CN115990134A - 一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途 - Google Patents
一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115990134A CN115990134A CN202211392431.8A CN202211392431A CN115990134A CN 115990134 A CN115990134 A CN 115990134A CN 202211392431 A CN202211392431 A CN 202211392431A CN 115990134 A CN115990134 A CN 115990134A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- hydrogel
- nanogel
- antagomir
- grafted
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 title claims abstract description 144
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 28
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title abstract description 19
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims abstract description 55
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims abstract description 23
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims abstract description 22
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 claims abstract 6
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 claims description 39
- HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N phenylboronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=CC=C1 HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 28
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 21
- IAVREABSGIHHMO-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybenzaldehyde Chemical compound OC1=CC=CC(C=O)=C1 IAVREABSGIHHMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 19
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims description 19
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 17
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 16
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 15
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 15
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 15
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 15
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 14
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 14
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 14
- UORVCLMRJXCDCP-UHFFFAOYSA-N propynoic acid Chemical compound OC(=O)C#C UORVCLMRJXCDCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 12
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 claims description 11
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 10
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 claims description 9
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 claims description 9
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 claims description 9
- KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N oxidanium;4-methylbenzenesulfonate Chemical group O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 8
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 5
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 abstract description 18
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 13
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 abstract description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 34
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 20
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 12
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 11
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 11
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 7
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 7
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 102100027995 Collagenase 3 Human genes 0.000 description 5
- 108050005238 Collagenase 3 Proteins 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 206010061246 Intervertebral disc degeneration Diseases 0.000 description 5
