CN116098173A - 防治柑橘炭疽病提取物的制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,包括以下步骤:大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子经干燥后粉碎,加入到沸水中搅拌均匀,继续煮,然后冷冻,冷冻结束后解冻,获得冻融物料;冻融物料中加入磷酸二氢钠,置于发酵槽中,接种枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌好氧发酵,继续接种地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌,好氧发酵结束,发酵物料进行厌氧发酵,取发酵物料和纯净水搅拌均匀,静置后过滤,滤渣和沉淀物为提取物A;滤液调节PH值后为提取物B;往提取物A中加入甘蔗渣粉压实打包装袋;提取物B密封保存。本发明制备的提取物能够高效防治柑橘炭疽病,并且具有生产成本低、对柑橘种植环境无污染等特点。
Description
技术领域
本发明属于柑橘病害防治领域。更具体地说,本发明涉及一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法与应用。
背景技术
柑橘喜欢温暖湿润的气候,主要分布在云南、广西、广东、四川南部、湖南南部,江西南部,福建的一部分地区,是我国重要的经济作物之一。由于柑橘的连年种植,柑橘树上的病害也在逐年增加,其中“炭疽病”是柑橘的主要危害之一。引起柑橘炭疽病的病原菌无性阶段是半知菌亚门炭疽菌属的胶孢炭疽菌,有性阶段为子囊菌门小丛壳属。病菌寄主范围广,在全国各大柑橘种植区均有发生,严重危害了生产、运输、储藏。炭疽病主要危害树体的地上部分,会引起落叶、落果、树枝干枯等,严重情况下可造成树势衰退,产量下降,甚至树木枯死。
目前防治柑橘炭疽病的主要技术手段就是选用甲基硫菌灵可湿性粉剂、多菌灵可湿性粉剂、百菌清水剂、苯醚甲环唑水分散粒剂、咪鲜胺这些具有一定毒性的农药进行防治。农药污染是指农药使用后残存于生物体、农副产品及环境中的微量农药原体、有毒代谢产物、降解产物及杂质超过农药的最高残留限制而形成的污染现象,残留的农药对生物的毒性称为农药残毒,而保留在土壤中可能挥形成对土壤、大气及地下水的污染。当农药流失到环境中的农药通过蒸发、蒸腾,飘到大气之中,飘动的农药又被空气中的尘埃吸附住,这样会造成大气环境污染。而大气中的农药通过降雨又流入到水中,从而造成水环境的污染。同时流失到土壤中的农药还会造成土壤板结。大多数的农药是无选择地杀伤各种生物的,其中包括一些有益的动物,比如青蛙、蜜蜂、蚯蚓等,这些有益动物的减少会导致害虫数量的增加,从而影响农业生产。野生生物和畜禽吃了沾有农药的食物会造成急性或者慢性中毒,而且农药会影响生物的生殖能力。
针对柑橘的炭疽病,研发一种绿色、无毒、高效的农药替代品,对柑橘在绿色种植很有意义。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题,并提供至少后面将说明的优点。
本发明的一个目的是提供一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其能够高效防治柑橘炭疽病,并且具有生产成本低、对柑橘种植环境无污染等特点。
为了实现本发明的这些目的和其它优点,提供了一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其包括以下步骤:
步骤一、大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子经干燥后粉碎,分别取上述粉碎物,加入到沸水中搅拌均匀,继续煮5-10min,然后置于低于零下20℃的环境中冷冻,冷冻结束后取出,在室温环境下解冻,获得冻融物料;
步骤二、冻融物料中加入磷酸二氢钠,混合均匀,置于发酵槽中,接种枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌好氧发酵,获得一次发酵物料;
步骤三、往一次发酵物料中接种地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌,好氧发酵,获得二次发酵物料;
步骤四、将二次发酵物料转入厌氧池,盖好篷布以隔绝氧气,进行厌氧发酵,当发酵物料中的总酸≥32%,取发酵物料和纯净水按照质量比1:5充分搅拌均匀,静置后过滤,滤渣和沉淀物为提取物A;滤液调节PH值至6.5-7.5范围后为提取物B;往提取物A中加入甘蔗渣粉,混合均匀,即可压实打包装袋;提取物B装瓶后瓶口密封保存。
优选的是,粉碎物分别为以下重量份组分:大蒜35-40份、黄芪30-35份、川芎25-35份、香蕉皮20-30份、黄豆20-25份、蚕蛹20-25份、车前子15-20份。
优选的是,磷酸二氢钠的质量为冻融物料的0.08%-0.12%。
优选的是,枯草芽孢杆菌的接种量为0.007%-0.01%,胶冻样芽孢杆菌的接种量为0.005%-0.01%,地衣芽孢杆菌的接种量为0.014%-0.018%、侧孢芽孢杆菌的接种量为0.01%-0.02%、苏云金芽孢杆菌的接种量为0.08%-0.12%。
