效成分，如皂甙、多糖、类甾体物质等，因中药适应证广、安全性高成为药物研发的热点，具有广阔的开发前景。因此，本发明意在提供一种安全性高、能够有效提高机体冷习服能力的中药组合物。
发明内容
本发明提供一种提高机体冷习服能力的中药组合物，能够明显提高机体冷习服能力。
本发明第一方面，提供一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其按重量份数计由以下原料组成：元胡20～40份、乳香10～20份、当归10～20份、龙骨40～60份、血竭15～25份、冰片10～30份。
优选地，其按重量份数计由以下原料组成：元胡30份、乳香15份、当归15份、龙骨50份、血竭20份、冰片20份。
本发明第二方面，提供一种所述中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
按重量份数称取元胡、乳香、当归、龙骨、血竭、冰片；
将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50～70％乙醇溶液进行提取，收集提取液，浓缩，加入冰片细粉，混匀，即得所述中药组合物。
优选地，所述提取是加入相当于药材混合物6～8倍量的质量分数50～70％乙醇溶液，回流提取2～3次，每次30～45min。
本发明第三方面，提供一种所述中药组合物在制备提高机体冷习服能力的产品中的用途。
本发明第四方面，提供一种提高机体冷习服能力的组合物，其是由所述中药组合物的提取液以及葛根多肽、鹿茸多肽按用量比为10mL：1～2g：1～2g混合制成；
中药组合物的提取液是按照以下步骤制备得到：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50～70％乙醇溶液进行提取，收集提取液，浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得。
优选地，所述鹿茸多肽是按照以下方法制备得到：向鹿茸中加入pH为4.5～5.0的缓冲液，浸提12～24h，所得提取液中加入乙醇溶液并使得到的混合物中乙醇质量浓度为60％～70％，浸提12～24h，离心，取下层沉淀物，冻干，即得所述鹿茸多肽。
优选地，所述葛根多肽是按照以下方法制备得到：向葛根中加入pH为8.5～9.5的缓冲液，40～60℃提取2～4h后，离心，所得上清液调PH至2.5～3.5，离心，取下层沉淀物，冻干，即得葛根多肽。
优选地，所述离心是在10000rpm下离心20min。
本发明第五方面，提供一种所述组合物在制备提高机体冷习服能力的产品中的用途。
与现有技术相比较，本发明的有益效果为：
1、当人体处于寒冷环境中，低温会使肢端散热加剧，体温调节中枢通过收缩微小血管减少血流量从而迅速降低肢端温度，以达到减少散热、维持中心体温的目的，但可能使得肢端皮肤和组织因微循环过度收缩而发生微循环障碍和凝血系统功能异常。中医辨证认为寒冷损伤的机理是素体虚弱、阳气不达，遇严寒侵袭导致气血运行不畅、经络阻隔。本发明提供的组合物中元胡、乳香能够行气活血、散瘀定痛，当归补血活血，龙骨平肝潜阳、收敛固涩，如此配伍可具平衡阴阳、调和营卫的效果，其中龙骨量多倍是为了发挥其养血柔肝的功效；佐以血竭可协同活血化瘀，并可敛阴和营；加入冰片取其通经活络、助行药力之功。
2、为了克服中药组合物起效慢的不足，将其与葛根多肽和鹿茸多肽组合使用，葛根多肽和鹿茸多肽可直接经胃肠吸收进入血液循环，分别发挥改善微循环、增加产热的作用，与中药组合物协同发挥即时和长期提高机体冷习服能力、预防寒冷损伤的作用。
3、本发明提供的组合物中元胡含多种异喹啉类生物碱，有活血、散瘀、改善微循环的功效，其能够抑制血中前列腺素F2α(PGF2α)、前列腺素E2(PGE2)、血栓素B2(TXB2)等炎性因子水平，从而改善微循环；
乳香含有三萜、二萜、单萜等萜类物质，具有行气活血、散瘀定痛等功效。促炎因子IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α及NO在冻伤导致的肢端血管血栓形成、微循环障碍的发生发展过程中有着重要的作用，在体内外不同模型中，乳香提取物均表现出较强的抑制以上促炎因子产生的作用；
血竭具有活血定痛、化瘀止血等功效。当冻伤发生时，肢端血管内血小板聚集增加，微循环障碍，血竭含有龙血素等活性成分，龙血素能有效阻止尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)/纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)复合物的形成，达到抗微循环内血栓形成的作用；
冰片在中药配伍中可协助其他药物更好地发挥药效，有着“独行则势弱，佐使则有功”的作用。冰片能够显著提高配伍药物促血管生成的活性，其机制与调控血管内皮生长因子(VEGF)相关的信号通路有关，可诱导血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)表达量显著提高，提高蛋白激酶B(PKB)、磷脂酶Cγ(PLCγ)的磷酸化比例，促进血管内皮细胞分裂，从而达到修复受损血管的作用；
