CN116041468A - 一种青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3及其编码基因和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医学领域，具体提供了一种青环海蛇抗菌肽Hydrostatin‑AMP3及其编码基因和应用。该青环海蛇抗菌肽Hydrostatin‑AMP3，具有如SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或，将SEQ ID NO:1的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸残基、且与青环海蛇抗菌肽Hydrostatin‑AMP3相关的由SEQ ID NO:1衍生的蛋白质。本发明通过对青环海蛇抗菌肽Hydrostatin‑AMP3进行活性研究，发现其在体外能够有效抑制细菌增殖，尤其对于临床分离的耐药肺炎克雷伯菌株的抑制效果优于美罗培南，在抗感染领域具有极大的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，是一种青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3及其编码基因和应用。
背景技术
肺炎克雷伯菌是临床中重要的条件致病菌之一，可引起肺炎、脑膜炎、眼内炎、肝脓肿及败血症等多种感染疾病。随着在临床中广泛和大量使用抗生素，泛耐药肺炎克雷伯菌不断增加，增加药物失效的风险。碳青霉烯药物美罗培南是抗感染战役中的最后防线，但肺炎克雷伯菌对美罗培南的耐药率在近十年一直呈持续上升趋势。更为严峻的是，世界范围内已经多年没有新的抗生素产生，面对即将无药可用的困境，我们迫切需要可以替代抗生素的新一代药物。
抗菌肽被认为是最有希望的抗生素替代药物。抗菌肽是一类在先天免疫系统中发挥抗微生物活性的天然多肽，一般分子量小于10000道尔顿，富含碱性氨基酸残基。它通过静电作用，吸附于带负电荷的细菌细胞膜，当达到一定浓度便会形成孔洞导致细菌死亡。传统抗生素一般影响胞内某个蛋白质或者代谢途径中的某个酶的表达，该细菌蛋白突变后，抗生素便会失去作用，从而产生抗生素耐药性细菌。而抗菌肽通过静电作用直接吸附作用于细菌细胞膜，由于这种性质不易改变，因此细菌很难产生耐药性。Cathelicidins是一个只存在于脊椎动物的抗菌肽家族，具有广谱抑菌活性，包括革兰氏阴性菌，阳性菌及真菌等。同时，Cathelicidins还具有免疫调节活性，在体内可充当免疫调节剂，因此一直是国际研究的热点。如今国内已有多种抗菌肽药物进入临床试验。来源于金环蛇的抗菌肽泡腾片Cathelicidins-BF，可用于治疗细菌性阴道炎，已进入了临床Ⅰ期。对糖足有显著疗效的PL-5喷雾剂，已进入临床Ⅲ期，有望成为中国首个抗菌肽药物。
本发明人通过对青环海蛇进行基因组测序和基因注释得到了一条Cathelicidins家族抗菌肽Hydrostatin-AMP3。
发明内容
本发明的目的在于提供一种青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3及其编码基因，以及该青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3在制备抗感染药物中的应用。
本发明的Hydrostatin-AMP3分子量小，杀菌作用强，盐稳定性和耐热性强，对耐药细菌具有较好的活性，有望成为新一代抗感染药物。
本发明通过对青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3进行活性研究，发现了Hydrostatin-AMP3对细菌的抑制活性，该抗菌肽在体外能够有效抑制细菌增殖，尤其对于临床分离的耐药肺炎克雷伯菌株的抑制效果优于美罗培南，在抗感染领域具有极大的临床应用前景。
本发明的第一方面，提供了一种青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3，所述的青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3，具有如下(a)或(b)或(c)或(d)的蛋白质：
(a)如SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)将SEQ ID NO:1的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸残基后所衍生的与SEQ ID NO:1具有相同活性的序列；
(c)将SEQ ID NO:1中的氨基酸序列在N端或C端加上1-10个氨基酸残基后所衍生的与SEQ ID NO:1具有相同活性的序列；
(d)将SEQ ID NO:1中的氨基酸序列在N端或C端连接聚乙二醇进行修饰，所衍生的与SEQ ID NO:1具有相同活性的序列。
本发明的第二方面，提供了一种青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的编码基因，为如下(ⅰ)或(ⅱ)的DNA分子：
(ⅰ)如SEQ ID NO:2所示的DNA分子；
