CN116059128A - 抗炎组合物 - Google Patents
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Abstract
本申请提供一种抗炎组合物，该组合物包括唾液酸，以及透明质酸；其中，所述透明质酸的重均分子量大于200kDa，通过将这两种组分的复配，对皮肤具有协同抗炎作用，可用于缓解、治疗和修复炎症引起的皮肤问题。
Description
技术领域
本申请涉及制剂技术领域，具体涉及一种抗炎组合物。
背景技术
皮肤作为人体最大的器官，主要承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力等功能。皮肤覆盖全身，保护着人体内各组织和器官免受病原微生物等外界物质以及物理等机械损伤的侵袭，有效地抵御外界刺激；皮肤还保持着人体的水分、电解质和营养物质等的流失，有效地维持了人体内环境的稳定，是保护人体的天然屏障。
随着人们生活水平和自我养护意识的增强，除了美白、保湿等对皮肤的基础护理作用外，炎症肌肤带来的各种皮肤问题也引起了人们的广泛关注。尤其近年来，气候变化异常、空气污染严重、人体油脂代谢、层出不穷的化妆品种类以及复杂的化妆品成分，提高了皮肤炎症的出现以及接受外界刺激的可能性，人们皮肤健康的意识和抗炎的认知也在逐步提高。
皮肤的炎症一般通过皮肤的瘙痒、刺痛及发痒等迹象来体现，严重时还会引起皮炎、湿疹甚至痤疮，因此对这些炎症皮肤进行炎症的缓解、治疗和修复对维持皮肤的健康具有重要意义。虽然目前已有研究发现许多活性成分具有抗炎或痤疮治疗的特性，现有技术中外用消炎药常用的为丁酸氢化可的松(1％)、醋酸地塞米松等，但此类药物属于糖皮质激素，长期使用可致皮肤萎缩、毛细血管扩张、色素沉着以及继发感染；抗炎成分护肤品中常添加的水杨酸、果酸等成分，容易引起刺激症状，如灼感、脱屑等，而天然提取物成分，如洋甘菊提取物、积雪草提取物等，由于主要成分为黄酮类化合物，几乎不溶于水，制剂时需要添加酒精助溶，对于皮肤的刺激性依然无法忽略；对于痤疮的治疗，常见的治疗方案为外用维A酸软膏，但维A酸的副作用较多，例如同样会引起皮肤刺激症状，如灼感、红斑及脱屑、削弱角质层屏障，需要建立适应及耐受。此前申请人曾公开唾液酸对于抗炎、痤疮治疗方面的作用，但唾液酸应用浓度有限导致效果受到限制，此外，从成本、刺激性或稳定性方面考虑在某些应用中希望使用相对少量的活性成分。然而，许多活性成分或其组合以相对低的含量应用时，在缓解炎症方面几乎没有或没有效果。因此，需要具有相对高的协同抗炎特性和有效性的抗炎组合物。
发明内容
本申请提供一种抗炎组合物，旨在缓解、治疗和修复皮肤炎症。
第一方面，本申请提供一种抗炎组合物，所述组合物包括唾液酸，以及透明质酸；其中，所述透明质酸的重均分子量大于200kDa。
可选的，所述透明质酸包括透明质酸盐，所述透明质酸盐选自透明质酸钠盐、透明质酸锌盐中的至少一种。
可选的，所述透明质酸的重均分子量为800kDa～2800kDa。
可选的，以所述组合物的总质量计，所述组合物中，所述透明质酸的质量百分比为0.05％～2％。
可选的，以所述组合物的总质量计，所述组合物中，所述唾液酸的质量百分比为0.01％～2％，
可选的，以所述组合物的总质量计，所述组合物中，所述唾液酸的质量百分比为0.25％～1％。
可选的，所述组合物的剂型为皮肤外用制剂。
可选的，所述皮肤外用制剂为化妆水、精华液、乳液、面霜、眼霜、面膜、防晒霜、沐浴露、洗面奶、粉底或BB霜中的任一种。
可选的，所述组合物还包括护肤品学或化妆品学上可接受的辅料。
第二方面，本申请还提供第一方面所述的组合物的应用，所述组合物用于制备皮肤红肿、痤疮的皮肤外用制剂。
有益效果：
