CN116035043A - 冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法,冬季火龙果冻害防治制剂包括中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。本发明提供的冬季火龙果叶面冻害防治制剂,是由广谱杀灭有害病原菌的中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物组成,所用原料绿色环保,具有生产成本低、高效防治冬季火龙果叶面冻害,对种植环境无污染的优点。

Description

冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法
技术领域
本发明涉及种植技术领域。更具体地说,本发明涉及一种冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法。
背景技术
火龙果味道香甜,具有很高的营养价值,它集于水果、花蕾、蔬菜、医药优点于一身。是一种绿色、环保果品和具有一定疗效的保健养分食品。火龙果为热带、亚热带水果,喜光耐阴、耐热耐旱、喜肥耐瘠。在温暖湿润、光线充足的环境下生长迅速,生长的最适温度为25-35℃。
由于火龙果是热带和亚热带水果,在我国一开始只能在两广、海南、福建南部等地区种植,随着火龙果大棚种植技术研发成功并得到推广,我国其他地区,如江苏、浙江、安徽这些地区也能利用大棚技术种植火龙果。但当环境温度低于10℃时火龙果植株出现低温休眠,而低温休眠状态下的火龙果时间超过3天,就特别容易患病,最直观的表现就是火龙果的叶片慢慢冻坏并腐烂发臭。而全国除了海南,两广部分地区,其他地区冬季较长时间最低温低于10℃是很正常的,即使采用大棚保温技术,在遇到极端严寒天气,也难以保证大棚内温度在10℃以上。
冬季引起火龙果叶片腐烂病原较复杂,有色二孢、壳二孢、茎点霉、桃吉贝氏菌、念珠菌等多种病原菌参与,这些病原趁火龙果植株处于低温休眠下,抗逆性降低,入侵火龙果植株导致叶片病变腐烂。目前的常见处理方式为将不严重的腐烂部位清理一下,喷洒化学药剂,如喷洒森锰锌、甲基硫菌灵、多菌灵、丙环唑、氟硅唑这些化学制剂。这些化学制剂毒性较大,会无选择地杀伤各种生物,其中包括一些有益的动物,比如青蛙、蜜蜂、蚯蚓等,这些有益动物的减少会导致害虫数量的增加,从而影响农业生产。
近年来,国家农业部门也发现高度依赖农药化肥带来的危害,高度重视农药化肥减施增效技术的研究与推广。针对经济作物火龙果的冻害特点,研发一种绿色、无毒、高效的叶面冻害防治制剂,对火龙果的绿色种植很有意义。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题,并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法,其中,冬季火龙果冻害防治制剂是由广谱杀灭有害病原菌的中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物组成,所用原料绿色环保,具有生产成本低、高效防治防治冬季火龙果叶面冻害,对种植环境无污染的优点。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点,提供了一种冬季火龙果冻害防治制剂,其包括中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
优选的是,所述的冬季火龙果冻害防治制剂,中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的质量比为1:1.5。
优选的是,所述的冬季火龙果冻害防治制剂,所述中药提取物包括以下重量份数的原料:松针35~50份、大蒜素35~40份、大青叶30~35份、黄芪20~35份、黄柏25~30份、黄连20~25份、苦参15~20份。
优选的是,所述的冬季火龙果冻害防治制剂,所述中药提取物的制备方法包括:
步骤a、按重量份数计,将松针35~50份、大蒜素35~40份、大青叶30~35份、黄芪20~35份、黄柏25~30份、黄连20~25份和苦参15~20份,分别粉碎过50~100目筛网,然后混合均匀,得粉末混合物;
步骤b、将粉末混合物3倍重量的水煮沸,将粉末混合物加入沸水中,搅拌均匀继续煮沸5min,得糊状物,将糊状物趁热置于-25℃的环境下冷冻,24h后取出,于25℃下自然解冻,得冻融后的糊状物;
