CN116046956A - 不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法 - Google Patents

不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，涉及乳品分析鉴定技术领域。本申请首先利用超高效液相色谱‑质谱联用技术对不同乳基婴幼儿配方奶粉中的磷脂分子组成进行全面分析，随后通过多元统计分析方法得到偏最小二乘判别分析的VIP得分图和载荷图，建立不同乳基婴幼儿配方奶粉的磷脂指纹图谱并筛选出标志性磷脂；然后通过磷脂指纹图谱和标志性磷脂对乳基成分进行判断。因此，本发明分析鉴定方法与现有乳粉掺假检验方法相比最大的特点在于并不是针对某一特定掺假物进行检测，更不需要对每一种可能的掺假物进行检测，只需要进行一次磷脂指纹图谱的测定，然后同判定图谱进行比较即可，而且在掺假物种类未知的情况下该方法同样有效。

Description

不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法
技术领域
本发明涉及乳品分析鉴定技术领域，尤其是涉及一种不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法。
背景技术
目前针对婴幼儿配方奶粉掺假领域的相关研究较少，已有的技术研究主要集中在近红外光谱和液相色谱等方法，且主要集中在磷脂之外的其他成分。婴幼儿配方奶粉是母乳供应不足时母乳的理想替代品，对于婴幼儿的健康成长至关重要。婴幼儿配方奶粉主要以牛乳作为基质，其次是羊乳和大豆蛋白占有市场一小部分的比例，形成了以牛乳基为主的婴幼儿配方奶粉市场。乳基基质是婴幼儿配方奶粉中主要的脂肪来源，根据婴幼儿的个体差异，不同类型婴幼儿配方奶粉适配不同婴幼儿食用，以避免由于婴幼儿配方奶粉选择不当造成的个体过敏等其他不良健康现象。
近年来，羊乳配方奶粉由于其低致敏性，高营养价值，易消化吸收及独特的风味等优势，受到了广大消费者的追捧，成为婴儿乳品行业热销产品。但是，羊乳的产量较牛乳低、原料成本较高，并且受季节性变化影响，因此生产厂家受到经济利益的驱使，将价格更低、产量较高的牛乳奶粉掺入羊乳配方奶粉的掺假现象频繁出现。与此同时，大豆分离蛋白作为来源广泛且价格低廉的原材料，也被用于制作婴幼儿配方奶粉，以避免牛乳和羊乳等乳基制品带来的婴儿乳糖不耐受或乳制品过敏等现象。
婴幼儿配方奶粉中的掺假行为不仅对消费者的经济利益造成损害，掺入的乳过敏原更对乳过敏消费者的健康形成威胁。不同乳基来源的婴幼儿配方奶粉价格差异较大，这种价格差异是在市场上发现的欺诈和不安全产品的动机。这种欺诈行为不仅损害了正品制造商的声誉，还给可能食用掺假产品的婴儿带来了健康问题。为了缓解这一问题，拥有有效的工具来验证婴幼儿配方乳粉的真实性至关重要。
目前已有的许多鉴别乳制品掺假的方法，例如：电泳、免疫学技术、液相色谱、气相色谱、差示扫描量热法、拉曼光谱法、高效液相色谱-质谱联用技术、基于检测DNA的PCR法和检测蛋白质的ELISA法等，虽然在一定程度上可以解决乳制品掺假相关问题，但却各有不足。
例如：1、根据不同乳品中所含各种脂肪酸含量的不同为依据进行检测分析的高效液相色谱法，其前处理分析复杂，而且乳粉中脂肪酸分子组成多样，检测准确度有待提高；2、根据筛选出指标性香气化合物检测物质的气相色谱分析法，由于乳粉中香气分子组成复杂，气相色谱前处理需要衍生化，衍生化需要较长时间并且复杂的衍生过程中发生的化学反应可能造成实验误差；3、根据牛特异性基因-线粒体12S rRNA基因中的片段为靶基因进行检测的PCR法，由于PCR法基于指数扩增的检测机理，其检测误差较大。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，该方法可准确地鉴定不同乳基婴幼儿配方奶粉是否添加了其他乳源成分，或不含该乳源成分而冒充该乳基婴幼儿配方奶粉。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
根据本发明的一个方面，一种不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，所述分析鉴定方法主要通过超高效液相色谱-质谱联用技术结合偏最小二乘判别分析的方法对配方乳粉中的脂质成分进行分析而得到。