本申请提供一种抗炎组合物，该组合物包括唾液酸，以及透明质酸；其中，所述透明质酸的重均分子量大于200kDa，通过将这两种组分的复配，对皮肤具有协同抗炎作用，可用于缓解、治疗和修复炎症引起的皮肤问题，例如针对炎症引起的痤疮，具有良好的抑制效果，尤其是选用唾液酸盐可进一步具有更好的抗炎效果。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1是本申请实施例中抗痤疮性能测试的照片，其中：图1(A)代表模型组和实施例2组的抗痤疮性能测试照片；图1(B)代表模型组和实施例5组的抗痤疮性能测试照片；图1(C)代表模型组和实施例6组的抗痤疮性能测试照片。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案以及技术效果更加清楚明白，以下将结合具体实施例对本发明进行进一步的详细描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为了促进对本申请的理解，纳入本申请上下文中使用的一些术语和表述的含义。
术语“唾液酸”(Sialic Acid，SA)学名叫作“N-乙酰基神经氨酸 (N-Acetylneuraminic acid)”，是一种天然存在的碳水化合物，CAS号为 131-48-6。化学式为C11H19NO9。它最初由颌下腺粘蛋白中分离而出，也因此而得名。唾液酸的生产方法包括有合成法(例如化学合成、酶合成)、天然提取法 (例如从蛋清、颌下腺粘蛋白或胎盘中提取)及发酵法，其中发酵法能够产生唾液酸单体或者聚唾液酸，需要说明的是，唾液酸的来源并不影响本申请实施例的实施。
术语“透明质酸”又名“玻尿酸(hyaluronic acid，HA)”，是一种酸性黏多糖，化学式是(C14H21NO11)n，由N-乙酰氨基葡糖和D-葡糖醛酸双糖重复单位构成的无分支高分子糖胺聚糖，一般存在于动物组织细胞间质和某些细菌的荚膜中。
术语“抗炎组合物”通常是指引入患炎症的皮肤后能够缓解、治疗和修复炎症的化合物组合。在本申请实施例中，该化合物的组合包括透明质酸，与唾液酸的组合，该透明质酸重均分子量大于200kDa，在这个重均分子量的范围下，透明质酸与唾液酸可以起到一个协同抗炎作用，另一方面，透明质酸还可以对炎症部位起到一个“封闭”的作用，从而抵御外界刺激，加快炎症皮肤的修复。
术语“皮肤”应当理解为从最上层或角质层到最下层或真皮(二者包括在内)，包含它的层。这些层包含不同类型的细胞，例如尤其是角化细胞、纤维原细胞、黑素细胞和脂肪细胞。在本申请实施例中，术语“皮肤”主要指人的皮肤。
术语“协同抗炎作用”及其变型是指通过使用透明质酸与唾液酸的组合提供的皮肤抗炎效果，该效果超过透明质酸和唾液酸的预测累加效果。
除非另外指说明，否则百分比是指重量百分比(即，％(W/W))。除非另外阐明，否则所有范围均包括端值，如“4至9”包括端值4和9。
本申请的发明人经过长期且广泛的研究最终发现，重均分子量在一定范围内的透明质酸，与唾液酸复配时具有协同抗炎的作用。
鉴于此，本申请提供一种组合物，具体用于皮肤外用抗炎，以有效缓解、治疗和修复各种原因导致的皮肤炎症。
所述组合物包括唾液酸，以及透明质酸；其中，所述透明质酸的重均分子量为大于200kDa，若所述透明质酸的分子量过大，则皮肤难以吸收，产品流动性不佳，若所述透明质酸的分子量过小，则难以成膜，不能有效起到抗炎作用。
在本申请中，所述透明质酸包括透明质酸盐或其衍生物，所述透明质酸盐可以选自但不限于透明质酸钠盐、透明质酸锌盐。
在一些实施例中，以所述组合物的总质量计，所述组合物中，所述透明质酸的质量百分比为0.05％～2％，若质量百分比过大，则给制剂工艺造成困难，若质量比过小，则抗炎效果不好。可以理解的是，所述透明质酸的质量百分比可以在0.05％～2％范围内任意取值，例如0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、 0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％、0.20％，或0.05％～2％之间其他未列出的数值。