葛根多肽具有心肌保护、扩张冠状血管、改善微循环、抑制动脉硬化、抗心律失常、改善脑循环等作用。葛根多肽通过影响AMPK/哺乳动物类靶蛋白(mTOR)信号通路、蛋白激酶C信号通路改善局部轻微脑循环障碍、促进血液循环，还可通过影响细胞膜对钠、钾、钙等离子的通透性来改善由低温导致的组织损伤；
以上五种药物分别从抗血栓形成、抗促炎因子、抗炎性反应等微循环障碍病理生理反应中的不同环节发挥作用，协同发挥改善寒冷损伤导致肢端血管微循环障碍的作用；
当归具有补血活血，增强代谢等功效。当归含有挥发油类、有机酸类、多糖类等成分，可诱导AKT、mTOR、p70S6K等关键代谢通路激活，进一步激活下游信号分子，促进机体产热。代谢组学研究发现，当归水煎液可改善小鼠血浆、脾组织、肝组织中的能量代谢障碍、氨基酸代谢和脂肪酸代谢障碍，影响小鼠谷胱甘肽、磷酸戊糖、甘氨酸、丝氨酸与苏氨酸代谢过程；
龙骨具有镇惊安神，平肝潜阳，收敛固涩等功效。龙骨中含有多种微量元素，参与胰岛素的合成、贮存和释放，提高胰岛素的稳定性及其与受体的结合，刺激细胞膜上葡萄糖载体的转运过程，起到调节糖代谢、增强机体产能的作用。龙骨还被证明能够调节下丘脑-垂体-肾上腺轴，影响糖代谢、脂肪代谢，促进新陈代谢，增加产热；
鹿茸多肽具有增强机体代谢、抗炎、抗氧化等药理作用。鹿茸多肽可增加机体肝糖原和肌糖原的储备，调节机体的代谢状态，提高机体抗寒能力。鹿茸多肽具有明显的抗氧化及抗应激作用，减轻过度冷应激导致的组织损伤。鹿茸多肽还具有使外周血管扩张、改善微循环的作用，从多个层面改善机体的冷应激反应，促进机体冷习服；
以上三种药物分别调控糖代谢、蛋白质代谢、脂肪代谢等三大产热物质代谢，其调控机制与影响神经内分泌、细胞内信号转导通路、线粒体产热和细胞膜受体转运等有关，从冷应激产热代谢障碍的不同层面加以干预，能够协同改善寒冷损伤导致的产热障碍。
抗寒实验证明，以上原料组合具有协同效应，可明显提高机体冷习服能力，预防寒冷损伤的发生。
4、中药复合多肽的药物组合从增加机体产热和避免肢端血管过度收缩两方面增强机体冷习服能力，大鼠抗寒实验证实，该组合物具有协同抗寒效应，可明显提高机体冷习服能力，预防寒冷损伤的发生，较单一药物效果更为明显。
附图说明
图1是中药多肽复合制剂改善冷暴露大鼠尾部皮肤温度；与冷暴露组相比，**P＜0.01，***P＜0.001；与冷暴露+多肽组相比，#P＜0.05；
图2是中药多肽复合制剂改善冷暴露大鼠肛温；与冷暴露组相比，*P＜0.05；与冷暴露组相比，**P＜0.01，***P＜0.001；与冷暴露+多肽组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；
图3是中药多肽复合制剂提高大鼠冷水游泳时间；与冷暴露组相比，**P＜0.01，***P＜0.001；与冷暴露+多肽组相比，###P＜0.001；与冷暴露+中药组相比，
Figure BDA0004166602380000061
P＜0.001；
图4是中药多肽复合制剂提升大鼠冷水游泳后血皮质酮浓度；与冷暴露组相比，***P＜0.001；与冷暴露+多肽组相比，###P＜0.001；
图5是中药多肽复合制剂改善大鼠冷水游泳后血胰高血糖素浓度；与冷暴露组相比，**P＜0.01，***P＜0.001；与多肽组相比，##P＜0.01；
图6是中药多肽复合制剂改善大鼠冷水游泳后血游离甲状腺素浓度；与冷暴露组相比，***P＜0.001；与冷暴露+多肽组相比，###P＜0.001；与冷暴露+中药组相比，
Figure BDA0004166602380000062
P＜0.05。
具体实施方式
下面通过实施例进一步描述本发明，但是本发明不受这些实施例的限制。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
本发明所提及的细粉是指能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95％的粉末。
实施例1
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其是由以下原料组成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g。
实施例2
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其是由以下原料组成：元胡20g、乳香10g、当归10g、龙骨40g、血竭15g、冰片10g。
实施例3
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其是由以下原料组成：元胡40g、乳香40g、当归40g、龙骨60g、血竭25g、冰片30g。
实施例4
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其是由以下原料组成：元胡30g、乳香15g、当归40g、龙骨60g、血竭15g、冰片30g。
实施例5
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其是由以下原料组成：元胡25g、乳香18g、当归15g、龙骨50g、血竭18g、冰片25g。
实施例6