本发明提供的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，是通过采用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)与有监督的偏最小二乘判别分析(Partialleast-squares discrimination analysis，PLS-DA)相结合的方法对配方乳粉中的脂质成分进行分析而得到的。本发明首先利用超高效液相色谱-质谱联用技术对不同乳基婴幼儿配方奶粉中的磷脂分子组成进行全面分析，然后通过多元统计分析方法得到偏最小二乘判别分析的VIP得分图和载荷图，建立不同乳基婴幼儿配方奶粉的磷脂指纹图谱并筛选出标志性磷脂；然后通过磷脂指纹图谱和标志性磷脂对乳基成分进行判断。因此，本发明分析鉴定方法与现有乳粉掺假检验方法相比最大的特点在于并不是针对某一特定掺假物进行检测，更不需要对每一种可能的掺假物进行检测，只需要进行一次磷脂指纹图谱的测定，然后同判定图谱进行比较即可，而且在掺假物种类未知的情况下该方法同样有效。
优选地，本申请分析方法还可总结如下：本申请首先通过超高效液相色谱-质谱联用法定性定量分析磷脂组成，结合偏最小二乘判别分析法建立未掺假不同乳基婴幼儿配方奶粉磷脂的指纹图谱库，并筛选出来了未掺假的不同乳基婴幼儿配方奶粉的特征磷脂。然后，利用最小二乘判别分析，确定了用于鉴别不同乳基婴幼儿配方奶粉的指标性磷脂分子种类。最后，将测得的待测样品中的磷脂组成与未掺假的婴幼儿配方奶粉中的特征磷脂进行比较，可确定待测样品是否含有该乳基，确定待测样品是否掺假，此方法能够直观、快速地对待测物进行判断。
进一步的，所述不同乳基成分婴幼儿配方奶粉包括：羊乳基婴幼儿配方奶粉、牛乳基婴幼儿配方奶粉和豆乳基婴幼儿配方奶粉中的至少一种。
进一步的，所述脂质成分包括甘油磷脂和鞘脂；
优选地，所述脂质成分包括PE、PI、PS、PC、PA、PG、SM和Cer中的至少一种。
进一步的，所述方法包括以下步骤：
(a)、对不同乳基成分婴幼儿配方奶粉中的脂质成分利用超高效液相色谱-质谱联用技术进行分析，得到不同乳基成分婴幼儿配方奶粉中的脂质成分定量数据；
(b)、将步骤(a)中得到的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的脂质成分定量数据进行偏最小二乘判别分析得到载荷图和VIP分值，并根据VIP分值筛选得到差异性磷脂分子；
随后依据不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的偏最小二乘判别分析数据，得到差异性磷脂分子表达模型；
(c)、利用超高效液相色谱-质谱联用技术对待测配方乳粉中的差异性磷脂分子进行定量分析，随后与步骤(c)的差异性磷脂分子表达模型进行对比，判断待测乳品的乳基成分以及是否掺假。
图1为本申请不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法的路线示意图。
由图1可知，本申请不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法包括以下步骤：
A、不同乳基婴幼儿配方奶粉(羊乳基、牛乳基及豆基)磷脂组成分析：
首先对乳粉进行前处理制得乳液，随后利用超高效液相色谱-质谱联用技术对不同乳基婴幼儿配方奶粉(牛乳基、羊乳基、豆基)中的磷脂进行定性定量分析，得到其中磷脂的组成；
B、不同乳基婴幼儿配方奶粉特征磷脂的筛选：
通过婴幼儿配方奶粉各类磷脂组成的对比，分析不同类别婴幼儿配方奶粉的磷脂分子组成差异，分别作为不同乳基婴幼儿配方奶粉中的特征磷脂，即不同乳基婴幼儿配方奶粉的差异性磷脂；
C、特征磷脂指纹图谱库的建立：
建立不同乳基婴幼儿配方奶粉特征磷脂的指纹图谱；
D、将所述待测样品中的磷脂组成与所述未掺假的婴幼儿配方奶粉中特征磷脂进行比较，确定待测样品是否含有其他乳源成分，确定待测样品是否掺假。
进一步的，所述差异性磷脂分子的筛选方法为：根据偏最小二乘判别分析的载荷图和VIP分值，以VIP分值大于1为条件，筛选得到差异性磷脂分子。