在一些实施例中，以所述组合物的总质量计，所述组合物中，所述唾液酸的质量百分比为0.01％～2％，例如0.25％～1％。若所述唾液酸的质量百分比过大，则肤感会有不适，若所述唾液酸盐的质量百分比过小，则起不到抗炎的效果。可以理解的是，所述唾液酸的质量百分比可以在0.01％～2％范围内任意取值，例如0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、 0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％、 0.20％，或0.01％～2％之间其他未列出的数值。
以上方案中给的范围为最终的使用方案，根据透明质酸的分子量的不同可使组合物两者间呈现液体或者凝胶质感。因此，在一些实施例中，所述组合物还包括护肤品学或化妆品学上可接受的辅料，所述组合物的质感由辅料因素决定。
作为示例性的实施例，所述可接受的辅料包括油脂、乳化剂、增稠剂、抗炎成分、美白成分、角质软化成分、保湿成分、防晒剂及防腐剂中的至少一种。在一些实施例中，所述组合物的剂型为皮肤外用制剂，具体的，所述皮肤外用制剂可以为化妆水、精华液、乳液、面霜、眼霜、面膜、防晒霜、沐浴露、洗面奶、粉底或BB霜中的任一种。例如：
当所述组合物为化妆水时，所述组合物中的辅料包括保湿成分、抗菌成分和油脂中的至少一种。
当所述组合物为精华液时，所述组合物中的辅料选自但不限于增稠剂、保湿成分、油脂、乳化剂、抗炎成分和细胞修护成分中的至少一种。
当所述组合物为乳液时，所述组合物中的辅料选自但不限于增稠剂、保湿成分、乳化剂、防腐剂、油脂及抗炎成分中的至少一种。
当所述组合物为面霜时，所述组合物中的辅料选自但不限于增稠剂、乳化剂、油脂中的至少一种。
当所述组合物为面膜时，所述组合物中的辅料选自但不限于保湿成分、乳化剂、抗炎成分、保湿成分及增稠剂中的至少一种。
当所述的组合物为沐浴露时，所述组合物中的辅料选自但不限于表面活性剂、保湿成分及抗炎成分中的至少一种。
当所述组合物为洗面奶时，所述组合物中的辅料选自但不限于表面活性剂、保湿成分及角质软化成分中的至少一种。
当所述组合物为防晒霜时，所述组合物中的辅料选自但不限于乳化剂、油脂、防晒剂、保湿成分、抗炎成分及增稠剂中的至少一种。
当所述组合物为眼霜时，所述组合物中的辅料选自但不限于乳化剂、保湿成分及油脂中的至少一种。
当所述组合物为粉底时，所述组合物中的辅料选自但不限于乳化剂、钛白粉、保湿成分、油脂及细胞修护成分中的至少一种。
当所述组合物为BB霜时，所述组合物中的辅料选自但不限于乳化剂、钛白粉、保湿成分、油脂、抗炎成分及增稠剂中的至少一种。
在本申请各个实施例中，所述油脂、乳化剂、增稠剂、抗炎成分、美白成分、角质软化成分、保湿成分、防晒剂及防腐剂可以为本领域已知的材料，例如：
所述的油脂选自但不限于：植物油脂、硅油和合成油脂中的至少一种；所述的植物油脂选自但不限于甜杏仁油、椰子油、米糠油、鳄梨油、澳洲坚果油、霍霍巴油、小麦胚芽油、花生油、玫瑰果油、乳木果油、蓖麻油、橄榄油、太阳花油和红花油中的至少一种；所述的合成油脂选自但不限于异壬酸异壬酯、棕榈酸异丙酯、辛酸/癸酸甘油三酯、甘油肉豆蔻酸酯、氢化聚异丁烯和辛基十二醇肉豆蔻酸酯中的至少一种。
所述的乳化剂选自但不限于：阳离子乳化剂、阴离子乳化剂、非离子乳化剂、两性乳化剂中的至少一种。在一些实施例中，所述非离子乳化剂选自聚山梨糖醇、脱水山梨糖醇、烷氧化脂肪醇及烷基聚糖苷中的至少一种；所述阴离子乳化剂选自皂、烷基硫酸盐、单烷基磷酸盐、双烷基磷酸盐、烷基磺酸盐及酰基异硫代硫酸盐中的至少一种。
所述的增稠剂选自但不限于：瓜尔胶、槐豆胶、黄原胶、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、糊精、葡聚糖、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰基二甲基牛磺酸钠共聚物、二硬脂二甲胺锂蒙脱石、卡波姆及丙烯酸聚合物中的至少一种。
所述的抗炎成分选自但不限于：甘草酸及其衍生物、植物甾醇类、紫草提取物、尿囊素、炉甘石、氧化锌、马齿苋提取物和薄荷醇中的至少一种。