步骤c、将冻融后的糊状物与体积分数为95%的乙醇按重量比为1:3的比例混合,常温浸提3h后抽滤,重复操作浸提、抽滤3次,合并三次滤液,减压蒸馏去除乙醇,得醇提液;
步骤d、将醇提液与其5倍体积的水混合,并在60℃恒温水浴下,真空旋转浓缩至与步骤a中粉末混合物等重量,即得所述中药提取物。
优选的是,所述的冬季火龙果冻害防治制剂,所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的制备方法为:将胶冻样类芽孢杆菌接种于一级培养基中,于温度为32℃下培养48h;然后转接到二级培养基中,于温度为30~32℃、转速为150~180r/min的摇床上培养48h,得种子培养液;将种子培养液以体积分数为5%的接种比例,接种至装有发酵培养基的发酵罐中,于温度为30~34℃、转速为150~180r/min条件下通入空气进行发酵培养,直至发酵液中95%以上的菌体产生芽孢,且芽孢的数量超过10亿个/mL停止发酵,其中,发酵过程中空气的通入量为发酵罐体积的1/20;将发酵液浓缩、低温干燥,制得孢子粉,即得所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的制备方法,将中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物以质量比为1:1.5的比例混合均匀,装瓶密封,即得。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的使用方法,将所述冬季火龙果冻害防治制剂与水混匀得冻害防治制剂水溶液,将冻害防治制剂水溶液均匀的喷雾至火龙果茎杆上;
在气温即将降至10℃的前一个月,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为200~300公斤/亩,每半个月喷1次;
在气温低于10℃且在火龙果叶面发生冻害之前,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为200~300公斤/亩,每周喷1次;
在火龙果叶面发烧冻害之后,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:200mL,施用量为200~300公斤/亩,每2天喷1次,连续喷3~5次;待气温低于10℃时,每周喷1次。
本发明至少包括以下有益效果:本发明提供一种冬季火龙果冻害防治制剂,其是由广谱杀灭有害病原菌的中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物组成,所用原料绿色环保,具有生产成本低、高效防治防治冬季火龙果叶面冻害,对种植环境无污染的优点。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解,本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是,下述实施方案中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
本发明提供一种冬季火龙果冻害防治制剂,其包括中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
在上述技术方案中,本发明提供一种冬季火龙果冻害防治制剂,其是由广谱杀灭有害病原菌的中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物组成,所用原料绿色环保,具有生产成本低、高效防治防治冬季火龙果叶面冻害,对种植环境无污染的优点。
另一种技术方案中,所述的冬季火龙果冻害防治制剂,中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的质量比为1:1.5。将中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物按照一定比例混合,制得具有良好冻害防治的植物用药,在保证功效的同时,尽可能降低成本。
另一种技术方案中,所述的冬季火龙果冻害防治制剂,所述中药提取物包括以下重量份数的原料:松针35~50份、大蒜素35~40份、大青叶30~35份、黄芪20~35份、黄柏25~30份、黄连20~25份、苦参15~20份。