更进一步的，所述差异性磷脂分子包括PC34:1(C16:0-C18:1)、PI34:2(C16:0-C18:2)、PE34:1(C16:0-C18:1)、PI36:1(C18:0-C18:1)、PC34:2(C16:0-C18:2)、SM42:1:2、PE34:2(C16:0-C18:2)、SM40:1:2、LPE18:1、PG32:1(C16:0-C16:1)、SM40:2:3、SM42:2:2、PE32:2(C16:0-C16:2)和LPE16:1。
进一步的，所述差异性磷脂分子表达模型包括：
Figure BDA0004106689350000051
需要说明的是本申请通过建立上述不同乳基婴幼儿配方奶粉的指纹图谱，对待测样品进行磷脂组成分析，与纯品婴幼儿配方奶粉进行指纹图谱比对，若待测样品的指纹图谱与纯品婴幼儿配方奶粉的指纹图谱重合或相似，则判定该待测样品与重合或相似的纯品婴幼儿配方奶粉为同一乳基，否则为掺假婴幼儿配方奶粉。另外，通过指纹图谱定性判断出为掺假婴幼儿配方奶粉后，还可根据差异性磷脂分子的表达含量，初步判断掺假的具体奶基种类。
进一步的，所述超高效液相色谱-质谱联用分析的液相色谱分离条件为：
色谱柱使用规格为150×4.6mm的液相色谱柱(Phenomenex,
Figure BDA0004106689350000063
2.6μm C18
Figure BDA0004106689350000064
)分离磷脂；
洗脱系统流动相为：洗脱液A(水/甲醇/乙腈1:1:1，5mM乙酸铵)，洗脱液B(异丙醇，5mM乙酸铵)。
进一步的，所述磷脂的梯度洗脱条件为：
Figure BDA0004106689350000065
进一步的，所述超高效液相色谱-质谱联用分析的质谱条件参数为：
Figure BDA0004106689350000062
Figure BDA0004106689350000071
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，是通过采用超高效液相色谱-质谱联用技术与偏最小二乘判别分析相结合的方法对配方乳粉中的脂质成分进行分析而得到的。本发明首先利用超高效液相色谱-质谱联用技术对不同乳基婴幼儿配方奶粉中的磷脂分子组成进行全面分析，然后通过多元统计分析方法得到偏最小二乘判别分析的VIP得分图和载荷图，建立不同乳基婴幼儿配方奶粉的磷脂指纹图谱并筛选出标志性磷脂；然后通过磷脂指纹图谱和标志性磷脂对乳基成分进行判断。因此，本发明分析鉴定方法与现有乳粉掺假检验方法相比最大的特点在于并不是针对某一特定掺假物进行检测，更不需要对每一种可能的掺假物进行检测，只需要进行一次磷脂指纹图谱的测定，然后同判定图谱进行比较即可，而且在掺假物种类未知的情况下该方法同样有效。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本申请不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法的路线示意图；
图2为本申请实施例3提供的不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉偏最小二乘判别分析的总览图；
图3为本申请实施例3提供的不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉的偏最小二乘判别分析二维图；
图4为申请实施例3提供的不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉的偏最小二乘判别分析三维图；
图5为本申请实施例3提供的不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉偏最小二乘判别分析的VIP得分图；
图6为本申请实施例3提供的不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉的偏最小二乘判别分析载荷图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行进一步地说明。
实施例1婴幼儿配方奶粉乳磷脂的提取
(1)、将婴幼儿配方奶粉制备为乳液：准确称取婴幼儿配方奶粉粉末约1.30g，加入9mL 65±5℃的超纯水，充分混匀、冷却后成了乳液。
(2)、化学试剂和标准品：
磷脂标准品包括PE36：2/PE31：1、PI34：1/PI31：1、PC36：2/PC31：1、PG34：1/PG31：1、SM42：1：2/SM35：1和Cer42：2：2(C24：1神经酰胺，批号：860525-01-06)/Cer42：2(C24：0神经酰胺，CAS：135941-18-3)购自Avanti Polar Lipids公司(阿拉巴斯特，美国)。