优选的是,步骤二中,接种完成后至少翻抛2次以使物料与枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌混合均匀,好氧发酵10-20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次。
优选的是,步骤三中,好氧发酵10-20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次。
优选的是,步骤一中,冷冻时间至少为24h。
一种所述的制备方法制备的提取物在柑橘炭疽病防治中的应用,其包括以下步骤:
在柑橘抽梢时,在柑橘根部施用提取物A,用量为1-1.5吨/亩,然后加土覆盖提取物A,并将提取物B与水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾;
在非柑橘抽梢以及未发病时,将取物B与水按体积比1:500混合均匀,对叶片喷雾;
在柑橘感染炭疽病或者树势衰弱时,提取物B和水按体积比1:300混合均匀后,先灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1-1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天。
本发明至少包括以下有益效果:
第一、本发明利用枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌等产生的纤维素酶、蛋白质酶等将大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子等物质分解,以使上述组分释放出抗菌物质和活性矿物质元素,并将蛋白质降解为氨基酸、多肽;地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌产生的甲壳素脱乙酰酶可见蚕蛹中的甲壳素降解为壳聚糖,增强了抗菌活性物质。并且上述菌体的代谢产物还又有抗菌、杀虫、增强抗性以及促进生长的作用。
第二、本发明制备的提取物防治柑橘炭疽病的机理如下:一、利用大蒜、黄芪等组分以及枯草芽孢杆菌等产生的抗菌物质抑制炭疽病菌的生长;二、利用胶冻样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等产生的代谢产物刺激作物产生免疫应答,增强作物的抗病性能;三、利用香蕉皮、蚕蛹等提供丰富的矿物质,促进作物的生长;四、利用枯草芽孢杆菌等产生的蛋白酶等将黄豆、蚕蛹、香蕉皮等含有的蛋白质解成小分子的多肽、氨基酸,促进柑橘的生长;五、利用苏云金芽孢杆菌的杀虫作用对昆虫杀灭,切断昆虫对炭疽病害的传播。本发明从增强柑橘树势以增强柑橘抵抗力,以及在对炭疽病菌杀灭抑制的同时,切断炭疽病菌的传播载体,从而大大提高了防治效果。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解,本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是,下述实施方案中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其包括以下步骤:
步骤一、大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子经干燥后粉碎,分别取上述粉碎物,加入到沸水中搅拌均匀,继续煮5-10min,然后快速置于低于零下20℃的环境中冷冻,冷冻结束后取出,在室温环境下解冻,获得冻融物料;
步骤二、冻融物料中加入磷酸二氢钠,混合均匀,置于发酵槽中,接种枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌好氧发酵,获得一次发酵物料;
步骤三、往一次发酵物料中接种地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌,好氧发酵,获得二次发酵物料;
步骤四、将二次发酵物料转入厌氧池,盖好篷布以隔绝氧气,进行厌氧发酵,当发酵物料中的总酸≥32%,取发酵物料和纯净水按照质量比1:5充分搅拌均匀,静置后过滤,滤渣和静置的沉淀物为提取物A;滤液调节PH值至6.5-7.5范围后为提取物B;往提取物A中加入甘蔗渣粉,混合均匀,即可压实打包装袋;提取物B装瓶后瓶口密封保存。
大蒜含有丰富的天然抗菌物质,其主要成分为大蒜素不但可防治病虫害、防治腐烂.而且还有利于促进萌芽、促进作物的生长发育。
黄芪中富含黄芪多糖,具有抑菌、杀菌作用。
川芎具有抗菌、抗氧化、细胞保护等作用,其与大蒜、黄芪共同使用,能够增强大蒜、黄芪的抗菌效果。
香蕉皮富含蛋白质、脂肪、糖以及钙、钾、镁、铁、锌等十几种元素,香蕉皮中含有蕉皮素,它可以抑制细菌和真菌滋生。
黄豆富含蛋白质、不饱和脂肪酸、纤维质、矿物质与维生素。
蚕蛹中合有丰富的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、氨基酸、麦角甾醇和甲壳素等。
车前子含多量黏液质、琥珀酸、车前烯醇、腺嘌呤、胆碱、车前子碱、脂肪油、维生素A和维生素B等,并具有抑菌作用。