- 208000031737 Tissue Adhesions Diseases 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 4
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 3
- 208000008035 Back Pain Diseases 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000008930 Low Back Pain Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 3
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 3
- CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N tert‐butyl hydroperoxide Chemical compound CC(C)(C)OO CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 238000001157 Fourier transform infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 2
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 208000018180 degenerative disc disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 208000021600 intervertebral disc degenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000007281 self degradation Effects 0.000 description 2
- 238000012764 semi-quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027400 A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4 Human genes 0.000 description 1
- 108091005664 ADAMTS4 Proteins 0.000 description 1
- 102100036601 Aggrecan core protein Human genes 0.000 description 1
- 108010067219 Aggrecans Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010050296 Intervertebral disc protrusion Diseases 0.000 description 1
- 108050006284 Matrix metalloproteinase-23 Proteins 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010033425 Pain in extremity Diseases 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 206010025005 lumbar spinal stenosis Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 208000027753 pain disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000000518 rheometry Methods 0.000 description 1
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 208000005198 spinal stenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明提供了一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途,属于生物医药领域。本发明提供了一种可注射、可自增强、具有炎症响应特性以及抗炎抗氧化作用的水凝胶,以及一种具有MMP‑2响应性能miRNA载体,然后将可注射水凝胶与miRNA载体相结合,最终构建一种可注射、自增强、具有炎症响应特性、可智能化给药的miRNA水凝胶递送体系,该水凝胶递送体系同时具有抗炎抗氧化和促进ECM再生的效果,可有效促进退变髓核再生、修复。本发明为退变髓核修复提供新思路,最终避免手术带来的风险和巨大的经济花费,具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域,具体涉及一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途。
背景技术
随着社会老龄化的不断加重,脊柱退变性疾病(如腰椎间盘突出症、腰椎管狭窄症等)发病率不断增高,腰腿痛已成为发病率最高的疼痛性疾病之一。据报道,全球腰腿痛患病率高达12%;一项WHO调查显示,37%的青少年每月会至少出现一次腰痛。脊柱的退变是源于椎间盘的退变(变性、失水),椎间盘由内部的髓核和周围包围的纤维环组成。随着脊柱退变性疾病的不断进展,常规保守治疗仅能部分缓解临床症状,大部分患者不得不最终接受手术治疗。虽然目前针对脊柱退变性疾病的手术方式众多,并且不断趋近微创化,但无论何种手术方式都无法克服如手术损伤、术后复发、邻近节段退变加速、远期疗效不确切等问题,这无疑给个人和社会带来沉重的经济、社会负担。针对椎间盘退变初期的患者,尤其是仅表现为盘源性腰痛的患者,如果能通过某种方式延缓甚至逆转椎间盘退变进程,将从源头上减少脊柱退变性疾病的发生。随着生物工程技术的发展,通过髓核组织工程技术,实现椎间盘髓核再生、修复已成为可能。
通过构建可以作为细胞和生物大分子(药物、细胞因子、miRNA等)转运载体的髓核替代生物诱导支架材料,结合再生医学为代表的生物医学工程技术,使退变髓核组织再生成为可能。髓核生物医学工程策略的目标是抑制内部炎症反应、促进髓核细胞再生、恢复ECM合成/分解代谢平衡,最终真正恢复椎间盘的生理功能并满足生物力学需求。在这个过程中,髓核替代支架材料的选择处于核心地位。理想的髓核替代支架材料除了具有常规生物材料必须的性能外(如良好的生物安全性和可降解性、与天然髓核相似的生物力学特性、可注射性),还应能够适应髓核内部微环境变化并智能调控其生物学活性。但是大量研究结果显示,由于椎间盘内组织结构复杂、血供极差、力学环境复杂,现有材料如天然材料:脱细胞基质、藻酸盐、多肽水凝胶,以及人工合成材料:透明质酸、PLGA等,都不能很好地满足体外功能化髓核的构建要求。在国际上,已有大量科学家通过一些包括纤维蛋白凝胶(GelfoamTM),透明质酸海绵(HYAFF)以及多肽水凝胶等在内的可以搭载细胞生长的髓核替代支架材料产品进行临床前期研究,但是仍然没有一款成熟的功能化髓核内药物递送产品应用于临床。
近年来,人们不断的尝试利用微球、纳米胶束、外泌体、脱细胞基质等递药体系作为髓核替代支架材料,但由于缺乏力学属性、制备工艺复杂、原材料昂贵等局限,始终无法满足上述全部需求。水凝胶材料近年来持续受到关注,并广泛应用于各种组织修复领域。可注射水凝胶固有的渗透性、吸水性、可降解性、良好的生物相容性,以及巨大的载药控释能力和力学支撑潜力,在髓核替代支架材料的选择中具有巨大的应用潜力。然而,可注射水凝胶作为药物递送载体应用于椎间盘再生存在注射后水凝胶材料外渗的潜在风险。因此,需要研究一种可注射性好,并且注射后可以自增强的水凝胶。同时,该水凝胶最好能够具有pH和ROS双响应的炎症响应特性,可以迅速对炎症微环境的变化和刺激进行感知和响应,精准可控的将药物释放于疾病部位。