所述的美白成分选自但不限于：抗坏血酸及其衍生物、熊果苷、柔花酸、植酸、维生素E及其衍生物、光果甘草根提取物、茵陈蒿花提取物、桑根提取物、枣果提取物、黄芩根提取物和凝血酸中的至少一种。
所述保湿成分选自但不限于：氨基酸及其衍生物成分、蛋白质、肽成分、甘油、丙二醇、丁二醇、聚谷氨酸及其衍生物、甲基葡糖醇聚醚及其衍生物中的至少一种。
所述防晒剂选自但不限于：二氧化钛、氧化锌、对甲氧基肉桂酸异辛酯、二苯丙酮-1、二苯丙酮-和二苯丙酮-4、芦荟提取物、黄芩提取物中的至少一种。
所述防腐剂选自但不限于：烷醇(例如乙醇和苯甲醇)、羟苯甲酸酯、山梨酸酯、咪唑烷基脲衍生物、碘丙炔醇丁基胺甲酸酯及异噻唑啉酮中的至少一种。
所述表面活性剂选自但不限于：阳离子乳化剂、阴离子乳化剂、非离子乳化剂、两性乳化剂中的至少一种。在一些实施例中，所述非离子乳化剂选自聚山梨糖醇、脱水山梨糖醇、烷氧化脂肪醇及烷基聚糖苷中的至少一种；所述阴离子乳化剂选自皂、烷基硫酸盐、单烷基磷酸盐、双烷基磷酸盐、烷基磺酸盐及酰基异硫代硫酸盐中的至少一种。
本申请还提供一种应用，具体为以上任一项实施例中的组合物在制备皮肤红肿、痤疮的外用制剂上的应用。
以下为利用各实施例对本发明的技术方案进行的详细说明。
本实施例中，唾液酸为SA晶体，白色粉末，由武汉中科光谷绿色生物技术有限公司提供，阴凉柜保存，使用时现配现用；
透明质酸及其钠盐由华熙福瑞达公司提供。
实施例：唾液酸和透明质酸的组合物
将唾液酸和透明质酸按以下表1中所示的比例复配，并用去离子水溶解配置为待测样品溶液。
表1.抗炎组合物的配方
抗炎性能测试
实验目的：建立“二甲苯致小鼠耳廓肿胀法”模型，考察待测样品抗炎能力。
试验材料与动物：
(1)实施例1至实施例8、对比例1至对比例3的样品。
(2)阳性对照物：丁酸氢化可的松软膏(尤卓尔，0.1％)。
(3)阴性对照物：纯化水。
(4)实验动物：试验用小鼠为昆明种，SPF级，雄性；体重：22g～25g，由湖北省实验动物研究中心提供。
饲养条件：试验动物为笼养，每笼饲养同性别动物6只。饲料为SPF级实验颗粒鼠粮，由江苏省协同医药工程有限责任公司生产。饮用水为灭菌纯化水。笼底垫料为杨木木屑，使用前已灭菌，每两日更换一次。实验室温度为20℃～22℃，湿度为55％～60％，12小时明暗周期。
试验方法：
取上述规格小鼠分成组。各组小鼠右耳涂抹相应组别受试物，0.1mL/只，每日两次，连续六天。第七天各组给药1小时后以蒸馏水洗去药液，用干棉球擦净，右耳凃二甲苯0.02mL/只，左耳作对照，2小时后处死动物，用直径8mm 打孔器将双儿同部位等面积切下，称重，右、左耳片重量差为肿胀度。计算各组肿胀度，采用SPSS15.0软件的单因素方差分析功能的LSD检验(总体样本数据为方差齐性)进行统计学处理，结果见下表2。
表2
| 样品 | 动物数 | 耳廓肿胀程度 |
| 实施例1 | 12 | 0.0070±0.0028** |
| 实施例2 | 12 | 0.0042±0.0008** |
| 实施例3 | 12 | 0.0048±0.0012** |
| 实施例4 | 12 | 0.0044±0.0015** |
| 实施例5 | 12 | 0.0037±0.0022** |
| 实施例6 | 12 | 0.0034±0.0010** |
| 实施例7 | 12 | 0.0033±0.0014** |
| 实施例8 | 12 | 0.0044±0.0012** |
| 对比例1 | 12 | 0.0060±0.0008** |
| 对比例2 | 12 | 0.0050±0.0018** |
| 对比例3 | 12 | 0.0056±0.0012** |
| 阴性对照组 | 12 | 0.0074±0.0026 |
| 阳性对照组 | 12 | 0.0042±0.0009** |
与阴性对照组相比，**表示p＜0.01
由表2可知，结果表明，实施例1至实施例8、对比例1至对比例3及阳性对照组的鼠耳耳廓肿胀程度与阴性对照组相比，均有明显改善。可见实施例1至实施例6、对比例1至对比例3的配方具有抗炎能力。
