CN115998772A

CN115998772A - 一种细菌菌株及组合物和用途

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Publication number: CN115998772A
Application number: CN202211741118.0A
Authority: CN
Inventors: 林诠盛; 蒋先芝; 贤一博; 邝祖鹏; 黄宝家; 孔萍; 邓茜莹; 赵莹莹; 肖晨; 张腾勋; 邝茜雯; 泰利宏
Original assignee: Moon Guangzhou Biotech Co ltd
Current assignee: Moon Guangzhou Biotech Co ltd
Priority date: 2021-04-06
Filing date: 2021-04-06
Publication date: 2023-04-25
Also published as: CN113069475A; CN113069475B

Abstract

本发明公开了一种细菌菌株及组合物和用途，涉及菌株分离和应用技术领域。本发明提供的克里斯滕森菌可以应用于治疗或预防肝脏功能损伤及肝脏功能损伤相关疾病、消化道黏膜损伤及消化道黏膜损伤相关疾病、糖尿病、肥胖及肥胖相关疾病。经发明人验证，本发明提供的克里斯滕森菌对肾脏无毒副作用，可减少肝脏重量；治疗初期脂肪肝炎病灶；减缓肝脏细胞脂肪堆积；降低血清AST、ALT；减少腹部白色脂肪炎症性病变。克里斯滕森菌还能修复消化道黏膜、恢复黏膜屏障功能，防治因屏障功能受损引起的肠漏、消化性溃疡等疾病。还具有降低机体空腹血糖，调节胰岛素水平，降低哺乳动物体脂的功效，具有防治糖尿病、提高肥胖患者代谢功能的作用。

Description

一种细菌菌株及组合物和用途

技术领域

本发明涉及菌株分离和应用技术领域，具体而言，涉及一种细菌菌株及组合物和用途。

背景技术

目前，肝病的主要通过接种肝炎疫苗，减少饮酒，改善膳食结构和进行身体锻炼来预防治疗。但这些策略往往只能起到预防作用，且收益甚少，效果因个人体质而异，一旦面临已发生的肝脏疾病则显得束手无策。因此，目前急需能够有效预防治疗肝脏疾病的应对措施，需要开发一种有效且副作用小的能够预防治疗肝脏疾病的方法或药物。

消化道黏膜损伤尤其是肠道黏膜损伤不仅会影响营养物质的消化吸收，还会对黏膜屏障功能和机体免疫功能造成极其不利的影响。常用的消化道黏膜损伤中西结合药物修复方法常伴有中药药效慢、难根治易复发，西药易对消化系统产生刺激作用和不良反应等缺点。亟需对修复消化道黏膜损伤药效快、药力持久且无毒副作用的药物的开发。

关于糖尿病，目前尚无根治方法，主要还是通过药物治疗的手段控制糖尿病。而当前糖尿病的药物治疗包括口服药物治疗如磺脲类药物、双胍类降糖药、α葡萄糖苷酶抑制剂、胰岛素增敏剂等，以及胰岛素注射治疗。虽然有几种药物可用于治疗T2D(2型糖尿病)，但与药物疗效因人而异，而且其存在令人担忧的潜在副作用，副作用包括：(1)引起胃肠道不良反应，包括恶心、呕吐和腹泻；(2)加重胰岛负担，可能引起胰腺炎；(3)可能引起甲状腺肿大与甲状腺癌；(4)其他一些肠道、肾功能、低血糖等副作用；(5)有引起抑郁倾向。因此迫切需要开发一种有效且副作用小的治疗糖尿病的方法或药物。

肥胖症的药物治疗有很长的历史，现代常用的减肥药物包括有利拉鲁肽，奥利司他、西布曲明和利莫那班等。但许多减肥药物被市场限制或退出临床应用，因为其中一些药物不能达到预期效果，或是由于其让患者产生严重的不良反应。因此迫切需要开发一种有效且副作用小的治疗肥胖症及相关疾病的方法或药物。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细菌菌株及组合物和用途以解决上述技术问题。

由于肠道微生物在肥胖和糖尿病中的新兴作用，肠道微生物自身的改善糖尿病作用，以及其与抗糖尿病药物的相互作用及其对药物功能的影响称为了当前的研究热点。一方面，肠道微生物可以通过分泌短链脂肪酸等途径影响宿主的代谢，免疫和脑功能，对人体将抗具有不可缺少的作用。另一方面，微生物组及其代谢物的代谢活动会影响药物的代谢和药效，而药物也可以操纵肠道微生物组的组成和代谢能力。

而本发明提供了一种克里斯滕森菌，能够治疗初期脂肪肝炎病灶，减缓肝脏脂肪堆积、缓解肝脏病变，从而有效防治肝脏功能损伤及相关疾病；该菌株同时具有修复消化道黏膜屏障功能，降低机体的空腹血糖、调节胰岛素水平，降低体重调节血脂四项的功能，从而具有预防和治疗消化道黏膜损伤及相关疾病、糖尿病、肥胖及肥胖相关疾病的作用。

本发明是这样实现的：

克里斯滕森菌(Christensenella sp.)物种的细菌菌株在制备用于治疗或预防选自以下至少一种的疾病或症状的药物中的用途：肝脏功能损伤及肝脏功能损伤相关疾病、消化道黏膜损伤及消化道黏膜损伤相关疾病、糖尿病、肥胖及肥胖相关疾病。

肝脏功能损伤相关疾病包括如下疾病中的至少一种：脂肪肝、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化；

消化道黏膜损伤是指消化道黏膜通透性升高、黏膜屏障作用受损，消化道黏膜损伤相关疾病包括肠漏病症、消化性溃疡、胃肠炎、炎性肠病中的至少一种；

肥胖相关疾病包括如下疾病中的至少一种：心血管疾病、高脂血症、胰岛素抗性综合征、肥胖相关的胃食管返流症和脂肪性肝炎。

在本发明应用较佳的实施方式中，细菌菌株具有与SEQ ID NO.1至少98.65％一致的16s rRNA序列。

在本发明应用较佳的实施方式中，克里斯滕森菌具有与SEQ ID NO.1至少99％一致的16s rRNA序列。

在本发明应用较佳的实施方式中，克里斯滕森菌具有与SEQ ID NO.1 99％、99.5％、99.9％或100％一致的16s rRNA序列。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物是冻干的。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物还包括一种或多种药学上可接受的赋形剂或载剂。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物是疫苗组合物。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物被配制用于经口施用、注射施用或灌胃施用。