此外,MicroRNA(miRNA)是一类由18-24个核苷酸序列组成的小型非编码RNA,广泛存在于真核生物中,并参与基因调节。成熟的miRNA在细胞质中引导RISC复合体(miRISC)靶向3’-UTR区域中带有部分互补序列的mRNA,导致转录沉默或mRNA降解,进而调控细胞的多种生理活动。miRNA调节失衡在椎间盘退变的发生过程中扮演着重要角色。大量的研究表明,多种miRNAs表达异常将导致髓核内部细胞炎症、ECM降解、髓核细胞凋亡等,并通过不同作用机制加速椎间盘髓核退变。因此,寻找并探索miRNAs作用靶点和规律,并通过miRNAs基因治疗的方法调节髓核细胞功能,在退变椎间盘髓核修复中具有巨大的应用前景。
miRNAs基因治疗可根据miRNAs自身表达情况分为miRNAs缺乏时的miRNA替代疗法以及过表达时的miRNA抑制疗法。然而,无论哪种方法,如何将外源miRNA或miRNA抑制剂精准、稳定的转运到靶区域是miRNA基因治疗退变髓核成败的关键。基于椎间盘内无血管的特殊结构特点,以及miRNAs全身递送的诸多局限(如靶器官外异常聚集、靶器官局部低生物活性及多次用药等),miRNAs全身递送的方法并不适用于髓核的miRNAs基因治疗。然而,由于椎间盘髓核特殊的封闭结构,单纯局部注射miRNAs又会导致局部浓度过高、转染效率不足、清除率过快等一系列问题。目前miRNA载体又存在装载效率不足、不稳定、制备复杂、生物免疫原性和无法实现智能长效缓释等不足。因此,寻找一种适合椎间盘盘内局部递送miRNAs的转运载体,并结合炎症响应型水凝胶共同构建智能miRNAs递药系统,在退变髓核miRNAs基因治疗中具有重大的科学意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途。
本发明提供了一种纳米凝胶,它是由如下重量配比的原料制备而成:
单(6-氨基-6-去氧)β环糊精3~5份、MMP-2响应型多肽8~12份、氧化葡聚糖8~12份。
进一步地,前述的纳米凝胶是由如下重量配比的原料制备而成:
单(6-氨基-6-去氧)β环糊精4份、MMP-2响应型多肽10份、氧化葡聚糖10份。
进一步地,所述MMP-2响应型多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了前述的纳米凝胶的制备方法,它包括如下步骤:
将单(6-氨基-6-去氧)β环糊精和MMP-2响应型多肽溶于溶剂中,加入氧化葡聚糖,搅拌后而得;
优选地,将单(6-氨基-6-去氧)β环糊精和MMP-2响应型多肽溶于溶剂中,滴加氧化葡聚糖,剧烈搅拌后将溶液再加入溶剂中,继续搅拌,透析,过滤,离心、冻干后得到纳米凝胶;
更优选地,所述溶剂为PBS。
本发明还提供了前述的纳米凝胶作为mRNA载体中的用途。
本发明还提供了一种载microRNA的纳米凝胶,它是由如下重量配比的原料制备而成:
前述的纳米凝胶1~20份、microRNA 1份;
优选地,
前述的纳米凝胶5~20份、microRNA 1份;
更优选地,所述microRNA为antagomir-21。
本发明还提供了一种载microRNA的纳米凝胶的制备方法,它包括如下步骤:将纳米凝胶和microRNA在溶剂中混合搅拌后而得。
本发明还提供了一种水凝胶前驱体,它含有如下重量分数的组分:
接枝苯硼酸的羧甲基壳聚糖4~7份、接枝3,4,5羟基苯甲醛的明胶8~12份、丙炔酸改性的聚乙二醇分子6~10份、水700~1000份;
优选地,它含有如下重量分数的组分:
接枝苯硼酸的羧甲基壳聚糖6份、接枝3,4,5羟基苯甲醛的明胶10份、丙炔酸改性的聚乙二醇分子8份、水880份。
进一步地,所述接枝苯硼酸的羧甲基壳聚糖是按照如下方法制备而成:
在羧甲基壳聚糖和3-醛基苯硼酸中加入还原剂后在溶剂中反应得到羧甲基壳聚糖接枝的苯硼酸;
和/或,所述接枝3,4,5羟基苯甲醛的明胶是按照如下方法制备而成:
在明胶和3,4,5-羟基苯甲醛中加入还原剂后在溶剂中反应得到接枝3,4,5羟基苯甲醛;
和/或,所述丙炔酸改性的聚乙二醇分子是按照如下方法制备而成:
将聚乙二醇、丙炔酸和催化剂溶于有机溶剂中,反应得到丙炔酸改性的聚乙二醇分子;
优选地,
所述接枝苯硼酸的羧甲基壳聚糖是按照如下方法制备而成:
在羧甲基壳聚糖水溶液中加入3-醛基苯硼酸DMSO溶液,然后加入还原剂反应得到羧甲基壳聚糖接枝的苯硼酸;
和/或,所述接枝3,4,5羟基苯甲醛的明胶是按照如下方法制备而成:
在明胶水溶液中加入3,4,5-羟基苯甲醛DMSO溶液,然后加入还原剂反应得到接枝3,4,5羟基苯甲醛。
进一步地,
所述羧甲基壳聚糖、3-醛基苯硼酸和还原剂的质量比为1:(0.1~1):(0.1~1);
和/或,所述明胶、3,4,5-羟基苯甲醛和还原剂的质量比为1:(0.1~1):(0.1~1);
和/或,所述聚乙二醇、丙炔酸和催化剂的质量比为1:(0.1~1):(0.01~0.1);
优选地,所述还原剂为NaBH3CN或NaBH4;和/或,所述催化剂为对甲苯磺酸一水合物。
进一步地,前述的水凝胶前驱体还含有如下重量份数的组分:
前述的载microRNA的纳米凝胶0.001~0.005份;
优选地,它还含有如下重量份数的组分:
前述的载microRNA的纳米凝胶0.001~0.002份。
本发明还提供了一种水凝胶,它是前述的水凝胶前驱体固化反应而成。
进一步地,所述固化反应的条件是在20~30℃静置。
本发明还提供了前述的水凝胶在制备退变髓核修复材料中的用途。
进一步地,所述退变髓核修复材料是髓核替代材料和/或促髓核再生材料。
本发明中,MMP-2响应型多肽是指对MMP-2(基质金属蛋白酶-2)的刺激做出相应响应的多肽,其序列为GCRDVPMS-MRGGDRCG(SEQ IDNO.1)。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
(1)为了解决髓核替代支架材料的问题,本发明设计了一种自增强的水凝胶体系,即“以弱机械强度”的水凝胶状态注射到椎间盘内部后,自我增强其机械强度,最终达到一种“较强机械强度”的水凝胶状态。这种成胶时间和机械强度可调的水凝胶构建模式,将很好的用于椎间盘再生中,具有防止渗漏及增强脊柱稳定性的作用。该水凝胶还具有pH和ROS双响应的炎症响应特性,载药后可根据髓核内部的不同炎症程度释放内部的药物,实现智能给药。同时,本发明水凝胶还具有良好的抗氧化性能和抗炎性能,有利于抑制退变髓核进程,促进退变髓核修复。
(2)为了解miRNA转运载体的问题,本发明设计了一种能够对MMP-2响应的纳米凝胶载药颗粒。同时,该纳米凝胶装载胆固醇修饰的miRNA药物时,是miRNA药物中的胆固醇分子与环糊精分子(CD)主客体自组装而形成的,这种自组装作用是物理的相互作用形式,是较弱的作用力,也是可逆的。本发明miRNA转运载体有利于miRNA药物智能缓释给药,促进ECM再生。
(3)本发明将纳米凝胶载药颗粒装载在自增强的水凝胶体系中,最终构建出一种可注射、自增强、具有炎症响应特性、可智能化给药的椎间盘内miRNA水凝胶递送体系,该水凝胶递送体系同时具有抗炎抗氧化和促进ECM再生的效果,具有优异的促进退变髓核再生、修复的功效。
(4)本发明水凝胶递送体系缓释miRNA药物(如miRNA-21抑制剂antagomir-21)的机制为:①水凝胶对椎间盘内的炎性环境(低pH和高ROS)响应,智能裂解释放出纳米凝胶载药颗粒;②纳米凝胶载药颗粒在MMP-2存在下智能裂解;③miRNA药物自发缓慢的从Ox-Dex-CD中释放出来。
综上,本发明首先提供了一种可注射水凝胶,该可注射水凝胶植入退变髓核内部后可以自发的增强自身模量,起到充分填充和避免渗漏的作用,同时该水凝胶具有很强的抗炎抗氧化作用,可促进退变髓核的修复。此外,本发明可注射水凝胶具有pH和ROS双响应的炎症响应特性,载药后可根据髓核内部的不同炎症程度释放内部的药物。其次,本发明提供了一种可以载miRNA的纳米凝胶载药颗粒,该纳米凝胶可在MMP-2存在下智能裂解,释放可以促ECM再生的药物,促进退变髓核修复。本发明将可注射水凝胶与载miRNA的纳米凝胶相结合,最终构建一种可注射、自增强、具有炎症响应特性、可智能化给药的miRNA水凝胶递送体系,该水凝胶递送体系同时具有抗炎抗氧化和促进ECM再生的效果,可有效促进退变髓核再生、修复。本发明为退变髓核修复提供新思路,最终避免手术带来的风险和巨大的经济花费,具有良好的应用前景。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为NG@antagomir-21的理化特性结果;其中,A为NG@antagomir-21合成流程示意图;B为NG及CD-NH2的1H NMR谱;C为PBS中纳米凝胶直径随时间变化图;D为PBS中加入MMP-2前后的纳米凝胶的粒度分布;E为纳米凝胶的大小和zeta电位值;F为纳米凝胶的SEM扫描结果(比例尺,100nm);G为纳米凝胶的TEM扫描结果(比例尺,100nm);H为封装在NG中的Cy3-antagomir-21引起了Cy3荧光的猝灭;I为电泳迁移率偏移分析研究NG与antagomir-21之间的相互作用结果;J为电泳迁移验证NG对antagomir-21的保护作用结果;K为antagomir-21在不同条件下从纳米凝胶中释放曲线图;图中,*P<0.05,**P<0.01,n=3。
