CN116003400A - 2-甲酰基四氢萘啶类化合物及其药用组合物和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种式(Ⅰ)所示结构的2‑甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，及其药物组合物和应用。本发明涉及的化合物及其药学上可接受的盐能够高活性、高选择性地抑制FGFR4蛋白酶，可以有效抑制多种肿瘤细胞的生长，尤其对肝癌细胞以及乳腺癌细胞具有很高地选择性抑制作用，并且具有良好的药代动力学性质，可用于制备抗肿瘤药物，可用于治疗人类及其它哺乳动物的肿瘤等过渡增殖性疾病。

Description

2-甲酰基四氢萘啶类化合物及其药用组合物和应用

技术领域

本发明涉及化学医药技术领域，具体涉及一类2-甲酰基四氢萘啶类化合物及其药用组合物和应用。

背景技术

肝细胞癌(HCC,Hepatocellular carcinoma)是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤(80％-90％)，已成为全球第六大常见癌症，是世界范围内癌症相关死亡的第三大原因。肝细胞癌的危险因素包括慢性乙型和丙型肝炎、酒精成瘾、代谢性肝病(特别是非酒精性脂肪性肝病)和接触黄曲霉毒素和马顿铃酸等饮食毒素。目前批准的HCC治疗包括多靶点激酶抑制剂索拉非尼(Sorafenib)、乐伐替尼(Lenvatinib)、瑞戈非尼(Regorafenib)、卡博替尼(Cabozantinib)，以及免疫检查点抑制剂尼鲁单抗(Nivolumab)等。这些治疗手段部分地满足了患者的需求，但这些HCC患者的中位总生存期仍小于1年。此外，手术切除治疗肝细胞癌术后复发率高，预后较差，迫切需要开发新的HCC治疗方法。越来越多的证据表明FGF19/FGFR4通路在肝癌发生发展过程中发挥作用，该通路异常与肝细胞癌的复发和不良预后有较明显相关。

FGF19/FGFR4介导的信号通路在包括肝细胞癌(HCC)在内的多种癌症的进展和转移中发挥着重要作用，这使得FGFR4成为治疗相关癌症的有前景的靶标。FGFR4小分子抑制剂已经经历了三个研究阶段，从多靶点抑制剂到Pan-FGFR抑制剂再到高度选择性的FGFR4抑制剂，已取得一定进展。然而，多靶点抑制剂和Pan-FGFR抑制剂较大的毒副作用限制了其在临床中的应用。令人鼓舞的是，针对FGFR4胞内激酶结构域中ATP结合位点附近保守度较差的半胱氨酸(Cys552)的亚型选择性FGFR4抑制剂最近被开发并报道。其中不可逆共价抑制剂BLU554和H3B-6527针对肝细胞癌已处于临床试验阶段。然而，肝癌细胞中FGFR4的快速再合成速率使得抑制剂需要允许频繁给药，以实现完全和持续的靶向抑制，从而达到最大的抗肿瘤效果，不可避免会产生毒副作用。共价可逆FGFR4抑制剂显示出较大优势，最近公开的Roblitinib在临床前研究中显示出显著的抗肿瘤活性，目前已进入临床二期研究阶段，但是，Roblitinib的口服生物利用度较低，在大鼠中的口服生物利用度只有20％[Fairhurst,R.A.；Knoepfel,T.；Buschmann,N.；Leblanc,C.；Mah,R.；Todorov,M.；Nimsgern,P.；Ripoche,S.；Niklaus,M.；Warin,N.；Luu,V.H.；Madoerin,M.；Wirth,J.；Graus-Porta,D.；Weiss,A.；Kiffe,M.；Wartmann,M.；Kinyamu-Akunda,J.；Sterker,D.；Stamm,C.；Adler,F.；Buhles,A.；Schadt,H.；Couttet,P.；Blank,J.；Galuba,I.；Trappe,J.；Voshol,J.；Ostermann,N.；Zou,C.；Berghau-sen,J.；Del,R.E.A.；Jahnke,W.；Furet,P.Discovery of Roblitinib(FGF401)as a Reversible-Covalent Inhibitor of theKinase Activity of Fibroblast Growth Factor Receptor 4.J.Med.Chem.2020,63,12542-12573.]。

已报道的不可逆或可逆共价抑制剂能够选择性地抑制FGFR4，但仍处于早期临床试验阶段。为了充分验证使用FGFR4选择性抑制剂可以治疗具有异常FGF19/FGFR4信号的HCC，需要在更全面的临床研究中评估更多的化合物类型，因此开发新类型的高选择性和高效的FGFR4抑制剂具有重要意义，尤其是开发新型的，口服生物利用度更高，成药性更好的FGFR4抑制剂具有重要意义。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一类新的2-甲酰基四氢萘啶类化合物，这类新的2-甲酰基四氢萘啶类化合物能够高选择性、高活性地抑制FGFR4蛋白激酶的活性，从而能够抑制多种肿瘤细胞的增殖。

具体技术方案如下：

具有式(Ⅰ)所示结构的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子：

其中，G选自：乙炔基或-(CH₂)_n-；n选自：0、1或2；

R¹选自：一个或多个R⁴取代或者未取代的C₆-C₁₀芳基、一个或者多个R⁴取代或者未取代的5-10元杂芳基；

R²选自：卤素或-W-R⁵；W选自NR⁶、O或S；

R³选自：H、一个或多个R⁷取代或者未取代的C₁～C₆烷基；

R⁴选自：H、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤素、氰基，卤素取代的C₁～C₆烷基；

R⁵选自：C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基取代的C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷胺基取代的C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基；

R⁶选自：H或者C₁～C₆烷基；

R⁷选自：一个或多个R⁸取代或者未取代的5-8元杂环基；

R⁸选自：H或者C₁～C₆烷基。

在其中一些实施例中，所述2-甲酰基四氢萘啶类化合物具有式(II)所示结构：

在其中一些实施例中，所述2-甲酰基四氢萘啶类化合物具有式(III)所示结构：

并且，R¹选自：

在其中一些实施例中，所述2-甲酰基四氢萘啶类化合物具有式(IV)所示结构：

并且，R¹选自：

在其中一些实施例中，R¹选自：一个或多个R⁴取代或者未取代的苯基、一个或多个R⁴取代或者未取代的苯并呋喃基、一个或多个R⁴取代或者未取代的苯并噻吩基、一个或多个R⁴取代或者未取代的5-6元含氮杂芳基。

在其中一些实施例中，R¹选自：一个或多个R⁴取代或者未取代的苯基、一个或多个R⁴取代或者未取代的苯并呋喃基、一个或多个R⁴取代或者未取代的苯并噻吩基、一个或多个R⁴取代或者未取代的吡啶基、一个或多个R⁴取代或者未取代的嘧啶基、一个或多个R⁴取代或者未取代的吡嗪基、一个或多个R⁴取代或者未取代的咪唑基、一个或多个R⁴取代或者未取代的吡唑基。

在其中一些实施例中，R⁴选自：H、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氯、氟、甲基、乙基、丙基、异丙基、氰基、三氟甲基。

在其中一些实施例中，R¹选自如下基团：

在其中一些实施例中，R²选自：卤素或-W-R⁵；W选自NH、O；

R⁵选自：C₁～C₄烷基、C₁～C₃烷氧基取代的C₁～C₃烷基、C₁～C₃烷胺基取代的C₁～C₃烷基、C₃～C₆环烷基。

在其中一些实施例中，R²选自：卤素、C₁～C₄烷氧基、C₁～C₃烷氧基取代的C₁～C₃烷氧基、或者-NH-R⁵；R⁵选自：C₁～C₃烷氧基取代的C₁～C₃烷基。

在其中一些实施例中，R²选自：氟、

在其中一些实施例中，R³选自：H、C₁～C₃烷基、R⁷取代的C₁～C₃烷基；R⁷选自：C₁～C₃烷基取代的5-6元含氮杂环基。

在其中一些实施例中，R³选自：H或者

本发明还提供了上述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子的应用。

具体技术方案如下：

上述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备FGFR4抑制剂中的应用。

上述的含2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备预防和/或者治疗肿瘤的药物中的应用。

在其中一些实施例中，所述肿瘤为：肝癌、头颈癌、食道癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、横纹肌肉瘤。

本发明还提供了一种预防和/或者治疗肿瘤的药用组合物。

具体技术方案如下：

一种预防和/或者治疗肿瘤的药用组合物，由活性成分和药学上可接受的辅料制备得到，所述活性成分包括上述的含2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子。

本发明的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，能够高活性、高选择性地抑制FGFR4蛋白酶，可以有效抑制多种肿瘤细胞的生长，尤其对肝癌细胞以及乳腺癌细胞具有很高地选择性抑制作用，并且具有良好的药代动力学性质，口服生物利用度高，成药性好，可用于制备抗肿瘤药物，可用于治疗人类及其它哺乳动物的肿瘤等过渡增殖性疾病。

附图说明

图1为化合物对FGFR4激酶及其下游信号通路蛋白磷酸化影响测试结果；

图2为化合物对细胞克隆形成能力的影响测试结果；

图3为化合物对小鼠移植瘤抑制的测试结果和对小鼠体重影响的测试结果。

具体实施方式

本发明所述化合物中，当任何变量(例如R⁴、R⁷、R⁸等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环系统的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。如果环系统为多环，其意味着这种键仅连接到邻近环的任何适当的碳原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。

本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“C₁-C₆烷基”中“C₁-C₆”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。例如，“C₁-C₆烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基。

术语“环烷基”指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。

术语“烷氧基”指具有-O-烷基结构的基团，如-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂CH₃、-O-CH₂CH(CH₃)₂、-OCH₂CH₂CH₂CH₃、-O-CH(CH₃)₂等。

术语“烷胺基”指具有-N-(烷基)₂、或者-NH-烷基结构的基团，如-NHCH₃、-NHCH₂CH₃、-NHCH₂CH₂CH₃、-NHCH₂CH(CH₃)₂、-NHCH₂CH₂CH₂CH₃、-NHCH(CH₃)₂、-N(CH₃)₂、-N(CH₂CH)₂、-N(CH₂CH₂CH₃)₂等。

术语“杂环烷基”或者“杂环基”为饱和或部分不饱和的单环环状取代基，其中一个或多个环原子选自N、O或S(O)m(其中m是0-2的整数)的杂原子，其余环原子为碳或者C＝O，例如：2-氧代哌嗪基、吗啉基、哌啶基、四氢吡咯基、吡咯烷基、二氢咪唑基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基等，及其N-氧化物，杂环取代基的连接可通过碳原子或通过杂原子实现。