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其是由以下原料组成：元胡35g、乳香18g、当归12g、龙骨48g、血竭18g、冰片25g。
实施例7
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其是由以下原料组成：元胡28g、乳香15g、当归18g、龙骨55g、血竭20g、冰片28g。
上述实施例1～7提供的中药组合物均是按照以下方法制备得到：
称取元胡、乳香、当归、龙骨、血竭、冰片；
将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后加入相当于其混合物总量6倍量的质量分数50％乙醇溶液，浸泡48h，回流提取2次(每次溶剂加入量均为提取物总重的6倍量)，每次45min，合并2次提取液，过滤，将滤液合并浓缩，加入冰片细粉，混匀，即得中药组合物。
实施例8
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其与实施例1的不同在于制备方法不同，具体为：
称取元胡、乳香、当归、龙骨、血竭、冰片；
将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后加入相当于其混合物总量8倍量的质量分数50％乙醇溶液，浸泡48h，回流提取3次(每次溶剂加入量均为提取物总重的8倍量)，每次30min，合并3次提取液，过滤，将滤液合并浓缩，加入冰片细粉，混匀，即得中药组合物。
实施例9
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其与实施例1的不同在于制备方法不同，具体为：
称取元胡、乳香、当归、龙骨、血竭、冰片；
将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后加入相当于其混合物总量8倍量的质量分数70％乙醇溶液，浸泡48h，回流提取3次(每次溶剂加入量均为提取物总重的8倍量)，每次30min，合并3次提取液，过滤，将滤液合并浓缩，加入冰片细粉，混匀，即得中药组合物。
实施例10
一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其与实施例1的不同在于制备方法不同，具体为：
称取元胡、乳香、当归、龙骨、血竭、冰片；
将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后加入相当于其混合物总量8倍量的质量分数60％乙醇溶液，浸泡48h，回流提取3次(每次溶剂加入量均为提取物总重的8倍量)，每次45min，合并3次提取液，过滤，将滤液合并浓缩，加入冰片细粉，混匀，即得中药组合物。
实施例11
一种提高机体冷习服能力的组合物，其由100mL中药提取液、20g鹿茸多肽提取物及10g葛根多肽提取物混合制成；
中药提取液由以下原料制成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g；
中药提取液的制备方法包括以下步骤：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50％乙醇溶液回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得；
鹿茸多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将人工养殖的梅花鹿茸4℃下切成1cm3小块后，与pH为4.5的HAc-NaAc缓冲液混合后研磨成匀浆，置于4℃保存12h，10000rpm下离心20min，所得上清液加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇溶液的终浓度为65％，4℃保存12h，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干，即得鹿茸多肽提取物；
葛根多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将葛根粉末与Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，50℃水浴提取2h后，10000rpm下离心20min，所得上清液抽滤后调PH＝3.0，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干即得葛根多肽提取物。
实施例12
一种提高机体冷习服能力的组合物，其由100mL中药提取液、10g鹿茸多肽提取物及10g葛根多肽提取物混合制成；
中药提取液由以下原料制成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g；
中药提取液的制备方法包括以下步骤：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50％乙醇溶液回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得；