图2为水凝胶的理化特性结果:其中,A为水凝胶合成过程和自增强机制的示意图;B为CMC和CMC-BA、Gel及Gel-TB的1H NMR谱;C为CMC和CMC-BA、Gel及Gel-TB的FTIR光谱;D为水凝胶合成及自增强过程的照片;E为不同状态(statusI和II)SEM扫描结果图;F为StatusI时水凝胶的可注射性及自愈性示意图;G为statusII时水凝胶炎症响应及组织粘附能力示意图。
图3为水凝胶的流变性能及基因缓释效果检测结果;其中,A为不同状态下(statusI和II)水凝胶的频率扫描结果;B为不同状态下(statusI和II)水凝胶振幅扫描结果;C为不同状态下(statusI和II)水凝胶剪切变稀及自愈结果;D为通过共聚焦显微镜观察水凝胶中cy3-antagomir-21荧光分布结果;E为水凝胶在不同条件下自我降解速率;F为在各种条件下从水凝胶中释放antagomir-21的结果;G为注射入椎间盘后cy3-antagomir-21水凝胶的实时荧光成像和Living Image计算的半定量分析结果。
图4为髓核细胞转染及水凝胶生物相容性检测结果;其中,A为通过Cy3免疫荧光(标尺,20μm)观察不同条件下培养髓核细胞(NPC)的Cy3-antagomir-21转染,(+)代表加入MMP-2;B为不同组NPC细胞内cy3荧光强度定量分析结果;C为不同浓度NG@antagomir-21与L929细胞共培养时,细胞活性比较;D为通过RT-PCR检测不同干预后NPCmiRNA-21表达情况;E为用水凝胶处理24和48小时后L929细胞的存活率及F为活死染色结果;G为水凝胶清除DPPH的百分比。
图5为水凝胶促进ECM再生及抗炎效果体外鉴定结果;其中,A为水凝胶及antagomir-21通过不同机制发挥抗炎及ECM再生作用示意图;B为RT-PCR检测NPC转染antagomir-21后不同组ColII、Aggrecan、MMP-13及ADAMTs-4的基因表达结果;C为ColII及MMP-13免疫荧光染色结果及D为Westernblot结果;E为DFCH-DA染色观察不同组NPC细胞内ROS清除结果;F为不同组TNF-α免疫荧光染色结果。
图6为水凝胶体内修复退变髓核的结果;其中,A为通过建立大鼠椎间盘退变模型,并植入不同水凝胶,4、8周观察退变髓核修复效果示意图;B为术后4、8周X光扫描结果;C为术后4、8周MRI扫描结果;D为椎间盘高度指数(DHI)在不同组不同时间点的变化趋势;E为不同治疗组不同时间的MRI分级结果;F和H为HE染色、番红O-固绿染色及ColII、MMP-13、TNF-α免疫荧光染色结果;G定量观察组织学分级;图中,*P<0.05,**P<0.01,ns无显著性差异。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品,通过购买市售产品获得。
antagomir-21是一种人工合成的miRNA序列,是一种胆固醇修饰的miRNA抑制剂,作为miRNA-21抑制剂,可通过购买市售产品获得,本具体实施方式中使用的antagomir-21是从吉玛基因公司购买的。
本发明中,如果没有特殊说明,所述的溶液均为水溶液。
实施例1、包含载药纳米凝胶的可注射水凝胶的制备
1、载antagomir-21的纳米凝胶(NG@antagomir-21)的合成
称取单(6-氨基-6-去氧)β环糊精(CD-NH2)4mg及MMP-2响应型多肽10mg溶解于5ml磷酸盐缓冲液(PBS)中,持续搅拌并缓慢逐滴加入氧化葡聚糖(Ox-Dex)溶液0.5ml(20mg/ml)。持续剧烈搅拌8h,后将上述溶液逐滴加入15ml PBS中,继续搅拌4h。反应溶液透析48h后0.45μm滤头过滤,离心冻干收集纳米凝胶(NG)。
分别吸取100μl NG溶液(1mg/ml)及150μl antagomir-21溶液(20μM),此时NG和antagomir-21的质量比为5:1w/w,加入750μl HEPES缓冲液中,充分搅拌12h,并透析收集,制成NG@antagomir-21(NG@ant)。
MMP-2响应型多肽:[NH2-GCRDVPMS-MRGGDRCG-NH2]。
2、CMC-BA的合成
称取3g羧甲基壳聚糖(CMC)溶解于300ml去离子水中,加入3-醛基苯硼酸(BA,1.6g溶解于30ml DMSO中),并持续搅拌常温下反应12h,随后将1.45g NaBH3CN缓慢加入溶液中继续搅拌8h,透析72h后冻干。
3、Gel-BA的合成
称取5g明胶(Gel)溶解于500ml去离子水中,加热溶解。加入3,4,5-羟基苯甲醛(TB,3g溶解于10ml DMSO中),并持续搅拌常温下反应12h,随后将3g NaBH3CN缓慢加入溶液中继续搅拌8h,透析72h后冻干。
4、DA-PEG的合成
将PEG(10.0g,5mmol,分子量为2000)、丙炔酸(3.5g,50mmol)和对甲苯磺酸一水合物(p-TSA)(0.57g,3mmol)溶解于干甲苯(150mL)中。充分搅拌并回流48小时去除多余水分,充分冻干后溶解于水中,使用乙醚沉淀,并用异丙醇重结晶,DA-PEG干燥保存使用。
5、制备装载NG@antagomir-21的可注射水凝胶体系
80μl DA-PEG溶液(10%w/v)逐滴加入400μl Gel-TB溶液中(2.5%w/v)并持续搅拌,后制备400μl CMC-BA溶液(1.5%w/v)并加入NG@antagomir-211.76mg,将上述两种溶液混合后轻微搅拌,水凝胶瞬间形成(statusI)。将上述水凝胶静置12h,得到水凝胶(statusII)。
statusI为硼酸酯键成胶后得到的水凝胶;statusII为通过氨炔点击化学自增强成为较强水凝胶。
以下通过具体试验例证明本发明的有益效果。
试验例1、NG@antagomir-21的理化特性
1、实验方法
对实施例1的原料CD-NH2和制备的NG(未载antagomir-21)进行核磁共振1H NMR谱检测;
将实施例1制备的纳米凝胶放入PBS中,放置不同时间后用DLS检测纳米凝胶的粒径;
将实施例1制备的纳米凝胶放入PBS中或加入MMP-2(MMP-2加入的最终浓度为1μg/ml)后的PBS中,放置2h后,使用DLS检测纳米凝胶的粒径和放入PBS中的Zeta电位;
采用SEM观察实施例1制备的纳米凝胶的形貌;
将实施例1制备的纳米凝胶放入PBS中或加入MMP-2(MMP-2加入的浓度为1μg/ml)后的PBS中,放置2h后,采用TEM观察纳米凝胶的形貌;
将Cy3连接的antagomir-21按照实施例1所述方法包裹在NG内,采用酶标仪检测antagomir-21溶液中Cy3荧光强度,NG加入量依次为0、0.5、0.75、1、1.5、2mg/ml,观察随NG加入量增多,antagomir-21溶液中Cy3的荧光强度,荧光强度逐渐降低,说明Cy3-antagomir-21被包裹入NG中。
采用实施例1所述方法,将NG和antagomir-21按照不同质量比(5:1/10:1/20:1和40:1)制备NG@antagomir-21,采用电泳迁移率偏移分析研究NG@antagomir-21中NG与antagomir-21之间的相互作用,并采用电泳迁移验证NG对antagomir-21的保护作用,具体方法如下:
(1)制备1%琼脂糖凝胶:称取0.5g琼脂糖置于锥形瓶中,加入50ml1×TAE,瓶口倒扣小烧杯,微波炉加热煮沸至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1%琼脂糖凝胶液;
(2)胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板,取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子,将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子,将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液加入5μlEB(或者其他核酸染料)溶液,混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层,室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中,添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止;