一种以保藏号为GDMCC No：61117保藏的克里斯滕森菌菌株或其子代菌株或亚克隆菌株的细胞。

一种组合物，其包括上述菌株和/或菌株的代谢产物。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述组合物还包括药学上可接受的赋形剂或载剂。

一种如上述组合物在用于制备药物或制剂中的用途，药物或制剂用于选自如下至少一组的用途：

减少肝脏重量；

治疗初期脂肪肝炎病灶；

减缓肝脏细胞脂肪堆积；

降低血清AST、ALT；

减少腹部白色脂肪炎症性病变；

减轻哺乳动物的体重；

减少哺乳动物的摄食量；

降低哺乳动物的体脂；

降低哺乳动物血清中如下至少一种指标的水平：总胆固醇水平、低密度脂蛋白和甘油三酯水平；

提高哺乳动物血清高密度脂蛋白的水平；

改善哺乳动物口服葡萄糖耐量受损；

降低哺乳动物的空腹血糖；

降低哺乳动物HOMA-IR指标；

修复消化道黏膜损伤。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供的克里斯滕森菌可以应用于治疗或预防肝脏功能损伤及肝脏功能损伤相关疾病、消化道黏膜损伤及相关疾病、糖尿病、肥胖及肥胖相关疾病。经发明人验证，本发明提供的克里斯滕森菌对肾脏无毒副作用，可减少肝脏重量；治疗初期脂肪肝炎病灶；减缓肝脏细胞脂肪堆积；降低血清AST、ALT；减少腹部白色脂肪炎症性病变。克里斯滕森菌能够降低机体的空腹血糖，并且明显改善机体得到胰岛素抵抗水平，具有预防和治疗糖尿病的作用。此外，克里斯滕森菌还可以降低哺乳动物的体脂，提高肥胖患者代谢功能。克里斯滕森菌具有修复受损的消化道黏膜和防治黏膜损伤相关疾病的功能。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为分离出的菌株的宏观形态图；

图2为分离出的菌株的微观形态图；

图3为单菌落厌氧培养后的宏观平板图；

图4为系统发育进化树；

图5为NASH肝损伤评分标准；

图6为MNO-863对肥胖模型小鼠肝脏重量的影响；

图7为肝脏组织HE染色结果图；

图8为肝脏组织油红染色结果图；

图9为NAFLD/NASH肝脏病理评分；

图10为肝脏脂肪变性程度统计结果图；

图11为肝小叶炎症评分统计结果图；

图12为肝脏气球样变性评分统计结果图；

图13为血清中的AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)水平；

图14为小鼠腹部白色脂肪显微图以及总面积统计图；

图15为小鼠血肌酐(CREA)、血尿素(UREA)及血尿酸(UA)的含量检测结果图；

图16为MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠口服葡萄糖耐量的影响；

图17为MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠空腹血糖(mmol/L)的影响；

图18为MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠HOMA-IR指数的影响；

图19为MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠体重(g)的影响；

图20为MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠体重(％)的影响；

图21为MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠摄食量(g)的影响；

图22为MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠TC、TG、LDL、HDL-C的影响；

图23为MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠腹股沟脂肪、皮下脂肪、附睾脂肪的影响；

图24为HFD对照组的小鼠结肠组织的显微图；

图25为HFD对照组的小鼠回肠组织的显微图；

图26为MNO-863处理组的小鼠结肠组织的显微图；

图27为MNO-863处理组的小鼠回肠组织的显微图；

图28为NCD对照组的小鼠结肠组织的显微图；

图29为NCD对照组的小鼠回肠组织的显微图。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

肝脏功能损伤相关疾病包括如下疾病中的至少一种：脂肪肝、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化。

在其他实施方式中，肝脏功能损伤相关疾病还包括肝纤维化。

消化道黏膜损伤是指消化道黏膜通透性升高、黏膜屏障作用受损，消化道黏膜损伤相关疾病包括肠漏病症、消化性溃疡、胃肠炎、炎性肠病等疾病中的至少一种；需要说明的是，肠漏病症表现为肠道的通透性增加。

在其他实施方式中，上述“肥胖相关疾病”可选自如下疾病：过食症(overeating)、暴食症(binge eating)、易饥症、高血压、糖尿病、血浆胰岛素浓度升高、胰岛素抗性、高脂血症、代谢综合征、胰岛素抗性综合征、肥胖相关的胃食管返流症、动脉硬化症、高胆固醇血症、高尿酸血症、下背痛、心脏肥大和左心室肥大、脂肪代谢障碍、非酒精性脂肪性肝炎、心血管疾病，和多囊性卵巢综合征，以及具有这些肥胖相关疾病包括希望减轻体重的那些对象。

糖尿病的三种主要类型是1型糖尿病(T1D)、2型糖尿病(T2D)和妊娠期糖尿病(GDM)。1型糖尿病是由于自身免疫损害或特发性原因引起的，以胰岛功能绝对破坏为特点的糖尿病，多发生在儿童和青少年，必须用胰岛素治疗才能获得满意疗效，否则将危及生命。2型糖尿病是一种以碳水化合物/脂肪代谢异常为特征的多因子综合征，通常包括高血糖、高血压和胆固醇异常。2型糖尿病是胰岛素不能有效发挥作用(与受体结合含量少)所致，因此不仅要检查空腹血糖，而且要观察餐后2小时血糖，特别应做胰岛功能检查。妊娠期间的糖尿病有两种情况，一种为妊娠前已确诊患糖尿病，称“糖尿病合并妊娠”；另一种为妊娠前糖代谢正常或有潜在糖耐量减退、妊娠期才出现或确诊的糖尿病，又称为“妊娠期糖尿病(GDM)”，糖尿病孕妇中80％以上为GDM。

需要说明的是，上述制药用途针对糖尿病的应用包括不限于1型糖尿病(T1D)、2型糖尿病(T2D)和妊娠期糖尿病(GDM)的治疗或预防。

在本发明应用较佳的实施方式中，细菌菌株具有如SEQ ID NO.1至少98.65％一致的16s rRNA序列。例如具有98.9％、99％、99.5％、99.6％、99.8％、99.9％或100％一致的16s rRNA序列。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物是冻干的。冻干是一项制备允许传递细菌的稳定组合物的有效和便利的技术。上述药物通过冻干制粉或制片便于包衣或者运输。

药学上可接受的赋形剂可以是抗氧化剂、螯合剂、乳化剂、溶剂等。

药物的剂型可选自片剂、丸剂、粉剂、混悬剂、凝胶、乳液、乳膏、颗粒剂、纳米颗粒、胶囊、栓剂、注射剂、喷雾和针剂。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物是疫苗组合物。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物被配制用于经口施用、注射施用或灌胃施用。经过灌胃小鼠实验，施用本发明中的菌株表现出与治疗糖尿病药物Liraglutide相当的治疗效果。

在其他实施方式中，上述药物还包括药学上可接受的盐，“药学上可接受的盐”是指以下盐，其在正确的医疗判断内，适合用于与人和低等动物的组织接触，并不具有过度毒性、刺激性、过敏反应等，并与合理的利益/风险比相称。

一种以保藏号为GDMCC No：61117保藏的菌株或其子代菌株或亚克隆菌株的细胞。

本发明的克里斯滕森菌Christensenella sp.MNO-863分离自广东省广州市的一位汉族健康男性志愿者的粪便样品。于2020年8月4日保藏于广东省微生物保藏中心。保藏编号为：GDMCC No：61117；保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，检测结果为存活。分类学名称为Christensenella sp.。

宏观形态：37℃厌氧培养72h，菌落浅黄色，圆形，表面湿润，半透明，边缘整齐。菌体呈短杆状，无芽孢，无鞭毛，不运动，0.3-0.4μm×0.6-1.1μm，单个或成对排列，革兰氏阴性。菌落特征：MNO-863在104平板上，37℃厌氧培养72h，单个菌落呈现圆形微凸、透明、白色、表面光滑，菌落直径约在0.46-0.50mm。

本发明还提供了一种组合物，其包括上述菌株和/或菌株的代谢产物。

上述的菌株可以是由上述的保藏号为GDMCC No：61117保藏的菌株直接培养获得，也可以是子代菌株(后代)或从原始菌株培养(亚克隆菌株)的菌株。例如分离细胞。

需要说明的是，本发明提供的菌株还包括其衍生物，例如可在基因水平下进行修饰而不消除生物活性。上述的衍生菌株具有治疗活性，具有与保藏号为GDMCC No：61117保藏的菌株相当的活性。

减少肝脏重量；治疗初期脂肪肝炎病灶；减缓肝脏细胞脂肪堆积；降低血清AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)；减少腹部白色脂肪炎症性病变；减轻哺乳动物的体重；减少哺乳动物的摄食量；降低哺乳动物的体脂；降低哺乳动物血清中如下至少一种指标的水平：总胆固醇水平、低密度脂蛋白和甘油三酯水平；提高哺乳动物血清高密度脂蛋白的水平；改善哺乳动物口服葡萄糖耐量受损；降低哺乳动物的空腹血糖；降低哺乳动物HOMA-IR指标；修复消化道黏膜损伤。

上述的减少肝脏重量；治疗初期脂肪肝炎病灶；减缓肝脏细胞脂肪堆积；降低血清AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)水平；减少腹部白色脂肪炎症性病变的用途为治疗肝脏损伤及其相关疾病中的用途。

上述的减轻哺乳动物的体重；减少哺乳动物的摄食量；降低哺乳动物的体脂；降低哺乳动物血清中如下至少一种指标的水平：总胆固醇水平、低密度脂蛋白和甘油三酯水平；提高哺乳动物血清高密度脂蛋白的水平的用途为治疗或预防肥胖及其相关疾病中的用途。

上述改善哺乳动物口服葡萄糖耐量受损、降低哺乳动物的空腹血糖和降低哺乳动物HOMA-IR指标的用途为治疗或预防糖尿病中的应用。

上述的修复消化道黏膜损伤是指修复胃肠道黏膜损伤，优选为修复肠道黏膜损伤。修复肠道黏膜损伤是指达到如下指标中的至少一种：恢复肠道黏膜组织的结构完整性、降低肠绒毛萎缩程度和菌丝数量。

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供了克里斯滕森菌Christensenella sp.MNO-863的分离与鉴定。

(1)MNO-863的分离

本发明的Christensenella spMNO-863分离自广东省广州市的一位汉族健康男性志愿者的粪便样品，采集样品时志愿者前三个月没有使用抗生素。

在生物安全柜中分装生理盐水于无菌的10ml离心管中；提前24h将厌氧血平板(江门凯林厌氧血琼脂培养基，粤械注准20172400940)和无菌生理盐水转移入厌氧工作台中，将5～7颗无菌的玻璃珠倒入已经凝固的厌氧血平板中。

取志愿者新鲜粪便样本适量置于含有无菌保存液(3％PEG溶液，即称取30g聚乙二醇3350溶于1000mL生理盐水中，于121℃，15min条件下高压灭菌)的样品保存管中，用涡旋振荡器震荡10分钟混匀，随后于厌氧工作站中吸取1mL溶液，用无菌生理盐水稀释至10-6稀释度，吸取0.1mL稀释菌液涂布于厌氧血琼脂平板上，在厌氧工作站中37℃培养72小时。采用分区划线法，用无菌牙签挑取不同形态的单菌落在厌氧血琼脂平板上进行划线分离培养。经72小时培养后，在分区平板上提取分离效果好的菌落进行传代培养。

(2)MNO-863的鉴定

①MNO-863的微生物学特征：

对MNO-863进行固体平板涂布以及液体培养以观察微生物学特征，菌株涂布平板和液体培养溶液使用104培养基1L，配方如下表1所示：

表1 104培养基的配方表。

试剂名称	每L培养基称取量
		Trypticase peptone	5g
peptone	5g
		Yeast extract	10g
Beef extract	5g
		Glucose	5g
<![CDATA[K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>]]>	2g
		Tween 80	1g
<![CDATA[Cysteine-HCl×H<sub>2</sub>O]]>	0.5g
		乙酸钠	2g
5×盐溶液母液	8mL
		<![CDATA[20×CaCl<sub>2</sub>溶液母液]]>	2mL
5×氯化血红素母液	2mL
		<![CDATA[维生素K<sub>1</sub>母液]]>	0.2mL

形态学特征：参照图1所示的宏观形态，在37℃厌氧培养72h，菌落浅黄色，圆形，表面湿润，半透明，边缘整齐。

微观形态：MNO-863在104平板上，37℃厌氧培养72h，对MNO-863进行革兰氏染色(图2中的上图)和芽孢染色镜检(图2中的下图)。参照图2所示，菌体呈短杆状，无芽孢，无鞭毛，不运动，0.3-0.4μm×0.6-1.1μm，单个或成对排列，革兰氏阴性。

菌落特征：MNO-863在104平板上，37℃厌氧培养72h，单个菌落呈现圆形微凸、透明、白色、表面光滑，菌落直径约在0.46-0.50mm(参照图3所示)。

继续进行分离出的菌株的生理生化特征鉴定。MNO-863在有氧条件下不生长，厌氧条件下生长良好，最适生长温度为37℃。使用API20A反应试剂盒测定MNO-863及标准菌株Christensenella minuta(DSM 22607)对底物的利用情况进行比较分析。

试验结果参照表2所示，由表2可知，分离出的MNO-863与标准菌株DSM 22607的生理生化特征基本保持一致，在底物为甘油、明胶水解、甘露糖、甘露醇和柳醇时存在差异。

表2MNO-863及标准菌株DSM 22607对底物的利用情况对比表。

符号说明：“+”，阳性；“+w”，弱阳性；“-”，阴性。

进行细胞脂肪酸分析：采用气相色谱法对培养后的MNO-863及标准菌株Christensenella minuta(DSM22607)的磷脂脂肪酸组成和含量分别进行比对分析。比对分析结果参照表3所示，由表3可知，与标准菌株相比，本发明分离出的MNO-863的细胞脂肪酸组成差异明显。

表3细胞脂肪酸分析结果表。

脂肪酸	MNO-863	DSM22067
			C9：0 FAME	0.48	0
C11：0 ISO FAME	27.50	2.89
			C11：0 FAME	0.33	1.31
C10：0 2OH FAME	1.33	8.57
			C12：0 FAME	4.58	1.13
C13：0 ISO FAME	1.58	0
			C13：0 ANTEISO FAME	3.30	2.35
C14：0 FAME	25.01	13.03
			C15：0 ISO FAME	20.10	27.40
C15：0 ANTEISO FAME	1.53	3.19
			C15：0 ISO DMA	0.60	0
C16：0 FAME	9.34	21.14
			C17：0 ISO FAME	0.74	1.68
C18：0 FAME	2.48	3.73
			C19：0 CYC 9，10 DMA	1.11	0

②核酸分析鉴定

16srRNA测序：

对该菌株的序列进行了16S序列片段(扩增引物与测序引物为27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′与1492R：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)测定，16s rRNA测定结果见序列SEQ ID NO.1：

进化分析：

对MNO-863进行全基因组测序，采用MEGA5.0软件，邻位连接法显示“MNO-863”与相关种的16S rDNA序列系统发育树，进行1000次的相似度重复计算，结果与NCBI中Christensenellaceae family的标准菌株基因组序列相互比对。系统发育树显示(参见图4)，MNO-863与三个标准菌株Christensenella minuta(DSM22607)，Christensenellatimonensis(Marseille-P2437)以及Christensenella massiliensis(Marseille-P2438)在同一分支上，表明MNO-863隶属Christensenella sp.范围内。

经以上传统微生物形态分析和核酸分析的方式鉴定，以及与标准菌株的比对结果，可在分类学角度认为MNO-863是隶属于Christensenella属内的一个物种，命名为Christensenella spMNO-863。于2020年8月4日保藏于广东省微生物保藏中心。保藏编号为：GDMCC No：61117；保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，检测结果为存活。分类学名称为Christensenella sp。

实施例2

本实施例进行MNO-863在高脂饮食诱导肥胖小鼠模型的体内试验以验证其在治疗或预防肝脏功能损伤及其相关疾病中的用途。

实验材料：

(1)实验动物：购买C57BL/6J雄性小鼠(购自江苏集萃药康生物科技有限公司)32只，为正常饲养小鼠，5周龄。小鼠生长过程处于同一环境，其中8只给予SPF级大小鼠维持饲料(广州市瀚程实验器材有限公司)，剩下24只给予D12492高脂饲料(派克生物)喂养约8～10周后，称重，饮食诱导肥胖模型成模标准为体重达到38.00±2.00_g。

(2)供试菌株：厌氧培养的MNO-863，培养基为实施例1中的104液体培养基，37℃厌氧条件下培养48h，至菌浓约10¹¹CFU/mL数量级，方可做为实验组灌胃。菌液存放为4℃条件厌氧储存。

(3)PBs磷酸盐缓冲溶液：是由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成的混合溶液，能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响，从而保持溶液的pH值相对稳定。配方如下表4所示：

表4PBS磷酸盐缓冲溶液配方

试剂名称	每升Buffer溶液称取量(g)
		<![CDATA[KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>]]>	0.24
<![CDATA[Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>]]>	1.44
		NaCl	8.00
KCl	0.20
		Cysteine-HCl	0.50

试验过程：

(1)试验分组

将8只给予SPF级大小鼠维持饲料的小鼠完全随机分成2笼，4只/笼，作为第一组。从24只肥胖小鼠中挑选体重达到38.00g±2.00g的小鼠16只，分为2组(作为第二组和第三组)，每组8只，4只/笼。第一组为饲喂普通饲料的对照组(NCD-control组)，第二组为高脂饮食诱导肥胖小鼠模型组(HFD-control组)，第三组为菌剂治疗组(MNO-863)，第二和第三组饲喂高脂饲料，分组见表5。动物分组后开始虚拟给药一周后再开始给药，第一组和第二组灌胃等量PBs磷酸盐缓冲液，第三组使用MNO-863供试菌株进行灌胃干预，干预持续4周。灌胃菌液的量为0.1～0.3mL/10g体重。分别在造模前后，干预前后每3天记录小鼠的体重、状态、摄食量等数据。给药结束动物时解剖采集组织。实验动物的使用关注动物福利，遵循“减少、替代和优化”的原则，并经本单位实验动物伦理委员会批准。试验过程中接受实验动物伦理委员会的监督检查。

表5试验分组

序号

组别

受试物/对照品

药物浓度

给药频率

动物数量

饲料

1

NCD-control

PBS

/

1次/天

8

Normal diets

2

HFD-control

PBS

/

1次/天

8

D12492

3

MNO-863

MNH-863

<![CDATA[1×10<sup>11</sup>CFU/mL]]>

1次/天

8

D12492

所有的动物包括试验期间死亡、安乐死和试验结束处死的动物都要进行大体解剖检查，记录每只动物的大体病理学变化。对肝脏进行称重；剪取大叶肝脏的中间一条置于福尔马林溶液，剩余组织液氮速冻后，保存于-80℃。随后将肝脏制作成石蜡包埋的肝脏病理学切片并进行HE染色、Masson染色以及油红染色，通过对原始放大时捕获的显微照片进行评分来评估肝脏组织和NAS病理学判读。根据NASH肝损伤评分系统(Kleiner DE，Brunt EM，Van NM，Behling C，Contos MJ，Cummings OW，et al.Design and validation of ahistological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease.Hepatology2005；41：1313-21.)(Brunt EM.Histopathology of non-alcoholic fatty liverdisease.Clin Liver Dis 2009；13：533-44.)评分标准参照图5所示(score of 0-2：notNASH；3-4：borderline；5-8：NASH)。

实验结果：

MNO-863对肥胖模型小鼠肝脏重量的影响参照图6所示，相比HFD组，MNO-863处理组能显著减少肥胖小鼠的肝脏重量，恢复至正常NCD组小鼠肝脏重量水平。对肥胖模型小鼠肝脏重量的影响数据参照表6所示。

表6不同处理组的小鼠肝脏重量

分组	肝脏重量(g)
		NCD-control	0.9875
HFD-control	1.125
		MNO-863	0.9325*

注：结果以Mean表示，*p＜0.05与HFD-control组相比。

(2)进一步通过病理学判读肥胖模型小鼠肝脏病变：结果表明MNO-863可治疗初期脂肪肝炎病灶，减缓肝脏细胞脂肪堆积，缓解肝脏病变。

具体地，对上述各处理组的小鼠肝脏组织分别进行HE染色和油红染色。实验结果分别参照图7和图8所示。在高脂饮食条件饲养下，MNO-863可治疗肥胖小鼠初期脂肪肝炎病灶与减缓脂肪堆积。

NAFLD/NASH肝脏病理评分参照图9所示。通过评分可知，MNO-4863可治疗肥胖小鼠初期脂肪肝炎病灶与减缓脂肪堆积。

图10中示出了肝脏脂肪变性程度，由图10可知，MNO-863可有效缓解肝脏脂肪的变性。图11中示出了肝小叶炎症评分，由图11可知，与HFD组相比，MNO-863可有效抑制肝小叶炎症的发生。图12中示出了肝脏气球样变性评分，由图12可知，与HFD组相比，MNO-863肝脏气球样变性评分明显下降。

(3)发明人还探究了MNO-863对肥胖模型小鼠血清ALT和AST的影响，结果表明MNO-863能显著降低肥胖小鼠的血清ALT及AST指标。

血清中的AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)水平参照图14所示。

(4)发明人还探究了MNO-863对高脂饮食诱导肥胖模型小鼠腹部白色脂肪的影响，结果表明MNO-863能显著减少肥胖模型小鼠腹部白色脂肪。

小鼠腹部白色脂肪显微图以及总面积统计图参照图14所示。

(5)发明人还探究了MNO-863对高脂饮食诱导肥胖模型小鼠血肌酐(CREA)、血尿素(UREA)及血尿酸(UA)的影响，结果表明MNO-863对肾脏无毒性。

小鼠血肌酐(CREA)的含量检测依据酶法的检测原理，通过终点法(采用肌酐测定试剂盒，雷社，S03076)，并利用全自动生化分析仪进行检测。血尿素(UREA)的含量检测依据尿素酶-谷氨酸脱氢酶法的检测原理，通过两点法(采用尿素测定试剂盒，雷社，S03036)，并利用全自动生化分析仪进行检测。血尿酸(UA)的含量检测依据尿酸酶法的检测原理，通过终点法(采用尿酸测定试剂盒，雷社，S03035)，并利用全自动生化分析仪进行检测。

小鼠血肌酐(CREA)、血尿素(UREA)及血尿酸(UA)的测定结果图参照图15所示。

实施例3

本实施例进行MNO-863在高脂饮食诱导肥胖小鼠模型的体内试验以验证其在治疗或预防糖尿病中的用途。实验材料：

(1)实验动物：购买C57BL/6J雄性小鼠(购自江苏集萃药康生物科技有限公司)40只，为正常饲养小鼠，5周龄。小鼠生长过程处于同一环境，其中8只给予SPF级大小鼠维持饲料(广州市瀚程实验器材有限公司)，32只给予D12492高脂饲料(派克生物)喂养约8～10周后，称重，饮食诱导肥胖模型成模标准为体重达到38.00±2.00g。

(2)供试菌株：厌氧培养的MNO-863，培养基是104液体培养基，37℃厌氧条件下培养48h，至菌浓约10¹¹CFU/mL数量级，方可做为实验组灌胃。菌液存放为4℃条件厌氧储存。

(3)PBS磷酸盐缓冲溶液：是由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成的混合溶液，能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响，从而保持溶液的pH值相对稳定。配方同实施例2中的表5。