鹿茸多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将人工养殖的梅花鹿茸4℃下切成1cm3小块后，与pH为4.74的HAc-NaAc缓冲液混合后研磨成匀浆，置于4℃保存12h，10000rpm下离心20min，所得上清液加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇溶液的终浓度为65％，4℃保存12h，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干，即得鹿茸多肽提取物；
葛根多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将葛根粉末与Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，50℃水浴提取2h后，10000rpm下离心20min，所得上清液抽滤后调PH＝3.0，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干即得葛根多肽提取物。
实施例13
一种提高机体冷习服能力的组合物，其由100mL中药提取液、20g鹿茸多肽提取物及20g葛根多肽提取物混合制成；
中药提取液由以下原料制成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g；
中药提取液的制备方法包括以下步骤：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50％乙醇溶液回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得；
鹿茸多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将人工养殖的梅花鹿茸4℃下切成1cm3小块后，与pH为4.74的HAc-NaAc缓冲液混合后研磨成匀浆，置于4℃保存12h，10000rpm下离心20min，所得上清液加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇溶液的终浓度为65％，4℃保存12h，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干，即得鹿茸多肽提取物；
葛根多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将葛根粉末与Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，50℃水浴提取2h后，10000rpm下离心20min，所得上清液抽滤后调PH＝3.0，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干即得葛根多肽提取物。
实施例14
一种提高机体冷习服能力的组合物，其由100mL中药提取液、10g鹿茸多肽提取物及10g葛根多肽提取物混合制成；
中药提取液由以下原料制成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g；
中药提取液的制备方法包括以下步骤：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50％乙醇溶液回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得；
鹿茸多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将人工养殖的梅花鹿茸4℃下切成1cm3小块后，与pH为4.74的HAc-NaAc缓冲液混合后研磨成匀浆，置于4℃保存12h，10000rpm下离心20min，所得上清液加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇溶液的终浓度为65％，4℃保存12h，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干，即得鹿茸多肽提取物；
葛根多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将葛根粉末与Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，50℃水浴提取2h后，10000rpm下离心20min，所得上清液抽滤后调PH＝3.0，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干即得葛根多肽提取物。
实施例15
一种提高机体冷习服能力的组合物，其由100mL中药提取液、10g鹿茸多肽提取物及10g葛根多肽提取物混合制成；
中药提取液由以下原料制成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g；
中药提取液的制备方法包括以下步骤：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50％乙醇溶液回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得；