上述技术方案中,松针提取物富含糖类、粗蛋白、粗脂肪、多种氨基酸和多种微量矿元素、多种维生素、生物黄酮类物质、精油、叶绿素、不饱和脂肪酸、酶与辅酶等活性物质,松针中还含有杀菌素,即松针不但具有一定的营养价值、多种生理活性功能作用,还具有杀菌功效;大蒜素(Allicin)是从葱科葱属植物大蒜(Allium Sativum)的鳞茎(大蒜头)中提取的一种有机硫化合物,也存在于洋葱和其他葱科植物中,大蒜素是一种广谱抗菌药;大青叶具有杀菌的作用,对桃吉贝氏菌、念珠菌等多种病原菌均有一定抑制作用;在冻害防治制剂中加入黄芪后,能够逆转病原物对杀菌剂的抗药性,从而提高中药杀菌剂的防治效果;黄柏提取物对病菌菌丝生长和孢子萌发均有显著的抑制作用;黄连中含有大量打的生物碱,其对植物病原菌具有高效的抑制作用;苦参中的苦参碱微乳杀菌剂属国内首创高效广谱植物杀菌剂;本发明中药提取物都是选用绿色安全的原料组成,不仅具有高效的杀菌,防冻害、杀灭害虫的功效,且无任何有害成分,对土壤无危害;多种广谱杀菌中药进行有机结合,并合理调控各个组分的用量,遵循中药的君臣佐使的配伍原则,使得各种中药组分发挥本身的药效的同时,各个组分之间协同功效发挥至最大。
另一种技术方案中,所述的冬季火龙果冻害防治制剂,所述中药提取物的制备方法包括:
步骤a、按重量份数计,将经挑选、洗净和干燥后的,松针35~50份、大蒜素35~40份、大青叶30~35份、黄芪20~35份、黄柏25~30份、黄连20~25份和苦参15~20份,分别粉碎过50~100目筛网,然后混合均匀,得粉末混合物;
步骤b、将粉末混合物3倍重量的水煮沸,将粉末混合物加入沸水中,搅拌均匀继续煮沸5min,得糊状物,将糊状物趁热置于-25℃的环境下冷冻,24h后取出,于25℃下自然解冻,得冻融后的糊状物;
步骤c、将冻融后的糊状物与体积分数为95%的乙醇按重量比为1:3的比例混合,常温浸提3h后抽滤,重复操作浸提、抽滤3次,合并三次滤液,减压蒸馏去除乙醇,得醇提液;
步骤d、将醇提液与其5倍体积的水混合,并在60℃恒温水浴下,真空旋转浓缩至与步骤a中粉末混合物等重量,即得所述中药提取物;
上述各个步骤中除了冷冻环节外,其他工作环节的环境为常温,相对湿度均为30-70%。
在上述技术方案中,本发明公开了中药提取物的制备方法,其经过了挑拣→清洗→干燥→粉碎→加适量沸水搅拌成糊状→冻融→醇提→浓缩,制备工艺方法简单,成本较低,采用冷冻破壁代替常规的需要借助专门破壁设备破壁,大大简化了生产设备,降低能耗和生产成本。
另一种技术方案中,所述的冬季火龙果冻害防治制剂,所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的制备方法为:将胶冻样类芽孢杆菌接种于一级培养基(一级培养基选用土豆培养基)中,于温度为32℃下培养48h;然后转接到二级培养基(二级培养基选用察氏培养基)中,于温度为30~32℃、转速为150~180r/min的摇床上培养48h,得种子培养液;将种子培养液以体积分数为5%的接种比例,接种至装有发酵培养基的发酵罐中,于温度为30~34℃、转速为150~180r/min条件下通入空气进行发酵培养,直至发酵液中95%以上的菌体产生芽孢,且芽孢的数量超过10亿个/mL停止发酵,其中,发酵过程中空气的通入量为发酵罐体积的1/20;将发酵液浓缩、低温干燥,制得孢子粉,即得所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
在上述技术方案中,本发明公开了胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的制备方法,其最终得到的代谢产物以果聚糖为主,胶冻样类芽孢杆菌又称硅酸盐细菌,是一种革兰氏阴性细菌,作为土壤中的一种重要功能菌,在自然界中分布广泛,胶冻样类芽孢杆菌的代谢产物果聚糖,可以促进植物生长吸收、抑制病原菌的生长。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的制备方法,将中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物以质量比为1:1.5的比例混合均匀,装瓶密封,即得。将胶冻样类芽孢杆菌与中药提取物进行混合形成冻害防治制剂,能够高效防治冬季火龙果叶面冻害,进而达到提高火龙果产量的有益效果。
本技术方案还可以包括以下技术细节,以更好地实现技术效果:
冬季火龙果冻害防治制剂的制备方法,具体包括以下步骤:
步骤一、将中药提取物溶解于其4倍重量的体积分数为95%的乙醇中,得第一溶液;