术语“杂芳基”指含有1个或多个选自O、N或S的杂原子的芳香环，本发明范围内的杂芳基包括但不限于：喹啉基、吡唑基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、哒嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基；“杂芳基”也理解为包括任何含有氮的杂芳基的N-氧化物衍生物。

正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”(“halo”)或“卤”意指氯、氟、溴和碘。

除非另有定义，烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环烷基取代基可为未被取代的或取代的。例如，C₁-C₆烷基可被一个、两个或三个选自OH、卤素、烷氧基、二烷基氨基或杂环基例如吗啉基、哌啶基等的取代基取代。

本发明包括式Ⅰ-IV化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及立体异构体。术语“游离形式”指以非盐形式的胺类化合物。包括在内的药学上可接受盐不仅包括本文所述特定化合物的示例性盐，也包括所有式Ⅰ-IV化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液例如NaOH稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。

可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。

因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括得自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐，也包括自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2一乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。

如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐.得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'－二苄基乙二胺、二乙胺、2一二乙基氨基乙醇、2一二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N一乙基吗啉、N一乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。

Berg等，“Pharmaceutical Salts，”J.Pharm.Sci.’1977：66：1－19更详细描述了上文所述药学上可接受的盐及其它典型的药学上可接受的盐的制备。

由于在生理条件下化合物中脱质子化的酸性部分例如竣基可为阴离子的，而这种带有的电荷然后可被内部带有阳离子的质子化了的或烷基化的碱性部分例如四价氮原子平衡抵消，所以应注意本发明化合物是潜在的内盐或两性离子。

合成方法：除在文献中已知的或在实验程序中例证的标准方法外，可采用如下合成路线(合成路线1-2)中的方法制备本发明化合物。结合下述的合成方案，能够对本发明中所述的化合物以及合成方法进行更好的理解。所述的合成方案描述了可以用于制备本发明中所述的化合物的方法，所述的方法仅仅是为说明目的的说明性方案描述，并不构成对本发明所具有的范围的限制。

在其中一些实施方案中，本发明提供了一种利用具有式Ⅰ-IV的化合物及其药学可接受的盐治疗人或其它哺乳动物肿瘤等过渡增殖性疾病或症状。

在其中一些实施方案中，本发明的化合物及其药学可接受的盐可以用于治疗或控制肝癌、头颈癌、食道癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、横纹肌肉瘤等过渡增殖性疾病。

药物代谢物及前药

本发明所涉及的化合物及其药学可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本发明所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本发明的权利要求中。

联合用药

式Ⅰ-IV化合物可以与已知的治疗或改进相似病状的其它药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式&剂量保持不变，而同时或随后服用式Ⅰ-IV化合物。当式Ⅰ-IV化合物与其它一种或几种药物同时服用时，优选使用同时含有一种或几种已知药物和式Ⅰ-IV化合物的药用组合物。药物联用也包括在重叠的时间段服用式Ⅰ-IV化合物与其它一种或几种已知药物。当式Ⅰ-IV化合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，式Ⅰ-IV化合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量较低。

可以与式Ⅰ-IV化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：

雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、视网膜样受体调节剂、细胞毒素/细胞抑制剂、抗增殖剂、蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白激酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、血管生成抑制剂、细胞增殖及生存信号抑制剂、干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂、细胞毒类药物、酪氨酸蛋白抑制剂、EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂、丝氨酸/苏氨酸蛋白抑制剂、Bcr-Abl抑制剂、c-Kit抑制剂、Met抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、MMP抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、组氨酸去乙酰化酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、CDK抑制剂，Bcl-2家族蛋白抑制剂、MDM2家族蛋白抑制剂、IAP家族蛋白抑制剂、STAT家族蛋白抑制剂、PI3K抑制剂、AKT抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素-α、白介素-12、COX-2抑制剂、p53、p53激活剂、VEGF抗体、EGF抗体等。

在其中一些实施方案中，可以与式Ⅰ-IV化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：阿地白介素、阿仑膦酸、干扰素、阿曲诺英、别嘌醇、别嘌醇钠、帕洛诺司琼盐酸盐、六甲蜜胺、氨基格鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安丫啶、阿纳托唑、多拉司琼、aranesp、arglabin、三氧化二砷、阿诺新、5-氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗或tice卡介苗、贝他定、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸钠制剂、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿甘、bortezomib、白消安、降钙素、阿来佐单抗注射剂、卡培他滨、卡铂、康士得、cefesone、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、克拉屈滨、氯屈磷酸、环磷酰胺、阿糖胞昔、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素脂质体、地塞米松、磷酸地塞米松、戊酸雌二醇、地尼白介素2、狄波美、地洛瑞林、地拉佐生、己烯雌酚、大扶康、多西他奇、去氧氟尿苷、阿霉素、屈大麻酚、钦-166-壳聚糖复合物、eligard、拉布立酶、盐酸表柔比星、阿瑞吡坦、表阿霉素、阿法依伯汀、红细胞生成素、依铂、左旋咪唑片、雌二醇制剂、17-β-雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、炔雌醇、氨磷汀、羟磷酸、凡毕复、依托泊甙、法倔唑、他莫昔芬制剂、非格司亭、非那司提、非雷司替、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿嘧啶核苷一磷酸盐、5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、福麦斯坦、1-β-D-阿糖呋喃糖胞噻啶-5’-硬脂酰磷酸酯、福莫司汀、氟维司群、丙种球蛋白、吉西他滨、吉妥单抗、甲磺酸伊马替尼、卡氮芥糯米纸胶囊剂、戈舍瑞林、盐酸格拉尼西隆、组氨瑞林、和美新、氢化可的松、赤型-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替坦异贝莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α、干扰素-α2、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-nl、干扰素α-n3、干扰素β、干扰素γ-la、白细胞介素-2、内含子A、易瑞沙、依立替康、凯特瑞、硫酸香菇多糖、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林醋酸盐、左旋四咪唑、左旋亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左甲状腺素钠制剂、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、氮芥、甲钴胺、甲羟孕酮醋酸酯、醋酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素、6-琉基嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、氨基乙酰丙酸甲酯、米替福新、美满霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托葱醌、曲洛司坦、柠檬酸阿霉素脂质体、奈达铂、聚乙二醇化非格司亭、奥普瑞白介素、neupogen、尼鲁米特、三苯氧胺、NSC-631570、重组人白细胞介素1-β、奥曲肽、盐酸奥丹西隆、去氢氢化可的松口服溶液剂、奥沙利铂、紫杉醇、泼尼松磷酸钠制剂、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、溶链菌制剂、盐酸匹鲁卡品、毗柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、司替泼尼松龙、泼尼松、倍美力、丙卡巴脐、重组人类红细胞生成素、雷替曲塞、利比、依替膦酸铼-186、美罗华、力度伸-A、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱片剂、奥曲肽、沙莫司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、唬钠甲强龙、帕福斯酸、干细胞治疗、链佐星、氯化锶-89、左旋甲状腺素钠、他莫昔芬、坦舒洛辛、他索那明、tastolactone、泰索帝、替西硫津、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、甲睾酮、硫鸟嘌呤、噻替哌、促甲状腺激素、替鲁膦酸、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维A酸、甲氨喋呤片剂、三甲基密胺、三甲曲沙、乙酸曲普瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、优福定、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春酰胺、长春瑞滨、维鲁利秦、右旋丙亚胺、净司他丁斯酯、枢复宁、紫杉醇蛋白质稳定制剂、acolbifene、干扰素r-lb、affinitak、氨基喋呤、阿佐昔芬、asoprisnil、阿他美坦、阿曲生坦、BAY43-9006、阿瓦斯丁、CCI-779、CDC-501、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、环丙孕酮醋酸酯、地西他滨、DN-101、阿霉素-MTC、dSLIM、度他雄胺、edotecarin、依氟鸟氨酸、依喜替康、芬维A胺、组胺二盐酸盐、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班膦酸、干扰素γ、内含子-PEG、ixabepilone、匙孔形血蓝蛋白、L-651582、兰乐肽、拉索昔芬、libra、lonafamib、米泼昔芬、米诺屈酸酯、MS-209、脂质体MTP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲特、奥利默森、onco-TCS、osidem、紫杉醇聚谷氨酸酯、帛米酸钠、PN-401、QS-21、夸西洋、R-154、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-顺维A酸、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、tarceva、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素αl、嘎唑呋林、tipifarnib、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、反式MID-lo7R、伐司朴达、伐普肽、vatalanib、维替泊芬、长春氟宁、Z-100和唑来麟酸或它们的组合。

下列实施例中所用试剂均可购买得到。

以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。

实施例1

N-(5-((3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2121)(合成方法参考合成路线1)

步骤1：4-氟-5-碘吡啶-2-胺(化合物2)

将2-氨基-4-氟吡啶(化合物1，12g，116.6mmol),N-碘代丁二酰亚胺(26.4g，117.3mmol))和三乙胺(3.2mL，42.6mmol)溶于400mL乙腈中。室温搅拌5小时，反应结束后用乙酸乙酯稀释，饱和亚硫酸钠溶液洗涤两次，饱和食盐水洗两次。合并有机相后使用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到化合物2粗品(22g，86％)。MS(ESI)m/z 239.0[M+H]⁺¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.12(dd,J＝13.7,8.6Hz,1H),6.45(s,2H),6.31(d,J＝10.9Hz,1H).

步骤2：5-碘-4-异丙氧基吡啶-2-胺(3)

将化合物2(1.44g，6.05mmol)加入到叔丁醇钾(1.36g，12.1mmol)的异丙醇溶液中，反应液在60℃下搅拌3小时。冷却反应液后减压浓缩，得到的粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA2:1至1:1梯度洗脱)得到目标产物化合物3，为白色固体(1.47g，88％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.19(s,1H),5.97(d,J＝6.2Hz,1H),4.60(dt,J＝12.1,6.1Hz,1H),4.41(s,2H),1.42(d,J＝6.1Hz,6H).