鹿茸多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将人工养殖的梅花鹿茸4℃下切成1cm3小块后，与pH为5.0的HAc-NaAc缓冲液混合后研磨成匀浆，置于4℃保存24h，10000rpm下离心20min，所得上清液加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇溶液的终浓度为65％，4℃保存12h，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干，即得鹿茸多肽提取物；
葛根多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将葛根粉末与Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，50℃水浴提取2h后，10000rpm下离心20min，所得上清液抽滤后调PH＝3.0，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干即得葛根多肽提取物。
实施例16
一种提高机体冷习服能力的组合物，其由100mL中药提取液、10g鹿茸多肽提取物及10g葛根多肽提取物混合制成；
中药提取液由以下原料制成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g；
中药提取液的制备方法包括以下步骤：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50％乙醇溶液回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得；
鹿茸多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将人工养殖的梅花鹿茸4℃下切成1cm3小块后，与pH为4.74的HAc-NaAc缓冲液混合后研磨成匀浆，置于4℃保存12h，10000rpm下离心20min，所得上清液加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇溶液的终浓度为70％，4℃保存24h，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干，即得鹿茸多肽提取物；
葛根多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将葛根粉末与Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，50℃水浴提取2h后，10000rpm下离心20min，所得上清液抽滤后调PH＝3.0，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干即得葛根多肽提取物。
实施例17
一种提高机体冷习服能力的组合物，其由100mL中药提取液、10g鹿茸多肽提取物及10g葛根多肽提取物混合制成；
中药提取液由以下原料制成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g；
中药提取液的制备方法包括以下步骤：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50％乙醇溶液回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得；
鹿茸多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将人工养殖的梅花鹿茸4℃下切成1cm3小块后，与pH为5.0的HAc-NaAc缓冲液混合后研磨成匀浆，置于4℃保存24h，10000rpm下离心20min，所得上清液加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇溶液的终浓度为65％，4℃保存12h，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干，即得鹿茸多肽提取物；
葛根多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将葛根粉末与Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，50℃水浴提取4h后，10000rpm下离心20min，所得上清液抽滤后调PH＝3.0，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干即得葛根多肽提取物。
实施例18
一种提高机体冷习服能力的组合物，其由100mL中药提取液、10g鹿茸多肽提取物及10g葛根多肽提取物混合制成；
中药提取液由以下原料制成：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g；
中药提取液的制备方法包括以下步骤：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50％乙醇溶液回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得；