步骤二、向第一溶液中加入成膜剂、防冻剂、渗透剂,充分搅拌均匀,得第二溶液,其中成膜剂、防冻剂和渗透剂与中药提取物的重量比为0.1:0.2:0.1:1;
步骤三、将胶冻样类芽孢杆菌代谢产物分散于其3倍重量的琼脂糖水溶液中,于温度为28℃、转速为2700rpm/min的条件下搅拌,40min后置于-30℃的冷藏柜中冷藏7h,得胶冻样类芽孢杆菌代谢产物预处理块,胶冻样类芽孢杆菌代谢产物与步骤一中中药提取物的重量比为1.5:1;
步骤四、将胶冻样类芽孢杆菌代谢产物预处理块放入步骤二中的第二溶液中,静置5h后,冷冻干燥后粉碎至纳米颗粒,装瓶密封,即得。
所述成膜剂为透明质酸或蛋白粉;所述防冻剂包括重量比为1:1的芸薹素内酯和丙三醇;所述渗透剂为脯氨酸。
在上述技术方案中,本发明进一步公开了中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的混合方法,具体的,将中药提取物与成膜剂、防冻剂和渗透剂投入乙醇溶剂中混合,制得第二溶液;将胶冻样类芽孢杆菌代谢产物分散于琼脂糖水溶液中,经冷冻制得外表面具有很多孔洞的胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的气凝胶,随后将胶冻样类芽孢杆菌代谢产物预处理块,浸入第二溶液中,冷冻干燥去除溶剂乙醇,通过浸渍、冷冻干燥去除溶剂使得中药提取物以及其他添加剂均匀的吸附于胶冻样类芽孢杆菌代谢产物预处理块的孔洞中,制备得到的冻害防治制剂产物中中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物混合均匀,避免中药提取物与与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物直接简单混合,较难混合均匀,导致各功效组分分布不均匀,影响对火龙果叶面冻害防治效果。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的使用方法,将所述冬季火龙果冻害防治制剂与水混匀得冻害防治制剂水溶液,将冻害防治制剂水溶液均匀的喷雾至火龙果茎杆上;
在气温即将降至10℃的前一个月,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为200~300公斤/亩,每半个月喷1次;
在气温低于10℃且在火龙果叶面发生冻害之前,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为200~300公斤/亩,每周喷1次;
在火龙果叶面发烧冻害之后,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:200mL,施用量为200~300公斤/亩,每2天喷1次,连续喷3~5次;待气温低于10℃时,每周喷1次。
上述技术方案中,通过合理喷施冻害防治制剂,将预防与治疗叶面冻害进行结合,尽可能降低冬季低温时期火龙果因叶面冻害导致火龙果减产的损失,适用于规模化种植火龙果。
<实施例1>
本发明提供一种冬季火龙果冻害防治制剂,其包括重量比为1:1.5的中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
所述中药提取物包括以下重量份数的原料:松针35份、大蒜素35份、大青叶30份、黄芪20份、黄柏25份、黄连20份、苦参15份;
所述中药提取物的制备方法包括:
步骤a、按重量份数计,将经挑选、洗净和干燥后的,松针35份、大蒜素35份、大青叶30份、黄芪20份、黄柏25份、黄连20份和苦参15份,分别粉碎过50目筛网,然后混合均匀,得粉末混合物;
步骤b、将粉末混合物3倍重量的水煮沸,将粉末混合物加入沸水中,搅拌均匀继续煮沸5min,得糊状物,将糊状物趁热置于-25℃的环境下冷冻,24h后取出,于25℃下自然解冻,得冻融后的糊状物;
步骤c、将冻融后的糊状物与体积分数为95%的乙醇按重量比为1:3的比例混合,常温浸提3h后抽滤,重复操作浸提、抽滤3次,合并三次滤液,减压蒸馏去除乙醇,得醇提液;
步骤d、将醇提液与其5倍体积的水混合,并在60℃恒温水浴下,真空旋转浓缩至与步骤a中粉末混合物等重量,即得所述中药提取物;
上述各个步骤中除了冷冻环节外,其他工作环节的环境为常温,相对湿度均为30%。