步骤3：2-(二甲氧基甲基)-1,8-萘啶(化合物7)

将2-氨基烟碱醛(20g，164mmol)、1,1-二甲氧基丙酮(25.7mL，214mmol)和3N NaOH(71mL，213mmol)溶于乙醇和水的混合溶剂中(400mL：40mL)，室温搅拌3小时。反应液浓缩去除多余溶剂后在乙酸乙酯和饱和食盐水中分液，合并的有机相经无水硫酸钠干燥后过滤，减压浓缩得到中间体化合物7(29.8g，86％)。MS(ESI)m/z 227[M+Na]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.15(dd,J＝4.2,2.0Hz,1H),8.27(d,J＝8.4Hz,1H),8.23(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.53(dd,J＝8.1,4.2Hz,1H),5.50(s,1H),3.54(s,6H).

步骤4：7-(二甲氧基甲基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶(化合物8)

将化合物7(15g,73.45mmol)与二氧化铂(500mg,2.2mmol)溶于乙醇中，氢气保护下室温搅拌36小时。反应结束后使用硅藻土滤除不溶物，减压浓缩得到中间体化合物8，为白色固体(12.2g，80％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.18(dd,J＝7.4,0.5Hz,1H),6.72(d,J＝7.4Hz,1H),5.16(s,1H),4.94(s,1H),3.44–3.41(m,2H),3.39(s,6H),2.74(t,J＝6.3Hz,2H),1.96–1.89(m,2H).

步骤5：7-(二甲氧基甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酸苯基酯(化合物9)

将化合物8(5.0g,24mmol)和碳酸二苯酯(6,1g,28.8mmol)溶于四氢呋喃中，反应液降温至-78℃，缓慢加入双三甲基硅基胺基锂的四氢呋喃溶液(1M,26.4mL,26.4mmol)。随后将反应液升温至室温反应1小时，使用饱和氯化铵溶液淬灭反应，随后用二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，合并有机相后经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA2:1至1:1梯度洗脱)得到目标产物化合物9，为白色固体(5.3g，67％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.55–7.51(m,1H),7.38(tt,J＝4.1,2.0Hz,2H),7.34–7.31(m,1H),7.27–7.17(m,4H),6.79(dd,J＝8.5,0.9Hz,1H),5.32(s,1H),3.99–3.95(m,2H),3.41(s,6H),2.86(t,J＝6.6Hz,2H),2.06(dt,J＝16.6,6.5Hz,2H).

步骤6：7-(二甲氧基甲基)-N-(5-碘-4-异丙氧基吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(化合物10)

将化合物9(0.5g，1.5mmol)、化合物3(0.466g，1.67mmol)溶于四氢呋喃，降温至-15℃，缓慢加入双三甲基硅基胺基锂的四氢呋喃溶液(1M，2.3mL，2.3mmol)。随后将反应液升温至室温反应1小时，使用饱和氯化铵溶液淬灭反应，随后用二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，合并有机相后经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA 8:1至3:1梯度洗脱)得到目标产物化合物10，为白色固体(620mg，72.2％)。¹HNMR(600MHz,CDCl₃)δ8.29(s,1H),7.91(s,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.20(d,J＝7.6Hz,1H),5.52(s,1H),4.82(dp,J＝12.1,6.0Hz,1H),4.09–4.03(m,2H),3.51(d,J＝5.6Hz,6H),2.87(t,J＝6.3Hz,2H),2.04–2.00(m,2H),1.46(d,J＝6.1Hz,6H).

步骤7：将化合物10(300mg，0.5mmol)，3,5-二甲氧基苯乙炔(72mg，0.07mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(41mg，0.058mmol)，碘化亚铜(11mg，0.058mmol)，三乙胺(0.23ml，1.76mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，氩气保护下将反应加热至80℃，3小时后将体系冷却至室温，用二氯甲烷与水对反应体系进行分液，合并有机相后经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA 8:1至3:1梯度洗脱)，将得到的固体溶于6ml四氢呋喃和3ml水的混合溶剂中，加入1ml盐酸，室温搅拌半小时后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，将反应液调pH至中性，使用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，随后经乙酸乙酯重结晶得到目标产物ZZ2121，为白色固体(450mg，66.8％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:501.2132；found:501.2115；纯度:95.5％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.57(s,1H),10.18(d,J＝0.6Hz,1H),8.32(s,1H),7.90(s,1H),7.69(dd,J＝7.6,0.7Hz,1H),7.64(d,J＝7.5Hz,1H),6.72(d,J＝2.3Hz,2H),6.48(t,J＝2.3Hz,1H),4.90–4.80(m,1H),4.18–4.10(m,2H),3.84(s,6H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.12–2.04(m,2H),1.48(t,J＝5.6Hz,6H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ191.49,165.71,160.48(2C),153.78,152.92,152.30,152.17,147.64,139.22,128.17,124.96,115.66,109.29(2C),106.01,101.55,97.48,94.25,83.19,71.20,55.44(2C),43.79,28.69,21.86(2C),20.99.

实施例2

N-(5-(3,5-二甲氧基苯基)乙基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2122)

将化合物ZZ2121(50mg，0.106mmol)溶于乙醇中，加入10％钯碳(12mg，0.01mmol)，置换氢气，反应于室温下进行8小时，随后使用硅藻土将钯碳滤除，随后浓缩反应液，经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA 3:1至1:1梯度洗脱)得到目标化合物ZZ2122(360mg，52.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:505.2445；found:505.2426；纯度：98.6％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.57(s,1H),10.18(d,J＝0.6Hz,1H),8.32(s,1H),7.90(s,1H),7.69(dd,J＝7.6,0.7Hz,1H),7.64(d,J＝7.5Hz,1H),6.72(d,J＝2.3Hz,2H),6.48(t,J＝2.3Hz,1H),4.90–4.80(m,1H),4.18–4.10(m,2H),3.84(s,6H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.12–2.04(m,2H),1.48(t,J＝5.6Hz,6H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ191.61,163.38,160.70(2C),153.12,152.81,152.37,148.35,147.67,144.56,139.05,128.07,121.75,115.44,106.54(2C),97.84,97.58,69.85,55.25(2C),43.70,36.33,29.82,28.74,21.95(2C),21.03.

实施例3

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-((3-甲氧基苯基)乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2123)

合成方法参照实施例1(140mg，50.8％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:471.2027；found:471.2014；纯度：99.3％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.61(s,1H),10.21(s,1H),8.33(s,1H),7.92(s,1H),7.69(d,J＝7.5Hz,1H),7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.28(t,J＝7.9Hz,1H),7.16(d,J＝7.6Hz,1H),7.09(dd,J＝2.4,1.3Hz,1H),6.93–6.89(m,1H),4.89–4.82(m,1H),4.19–4.09(m,2H),3.86(s,3H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.16–2.06(m,2H),1.50(s,3H),1.49(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.61,165.66,159.24,153.71,152.95,152.27,152.15,147.57,139.26,129.37,128.23,124.62,124.12,116.18,115.72,114.68,106.04,97.42,94.18,83.38,71.17,55.32,43.76,28.71,21.87(2C),20.97.

实施例4

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(3-甲氧基苯乙基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2124)

合成方法参照实施例2(34mg，67.42％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:475.2340；found:475.2326；纯度：97.95％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.31(s,1H),10.16(s,1H),7.90(s,1H),7.81(s,1H),7.70–7.57(m,2H),7.21(t,J＝7.6Hz,1H),6.87–6.71(m,3H),4.81(hept,J＝5.9Hz,1H),4.17–4.07(m,2H),3.81(s,3H),2.96(t,J＝6.2Hz,2H),2.84(s,4H),2.09–2.00(m,2H),1.44(s,3H),1.42(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.67,163.40,159.53,153.13,152.76,152.33,148.30,147.59,143.78,139.09,129.29,128.13,121.77,120.93,115.50,114.20,111.10,97.55,69.85,55.15,43.70,36.06,29.97,28.75,21.96(2C),21.01.

实施例5

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(苯基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2125)

合成方法参照实施例1(140mg，50.8％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:441.1921；found:441.1908；纯度：99.3％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.55(s,1H),10.32–10.07(m,1H),8.32(s,1H),7.90(s,1H),7.71–7.61(m,2H),7.55(dt,J＝8.3,2.2Hz,2H),7.42–7.30(m,3H),4.85(hept,J＝6.1Hz,1H),4.17–4.11(m,2H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.11–2.04(m,2H),1.49(s,3H),1.48(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.61,165.62,153.66,152.95,152.21,152.13,147.56,139.25,131.51(2C),128.31(2C),128.24,128.07,123.61,115.73,106.13,97.44,94.27,83.51,71.16,43.75,28.70,21.87(2C),20.95.

实施例6

N-(5-((2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2126)

合成方法参照实施例1(70mg，53.5％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:569.1353；found:569.1327；纯度：98.9％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.62–13.59(m,1H),10.19–10.17(m,1H),8.44–8.40(m,1H),7.95–7.90(m,1H),7.70–7.63(m,2H),6.60–6.55(m,1H),5.32(s,2H),4.91–4.84(m,1H),4.16–4.12(m,2H),3.96(s,6H),3.01–2.95(m,2H),2.12–2.05(m,3H),1.48(d,J＝6.0Hz,6H).

实施例7

N-(3,5-二甲氧基苯基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2127)

将化合物10(300mg，0.585mmol)，3,5-二甲氧基苯硼酸频那醇酯(114mg，0.7mmol)，四三苯基膦钯(67.6mg，0.058mmol)，碳酸钠(124mg，0.117mmol)溶解于体积比为4:1的二氧六环与水的混合溶剂中，将反应进行氩气保护后加热至100℃，三小时后反应结束，冷却至室温，蒸干多余溶剂后使用二氯甲烷与水分液，有机相合并后经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA 3:1至2:1梯度洗脱)，将得到的固体溶于6ml四氢呋喃和3ml水的混合溶剂中，加入1ml盐酸，室温搅拌半小时后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，将反应液调pH至中性，使用乙酸乙酯萃取，合并有机相后无水硫酸钠干燥并减压浓缩，随后经乙酸乙酯重结晶得到目标产物ZZ2127，为白色固体(210mg，78.6％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:477.2132；found:477.2070；纯度：95.1％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.48(s,1H),10.20(s,1H),8.22(s,1H),7.95(s,1H),7.66(dd,J＝19.5,7.6Hz,2H),6.75(d,J＝2.3Hz,2H),6.48(t,J＝2.3Hz,1H),4.91–4.82(m,1H),4.19–4.13(m,2H),3.85(s,6H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.13–2.04(m,2H),1.43(d,J＝6.1Hz,6H).¹³CNMR(151MHz,CDCl₃)δ191.50,162.45,160.35(2C),153.53,153.12,152.29,148.98,147.68,139.15,137.34,128.13,122.51,115.62,107.38(2C),99.58,97.94,70.52,55.34(2C),43.76,28.73,21.85(2C),21.02.