(ⅱ)在严格条件下与(ⅰ)限定的DNA序列杂交且编码所述青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的DNA分子。
进一步的，所述的青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，是一种线性直链多肽，分子量为3249.21道尔顿，等电点为12.48。
本发明的第三方面，提供了上述青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3或者其编码基因在制备抗微生物感染药物中的应用。
进一步的，所述的抗微生物感染药物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、肺炎克雷伯菌等多种微生物具有抑制或杀灭作用。
本发明还提供了一种抗微生物感染药物，所述药物以青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3为唯一活性成分，或包含青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的药物组合物。
进一步的，所述药物与药剂学上的常规药用辅料制成药物制剂。
进一步的，所述药物制剂为片剂、颗粒剂、分散剂、胶囊剂、滴丸、注射剂、粉针剂或气雾剂。
本发明使用AlphaFold服务器对青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3进行结构和性质分析，发现它具有两亲性和α-螺旋结构，与Cathelicidin抗菌肽家族的成熟肽结构相似；同时使用DBAASP服务器预测青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的抗菌谱，结果认为它对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有抑制活性。通过微量肉汤稀释法检测青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3对常见菌株的最小抑菌浓度，证明抗菌肽Hydrostatin-AMP3具有较好的抑菌能力；进一步使用结晶紫染色法分析抗菌肽Hydrostatin-AMP3对生物膜的清除和抑制效果，证明Hydrostatin-AMP3不仅可以抑制生物膜的形成，还可以显著根除已形成的成熟生物膜；然后使用扫描电子显微镜，分析Hydrostatin-AMP3处理前后的肺炎克雷伯菌表面形态变化，证明它可能是通过影响细菌的细胞膜发挥作用。同时将小鼠成纤维细胞L929细胞与青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3进行共孵育，结果证明Hydrostatin-AMP3的细胞毒性极小。因此，青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3可作为活性成分进行抗微生物感染药物的研究。
本发明采用生物信息学分析工具得到编码青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的氨基酸序列，通过多肽合成仪合成，结构简单，便于制备。Hydrostatin-AMP3分子量小，毒性低，具有广谱抗菌活性。
Hydrostatin-AMP3对肺炎克雷伯菌具有明显抑制作用，效果优于美罗培南，有潜力作为抗感染的候选药物。
附图说明
图1是青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的结构预测图；
图2是Hydrostatin-AMP3的色谱分析结果；
图3是Hydrostatin-AMP3的质谱分析结果；
图4是不同浓度的Hydrostatin-AMP3对耐药肺炎克雷伯菌48的生物膜抑制效果；
图5是不同浓度的Hydrostatin-AMP3对耐药肺炎克雷伯菌48的生物膜清除效果；图6是扫描电子显微镜对经Hydrostatin-AMP3处理前后的耐药肺炎克雷伯菌48的表面变化；
图7是在不同浓度的氯化钠条件下，Hydrostatin-AMP3对大肠杆菌的最小抑菌浓度的变化；
图8是在不同温度条件下，Hydrostatin-AMP3对大肠杆菌的最小抑菌浓度的变化；
图9是不同浓度的Hydrostatin-AMP3对L929细胞存活率的影响；
图10是不同浓度的Hydrostatin-AMP3的溶血率。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但下列实施例不应看作对本发明的限制。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
用实施例3制得的Hydrostatin-AMP3进行实施例4-10的实验。以下实施例中所用的Hydrostatin-AMP3，由北京中科亚光生物科技有限公司合成，经HPLC检测纯度≥95％。
实施例1:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的结构
使用AlphaFold服务器模拟Hydrostatin-AMP3的3D结构，如图1所示，Hydrostatin-AMP3主要由α螺旋结构构成，一端带有无规则卷曲片段，分析其组成氨基酸，认为该抗菌肽具有两亲性，与已知阳离子抗菌肽的基本性质和结构相符，推测具有抗菌活性。
实施例2:预测青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的抗菌谱
使用DBAASP在线服务器预测Hydrostatin-AMP3的抗菌谱。阳性表示有活性，阴性表示无活性，其中对人血红细胞的“阳性”表示无溶血性。结果如表1所示，Hydrostatin-AMP3的抗菌谱包括革兰氏阳性菌和阴性菌，具体包括大肠杆菌，金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌等具有活性，而对人血红细胞和真菌无活性。上述结果表明Hydrostatin-AMP3对革兰氏阳性菌和阴性菌可能具有抑制活性，并且无溶血性。
表1
实施例3:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的合成
使用Fmoc法固相合成来源于青环海蛇的抗菌肽Hydrostatin-AMP3，使用VarianProStar 218高效液相色谱仪(图2)和Voyager-DE STR质谱(图3)分析其纯度及分子量。由结果可知纯度>95％，分子量为3249.21g/mol。
本发明的青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。基因序列如SEQ ID No:2所示。
Hydrostatin-AMP3：RITRHRWKRAVRKVGRFVRRYGPLIA(SEQ ID NO:1)
基因序列:
CGGATCACCAGACATCGCTGGAAAAGAGCTGTGAGGAAAGTAGGCCGTTTCGTGAGGCGATATGGGCCGCTCATCGCC(SEQ ID NO:2)
实施例4:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的最小抑菌浓度(MinimalInhibitory Concentration，MIC)
试验菌株金黄色葡萄球菌，大肠杆菌和痤疮丙酸杆菌均购自上海复祥生物。肺炎克雷伯菌临床分离株由上海市第十人民医院惠赠。使用微量肉汤2倍稀释法测定最小抑菌浓度。
具体实验步骤为：将试验菌株接种到MH肉汤培养基(购自青岛海博生物)中，37℃振荡培养到对数生长期，然后使用新鲜MH肉汤培养基将培养至对数生长期的细菌培养液稀释至1×106cfu/ml备用。使用MH肉汤配制Hydrostatin-AMP3溶液，氨苄青霉素和美罗培南溶液，浓度分别为1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml，16μg/ml，32μg/ml，64μg/ml和128μg/ml。在无菌96孔板各孔中先加入100μl Hydrostatin-AMP3溶液，氨苄青霉素溶液或美罗培南溶液，再加入备用的细菌稀释液100μl。37℃条件下静置培养16-20小时。使用酶联免疫检测仪检测溶液在波长600nm处的吸光值。结果如表2所示，Hydrostatin-AMP3对革兰氏阳性菌和阴性菌都具有抑菌活性，并且相比于氨苄青霉素和美罗培南，Hydrostatin-AMP3对肺炎克雷伯菌的抑菌浓度更低。上述结果表明Hydrostatin-AMP3具有显著的抑菌作用。
表2
实施例5:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3对耐药肺炎克雷伯菌48的生物膜抑制活性
试验菌株接种至MH肉汤培养基中，37℃振荡培养到对数生长期，使用MH新鲜肉汤培养基将其稀释至1×106cfu/ml，备用。使用MH肉汤培养基制备Hydrostatin-AMP3的连续稀释液，浓度分别为0.5倍，1倍，2倍，4倍和8倍的最小抑菌浓度值(MIC)。向96孔板每孔中加入Hydrostatin-AMP3溶液100μl，加入细菌稀释液100μl，空白对照中加入100μl细菌稀释液和100μl MH肉汤培养基，在37℃下静置培养24小时。用无菌PBS冲洗3次，去除浮游细菌。加入甲醇固定20分钟。去除甲醇，无菌晾干。加入100μl由PBS配制的1％结晶紫溶液，染色30分钟，去除结晶紫，用灭菌去离子水冲洗3次。加入100μl无水乙醇溶解孔底形成的生物膜，使用酶联免疫检测仪检测溶液在波长600nm处的吸光值，以半定量地估计生物膜的形成量。
结果见图4，Hydrostatin-AMP3与细菌作用后，生物膜形成量显著低于空白对照组，抑制作用呈浓度相关性。上述结果说明：Hydrostatin-AMP3可以显著抑制耐药肺炎克雷伯菌生物膜的形成。
实施例6:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的生物膜清除活性
试验菌株接种至MH肉汤培养基中，37℃振荡培养到对数生长期，使用MH新鲜肉汤培养基将其稀释至1×106cfu/ml。在96孔板每孔中加入细菌稀释液100μl，并在37℃静置培养24小时。用无菌PBS冲洗3次，加入100μl Hydrostatin-AMP3的MH肉汤连续稀释液，浓度分别为0.5倍，1倍，2倍，4倍和8倍的最小抑菌浓度值(MIC)，空白对照孔中加入等体积的MH肉汤培养基。37℃下静置培养24小时，无菌PBS冲洗3次。加入甲醇固定20分钟。去除甲醇，无菌晾干。加入100μl由PBS配制的1％结晶紫溶液，染色30分钟，去除结晶紫，用灭菌去离子水冲洗3次。加入100μl无水乙醇，使用酶联免疫检测仪检测溶液在波长600nm处的吸光值，以半定量地估计生物膜的剩余量。
结果见图5，Hydrostatin-AMP3可以明显降低成熟生物膜的剩余量，与空白对照组形成显著差异。上述结果说明：Hydrostatin-AMP3可以显著根除耐药肺炎克雷伯菌的成熟生物膜。
实施例7:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3作用前后的细菌表面形态变化
试验菌株接种至MH肉汤培养基中，37℃振荡培养到对数生长期，使用MH新鲜肉汤培养基将其调整至1×108cfu/ml，备用。使用灭菌PBS配制浓度为4倍最小抑菌浓度值的Hydrostatin-AMP3溶液，备用。加入1ml细菌稀释液至1.5ml离心管中，3000rpm离心5分钟，吸弃上清，灭菌PBS洗涤1次，加入上述配制的Hydrostatin-AMP3溶液500μl，对照组加等量PBS。在37℃孵育30分钟，3000rpm离心5分钟，吸弃上清，沿管壁缓慢加入预冷的固定液2.5％(v/v)戊二醛，4℃固定24小时。吸弃戊二醛，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品3次，每次15分钟。用1％的锇酸溶液固定样品2小时；小心去除锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品3次，每次15分钟；用30％，50％，70％，80％，90％，100％梯度乙醇脱水，每个梯度处理15分钟，最后脱水的100％乙醇处理2次，每次20分钟。弃掉乙醇，加入乙醇与醋酸异戊酯的混合液(V/V＝1/1)处理30分钟，再用纯醋酸异戊酯处理1小时。临界点干燥，镀膜，上样观察。
由图6可见正常状态下的肺炎克雷伯菌呈典型的棍棒状和完整表面，经Hydrostatin-AMP3处理后，菌体形态明显发生改变。细胞扭曲变形起泡，完整性丧失，质膜受到破坏，内容物发生泄露。上述结果说明：Hydrostatin-AMP3可能通过影响细菌细胞膜的完整性发挥作用，相比传统抗生素，不易引起细菌的广泛耐药性。
实施例8:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的体外稳定性
(1)Hydrostatin-AMP3在不同浓度盐溶液中的稳定性
试验菌株接种至MH肉汤培养基中，37℃振荡培养到对数生长期，使用终浓度分别为0mM，50mM，100mM，150mM，200mM氯化钠的MH新鲜肉汤培养基将其调整至1×106cfu/ml，备用。用含相应氯化钠浓度的MH肉汤稀释Hydrostatin-AMP3至系列浓度：1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml，16μg/ml，32μg/ml，64μg/ml，128μg/ml。在96孔板中，加入100μlHydrostatin-AMP3溶液，加入100μl上述细菌稀释液，37℃静置孵育18小时，使用酶联免疫检测仪检测溶液在波长600nm处的吸光值，通过最小抑菌浓度变化来证明Hydrostatin-AMP3的盐稳定性。
结果如图7所示，Hydrostatin-AMP3不具有盐依赖性，当NaCl浓度低于或等于200mM时，Hydrostatin-AMP3的最小抑菌浓度基本保持不变。上述结果说明：盐溶液的钠离子基本不影响Hydrostatin-AMP3的抑菌活性。
(2)Hydrostatin-AMP3的耐热性
试验菌株接种至MH肉汤培养基中，37℃振荡培养到对数生长期，使用MH新鲜肉汤培养基将其调整至106cfu/ml，备用。生理盐水稀释Hydrostatin-AMP3为1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml，16μg/ml，32μg/ml，64μg/ml，128μg/ml。在不同温度(4℃、37℃、80℃和100℃)条件下孵育1小时。在96孔板各孔中加入100μl Hydrostatin-AMP3溶液，100μl上述细菌稀释液，37℃静置孵育16-20小时，使用酶联免疫检测仪检测溶液在波长600nm处的吸光值，通过最小抑菌浓度变化来证明Hydrostatin-AMP3的耐热性。
结果如图8所示，Hydrostatin-AMP3经过不同条件处理后，最小抑菌浓度值只是略有增加。上述结果说明：Hydrostatin-AMP3具有极强的耐热性和稳定性，其活性不易受到外界温度条件影响。
实施例9:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的细胞毒性
小鼠成纤维细胞L929细胞(购自中国科学院上海生化与细胞所)使用含10％胎牛血清(购自Gibco公司)，1‰青链双抗(购自源培生物)的RPMI-1640培养基(购自Hyclone公司)培养。
具体实验步骤为：传代培养的L929细胞用胰酶消化后重悬于含双抗及血清的培养基，调整细胞密度为2×104个/ml，接种100μl于96孔细胞培养板，CO2培养箱培养过夜。更换为含系列终浓度Hydrostatin-AMP3的培养基100μl，细胞于CO2培养箱继续培养24小时。各孔加入10μl Cell Counting Kit-8试剂，轻轻吹打混匀，培养箱内继续培养15-30分钟。使用酶联免疫检测仪检测波长480nm处的吸光度值，根据公式：细胞存活率＝(吸光度值对照组-吸光度值实验组)/吸光度值对照组*100％，计算不同浓度的Hydrostatin-AMP3对L929细胞存活率的影响，
结果如图9所示，当Hydrostatin-AMP3浓度为300μg/ml时，细胞存活率为93.24％。上述结果表明：Hydrostatin-AMP3在活性范围内，对L929细胞几乎不具有毒性。
实施例10:青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3对人血红细胞的溶血活性
使用生理盐水稀释Hydrostatin-AMP3至浓度为7.86μg/ml，15.63μg/ml，31.25μg/ml，62.5μg/ml，125μg/ml，250μg/ml，生理盐水作为阴性对照，1％Triton X-100溶液为阳性对照。
具体实验步骤为：分别加入200μl生理盐水，1％Triton X-100溶液或系列浓度的Hydrostatin-AMP3至1.5ml离心管中，每管加入50μl新鲜的2％人血细胞悬液，混合均匀后置于CO2培养箱孵育30分钟。以25℃，2000rpm离心5分钟。转移上清液180μl至96孔细胞培养板内，使用酶联免疫检测仪检测波长540nm处的吸光度值，并计算溶血率。
结果如图10所示，当Hydrostatin-AMP3浓度高达250ug/ml时，溶血率约为6％。上述结果表明Hydrostatin-AMP3具有极好的安全性。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
Claims (10)
1.一种青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3，其特征在于：所述的青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3，具有如下(a)或(b)或(c)或(d)的蛋白质：
(a)如SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)将SEQ ID NO:1的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸残基后所衍生的与SEQ ID NO:1具有相同活性的序列；
(c)将SEQ ID NO:1中的氨基酸序列在N端或C端加上1-10个氨基酸残基后所衍生的与SEQ ID NO:1具有相同活性的序列；
(d)将SEQ ID NO:1中的氨基酸序列在N端或C端连接聚乙二醇进行修饰，所衍生的与SEQ ID NO:1具有相同活性的序列。
2.根据权利要求1所述的一种青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3，其特征在于：所述青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，是一种线性直链多肽，分子量为3249.21道尔顿，等电点为12.48。
3.一种如权利要求1或2所述的青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的编码基因，其特征在于：所述编码基因为如下(ⅰ)或(ⅱ)的DNA分子：
(ⅰ)如SEQ ID NO:2所示的DNA分子；
(ⅱ)在严格条件下与(ⅰ)限定的DNA序列杂交且编码所述青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的DNA分子。
4.如权利要求1或2所述的青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3在制备抗微生物感染药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的抗微生物感染药物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌或肺炎克雷伯菌具有抑制或杀灭作用。
6.如权利要求3所述的青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的编码基因在制备抗微生物感染药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的抗微生物感染药物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌或肺炎克雷伯菌具有抑制或杀灭作用。
8.一种抗微生物感染药物，其特征在于：所述药物以青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3为唯一活性成分，或包含青环海蛇抗菌肽Hydrostatin-AMP3的药物组合物。
9.根据权利要求8所述的一种抗微生物感染药物，其特征在于：所述药物与药剂学上的常规药用辅料制成药物制剂。
10.根据权利要求9所述的一种抗微生物感染药物，其特征在于：所述药物制剂为片剂、颗粒剂、分散剂、胶囊剂、滴丸、注射剂、粉针剂或气雾剂。
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