所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的制备方法为:将胶冻样类芽孢杆菌接种于一级培养基中,于温度为32℃下培养48h;然后转接到二级培养基中,于温度为30℃、转速为150r/min的摇床上培养48h,得种子培养液;将种子培养液以体积分数为5%的接种比例,接种至装有发酵培养基的发酵罐中,于温度为30℃、转速为150r/min条件下通入空气进行发酵培养,直至发酵液中95%以上的菌体产生芽孢,且芽孢的数量超过10亿个/mL停止发酵,其中,发酵过程中空气的通入量为发酵罐体积的1/20;将发酵液浓缩、低温干燥,制得孢子粉,即得所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的制备方法,将中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物以质量比为1:1.5的比例混合均匀,装瓶密封,即得。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的使用方法,将所述冬季火龙果冻害防治制剂与水混匀得冻害防治制剂水溶液,将冻害防治制剂水溶液均匀的喷雾至火龙果茎杆上;
在气温即将降至10℃及以下的前一个月(依据天气预报预测未来天气情况,结合当地往年天气特点,在天气大降温(降至10℃及以下)的前一个月),所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为200公斤/亩,每半个月喷1次;总共喷施两次;
在气温低于10℃且在火龙果叶面发生冻害之前,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为200公斤/亩,每周喷1次;
在火龙果叶面发烧冻害之后,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:200mL,施用量为200公斤/亩,每2天喷1次,连续喷3次;待气温低于10℃时,每周喷1次。
<实施例2>
本发明提供一种冬季火龙果冻害防治制剂,其包括重量比为1:1.5的中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
所述中药提取物包括以下重量份数的原料:松针50份、大蒜素40份、大青叶35份、黄芪35份、黄柏30份、黄连25份、苦参20份;
所述中药提取物的制备方法包括:
步骤a、按重量份数计,将经挑选、洗净和干燥后的,松针50份、大蒜素40份、大青叶35份、黄芪35份、黄柏30份、黄连25份和苦参20份,分别粉碎过100目筛网,然后混合均匀,得粉末混合物;
步骤b、将粉末混合物3倍重量的水煮沸,将粉末混合物加入沸水中,搅拌均匀继续煮沸5min,得糊状物,将糊状物趁热置于-25℃的环境下冷冻,24h后取出,于25℃下自然解冻,得冻融后的糊状物;
步骤c、将冻融后的糊状物与体积分数为95%的乙醇按重量比为1:3的比例混合,常温浸提3h后抽滤,重复操作浸提、抽滤3次,合并三次滤液,减压蒸馏去除乙醇,得醇提液;
步骤d、将醇提液与其5倍体积的水混合,并在60℃恒温水浴下,真空旋转浓缩至与步骤a中粉末混合物等重量,即得所述中药提取物;
上述各个步骤中除了冷冻环节外,其他工作环节的环境为常温,相对湿度均为70%。
所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的制备方法为:将胶冻样类芽孢杆菌接种于一级培养基中,于温度为32℃下培养48h;然后转接到二级培养基中,于温度为32℃、转速为180r/min的摇床上培养48h,得种子培养液;将种子培养液以体积分数为5%的接种比例,接种至装有发酵培养基的发酵罐中,于温度为34℃、转速为180r/min条件下通入空气进行发酵培养,直至发酵液中95%以上的菌体产生芽孢,且芽孢的数量超过10亿个/mL停止发酵,其中,发酵过程中空气的通入量为发酵罐体积的1/20;将发酵液浓缩、低温干燥,制得孢子粉,即得所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的制备方法,将中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物以质量比为1:1.5的比例混合均匀,装瓶密封,即得。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的使用方法,将所述冬季火龙果冻害防治制剂与水混匀得冻害防治制剂水溶液,将冻害防治制剂水溶液均匀的喷雾至火龙果茎杆上;