需要注意，PE36：2的缩写(同PE36-2)，冒号或“-”前后的阿拉伯数字分别表示碳原子数和不饱和双键的数目，该描述适用于其他甘油磷脂。例如：PE36：2的缩写意为36个碳原子和一个不饱和双键组成的磷脂酰乙醇胺。
另外，对于Cer42:2:2(同Cer42-2-2)的缩写，冒号或“-”前后的阿拉伯数字分别表示碳原子数、不饱和双键和羟基的数目，并且该描述适用于所有鞘脂。例如：Cer42：2：2的缩写意为42个碳原子和2个不饱和双键组成的神经酰胺，并带有2个羟基。
质谱级二氯甲烷、甲醇、乙腈和异丙醇购自默克公司(达姆施塔特，德国)。所有其他化学品都是分析级的，购自阿拉丁(上海，中国)。超纯水由Milli-Q系统(米利波尔，美国)提供。
(3)、磷脂提取步骤如下：
所有的标准品被溶解在了1mM复溶液(甲醇/二氯甲烷，1:1，v/v)中制备了不同浓度的标准溶液。
1、首先20μL PC34:1(C17:0-C14:1)(10.38mg/L)、20μL PE34:1(C17:0-C14:1)(9.64mg/L)、20μL SM35:1(10.00mg/L)、8μL PI34:1(C17:0-C14:1)(10.22mg/L)、4μLPG34:1(C17:0-C14:1)(9.81mg/L)、4μL Cer42:2(10.00mg/L)被加入到200μL乳液中，混匀。
2、紧接着加入了200μL超纯水、2mL甲醇和900μL二氯甲烷，混匀后再加入200μL超纯水和900μL二氯甲烷，3750×g离心15min，分离有机相和水相。
3、然后1mL超纯水、2.2mL甲醇和600μL二氯甲烷被加入到了有机相中，混匀，3000×g离心10min，有机相被吸取出来了备用。
4、将1.8mL二氯甲烷被加入到了水相中，混匀，3750×g离心15min，同样地有机相被收集。最后所有的有机相被合并，在温和的氮气流下被吹至近干，1mL复溶液用来溶解样品。
(4)、从提取的脂质中通过固相萃取分离出极性脂质。
首先，3mL正己烷被加入以活化硅胶柱，洗脱液被丢弃，加入1mL提取液，静置了5min。然后3mL正己烷/乙醚(8:2，v/v)和3mL正己烷/乙醚(1:1，v/v)分别用来洗脱非极性脂质(主要是甘油酯)。向硅胶柱中加入4mL甲醇进行第一次洗脱，2mL甲醇和2mL二氯甲烷/甲醇/水(3:5:2，v/v/v)溶液被用作第二次洗脱，磷脂被收集到了洗脱液中。收集的洗脱液在氮气下吹干，200μL复溶液被加入以用于分析磷脂。
实施例2超高效液相色谱-质谱联用技术
(1)、将实施例1提取得到的婴幼儿配方奶粉中的乳磷脂进行超高效液相色谱-质谱联用技术分析，所述超高效液相色谱-质谱联用技术的条件如下：
采用超高效液相色谱联用高分辨率质谱仪(Triple TOF 6600)，配备电喷雾电离源(ESI)、Pearkview 2.2、Analyst 1.7.1和MultiQuant 3.0.2数据处理系统，均购自ABSCIEX公司(美国)。
使用规格为150×4.6mm的液相色谱柱(Phenomenex,
Figure BDA0004106689350000101
2.6μm C18
Figure BDA0004106689350000102
)分离磷脂。
洗脱液A(水/甲醇/乙腈1:1:1，5mM乙酸铵)和B(异丙醇，5mM乙酸铵)，洗脱梯度示于表1中。进样量为2μL，流速为0.8mL/min，柱温为30℃作为色谱检测条件。
表1磷脂的梯度洗脱条件：
Figure BDA0004106689350000103
以ESI正离子模式检测鞘脂，负离子模式检测甘油磷脂。质谱具体条件参数见表2。
表2质谱条件参数：
Figure BDA0004106689350000111
(2)、定性分析：
用Peakview 2.2对Analyst 1.7.1收集到的甘油磷脂和鞘脂碎片进行定性分析。甘油磷脂直接通过脂肪酸酰基碎片识别定性，
本发明针对PE、PC、PG、PI、PS、PA、SM和Cer共八种磷脂亚类进行定性分析。其中PE、PG、PI、PS和PA的加合离子为“-H”，PC的加合离子为“+CH3COO”。SM包含O-链胆碱基团，通过中性丢失碰撞激活的鞘磷脂产生胆碱离子碎片m/z 184。Cer在正离子模式下很容易失水，形成[M-H2O+H]+，并且可以通过脂肪酸酰基的中性损失和酰胺键的解离产生的特有产物离子m/z 264或266进行鉴定。