鹿茸多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将人工养殖的梅花鹿茸4℃下切成1cm3小块后，与pH为5.0的HAc-NaAc缓冲液混合后研磨成匀浆，置于4℃保存24h，10000rpm下离心20min，所得上清液加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇溶液的终浓度为65％，4℃保存24h，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干，即得鹿茸多肽提取物；
葛根多肽提取物的制备方法包括以下步骤：将葛根粉末与Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，60℃水浴提取2h后，10000rpm下离心20min，所得上清液抽滤后调PH＝3.0，10000rpm下离心20min，取下层沉淀物，冻干即得葛根多肽提取物。
下面对本发明提供的中药组合物及该中药组合物与鹿茸多肽提取物、葛根多肽提取物的混合物的效果进行说明。
1.实验材料
1.1、动物
6周龄SPF级Sprague-Dawley(SD)鼠购于四川成都达硕实验动物有限公司[许可证号：SCXK(川)2019-001]，饲养于洁净动物房内，自由食水，环境温度控制在22～25℃，光照/黑暗周期为12h/12h，相对湿度50％～60％，动物实验严格遵守《实验动物管理条例》和《实验动物福利伦理审查指南》(GB/T 35892-2018)，实验流程经空军军医大学实验动物福利与伦理委员会批准。
1.2、药品
中药提取液的制备方法为：元胡30g、乳香15g、当归15g、龙骨50g、血竭20g、冰片20g。先将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭研末过筛，混合，用质量分数50％乙醇浸泡48小时，回流提取3次，每次45min，合并3次提取液，过滤，所得滤液蒸馏浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得。
鹿茸多肽的制备方法为：将梅花鹿茸在4℃条件下切成1cm3小块，加入HAc-NaAc缓冲液(PH＝4.74)研磨成匀浆后置于4℃保存12h。高速离心机10000rpm离心20min，吸取上清液后加入质量分数90％乙醇溶液，使乙醇的终浓度最后达到65％(质量分数)。4℃保存12h。以10000rpm离心20min，取下层沉淀物，冻干得到鹿茸多肽提取物。
葛根多肽的制备方法为：将葛根粉末加入Tris-HCl缓冲液(PH＝9.0)充分搅拌，50℃水浴提取2h。高速离心机10000rpm离心20min，上清液抽滤后调PH＝3.0。10000rpm离心20min，取下层沉淀物，冻干得到葛根多肽提取物。
多肽药物的制备方法为：鹿茸多肽提取物10g+葛根多肽提取物10g混合，溶于超纯水中，充分搅拌，定容至100ml。
中药/多肽组合药物的制备方法为：中药提取液100ml+鹿茸多肽提取物10g+葛根多肽提取物10g，充分搅拌。
1.3、试剂
皮质酮检测试剂盒、胰高血糖素检测试剂盒、游离甲状腺素(FT4)检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所。
1.4、仪器
低温实验舱，空军军医大学军队劳动与环境卫生学教研室自建；680型酶标仪，美国BioRad公司；T335型红外摄像仪，美国FLIR公司；7151型半导体温度计，上海医用仪表厂。
2.实验方法
2.1、动物分组及给药
大鼠在洁净动物房内适应一周后，随机分为5组，每组15只，分别为室温组、冷暴露组、冷暴露+多肽组、冷暴露+中药组、冷暴露+中药/多肽组合组(即冷暴露+中药多肽复合制剂组)。三个给药组每日上午8～12时灌胃给药，给药剂量：冷暴露+多肽组，多肽混合物溶液10ml/kg体重；冷暴露+中药组(由于实施例1～10提供的中药组合物的效果基本相同，故本发明仅以实施例1提供的中药组合物为例进行效果说明)，中药提取液10ml/kg体重；冷暴露+中药/多肽组合组(由于实施例11～18提供的组合物的效果基本相同，故本发明仅以实施例14提供的组合物为例进行效果说明)，中药/多肽混合物10ml/kg灌胃。室温组和冷暴露组置于正常室温动物房中饲养。给药2周后，将冷暴露组、冷暴露+多肽组、冷暴露+中药组和冷暴露+中药/多肽组分别独立置于饲养笼内，暴露于低温实验舱，设置舱内温度为-15±2℃，暴露时间为4小时。冷暴露实验结束后间隔2天，于第3天上午8～10时进行冷水(水温10℃)游泳，记录游泳时间。游泳后立即采血。室温组不进行冷暴露和冷水游泳，采血同其他实验组。
2.2、尾部皮肤温度
在冷暴露过程中的0小时、2小时和4小时，以尾根部起1/3处使用红外摄像仪进行拍摄，记录皮肤温度的变化。
2.3、肛温
在大鼠进行冷暴露前和冷暴露后，使用7151型半导体温度计，将测温探头用石蜡油润滑后，轻轻插入大鼠肛门3cm深处，指针稳定后读数。计算肛温在冷暴露前后的变化。
2.4、冷水游泳