实施例8

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(6-甲氧基苯并呋喃-2-基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2128)

合成方法参照实施例7(120mg，63.18％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:487.1976；found:487.1961；纯度：98.4％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.57(s,1H),10.21(s,1H),8.83(s,1H),7.98(s,1H),7.64(q,J＝7.5Hz,2H),7.45(d,J＝8.5Hz,1H),7.20(s,1H),7.09(s,1H),6.87(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.97(hept,J＝5.9Hz,1H),4.17–4.09(m,2H),3.90(s,3H),2.95(t,J＝6.2Hz,2H),2.07(p,J＝6.2Hz,2H),1.57(s,3H),1.56(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.64,161.43,157.94,154.79,153.20,153.07,152.21,149.82,147.62,146.23,139.22,128.20,122.77,120.92,115.65,112.69,111.79,105.58,97.44,95.52,71.06,55.79,43.77,28.73,22.13(2C),20.99.

实施例9

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(5-甲氧基苯并呋喃-2-基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ2129)

合成方法参照实施例7(80mg，55.6％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:487.1976；found:487.1970；纯度：98.9％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.65(s,1H),10.27(s,1H),8.88(s,1H),8.03(s,1H),7.68(dd,J＝17.9,7.5Hz,2H),7.42(d,J＝8.8Hz,1H),7.24(s,1H),7.08(d,J＝2.5Hz,1H),6.91(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),5.00(dt,J＝11.8,5.9Hz,1H),4.17–4.13(m,2H),3.88(s,3H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.09(dt,J＝15.1,4.7Hz,2H),1.58(d,J＝6.0Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.65,155.86,153.03,152.10,148.78,147.65,139.27,129.95,128.20,124.49,124.01,119.05,115.77,112.82,112.58,111.34,106.02,103.20,97.51,55.91,43.80,29.75,28.70,22.05(2C),20.99.

实施例10

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(7-甲氧基-5-甲基苯并[b]噻吩-2-基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21210)

合成方法参照实施例7(150mg，53.5％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:517.1904；found:517.1898；纯度：96.4％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.62(s,1H),10.23(s,1H),8.58(s,1H),8.00(s,1H),7.70(s,1H),7.65(d,J＝7.2Hz,2H),7.25(s,1H),6.61(s,1H),4.99–4.94(m,1H),4.17–4.13(m,2H),4.02(s,3H),2.98(t,J＝6.2Hz,2H),2.50(s,3H),2.09(d,J＝11.4Hz,2H),1.55(d,J＝6.1Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.55,153.78(2C),152.98,152.08,147.64,141.63,139.27(2C),135.55,128.21(2C),125.56,121.80,116.56,116.02(2C),115.89,105.90(2C),97.76,71.67,55.61,43.82,28.69,21.94(2C),20.98.

实施例11

N-(5-((4-氰基苯基)乙炔基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘吡啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21211)

合成方法参照实施例1(80mg，76.9％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:466.1874；found:466.1868；纯度：99.3％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.67(s,1H),10.18(s,1H),8.33(s,1H),7.92(s,1H),7.78–7.51(m,5H),4.86(hept,J＝6.0Hz,1H),4.24–4.09(m,2H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.08(dt,J＝11.0,5.6Hz,2H),1.49(s,3H),1.48(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.60,163.33,153.16,153.08,152.30,148.44,147.65,147.57,139.14,132.17(2C),129.38(2C),128.17,120.62,119.23,115.65,109.67,97.53,69.93,43.72,36.09,29.49,28.75,21.94(2C),21.00.

实施例12

N-(5-((3-氰基苯基)乙炔基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21212)

合成方法参照实施例1(90mg，83.2％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:466.1874；found:466.1839；纯度：96.5％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.63(s,1H),10.18(s,1H),8.32(s,1H),7.93(s,1H),7.82(s,1H),7.76(d,J＝7.8Hz,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(dd,J＝14.2,7.7Hz,2H),7.48(t,J＝7.8Hz,1H),4.91–4.82(m,1H),4.18–4.10(m,2H),2.98(t,J＝6.2Hz,2H),2.14–2.04(m,2H),1.49(d,J＝6.0Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.60,163.33,153.16,153.08,152.30,148.44,147.65,147.57,139.14,132.17(2C),129.38(2C),128.17,120.62,119.23,115.65,109.67,97.53,69.93,43.72,36.09,29.49,28.75,21.94(2C),21.00.

实施例13

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(吡啶-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21213)

合成方法参照实施例1(110mg，76.5％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:442.1874；found:442.1862；纯度：97.3％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.65(s,1H),10.20(s,1H),8.65(d,J＝4.4Hz,1H),8.40(s,1H),7.93(s,1H),7.74–7.68(m,2H),7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.56(d,J＝7.8Hz,1H),7.27(dd,J＝7.1,4.7Hz,1H),4.87(dt,J＝12.1,6.1Hz,1H),4.16–4.11(m,2H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.08(dt,J＝12.0,6.2Hz,2H),1.49(d,J＝6.1Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.58,166.02,154.23,153.04,152.97,152.12,150.01,147.59,143.78,139.31,136.15,128.25,127.29,122.56,115.77,105.13,97.28,93.44,83.89,71.28,43.77,28.70,21.83(2C),20.96.

实施例14

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(2-(吡啶-2-基)乙基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21214)

合成方法参照实施例2(54mg，68.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:446.2186；found:446.2184；纯度：98.8％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.28(s,1H),10.15(s,1H),8.57(d,J＝5.6Hz,1H),7.88(s,1H),7.80(s,1H),7.66(d,J＝7.7Hz,1H),7.61(d,J＝7.5Hz,1H),7.59–7.54(m,1H),7.12(dd,J＝7.4,5.0Hz,1H),7.07(d,J＝7.8Hz,1H),4.81(dt,J＝12.1,6.0Hz,1H),4.15–4.10(m,2H),3.08(dd,J＝8.5,6.0Hz,2H),2.97(dd,J＝13.4,7.1Hz,4H),2.09–2.04(m,2H),1.42(d,J＝6.0Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.70,163.45,161.46,153.15,152.77,152.32,149.25,148.47,147.59,139.09,136.34,128.13,123.07,121.45,121.15,115.52,97.56,69.87,43.71,38.04,28.75,28.00,21.95(2C),21.01.

实施例15

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(吡啶-3-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21215)

合成方法参照实施例1(105mg，74.6％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:442.1874；found:442.1858；纯度：96.9％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.66(s,1H),10.19(s,1H),8.79(s,1H),8.56(d,J＝4.1Hz,1H),8.34(s,1H),7.92(s,1H),7.85(d,J＝7.9Hz,1H),7.70(d,J＝7.5Hz,1H),7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.35–7.30(m,1H),4.86(dt,J＝12.1,6.1Hz,1H),4.17–4.10(m,2H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.08(d,J＝5.8Hz,2H),1.49(d,J＝6.1Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.54,165.84,154.00,152.93,152.16,152.08,151.97,148.12,147.56,139.32,138.48,128.28,123.14,120.94,115.89,105.40,97.37,90.81,87.04,71.38,43.79,28.68,21.84(2C),20.95.

实施例16

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(2-(吡啶-3-基)乙基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21216)

合成方法参照实施例2(67mg，69.9％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:446.2187；found:446.2180；纯度：97.8％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.36(s,1H),10.17(s,1H),8.46(d,J＝3.4Hz,2H),7.88(s,1H),7.82(s,1H),7.67(d,J＝7.5Hz,1H),7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.49(d,J＝7.8Hz,1H),7.24–7.21(m,1H),4.83–4.78(m,1H),4.15–4.11(m,2H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.89(d,J＝5.9Hz,2H),2.85(d,J＝7.7Hz,2H),2.09–2.05(m,2H),1.42(d,J＝6.1Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.66,163.59,153.10,152.82,152.24,149.74,147.99,147.59,147.15,139.15,137.25,136.29,128.17,123.39,120.89,115.68,97.62,70.09,43.73,33.06,29.64,28.72,21.91(2C),21.00.

实施例17

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(吡啶-4-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21217)

合成方法参照实施例1(24mg，37.0％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:442.1874；found:442.1861；纯度：98.5％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.63(s,1H),10.17(s,1H),8.61(d,J＝5.9Hz,2H),8.33(s,1H),7.92(s,1H),7.77–7.63(m,2H),7.49–7.38(m,2H),4.98–4.62(m,J＝6.0Hz,1H),4.13(dd,J＝6.7,4.8Hz,2H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.08(p,J＝6.2Hz,2H),1.50(s,3H),1.48(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.51,165.94,154.44,152.94,152.71,152.08,149.66(2C),147.54,139.33,131.88,128.29,125.42(2C),115.88,104.94,97.28,91.67,88.68,71.34,43.78,28.69,21.83(2C),20.94.

实施例18

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(2-(吡啶-4-基)乙基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21218)

合成方法参照实施例2(38mg，83.2％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:446.2187；found:446.2180；纯度：95.4％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.35(s,1H),10.16(s,1H),8.49(d,J＝5.9Hz,2H),7.87(s,1H),7.82(s,1H),7.70–7.59(m,2H),7.11(d,J＝5.8Hz,2H),4.81(hept,J＝5.9Hz,1H),4.17–4.10(m,2H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.93–2.76(m,J＝4.0Hz,4H),2.07(dt,J＝12.2,6.2Hz,2H),1.42(s,3H),1.41(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.62,163.34,153.15,153.06,152.30,150.89,149.64(2C),148.41,147.57,139.13,128.17,124.05(2C),120.73,115.62,97.53,69.94,43.72,35.28,28.86,28.74,21.92(2C),21.00.

实施例19

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(嘧啶-5-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21219)

合成方法参照实施例1(70mg，58.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:443.1826；found:443.1798；纯度：96.7％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.65(s,1H),10.17(s,1H),9.15(s,1H),8.87(s,2H),8.33(s,1H),7.93(s,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.64(d,J＝7.5Hz,1H),4.86(dt,J＝12.2,6.1Hz,1H),4.16–4.12(m,2H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.11–2.07(m,2H),1.48(d,J＝6.1Hz,6H).13C NMR(151MHz,CDCl3)δ191.45,184.04,165.86,158.46,156.40,154.54,152.94,152.54,152.07,147.53,139.34,128.30,120.37,115.91,104.66,97.25,90.98,87.17,71.41,43.79,28.68,21.82(2C),20.93.