(3)、定量分析：
本发明针对PE、PC、PG、PI、SM和Cer共六种磷脂亚类进行定量分析。采用内标法和外标法准确定量磷脂。各种磷脂的外标和内标分别为PC36:2/PC31:1、PE36:2/PE31:1、PI34:1/PI31:1、PG34:1/PG31:1、SM42:1；2/SM35:1、Cer42:2；2/Cer42:2，所有磷脂内标均为奇数碳(除Cer42:2外)。梯度外标为横坐标，外标与内标对应峰面积之比为纵坐标，制作标准曲线。回归方程和校正系数R2见表3。
表3分析方法的线性回归方程：
Figure BDA0004106689350000121
实施例3
以Y1、Y2、Y3作为未掺假羊乳基配方奶粉的标准品；以N1、N2、N3作为未掺假豆乳基配方奶粉的标准品；以Q1、Q2、Q3...Q12作为未掺假牛乳基配方奶粉的纯品，每个样品均进行了3次平行测定，选取该样品的平均值进行表示。利用实施例1的磷脂提取方法和实施例2的超高效液相色谱-质谱联用方法进行检测。
随后根据鉴定出的磷脂种类，统计分析采用偏最小二乘法，结合有监督的偏最小二乘判别分析(Partial least-squares discrimination analysis，PLS-DA)来区分不同乳基婴幼儿配方奶粉，偏最小二乘判别分析是一种复杂的监督聚类方法，它生成的判别曲面能最好地分离类。
具体数据如下表4～6所示：浓度单位：mg/L
表4：
Figure BDA0004106689350000122
Figure BDA0004106689350000131
表5：
Figure BDA0004106689350000132
Figure BDA0004106689350000141
表6：
Figure BDA0004106689350000142
Figure BDA0004106689350000151
基于上述偏最小二乘判别分析分析得到如下附图：
图2为不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉偏最小二乘判别分析的总览图；图2中BeanIF:豆基婴幼儿配方奶粉；Cow IF:牛乳基婴幼儿配方奶粉；GoatIF:羊乳基婴幼儿配方奶粉；
图3为不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉的偏最小二乘判别分析二维图；图3中BeanIF为豆基婴幼儿配方奶粉；Cow IF为牛乳基婴幼儿配方奶粉；Goat IF为羊乳基婴幼儿配方奶粉；
如图3所示，不同乳基婴幼儿配方奶粉按PC1(28.8％)和PC2(11.6％)分为三组，三组样本之间有很好的分离，累积贡献率为39.6％，作为不同乳基婴幼儿配方奶粉的磷脂指纹图谱。
图4为同纯品乳基婴幼儿配方奶粉的偏最小二乘判别分析三维图；图4中Bean IF为豆基婴幼儿配方奶粉；Cow IF为牛乳基婴幼儿配方奶粉；Goat IF为羊乳基婴幼儿配方奶粉。
如图4所示，不同乳基婴幼儿配方奶粉按PC1(28.8％)、PC2(11.6％)和PC3(9.7％)分为三组，其相对于二维图可以更明显的呈现三组样本之间的分离。
此外，本发明还评估了不同乳基婴幼儿配方奶粉中的各种磷脂的可变重要性投影VIP分数。
图5为不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉偏最小二乘判别分析的VIP得分图；图5中Bean IF为豆基婴幼儿配方奶粉；Cow IF为牛乳基婴幼儿配方奶粉；Goat IF为羊乳基婴幼儿配方奶粉；
图6为不同纯品乳基婴幼儿配方奶粉的偏最小二乘判别分析载荷图；图6中BeanIF为豆基婴幼儿配方奶粉；Cow IF为牛乳基婴幼儿配方奶粉；Goat IF为羊乳基婴幼儿配方奶粉；
上述VIP得分图和载荷图是偏最小二乘判别分析模型分析得到的两种分布图。其中，载荷图表示了所检测的变量(如磷脂分子)的分布情况，载荷图中的变量分布与得分图中样品的分布和位置相对应。
表7为不同乳基婴幼儿配方奶粉偏最小二乘判别分析的VIP得分图
Figure BDA0004106689350000161
Figure BDA0004106689350000171