(3)加样:在点样板上不同比例TANPs@ant样品和上样缓冲液2.5μl的1x loadingbuffer,样本上样7.5μl,混匀后,用10μl微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面,注意加样前要先记下加样的顺序;
(4)电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压190V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动,电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低,当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳;
(5)观察照相:电泳完毕后,取出凝胶,在紫外灯下观察,DNA存在则显示出荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存。
采用荧光强度检测方法研究实施例1制备的NG@antagomir-21中antagomir-21在不同条件下从纳米凝胶中的释放情况,具体方法如下:
将NG@cy3-antagomir-21置于透析袋中(MWCO=3500DA),并将透析袋置于去PBS(加或不加MMP-2,1μg/ml)中不断搅拌,不同时间点吸取上清液200μL,进行荧光强度检测,根据浓度标曲检测cy3-antagomir-21释放量。
上述各组的纳米凝胶是指NG@antagomor-21。
2、实验结果
NG@antagomir-21的理化特性结果如图1所示:
图1A为NG@antagomir-21合成流程示意图,说明antagomir-21可以装载于Ox-Dex、MMP-2响应型多肽和CD-NH2自组装形成的纳米凝胶中。
图1B为NG及CD-NH2的1H NMR谱,该结果说明CD-NH2成功接枝于NG内。
图1C为PBS中纳米凝胶直径随时间变化图,说明本发明纳米凝胶稳定性好。
图1D为PBS中加入MMP-2前后的纳米凝胶的粒度分布,该结果说明在MMP-2的作用下,纳米凝胶被裂解为大小不同的碎片。
图1E为纳米凝胶的大小和zeta电位值,装载antagomir-21对纳米凝胶的粒径没有改变,而zeta电位由正电位变为负电位,进一步说明装载antagomir-21成功。
图1F和1G为纳米凝胶的SEM和TEM图片,该结果说明纳米凝胶为大小均一的球型结构,同时,该结果还说明本发明制备的纳米凝胶具有MMP-2响应性,在MMP-2存在的情况下会智能裂解,利于antagomir-21的释放。
图1H显示封装在NG中的Cy3-antagomir-21引起了Cy3荧光的猝灭,该结果说明Cy3-antagomir-21会被NG装载,并且表现为浓度依赖性。
图1I和1J说明当NG/antagomir-21的质量比达到20:1时,NG装载效率达到饱和,同时NG具有良好的antagomir-21保护效果。
图1K说明NG@antagomir-21具有敏感的MMP-2响应释放特点,CD-NH2的加入,进一步实现其缓释效果。
试验例2、水凝胶的理化特性
1、实验方法
对原料CMC、Gel以及实施例1制备的CMC-BA和Gel-TB进行核磁共振、FTIR检测;
观察实施例1水凝胶合成及自增强过程中状态变化;
观察实施例1制备的statusI和statusII两种状态水凝胶的SEM扫描图像;
观察statusI状态水凝胶的的可注射性和自愈性,以及statusII状态水凝胶的炎症响应及组织粘附能力,炎症响应检测方法为模拟体外炎性环境(pH 5的HCl溶液和/或H2O21mM溶液),观察水凝胶在不同溶液覆盖下的降解情况,组织粘附能力检测方法为观察不同组织与水凝胶粘附状态并通过万能拉力机检测抗拉指数。
2、实验结果
水凝胶的理化特性结果如图2所示:
图2B为CMC和CMC-BA、Gel及Gel-TB的1H NMR谱,图2B中a、b、c分别对应图2A中对应的氢元素特征峰,该结果说明已成功制备CMC-BA及Gel-TB。
图2C为CMC和CMC-BA、Gel及Gel-TB的FTIR光谱,该结果说明已成功制备CMC-BA及Gel-TB。
图2D为水凝胶合成及自增强过程的照片,水凝胶刚交联时,是通过硼酸酯键成胶,强度较弱,水凝胶仍然可以呈流动状;交联一段时间后水凝胶通过氨炔点击化学自增强成为高强度水凝胶,此时水凝胶强度大,作为髓核修复材料可以满足椎间盘的机械强度。
图2E为statusI和statusII两种状态水凝胶的SEM扫描图片,该结果说明statusII表现出更加致密的微观结构。
图2F为StatusI时水凝胶的可注射性及自愈性示意图,图2G为statusII时水凝胶炎症响应及组织粘附能力示意图,该结果说明本发明刚制备的水凝胶(StatusI)可注射性能好,并且自愈性好;待水凝胶交联一段时间后(StatusII)强度增强,并且该水凝胶在低pH高ROS环境下会溶解,具有炎症响应能力,并且该水凝胶组织粘附能力好,黏附能力好就可以使得水凝胶注射入椎间盘内部后可以和椎间盘组织充分粘附,不会渗漏。
试验例3、水凝胶的流变性能及基因缓释效果检测
1、实验方法
对实施例1制备的statusI和statusII两种状态水凝胶进行流变学测试;
将Cy3连接的antagomir-21按照实施例1所述方法制备水凝胶,通过共聚焦显微镜观察水凝胶中cy3-antagomir-21荧光分布结果;
将实施例1制备的装载了NG@antagomir-21水凝胶放在不同溶液中(PBS溶液,pH5的HCl溶液,pH5的HCl溶液加上1mM的H2O2),观察不同时间后水凝胶的降解速度;
将实施例1制备的水凝胶放在不同溶液中(PBS溶液,pH5.5的HCl溶液,pH5.5的HCl溶液加上1mM的H2O2,pH5.5的HCl溶液加上1mM的H2O2和1μg/ml MMP-2),观察不同时间后水凝胶中释放antagomir-21的结果;
水凝胶动物体内实时成像观察:将不同形式的Cy3-antagomir-21分别注入大鼠不同节段椎间盘内部(Co 2/3,4/5,6/7),分别于不同时间点通过小动物实时荧光仪IVISSpectrum system(PerkinElmer,USA)观察荧光强度。
2、实验结果
水凝胶的流变性能及基因缓释效果检测结果如图3所示:
图3A为不同状态下(statusI和II)水凝胶的频率扫描结果,图3B为不同状态下(statusI和II)水凝胶振幅扫描结果,图3C为不同状态下(statusI和II)水凝胶剪切变稀及自愈结果,这些结果说明随着水凝胶由status I变为II,水凝胶的弹性模量逐渐增强。
图3D为通过共聚焦显微镜观察水凝胶中cy3-antagomir-21荧光分布结果,该结果说明antagomir-21在水凝胶中均匀分布。
图3E为水凝胶在不同条件下自我降解速率,图3F为不同条件下水凝胶中释放antagomir-21的结果,结果说明水凝胶在低pH和高ROS环境下快速降解,antagomir-21迅速释放,说明本发明水凝胶具有pH和ROS双响应的炎症响应特性。
图3G为注射入椎间盘后cy3-antagomir-21水凝胶的实时荧光成像和LivingImage计算的半定量分析结果,这些结果说明得益于水凝胶的包裹和NG对antagomir-21的装载,antagomir-21可以在体内存留10d之久,从而真正实现长效缓释。
试验例4、NG@antagomir-21促进antagomir-21被髓核细胞转染及水凝胶生物相容性检测
1、实验方法
培养原代髓核细胞(NPC)后,分别设置不同组(对照组control,单纯antagomir-21转染,NG@antagomir-21转染组(无MMP-13)及NG@antagomir转染组(有MMP-2)),转染24h后通过免疫荧光染色、miRNA-21基因表达观察antagomir-21转染效果。通过L929细胞活性及活死染色,鉴定水凝胶生物相容性,通过DPPH清除实验,检测水凝胶抗氧化性能。
2、实验结果
图4为髓核细胞转染及水凝胶生物相容性检测结果:
图4A为通过Cy3免疫荧光(标尺,20μm)观察不同条件下培养髓核细胞(NPC)的Cy3-antagomir-21转染结果,(+)代表加入MMP-2,该结果说明在NG@antagomir-21相对于单纯antagomir-21,具有更高的转染效率,尤其是加入MMP-2诱导NG@antagomir-21裂解后,转染效率最高。图4B为不同组NPC细胞内cy3荧光强度定量分析结果,该结果与前述一致。
图4C为不同浓度NG@antagomir-21与L929细胞共培养时,细胞活性比较,说明本发明制备的载antagomir-21纳米凝胶具有良好的细胞相容性。
图4D为通过RT-PCR检测不同干预后NPC miRNA-21表达情况,该结果说明在NG@antagomir-21相对于单纯antagomir-21,具有更高的转染效率,尤其是加入MMP-2诱导NG@antagomir-21裂解后,转染效率最高。因此,miRNA-21抑制作用最明显。
图4E为各样品处理24和48小时后L929细胞的存活率,图4F为活死染色结果,该结果进一步说明制备的载体以及水凝胶均有良好的细胞相容性。
图4G为载纳米凝胶、未载纳米凝胶的水凝胶和载纳米凝胶的水凝胶的清除DPPH的百分比,该结果说明,未载纳米凝胶的水凝胶本身就具有良好的抗氧化活性。
试验例5、水凝胶促进ECM再生及抗炎效果体外鉴定
1、实验方法
培养原代髓核细胞(NPC)后,TBHP刺激细胞诱导体外髓核细胞退变模型,分别设置不同组(正常组control,TBHP组(未干预),单纯antagomir-21转染,NG@antagomir-21转染组),通过PCR、免疫荧光染色及Western-blot检测ECM合成指标Col II及分解指标MMP-23基因及蛋白表达情况。
另分别设置不同组(正常组control,TBHP组(未干预),Hydrogel单纯水凝胶治疗组,Hydrogel/NG@antagomir-21即包含NG@antagomir-21的水凝胶治疗组),通过DFCH-DA染色观察细胞内ROS清除效果及炎症因子TNF-α表达差异。
2、实验结果
图5为水凝胶促进ECM再生及抗炎效果体外鉴定结果:
图5B、5C和5D说明了本发明装载了NG@antagomir-21的水凝胶治疗髓核细胞后,ECM再生基因高表达,并充分抑制ECM分解基因的表达。说明本发明水凝胶体系可显著促进髓核细胞ECM再生,帮助髓核修复。
图5E为DFCH-DA染色观察不同组NPC细胞内ROS清除结果结果,该结果说明本发明载纳米凝胶和未载纳米凝胶的水凝胶均具有优异的抗氧化作用。
图5F为不同组TNF-α免疫荧光染色结果该结果说明本发明载纳米凝胶和未载纳米凝胶的水凝胶均具有优异的抗炎作用。
试验例6、水凝胶体内修复退变髓核研究
1、实验方法
本部分通过对大鼠椎间盘穿刺,建立动物椎间盘退变模型,同时,给予退变椎间盘内进行不同治疗(control正常椎间盘,NC注入PBS治疗,antagomir-21即只注入antagomir-21溶液,NG@ant即注入NG@ant溶液,及包含NG@ant的水凝胶治疗),分别于4周及8周后通过X线、MRI扫描以及组织学评估(HE染色,番红O-固绿染色,及免疫组化染色)。
2、实验结果
图6为水凝胶体内修复退变髓核结果:
图6B为术后4、8周X光扫描结果,说明Hydrogel/NG@antagomir-21组可以有效恢复椎间隙高度,效果优于使用单纯的antagomir-21溶液以及NG@antagomir-21。
图6C为术后4、8周MRI扫描结果,说明Hydrogel/NG@antagomir-21组可以有效增加髓核含水量,恢复髓核MRI信号,修复效果最佳。
图6D为椎间盘高度指数(DHI)在不同组不同时间点的变化趋势,该结果说明Hydrogel/NG@antagomir-21组可以有效恢复椎间隙高度,效果优于使用单纯的antagomir-21溶液以及NG@antagomir-21。
图6E为不同治疗组不同时间的MRI分级结果,该结果说明Hydrogel/NG@antagomir-21组可以有效恢复椎间盘内部含水量,降低MRI分级,椎间盘修复效果最佳。
图6F和6H为HE染色,番红O-固绿染色及ColII、MMP-13、TNF-α免疫荧光染色,说明Hydrogel/NG@antagomir-21组退变髓核修复效果最佳。
图6G为定量观察组织学分级,该结果也同样说明Hydrogel/NG@antagomir-21组退变髓核修复效果最佳。
本发明首先提供了一种可注射水凝胶,该可注射水凝胶植入退变髓核内部后可以自发的增强自身模量,起到充分填充和避免渗漏的作用,同时该水凝胶具有很强的抗炎抗氧化作用,可促进退变髓核的修复。此外,本发明可注射水凝胶具有pH和ROS双响应的炎症响应特性,载药后可根据髓核内部的不同炎症程度释放内部的药物。其次,本发明提供了一种可以载miRNA的纳米凝胶载药颗粒,该纳米凝胶可在MMP-2存在下智能裂解,释放可以促ECM再生的药物,促进退变髓核修复。本发明将可注射水凝胶与载miRNA的纳米凝胶相结合,最终构建一种可注射、自增强、具有炎症响应特性、可智能化给药的miRNA水凝胶递送体系,该水凝胶递送体系同时具有抗炎抗氧化和促进ECM再生的效果,可有效促进退变髓核再生、修复。本发明为退变髓核修复提供新思路,最终避免手术带来的风险和巨大的经济花费,具有良好的应用前景。
Claims (15)
1.一种纳米凝胶,其特征在于:它是由如下重量配比的原料制备而成:
单(6-氨基-6-去氧)β环糊精3~5份、MMP-2响应型多肽8~12份、氧化葡聚糖8~12份。
2.根据权利要求1所述的纳米凝胶,其特征在于:它是由如下重量配比的原料制备而成:
单(6-氨基-6-去氧)β环糊精4份、MMP-2响应型多肽10份、氧化葡聚糖10份。
3.根据权利要求1或2所述的纳米凝胶,其特征在于:所述MMP-2响应型多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.权利要求1~3任一项所述的纳米凝胶的制备方法,其特征在于:它包括如下步骤:
将单(6-氨基-6-去氧)β环糊精和MMP-2响应型多肽溶于溶剂中,加入氧化葡聚糖,搅拌后而得;
优选地,将单(6-氨基-6-去氧)β环糊精和MMP-2响应型多肽溶于溶剂中,滴加氧化葡聚糖,剧烈搅拌后将溶液再加入溶剂中,继续搅拌,透析,过滤,离心、冻干后得到纳米凝胶;
更优选地,所述溶剂为PBS。
5.权利要求1~3任一项所述的纳米凝胶作为mRNA载体中的用途。
6.一种载microRNA的纳米凝胶,其特征在于:它是由如下重量配比的原料制备而成:
权利要求1~3任一项所述的纳米凝胶1~20份、microRNA 1份;
优选地,
权利要求1~3任一项所述的纳米凝胶5~20份、microRNA 1份;
更优选地,所述microRNA为antagomir-21。
7.一种载microRNA的纳米凝胶的制备方法,其特征在于:它包括如下步骤:将纳米凝胶和microRNA在溶剂中混合搅拌后而得。
8.一种水凝胶前驱体,其特征在于:它含有如下重量分数的组分:
接枝苯硼酸的羧甲基壳聚糖4~7份、接枝3,4,5羟基苯甲醛的明胶8~12份、丙炔酸改性的聚乙二醇分子6~10份、水700~1000份;
优选地,它含有如下重量分数的组分:
接枝苯硼酸的羧甲基壳聚糖6份、接枝3,4,5羟基苯甲醛的明胶10份、丙炔酸改性的聚乙二醇分子8份、水880份。
9.根据权利要求8所述的水凝胶前驱体,其特征在于:所述接枝苯硼酸的羧甲基壳聚糖是按照如下方法制备而成:
在羧甲基壳聚糖和3-醛基苯硼酸中加入还原剂后在溶剂中反应得到羧甲基壳聚糖接枝的苯硼酸;
和/或,所述接枝3,4,5羟基苯甲醛的明胶是按照如下方法制备而成:
在明胶和3,4,5-羟基苯甲醛中加入还原剂后在溶剂中反应得到接枝3,4,5羟基苯甲醛;
和/或,所述丙炔酸改性的聚乙二醇分子是按照如下方法制备而成:
将聚乙二醇、丙炔酸和催化剂溶于有机溶剂中,反应得到丙炔酸改性的聚乙二醇分子;
优选地,
所述接枝苯硼酸的羧甲基壳聚糖是按照如下方法制备而成:
在羧甲基壳聚糖水溶液中加入3-醛基苯硼酸DMSO溶液,然后加入还原剂反应得到羧甲基壳聚糖接枝的苯硼酸;
和/或,所述接枝3,4,5羟基苯甲醛的明胶是按照如下方法制备而成:
在明胶水溶液中加入3,4,5-羟基苯甲醛DMSO溶液,然后加入还原剂反应得到接枝3,4,5羟基苯甲醛。
10.根据权利要求9所述的水凝胶前驱体,其特征在于:
所述羧甲基壳聚糖、3-醛基苯硼酸和还原剂的质量比为1:(0.1~1):(0.1~1);
和/或,所述明胶、3,4,5-羟基苯甲醛和还原剂的质量比为1:(0.1~1):(0.1~1);