枯草芽孢杆菌可分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、甲壳素脱乙酰酶、枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等物质。
胶冻样芽孢杆菌具有分解硅酸盐矿物、溶磷、解钾、固氮等作用,可提高土壤中的可溶性磷、钾的含量,提高土壤肥力,改善作物所需矿物元素的工艺,促进植物的生长,提高抗病性,并可预防和减少灰霉病、炭疽病等病害。
地衣芽孢杆菌能够产生甲壳素脱乙酰酶、纤维素酶、葡聚糖酶等溶菌物质以及表面活性素、伊枯草菌素、枯草杆菌素等抗菌物质,并且其代谢产物还可促进作物生长、诱导作物产生系统抗性,增强作物对作物病原菌的抗病能力。
侧孢芽孢杆菌可产生蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶以及多种维生素、氨基酸等,促进作物根系生长、提高根系活力,并刺激机体免疫系统产生各种免疫应答,增强作物的抗病能力;侧孢芽孢杆菌还可分泌出杀虫、抗菌活性物质。
苏云金芽孢杆菌可产生伴孢晶体毒素而是昆虫发生毒血症而死亡。
本发明利用枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌等产生的纤维素酶、蛋白质酶等将大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子等物质分解,以使上述组分释放出抗菌物质和活性矿物质元素,并将蛋白质降解为氨基酸、多肽;地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌产生的甲壳素脱乙酰酶可见蚕蛹中的甲壳素降解为壳聚糖,增强了抗菌活性物质。并且上述菌体的代谢产物还又有抗菌、杀虫、增强抗性以及促进生长的作用。本发明制备的提取物防治柑橘炭疽病的机理如下:一、利用大蒜、黄芪等组分以及枯草芽孢杆菌等产生的抗菌物质抑制炭疽病菌的生长;二、利用胶冻样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等产生的代谢产物刺激作物产生免疫应答,增强作物的抗病性能;三、利用香蕉皮、蚕蛹等提供丰富的矿物质,促进作物的生长;四、利用枯草芽孢杆菌等产生的蛋白酶等将黄豆、蚕蛹、香蕉皮等含有的蛋白质解成小分子的多肽、氨基酸,促进柑橘的生长;五、利用苏云金芽孢杆菌的杀虫作用对昆虫杀灭,切断昆虫对炭疽病害的传播。
在另一种技术方案中,粉碎物分别为以下重量份组分:大蒜35-40份、黄芪30-35份、川芎25-35份、香蕉皮20-30份、黄豆20-25份、蚕蛹20-25份、车前子15-20份。
在另一种技术方案中,磷酸二氢钠的质量为冻融物料的0.08%-0.12%。
在另一种技术方案中,枯草芽孢杆菌的接种量为0.007%-0.01%,胶冻样芽孢杆菌的接种量为0.005-0.01%,地衣芽孢杆菌的接种量为0.014%-0.018%、侧孢芽孢杆菌的接种量为0.01-0.02%、苏云金芽孢杆菌的接种量为0.08%-0.12%。
在另一种技术方案中,步骤二中,接种完成后至少翻抛2次以使物料与枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌混合均匀,好氧发酵10-20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次。
在另一种技术方案中,步骤三中,好氧发酵10-20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次。
在另一种技术方案中,步骤一中,冷冻时间至少为24h。
在另一种技术方案中,提取物A还经过以下步骤处理:
1)往提取物A中加入质量分数为5-10%的甘蔗渣粉,混合均匀,获得物料A;
2)往物料A中加入钾长石、磷矿粉、盐酸多巴胺和京尼平,物料A与钾长石、磷矿粉、10%(wt)的盐酸多巴胺、0.1%(wt)京尼平的质量比为100:1-5:1-5:5-10:1-5:0.1-1,混合均匀,获得物料B;
2)往物料B中加入甘蔗渣粉,物料B与甘蔗渣粉的质量比为100:1-10,混合均匀,置于造粒机中造粒,颗粒物料在40℃条件下,烘干,即得颗粒料A。
甘蔗渣粉中的纤维素富含羟基,具有良好的吸附性能。本实施例利用甘蔗渣粉与提取物A混合以利用甘蔗渣粉吸附提取物A中的营养成分以及枯草芽孢杆菌等菌体,随后再与钾长石、磷矿粉、盐酸多巴胺、京尼平进行混合,再利用甘蔗渣粉调节水分以利于造粒机造粒,颗粒在后烘干的过程中,壳聚糖、盐酸多巴胺和京尼平的交联作用在颗粒A的表面或者内部形成交联结构以将菌体、钾长石、磷矿粉以及各种营养成分束缚在颗粒A内,使其在使用时具有缓释作用,避免养分的流失,为枯草芽孢杆菌等菌体的生长构建出适宜其生长的微环境,使各菌在微环境中成为优势菌群,使各菌体长时间保持旺盛的生长能力,进而提高菌体的防治效果;而构建的微环境能够增加局部微生物代谢产物的浓度,增强溶磷、解钾等作用,为柑橘的生长持续的提供充足的矿物质元素,避免树势衰弱的发生。
在另一种技术方案中,提取物B在使用前还经过以下步骤处理:往100体积份的提取物B中加入以下重量份的原料组分:盐酸多巴胺0.5-1份、蒙脱土粉3-5份和京尼平0.01-0.1份,提取物B与盐酸多巴胺的体积,获得施用液B。