实施例20

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(吡嗪-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21220)

合成方法参照实施例1(120mg，46.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:443.1826；found:443.1808；纯度：98.2％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.64(s,1H),10.17(s,1H),8.77(s,1H),8.59(s,1H),8.48(d,J＝2.3Hz,1H),8.39(s,1H),7.93(s,1H),7.70–7.61(m,2H),4.92–4.82(m,1H),4.16–4.11(m,2H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.10–2.04(m,2H),1.49(s,3H),1.48(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.45,166.16,154.70,153.16,152.92,152.05,147.85,147.53,144.40,142.45,140.77,139.33,128.28,115.86,104.36,97.19,90.72,88.29,71.44,43.78,28.67,21.81(2C),20.92.

实施例21

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-((3-甲基吡啶-2-基)乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21221)

合成方法参照实施例1(55mg，55.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:456.2030；found:456.1967；纯度：95.2％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.61(s,1H),10.19(s,1H),8.45(d,J＝18.2Hz,2H),7.93(s,1H),7.66(dd,J＝18.5,7.6Hz,2H),7.57(d,J＝7.7Hz,1H),7.19–7.13(m,1H),4.89(t,J＝9.0Hz,1H),4.20–4.07(m,2H),2.98(t,J＝6.2Hz,2H),2.58(s,3H),2.14–2.04(m,2H),1.48(d,J＝6.0Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.44,166.00,154.17,152.93,152.76,152.12,147.66,147.22,143.50,139.25,136.88,136.03,128.15,122.41,115.69,105.43,97.14,92.68,87.84,71.11,43.76,28.67,21.89(2C),20.98,19.52.

实施例22

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-((4-甲基吡啶-3-基)乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21222)

合成方法参照实施例1(85mg，64.2％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:456.2030；found:456.1971；纯度：95.3％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.61(s,1H),10.18(s,1H),8.70(s,1H),8.41(d,J＝5.0Hz,1H),8.34(s,1H),7.93(s,1H),7.67(dd,J＝19.3,7.5Hz,2H),7.19(d,J＝5.0Hz,1H),4.93–4.80(m,1H),4.17–4.10(m,2H),2.98(t,J＝6.2Hz,2H),2.56(s,3H),2.13–2.04(m,2H),1.48(d,J＝6.0Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.45,165.71,154.04,152.93,152.14,152.04,151.72,148.74,147.98,147.64,139.26,128.19,124.23,121.13,115.74,105.73,97.28,90.72,89.98,71.15,43.76,28.68,21.89(2C),20.98,20.26.

实施例23

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-((1-甲基-1H-咪唑-5-基)乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21223)

合成方法参照实施例1(35mg，34.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:445.1983；found:445.1925；纯度：96.5％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.61(s,1H),10.18(s,1H),8.29(s,1H),7.92(s,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.64(d,J＝7.6Hz,1H),7.54(s,1H),7.42–7.31(m,1H),4.90–4.81(m,1H),4.16–4.10(m,2H),3.78(s,3H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.12–2.04(m,2H),1.46(d,J＝6.0Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.42,165.38,153.94,152.93,152.14,151.71,147.63,139.26,128.20,115.77,105.49,97.28,90.64,71.12,43.76,28.68,21.88(2C),20.98.

实施例24

N-(5-(((1H-咪唑-5-基)乙炔基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘吡啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21224)

合成方法参照实施例1(80mg，44.2％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:431.1826；found:431.1807；纯度：96.5％；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ191.30,170.85,165.00,153.73,152.66,152.20,152.10,147.11,141.56,140.33,131.99,129.65,117.39,106.02,101.82,97.38,86.83,83.77,71.30,60.25,28.23,21.92,21.26,20.77,14.56.

实施例25

N-(4-氟-5-(吡啶-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21525)(合成方法参考合成路线1)

步骤1：4-氟-5-(吡啶-2-亚乙基炔基)吡啶-2-胺(化合物4a)

将化合物2(2.38g，1mmol)，2-吡啶乙炔(1.03g，1mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(702mg，0.1mmol)，碘化亚铜(190mg，0.1mmol)，三乙胺(3ml，3mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，氩气保护下将反应加热至80℃，3小时后将体系冷却至室温，用二氯甲烷与水对反应体系进行分液，合并有机相后经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA 8:1至3:1梯度洗脱)得到化合物4a，为白色固体(1.75g，82.1％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.64(d,J＝4.6Hz,1H),8.33(d,J＝9.9Hz,1H),7.70(td,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.54(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(dd,J＝7.1,5.5Hz,1H),6.25(d,J＝10.7Hz,1H),4.83(s,2H).

步骤2：7-(二甲氧基甲基)-N-(4-氟-5-(吡啶-2-亚乙基炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(化合物13a)

合成方法参照化合物10(780mg，77.6％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ13.92(s,1H),8.65(d,J＝4.2Hz,1H),8.53(d,J＝9.9Hz,1H),8.09(d,J＝12.0Hz,1H),7.72(td,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.59–7.53(m,2H),7.30–7.26(m,2H),7.20(t,J＝6.4Hz,1H),5.47(s,1H),4.08(dd,J＝6.7,4.7Hz,2H),3.53(s,7H),2.88(t,J＝6.3Hz,2H),2.02(dd,J＝11.9,6.1Hz,2H).

步骤3：将化合物13a溶于6mL四氢呋喃和3mL水的混合溶剂中，加入1mL盐酸，室温搅拌半小时后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，将反应液调至中性，使用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，随后经乙酸乙酯重结晶得到目标产物ZZ21525，为白色固体(110mg，88.6％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:402.1361；found:402.1355；¹HNMR(600MHz,CDCl₃)δ13.87(s,1H),10.16(s,1H),8.66(d,J＝4.5Hz,1H),8.52(d,J＝9.7Hz,1H),8.09(d,J＝11.7Hz,1H),7.75–7.69(m,2H),7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.32–7.29(m,1H),4.16–4.12(m,2H),2.99(t,J＝6.2Hz,2H),2.11–2.07(m,2H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.32,168.48,154.75,153.44,152.67,151.98,150.18,147.49,142.89,139.44,136.31,128.39,127.34,123.18,116.05,103.84,100.87,94.66,79.94,43.83,28.67,20.85.

实施例26

7-甲酰基-N-(4-(2-甲氧乙氧基)-5-(吡啶-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21526)

将化合物13a(220mg，0.5mmol)，碳酸钾(138mg，1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入乙二醇甲醚(0.1mL，1mmol)将反应加热至60℃搅拌6小时，反应结束后使用二氯甲烷和水分液，合并有机相后经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA 3:1至1:1梯度洗脱)，将产物溶于6ml四氢呋喃和3ml水的混合溶剂中，加入1ml盐酸，室温搅拌半小时后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，将反应液调至中性，使用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，随后经乙酸乙酯重结晶得到目标产物为白色固体(150mg，66.9％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:458.1823；found:458.1807；纯度：96.3％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.68(s,1H),10.16(s,1H),8.63(s,1H),8.39(s,1H),7.91(s,1H),7.71–7.65(m,2H),7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.52(d,J＝7.8Hz,1H),7.25(dd,J＝7.5,4.9Hz,1H),4.39–4.33(m,2H),4.14–4.09(m,2H),3.91–3.87(m,2H),3.53(s,3H),2.96(t,J＝6.3Hz,2H),2.10–2.04(m,2H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.48,166.59,154.35,152.88,152.76,152.03,150.00,147.52,143.60,139.31,136.16,128.27,127.12,122.64,115.82,104.60,96.44,93.77,83.42,70.38,68.26,59.59,43.76,28.67,20.90.

实施例27

7-甲酰基-N-(4-((2-甲氧乙基)氨基)-5-(吡啶-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(ZZ21527)

合成方法参照实施例26(120mg，56.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:457.1983；found:457.1970；纯度：98.2％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.42(s,1H),10.17(s,1H),8.62(d,J＝4.5Hz,1H),8.21(s,1H),7.71(td,J＝7.7,1.6Hz,1H),7.66(d,J＝7.5Hz,1H),7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.55–7.51(m,2H),7.26(dd,J＝7.1,5.3Hz,1H),5.72(t,J＝5.2Hz,1H),4.15–4.09(m,2H),3.69(t,J＝5.2Hz,2H),3.54(dd,J＝10.6,5.3Hz,2H),3.44(s,3H),2.96(t,J＝6.3Hz,2H),2.09–2.04(m,2H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.70,155.15,153.56,152.89,152.18,151.69,149.94,147.58,143.37,139.17,136.32,128.16,126.87,122.63,115.55,99.82,95.70,92.94,84.07,70.42,58.95,43.72,42.16,28.72,20.97.

实施例28

7-甲酰基-N-(4-(异丁基氨基)-5-(吡啶-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21528)

合成方法参照实施例26(60mg，56.9％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:455.2190；found:455.2174；纯度：94.3％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.41(s,1H),10.18(s,1H),8.63(s,1H),8.21(s,1H),7.72(s,1H),7.66(s,1H),7.63(s,1H),7.53(d,J＝9.1Hz,2H),7.26(t,J＝8.4Hz,1H),5.39(s,1H),4.16–4.12(m,2H),3.17(t,J＝6.2Hz,2H),2.97(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(s,2H),2.03(s,1H),1.90(s,2H),1.06(d,J＝6.6Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.78,155.39,153.54,152.90,152.23,151.64,150.04,147.60,143.42,139.16,136.31,128.15,126.84,122.64,115.50,99.44,95.74,92.96,84.07,50.21,43.73,28.73,28.12,20.99,20.46(2C).