在气温即将降至10℃及以下的前一个月(依据天气预报预测未来天气情况,结合当地往年天气特点,在天气大降温(降至10℃及以下)的前一个月),所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为300公斤/亩,每半个月喷1次;总共喷施两次;
在气温低于10℃且在火龙果叶面发生冻害之前,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为300公斤/亩,每周喷1次;
在火龙果叶面发烧冻害之后,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:200mL,施用量为300公斤/亩,每2天喷1次,连续喷5次;待气温低于10℃时,每周喷1次。
<实施例3>
本发明提供一种冬季火龙果冻害防治制剂,其包括重量比为1:1.5的中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
所述中药提取物包括以下重量份数的原料:松针43份、大蒜素38份、大青叶33份、黄芪28份、黄柏28份、黄连23份、苦参18份;
所述中药提取物的制备方法包括:
步骤a、按重量份数计,将经挑选、洗净和干燥后的,松针43份、大蒜素38份、大青叶33份、黄芪28份、黄柏28份、黄连23份和苦参18份,分别粉碎过75目筛网,然后混合均匀,得粉末混合物;
步骤b、将粉末混合物3倍重量的水煮沸,将粉末混合物加入沸水中,搅拌均匀继续煮沸5min,得糊状物,将糊状物趁热置于-25℃的环境下冷冻,24h后取出,于25℃下自然解冻,得冻融后的糊状物;
步骤c、将冻融后的糊状物与体积分数为95%的乙醇按重量比为1:3的比例混合,常温浸提3h后抽滤,重复操作浸提、抽滤3次,合并三次滤液,减压蒸馏去除乙醇,得醇提液;
步骤d、将醇提液与其5倍体积的水混合,并在60℃恒温水浴下,真空旋转浓缩至与步骤a中粉末混合物等重量,即得所述中药提取物;
上述各个步骤中除了冷冻环节外,其他工作环节的环境为常温,相对湿度均为30-70%。
所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的制备方法为:将胶冻样类芽孢杆菌接种于一级培养基中,于温度为32℃下培养48h;然后转接到二级培养基中,于温度为31℃、转速为165r/min的摇床上培养48h,得种子培养液;将种子培养液以体积分数为5%的接种比例,接种至装有发酵培养基的发酵罐中,于温度为32℃、转速为165r/min条件下通入空气进行发酵培养,直至发酵液中95%以上的菌体产生芽孢,且芽孢的数量超过10亿个/mL停止发酵,其中,发酵过程中空气的通入量为发酵罐体积的1/20;将发酵液浓缩、低温干燥,制得孢子粉,即得所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的制备方法,将中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物以质量比为1:1.5的比例混合均匀,装瓶密封,即得。
本发明还提供一种冬季火龙果冻害防治制剂的使用方法,将所述冬季火龙果冻害防治制剂与水混匀得冻害防治制剂水溶液,将冻害防治制剂水溶液均匀喷雾至火龙果茎杆上;
在气温即将降至10℃及以下的前一个月(依据天气预报预测未来天气情况,结合当地往年天气特点,在天气大降温(降至10℃及以下)的前一个月),所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为250公斤/亩,每半个月喷1次;总共喷施两次;
在气温低于10℃且在火龙果叶面发生冻害之前,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为250公斤/亩,每周喷1次;
在火龙果叶面发烧冻害之后,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:200mL,施用量为250公斤/亩,每2天喷1次,连续喷4次;待气温低于10℃时,每周喷1次。
<实施例4>
一种冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法,与实施例3的不同在于,冬季火龙果冻害防治制剂的制备方法,具体包括以下步骤:
步骤一、将中药提取物溶解于其4倍重量的体积分数为95%的乙醇中,得第一溶液;
步骤二、向第一溶液中加入成膜剂、防冻剂、渗透剂,充分搅拌均匀,得第二溶液,其中成膜剂、防冻剂和渗透剂与中药提取物的重量比为0.1:0.2:0.1:1;
步骤三、将胶冻样类芽孢杆菌代谢产物分散于其3倍重量的琼脂糖水溶液中,于温度为28℃、转速为2700rpm/min的条件下搅拌,40min后置于-30℃的冷藏柜中冷藏7h,得胶冻样类芽孢杆菌代谢产物预处理块,胶冻样类芽孢杆菌代谢产物与步骤一中中药提取物的重量比为1.5:1;
步骤四、将胶冻样类芽孢杆菌代谢产物预处理块放入步骤二中的第二溶液中,静置5h后,冷冻干燥后粉碎至纳米颗粒,装瓶密封,即得。
所述成膜剂为透明质酸或蛋白粉;所述防冻剂包括重量比为1:1的芸薹素内酯和丙三醇;所述渗透剂为脯氨酸。
其余条件和参数同实施例3。
<实施例5>
一种冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法,与实施例3的不同在于,冬季火龙果冻害防治制剂为中药提取物,即不加入胶冻样类芽孢杆菌代谢产物;其余条件和参数同实施例3。
<实施例6>
一种冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法,与实施例3的不同在于,冬季火龙果冻害防治制剂为胶冻样类芽孢杆菌代谢产物,即不加入中药提取物;其余条件和参数同实施例3。
<实施例7>
一种冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法,与实施例3的不同在于,所用中药提取物的制备过程中,不经过步骤b,将粉末混合物用专用破壁设备进行破壁,然后代替步骤c中的冻融后的糊状物,与乙醇混匀,进行醇提;其余条件和参数同实施例3。
<实施例8>
一种冬季火龙果冻害防治制剂及其制备方法和使用方法,与实施例4的不同在于,没有步骤二,将第一溶液代替步骤四中的第二溶液(即不加入成膜剂、防冻剂和渗透剂);其余条件和参数同实施例4。
<对照例>
采用常规管理方法进行冬季火龙果植株的种植管理:
1、施肥
在十一月到十二月初时,温度会出现大幅度的降温,等二月份的时候,温度才有所升高,因此,对于年幼的果园,每一桩施肥十五到二十公斤,结果的果园,每一桩施肥二十到三十公斤的有机肥料或者农家肥都可以。
2、修剪
对于年幼的火龙果植株,只要在苗上盘留一枝长势比较好、位置向上生长的枝叶,对于其他多余的全部剪掉,等果苗上盘之后,则将处于水泥盘下部的新生长得枝条全部剪除。对结果的火龙果植株,剪去多余的、病衰枯枝,以及过密的枝叶进行剪除,在第二年的三月下旬到四月初,剪去那些腐烂的、干枯、病虫枝剪除,这样有利于的枝叶的生长。
3、清理果园
对那些剪除下来的病枝、枯枝等进行清理,并且配合杀菌剂进行喷施杀毒,大约喷施一两次就可以了。
4、注意防寒
可以每天都关注当地的天气预报,这样就可以知晓最近的天气情况,在冷空气来临之前,提前做好防寒措施,比如说可以在地表信息铺膜、喷防冻剂等。
<试验例>
2021年末和2022年初冬季期间(在此期间,江苏省镇江市丹阳市珥陵镇碧云天生态农庄最低温达-15℃,-10℃维持有20多天),在江苏省镇江市丹阳市珥陵镇碧云天生态农庄火龙果种植基地,选取9块同等面积(10亩)、同等种植龄、同等品质火龙果(品种为红水晶)植株田地(火龙果全部都是大棚种植),作为九块试验田,分别采用实施例1~8(管理中的施肥、修剪、清理果园的常规操作与对照例相同,期间的喷施杀菌剂遵循实施例1~8的方法)和对照例的方法进行冬季火龙果植株的管理,此阶段江苏遭遇难遇的寒冷天气,记录此期间火龙果叶面冻害面积占比,至2022年天气回暖后统计各个试验田整个冬季的叶面冻害费用,2022年夏季开始上市至火龙果采摘结束,统计各个试验田火龙果平均亩产量,统计结果如表1所示;
表1统计结果
组别 冻害面积占比/(%) 叶面冻害费用/(元/亩) 平均亩产量/(kg)
实施例1 0.9 567.4 2100
实施例2 1.1 557.8 2140
实施例3 1.2 560.3 2098
实施例4 0.01 579.3 2700
实施例5 48 451.5 1678
实施例6 50 447.2 1579
实施例7 26 724.1 1956
实施例8 0.5 563.2 2430
对照例 70 800 980