提取物B中含有丰富的多肽、氨基酸、枯草芽孢杆菌等菌的次级代谢产物、甲壳素脱乙酰形成的壳聚糖以及丰富的矿物质元素,如钾、磷、钙等。本实施例利用盐酸多巴胺、壳聚糖、京尼平的交联作用,使得提取物B在喷洒后在作物表面交联,在作物表面形成抗菌层以及养分缓释层,增强了作物的抗病性。
一种所述的制备方法制备的提取物在柑橘炭疽病防治中的应用,其包括以下步骤:
在柑橘抽梢时,在柑橘根部施用提取物A,用量为1-1.5吨/亩,然后加土覆盖提取物A,并将提取物B与水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾;
在非柑橘抽梢以及未发病时,将取物B与水按体积比1:500混合均匀,对叶片喷雾;
在柑橘感染炭疽病或者树势衰弱时,提取物B和水按体积比1:300混合均匀后,先灌根,再对叶片喷雾,然后在根部施用提取物A,用量为1-1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天。
一种所述的制备方法制备的提取物在柑橘炭疽病防治中的应用,其包括以下步骤:
在柑橘抽梢时,在柑橘根部施用颗粒料A,用量为1-1.5吨/亩,然后加土覆盖颗粒料A,并将施用液B与水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾;
在非柑橘抽梢以及未发病时,将施用液B与水按体积比1:500混合均匀,对叶片喷雾;
在柑橘感染炭疽病或者树势衰弱时,施用液B和水按体积比1:300混合均匀后,先灌根,然后在根部施用颗粒料A,用量为1-1.5吨/亩,再用施用液B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天。
<实施例1>
一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法与应用,包括以下步骤:
步骤一、大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子经干燥后粉碎,分别取以下重量份组分:大蒜35份、黄芪30份、川芎25份、香蕉皮20份、黄豆20份、蚕蛹20份、车前子15份,加入到150份沸水中搅拌均匀,继续煮5min,然后快速置于低于零下20℃的环境中冷冻,冷冻结束后取出,在室温环境下解冻,冷冻时间为24h,获得冻融物料;
步骤二、冻融物料中加入磷酸二氢钠,磷酸二氢钠的质量为冻融物料的0.08%混合均匀,置于发酵槽中,接种枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌好氧发酵,枯草芽孢杆菌的接种量为0.007%,胶冻样芽孢杆菌的接种量为0.005%,获得一次发酵物料;其中,接种完成后翻抛2次以使物料与枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌混合均匀,好氧发酵20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次;
步骤三、往一次发酵物料中接种地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌,好氧发酵,地衣芽孢杆菌的接种量为0.014%、侧孢芽孢杆菌的接种量为0.01%、苏云金芽孢杆菌的接种量为0.08%,好氧发酵20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次,获得二次发酵物料;
步骤四、将二次发酵物料转入厌氧池,盖好篷布以隔绝氧气,进行厌氧发酵,当发酵物料中的总酸≥32%,取发酵物料和纯净水按照质量比1:5充分搅拌均匀,静置后过滤,滤渣和静置的沉淀物为提取物A;滤液调节PH值至6.5范围后为提取物B;往提取物A中加入甘蔗渣粉,混合均匀,即可压实打包装袋;提取物B装瓶后瓶口密封保存;
步骤五、在柑橘抽梢时,在柑橘根部施用提取物A,用量为1吨/亩,然后加土覆盖提取物A,并将提取物B与水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾;
在非柑橘抽梢以及未发病时,将取物B与水按体积比1:500混合均匀,对叶片喷雾;
在柑橘感染炭疽病或者树势衰弱时,提取物B和水按体积比1:300混合均匀后,先灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天。
<实施例2>
一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法与应用,包括以下步骤:
步骤一、大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子经干燥后粉碎,分别取以下重量份组分:大蒜40份、黄芪35份、川芎35份、香蕉皮30份、黄豆25份、蚕蛹25份、车前子20份,加入到200份沸水中搅拌均匀,继续煮10min,然后快速置于零下25℃的环境中冷冻,冷冻结束后取出,在室温环境下解冻,冷冻时间为24h,获得冻融物料;
步骤二、冻融物料中加入磷酸二氢钠,磷酸二氢钠的质量为冻融物料的0.12%混合均匀,置于发酵槽中,接种枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌好氧发酵,枯草芽孢杆菌的接种量为0.01%,胶冻样芽孢杆菌的接种量为0.01%,获得一次发酵物料;其中,接种完成后翻抛2次以使物料与枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌混合均匀,好氧发酵10h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次;
步骤三、往一次发酵物料中接种地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌,好氧发酵,地衣芽孢杆菌的接种量为0.018%、侧孢芽孢杆菌的接种量为0.02%、苏云金芽孢杆菌的接种量为0.12%,好氧发酵10h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次,获得二次发酵物料;
步骤四、将二次发酵物料转入厌氧池,盖好篷布以隔绝氧气,进行厌氧发酵,当发酵物料中的总酸≥32%,取发酵物料和纯净水按照质量比1:5充分搅拌均匀,静置后过滤,过滤后的滤渣和静置的沉淀物为提取物A;滤液调节PH值至7.5范围后为提取物B;往提取物A中加入甘蔗渣粉,混合均匀,即可压实打包装袋;提取物B装瓶后瓶口密封保存;
步骤五、在柑橘抽梢时,在柑橘根部施用提取物A,用量为1.5吨/亩,然后加土覆盖提取物A,并将提取物B与水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾;在非柑橘抽梢以及未发病时,将取物B与水按体积比1:500混合均匀,对叶片喷雾;在柑橘感染炭疽病或者树势衰弱时,提取物B和水按体积比1:300混合均匀后,先灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天。
<实施例3>
一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法与应用,包括以下步骤:
步骤一、大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子经干燥后粉碎,分别取以下重量份组分:大蒜35份、黄芪30份、川芎25份、香蕉皮20份、黄豆20份、蚕蛹20份、车前子15份,加入到150份沸水中搅拌均匀,继续煮5min,然后快速置于零下20℃的环境中冷冻,冷冻结束后取出,在室温环境下解冻,冷冻时间为24h,获得冻融物料;
步骤二、冻融物料中加入磷酸二氢钠,磷酸二氢钠的质量为冻融物料的0.08%混合均匀,置于发酵槽中,接种枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌好氧发酵,枯草芽孢杆菌的接种量为0.007%,胶冻样芽孢杆菌的接种量为0.005%,获得一次发酵物料;其中,接种完成后翻抛2次以使物料与枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌混合均匀,好氧发酵20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次;
步骤三、往一次发酵物料中接种地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌,好氧发酵,地衣芽孢杆菌的接种量为0.014%、侧孢芽孢杆菌的接种量为0.01%、苏云金芽孢杆菌的接种量为0.08%,好氧发酵20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次,获得二次发酵物料;
步骤四、将二次发酵物料转入厌氧池,盖好篷布以隔绝氧气,进行厌氧发酵,当发酵物料中的总酸≥32%,取发酵物料和纯净水按照质量比1:5充分搅拌均匀,静置后过滤,过滤后的滤渣和静置的沉淀物为提取物A;滤液调节PH值至6.5范围后为提取物B;
步骤五、往提取物A中加入质量分数为5%的甘蔗渣粉,混合均匀,获得物料A;往物料A中加入钾长石、磷矿粉、盐酸多巴胺和京尼平,物料A与钾长石、磷矿粉、盐酸多巴胺、京尼平的质量比为100:1:1:5:1:0.1,混合均匀,获得物料B;往物料B中加入甘蔗渣粉,物料B与甘蔗渣粉的质量比为100:1,混合均匀,置于造粒机中造粒,颗粒物料在45℃条件下,烘干,即得颗粒料A;
步骤六、往100体积份的提取物B中加入以下重量份的原料组分:盐酸多巴胺0.5份、蒙脱土粉3份和京尼平0.01份,提取物B与盐酸多巴胺的体积,获得施用液B。
步骤七、在柑橘抽梢时,在柑橘根部施用颗粒料A,用量为1吨/亩,然后加土覆盖颗粒料A,并将施用液B与水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾;在非柑橘抽梢以及未发病时,将施用液B与水按体积比1:500混合均匀,对叶片喷雾;在柑橘感染炭疽病或者树势衰弱时,施用液B和水按体积比1:300混合均匀后,先灌根,然后在根部施用颗粒料A,用量为1吨/亩,再用施用液B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天。
<实施例4>
一种防治柑橘炭疽病提取物的制备方法与应用,包括以下步骤:
步骤一、大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子经干燥后粉碎,分别取以下重量份组分:大蒜40份、黄芪35份、川芎35份、香蕉皮30份、黄豆25份、蚕蛹25份、车前子20份,加入到200份沸水中搅拌均匀,继续煮10min,然后快速置于零下25℃的环境中冷冻,冷冻结束后取出,在室温环境下解冻,冷冻时间为24h,获得冻融物料;
步骤二、冻融物料中加入磷酸二氢钠,磷酸二氢钠的质量为冻融物料的0.12%混合均匀,置于发酵槽中,接种枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌好氧发酵,枯草芽孢杆菌的接种量为0.01%,胶冻样芽孢杆菌的接种量为0.01%,获得一次发酵物料;其中,接种完成后翻抛2次以使物料与枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌混合均匀,好氧发酵10h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次;
步骤三、往一次发酵物料中接种地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌,好氧发酵,地衣芽孢杆菌的接种量为0.018%、侧孢芽孢杆菌的接种量为0.02%、苏云金芽孢杆菌的接种量为0.12%,好氧发酵10h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次,获得二次发酵物料;
步骤四、将二次发酵物料转入厌氧池,盖好篷布以隔绝氧气,进行厌氧发酵,当发酵物料中的总酸≥32%,取发酵物料和纯净水按照质量比1:5充分搅拌均匀,静置后过滤,过滤后的滤渣和静置的沉淀物为提取物A;滤液调节PH值至7.5范围后为提取物B;
步骤五、往提取物A中加入质量分数为10%的甘蔗渣粉,混合均匀,获得物料A;往物料A中加入钾长石、磷矿粉、盐酸多巴胺和京尼平,物料A与钾长石、磷矿粉、盐酸多巴胺、京尼平的质量比为100:5:5:10:5:1,混合均匀,获得物料B;往物料B中加入甘蔗渣粉,物料B与甘蔗渣粉的质量比为100:10,混合均匀,置于造粒机中造粒,颗粒物料在45℃条件下,烘干,即得颗粒料A;
步骤六、往100体积份的提取物B中加入以下重量份的原料组分:盐酸多巴胺1份、蒙脱土粉5份和京尼平0.1份,提取物B与盐酸多巴胺的体积,获得施用液B。
步骤七、在柑橘抽梢时,在柑橘根部施用颗粒料A,用量为1.5吨/亩,然后加土覆盖颗粒料A,并将施用液B与水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾;在非柑橘抽梢以及未发病时,将施用液B与水按体积比1:500混合均匀,对叶片喷雾;在柑橘感染炭疽病或者树势衰弱时,施用液B和水按体积比1:300混合均匀后,先灌根,然后在根部施用颗粒料A,用量为1.5吨/亩,再用施用液B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天。
<对比试验>
在防治前调查病情基数,并于最后一次施药14天后进行调查;叶片炭疽病防效调查:每亩随机调查2株果树,每株按东西南北中五个方向各固定2个新梢,调查全部叶片,记录总叶数、各级病叶数、统计病情指数及防治效果。
叶片的分级标准:
0级:无病斑;
1级:病斑面积占整个叶面积的5%以下;
3级:病斑面积占整个叶面积的6%-10%以下;
5级:病斑面积占整个叶面积的11%-25%以下;
7级:病斑面积占整个叶面积的26%-50%以下;
9级:病斑面积占整个叶面积的51%以上。
病情指数和防治效果计算:
病情指数=∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶数×9)×100;
防效(%)=(对照区病情指数-处理区病情指数)/对照区病情指数×100。
对比例1:采用实施例1的方法制备提取物A和提取物B,不同之处在,组分中不含蚕蛹。
对比例2:采用实施例1的方法制备提取物A和提取物B,不同之处在于,组分中不含川芎、车前子。
对比例3:采用实施例1的方法制备提取物A和提取物B,不同之处在于,发酵菌中不含枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌。
对比例4:采用实施例1的方法制备提取物A和提取物B,不同之处在于,发酵军中不含苏云金芽孢杆菌。
对比例5:采用实施例1的方法制备颗粒料A和施用液B,不同之处在于,组分中不含胶冻样芽孢杆菌。
对比例6:采用实施例3的方法制备颗粒料A和施用液B,不同之处在于,组分中不含蒙脱土粉。
<病情防控效果>
在出现炭疽病病情的沃柑种植园,随机选取7亩,分别记为A区、B区、C区、D区、E区、F区、G区、H区、I区;
对于A区,采用比较例1制备的提取物A和施用液B,提取物B和水按体积比1:300混合制备滴灌液,利用滴灌液灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天;
对于B区,采用比较例2制备的提取物A和施用液B,提取物B和水按体积比1:300混合制备滴灌液,利用滴灌液灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天;
对于C区,采用比较例3制备的提取物A和施用液B,提取物B和水按体积比1:300混合制备滴灌液,利用滴灌液灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天;
对于D区,采用比较例4制备的提取物A和施用液B,提取物B和水按体积比1:300混合制备滴灌液,利用滴灌液灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天;
对于E区,采用比较例5制备的提取物A和施用液B,提取物B和水按体积比1:300混合制备滴灌液,利用滴灌液灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天;
对于F区,施用液B和水按体积比1:300混合制备滴灌液,利用滴灌液灌根,然后在根部施用颗粒料A,用量为1.5吨/亩,再用施用液B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天;
对于G区,采用对比例6制备的颗粒料A和施用液B,施用液B和水按体积比1:300混合制备滴灌液,利用滴灌液灌根,然后在根部施用颗粒料A,用量为1.5吨/亩,再用施用液B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天;
对于H区,采用实施例3制备的颗粒料A和施用液B,施用液B和水按体积比1:300混合制备滴灌液,利用滴灌液灌根,然后在根部施用颗粒料A,用量为1.5吨/亩,再用施用液B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天;
G区的沃柑树根部滴灌清水,根部施用牛粪发酵后的发酵料,用量为1.5吨/亩,再对叶片喷雾,连续3天。14天后的叶片防治效果如表1所示。
表1田间炭疽病防治效果
从表1结果可知,A区的防控效果低于F区,说明增加蚕蛹可提高炭疽病的防治效果;B区的防控效果低于F区,说明增加川芎、车前子可提高炭疽病的防治效果;C区的防控效果低于F区,说明增加枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌可提高炭疽病的防治效果;D区的防控效果低于F区,说明增加苏云金芽孢杆菌可提高炭疽病的防治效果;E区的防控效果低于F区,说明增加胶冻样芽孢杆菌可提高炭疽病的防治效果;H区的防控效果优于G区的防控效果说明增加蒙脱土粉可提高炭疽病的防治效果。
<效果试验>
试验一:2022年2月27日起,在南宁市武鸣区锣圩镇灵旗沃柑基地,随机选取该基地种植的4亩沃柑,分成4部分,分别依照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提供的方法防治炭疽病;至2022年6月30日,试验的4亩沃柑树均没有发生炭疽病,而该基地有17亩沃柑树发生炭疽病;至2022年10月30日,采用实施例1、实施例2提供方法防治的沃柑树叶片出现炭疽病病情,实施例3、实施例4提供方法防治的沃柑树未出现炭疽病病情。在该17亩发生炭疽病病情的沃柑树中随机选取4亩,分成4部分,每部为一亩,分别按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提供的方法治疗炭疽病,3天树势均恢复,而另外13亩感染炭疽病的沃柑树采用咪鲜胺喷雾,则需要5-15天不等才能恢复树势。采用咪鲜胺虽能对炭疽病起到防治作用,但防治效果并不理想,在10个月内存在反复多次发生炭疽病的情况,而经实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提供的方法防治炭疽病,未出现反复多次发生炭疽病的情况。
试验二、2022年2月28日起,在广西亚林果业犟作沙糖桔基地,随机选取该基地种植的4亩砂糖桔,分成4部分,分别依照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提供的方法防治炭疽病,至2022年6月30日,试验的4亩砂糖桔没有发生炭疽病,而该基地有22亩砂糖桔树发生炭疽病;至2022年10月30日,采用实施例1、实施例2提供方法防治的砂糖桔树叶片出现炭疽病病情,实施例3、实施例4提供方法防治的砂糖桔树未出现炭疽病病情。在发生炭疽病的22亩砂糖桔树种选取4亩,分成4部分,每部分为一亩,按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提供的方法治疗炭疽病,3天树势均恢复,而其他18亩的砂糖桔树采用传统的咪鲜胺进行治疗,则需要5-12天不等才能治好。采用咪鲜胺虽能对炭疽病起到防治作用,但防治效果并不理想,在10个月内存在反复多次发生炭疽病的情况,严重降低果实品相。该基地全程采用实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提供的方法防治柑橘炭疽病时,砂糖桔长势良好,砂糖桔在10月中旬即可提前上市,而采用传统防治方法的砂糖桔还要再等2月才能上市。
试验三、2022年2月8日起,在位于广西崇左市天等县的广西红江橙果园,选取该果园种植的4亩红江橙,分成4部分,分别依照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提供的方法防治炭疽病,至2022年6月30日,试验的4亩红江橙均没有发生炭疽病,而该基地有21亩红江橙树发生了炭疽病,至2022年10月30日,采用实施例1、实施例2提供方法防治的红江橙树叶片出现炭疽病病情,实施例3、实施例4提供方法防治的红江橙树未出现炭疽病病情。在发生炭疽病的21亩红江橙树中选取4亩,分成4部分,分别按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的方法治疗炭疽病,5天树势均恢复,而其他17亩数的红江橙树采用咪鲜胺传统方法进行治疗,则需要7-20天不等才能恢复树势。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节。
Claims (8)
1.防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、大蒜、黄芪、川芎、香蕉皮、黄豆、蚕蛹、车前子经干燥后粉碎,分别取上述粉碎物,加入到沸水中搅拌均匀,继续煮5-10min,然后置于低于零下20℃的环境中冷冻,冷冻结束后取出,在室温环境下解冻,获得冻融物料;
步骤二、冻融物料中加入磷酸二氢钠,混合均匀,置于发酵槽中,接种枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌好氧发酵,获得一次发酵物料;
步骤三、往一次发酵物料中接种地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌,好氧发酵,获得二次发酵物料;
步骤四、将二次发酵物料转入厌氧池,盖好篷布以隔绝氧气,进行厌氧发酵,当发酵物料中的总酸≥32%,取发酵物料和纯净水按照质量比1:5充分搅拌均匀,静置后过滤,滤渣和沉淀物为提取物A;滤液调节PH值至6.5-7.5范围后为提取物B;往提取物A中加入甘蔗渣粉,混合均匀,即可压实打包装袋;提取物B装瓶后瓶口密封保存。
2.根据权利要求1所述的防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其特征在于,粉碎物分别为以下重量份组分:大蒜35-40份、黄芪30-35份、川芎25-35份、香蕉皮20-30份、黄豆20-25份、蚕蛹20-25份、车前子15-20份。
3.根据权利要求1所述的防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其特征在于,磷酸二氢钠的添加质量为冻融物料的0.08%-0.12%。
4.根据权利要求1所述的防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其特征在于,枯草芽孢杆菌的接种量为0.007%-0.01%,胶冻样芽孢杆菌的接种量为0.005%-0.01%,地衣芽孢杆菌的接种量为0.014%-0.018%、侧孢芽孢杆菌的接种量为0.01%-0.02%、苏云金芽孢杆菌的接种量为0.08%-0.12%。
5.根据权利要求1所述的防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其特征在于,步骤二中,接种完成后至少翻抛2次以使物料与枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌混合均匀,好氧发酵10-20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次。
6.根据权利要求1所述的防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其特征在于,步骤三中,好氧发酵10-20h,发酵期间料温≥40℃则2.5h翻一次,料温40℃小于则3.5h翻一次。
7.根据权利要求1所述的防治柑橘炭疽病提取物的制备方法,其特征在于,步骤一中,冷冻时间至少为24h。
8.利用权利要求1-7任一项所述的制备方法制备的提取物在柑橘炭疽病防治中的应用,其特征在于,包括以下步骤:
在柑橘抽梢时,在柑橘根部施用提取物A,用量为1-1.5吨/亩,然后加土覆盖提取物A,并将提取物B与水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾;
在非柑橘抽梢以及未发病时,将取物B与水按体积比1:500混合均匀,对叶片喷雾;
在柑橘感染炭疽病或者树势衰弱时,提取物B和水按体积比1:300混合均匀后,先灌根,然后在根部施用提取物A,用量为1-1.5吨/亩,再用提取物B和水按体积比1:300混合均匀,对叶片喷雾,连续喷雾3天。
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Legal Events
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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