和/或,所述聚乙二醇、丙炔酸和催化剂的质量比为1:(0.1~1):(0.01~0.1);
优选地,所述还原剂为NaBH3CN或NaBH4;和/或,所述催化剂为对甲苯磺酸一水合物。
11.根据权利要求8所述的水凝胶前驱体,其特征在于:它还含有如下重量份数的组分:
权利要求6所述的载microRNA的纳米凝胶0.001~0.005份;
优选地,它还含有如下重量份数的组分:
权利要求6所述的载microRNA的纳米凝胶0.001~0.002份。
12.一种水凝胶,其特征在于,它是权利要求8~11任一项所述的水凝胶前驱体固化反应而成。
13.根据权利要求12所述的水凝胶,其特征在于,所述固化反应的条件是在20~30℃静置。
14.权利要求12或13所述的水凝胶在制备退变髓核修复材料中的用途。
15.根据权利要求14所述的用途,其特征在于:所述退变髓核修复材料是髓核替代材料和/或促髓核再生材料。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211392431.8A CN115990134B (zh) | 2022-11-08 | 2022-11-08 | 一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211392431.8A CN115990134B (zh) | 2022-11-08 | 2022-11-08 | 一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115990134A true CN115990134A (zh) | 2023-04-21 |
CN115990134B CN115990134B (zh) | 2024-05-10 |
Family
ID=85994424
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211392431.8A Active CN115990134B (zh) | 2022-11-08 | 2022-11-08 | 一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115990134B (zh) |
Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102058876A (zh) * | 2010-12-18 | 2011-05-18 | 甘少磊 | 一种宫颈抗菌修复复合物及其制备方法 |
CN102827446A (zh) * | 2012-09-14 | 2012-12-19 | 武汉大学 | 一种温度响应型可注射水凝胶及其制备方法和用途 |
WO2018108164A1 (zh) * | 2016-12-16 | 2018-06-21 | 宁波宁融生物医药有限公司 | 一种硼替佐米药物组合物及其应用 |
CN108434093A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-08-24 | 青岛大学 | 一种伏立康唑眼内药物控释的可注射水凝胶的制备方法 |
US20180303866A1 (en) * | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Zoetis Services Llc | Veterinary compositions for use in treating mastitis, and associated methods |
CN110204742A (zh) * | 2019-07-15 | 2019-09-06 | 吉林大学 | 一种仿眼角膜的高强度电响应润滑水凝胶及其制备方法 |
CN111329872A (zh) * | 2020-03-10 | 2020-06-26 | 中国药科大学 | 一种用于治疗转移性乳腺癌的糊精纳米凝胶及其制备方法和应用 |
CN111686308A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-22 | 四川大学华西医院 | 一种带电明胶纳米球胶体凝胶及其制备方法和用途 |
CN112980010A (zh) * | 2021-03-19 | 2021-06-18 | 广东省科学院健康医学研究所 | 一种可注射导电凝胶及其制备方法和应用 |
CN114524950A (zh) * | 2022-01-10 | 2022-05-24 | 山东师范大学 | 一种磁靶向疏水药物载体水凝胶及其制备方法和应用 |
CN114948863A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-08-30 | 四川大学 | 一种用于治疗动脉粥样硬化的药物 |
-
2022
- 2022-11-08 CN CN202211392431.8A patent/CN115990134B/zh active Active
Patent Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102058876A (zh) * | 2010-12-18 | 2011-05-18 | 甘少磊 | 一种宫颈抗菌修复复合物及其制备方法 |
CN102827446A (zh) * | 2012-09-14 | 2012-12-19 | 武汉大学 | 一种温度响应型可注射水凝胶及其制备方法和用途 |
WO2018108164A1 (zh) * | 2016-12-16 | 2018-06-21 | 宁波宁融生物医药有限公司 | 一种硼替佐米药物组合物及其应用 |
US20180303866A1 (en) * | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Zoetis Services Llc | Veterinary compositions for use in treating mastitis, and associated methods |
CN108434093A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-08-24 | 青岛大学 | 一种伏立康唑眼内药物控释的可注射水凝胶的制备方法 |
CN110204742A (zh) * | 2019-07-15 | 2019-09-06 | 吉林大学 | 一种仿眼角膜的高强度电响应润滑水凝胶及其制备方法 |
CN111329872A (zh) * | 2020-03-10 | 2020-06-26 | 中国药科大学 | 一种用于治疗转移性乳腺癌的糊精纳米凝胶及其制备方法和应用 |
CN111686308A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-22 | 四川大学华西医院 | 一种带电明胶纳米球胶体凝胶及其制备方法和用途 |
CN112980010A (zh) * | 2021-03-19 | 2021-06-18 | 广东省科学院健康医学研究所 | 一种可注射导电凝胶及其制备方法和应用 |
CN114524950A (zh) * | 2022-01-10 | 2022-05-24 | 山东师范大学 | 一种磁靶向疏水药物载体水凝胶及其制备方法和应用 |
CN114948863A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-08-30 | 四川大学 | 一种用于治疗动脉粥样硬化的药物 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JIACHANG HUANG: "Injectable and Degradable pH-Responsive Hydrogels via Spontaneous Amino−Yne Click Reaction", 《ACS APPL. MATER. INTERFACES》, vol. 10, no. 1, 10 January 2018 (2018-01-10), pages 361 - 370, XP055829381, DOI: 10.1021/acsami.7b18141 * |