由表1可知,本发明实施例1~8对应的火龙果叶面冻害面积占比小于对照例;相较于实施例1~8对照例火龙果叶面冻害面积加大,具有较高的支出的叶面冻害费用,较低的火龙果平均亩产量;实施例1~3、5~8与实施例4相比,虽然实施例4支出叶面冻害费用略高,但是其火龙果平均亩产量得到了大幅度提升,火龙果的平均亩产量高达2700kg;由上述数据分析可知,本发明提供的冬季火龙果冻害防治制剂具有较低的成本、高效的防冻害的功效,进一步将有效成分中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物按照实施例4公开的方法进行混合,并引入成膜剂、防冻剂、渗透剂(使得冻害防治制剂能够形成一层膜吸附在叶面上,不会因低温冻住失效,同时渗透至叶面内部,促进叶面吸收,提高冻害防治效果),可进一步降低防治叶面冻害费用,且可提高火龙果的平均亩产量。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节。

Claims (7)

1.冬季火龙果冻害防治制剂,其特征在于,包括中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
2.如权利要求1所述的冬季火龙果冻害防治制剂,其特征在于,中药提取物和胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的质量比为1:1.5。
3.如权利要求1所述的冬季火龙果冻害防治制剂,其特征在于,所述中药提取物包括以下重量份数的原料:松针35~50份、大蒜素35~40份、大青叶30~35份、黄芪20~35份、黄柏25~30份、黄连20~25份、苦参15~20份。
4.如权利要求3所述的冬季火龙果冻害防治制剂,其特征在于,所述中药提取物的制备方法包括:
步骤a、按重量份数计,将松针35~50份、大蒜素35~40份、大青叶30~35份、黄芪20~35份、黄柏25~30份、黄连20~25份和苦参15~20份,分别粉碎过50~100目筛网,然后混合均匀,得粉末混合物;
步骤b、将粉末混合物3倍重量的水煮沸,将粉末混合物加入沸水中,搅拌均匀继续煮沸5min,得糊状物,将糊状物趁热置于-25℃的环境下冷冻,24h后取出,于25℃下自然解冻,得冻融后的糊状物;
步骤c、将冻融后的糊状物与体积分数为95%的乙醇按重量比为1:3的比例混合,常温浸提3h后抽滤,重复操作浸提、抽滤3次,合并三次滤液,减压蒸馏去除乙醇,得醇提液;
步骤d、将醇提液与其5倍体积的水混合,并在60℃恒温水浴下,真空旋转浓缩至与步骤a中粉末混合物等重量,即得所述中药提取物。
5.如权利要求1所述的冬季火龙果冻害防治制剂,其特征在于,所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物的制备方法为:将胶冻样类芽孢杆菌接种于一级培养基中,于温度为32℃下培养48h;然后转接到二级培养基中,于温度为30~32℃、转速为150~180r/min的摇床上培养48h,得种子培养液;将种子培养液以体积分数为5%的接种比例,接种至装有发酵培养基的发酵罐中,于温度为30~34℃、转速为150~180r/min条件下通入空气进行发酵培养,直至发酵液中95%以上的菌体产生芽孢,且芽孢的数量超过10亿个/mL停止发酵,其中,发酵过程中空气的通入量为发酵罐体积的1/20;将发酵液浓缩、低温干燥,制得孢子粉,即得所述胶冻样类芽孢杆菌代谢产物。
6.冬季火龙果冻害防治制剂的制备方法,其特征在于,将中药提取物与胶冻样类芽孢杆菌代谢产物以质量比为1:1.5的比例混合均匀,装瓶密封,即得。
7.冬季火龙果冻害防治制剂的使用方法,其特征在于,将所述冬季火龙果冻害防治制剂与水混匀得冻害防治制剂水溶液,将冻害防治制剂水溶液均匀的喷雾至火龙果茎杆上;
在气温即将降至10℃的前一个月,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为200~300公斤/亩,每半个月喷1次;
在气温低于10℃且在火龙果叶面发生冻害之前,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:300mL,施用量为200~300公斤/亩,每周喷1次;
在火龙果叶面发烧冻害之后,所用冻害防治制剂水溶液中所述冬季火龙果冻害防治制剂与水的混合比例为1g:200mL,施用量为200~300公斤/亩,每2天喷1次,连续喷3~5次;待气温低于10℃时,每周喷1次。
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