将实施例3、实施例4和对比例1进行比较，实施例3相比对比例1，鼠耳耳廓肿胀程度有改善，实施例4的鼠耳耳廓肿胀程度改善的更加显著，说明透明质酸的重均分子量在200kDa以上，尤其是800kDa以上，抗炎效果更好。
将实施例2和对比例2进行比较，实施例2相比对比例2，鼠耳耳廓肿胀程度有改善，说明透明质酸在0.1％以上，抗炎效果更好。
将实施例2和对比例3进行比较，实施例2相比对比例3，鼠耳耳廓肿胀程度有改善，说明透明质酸与唾液酸复配相比单组分的唾液酸，抗炎效果更好。
抗痤疮性能测试
实验目的：建立兔耳痤疮模型，通过该模型测试受试物痤疮治疗的能力。
实验步骤：
(1)兔耳痤疮模型的建立。
取体重25kg～3.5kg大耳白家兔96只，雌雄不限，适应性喂养1周。随机取8只作为兔耳空白对照组，其余88只兔右耳内侧耳管开口处2cm×2cm范围，每天涂布煤焦油稀释液(95％乙醇配成的2％浓度煤焦油溶液)0.25mL一次，左耳不做任何处理作为对比，肉眼观察造模后兔耳皮损的情况和毛囊口有无角质栓等，连涂21天。根据Pillsbury的痤疮4级分级法对造模兔耳进行肉眼观察评级，以确证造模成功。
痤疮疗效肉眼判定标准：
正常(0)：正常组织，无痤疮；
轻度(I级)：粉刺为主要皮损，可有少量丘疹和脓疱，总病灶数少于30 个；
中度(Ⅱ～Ⅱ级)：其中Ⅱ级有粉刺，伴有中等量的丘疹和脓疱，总病灶数在31～50个之间，Ⅱ级在粉刺基础上伴大量丘疹和脓疱，偶见大的炎性损害，分布广泛，有少数结节形成，总病灶数在51～100个之间；
重度(Ⅳ级)：除上述皮损外，还伴有3个以上的结节或囊肿。
(2)分组给药及病理观察。
将兔耳造模成功家兔按分级结果均分为11组，每组8只，11组分别为实施例1至实施例8、对比例1至对比例3、阳性对照组和模型对照组。各药物组涂布相应浓度样品溶液，阳性对照组涂布维A酸乳膏，空白对照组和模型组给以同体积纯化水，一日一次，每次0.25mL，连续21d。末次给药后24h 后，肉眼观察各组家兔给药部位皮肤，根据疗效肉眼判定标准评级，并进行秩和检验统计分析。后对所有家兔空气栓塞处死，取下双耳导管开口处的全层皮肤，10％性福尔马林液固定，脱水固定，石蜡包埋，切片，HE染色，于光镜下观察组织学改变，测其毛囊面积及皮脂腺直径，结果采用SPSS软件进行统计学处理。
实验结果：
涂药前后兔耳皮肤按痤疮疗效肉眼判定标准进行分级，结果如表3至4所示。
表3.分组给药前观察结果
表4.分组给药后观察结果
由表3至4可知，结果表明，实施例1至实施例8、对比例1至对比例3及阳性对照组的兔耳皮肤肉眼观评分等级与模型对照组相比，均有明显降低。可见实施例1至实施例6、对比例1至对比例3的配方具有抗痤疮能力。
将实施例3和对比例1进行比较，实施例3相比对比例1，兔耳皮肤肉眼观评分等级降低的更加显著，说明透明质酸的重均分子量在200kDa以上，尤其是 800kDa以上，抗痤疮效果更好。
将实施例2和对比例2进行比较，实施例2相比对比例2，兔耳皮肤肉眼观评分等级降低的更加显著，说明透明质酸的浓度在0.1％以上，抗痤疮效果更好。
将实施例2和对比例3进行比较，实施例2相比对比例3，兔耳皮肤肉眼观评分等级降低的更加显著，说明透明质酸与唾液酸复配相比单组分的唾液酸，抗痤疮效果更好。
对涂药后的兔耳皮肤进行肉眼观疗效观察并拍照，拍照结果如图1所示。其中：图1(A)代表模型组和实施例2组的抗痤疮性能测试照片；图1(B)代表模型组和实施例5组的抗痤疮性能测试照片；图1(C)代表模型组和实施例6 组的抗痤疮性能测试照片。
从图1可以看出，实施例2、实施例5和实施例6的肉眼观察疗效与模型组对照组相比，具有明显的抗痤疮效果。
对各实验组兔耳皮肤病理组织学切片镜下观，应用Imag-proplus软件测得皮脂腺直径及毛囊面积，进行统计计算，结果见表5(平均数+SD)。
表5.病理学结果
| 组别 | 动物数(n) | 皮脂腺直径(μm) | <![CDATA[毛囊面积(μm<sup>2</sup>)]]> |
| 实施例2 | 8 | 25.5±3.4** | 1279.1±380.7** |
| 实施例5 | 8 | 20.0±2.1** | 1089.9±356.4** |
| 实施例6 | 8 | 22.0±2.1** | 1158.2±320.5** |
| 实施例7 | 8 | 26.0±4.2** | 1368.2±428.6** |
| 空白对照组 | 8 | 16.7±2.4 | 604.1±242.2 |
| 模型对照组 | 8 | <![CDATA[48.8±8.9<sub>△△</sub>]]> | <![CDATA[2342.0±361.8<sub>△△</sub>]]> |
| 阳性对照组 | 8 | 25.1±5.4** | 916.4±339.3** |
注：△△：与正常组相比，**：与模型组相比，P＜0.01
结果显示，各组兔耳皮肤病理组织学切片镜下测得皮脂腺直径及毛囊面积，模型对照组与空白对照组相比，有显著性差异(p<0.01)，表明家兔兔耳痤疮模型造模成功；实施例2、实施例5至实施例7及阳性对照组与模型对照组相比，均有显著性差异(p<0.01)，有统计学意义。
皮肤刺激性性试验
试验目的：确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。
皮肤刺激性：皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎性变化。
试验方法：
(1)准备18只白色家兔，分为6组，雌雄不限，雌性动物未孕且未曾产崽，并已在动物房中适应5天。
(2)试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。
(3)取受试物约0.5mL(g)直接涂在皮肤上，然后用二层纱布 (2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定，另一侧皮肤作为对照。采用封闭试验，敷用时间为4h。试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。
(4)于清除受试物后的1h、24h、48h和72h观察涂抹部位皮肤反应，按表6进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24h、 48h和72h各观察时点最高积分均值。
评价方法：按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表7判定皮肤刺激强度，实验结果如表8所示。
表6.皮肤刺激反应评分
表7.皮肤刺激强度分级
| 积分均值 | 强度 |
| [0，0.5) | 无刺激性 |
| [0.5，2.0) | 轻刺激性 |
| [2.0，6.0) | 中刺激性 |
| [6.0，8.0) | 强刺激性 |
表8.急性刺激程度实验结果
根据表8可知，在24h、48h、72h观察得到的皮肤刺激性实验结果，受试家兔未出现红斑水肿现象，受试样对于家兔均无刺激性。
4、皮肤外用实验(凝胶)
实验目的：按照随机、双盲、对照的原则，对自制的凝胶产品进行志愿者功效测评，评价该凝胶对抗炎方面的功效。
试用产品：按照常规的方法利用表9的配方制成凝胶。
表9.凝胶配方
| 原辅料 | 凝胶组1组(wt％) | 凝胶组2组(wt％) | 对照组(wt％) |
| 羟丙纤维素 | 5 | 5 | 5 |
| 1,3-丁二醇 | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
| L-抗坏血酸 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 唾液酸 | 0.25 | 0.25 | / |
| 透明质酸钠 | 0.1(2000kDa) | / | / |
| 对羟基苯甲酸甲酯 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
| 去离子水 | 余量 | 余量 | 余量 |
实验步骤：选取30名年龄在25岁左右患有痤疮的志愿者(粉刺，并伴有少量至中等数量的脓包和丘疹，总病灶数在50个以下)，随机分为3组，每组10 人，分别为凝胶1组、凝胶2组和对照组，志愿者平均早晚面部使用一次表中配置的制剂，持续使用60天，并根据志愿者皮肤改善的情况进行打分，以10名的平均分数标记在表10中，并将测试结果记录在表11中。
测试结果评价标准：治疗指数≥90％为痊愈疗效，60％～90％为显著疗效，20％-60％为进步疗效，20％以下为无效。功效评价＝(治疗前总皮损数-治疗后总皮损数)/治疗前总皮损数。有效治疗天数为皮损数小于40％的治疗时间，取平均值。
在测试过程中，未发现志愿者的皮肤出现不良反应。
实验结果：
表10.平均皮损数目(平均值+SD)
表11.凝胶的测试结果
| 功效 | 凝胶1组 | 凝胶2组 | 对照组 |
| 炎症性痤疮的改善 | 显效 | 显效 | 无效 |
| 有无脱皮、红肿现象 | 无 | 无 | 无 |
| 有误灼烧、刺痛感 | 出现1例 | 出现3例 | 无 |
| 有效天数 | 46 | 55 | / |
从表10和表11可以看出，凝胶1组、凝胶2组相比对照组具有改善炎症性痤疮的效果，尤其是凝胶1组，在改善炎症方面具有显著效果，并且肤感更易于被大众所接受，说明将一定分子量的透明质酸与唾液酸复配对改善炎症性痤疮具有较好的效果。
以上对本发明所提供的一种抗炎组合物，进行了详细介绍。本文中应用了具体个例对本申请的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本申请的技术方案及其核心思想；本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请实施例的技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种抗炎组合物，其特征在于，所述组合物包括唾液酸，以及透明质酸；其中，所述透明质酸的重均分子量大于200kDa。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述透明质酸包括透明质酸盐，所述透明质酸盐选自透明质酸钠盐、透明质酸锌盐中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述透明质酸的重均分子量为800kDa～2800kDa。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以所述组合物的总质量计，所述组合物中，所述透明质酸的质量百分比为0.05％～2％。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以所述组合物的总质量计，所述组合物中，所述唾液酸的质量百分比为0.01％～2％。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，以所述组合物的总质量计，所述组合物中，所述唾液酸的质量百分比为0.25％～1％。
7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物的剂型为皮肤外用制剂。
8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述皮肤外用制剂为化妆水、精华液、乳液、面霜、眼霜、面膜、防晒霜、沐浴露、洗面奶、粉底或BB霜中的任一种。
9.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括护肤品学或化妆品学上可接受的辅料。
10.如权利要求1至9任一项所述的组合物的应用，其特征在于，所述组合物用于制备皮肤红肿、痤疮的皮肤外用制剂。
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