由上述图4和表7显示，共有14种差异性磷脂分子对VIP有显著贡献(VIP>1.0)，分别为PC34:1、PI34:2、PE34:1、PI36:1、PC34:2、SM42:1:2、PE34:2、SM40:1:2、LPE18:1、PG32:1、SM40:2:3、SM42:2:2、PE32:2、LPE16:1。
由上述偏最小二乘判别分析数据可以得到如下差异性磷脂分子表达模型：
表8差异性磷脂分子表达模型：
Figure BDA0004106689350000172
Figure BDA0004106689350000181
需要说明的是，上述表格中的“低定量”、“高定量”是根据不同乳基婴幼儿配方奶粉(羊乳基、牛乳基及豆基)的原始数据进行相应的磷脂分子定量求平均值所得到的，通过不同乳基婴幼儿配方奶粉(羊乳基、牛乳基及豆基)对应数值的比较，含量最高的为高定量，含量最低的为低定量。
具体数据如下表9所示：
Figure BDA0004106689350000182
综上可知，利用本申请上述分析鉴定方法对待测样品进行磷脂组成分析后，与纯品婴幼儿配方奶粉进行指纹图谱比对，若待测样品的指纹图谱与纯品婴幼儿配方奶粉的指纹图谱重合或相似(例如图3、图4)，则判定该待测样品与重合或相似的纯品婴幼儿配方奶粉为同一乳基，否则为掺假婴幼儿配方奶粉，进而对乳粉是否有掺杂进行定性分析；
另外，本申请还可根据差异性磷脂分子的表达含量(例如图5、图6)，初步判断掺假的具体乳基种类。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述分析鉴定方法主要通过超高效液相色谱-质谱联用技术结合偏最小二乘判别分析的方法对配方乳粉中的脂质成分进行分析而得到。
2.根据权利要求1所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述不同乳基成分婴幼儿配方奶粉包括：羊乳基婴幼儿配方奶粉、牛乳基婴幼儿配方奶粉和豆乳基婴幼儿配方奶粉中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述脂质成分包括甘油磷脂和鞘脂；
优选地，所述脂质成分包括PE、PI、PC、PG、PA、PS、SM和Cer中的至少一种。
4.根据权利要求1～3任一项所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(a)、对不同乳基成分婴幼儿配方奶粉中的脂质成分进行超高效液相色谱-质谱联用技术分析，得到不同乳基成分婴幼儿配方奶粉中的脂质成分定量数据；
(b)、将步骤(a)中得到的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的脂质成分定量数据进行偏最小二乘判别分析得到偏最小二乘判别分析的载荷图和VIP分值，并根据VIP分值筛选得到差异性磷脂分子；
随后依据不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的偏最小二乘判别分析数据，得到差异性磷脂分子表达模型；
(c)、利用超高效液相色谱-质谱联用技术对待测配方乳粉中的差异性磷脂分子进行定量分析，随后与步骤(c)的差异性磷脂分子表达模型进行对比，判断待测乳品的乳基成分以及是否掺假。
5.根据权利要求4所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述步骤(b)差异性磷脂分子的筛选方法为：根据偏最小二乘判别分析的载荷图和VIP分值，以VIP分值大于1为条件，筛选得到差异性磷脂分子。
6.根据权利要求4所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述差异性磷脂分子包括PC34:1(C16:0-C18:1)、PI34:2(C16:0-C18:2)、PE34:1(C16:0-C18:1)、PI36:1(C18:0-C18:1)、PC34:2(C16:0-C18:2)、SM42:1:2、PE34:2(C16:0-C18:2)、SM40:1:2、LPE18:1、PG32:1(C16:0-C16:1)、SM40:2:3、SM42:2:2、PE32:2(C16:0-C16:2)和LPE16:1。
7.根据权利要求4所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述差异性磷脂分子表达模型包括：
Figure FDA0004106689340000021
8.根据权利要求4所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱联用分析的液相色谱分离条件为：
色谱柱使用规格为150×4.6mm的液相色谱柱(Phenomenex,
Figure FDA0004106689340000031
2.6μm C18
Figure FDA0004106689340000032
)分离磷脂；
洗脱系统流动相为：洗脱液A(水/甲醇/乙腈1:1:1，5mM乙酸铵)，洗脱液B(异丙醇，5mM乙酸铵)。
9.根据权利要求8所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述磷脂的梯度洗脱条件为：
Figure FDA0004106689340000033
10.根据权利要求4所述的不同乳基成分婴幼儿配方奶粉的分析鉴定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱联用分析的质谱条件参数为：
Figure FDA0004106689340000034
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116660443A (zh) * 2023-08-01 2023-08-29 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 假冒骆驼乳或骆驼乳中是否掺杂其它动物乳的鉴定方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112578053A (zh) * 2020-12-28 2021-03-30 北京工商大学 一种羊乳配方奶粉掺假的判别方法
CN112858558A (zh) * 2021-01-22 2021-05-28 陕西科技大学 一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法
CN112858559A (zh) * 2021-01-22 2021-05-28 陕西科技大学 一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法
CN114354814A (zh) * 2022-01-13 2022-04-15 青岛农业大学 一种用于检测羊乳制品中掺假牛乳的小分子标记物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112578053A (zh) * 2020-12-28 2021-03-30 北京工商大学 一种羊乳配方奶粉掺假的判别方法
CN112858558A (zh) * 2021-01-22 2021-05-28 陕西科技大学 一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法
CN112858559A (zh) * 2021-01-22 2021-05-28 陕西科技大学 一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法
CN114354814A (zh) * 2022-01-13 2022-04-15 青岛农业大学 一种用于检测羊乳制品中掺假牛乳的小分子标记物

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116660443A (zh) * 2023-08-01 2023-08-29 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 假冒骆驼乳或骆驼乳中是否掺杂其它动物乳的鉴定方法
CN116660443B (zh) * 2023-08-01 2023-10-13 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 假冒骆驼乳或骆驼乳中是否掺杂其它动物乳的鉴定方法

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