实施例29

N-(4-(环丙基氨基)-5-(吡啶-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21529)

合成方法参照实施例26(35mg，45.5％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:439.1877；found:439.1864；纯度：90.6％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.45(s,1H),10.18(s,1H),8.62(d,J＝4.8Hz,1H),8.21(s,1H),7.90(s,1H),7.72(td,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.67(d,J＝7.5Hz,1H),7.63(d,J＝7.5Hz,1H),7.54(d,J＝7.8Hz,1H),7.27(ddd,J＝7.5,4.9,1.0Hz,1H),5.64(s,1H),4.19–4.12(m,2H),2.97(t,J＝6.2Hz,2H),2.67–2.60(m,1H),2.11–2.03(m,2H),0.94(tt,J＝16.0,8.1Hz,2H),0.73–0.67(m,2H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.74,156.20,153.40,152.87,152.26,151.66,149.95,147.59,143.35,139.16,136.34,128.16,126.99,122.70,115.51,99.45,95.44,94.50,83.96,43.74,28.75,24.28,21.00,7.59(2C).

实施例30

N-(4-(环戊基氨基)-5-(吡啶-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21530)

合成方法参照实施例26(55mg，67.9％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:467.2190；found:467.2177；纯度：95.2％；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.42(s,1H),10.17(s,1H),8.62(d,J＝4.5Hz,1H),8.21(s,1H),7.71(td,J＝7.7,1.6Hz,1H),7.66(d,J＝7.5Hz,1H),7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.55–7.51(m,2H),7.26(dd,J＝7.1,5.3Hz,1H),5.72(t,J＝5.2Hz,1H),4.15–4.09(m,2H),3.69(t,J＝5.2Hz,2H),3.54(dd,J＝10.6,5.3Hz,2H),3.44(s,3H),2.96(t,J＝6.3Hz,2H),2.09–2.04(m,2H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.75,154.76,153.41,152.91,152.24,151.69,150.05,147.61,143.44,139.15,136.28,128.14,126.93,122.65,115.50,99.47,95.60,93.71,84.12,53.87,43.74,33.38,28.74,24.17,21.01.

实施例31

N-(4-氟-5-(吡啶-3-基乙炔基)吡啶-2-基)-7-甲酰-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21531)

合成方法参照实施例25(160mg，89.1％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:402.1361；found:402.1350；纯度：95.2％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.84(s,1H),10.17(s,1H),8.82(s,1H),8.60(d,J＝3.7Hz,1H),8.47(d,J＝9.8Hz,1H),8.10(d,J＝11.8Hz,1H),7.87(d,J＝7.9Hz,1H),7.71(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.36–7.30(m,1H),4.31–4.12(m,2H),2.99(t,J＝6.3Hz,2H),2.09(p,J＝6.2Hz,2H).

实施例32

7-甲酰基-N-(4-(2-甲氧乙氧基)-5-(吡啶-3-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21532)

合成方法参照实施例26(85mg，68.5％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:458.1823；found:458.1807；纯度：97.2％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.67(s,1H),10.18(s,1H),8.78(s,1H),8.56(d,J＝4.0Hz,1H),8.35(s,1H),7.94(s,1H),7.83(d,J＝6.3Hz,1H),7.70(d,J＝7.6Hz,1H),7.66(s,1H),7.31(dd,J＝7.8,4.9Hz,1H),4.43–4.34(m,2H),4.14(dd,J＝6.7,4.7Hz,2H),3.94–3.82(m,2H),3.54(s,3H),2.98(t,J＝6.3Hz,2H),2.16–2.00(m,2H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.40(d,J＝6.6Hz),166.40,154.26,152.90,152.19,152.12,152.10,148.34,147.64,139.31,138.28,128.24,123.07,120.83,115.82,104.96,96.54,91.13,86.66,70.47,68.36,59.59,43.77,28.67,20.96.

实施例33

7-甲酰基-N-(4-((2-甲氧基乙基)氨基)-5-(吡啶-3-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(ZZ21533)

合成方法参照实施例26(110mg，53.9％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:457.1983；found:457.1915；纯度：97.9％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.41(s,1H),10.18(s,1H),8.80–8.74(m,1H),8.59–8.53(m,1H),8.18(s,1H),7.82(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(s,1H),7.31(dt,J＝8.3,4.1Hz,1H),5.48(t,J＝4.9Hz,1H),4.24–4.07(m,2H),3.71(t,J＝5.1Hz,2H),3.53(q,J＝5.4Hz,2H),3.46(s,3H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.11–2.03(m,2H).

实施例34

(S)-7-甲酰基-N-(4-(((1-甲氧基丙烷-2-基)氨基)-5-(吡啶-3-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21534)

合成方法参照实施例26(64mg，30.4％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:471.2139；found:471.2075；纯度：95.1％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.39(s,1H),10.18(s,1H),8.81–8.73(m,1H),8.57(d,J＝3.8Hz,1H),8.17(s,1H),7.82(dt,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.66(t,J＝8.8Hz,2H),7.58(s,1H),7.32(dd,J＝7.8,4.9Hz,1H),5.42(d,J＝7.9Hz,1H),4.19–4.09(m,2H),4.02–3.90(m,1H),3.61–3.50(m,2H),3.46(s,3H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.11–1.98(m,2H),1.37(d,J＝6.5Hz,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.76(d,J＝6.6Hz),154.09,153.31,152.92,152.22,151.86,150.96,148.45,147.61,139.21,138.09,128.19,123.18,120.52,115.65,100.28,93.28,93.12,87.03,75.43,59.36,47.40,43.75,28.72,20.99,17.51.

实施例35

(R)-7-甲酰基-N-(4-((1-甲氧基丙烷-2-基)氨基)-5-(吡啶-3-基乙炔基)吡啶-2-基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ21535)

合成方法参照实施例26(50mg，23.7％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:471.2139；found:471.2071；纯度：96.1％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.37(s,1H),10.18(s,1H),8.77(s,1H),8.59–8.53(m,1H),8.17(s,1H),7.81(d,J＝7.8Hz,1H),7.67(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.58(s,1H),7.32(dd,J＝7.9,4.9Hz,2H),5.41(d,J＝8.0Hz,1H),4.15(s,2H),3.95(tt,J＝7.3,3.9Hz,1H),3.61–3.48(m,2H),3.46(s,3H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.08(dd,J＝10.6,4.7Hz,2H),1.36(d,J＝6.5Hz,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ191.77(d,J＝6.4Hz),154.06,153.43,153.03,152.93,152.24,152.21,151.87,151.13,148.43,147.62,139.19,138.08,128.19,123.18,120.55,115.60,100.26,93.28,75.44,59.36,47.38,43.74,28.73,21.00,17.52.

实施例36

N-(((3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)-4-异丙氧基吡啶-2-基-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ22536)(合成方法参考合成路线2)

步骤1：6-溴-7-(二甲氧基甲基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶(化合物19)

室温下，将化合物8(9g，43.3mmol)溶于乙腈中，分批加入N-溴代丁二酰亚胺(8.1g，45.4mmol)，继续搅拌1小时，反应结束后浓缩反应液，使用二氯甲烷溶解，1M NaOH水溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤浓缩得到化合物19(9.5g，76.55％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.28(s,1H),5.57(s,1H),3.47(s,6H),3.42–3.38(m,2H),2.72(t,J＝6.3Hz,2H),1.88(dd,J＝11.6,6.2Hz,2H).

步骤2：2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-3-碳醛(化合物20)

在-78℃下，向化合物19(5g，17.4mmol)的四氢呋喃溶液中滴加甲基锂(1.6M乙醚溶液，13mL，20.9mmol)，搅拌5分钟后滴加正丁基锂溶液(1.6M四氢呋喃溶液，22mL，34.8mmol)，搅拌15分钟后滴加干燥的N,N-二甲基甲酰胺，反应液缓慢升温至室温，再搅拌半小时，向反应中加入饱和氯化铵溶液淬灭，搅拌5分钟后用二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，PE/EA 3:1至1:1梯度洗脱)的到目标化合物19(2.2g。53.48％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.31(s,1H),7.74(s,1H),5.77(s,1H),5.42(s,1H),3.45(d,J＝2.7Hz,8H),2.75(t,J＝6.3Hz,2H),1.90(dd,J＝11.6,6.1Hz,2H).

步骤3：N-(2-氨基乙基)-N-甲基甘氨酸乙酯(化合物18)

在0℃下，将溴乙酸乙酯(3.81mL，34.4mmol)加入到2-(甲基氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(6g，34.4mmol)与三乙胺(14.43mL)的四氢呋喃溶液中，室温搅拌24小时后，用二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液分液，合并有机相后干燥得到粗品，将其溶于四氢呋喃与乙醇(60mL：300mL)的混合溶剂中，室温下加入浓盐酸30mL，搅拌一小时后蒸干反应液，添加乙醇60mL，蒸干，重复两次后得到目标化合物18(3.2g，58％)¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.60(s,3H),4.31(s,2H),4.25–4.21(m,2H),3.50(s,2H),3.28(d,J＝5.6Hz,2H),2.92(s,3H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H).

步骤4：1-((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪-2-酮(化合物21)

室温下将化合物20(230mg，0.973mmol)，化合物18(260mg，1.62mmol)和0.7mL三乙胺溶于1,2-二氯乙烷中，分批次加入三乙酰基硼氢化钠(900mg，3mmol)，室温搅拌36小时，反应完成后加入饱和NaHCO₃水溶液，混合物用二氯甲烷萃取，合并有机相后经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，DCM/MeOH 100:0至10:1梯度洗脱)，得到目标化合物21(180mg，55.3％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.15(s,1H),5.24(s,1H),4.71(s,2H),3.44(s,6H),3.41(s,2H),3.25–3.21(m,2H),3.20(s,2H),2.71(t,J＝6.3Hz,2H),2.62–2.57(m,2H),2.35(s,3H),1.93–1.88(m,2H).

步骤5：5-((3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)-4-异丙氧基吡啶-2-胺(化合物22a)

合成方法参照化合物3和化合物4a(120mg，21.37％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.14(s,1H),6.68(d,J＝2.3Hz,2H),6.45(t,J＝2.3Hz,1H),5.96(s,1H),4.66–4.54(m,3H),3.82(s,6H),1.44(s,3H),1.42(s,3H).