采用水深70cm、直径50cm玻璃缸进行游泳实验，以大鼠沉底20秒作为终止时间。
2.5、激素测定
主动脉穿刺采集血液，于室温静置1～2h等待血清析出，3000r/分室温离心10分钟，小心取上层血清，分装冷藏于-80℃冰箱备用。检测时严格按照试剂盒说明书操作检测激素水平，在酶标仪指定波长处读取OD值。
2.6、统计方法与数据分析
使用Graphpad Prism 8.0软件对实验数据进行处理，多组数据比较分析采用单因素方差分析，组间比较采用Tukey校正的t检验。P＜0.05认为差异具有统计学意义。
3、实验结果
3.1、尾部皮肤温度
在-15℃急性冷暴露过程中，冷暴露2h后，冷暴露组大鼠尾部皮温降幅较大，与室温组相比差异显著(P＜0.001)，冷暴露+中药多肽复合制剂组大鼠尾部皮温显著高于冷暴露组(P＜0.01)，而冷暴露+多肽组和冷暴露+中药组与冷暴露组相比且无显著差异；冷暴露4h后，冷暴露组大鼠皮温继续降低，中药多肽复合制剂的保护作用仍然显著(P＜0.01)，优于多肽组(P＜0.05)和中药组(见表1和图1)。
表1各组大鼠尾部皮肤温度(℃)
Figure BDA0004166602380000191
Figure BDA0004166602380000192
**，与冷暴露组相比P＜0.01；***，与冷暴露组相比P＜0.001；#，与冷暴露+多肽组相比P＜0.05。
3.2、肛温
在-15℃急性冷暴露过程中，随暴露时间延长，大鼠肛温逐渐下降，与室温组相比降幅显著(P＜0.001)。与冷暴露组相比，中药多肽复合制剂组肛温下降幅度明显减少(P＜0.001)，优于冷暴露+多肽组(P＜0.01)和冷暴露+中药组(见表2和图2)。以上结果说明，中药多肽复合制剂具有良好的抗寒作用，其抗寒效果明显优于多肽单独给药和中药单独给药。
表2各组大鼠肛温(℃)
Figure BDA0004166602380000193
Figure BDA0004166602380000194
Figure BDA0004166602380000201
*，与冷暴露组相比P＜0.05；**，与冷暴露组相比P＜0.01；***，与冷暴露组相比P＜0.001；#，与冷暴露+多肽组相比P＜0.05；##，与冷暴露+多肽组相比P＜0.01。
3.3、冷水游泳时间
冷水游泳实验中各组大鼠冷水游泳时间见表3和图3，可见中药多肽复合制剂组大鼠冷水游泳时间与冷暴露组比较具有显著差异(P＜0.001)，其抗冷应激效果明显优于冷暴露+多肽组(P＜0.001)和冷暴露+中药组(P＜0.001)。
表3各组大鼠冷水游泳时间(min)
Figure BDA0004166602380000202
Figure BDA0004166602380000203
**，与冷暴露组相比P＜0.01；***，与冷暴露组相比P＜0.001；###，与冷暴露+多肽组相比P＜0.001；
Figure BDA0004166602380000204
与冷暴露+中药组相比P＜0.001。
3.4、血皮质酮
冷水游泳后，冷暴露组血皮质酮浓度较室温组升高(P＜0.001)，表明动物体内产生冷应激反应。冷暴露+中药组和冷暴露+中药多肽复合制剂组血皮质酮浓度均显著高于冷暴露组(P＜0.001)，而冷暴露+多肽组和冷暴露组比较差异不显著(P＞0.05)，中药多肽复合制剂组抗冷应激的效应优于多肽组(P＜0.001，表4，图4)。以上结果显示，中药多肽复合制剂能够诱导冷暴露动物体内产生冷应激反应，其作用优于多肽或中药单独给药，有助于动物对抗寒冷环境导致的组织或器官损伤。
表4冷水游泳后各组大鼠血皮质酮浓度(μg/dL)
Figure BDA0004166602380000211
Figure BDA0004166602380000212
***，与冷暴露组相比P＜0.001；###，与冷暴露+多肽组相比P＜0.001。
3.5、血胰高血糖素
冷水游泳后，冷暴露组动物血胰高血糖素浓度高于室温组(P＜0.01)，冷暴露+多肽组、冷暴露+中药组、冷暴露+中药多肽复合制剂组胰高血糖素浓度均进一步升高，与冷暴露组比较差异显著(P＜0.01，P＜0.001)，冷暴露+中药多肽复合制剂组提升血胰高血糖素水平的作用优于多肽组(P＜0.01)和中药组，证实中药多肽复合制剂能够更明显地诱导机体冷应激反应(表5，图5)。
表5冷水游泳后大鼠血胰高血糖素浓度(pg/mL)
Figure BDA0004166602380000213
Figure BDA0004166602380000214
**，与冷暴露组相比P＜0.01；***，与冷暴露组相比P＜0.001；##，与多肽组相比P＜0.01。
3.6、血游离甲状腺素
冷水游泳后，冷暴露组动物血游离甲状腺素浓度高于室温组(P＜0.001)，冷暴露+中药组、冷暴露+中药多肽复合制剂组血游离甲状腺素浓度均进一步升高，与冷暴露组比较差异显著(P＜0.001)，冷暴露+中药多肽复合制剂组提升血游离甲状腺素水平的作用优于多肽组(P＜0.001)和中药组(P＜0.05)，证实中药多肽复合制剂能够更明显地诱导机体冷应激反应(表6，图6)。
表6冷水游泳后大鼠血FT4浓度(μg/dL)
Figure BDA0004166602380000221
Figure BDA0004166602380000222
***，与冷暴露组相比P＜0.001；###，与冷暴露+多肽组相比P＜0.001；
Figure BDA0004166602380000223
与冷暴露+中药组相比P＜0.05。
以上结果表明，葛根多肽和鹿茸多肽组成的多肽复合物以及从元胡、乳香、当归、龙骨、血竭和冰片中提取的中药提取液都有不同程度的抗寒及提高冷应激反应的能力，而中药多肽复合制剂的抗寒和提高冷应激反应的能力明显优于多肽单独给药和中药单独给药，具体表现为：中药多肽复合制剂可提高冷暴露后大鼠中心体温和尾部皮肤温度，优于单独给药；中药多肽复合制剂组大鼠冷水游泳时间高于冷暴露组、冷暴露+多肽组和冷暴露+中药组，差异显著；冷水游泳后，中药多肽复合制剂组大鼠血皮质酮、胰高血糖素和游离甲状腺素浓度高于其他实验组，差异显著。以上结果表明，中药和多肽复合制剂能提高机体抗寒和抗冷应激原能力，复方制剂优于单独给药。
冷应激对大鼠内分泌活动具有显著的影响。通过各组大鼠与应激有关的几种激素测定结果表明，在冷应激后皮质酮、甲状腺素和胰高血糖素的浓度都有不同程度的增加，说明在冷应激时，垂体-肾上腺轴、垂体-甲状腺轴等几个轴的活动加强，共同协调发挥生理调控作用，调节机体抵抗寒冷应激。
本发明所选用的中药和多肽中含有多种有效成分，其作用包括：(1)对垂体-肾上腺功能有刺激作用，刺激肾上腺皮质增加分泌皮质激素；葛根多肽和鹿茸多肽中的有效成分具有激素样作用，可以提高机体对皮质酮的敏感性；(2)增加肝脏线粒体的氧化磷酸化效率，使机体充分利用能量物质，既不过多消耗机体的能量物质，又能保证机体对能量物质的需求，从而提高机体的抗寒能力；(3)在冷应激时，耗氧量最大，脂质过氧化作用增强，自由基产生增多，可对细胞膜和DNA造成损伤，中药中含有的酚酸类化合物，能够清除自由基，减轻脂质过氧化物对机体的损伤；(4)中药对心血管系统具有保护作用，可抑制心肌细胞Na+-K+-ATP酶的活性，提高心肌细胞内钙离子的浓度，增强心肌的收缩力、减慢心率、增加心输出量和冠脉血流量，提高机体抗缺氧能力，具有心肌保护作用，同时还对血管有选择性收缩和舒张作用。因此，中药可以在冷应激时调节机体血液循环，使血流重新分布，增强机体的抗寒能力。
综上所述，本发明证实中药多肽复合制剂能够显著提高急性冷暴露时的冷习服能力，可能是通过提升机体冷应激能力，共同调节机体抵抗寒冷造成的组织或器官损伤。
以上公开的仅为本发明的具体实施例，但是，本发明实施例并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种提高机体冷习服能力的中药组合物，其特征在于，其按重量份数计由以下原料组成：元胡20～40份、乳香10～20份、当归10～20份、龙骨40～60份、血竭15～25份、冰片10～30份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，其按重量份数计由以下原料组成：元胡30份、乳香15份、当归15份、龙骨50份、血竭20份、冰片20份。
3.一种权利要求1所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
按重量份数称取元胡、乳香、当归、龙骨、血竭、冰片；
将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50～70％乙醇溶液进行提取，收集提取液，浓缩，加入冰片细粉，混匀，即得所述中药组合物。
4.根据权利要求3所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述提取是加入相当于药材混合物6～8倍量的质量分数50～70％乙醇溶液，回流提取2～3次，每次30～45min。
5.一种权利要求1或2所述的中药组合物在制备提高机体冷习服能力的产品中的用途。
6.一种提高机体冷习服能力的组合物，其特征在于，其是由权利要求1或2所述的中药组合物的提取液以及葛根多肽、鹿茸多肽按用量比为10mL：1～2g：1～2g混合制成；
中药组合物的提取液是按照以下步骤制备得到：将元胡、乳香、当归、龙骨、血竭混合后用质量分数50～70％乙醇溶液进行提取，收集提取液，浓缩至每毫升含生药1g，加入冰片细粉，混匀，即得。
7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述鹿茸多肽是按照以下方法制备得到：向鹿茸中加入pH为4.5～5.0的缓冲液，浸提12～24h，所得提取液中加入乙醇溶液并使得到的混合物中乙醇质量浓度为60％～70％，浸提12～24h，离心，取下层沉淀物，冻干，即得所述鹿茸多肽。
8.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述葛根多肽是按照以下方法制备得到：向葛根中加入pH为8.5～9.5的缓冲液，40～60℃提取2～4h后，离心，所得上清液调PH至2.5～3.5，离心，取下层沉淀物，冻干，即得葛根多肽。
9.根据权利要求7或8所述的组合物，其特征在于，所述离心是在10000rpm下离心20min。
10.一种权利要求6所述的组合物在制备提高机体冷习服能力的产品中的用途。
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