(4)Liraglutide(阳性对照)：利拉鲁肽是一种人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物，用于治疗糖尿病。购自诺和诺德，商品名为

-Novo Nordisk，使用时按照15μg/kg/d皮下注射。

试验过程：

(1)试验分组

将8只给予sPF级大小鼠维持饲料的小鼠完全随机分成2笼，4只/笼，作为第一组。从32只肥胖小鼠中挑选体重达到38.00g±2.00g的小鼠24只，共分为3组(分别作为第二、三、四组)，每组8只，4只/笼。第一组为饲喂普通饲料的对照组(NCD-control组)，第二组为高脂饮食诱导肥胖小鼠模型组(HFD-control组)，第三组为菌剂治疗组(MNO-863)，第四组为Liraglutide阳性对照组，第二、第三和第四组饲喂高脂饲料，分组见表7。动物分组后开始虚拟给药一周后再开始给药，第一组和第二组灌胃等量PBS磷酸盐缓冲液，第三组使用MNO-863供试菌株进行灌胃干预，干预持续4周。灌胃菌液的量为0.1～0.3mL/10g体重。分别在造模前后，干预前后每3天记录小鼠的体重和状态等数据。实验动物的使用关注动物福利，遵循“减少、替代和优化”的原则，并经本单位实验动物伦理委员会批准。试验过程中接受实验动物伦理委员会的监督检查。

表7试验分组

口服葡萄糖耐量检查(OGTT)：动物给药后的第28天，测定禁食12h的OGTT(如晚上20:30:00禁食至次日08:30:00)。称量小鼠禁食体重，按照小鼠禁食体重值灌胃葡萄糖，灌胃葡萄糖剂量为2g/kg(葡萄糖g/小鼠禁食体重kg)，测定空腹血糖、给糖后15min、30min、60min、90min、120min血糖值。每只小鼠严格计时，准确按照6个时间点测定血糖值。口服葡萄糖耐量试验是一种葡萄糖负荷试验，用以了解胰岛β细胞功能和机体对血糖的调节能力，观察病人耐受葡萄糖的能力，是目前公认的诊断糖尿病的金标准。

干预实验结束后对小鼠过夜禁食10～12h，次日称量禁食体重，异氟烷(瑞沃德生命科技有限公司)麻醉后对小鼠进行眼球采血，使用血糖仪(ACCU-CHEK型，Roche)检测空腹血糖，并将血液放置在4℃冰箱3～4h后，待血液凝固血块收缩后，4℃4500r/min离心15min，收集上层血清，使用小鼠胰岛素(INS)酶联免疫试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)检测血清中胰岛素的含量。根据血清中的空腹血糖水平和胰岛素水平计算出HOMA-IR。HOMA-IR是用于评价个体的胰岛素抵抗水平的指标，目前已成为广泛应用于临床的评价糖尿病人胰岛素敏感性，胰岛素抵抗水平与胰岛β细胞功能的常用指标，其计算方法为：空腹血糖水平(FPG，mmol/L)×空腹胰岛素水平(FINS，μU/mL)/22.5，正常个体的HOMA-IR指数为1。随着胰岛素抵抗水平升高的升高，HOMA-IR指数将高于1。胰岛素抵抗是指各种原因使胰岛素促进葡萄糖摄取和利用的效率下降，机体代偿性的分泌过多胰岛素产生高胰岛素血症，以维持血糖的稳定，胰岛素抵抗易导致代谢综合征和2型糖尿病。

实验结果：

(1)MNO-863对肥胖模型小鼠口服葡萄糖耐量的影响：MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠口服葡萄糖耐量的影响参照表8和图16所示。

表8MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠口服葡萄糖耐量的影响

注：结果以Mean±SD表示，*p<0.05，**p<0.01,***p<0.001,****p<0.0001与HFD-control组相比

当糖代谢紊乱时，口服一定量的葡萄糖后血糖急剧升高，或升高不明显，但短时间内不能降至空腹水平(或原来水平)，此为糖耐量异常(IGT)或糖耐量降低。糖耐量异常(IGT)表明机体对葡萄糖的代谢能力下降，常见于2型糖尿病和肥胖症等。

根据表8和图16结果可知，在MNO-863干预4周后，MNO-863处理组的高脂饮食诱导肥胖小鼠在灌胃葡萄糖15min后血糖升高程度显著低于HFD对照组。在后续的检测中，MNO-863处理组小鼠血糖逐渐降低，并且在120min后血糖值恢复至接近NCD对照组，远低于HFD对照组，且具有显著性差异。同时，MNO-863表现出与治疗糖尿病药物Liraglutide相当的治疗效果。

(2)MNO-863对肥胖模型小鼠空腹血糖的影响：MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠空腹血糖的影响参照表9和图17所示。

表9MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠空腹血糖(mmol/L)的影响

分组	空腹血糖(mmol/L)
		NCD	9.74±1.53*
HFD	11.81±2.82
		MNO-863	6.74±1.28****
Liraglutide	7.02±0.93****

注：结果以Mean表示，*p＜0.05，****p＜0.0001与HFD-control组相比

根据表9和图17结果可知，与HFD对照组相比，MNO-863处理组能够显著降低高脂饮食诱导肥胖小鼠的血糖值，与HFD对照组相比达到显著差异。并且相比治疗糖尿病药物Liraglutide，MNO-863对于血糖的控制更为明显。表明MNO-863具有明显的降血糖效果，可以改善糖尿病症状。

(3)MNO-863对高脂饮食诱导肥胖模型小鼠HOMA-IR指数的影响：MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠HOMA-IR指数的影响参照表10和图18所示。

表10 MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠HOMA-IR的影响

分组	HOMA-IR
		NCD	1.74
HFD	3.36
		MNO-863	1.24

注：结果以Mean表示

胰岛素抵抗(IR)是II型糖尿病发生的主要原因，可促进2型糖尿病患者并发症的发生及进展。与HOMA-IR相关的生化指标，可有效揭示IR发生的原因。而通常情况下糖尿病患者的HOMA-IR会明显高于正常人群。

根据表10和图18结果可知，与HFD对照组相比，在MNO-863的干预下能够明显降低高脂饮食诱导肥胖小鼠的HOMAA-IR。表明MNO-863具有改善机体胰岛素抵抗与胰岛β细胞功能的作用，从而达到预防和治疗糖尿病。

实施例4

本实施例进行MNO-863在高脂饮食诱导肥胖小鼠模型的体内试验以验证MNO-863在治疗和预防肥胖以及相关疾病中的应用。实验材料(包括实验动物、供试菌株、PBS磷酸盐缓冲溶液以及阳性对照)同实施例3中的实验材料。

试验过程：(1)试验分组

将8只给予SPF级大小鼠维持饲料的小鼠完全随机分成2笼，4只/笼，作为第一组。从32只肥胖小鼠中挑选体重达到38.00g±2.00g的小鼠24只，共分为3组(分别作为第二、三、四组)，每组8只，4只/笼。第一组为饲喂普通饲料的对照组(control组)，第二组为高脂饮食诱导肥胖小鼠模型组(model组)，第三组为菌剂治疗组，第四组为Liraglutide阳性对照组，第二、第三和第四组饲喂高脂饲料，分组见表11。动物分组后开始虚拟给药一周后再开始给药，第一组和第二组灌胃等量PBS磷酸盐缓冲液，第三组使用MNO-863供试菌株进行灌胃干预，干预持续4周。灌胃菌液的量为0.1～0.3mL/10g体重。分别在造模前后，干预前后每3天记录小鼠的体重、状态、摄食量等数据。给药结束动物时解剖采集组织。实验动物的使用关注动物福利，遵循“减少、替代和优化”的原则，并经本单位实验动物伦理委员会批准。试验过程中接受实验动物伦理委员会的监督检查。

表11试验分组

序号

组别

受试物/对照品

药物浓度

给药频率

动物数量

饲料

1

NCD-control

PBS

/

1次/天

8

Normal diets

2

HFD-control

PBS

/

1次/天

8

D12492

3

MNO-863

MNH-863

<![CDATA[1×10<sup>11</sup>CFU/mL]]>

1次/天

8

D12492

4

Liraglutide

40μg/ml

1次/天

8

D12492

实验结束后处死小鼠，记录脂肪含量，采血并于4℃4500r/min离心15min收集血清，使用总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDLC)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)检测血清中血脂的含量。

实验结果：

(1)MNO-863对肥胖模型小鼠体重的影响：根据表12、表13和图19、图20结果可知，与HFD-control组相比，MNO-863干预组在3周内能够有效降低高脂饮食诱导肥胖小鼠体重3g以上以及体重百分数约10％，并达到显著性差异，与阳性对照减肥药物Liraglutide减重效果相当，表明MNO-863对高脂质摄入下的机体具有减轻体重的效果。

表12 MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠体重(g)的影响

表13 MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠体重(g)的影响

注：结果以Mean±SD表示，****p＜0.0001与HFD-control组相比。

(2)MNO-863对肥胖模型小鼠摄食量的影响：根据表14和图21结果可知，与HFD-control组相比，MNO-863干预组在3周内能够降低高脂饮食诱导肥胖小鼠的摄食量。

表14 MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠摄食量(g)的影响

注：结果以Mean表示

(3)MNO-863对高脂饮食诱导肥胖模型小鼠血脂的影响：根据表15和图22结果可知，MNO-863干预组对于持续高脂质摄入下的小鼠的血脂水平具有明显的控制效果，能够降低与原发性高血脂等心血管疾病相关的指标：总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDLC)，并提高血液中高密度脂蛋白(HDL-C)水平，而HDL与心血管疾病的发病率和病变程度呈负相关，其中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)结果达到显著差异。

表15MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠血脂四项的影响

注：结果以Mean表示，*p<0.05，**p<0.01与HFD-control组相比

(4)MNO-863菌对高脂饮食诱导肥胖模型小鼠体脂的影响：根据表16和图23结果可知，与HFD-control组相比，在MNO-863干预下显著降低了高脂饮食诱导肥胖小鼠的腹股沟脂肪，皮下脂肪和附睾脂肪的重量，表明MNO-863具有降低哺乳动物体脂的作用。

表16MNO-863对高脂饮食诱导肥胖小鼠体脂(g)的影响

注：结果以Mean表示，*p<0.05，**p<0.01，****p<0.0001与HFD-control组相比。

实验例5

本实施例进行MNO-863对小鼠模型回肠和结肠组织黏膜修复的体内试验以验证MNO-863在修复消化道黏膜损伤及防治消化道黏膜损伤相关疾病中的应用。

动物实验过程：

将8只给予SPF级大小鼠维持饲料的小鼠完全随机分成2笼，4只/笼，作为第一组。从24只肥胖小鼠中挑选体重达到38.00g±2.00g的小鼠16只，分为2组(作为第二组和第三组)，每组8只，4只/笼。第一组为饲喂普通饲料的对照组(NCD-control组)，第二组为高脂饮食诱导肥胖小鼠模型组(HFD-control组)，第三组为菌剂治疗组(MNO-863)，第二和第三组饲喂高脂饲料，分组方式同实施例2的表5。动物分组后开始虚拟给药一周后再开始给药，第一组和第二组灌胃等量PBS磷酸盐缓冲液，第三组使用MNO-863供试菌株进行灌胃干预，干预持续4周。灌胃菌液的量为0.1～0.3mL/10g体重。分别在造模前后，干预前后每3天记录小鼠的体重、状态、摄食量等数据。给药结束动物时解剖采集组织。实验动物的使用关注动物福利，遵循“减少、替代和优化”的原则，并经本单位实验动物伦理委员会批准。试验过程中接受实验动物伦理委员会的监督检查。

解剖、观察过程：所有的动物包括试验期间死亡、安乐死和试验结束处死的动物都要进行大体解剖检查。剪取小鼠的回肠及结肠置于福尔马林溶液中保存。送到武汉赛维尔生物科技有限公司制作成病理切片，拍照观察。

结果显示：MNO-863供试菌株对小鼠回肠和结肠组织黏膜层损伤具有修复功能(参照表17所示)：与HFD-control组(即HFD对照组)相比，在MNO-863干预下，小鼠结肠组织各层结构清晰，黏膜上皮完整，肠腺数量丰富，排列紧密，未见明显异常(参照图26所示)。小鼠回肠组织各层结构清晰，肠绒毛数量丰富，黏膜上皮完整，肠腺数量丰富，排列紧密，未见其它明显异常(参照图27所示)。而HFD-control组的显微图显示，小鼠结肠组织可见多处黏膜层损伤，黏膜上皮细胞脱落，少量肠腺结构破坏，肠腔内可见大量嗜碱性菌丝(参照图24所示)；小鼠回肠组织黏膜层损伤，局部肠绒毛及黏膜上皮缺失，肠腺结构消失，少量上皮细胞肿胀，胞质疏松淡染，肠腔内可见大量嗜碱性菌丝(参照图25所示)。

NCD-control组(即NCD对照组)的显微图显示，小鼠结肠组织各层结构清晰，黏膜上皮完整，肠腺数量丰富，排列紧密，未见明显异常(参照图28所示)；小鼠回肠组织各层结构清晰，肠绒毛数量丰富，黏膜上皮完整，肠腺数量丰富，排列紧密，未见明显异常(参照图29所示)。

表明MNO-863具有修复回肠和结肠黏膜的功能，其施用能有效修复消化道黏膜并对消化道黏膜损伤相关疾病的防治产生积极效果。

表17MNO-863对小鼠结肠黏膜损伤和回肠黏膜损伤的病理评分结果

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.克里斯滕森菌(Christensenella sp.)物种的细菌菌株在制备用于治疗或预防选自以下至少一种的疾病或症状的药物中的用途：肝脏功能损伤及肝脏功能损伤相关疾病、消化道黏膜损伤及消化道黏膜损伤相关疾病、糖尿病、肥胖及肥胖相关疾病。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肝脏功能损伤相关疾病包括如下疾病中的至少一种：脂肪肝、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化；

所述消化道黏膜损伤是指消化道黏膜通透性升高、黏膜屏障作用受损，消化道黏膜损伤相关疾病包括肠漏病症、消化性溃疡、胃肠炎、炎性肠病中的至少一种；

所述肥胖相关疾病包括如下疾病中的至少一种：心血管疾病、高脂血症、胰岛素抗性综合征、肥胖相关的胃食管返流症和脂肪性肝、动脉硬化症、高胆固醇血症、高尿酸血症、脂肪代谢障碍、代谢综合征、胰岛素抵抗和/或，高胆固醇疾病；

所述糖尿病包括高脂饮食引起的糖尿病、肥胖引起的糖尿病、II型糖尿病、胰岛B细胞受损引起的糖尿病或者、脂肪肝患者、非酒精性脂肪性肝病患者、非酒精性脂肪性肝炎患者的糖尿病；

所述肥胖包括高脂饮食、高胆固醇饮食、高糖饮食、高胆固醇、高脂血至少一种引起的肥胖。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述细菌菌株具有与SEQ ID NO.1至少98.65％一致的16s rRNA序列；

优选地，所述克里斯滕森菌具有与SEQ ID NO.1至少99％一致的16s rRNA序列；

优选地，所述克里斯滕森菌具有与SEQ ID NO.1 99％、99.5％、99.9％或100％一致的16s rRNA序列。

4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述肝脏功能损伤、肝脏功能损伤相关疾病、消化道黏膜损伤及消化道黏膜损伤相关疾病、糖尿病、肥胖及肥胖相关疾病中的至少一种包括，高脂饮食、高胆固醇饮食、高糖饮食、血脂高、血糖高或血液胆固醇高中的至少一种引起的疾病；

优选地，所述肝脏功能损伤、肝脏功能损伤相关疾病、消化道黏膜损伤及消化道黏膜损伤相关疾病、糖尿病、肥胖及肥胖相关疾病中的至少一种，包括高脂饮食引起的、高胆固醇饮食引起的、高糖饮食引起的、高脂高胆固醇引起的、高脂高糖引起的和/或高脂高胆固醇高糖引起的疾病。

5.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述药物还包括一种或多种药学上可接受的赋形剂或载剂；

其中，药学上可接受的赋形剂可以是抗氧化剂、螯合剂、乳化剂或溶剂；

药物的剂型可选自片剂、丸剂、粉剂、混悬剂、凝胶、乳液、乳膏、颗粒剂、纳米颗粒、胶囊、栓剂、注射剂、喷雾和针剂中的至少一种。

6.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述药物是疫苗组合物。

7.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述药物被配制用于经口施用、注射施用或灌胃施用。

8.一种以保藏号为GDMCC No：61117保藏的克里斯滕森菌菌株或其子代菌株或亚克隆菌株的细胞。

9.一种组合物，其特征在于，其包括权利要求8所述的菌株和/或菌株的代谢产物；

优选地，所述组合物还包括药学上可接受的赋形剂或载剂。

10.一种如权利要求9所述的组合物在用于制备药物或制剂中的用途，其特征在于，所述药物或制剂用于选自如下至少一组的用途：

减少肝脏重量；

降低血脂；

降低血糖；

治疗初期脂肪肝炎病灶；

减缓肝脏细胞脂肪堆积；

降低血清AST、ALT；

减少腹部白色脂肪炎症性病变；

减轻哺乳动物的体重；

减少哺乳动物的摄食量；

降低哺乳动物的体脂；例如降低腹股沟脂肪的重量、皮下脂肪的重量、附睾脂肪的重量中的至少一种；

提高哺乳动物血清高密度脂蛋白的水平；

改善哺乳动物口服葡萄糖耐量受损；

降低哺乳动物的空腹血糖；

降低哺乳动物HOMA-IR指标；

改善高脂饮食导致的血清中总胆固醇升高；

改善高脂饮食导致的血清中高密度脂蛋白胆固醇下降；

高脂饮食引起的糖尿病；

高脂饮食引起的肥胖；

肥胖引起的糖尿病；

II型糖尿病；

胰岛B细胞受损引起的糖尿病；

修复消化道黏膜损伤。