步骤6：7-(二甲氧基甲基)-N-(5-((3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-6-((4-甲基-2-氧哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(化合物24a)

将三光气(18.6mg，0.062mmol)溶于二氯甲烷，将22a(56mg，0.18mmol)，三乙胺(0.07mL，0.54mmol)，化合物21(72mg，0.22mmol)，依次加入反应液中，室温搅拌。反应完成后加入饱和NaHCO₃水溶液洗涤，合并有机相后经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品经硅胶柱层析进行分离(SiO₂，DCM/MeOH 100:0至10:1梯度洗脱)，得到目标化合物24a(82mg，67.9％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ13.71(s,1H),8.32(s,1H),7.88(s,1H),7.47(s,1H),6.70(d,J＝1.8Hz,2H),6.47(s,1H),5.49(s,1H),4.95–4.76(m,3H),4.08–4.00(m,2H),3.82(s,6H),3.52(s,6H),3.32–3.26(m,2H),3.23(s,2H),2.83(t,J＝5.8Hz,2H),2.64(d,J＝4.7Hz,2H),2.36(s,3H),2.00(s,2H),1.47(s,3H),1.46(s,3H).

步骤7：将化合物24a溶于6mL四氢呋喃和3mL水的混合溶剂中，加入1mL盐酸，室温搅拌半小时后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，将反应液调至中性，使用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，随后经乙酸乙酯重结晶得到目标产物ZZ22536，为白色固体(42mg，90.2％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:627.2926；found:627.2905；纯度：95.1％；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ13.55(s,1H),10.29(s,1H),8.30(s,1H),7.89(d,J＝3.2Hz,1H),7.64(s,1H),6.72(t,J＝2.6Hz,2H),6.47(t,1H),5.12(s,2H),4.87–4.81(m,1H),4.14–4.06(m,2H),3.83(d,J＝2.0Hz,6H),3.42–3.32(m,2H),3.22(d,J＝4.6Hz,2H),2.94(t,J＝6.2Hz,2H),2.71–2.63(m,2H),2.37(s,3H),2.06(q,J＝6.4,5.8Hz,2H),1.49(s,3H),1.47(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ193.89,165.71,160.44(3C),153.68,152.84,152.26,151.09,143.94,140.09,128.21,124.89,109.23(2C),105.94,101.52,97.30,94.26,83.15,71.20,59.26,55.46(2C),51.75,47.08,45.18,43.89,43.75,29.74,28.52,21.86(2C),20.89.

实施例37

N-(5-(3,5-二甲氧基苯乙基)-4-异丙氧基吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘吡啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ22537)

将化合物24a(50mg，0.074mmol)溶于甲醇溶液，加入钯碳(8mg，0.0074mmol)，在氢气氛围下反应8小时后滤除不溶物，减压浓缩，随后将化合物溶于3ml四氢呋喃和1ml水的混合溶剂中，加入0.5ml盐酸，室温搅拌半小时后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，将反应液调至中性，使用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，随后经乙酸乙酯重结晶得到目标产物ZZ22537，为白色固体(33mg，70.8％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:631.3239；found:631.3222；纯度：97.7％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.30(s,1H),10.28(s,1H),7.89(s,1H),7.80(s,1H),7.62(s,1H),6.38(d,J＝2.2Hz,2H),6.33(t,J＝2.2Hz,1H),5.11(s,2H),4.82(tp,J＝11.6,6.0,5.5Hz,1H),4.13–4.07(m,2H),3.79(s,6H),3.39–3.33(m,2H),3.21(s,2H),2.93(t,J＝6.2Hz,2H),2.82(s,3H),2.71–2.62(m,2H),2.37(s,3H),2.06–1.97(m,2H),1.44(s,3H),1.42(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ193.95,167.52,163.41,160.65(2C),153.02,152.73,151.28,148.24,144.55,143.98,139.96,128.10,128.03,121.75,106.48(2C),97.76,97.44,69.88,59.29,55.27(2C),51.76,47.05,45.19,43.80,43.70,36.30,29.87,28.57,21.95(2C),20.94.

实施例38

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(吡啶-2-基乙炔基)吡啶-2-基)-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘吡啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ22538)

合成方法参照实施例36(60mg，41.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:568.2667；found:568.2647；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ13.61(s,1H),10.28(s,1H),8.63(d,J＝4.6Hz,1H),8.36(s,1H),7.90(s,1H),7.70(td,J＝7.7,1.5Hz,1H),7.62(s,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),7.25(dd,J＝7.1,5.2Hz,1H),5.11(s,2H),4.84(dq,J＝11.8,5.9Hz,1H),4.15–4.08(m,2H),3.36(t,J＝5.4Hz,2H),3.22(s,2H),2.94(t,J＝6.2Hz,2H),2.67(t,J＝5.4Hz,2H),2.37(s,3H),2.04(dd,J＝11.7,6.0Hz,2H),1.48(d,J＝6.1Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ193.83,167.55,166.00,154.16,153.00,152.83,151.04,149.98,143.94,143.73,140.12,136.14,128.29,128.21,127.27,122.57,105.11,97.16,93.45,83.86,71.30,59.26,51.75,47.10,45.18,43.87,43.76,28.51,21.81(2C),20.88.

实施例39

7-甲酰基-N-(4-异丙氧基-5-(吡啶-3-基乙炔基)吡啶-2-基)-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3，4-二氢-1,8-萘吡啶-1(2H)-羧酰胺(ZZ22539)

合成方法参照实施例36(120mg，22.3％)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd:568.2666；found:568.2637；纯度：95.08％；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.59(s,1H),10.29(s,1H),8.81–8.76(m,1H),8.55(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.31(s,1H),7.91(s,1H),7.83(dt,J＝7.9,1.8Hz,1H),7.64(s,1H),7.34–7.28(m,1H),5.12(s,2H),4.85(dq,J＝12.0,6.0Hz,1H),4.11(d,J＝5.5Hz,2H),3.37(t,J＝5.4Hz,2H),3.22(s,2H),2.94(t,J＝6.2Hz,2H),2.67(t,J＝5.4Hz,2H),2.37(s,3H),2.07–2.03(m,2H),1.49(s,3H),1.48(s,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ193.83,167.53,165.76,154.05,152.84,152.36,152.17,151.06,148.32,143.93,140.11,138.29,128.32,128.23,123.05,120.87,105.40,97.22,90.84,86.99,71.30,59.27,51.76,47.12,45.19,43.91,43.76,28.52,21.84(2C),20.89.

实施例40

2-甲酰基四氢萘啶类化合物激酶抑制活性测试

FGFR1-4激酶抑制实验：使用基于FRET的Z’-Lyte分析系统，根据制造商的说明(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的生命技术公司)，确定化合物对FGFR1-4的抑制活性。反应在384孔板中以5μL反应体积在50mM HEPES(pH 7.5)，10mM MgCl₂、1mM EGTA和0.01％Brij-35中用适量的激酶进行。将反应液在室温下，在2μM底物与各激酶(对应ATP浓度：FGFR1：25μM，FGFR2：5μM，FGFR3：75μM，FGFR4：150μM)的存在下以及在各种浓度的化合物存在下孵育1.5小时，然后添加2.5μL显影剂，再在室温下孵育1小时，然后添加2.5μL终止溶液。用EnVisionMultilabel Reader(Perkin Elmer，Inc.)检测445nm(香豆素)/520nm(荧光素)的荧光信号比。使用GraphpadPrism5(Graphpad Software，Inc)分析数据。通过以下公式计算化合物的抑制率：

IC50值通过抑制曲线以四参数拟合计算。本发明的2-甲酰基四氢萘啶类化合物的激酶抑制活性结果如表1所示，表1中所列化合物编号对应于实施例1-39中的化合物编号。

表1化合物的激酶抑制活性

由激酶活性检测结果可知，本发明的2-甲酰基四氢萘啶类化合物对FGFR1-3亚型激酶都未表现出抑制活性，对FGFR4表现出较高的抑制活性，多数化合物显示强效激酶抑制活性。

实施例41

2-甲酰基四氢萘啶类化合物对多种癌细胞增殖的抑制活性测试

体外细胞增殖抑制采用CCK8试验检测。MDA-MB-453、Huh 7、Hep3b2.1-7、SNU16、NCI-H1581等细胞(均来自上海细胞库)存储于相应的生长介质中，在复苏使用前至少已传两代。实验步骤如下：取适量对数生长期细胞接种于96孔板，每孔体积为100μL，然后在含有5％CO₂的培养箱中于37℃培养过夜。将待测化合物溶于DMSO中配置10μM/L的母液，然后稀释10个梯度，取其中2μL不同浓度的化合物溶液与998μL培养液混合。分别取100μL混合的培养液加入到相应的96孔板中。以2μL DMSO溶液作为相应的空白对照。共同培养孵育72小时后，加入CCK8(CK04,Dojindo Laboratories,Kumamoto,Japan)。将CCK8和培养基1：2稀释，例如1ml CCK8加入2ml培养基，混匀后，96孔板每个孔加入30μl稀释后的CCK8，拍打混匀，放置1-4h左右。用超级酶标仪测定OD值；首先根据OD₄₅₀和OD₆₅₀数据,得到每孔的实际吸光度值A(A＝OD₄₅₀-OD₆₅₀),再根据各孔的实际吸光度值A，得到各处理孔的细胞存活率：

细胞存活率(％)＝[(As-Ac)/(Ab-Ac)]×100％]

As：实验孔(含有细胞、不同浓度药物处理孔)的吸光度值

Ab：溶媒对照孔(含有细胞、药物浓度为0的溶媒处理孔)的吸光度值

Ac：空白孔(不含细胞和药物的孔)的吸光度值

然后将细胞存活率数据及其对应受试化合物和对照化合物的浓度输入GraphPadPrism 5Demo软件，使用非线性回归模型计算IC₅₀值，结果如表2所示。

表2化合物对细胞增殖的抑制活性

由细胞增值抑制活性检测结果可知，本发明的2-甲酰基四氢萘啶类化合物对FGFR4依赖的高表达FGFR4的肝细胞癌细胞Huh7，Hep3B2.1-7，三阴乳腺癌细胞MDA-MB-453具有较强的增值抑制活性，本发明的2-甲酰基四氢萘啶类化合物对非FGFR4依赖的FGFR2扩增人胃癌细胞SNU16，非小细胞肺癌细胞NCI-H1581均没有明显抑制作用。

实施例42

2-甲酰基四氢萘啶类化合物对Baf3细胞及Hep3b细胞(均来自上海细胞库)中FGFR4激酶磷酸化及下游信号通路活化的影响

体外细胞信号通路变化采用免疫印迹法检测。细胞使用合适密度接种6孔板，加入梯度浓度化合物或对照DMSO共培养。在预定的时间点收集，弃去培养基，并用4℃预冷的PBS缓冲液漂洗细胞2次，去尽残留液体。使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的1×SDS样品裂解缓冲液(CST)裂解细胞。经超声剪切和煮沸后，将裂解物上样于10～12％SDS-PAGE凝胶，电泳结束后将已分离好的蛋白质转移到PVDF膜上。用5％BSA溶液(in TBST,0.5％Tween-20)室温封闭4小时后，将膜与相应的一抗(1:3000～1:500)在4℃下孵育过夜。TBST溶液漂洗膜3～5次后，用相应的辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗室温孵育2h。抗体FGFR4(8562)、PLCγ1(5690)、Erk1/2(4695)、p-FGFR(3471)、p-Erk1/2(4370)、p-FRS2α(3861)、p-PLCγ1(14008)、GAPDH(5174)以及HRP连接的二抗购自Cell Signaling Technology(Boston,MA,USA)。抗体FRS2α(sc-17841)购自Santa Cruz Biotechnologies(Dallas,TX,USA)。蛋白质信号通过ECL蛋白质印迹检测试剂盒(Thermo Scientific，Waltham，MA，USA)进行可视化，并用Amersham Imager 600系统(GE，Boston，MA，USA)检测。

结果如图1所示，结果显示，本发明化合物ZZ22539能够剂量依赖性地抑制FGFR4以及下游信号蛋白的激活，但不会引起靶蛋白和下游效应蛋白总量的变化。在BA/F3-FGFR4细胞中，浓度为11.1nM的化合物ZZ22539对FGFR4、PLCγ1、FRS2、ERK的磷酸化抑制效果明显，其磷酸化作用几乎完全被抑制。

实施例43

2-甲酰基四氢萘啶类化合物对细胞克隆形成能力的影响

Hep3b2.1-7和NCI-H1581细胞系分别以4000个/mL、1000个/mL的密度接种于6孔板中，加入不同浓度的测试化合物或对照DMSO共培养。每3天更换具有相应处理的完全培养基。10天后，弃去上清，用PBS缓冲液小心洗涤细胞两次，4℃下用冷甲醇固定30分钟，而后在室温下用结晶紫染料(0.1％w/v)染色细胞1小时。用蒸馏水洗尽残余结晶紫染料后，干燥、扫描并计数。结果如图2所示，结果显示化合物ZZ22539可剂量依赖地降低Hep3B2.1-7细胞的克隆形成能力，在浓度为33.3nM时作用明显，而对于非FGFR4依赖的非小细胞肺癌细胞NCI-H1581无明显作用。

实施例44

2-甲酰基四氢萘啶类化合物的体内药代动力学性质测试

给药与样品采集

1.大鼠静脉给药：SD大鼠3只，体重180～220g。给药前禁食12h，试验期间少量进食，饮水自由。按5mg/kg的剂量静脉注射给予化合物。给药后0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,24h经眼眶取血约0.3mL，置肝素化试管中，6000rpm离心10min，分离血浆，4℃保存待测。

2.大鼠口服给药：SD大鼠3只，体重180～220g。给药前禁食12h，试验期间少量进食，自由饮水。分别按25mg/kg的剂量口服给予化合物。给药后0.25,0.5,1,2,4,6,8,24h经眼眶取血约0.3mL，置肝素化试管中，6000rpm离心10min，分离血浆，4℃保存待测。

血浆样品测定

1.血浆样品处理

向50μL大鼠血浆样品中加入150μL内标溶液(5μg/mL，乙腈溶液)，混匀；涡流混合2min，离心30min(13000rpm，4℃)，取上清于另一离心管中，取20μL进行LC/MS/MS分析。

2.标准曲线的配制

取大鼠空白血浆50μL，依次加入化合物标准系列溶液10μL，配制相当于血浆浓度为20，50，100，500，1000，2000，4000，6000，12000，40000ng/mL的化合物血浆样品，按“血浆样品处理”项下操作，建立标准曲线。以待测化合物的浓度(x)为横坐标，待测化合物与内标物的峰面积比值(y)为纵坐标，用加权(W＝1/x²)最小二乘法进行回归运算，求得直线回归方程，即为标准曲线。

3.数据处理和分析

采用DAS 2.0软件计算大鼠给药后的药代动力学参数，化合物ZZ22539测试结果如表3所示。

表3化合物ZZ22539在SD大鼠体内的药代动力学性质参数

结果显示，本发明化合物ZZ22539具有较优的药代动力学性质，有很高的口服生物利用度，其口服生物利用度远高于化合物Roblitinib(在大鼠中的口服生物利用度为20％)。[Fairhurst,R.A.；Knoepfel,T.；Buschmann,N.；Leblanc,C.；Mah,R.；Todorov,M.；Nimsgern,P.；Ripoche,S.；Niklaus,M.；Warin,N.；Luu,V.H.；Madoerin,M.；Wirth,J.；Graus-Porta,D.；Weiss,A.；Kiffe,M.；Wartmann,M.；Kinyamu-Akunda,J.；Sterker,D.；Stamm,C.；Adler,F.；Buhles,A.；Schadt,H.；Couttet,P.；Blank,J.；Galuba,I.；Trappe,J.；Voshol,J.；Ostermann,N.；Zou,C.；Berghau-sen,J.；Del,R.E.A.；Jahnke,W.；Furet,P.Discovery of Roblitinib(FGF401)as a Reversible-Covalent Inhibitor oftheKinase Activity ofFibroblast Growth Factor Receptor 4.J.Med.Chem.2020,63,12542-12573.]。

实施例45

2-甲酰基四氢萘啶类化合物对小鼠移植瘤生长抑制的影响

雌性CB17-SCID小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：SCXK(京)2016-0006。动物入室后，检疫一周，Hep3b2.1-7细胞体外培养放大到40盘后收集，用生理盐水与基质胶(BD Biosciences)1:1混匀调整到合适细胞浓度(3.5×10⁷个/ml)，接种于动物右前腋皮下，0.2ml/只。大约15天后，肿瘤体积达到200-300mm³，将携带肿瘤的小鼠随机分组：溶剂对照组(0.1ml/10kg,qd)、受试药物(30mg/kg，q2d)组，共2组，每组入组动物6只。拟口服给药，受试药物悬浮于0.5％CMC-Na水溶液中，每天两次，持续14天，每组隔天测量小鼠体重和肿瘤体积，其中肿瘤体积由以下公式确定：V＝0.5a×b²，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。末次给药后采集动物瘤体进行病理、组化分析。

肿瘤抑制(TGI)计算公式为：TGI＝[1-(T-T₀)/(C-C₀)]×100，其中，T和T₀分别为测量当天和第一天时的受试药物组的肿瘤体积，C和C₀分别为测量当天和第一天时的空白对照组的肿瘤体积。

实验结果如图3所示，化合物ZZ22539能够有效抑制小鼠体内Hep3b2.1-7肿瘤的生长，而且不显著影响小鼠体重的改变。肿瘤生长抑制计算结果表明，化合物ZZ22539以30mg/kg处理小鼠时，其TGI(肿瘤生长抑制)值为95.19％。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以下实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (18)

1.具有式(Ⅰ)所示结构的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子：

其中，G选自：乙炔基或-(CH₂)_n-；n选自：0、1或2；

R¹选自：一个或多个R⁴取代或者未取代的C₆-C₁₀芳基、一个或者多个R⁴取代或者未取代的5-10元杂芳基；

R²选自：卤素或-W-R⁵；W选自NR⁶、O或S；

R³选自：H、一个或多个R⁷取代或者未取代的C₁～C₆烷基；

R⁴选自：H、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤素、氰基，卤素取代的C₁～C₆烷基；

R⁵选自：C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基取代的C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷胺基取代的C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基；

R⁶选自：H或者C₁～C₆烷基；

R⁷选自：一个或多个R⁸取代或者未取代的5-8元杂环基；

R⁸选自：H或者C₁～C₆烷基。

2.根据权利要求1所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，具有式(II)所示结构：

3.根据权利要求1所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，具有式(III)所示结构：

并且，R¹选自：

4.根据权利要求1所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，具有式(IV)所示结构：

并且，R¹选自：

5.根据权利要求1或2所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R¹选自：一个或多个R⁴取代或者未取代的苯基、一个或多个R⁴取代或者未取代的苯并呋喃基、一个或多个R⁴取代或者未取代的苯并噻吩基、一个或多个R⁴取代或者未取代的5-6元含氮杂芳基。

6.根据权利要求5所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R¹选自：一个或多个R⁴取代或者未取代的苯基、一个或多个R⁴取代或者未取代的苯并呋喃基、一个或多个R⁴取代或者未取代的苯并噻吩基、一个或多个R⁴取代或者未取代的吡啶基、一个或多个R⁴取代或者未取代的嘧啶基、一个或多个R⁴取代或者未取代的吡嗪基、一个或多个R⁴取代或者未取代的咪唑基、一个或多个R⁴取代或者未取代的吡唑基。

7.根据权利要求1-2、权利要求5-6任一项所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R⁴选自：H、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氯、氟、甲基、乙基、丙基、异丙基、氰基、三氟甲基。

8.根据权利要求7所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R¹选自如下基团：

9.根据权利要求1-4任一项所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R²选自：卤素或-W-R⁵；W选自NH、O；R⁵选自：C₁～C₄烷基、C₁～C₃烷氧基取代的C₁～C₃烷基、C₁～C₃烷胺基取代的C₁～C₃烷基、C₃～C₆环烷基。

10.根据权利要求9所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R²选自：卤素、C₁～C₄烷氧基、C₁～C₃烷氧基取代的C₁～C₃烷氧基、或者-NH-R⁵；R⁵选自：C₁～C₃烷氧基取代的C₁～C₃烷基。

11.根据权利要求9所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R²选自：氟、

12.根据权利要求1-4任一项所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R³选自：H、C₁～C₃烷基、R⁷取代的C₁～C₃烷基；R⁷选自：C₁～C₃烷基取代的5-6元含氮杂环基。

13.根据权利要求12所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R³选自：H或者

14.根据权利要求1所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，所述2-甲酰基四氢萘啶类化合物选自如下化合物：

15.权利要求1-14任一项所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备FGFR4抑制剂中的应用。

16.权利要求1-14任一项所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。

17.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为：肝癌、头颈癌、食道癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、横纹肌肉瘤。

18.一种预防和/或治疗肿瘤的药用组合物，其特征在于，由活性成分和药学上可接受的辅料制备得到，所述活性成分包括权利要求1-14任一项所述的2-甲酰基四氢萘啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子。

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