VÉRONIQUE WINTGENS: "Cyclodextrin/dextran based hydrogels prepared by cross-linking with sodium trimetaphosphate", 《CARBOHYDRATE POLYMERS》, vol. 132, 31 December 2015 (2015-12-31), pages 80 - 88, XP029252807, DOI: 10.1016/j.carbpol.2015.06.038 * |
YU WANGA: "An injectable and self-strengthening nanogel encapsuled hydrogel gene delivery system promotes degenerative nucleus pulposus repair", 《COMPOSITES PART B》, vol. 250, 10 December 2022 (2022-12-10), pages 1 - 14, XP087235160, DOI: 10.1016/j.compositesb.2022.110469 * |
李丹丹: "基于席夫碱反应的氧化葡聚糖/胺化羧甲基壳聚糖双组分水凝胶粘合剂", 《中国组织工程研究》, vol. 22, no. 22, 30 May 2018 (2018-05-30), pages 3527 - 3532 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115990134B (zh) | 2024-05-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Zhou et al. | Genipin cross-linked type II collagen/chondroitin sulfate composite hydrogel-like cell delivery system induces differentiation of adipose-derived stem cells and regenerates degenerated nucleus pulposus | |
Wu et al. | In situ controlled release of stromal cell-derived factor-1α and antimiR-138 for on-demand cranial bone regeneration | |
Tang et al. | Well-dispersed platelet lysate entrapped nanoparticles incorporate with injectable PDLLA-PEG-PDLLA triblock for preferable cartilage engineering application | |
CN114605676B (zh) | 一种退变髓核修复可注射水凝胶及其用途 | |
Chang et al. | Silencing gene‐engineered injectable hydrogel microsphere for regulation of extracellular matrix metabolism balance | |
Chen et al. | Surface-engineering of glycidyl methacrylated dextran/gelatin microcapsules with thermo-responsive poly (N-isopropylacrylamide) gates for controlled delivery of stromal cell-derived factor-1α | |
US20200253192A1 (en) | Zwitterionic microgels, their assemblies and related formulations, and methods for their use | |
Sun et al. | Cryo-self-assembled silk fibroin sponge as a biodegradable platform for enzyme-responsive delivery of exosomes | |
CN112618571B (zh) | 治疗骨科疾病的可注射水凝胶微球及其制备方法与应用 | |
CN109925516A (zh) | 一种负载外泌体的复合水凝胶及其制备方法 | |
CN104587531B (zh) | 一种修复关节软骨损伤的凝胶支架的制备方法 | |
Yu et al. | Genipin cross-linked decellularized nucleus pulposus hydrogel-like cell delivery system induces differentiation of ADSCs and retards intervertebral disc degeneration | |
Kuang et al. | Cryo-shocked cancer cell microgels for tumor postoperative combination immunotherapy and tissue regeneration | |
Jiang et al. | A hydrogel reservoir as a self-contained nucleus pulposus cell delivery vehicle for immunoregulation and repair of degenerated intervertebral disc | |
Han et al. | Programmed release of vascular endothelial growth factor and exosome from injectable chitosan nanofibrous microsphere-based PLGA-PEG-PLGA hydrogel for enhanced bone regeneration | |
Huang et al. | Self-assembly of chlorogenic acid into hydrogel for accelerating wound healing | |
Wang et al. | Kartogenin-loaded hydrogel promotes intervertebral disc repair via protecting MSCs against reactive oxygen species microenvironment by Nrf2/TXNIP/NLRP3 axis | |
Xiang et al. | Progress in regulating inflammatory biomaterials for intervertebral disc regeneration | |
Zheng et al. | Hydrogen ion capturing hydrogel microspheres for reversing inflammaging | |
Albashari et al. | Local Spinal Cord Injury Treatment Using a Dental Pulp Stem Cell Encapsulated H2S Releasing Multifunctional Injectable Hydrogel | |
Kim et al. | In situ pocket-type microcarrier (PMc) as a therapeutic composite: Regeneration of cartilage with stem cells, genes, and drugs | |
CN115990134B (zh) | 一种可注射水凝胶/纳米凝胶载药缓释体系及其制备方法和用途 | |
CN109232995A (zh) | 可以调节响应温度的温敏性水凝胶包载细胞材料及其制备方法与应用 | |
CN115634214B (zh) | 一种可注射水凝胶/多酚miRNA载体缓释体系及其制备方法和用途 | |
CN115282288A (zh) | Ros响应性软骨靶向水凝胶微球及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |