CN115956088A

CN115956088A - 包括抗-CD19抗体和阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的抗肿瘤组合疗法

Info

Publication number: CN115956088A
Application number: CN202180044545.0A
Authority: CN
Inventors: J·恩德尔; G·芬格勒-罗森; M·P·曹
Original assignee: Morphosys AG; Gilead Sciences Inc
Current assignee: Morphosys AG; Gilead Sciences Inc
Priority date: 2020-06-22
Filing date: 2021-06-22
Publication date: 2023-04-11
Also published as: KR20230030636A; JP2023530499A; EP4168449A1; US20230014026A1; CA3181827A1; AU2021298106A1; WO2021259902A1; TW202216193A

Abstract

本公开针对组合疗法，该疗法包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα‑CD47先天免疫检查点的多肽，该疗法用于治疗癌症，尤其是血液癌症，例如白血病或淋巴瘤。

Description

包括抗-CD19抗体和阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的抗肿瘤组合疗法

技术领域

本公开针对组合疗法，该疗法包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该疗法用于治疗白血病或淋巴瘤。

背景技术

CD19是免疫球蛋白超家族的95-kDa跨膜糖蛋白，含有两个细胞外免疫球蛋白样结构域和一个广泛的(extensive)胞质尾区。该蛋白质是pan-B淋巴细胞表面受体，并无处不在地表达自前-B细胞发育的最早阶段，向前直至在末端分化为等离子体细胞的过程中被下调为止。它是B-淋巴细胞谱系特异性的，除了一些小结树突状细胞外，在造血干细胞和其他免疫细胞上不表达。CD19充当B细胞受体(BCR)信号传导的正向调节剂，并且对于B细胞激活和增殖以及体液免疫应答的发展很重要。它与CD21和CD81结合以共刺激分子起作用，并且对于B细胞对T-细胞-依赖性抗原的应答至关重要。CD19的胞质尾区与酪氨酸激酶家族在物理上相关，该酪氨酸激酶经由蛋白质酪氨酸激酶的src-家族触发下游信号传导通路。CD19是淋巴来源的癌症的有吸引力的靶标，因为它在几乎所有慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)以及许多其他不同类型的白血病包括急性淋巴细胞性白血病(ALL)和多毛细胞白血病(HCL)中高表达。

Tafasitamab(此前名称：MOR208和

5574)是一种人源化的单克隆抗体，靶向抗原CD19，一种参与B-细胞受体信号传导的跨膜蛋白。Tafasitamab已在IgG Fc-区进行了工程化，以增强抗体-依赖性细胞-介导的细胞毒性(ADCC)，从而与常规抗体(即非增强抗体)相比，改善了肿瘤细胞杀伤的关键机制，并提供增强功效的潜力。已经或目前正在多个临床试验中对Tafasitamab进行研究，例如在CLL、ALL和NHL中。在其中一些试验中，Tafasitamab与艾德拉尼(Idelalisib)，来那度胺(Lenalidomide)或维奈克拉(Venetoclax)组合使用。

尽管最近几种抗癌剂的发现和发展，但由于许多类型的癌症包括表达CD19的肿瘤的预后不良，仍然需要改进的方法或治疗方法来治疗此类类型的癌症。

因此，本发明人已经确认，将对CD19具有特异性的抗体或抗体片段连同阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合施用，对B细胞来源的恶性淋巴瘤的治疗具有较好的效果，并且已完成本发明。

发明内容

本公开提供一种新的组合，用于治疗癌症，该组合包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽。

巨噬细胞是存在于所有组织中的先天免疫细胞。在癌症中，巨噬细胞可以根据细胞信号促进或抑制肿瘤生长。巨噬细胞亚类的表征已显示至少2个亚类。一个亚类，M2巨噬细胞，产生精氨酸酶并促进肿瘤生长，而另一个亚类，M1巨噬细胞，产生氧化亚氮合成酶并介导肿瘤杀伤。巨噬细胞可以经由抗体依赖性机制(例如抗体-依赖性细胞吞噬作用(ADCP))或抗体独立性机制进行杀伤。

与健康的细胞不同，不需要的、老化或垂死的细胞展示称为“吃我”信号即“改变自我”的标志物或配体，而其又可以被吞噬细胞例如中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞上的受体识别。健康的细胞可展示积极抑制吞噬作用的“不要吃我”信号；这些信号或者在垂死的细胞中被下调，以改变的构象存在，或者被“吃我”或促吞噬信号的上调所取代。健康细胞上的细胞表面蛋白CD47及其吞噬受体信号调节蛋白a(Signal Regulatory Protein a)(SIRPα)的衔接，构成一个关键的“不要吃我”信号，可以关闭由多种方式(包括凋亡细胞清除和FcR介导的吞噬作用)介导的吞食。阻断吞噬细胞上SIRP的CD47介导的衔接，或在基因敲除小鼠中的CD47表达丧失，可以导致活细胞和非老化红细胞的去除。对于那些还存在吞噬前信号的细胞，阻断SIRPoc还允许通常不被吞噬的靶标的吞食。

CD47是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，具有单个Ig-样结构域和五个膜跨度区，可作为SIRPoc的细胞配体起作用，通过SIRPoc的NH2-末端V-样结构域进行介导的结合。SIRPoc主要在髓样细胞包括巨噬细胞、粒细胞、髓样树突状细胞(DC)、肥大细胞及其前体(包括造血干细胞)上表达。SIRPoc上介导CD47结合的结构决定因素通过Lee等人(2007)J.Immunol.179:7741-7750；Hatherley等人(2007)J.B.C.282:14567-75讨论；并且SIRPoccis二聚化在CD47结合中的作用通过Lee等人(2010)J.B.C.285:37953-63讨论。与CD47在抑制正常细胞的吞噬作用的作用相符，有证据表明，CD47在造血干细胞(HSC)和祖细胞上仅在这些细胞迁移阶段之前和期间短暂上调，并且CD47在这些细胞上的水平决定了它们在体内被吞食的可能性。

迄今为止，测试的所有癌症中CD47均过表达。实际上，已经表明，CD47在肿瘤上相比于正常细胞上过表达约3.3倍(Majeti等人(2009)Cell 138:286-289；Willingham等人(2012)PNAS 109:6662-6667)。

程序性细胞死亡(PCD)和吞噬细胞去除是生物体应答以便去除受损、癌前或感染细胞的方式之一。因此，在这种生物体应答下存活的细胞(例如，癌细胞、慢性感染细胞等)已经设计了逃避PCD和吞噬细胞去除的方法。CD47，“不要吃我”信号，在各种患病细胞、癌细胞和感染细胞上组成性上调，使这些细胞逃避吞噬作用。阻断一个细胞(例如，癌细胞，感染细胞等)上的CD47和另一个细胞(例如，吞噬细胞)上的SIRPoc的相互作用的抗-CD47药剂，抵消CD47表达的增加，并促进对癌细胞和/或感染细胞的吞噬作用。因此，抗-CD47药剂可用于治疗和/或预防各种疾病/病症。

在本公开中，发明人将靶向CD19的抗体Tafasitamab(Fc增强)和靶向CD47的抗体组合，并评估抗肿瘤活性。在体外和体内，当将Tafasitamab与靶向CD47的抗体组合时，观察到抗肿瘤作用的显著增加。

总之，证明了施用Tafasitamab以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点(例如经由靶向CD47的抗体或靶向SIRPα的抗体)对于淋巴瘤和白血病疗法可能持有有希望的方法。

本文提供的是一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗血液癌症。在一些实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性成淋巴细胞白血病(ALL)。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗血液癌症，其中所述阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是与人CD47或人SIRPα特异性地结合的抗体或抗体片段或者多肽SIRPα试剂。

在另一方面，本公开提供一种试剂盒，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段，以及将所述抗-CD19抗体或其抗体片段与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合施用的说明。在一个实施方式中，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是与人CD47或人SIRPα特异性地结合的抗体或抗体片段或者多肽SIRPα试剂。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括用于治疗癌症的对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，其中对CD19具有特异性的抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列SYVMH(SEQID NO:1)的HCDR1区、包含序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区和包含序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、包含序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和包含序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区，该组合用于治疗癌症。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，其中对CD19具有特异性的抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、包含序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区和包含序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、包含序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和包含序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区，该组合用于治疗癌症。

在另一方面，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

该轻链可变区为

在另一方面，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段具有效应功能。在另一方面，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段具有增强的效应功能。在一个实施方式中，效应功能是ADCC。在一个实施方式中，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段具有增强的ADCC活性。在另一实施方式中，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段包含一个Fc结构域，该结构域在位置S239和/或I332处包含氨基酸替换，其中该编号如在Kabat中根据EU索引。

在又一方面，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段包含重链恒定区，该重链恒定区为

在另一方面，对CD19具有特异性的抗体包含轻链恒定区，该轻链恒定区为

在又一方面，对CD19具有特异性的抗体包含重链恒定区和轻链恒定区，该重链恒定区为

该轻链恒定区为

在又一方面，对CD19具有特异性的抗体包括重链区和轻链区，该重链区为

该轻链区为

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中癌症是血液癌症。在一个实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性成淋巴细胞白血病(ALL)。在另一个实施方式中，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。在另一实施方式中，非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中对CD19具有特异性的抗体以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以单独的方式施用。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中对CD19具有特异性的抗体以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以同时的方式施用。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及抗-CD47抗体或其抗体片段，该组合用于治疗血液癌症，其中抗-CD19抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

该轻链可变区为

并且其中抗-CD47抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

该轻链可变区为

在一个实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性成淋巴细胞白血病(ALL)。在另一个实施方式中，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。在另一实施方式中，非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在另一个实施方式中，血液癌症是弥漫性大B细胞淋巴瘤。

本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及抗-CD47抗体或其抗体片段，该组合用于治疗血液癌症，其中抗-CD19抗体或抗体片段包含重链区和轻链区，该重链区为

该轻链区为

并且其中抗-CD47抗体或其片段包含重链和轻链，该重链为

该轻链为

附图说明

图1：用于ADCP测定的细胞系上相关表面抗原的抗原表达水平。将1.0E+05Raji、Ramos、Daudi或SU-DHL-6细胞铺板，用50μg/mL的人γ球蛋白阻断30分钟，并用商业初级标记的抗体或合适的同种型对照染色30分钟。测定读数使用Novocyte或Novocyte Quanteon仪器进行，并使用Novocyte软件分析数据。数据显示在显示MFI(平均荧光强度)比值的条形图中，该值根据合适同种型对照的MFI值，以目的抗原的MFI值的标准化计算。

图2和图3：添加抗-CD47mAb增加Tafasitamab介导的ADCP。将CFSE染色的THP-1细胞用作效应细胞，并在37℃和5％ CO2下与Cell Trace^TMViolet染色的Raji(A)、Ramos(B)、Daudi(C)或SU-DHL-6(D)靶细胞以E:T比为2:1共孵育4小时。靶细胞上的门控作为100％用于ADCP分析。效应细胞-介导的对肿瘤细胞的非特异性吞噬作用通过在没有抗体的情况下将效应细胞与靶细胞孵育来测定，并在图表上显示为灰色虚线，称为背景ADCP。通过对吞噬靶细胞的效应细胞进行定量，利用基于流式细胞术的读数来测量靶细胞的吞噬作用，因此对于两种使用的染色染料是双阳性的。当总靶细胞对应于100％时，吞噬作用的百分比代表双阳性细胞的百分比。黑色虚线曲线代表Tafasitamab滴定，而添加了3nM抗-CD47抗体(克隆B6H12.2)的Tafasitamab滴定，用黑色实线显示。误差条代表技术重复的标准偏差。灰色虚线表示不添加抗体的背景吞噬作用。

图4：添加抗-CD47mAb增加Tafasitamab介导的ADCP。将CFSE染色的THP-1细胞用作效应细胞，并在37℃和5％ CO2下与Cell Trace^TMViolet染色的Raji(A)或Ramos(B)靶细胞以E:T比为2:1共孵育4小时。靶细胞上的门控作为100％用于ADCP分析。效应细胞-介导的对肿瘤细胞的非特异性吞噬作用通过在没有抗体的情况下将效应细胞与靶细胞孵育来测定，并在图表上显示为灰色虚线，称为背景ADCP。通过对吞噬靶细胞的效应细胞进行定量，利用基于流式细胞术的读数来测量靶细胞的吞噬作用，因此对于两种使用的染色染料是双阳性的。当总靶细胞对应于100％时，吞噬作用的百分比代表双阳性细胞的百分比。黑色虚线曲线代表Tafasitamab滴定，而添加了3nM抗-CD47抗体(克隆B6H12.2)的Tafasitamab滴定，用黑色实线显示。灰色虚线表示不添加抗体的背景吞噬作用。

图5：MOR208和抗-CD47抗体组合在弥散性(disseminated)存活模型(MOR208P014)中的功效。

图6：Ramos-SCID皮下肿瘤(MOR208P015)中的MOR208组合功效。

图7：Ramos-NOD-SCID皮下肿瘤(MOR208P016)中的MOR208组合功效。

图8：MOR208和CD47/SIRPα检查点增加以M1和M2巨噬细胞用作效应细胞的ADCP分析中对Ramos细胞的吞噬作用的功效。

图9：以莫洛利单抗(Magrolimab)加Tafasitamab共同处理增强不同淋巴瘤细胞的吞噬作用。在37℃下将荧光标记的Raji细胞(A)、Toledo细胞(B)、U2932细胞(C)或RCK8细胞(D)与离体分化的人巨噬细胞以2：1的比共孵育，连同以10μg/ml的浓度进行指定抗体处理，持续2小时。通过用针对细胞表面标志物CD11b的抗体染色来鉴定巨噬细胞，并通过流式细胞术评估反应。吞噬事件定义为肿瘤细胞特异性荧光信号阳性的总巨噬细胞百分比，对应于吞食肿瘤细胞的巨噬细胞。通过用莫洛利单抗或Tafasitamab处理增加淋巴瘤细胞的吞噬作用；两种药物的组合增强这种吞噬作用。

图10：莫洛利单抗和Tafasitamab增强CA46淋巴瘤细胞的吞噬作用，但不显示组合的效果。在37℃下将荧光标记的CA46(A)或JVM-2细胞(B)细胞与离体分化的人巨噬细胞以2：1的比共孵育，连同以10μg/ml的浓度进行指定抗体处理，持续2小时。通过用针对细胞表面标志物CD11b的抗体染色来鉴定巨噬细胞，并通过流式细胞术评估反应。吞噬事件定义为肿瘤细胞特异性荧光信号阳性的总巨噬细胞百分比，对应于吞食肿瘤细胞的巨噬细胞。通过用莫洛利单抗或Tafasitamab处理增加CA46细胞和JVM-2细胞的吞噬作用；但是两种药物的组合并不明确增强这种吞噬作用。

定义

术语“CD19”是指称为CD19的蛋白质，具有以下同义词：B4，B-淋巴细胞抗原CD19，B-淋巴细胞表面抗原B4，CVID3，分化抗原CD19，MGC12802和T细胞表面抗原Leu-112。

人CD19具有以下氨基酸序列：

根据表1，将“MOR208”和“XmAb 5574”和“Tafasitamab”用作抗-CD19抗体的同义词。表1提供MOR208/Tafasitamab的氨基酸序列。MOR208抗体在美国专利申请序列号12/377,251中进行了描述，其全部内容并入以供参考。美国专利申请序列号12/377,251描述了名为4G7 H1.52杂合S239D/I332E/4G7 L1.155的抗体(后来命名为MOR208和Tafasitamab)。

本文使用的术语“抗体”是指包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的蛋白质，其与抗原相互作用。每条重链由可变重链区(本文中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由可变轻链区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区能够进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其间散布着更为保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL均由以如下顺序从氨基末端到羧基末端排列的三个CDR和四个FR组成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。术语“抗体”包括例如单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼状抗体和嵌合抗体。抗体能够是任何同种型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。轻链和重链均分为结构和功能同源的区域。

本文使用的短语“抗体片段”是指抗体的保留与抗原特异性相互作用(例如，通过结合、位阻、稳定性空间分布)能力的一个或多个部分。结合片段的实例包括但不限于由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段Fab片段；包含通过铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段F(ab)2片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341:544-546)；以及分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但可使用复原方法，通过合成接头将它们联接，该接头使得它们能够作为其中VL和VH区配对以形成单价分子的单一蛋白质链制备(称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人，(1988)Science242:423-426；和Huston等人，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883)。这样的单链抗体也意在包括在术语“抗体片段”之内。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术来获得，并且以与针对完整抗体所使用的方式相同的方式就功用进行片段筛选。抗体片段也可以掺入单结构域抗体、大型抗体(maxibody)、小型抗体、体内抗体、双抗体、三抗体、四抗体、v-NAR和bis-scFv(参见，例如，Hollinger和Hudson,(2005)NatureBiotechnology 23:1126-1136)。能够将抗体片段移植到基于比如III型纤连蛋白(Fn3)的多肽的骨架中(参见描述纤连蛋白多肽单抗的美国专利第6,703,199号)。能够将抗体片段掺入包含一对串联Fv片段(VH-CH1-VH-CH1)的单链分子中，该片段与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合位点(Zapata等人,(1995)Protein Eng.8:1057-1062；和美国专利第5,641,870号)。

“施用”或“给药”包括但不限于，通过可注射形式例如静脉内、肌内、真皮内或皮下路径或黏膜路径，例如，作为鼻喷雾或气溶胶用于吸入或作为可消化溶液、胶囊或片剂递送药物。优选地，通过可注射形式给药。

术语“效应功能”是指归因于抗体Fc区的那些生物活性，其随抗体同种型而变化。抗体效应功能的非限制性实例包括C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)；细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调；和B细胞活化。

“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指一种细胞毒性形式，其中抗体与存在于某些细胞毒性细胞(例如NK细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)上的Fc受体(FcR)结合，使这些细胞毒性效应细胞能够与携带抗原的靶细胞特异性地结合，随后用细胞毒素杀伤靶细胞。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。

“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指靶细胞在补体存在下的裂解。经典补体通路的激活由补体系统的第一组分(C1q)与本公开的抗体(适当亚类)的结合启动，该抗体与其同源抗原结合。

“抗体依赖性细胞吞噬作用”或“ADCP”是指通过吞噬细胞如巨噬细胞或树突状细胞的内化消除抗体包被的靶细胞的机制。

术语“血液癌症”包括血源性肿瘤和涉及造血来源组织中异常细胞生长和/或增殖的疾病或病症，例如淋巴瘤、白血病和骨髓瘤。

非霍奇金氏淋巴瘤(“NHL”)是源自淋巴细胞的异质性恶性肿瘤。在美国(U.S.)，发病率估计为65,000/年，死亡率约为20,000(American Cancer Society,2006；和SEERCancer Statistics Review)。该疾病能够发生在所有年龄段，通常的发病始于40多岁的成年人，其发病率随着年龄的增长而增加。NHL的特征在于累积在淋巴结、血液、骨髓和脾脏中(尽管可能涉及任何主要器官)的淋巴细胞的克隆增殖。目前病理学家和临床医生使用的分类系统是世界卫生组织(WHO)肿瘤分类，其将NHL分成前体和成熟的B细胞或T细胞肿瘤。目前，对于进入临床试验而言，目前PDQ将NHL分为惰性(indolent)或侵袭性的。惰性NHL组主要包括滤泡性亚型、小淋巴细胞淋巴瘤、MALT(粘膜相关淋巴组织)和边缘区；惰性包括约50％的新诊断的B细胞NHL患者。侵袭性NHL包括具有组织学诊断主要为弥漫性大B细胞(DLBL、“DLBCL”或DLCL)(所有新诊断的患者中有40％具有弥漫性大细胞)、伯基特氏细胞和套细胞(“MCL”)的患者。NHL的临床过程是高度可变的。临床过程的主要决定因素是组织学亚型。大多数惰性NHL被认为是不可治愈的疾病。患者最初对化疗或抗体疗法作出应答，大多数患者会复发。迄今为止的研究并没有显示出早期干预对存活率的改善。在无症状的患者中，“观察和等待”是可以接受的，直到患者出现症状或疾病进展似乎正在加速。随着时间的推移，这种疾病可能转化为一种更具侵袭性的组织学。中位生存期为8至10年，惰性患者在其疾病治疗阶段通常接受3次或更多次治疗。有症状的惰性NHL患者的初步治疗历来是组合化疗。最常用的药剂包括：环磷酰胺、长春新碱和泼尼松(CVP)；或环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松(CHOP)。约70％至80％的患者将对其初始化疗作出应答，缓解期的持续时间约为2-3年。最终大多数患者复发。抗-CD20抗体利妥昔单抗的发现和临床应用已在应答和存活率方面提供显著的的改善。目前对于大多数患者的护理标准是利妥昔单抗+CHOP(R-CHOP)或利妥昔单抗+CVP(R-CVP)。利妥昔单抗疗法已经显示在几种类型的NHL中是有效的，并且目前将其批准用于惰性(滤泡性淋巴瘤)和侵袭性NHL(弥漫性大B细胞淋巴瘤)的一线治疗。然而，抗-CD20单克隆抗体(mAb)存在显著的局限性，包括初级抵抗力(在复发性惰性患者中50％应答)、获得性抵抗力(对于再治疗50％应答率)、罕见的完全应答(在复发人群中2％完全应答率)、以及持续的复发模式。最后，许多B细胞不表达CD20，因此许多B细胞病症不能用抗-CD20抗体疗法进行治疗。

除NHL之外，存在由B细胞失调引起的几种类型的白血病。慢性淋巴细胞性白血病(也称为“慢性淋巴性白血病”或“CLL”)是由B淋巴细胞异常积累引起的一种成人白血病。在CLL中，恶性淋巴细胞可能看起来正常和成熟，但它们不能有效应对感染。CLL是成年人中最常见的白血病形式。男性患CLL是女性的两倍。然而，关键的危险因素是年龄。超过75％的新病例是在超过50岁的患者中诊断出来的。每年诊断出超过10,000例病例，并且每年死亡数接近5,000人(American Cancer Society,2006；和SEER Cancer Statistics Review)。在大多数病例中，CLL是一种不可治愈的疾病，但进展缓慢。许多患CLL的人多年来一直保持正常和积极的生活。由于其发作缓慢，通常不对早期CLL进行治疗，因为认为早期CLL干预不会改善生存时间或生活质量。相反，随着时间的推移监测症状。初始CLL治疗根据确切的诊断和疾病的进展而不同。有几十种用于CLL疗法的药物。组合化疗方案如FCR(氟达拉滨、环磷酰胺和利妥昔单抗)和BR(依鲁替尼(Ibrutinib)和利妥昔单抗)在新诊断和复发的CLL中均有效。由于其风险，同种异体骨髓(干细胞)移植很少用作CLL的一线治疗。

另一种类型的白血病是小淋巴细胞性淋巴瘤(“SLL”)，它被认为是一种CLL变体，它缺乏CLL诊断所需的克隆性淋巴细胞增多，但在其他方面共享病理和免疫表型特征(Campo等人，2011)。SLL的定义需要存在淋巴结肿大和/或脾肿大。此外，外周血中的B淋巴细胞数不应超过5×109/L。在SLL中，应尽可能通过淋巴结活检的组织病理学评估来确认诊断(Hallek等人，2008)。在美国，SLL的发病率约为CLL 25％(Dores等人，2007)。

另一种类型的白血病是急性成淋巴细胞白血病(急性成淋巴细胞白血病)(ALL)，也称为急性淋巴细胞性白血病(acute lymphocytic leukemia)。ALL的特征在于骨髓中恶性和未成熟白细胞(也称为淋巴母细胞)的过度产生和持续增殖。“急性”是指未分化、未成熟状态的循环淋巴细胞(“爆发”)，并且如果不治疗，疾病进展迅速，预期寿命为数周至数月。ALL在儿童期最常见，4-5岁的年龄为发病率高峰。12-16岁的儿童比其他人更容易死亡。目前，认为至少80％的儿童期ALL是可治愈的。每年诊断4000例，死亡数每年接近1500例(American CancerSociety,2006；和SEER Cancer Statistics Review)。

本上下文中使用的“受试者”或“患者”是指任何哺乳动物，包括啮齿动物，如小鼠或大鼠，以及灵长类动物，如食蟹猴(Macaca fascicularis)、恒河猴(Macaca mulatta)或人(Homo sapiens)。优选地，受试者或患者是灵长类动物，最优选人患者，甚至更优选成年人患者。

本文使用的术语“工程化”或“修饰的”包括通过合成手段(例如通过重组技术、体外肽合成、通过肽的酶促或化学偶联或这些技术的一些组合)对核酸或多肽的操作。优选地，根据本公开的抗体或抗体片段被工程化或修饰以改善一种或多种特性，例如抗原结合、稳定性、半衰期、效应功能、免疫原性、安全性等。优选地，根据本公开的抗体或抗体片段被工程化或修饰以改善效应功能，例如ADCC。

“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C-端区域。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒定结构域，CH2结构域和CH3结构域。除非本文另有规定，否则Fc区中氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat等人，,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5^th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。

根据本公开施用的抗体以治疗有效量施用于患者。“治疗有效量”是指足以提供给定疾病或病症的临床表现的一些改善的量。对特定治疗目的有效的量将取决于疾病或损伤的严重程度以及受试者的体重和一般状态。应当理解，可以使用常规实验、通过构建值的矩阵并测试矩阵中的不同点来确定合适的剂量，所有这些都在受过训练的医师或临床科学家的普通技能范围内。

术语“组合”或“药物组合”是指除了一种疗法外还施用另一种疗法。因此，“与…组合”包括以任何顺序同时(例如并发)和连续给药。每种组分可以同时或在不同时间点以任何顺序依次施用。因此，每种组分可以单独施用，但时间足够接近，以提供所需的治疗效果。作为非限制性实例，第一疗法(例如药剂，例如抗-CD19抗体)可以在向患者进行第二疗法(例如药剂，例如抗-CD47抗体)给药之前(例如，1分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、8周、9周、10周、11周或12周)，同时或之后(例如，1分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周或更长时间)施用。

在一些实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段和阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽(例如抗-CD47抗体)的组合给药具有协同效果。本文可互换使用的术语“协同”、“协同作用”、“协同的”和“协同效果”是指以组合施用的化合物的效果，其中该效果大于单独施用的每种化合物的单独效果的总和。

本文公开的药物组合的协同效果可以通过不同的方法测定。此类方法的实例包括Chou等人、Clarke等人和/或Webb等人的方法。参见Ting-Chao Chou,Theoretical Basis,Experimental Design,and Computerized Simulation of Synergism and Antagonismin Drug Combination Studies,Pharmacol Rev 58:621–681(2006)，将其全部内容并入以供参考。还参见Clarke等人,Issues in experimental design and endpoint analysisin the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer andother models,Breast Cancer Research and Treatment46:255-278(1997)，将其全部内容并入以供参考。还参见Webb,J.L.(1963)Enzyme and Metabolic Inhibitors,AcademicPress,New York，将其全部内容并入以供参考。

具体实施方式

抗-CD19抗体

CD19抗体在非特异性B细胞淋巴瘤中的使用在WO2007076950(US2007154473)中有所讨论，两者均并入以供参考。CD19抗体在CLL、NHL和ALL中的使用描述于Scheuermann等人,CD19Antigen in Leukemia and Lymphoma Diagnosis and Immunotherapy,Leukemiaand Lymphoma,Vol.18,385-397(1995)，将其全部内容并入以供参考。

对CD19特异性的其他抗体描述于WO2005012493(US7109304)、WO2010053716(US12/266,999)(Immunomedics)；WO2007002223(US US8097703)(Medarex)；WO2008022152(12/377,251)和WO2008150494(Xencor)、WO2008031056(US11/852,106)(Medimmune)；WO2007076950(US 11/648,505)(Merck Patent GmbH)；WO 2009/052431(US12/253,895)(Seattle Genetics)；和WO2010095031(12/710,442)(Glenmark Pharmaceuticals)、WO2012010562和WO2012010561(International Drug Development)、WO2011147834(RocheGlycart)和WO2012156455(Sanofi)，将它们全部内容并入以供参考。

药物组合物包括活性药剂，例如用于人类治疗用途的抗体。药物组合物可以另外包括药学上可接受的载体或赋形剂。

包含在根据本公开施用于患者的药物组合物中的抗体或抗体片段的剂量可以根据患者的年龄和体型、症状、病情、给药途径等而变化。剂量通常根据体重或体表面积、年龄或每个人来计算。根据病情的严重程度，可以调整治疗的频率和持续时间。可以根据经验确定用于施用包含对CD19具有特异性的抗体或抗体片段的药物组合物的有效剂量和时间表；例如，可以通过定期评估来监测患者的进展，并相应地调整剂量。此外，可以使用本领域众所周知的方法进行剂量的种间缩放(例如，Mordenti等人,1991,Pharmaceut.Res.8:1351)。

药物组合物可以包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射等的剂型。这些可注射制剂可以通过已知方法制备。例如，可通过例如将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备可注射制剂。可用于本公开上下文的包含对CD19具有特异性的抗体或抗体片段的示例性药物组合物公开于例如WO2008/022152或WO2018/002031中。

在某些给药方式中，例如静脉内给药时，优选根据患者的体重施用。在其他给药方式中，例如皮下给药，优选以平缓、固定的剂量施用。技术人员知晓一种给药方式中的哪个剂量等同于另一种给药方式中的另一种剂量。特定药物的药效学通常在合理决定以所需的方式(from)和所需的有效剂量施用药物时被考虑在内。

根据本公开施用的抗体以治疗有效量施用于患者。“治疗有效量”是指足以治愈、减缓或部分阻止给定疾病或病症即NHL及其并发症的临床表现的量。在某些实施方式中，本公开的CD19抗体以9mg/kg施用。在替代实施方式中，本公开的CD19抗体以12mg/kg施用。在另外的其他实施方式中，本公开的CD19抗体以15mg/kg或更多进行施用。

本公开的抗体可以在不同的时间点施用并且治疗周期可以具有不同的长度。抗体可以每天、每隔一天、每周三次、每周一次或每两周一次施用。抗体还可以施用至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少十一周或至少十二周。在本公开的某些实施方式中，抗体至少每周一次施用至少八周。

阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽

CD47是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，具有单个Ig-样结构域和五个膜跨度区，可作为SIRPoc的细胞配体起作用，通过SIRPoc的NH2-末端V-样结构域进行介导的结合。SIRPoc主要在髓样细胞包括巨噬细胞、粒细胞、髓样树突状细胞(DC)、肥大细胞及其前体(包括造血干细胞)上表达。SIRPoc上介导CD47结合的结构决定因素通过Lee等人(2007)J.Immunol.179:7741-7750；Hatherley等人(2008)Mol Cell.31(2):266-77；Hatherley等人(2007)J.B.C.282:14567-75讨论；并且SIRPoc cis二聚化在CD47结合中的作用通过Lee等人(2010)J.B.C.285:37953-63讨论。与CD47在抑制正常细胞的吞噬作用的作用相符，有证据表明，CD47在造血干细胞(HSC)和祖细胞上仅在这些细胞迁移阶段之前和期间短暂上调，并且CD47在这些细胞上的水平决定了它们在体内被吞食的可能性。

阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是指任何减少CD47与SIRPα结合的多肽。合适的SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂的非限制性实例包括抗-SIRPα抗体或抗体片段、抗-CD47抗体或抗体片段或者多肽SIRPα试剂。在一些实施方式中，合适的SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂(例如抗-CD47抗体、抗-SIRPα抗体等)特异性地结合CD47或SIRPα以减少CD47与SIRPα的结合。在一些实施方式中，合适的SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂(例如，抗-SIRPα抗体、可溶性CD47多肽等)特异性地结合SIRPα以减少CD47与SIRPα的结合。结合SIRPα的合适的SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂不激活SIRPα(例如，在表达SIRPα的吞噬细胞中)。合适的SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂的功效可以通过在示例性检定中检定试剂来评估，其中在候选药剂存在或不存在的情况下孵育靶细胞。与不存在试剂时的吞噬作用相比，用于本发明方法的SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂(例如抗-CD47抗体、抗-SIRPα抗体、多肽SIRPα试剂等)将使吞噬作用上调至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少120％、至少140％、至少160％、至少180％或至少200％)。类似地，与不存在候选药剂的情况下观察到的磷酸化相比，SIRPα的酪氨酸磷酸化水平的体外测定将显示磷酸化降低至少5％(例如，至少10％、至少15％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％)。

在一些实施方式中，抗-CD47药剂在结合后不激活CD47。

一些病原体(例如，痘病毒、粘液瘤病毒、鹿痘病毒、猪痘病毒、山羊痘病毒、绵羊痘病毒等)表达充当毒力因子的CD47-类似物(即CD47模拟物)(例如，M128L蛋白)以能够感染(Cameron等人,Virology.2005Jun 20；337(l):55-67)，一些病原体在宿主细胞中诱导内源性CD47的表达。因此，被表达CD47-类似物的病原体感染的细胞可以表达单独的病原体-提供的CD47类似物或与内源性CD47结合的病原体-提供的CD47类似物。这种机制允许病原体增加受感染细胞中的CD47表达(经由CD47类似物的表达)，同时增加或不增加内源性CD47的水平。在一些实施方式中，多肽SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂(例如，抗-CD47抗体、SIRPα试剂、SIRPα抗体、可溶性CD47多肽等)可以减少CD47类似物(即，CD47模拟物)与SIRPα的结合。在一些情况下，多肽SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂(例如SIRPα试剂、抗-CD47抗体等)可以结合CD47类似物(即CD47模拟物)以减少CD47类似物与SIRPα的结合。在一些情况下，合适的SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂(例如，抗-SIRPα抗体、可溶性CD47多肽等)可以与SIRPα结合。结合SIRPα的合适的SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂不激活SIRPα(例如，在表达SIRPα的吞噬细胞中)。当病原体是提供CD47类似物的病原体时，抗-CD47药剂可用于本文提供的任何方法。换言之，本文使用的术语“CD47”包括CD47以及多肽CD47类似物(即CD47模拟物)。

在一些实施方式中，主题SIRPα-CD47先天免疫检查点抑制剂是特异性地结合SIRPα的抗体(即，抗-SIRPα抗体)并减少一个细胞上的CD47和另一个细胞上的SIRPα之间的相互作用。合适的抗-SIRPα抗体可以结合SIRPα而不通过SIRPα激活或刺激信号传导，因为SIRPα的激活将抑制吞噬作用。相反，合适的抗-SIRPα抗体促进受损细胞超过正常细胞的优先吞噬作用。那些相对于其他细胞表达更高水平CD47的细胞将优先被吞噬。因此，合适的抗-SIRPα抗体特异性地结合SIRPα(不激活/刺激足够的信号传导应答来抑制吞噬作用)并阻断SIRPα和CD47之间的相互作用。合适的抗-SIRPα抗体包括此类抗体的全人、人源化或嵌合形式。人源化抗体由于其低抗原性而特别适用于人体体内应用。类似地，犬源化、猫源化等抗体分别特别适用于狗、猫和其他物种。感兴趣的抗体包括人源化抗体，或犬源化、猫源化、马源化、牛源化、猪源化等抗体及其变体。

在一些实施方式中，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的主题多肽是多肽SIRPα试剂。在一些实施方式中，多肽SIRPα试剂减少一个细胞上的CD47和另一个细胞上的SIRPα之间的相互作用。本文使用的“多肽SIRPα试剂”包含足以以可识别的亲和力结合CD47的SIRPα部分，其通常位于信号序列和跨膜结构域之间，或其保留结合活性的片段。合适的SIRPα试剂减少(例如，阻断、阻止等)天然蛋白质SIRPα和CD47之间的相互作用。SIRPα试剂通常将包含至少一个SIRPα结构域。在一些实施方式中，SIRPα试剂是融合蛋白，例如，与第二多肽框内融合。在一些实施方式中，第二多肽能够增加融合蛋白的大小，例如，使得融合蛋白不会从循环中快速清除。在一些实施方式中，第二多肽是免疫球蛋白Fc区的一部分或全部。Fc区通过提供“吃我”信号来帮助吞噬作用，这增强了对高亲和力SIRPα试剂提供的“不要吃我”信号的阻断。在其他实施方式中，第二多肽是与Fc基本上相似的任何合适的多肽，例如，提供增加的大小、多聚化结构域和/或与Ig分子的另外的结合或相互作用。在一些实施方式中，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是SIRPαFc-融合蛋白。

如本文所用，“抗-CD47抗体”指减少CD47与CD47配体例如SIRPα的结合的任何抗体或抗体片段。在一些实施方式中，合适的抗-CD47抗体在结合后不激活CD47。合适抗体的非限制性实例包括例如克隆B6H12、5F9、8B6和C3(例如，如国际专利公布WO 2011/143624中所述，具体并入本文以供参考)。合适的抗-CD47抗体包括全人、人源化或嵌合形式的抗体。人源化抗体由于其低抗原性而特别适用于人体体内应用。类似地，犬源化、猫源化等抗体分别特别适用于狗、猫和其他物种。感兴趣的抗体包括人源化抗体，或犬源化、猫源化、马源化、牛源化、猪源化等抗体及其变体。

可以将抗-CD47抗体与药学上可接受的赋形剂一起配制在药物组合物中。抗-CD47抗体可以静脉内施用。

在一些方面，抗-CD47抗体与B6H12、5F9、8B6或C3竞争结合CD47。在一些方面，抗-CD47与B6H12、5F9、8B6或C3结合相同的CD47表位。在一些方面，抗-CD47抗体与B6H12竞争结合CD47。在一些方面，抗-CD47与B6H12结合相同的CD47表位。

表2包含B6H12抗体重链和轻链的序列，并指出B6H12抗体的CDR。

在一些方面，抗-CD47抗体与B6H12结合相同的CD47表位，其中所述B6H12抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列GYGMS(SEQ ID NO:14)的HCDR1区、包含序列TITSGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:15)的HCDR2区和包含序列SLAGNAMDY(SEQ ID NO:16)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RASQTISD(SEQ ID NO:17)的LCDR1区、包含序列FASQSIS(SEQ ID NO:18)的LCDR2区和包含序列QNGHGFPRT(SEQ IDNO:19)的LCDR3区。在一方面，所述B6H12抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

该轻链可变区为

在一些方面，抗-CD47抗体与B6H12竞争结合CD47，其中所述B6H12抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列GYGMS(SEQ ID NO:14)的HCDR1区、包含序列TITSGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:15)的HCDR2区和包含序列SLAGNAMDY(SEQ ID NO:16)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RASQTISD(SEQ ID NO:17)的LCDR1区、包含序列FASQSIS(SEQ ID NO:18)的LCDR2区和包含序列QNGHGFPRT(SEQ ID NO:19)的LCDR3区。在一方面，所述B6H12抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

该轻链可变区为

在一些方面，抗-CD47抗体与5F9竞争结合CD47。在一些方面，抗-CD47与5F9结合相同的CD47表位。在一些方面，抗-CD47抗体包含IgG4 Fc。在一些方面，抗-CD47抗体包含5F9或由其组成。

在一些实施方式中，本文所述的方法包括施用抗-CD47抗体5F9。在一些实施方式中，本文所述的方法包括施用序列(轻链、重链和/或CDR)与5F9的序列具有至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的抗-CD47抗体。表3包含5F9抗体及其变体的序列。

在一些方面，抗-CD47抗体与以下抗体或抗体片段结合相同的CD47表位，该抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列NYNMH(SEQ ID NO:22)的HCDR1区、包含序列TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ ID NO:23)的HCDR2区和包含序列GGYRAMDY(SEQ ID NO:24)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQID NO:25)的LCDR1区、包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:26)的LCDR2区和包含序列FQGSHVPYT(SEQ ID NO:27)的LCDR3区。在一方面，所述抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:30和SEQ ID NO:32的重链可变区和选自SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:33的轻链可变区。在一方面，所述抗-CD47抗体或其片段包含SEQ ID NO:30的重链可变区和SEQ ID NO:31的轻链可变区。在另一方面，所述抗-CD47抗体或其片段包含SEQ ID NO:34的完整重链和SEQ ID NO:35的完整轻链。

在一些方面，抗-CD47抗体与以下抗体或抗体片段竞争结合CD47，该抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列NYNMH(SEQ ID NO:22)的HCDR1区、包含序列TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ ID NO:23)的HCDR2区和包含序列GGYRAMDY(SEQ ID NO:24)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:25)的LCDR1区、包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:26)的LCDR2区和包含序列FQGSHVPYT(SEQ IDNO:27)的LCDR3区。在一方面，所述抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32的重链可变区和选自SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:33的轻链可变区。

在一些方面，抗-CD47抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列NYNMH(SEQ ID NO:22)的HCDR1区、包含序列TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ IDNO:23)的HCDR2区和包含序列GGYRAMDY(SEQ ID NO:24)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:25)的LCDR1区、包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:26)的LCDR2区和包含序列FQGSHVPYT(SEQ ID NO:27)的LCDR3区。在一方面，所述抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ IDNO:32的重链可变区和选自SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31和SEQ IDNO:33的轻链可变区。在一方面，该抗-CD47抗体或其片段包含SEQIDNO:30的重链可变区和SEQ ID NO:31的轻链可变区。在另一方面，所述抗-CD47抗体或其片段包含SEQ ID NO:34的完整重链和SEQ IDNO:35的完整轻链。

在一些方面，抗-CD47抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列NYNMH(SEQ ID NO:22)的HCDR1区、包含序列TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ IDNO:23)的HCDR2区和包含序列GGYRAMDY(SEQ ID NO:24)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:25)的LCDR1区、包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:26)的LCDR2区和包含序列FQGSHVPYT(SEQ ID NO:27)的LCDR3区。

在一方面，所述抗-CD47抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

该轻链可变区为

该轻链可变区为

该轻链可变区为

在一方面，所述抗-CD47抗体或其片段包含重链和轻链，该重链为

该轻链为

在一些实施方式中，合适的抗-CD47抗体在结合后不激活CD47。合适抗体的非限制性实例包括克隆B6H12、5F9、8B6和C3(例如，如国际专利公布WO2011/143624中所述，具体并入本文以供参考)。

在一些实施方式中，抗-CD47抗体包含人IgG Fc区，例如IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgG4恒定区。在一个实施方式中，IgG Fc区是IgG4恒定区。IgG4铰链可通过氨基酸取代S241P而稳定(参见Angal等人(1993)Mol.Immunol.30(1):105-108，具体并入本文以供参考)。

治疗方法

本文公开的是一种治疗患有癌症(例如，鉴定为CD19+的癌症)的人受试者或减小人受试者中癌症大小的方法，其包括：

(a)向受试者施用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽；和

(b)向受试者施用抗-CD19抗体。

(a)以大于或等于每kg体重2mg抗体的剂量向受试者施用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽；和

(b)向受试者施用抗-CD19抗体。

在一个实施方式中，本公开提供一种治疗患有癌症(例如，鉴定为CD19+的癌症)的人受试者或减小人受试者中癌症大小的方法，其包括：

(a)向受试者施用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽；和

(b)向受试者施用抗-CD19抗体，

其中癌症是血液癌症。在一些方面，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性成淋巴细胞白血病(ALL)。在一些其他方面，NHL选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。

在一些方面，癌症是CD19+癌症。在一些方面，CD19+癌症是血液癌症。在一些方面，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。在某些方面，NHL是惰性淋巴瘤。在一些方面，惰性淋巴瘤是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些方面，惰性淋巴瘤是边缘区淋巴瘤。在一些方面，NHL是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些方面，CD19+癌症是DLBCL、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性白血病、特发性巨球蛋白血症/淋巴浆细胞性淋巴瘤、原发性纵隔B-细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、未分类的B-细胞淋巴瘤、B-细胞急性成淋巴细胞白血病或移植后淋巴组织增生性疾病(PTLD)，任选地，其中CD19+癌症基于组织病理学、流式细胞术、分子分类、一种或多种等效检定或其组合进行分类。在一些方面，CD19+癌症是双打击淋巴瘤。在一些方面，CD19+癌症是myc-重排淋巴瘤。

在一些方面，受试者对至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或多于10种先前的癌症疗法线是复发的或难治的。在一些方面，受试者对利妥昔单抗是难治的。在一些方面，利妥昔单抗难治的状态是对任何先前的含利妥昔单抗的方案没有反应或在此期间没有进展，或在最后一次利妥昔单抗施用6个月没有进展。

(a)向受试者施用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽；和

(b)向受试者施用抗-CD19抗体，

其中，所述抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以单独的方式施用。另一方面，所述抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以同时的方式施用。

在另一个实施方式中，本公开提供一种治疗患有癌症(例如，鉴定为CD19+的癌症)的人受试者或减小人受试者中癌症大小的方法，其包括：

(a)向受试者施用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽；和

(b)向受试者施用抗-CD19抗体，

其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段，其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、包含序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区和包含序列GTYYYGTRVFDY(SEQ IDNO:3)的HCDR3区，所述轻链可变区包含：包含序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、包含序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和包含序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区。在一方面，所述抗-CD19抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

该轻链可变区为

在另一方面，所述抗-CD19抗体包含重链，该重链为

在另一方面，所述抗-CD19抗体或其抗体片段还包含轻链，该轻链为

(a)向受试者施用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽；和

(b)向受试者施用抗-CD19抗体，其中所述阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是特异性地结合人CD47或人SIRPα的抗体或抗体片段。在另一方面，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是多肽SIRPα试剂。在另一方面，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是SIRPαFc融合蛋白。

在另一个实施方式中，本公开提供治疗患有癌症(例如，鉴定为CD19+的癌症)的人受试者或减小人受试者中癌症大小的方法，其包括：

(a)向受试者施用抗-CD47抗体；和

(b)向受试者施用抗-CD19抗体。

表2包含B6H12抗体重链和轻链的序列，并指出B6H12抗体的CDR。

该轻链可变区为

该轻链可变区为

在一些方面，抗-CD47抗体与以下抗体或抗体片段结合相同的CD47表位，该抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列NYNMH(SEQ ID NO:22)的HCDR1区、包含序列TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ ID NO:23)的HCDR2区和包含序列GGYRAMDY(SEQ ID NO:24)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQID NO:25)的LCDR1区、包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:26)的LCDR2区和包含序列FQGSHVPYT(SEQ ID NO:27)的LCDR3区。在一方面，所述抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:30和SEQ ID NO:32的重链可变区和选自SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:33的轻链可变区。

在一些方面，抗-CD47抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列NYNMH(SEQ ID NO:22)的HCDR1区、包含序列TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ IDNO:23)的HCDR2区和包含序列GGYRAMDY(SEQ ID NO:24)的HCDR3区，该轻链可变区包含：包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:25)的LCDR1区、包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:26)的LCDR2区和包含序列FQGSHVPYT(SEQ ID NO:27)的LCDR3区。在一方面，所述抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ IDNO:32的重链可变区和选自SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31和SEQ IDNO:33的轻链可变区。

在一方面，该抗-CD47抗体或其片段包含SEQ ID NO:30的重链可变区和SEQ IDNO:31的轻链可变区。在另一方面，所述抗-CD47抗体或其片段包含SEQ ID NO:34的完整重链和SEQ ID NO:35的完整轻链。

该轻链可变区为

该轻链可变区为

该轻链可变区为

在一方面，所述抗-CD47抗体或其片段包含重链和轻链，

该重链为

该轻链为

提供方法用于以治疗有效剂量的对CD19具有特异性的抗体或抗体片段和阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽治疗受试者。

治疗有效剂量的合适给药可以限定单次剂量给药，或者可以限定每天、每半周、每周、每两周一次、每月一次、每年一次等剂量给药。在一些情况下，治疗有效剂量作为递增浓度的两个或更多个剂量(即增加剂量)施用，其中(i)所有剂量都是治疗剂量，或其中(ii)亚治疗剂量(或两个或更多个亚治疗剂量)是初始给予并且治疗剂量通过所述递增达到。

对CD19具有特异性的抗体或抗体片段或阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的初始剂量可在输注后立即导致血凝反应一段时间。不受理论的束缚，据信多价CD47结合药剂的初始剂量可引起与该药剂结合的RBC的交联。在本发明的某些实施方式中，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以初始剂量以及任选地后续剂量输注给患者，持续一段时间和/或以减少血液微环境的可能性的浓度输注给患者，其中RBC和药剂的局部浓度高。

在一些实施方式中，初始剂量的CD47结合药剂在至少约2小时、至少约2.5小时、至少约3小时、至少约3.5小时、至少约4小时、至少约4.5小时、至少约5小时、至少约6小时或更长的一段时间输注。在一些实施方式中，初始剂量在约2.5小时至约6小时；例如约3小时至约4小时的一段时间输注。在一些这样的实施方式中，输注物中药剂的剂量为约0.05mg/ml至约0.5mg/ml；例如约0.1mg/ml至约0.25mg/ml。

剂量和频率可取决于抗-CD47抗体和/或其他药剂(例如抗-CD19抗体)在患者中的半衰期而变化。本领域技术人员将理解，将针对活性药剂的分子量调整此类指南，例如在抗体片段的使用中，在抗体偶联物的使用中，在SIRPα试剂的使用中，在可溶性CD47肽的使用中等。对于局部施用，例如鼻内、吸入等，或对于全身施用，例如i.m、i.p.、i.v.、s.c.等，剂量也可以变化。

在本发明的某些实施方式中，抗-CD47抗体以初始剂量以及任选地后续剂量输注给患者，持续一段时间和/或以减少血液微环境的可能性的浓度输注给患者，其中RBC和药剂的局部浓度高。在本发明的一些实施方式中，初始剂量的抗-CD47抗体在至少约2小时、至少约2.5小时、至少约3小时、至少约3.5小时、至少约4小时、至少约4.5小时、至少约5小时、至少约6小时或更长的一段时间输注。在一些实施方式中，初始剂量在约2.5小时至约6小时；例如约3小时至约4小时的一段时间输注。在一些这样的实施方式中，输注物中药剂的剂量为约0.05mg/ml至约0.5mg/ml；例如约0.1mg/ml至约0.25mg/ml。

给药方法

一种或多种阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以及对CD19具有特异性的抗体或抗体片段可以以任何顺序或同时施用于受试者。如果同时，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以及对CD19具有特异性的抗体或抗体片段可以以单一、统一的形式提供，例如静脉内或皮下注射，或以多种形式提供，例如，多次静脉内或皮下输注、皮下注射。阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以及对CD19具有特异性的抗体或抗体片段可以一起包装，也可以分开包装，可以在单个包装中，也可以在多个包装中。一种或所有阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以及对CD19具有特异性的抗体或抗体片段可以以多剂量施用。如果不同时，多次施用之间的时间间隔可以变化至差不多约一周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月或约一年。本公开的阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽和/或对CD19具有特异性的抗体或抗体片段，以及包含它们的药物组合物可以包装成试剂盒。试剂盒可包括关于使用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以及对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及包含它们的组合物的说明(例如，书面说明)。

在一些情况下，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以及对CD19具有特异性的抗体或抗体片段，其中施用治疗癌症。在一些实施方式中，施用治疗有效量的阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以及对CD19具有特异性的抗体或抗体片段至少约10秒、30秒、1分钟、10分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、8小时、12小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或1年。

本文所述的方法包括施用治疗有效剂量的组合物，即治疗有效剂量的阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以及对CD19具有特异性的抗体或抗体片段。如上所述，将组合物以足以大幅消融靶细胞的量施用于受试者。取决于患者需要和耐受的剂量和频率，可以单次或多次施用组合物。用于治疗的特定剂量将取决于哺乳动物的医学病情和病史，以及其他因素，例如年龄、体重、性别、给药途径、效率等。

实施方式

本公开提供一种药物组合，其包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中癌症是血液癌症。在一个实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性淋巴细胞白血病(ALL)。在另一个实施方式中，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。在另一个实施方式中，非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。

在某些实施方式中，本公开提供一种药物组合，其包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中所述对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以9mg/kg施用。在替代实施方式中，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以12mg/kg施用。在其他实施方式中以15mg/kg或更多施用。

在实施方式中，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段具有细胞毒活性。在实施方式中，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段包含具有ADCC诱导活性的恒定区。在实施方式中，对CD19具有特异性的抗体诱导ADCC。

在某些实施方式中，本公开提供一种药物组合，其包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中该组合的组分、对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽单独地施用。在一个实施方式中，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽在施用对CD19具有特异性的抗体或抗体片段之前施用。在一个实施方式中，对CD19具有特异性的抗体或抗体片段在施用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽之前施用。在实施方式中，该组合的组分在两种组分(药物)在患者体内同时具有活性的时间施用。在实施方式中，该组合的组分一起、同时、单独或随后物理地或及时地施用。在实施方式中，组合的组分同时施用。

在某些实施方式中，本公开提供一种药物组合，其包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中抗-CD19抗体每周一次、每两周一次或每月一次施用。

在某些实施方式中，本公开提供一种药物组合，其包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中所述对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以12mg/kg的浓度施用。

在某些实施方式中，本公开提供一种药物组合，其包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中所述对CD19具有特异性的抗体或抗体片段在第1天第一次施用后每周一次、每两周一次或每月一次施用，并且其中阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽在第8天第一次施用。在另一实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段在第1天第一次施用后，前3个月每周一次施用，至少接下来的3个月每两周一次施用。

在一方面，本公开提供一种用于治疗血液癌症患者的抗-CD19抗体或其抗体片段，其中所述血液癌症患者患有非霍奇金氏淋巴瘤并且其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合施用。

在一方面，本公开提供一种用于治疗血液癌症患者的抗-CD19抗体或其抗体片段，其中所述血液癌症患者患有非霍奇金氏淋巴瘤并且其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合施用。在一个实施方式中，血液癌症患者患有非霍奇金氏淋巴瘤，其中非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。

在一个实施方式中，与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合的用于治疗血液癌症患者的抗-CD19抗体或其抗体片段包含：包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、包含序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区、包含序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区、包含序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、包含序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和包含序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区。

在另一实施方式中，与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合的用于治疗血液癌症患者的抗-CD19抗体或其抗体片段包含可变重链和可变轻链，该可变重链的序列为

该可变轻链的序列为

在本公开的另一个实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段是人、人源化或嵌合抗体或抗体片段。在本公开的另一个实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段是IgG同种型。在另一个实施方式中，抗体或抗体片段是IgG1、IgG2或IgG1/IgG2嵌合的。在本公开的另一个实施方式中，抗-CD19抗体的同种型被工程化以增强抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。在另一个实施方式中，抗-CD19抗体的重链恒定区包含氨基酸239D和332E，其中Fc编号如在Kabat中根据EU索引。在另一个实施方式中，抗体是IgG1、IgG2或IgG1/IgG2，并且抗-CD19抗体的嵌合重链恒定区包含氨基酸239D和332E，其中Fc编号如在Kabat中根据EU索引。

在另一实施方式中，与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合的用于治疗血液癌症患者的抗-CD19抗体或其抗体片段包含重链和轻链，该重链具有序列

该轻链具有序列

在一个实施方式中，与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合的用于治疗血液癌症患者的抗-CD19抗体或其抗体片段包含可变重链和可变轻链，该可变重链的序列为

该可变轻链的序列为

或该可变重链和可变轻链与SEQ ID NO:7的可变重链和与SEQ ID NO:8的可变轻链具有至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

该可变轻链的序列为

或该可变重链和可变轻链与SEQ ID NO:7的可变重链和与SEQ ID NO:8的可变轻链具有至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性，其中抗-CD19抗体包含：包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、包含序列NPYNDG(SEQID NO:2)的HCDR2区、包含序列GTYYYGTRVFDY(SEQ IDNO:3)的HCDR3区、包含序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、包含序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和包含序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区。在另一个实施方式中，抗-CD19抗体的重链区包含氨基酸239D和332E，其中Fc编号如在Kabat中根据EU索引。

该轻链具有序列

或该重链和轻链与SEQ ID NO:7的重链和与SEQ ID NO:8的轻链具有至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

该轻链具有序列

或该重链和轻链与SEQ ID NO:7的重链和与SEQ ID NO:8的轻链具有至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性，其中抗-CD19抗体包含：包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、包含序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区、包含序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区、包含序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ IDNO:4)的LCDR1区、包含序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和包含序列MQHLEYPIT(SEQID NO:6)的LCDR3区。在另一个实施方式中，抗-CD19抗体的重链区包含氨基酸239D和332E，其中Fc编号如在Kabat中根据EU索引。

一个实施方式中，本公开提供一种抗-CD19抗体或其抗体片段，其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段以12mg/kg的浓度施用。

在另一实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段每周一次、每两周一次或每月一次施用。在另一实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段在前3个月每周一次施用并且在至少接下来的3个月每两周一次施用。在另一实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段在前3个月每周一次施用。在另一实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段在前3个月每周一次施用并且在至少接下来的3个月每两周一次施用。在另一个实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段在前3个月每周一次施用，在接下来的3个月每两周一次施用，之后每月一次施用。在又一个实施方式中，抗-CD19抗体或其抗体片段在前3个月每周一次施用，在接下来的3个月每两周一次施用，之后每月一次施用。

本公开提供用于治疗癌症的对CD19具有特异性的抗体或抗体片段，其中所述对CD19具有特异性的抗体或抗体片段与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合施用。

阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽(例如抗-CD47抗体或抗体片段)的治疗有效剂量可取决于所使用的具体药剂，但通常为约2mg/kg体重或更多、约4mg/kg体重或更多、约6mg/kg体重或更多、约8mg/kg体重或更多、约10mg/kg体重或更多、约12mg/kg体重或更多、约14mg/kg体重或更多、约16mg/kg体重或更多、约18mg/kg体重或更多、约20mg/kg体重或更多、约25mg/kg或更多、约30mg/kg或更多、约35mg/kg或更多、约40mg/kg或更多、约45mg/kg或更多、约50mg/kg或更多、或约55mg/kg或更多、或约60mg/kg或更多、或约65mg/kg或更多、或约70mg/kg或更多。

在一些实施方式中，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的治疗有效剂量是2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、45、60或70mg/kg。在一些实施方式中，阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的治疗有效剂量是20至60mg/kg。

达到和/或维持所施用组合物的特定血清水平所需的剂量与剂量之间的时间量成正比，并且与施用的剂量次数成反比。因此，随着施用频率的增加，所需剂量减少。剂量策略的优化将容易被本领域普通技术人员理解和实践。示例性治疗方案限定每两周一次或每月一次或每3至6个月一次施用。本发明的治疗实体通常在多个场合施用。单剂量之间的间隔可以是每周一次、每月一次或每年一次。间隔也可以是不规则的，如测量患者中治疗实体的血液水平所示。或者，本发明的治疗实体可以作为持续的释放制剂施用，在这种情况下使用较少的施用频率。剂量和频率取决于多肽在患者体内的半衰期而变化。

维持剂量是旨在成为治疗有效剂量的剂量。例如，在确定治疗有效剂量的实验中，可以将多个不同的维持剂量施用于不同的受试者。因此，一些维持剂量可能是治疗有效剂量，而另一些可能是亚治疗剂量。

在其他实施方式中，本发明的方法包括治疗、减少或预防癌症包括癌、血液癌症、黑素瘤、肉瘤、神经胶质瘤等的肿瘤生长、肿瘤转移或肿瘤侵袭。为了预防应用，将药物组合物或药物施用于易感或否则有患病风险的患者，其量足以消除或减少风险、减轻严重程度或延迟疾病发作，包括疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症和疾病发展过程中出现的中间病理表型。

本文描述的组合药剂的毒性可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药物程序来测定，例如，通过测定LD50(对50％群体的致死剂量)或LD100(对100％群体的致死剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数。从这些细胞培养试验和动物研究中获得的数据可用于制定对人体使用无毒的剂量范围。本文所述蛋白质的剂量优选地处于循环浓度范围内，该范围包括具有很少或没有毒性的有效剂量。剂量可在此范围内变化，这取决于所用的剂型和所用的给药途径。确切的制剂、给药途径和剂量可由个体医师根据患者的病情来选择。

本发明的组合药剂用于治疗癌症的有效剂量取决于许多不同的因素，包括给药方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人还是动物、施用的其他药物，以及治疗是预防性的还是治疗性的。通常，患者是人，但也可以治疗非人类哺乳动物，例如伴侣动物比如犬、猫、马等，实验室哺乳动物比如兔、小鼠、大鼠等，等等。可以滴定治疗剂量以优化安全性和有效性。

本公开提供一种用于治疗癌症的对CD19具有特异性的抗体或抗体片段，其中所述对CD19具有特异性的抗体或抗体片段与阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合施用，其中施用步骤是通过对CD19具有特异性的抗体以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽同时、依次或逆序组合施用进行。

在另一个实施方式中，本公开提供包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的药物组合在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在另一个实施方式中，本公开提供包括对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的药物组合在用于治疗癌症的药物的制备中的用途。

在另一个实施方式中，本公开提供一种用于治疗癌症的方法，包括向受试者组合施用对CD19具有特异性的抗体以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的步骤。在另一个实施方式中，本公开提供一种用于治疗癌症的方法，包括向受试者组合施用对CD19具有特异性的抗体以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的步骤，其中施用步骤是通过对CD19具有特异性的抗体以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽同时、依次或逆序组合施用进行。

组合

本公开提供一种抗-CD19抗体或其抗体片段，其与对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合，用于治疗血液癌症，其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段和对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽与一种或多种药剂组合施用。在本公开的一个实施方式中，所述抗-CD19抗体或其抗体片段和对CD19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽与药剂组合施用。在本公开的另一个实施方式中，所述抗-CD19抗体或其抗体片段和所述阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽与一种或多种另外的药剂组合施用。在一方面，所述药剂是另外的药剂。在本公开的一个实施方式中，所述药剂是生物制剂或化学治疗剂。在本公开的另一个实施方式中，所述药剂是治疗性抗体或抗体片段、氮芥、嘌呤类似物、沙利度胺类似物、磷酸肌醇3-激酶抑制剂、BCL-2抑制剂或布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)抑制剂。在另一个实施方式中，所述药剂是利妥昔单抗、R-CHOP、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、乌莫司汀、异环磷酰胺、美法仑、苯达莫司汀、巯基嘌呤、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤、氟达拉滨、沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、艾德利斯(idelalisib)、杜韦利西布(duvelisib)、库潘尼西(copanlisib)、依鲁替尼或维奈托克。

在另一个实施方式中，本公开提供抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，用于治疗血液癌症，其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽SIRPα-CD47先天免疫检查点与利妥昔单抗、R-CHOP、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、乌莫司汀、异环磷酰胺、美法仑、苯达莫司汀、巯基嘌呤、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤、氟达拉滨、沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、艾德利斯、杜韦利西布、库潘尼西、依鲁替尼或维奈托克组合施用。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中所述药物组合具有协同效果。

在一些实施方式中，所述协同效果是改善的总存活期(OS)、延长的无进展存活期(PFS)、增加的应答率(RR)或增加或增强的癌细胞清除率。

在一些实施方式中，所述协同效果是增加癌细胞死亡、减少癌细胞生长或增加对非霍奇金氏淋巴瘤细胞的杀伤。在一些其他实施方式中，此类非霍奇金氏淋巴瘤细胞是源自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DBLCL)、伯基特氏淋巴瘤或套细胞淋巴瘤(MCL)的细胞系。在一些其他实施方式中，此类非霍奇金氏淋巴瘤细胞是Raji、RCK8、Toledo、U2932、CA46、JVM-2、Ramos、Daudi或SU-DHL-6细胞。

在一些实施方式中，所述协同效果是在淋巴瘤小鼠模型中增加存活、减小肿瘤体积或减少肿瘤生长。在一些其他实施方式中，此类淋巴瘤小鼠模型是使用源自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DBLCL)、伯基特氏淋巴瘤或套细胞淋巴瘤(MCL)的细胞的异种移植模型。在一些其他实施方式中，此类淋巴瘤小鼠模型是使用Raji、RCK8、Toledo、U2932、CA46、JVM-2、Ramos、Daudi或SU-DHL-6细胞的异种移植模型。

在另一个实施方式中，用于治疗癌症的包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的药物组合是协同组合。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及抗-CD47抗体或其抗体片段，该组合用于治疗血液癌症，其中抗-CD19抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

该轻链可变区为

该轻链可变区为

其中所述药物组合具有协同效果。在一个实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性淋巴细胞白血病(ALL)。在另一个实施方式中，包含所述抗-CD19抗体或其抗体片段以及所述抗-CD47抗体或其抗体片段的所述药物组合是协同组合。在另一个实施方式中，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。在另一个实施方式中，非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在另一个实施方式中，血液癌症是弥漫性大B细胞淋巴瘤。

在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及抗-CD47抗体或其抗体片段，该组合用于治疗血液癌症，其中抗-CD19抗体或其抗体片段包含重链区和轻链区，该重链区为

该轻链区为

并且其中抗-CD47抗体或其片段包含重链和轻链，该重链为

该轻链为

并且其中所述药物组合具有协同效果。在另一个实施方式中，包括所述抗-CD19抗体或其抗体片段以及所述抗-CD47抗体或其抗体片段的所述药物组合是协同组合。在一个实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性淋巴细胞白血病(ALL)。在另一个实施方式中，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。在另一个实施方式中，非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在另一个实施方式中，血液癌症是弥漫性大B细胞淋巴瘤。

抗体序列

表1：Tafasitamab(MOR208)

表2：B6H12

表3：5F9及变体

实施例

实施例1：Tafasitamab(抗-CD19 mAb)与CD47/SIRPα阻断抗体组合的体外功效

MOR208介导的ADCP活性与CD47/SIRPα阻断组合

通过体外试验，测试MOR208(Tafasitamab)介导的吞噬作用是否可以在CD47/SIRPα阻断后进一步增强。Tafasitamab(抗-CD19 mAb)与抗-CD47(克隆B6H12)功能性抗体组合的功效在抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)试验中测定，其中THP-1单核细胞系或M1和M2巨噬细胞充当效应细胞。为此，对以下癌细胞系进行了表征：三种伯基特淋巴瘤细胞系(Raji、Ramos和Daudi)和一种弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞系(SU-DHL-6)。对这些癌细胞的CD19和CD47抗原表达水平进行了定量(图1)。Raji细胞表达最高水平的CD19，但Ramos、Daudi和Toledo细胞也显示CD19的高表达。SU-DHL-6细胞系是唯一具有低CD19表达的细胞系。可以表明，CD47在所有分析的癌细胞系上均有表达，只有SU-DHL-6具有低表达。

Ramos、Raji、Daudi和SU-DHL-6癌细胞系在ADCP试验中进行了测试，THP-1单核细胞癌细胞用作效应细胞。将癌细胞与THP-1细胞以E:T(效应物：靶标)比1:2接种在一起，并在ADCP检定中与滴定系列的Tafasitamab(与3nM抗-CD47 mAb(克隆B6H12)组合)共孵育(图2至4)。抗-CD47抗体对Tafasitamab介导的ADCP的益处通过基于流式细胞术的吞噬作用读数进行评估，其中效应细胞和靶细胞用两种不同的染料染色(THP-1细胞用CFSE，癌细胞用Cell Trace^TMViolet)。以这种方式获得的双阳性细胞百分比代表吞噬作用的百分比。

此外，Ramos癌细胞系在ADCP检定中进行了测试，其中M1和M2巨噬细胞用作效应细胞。为了生成M1和M2₀巨噬细胞，从健康志愿者的全血中分离出CD14+单核细胞，并用50ng/mL M-CSF培养6天使其成熟为巨噬细胞。通过添加10ng/mL IFN-γ和10ng/mL LPS 48小时使巨噬细胞进一步极化为M1表型或继续用50ng/mL M-CSF处理以维持M2₀表型。通过流式细胞术分析和确认巨噬细胞表型标志物CD80、CD86、CD163和CD206的表达水平。将Ramos细胞与M1或M2₀巨噬细胞以E:T(效应物：靶标)比1:2接种在一起，并与滴定系列的Tafasitamab(与3nM抗-CD47 mAb(克隆B6H12)组合)一起共孵育。在用MOR208和抗-CD47 mAb(克隆B6H12)治疗3小时后，通过流式细胞术分析ADCP(图8)。

结果

ADCP试验显示MOR208介导的吞噬作用在与3nM抗-CD47 mAb(克隆B6H12)组合后可进一步增强(图2至4)。

对于M1-和M2₀-极化巨噬细胞，Tafasitamab和CD47/SIRPα检查点阻断的组合观察到Ramos细胞吞噬作用的增加相当(图8)。在体外将MOR208与CD47/SIRPα检查点阻断组合后，M1-以及M2₀-极化巨噬细胞的ADCP活性增加。总体而言，与对于M1极化巨噬细胞相比，由该组合驱动的吞噬活性增加对于M2₀更明显。

实施例2：Tafasitamab与抗-CD47抗体组合的体内功效

为评估抗-CD47抗体(克隆B6H12)和Tafasitamab的组合效果，在两种皮下(MOR208P015和MOR208P016)和一种弥散性存活肿瘤模型(MOR208P014)中使用Ramos伯基特淋巴瘤细胞进行三项功效研究。

由于Ramos细胞上的人CD47(hCD47)与小鼠巨噬细胞和嗜中性粒细胞上表达的小鼠SIRPα(mSIRPα)之间存在差异结合亲和力(Kwong等人，2014年；Iwamoto等人，2014年)，因此在两种不同的基因小鼠品系中测试功效。在研究MOR208P014和MOR208P015中，使用Balb/c遗传背景(SCID小鼠)，其被描述为与人CD47-SIRPα检查点相互作用非常相似，在研究MOR208P016中测试NOD-SCID遗传品系。NOD-SCID在文献(Chao等人2010a；Liu等人2015；Buatois等人2018；Kauder等人2018)中最广泛地用于测试CD47阻断化合物，据报道其比hCD47与mSIRPα检查点结合亲和力高10倍，可能导致抗肿瘤效果增强(Huang等人2017)。

单一和组合功效的研究读数是肿瘤体积(MOR208P015和MOR208P016)或动物存活率(MOR208P014)。

方法：体内研究——实验大纲和分析

五到八周大的雌性C.B-17SCID(CB17/lcr-Prkdcscid/lcrlcoCrl；在研究MOR208P014；MOR208P015中)、NOD-SCID(NOD.CB17-Prkdc^scid/J；在研究MOR208P016中)购自个人供应商(MOR208P015和MOR208P016：Charles River实验室；MOR208P014：Envigo)。将动物圈养在IVC笼(II型，聚砜笼)中，每笼4-5只，12小时光照/黑暗循环，并在实验前在实验室适应一周。所有动物均接受过滤水和含有裸鼠饮食(安慰剂食物；Sniff，货号：V1244-000)的特殊载体或测试物品。

Ramos细胞在所有体内研究中的细胞培养

Ramos人伯基特淋巴瘤细胞在补充有20％胎牛血清、非必需氨基酸(2mM L-谷氨酰胺)和丙酮酸钠的RPMI1640中以悬浮培养进行培养。连续传代细胞直到建立足够的细胞数用于注射。在将细胞皮下接种到小鼠之前和之后，使用0.25％台盼蓝排除检定对细胞进行计数并评估活力。

MOR208P014–Ramos弥散性存活模型中的功效研究

肿瘤细胞接种和随机化

为了使SCID小鼠获得适当的原位肿瘤细胞，从接种肿瘤细胞前两天开始，每天两次经由腹膜内注射25mg/kg环磷酰胺对动物进行治疗，间隔12小时。在细胞接种当天(第0天)，对小鼠称重，按体重(基于第0天体重测量值)随机分为15组，并在尾静脉中接种1x10⁶个RAMOS细胞(100μL)。

功效参数的处理和评估

细胞接种后五天，抗体治疗开始。在此，将CD47抗体(克隆B6H12；4mg/kg；BioXCell；目录号：BE0019-1；批号：655117M2)通过腹膜内注射施用，每周三次。将Tafasitamab(3mg/kg)每周两次静脉内施用，载体治疗组也每周两次用磷酸盐缓冲盐水进行腹膜内注射。用所述测试物品进行的治疗总共进行三周。

在整个研究过程中，密切监测动物是否显示发病迹象，例如体重减轻、疼痛和痛苦的迹象、外观和行为，这些都是动物终止的明确原因。在Kaplan和Maier图中进一步总结了动物存活率。

对于统计评估，使用对数秩(Mantel-Cox)检验。所有统计分析均使用GraphPadPrism完成。小于0.05的p值被认为是显著的。

MOR208P015–Ramos-SCID皮下肿瘤模型中的功效研究

肿瘤细胞接种和随机化

使用23号1/2针头将5x10⁶个Ramos肿瘤细胞(在Cultrex基底膜中)皮下植入C.B-17SCID小鼠体内。注射体积为每只小鼠0.2mL。肿瘤植入的日期被记录为第0天。一旦生长的肿瘤达到70-150mm³的大小，动物被随机分配到它们各自的治疗组中并开始治疗。

功效参数的处理和评估

在抗体治疗方面，将Tafasitamab(10mg/kg)每周两次施用，抗-CD47(克隆B6H12；4mg/kg；BioXCell；目录号：BE0019-1；批号：655117M2)每周三次施用。载体治疗组每周两次用磷酸盐缓冲盐水注射。所有相应的治疗均通过腹膜内注射进行至多四周。

从第0天开始，每周两次测量肿瘤大小。使用椭球体方程(l x w2)/2＝mm³计算肿瘤体积，其中l和w指每次测量时收集的较大和较小的尺寸，并假设单位密度。最初每天监测体重变化，在治疗的第一天并在最后一次治疗后一天结束。垂死的动物、体重过度减轻(>25％的体重)的动物或总肿瘤负荷为3,000mm³的动物在研究结束前终止。

为了对延迟的肿瘤生长进行统计评估，生成了Kaplan和Meier图，显示了达到3,000mm³肿瘤体积的时间。对数秩Mantel-Cox检验用于评估统计差异。所有统计分析均使用GraphPad Prism完成。小于0.05的p值被认为是显著的。

MOR208P016：NOD-SCID小鼠的Ramos皮下模型

肿瘤细胞接种和随机化

通过使用23号1/2针头将1x10⁷个Ramos肿瘤细胞(在含有50％(v/v)基质胶(参考号356237，Corning)的200μL RPMI1640中)皮下注射到雌性C.B-17SCID小鼠的右侧。一旦肿瘤达到100-200mm³的平均体积立即将动物随机化，并且立即开始用各自的抗体和载体对照治疗。

功效参数的处理和评估

将Tafasitamab(10mg/kg，每周两次)、抗-CD47抗体(克隆B6H12；4mg/kg；每周三次；BioXCell；目录号：BE0019-1；批号：655117M2)和载体(磷酸盐缓冲盐水)腹膜内施用至多四周。

从注射肿瘤细胞之日开始，每周两次测量肿瘤。使用椭球体方程(lx w2)/2＝mm³计算肿瘤体积。最初每天监测体重变化，从治疗的第一天开始到治疗的最后一天结束。垂死的动物、体重过度减轻(>25％的体重)的动物或总肿瘤负荷为2,000mm³的动物在研究结束前终止。

为了对延迟的肿瘤生长进行统计评估，生成了Kaplan和Meier图，显示了达到1500mm³肿瘤体积的时间。对数秩Mantel-Cox检验用于评估统计差异。所有统计分析均使用GraphPad Prism完成。小于0.05的p值被认为是显著的。

体内研究的结果

MOR208和抗-CD47抗体组合在弥散性存活模型(MOR208P014)中的功效

与载体对照相比，MOR208治疗显著提高了中位存活率高达40％(p<0.0001****)。此外，与载体对照相比，在单一疗法中用抗-CD47(克隆B6H12)抗体阻断CD47-SIRPα检查点，显著提高动物存活率高达3倍(p<0.0001****)。15只动物中有11只继续研究，直到生命阶段结束。就MOR208和抗-CD47组合而言，这种趋势更为明显。所有15只动物都存活到研究结束(B6H12对比MOR208和B6H12：p＝0.0348*；MOR208对比MOR208和B6H12：p<0.0001****)。由于组合治疗组中的所有动物仍在研究中，因此无法进行关于这种组合效果的力量的生物统计评估。来自体内研究MOR208P014的数据总结在图5中。

MOR208组合在Ramos-SCID皮下肿瘤(MOR208P015)中的功效

如方法部分所述，通过使用Kaplan-Meier曲线对延迟的肿瘤生长进行评估。与载体对照相比，MOR208单一疗法检测到肿瘤生长有轻微但仍然显著的延迟(载体相比MOR208：p＝0.0331*)。此外，与载体对照相比，抗-CD47 mAb(克隆B6H12)单一疗法显示肿瘤生长显著延迟高达12％(载体相比B6H12：p＝0.0003***)。就MOR208和抗-CD47mAb组合而言，肿瘤生长的延迟甚至更明显。与MOR208单一疗法相比，检测到肿瘤负荷减少20％，与抗-CD47单一疗法相比，肿瘤负荷减少8％。但与抗-CD47 mAb单一疗法对照相比，这种效果并不显著(p＝0.0985)。来自体内研究MOR208P015的数据总结在图6中。

MOR208组合在Ramos-NOD-SCID皮下肿瘤(MOR208P016)中的功效

与研究MOR208P015类似，肿瘤生长的延迟由Kaplan-Meier曲线总结。与载体对照相比，MOR208单一疗法显著延迟肿瘤生长高达11％(载体相比MOR208：p＝0.0095**)。抗-CD47 mAb(克隆B6H12)单一药剂在该模型中的功效非常显著，与载体对照相比，观察到肿瘤生长延迟78％(载体相比B6H12：p<0.0001*****)。然而，与各自的单一疗法对照相比，与MOR208组合时单一疗法的功效增加更多，效果非常显著(MOR208对比MOR208和B6H12 p<0.0001****；B6H12对比MOR208和B6H12：p＝0.0017**)。来自体内研究MOR208P016的所有数据总结在图7中。

实施例3：Tafasitamab与莫洛利单抗(抗-CD47抗体)组合的功效

本研究旨在评估抗-CD19抗体(Tafasitamab)与莫洛利单抗的组合是否可以在体外增加对B-细胞淋巴瘤细胞的吞噬作用。

对来自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DBLCL)、伯基特淋巴瘤或套细胞淋巴瘤(MCL)的六种不同细胞系进行了测试。根据制造商的指示，每个细胞系都用CellTrace CFSE染料进行荧光标记。通过孵育和随后用CD14-结合磁珠纯化，从富含白细胞的全血中分离出人单核细胞。产生的单核细胞在人重组巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)存在的情况下体外培养7-10天，然后在共培养前收获和计数。通过在96孔超低附着细胞培养板的孔中以100ul体积共培养50,000个人巨噬细胞和100,000个人癌细胞，连同所示的终浓度为10ug/ml的莫洛利单抗和/或Tafasitamab治疗，进行吞噬反应。在37℃下将共培养物孵育2小时，然后转移到冰上以停止反应。使用标记的抗-CD11b抗体对巨噬细胞进行染色，并在流式细胞仪上分析反应。吞噬事件被定义为基于FMO对照的CFSE+CD11b+事件。此类双阳性事件对应于已吞食CFSE+肿瘤细胞的巨噬细胞。吞噬作用表示为CFSE阳性巨噬细胞的分数。

在测试的细胞系中，所有六种细胞系均显示单独使用莫洛利单抗(抗-CD47)治疗后吞噬作用增加。类似地，所有六种细胞系均显示单独使用Tafasitamab(抗-CD19)治疗吞噬作用增加。在六种细胞系中，四种(Raji、RCK8、Toledo和U2932)在同时使用莫洛利单抗和Tafasitamab进行治疗时表现出与任一单一治疗相比增强的吞噬作用(图9)。与单独的Tafasitamab相比，六种细胞系中的两种(CA46、JVM-2)未显示明显增强的组合功效(图10)。

总之，这项研究表明，使用莫洛利单抗或Tafasitamab治疗可以增强对B-细胞淋巴瘤的体外吞噬作用；并且对于B-细胞淋巴瘤的一个亚类，两种药物的组合比单独使用任何一种药物更有效。这些结果与莫洛利单抗和Tafasitamab在用于患者以治疗B-细胞淋巴瘤时可以显示组合功效的结论一致。

序列表

<110> 莫佛塞斯公司

<120>包括抗-CD19抗体和阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的抗肿瘤组合疗法

<130> MS312/PCT

<140> EP 20181309.4

<141> 2020-06-22

<150> EP 20210588.8

<151> 2020-11-30

<160> 35

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 1

Ser Tyr Val Met His

1 5

<210> 2

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 2

Asn Pro Tyr Asn Asp Gly

1 5

<210> 3

<211>12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 3

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 4

Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr

1 5 10 15

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 5

Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 6

Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 7

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ser Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211>112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 8

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln His

85 90 95

Leu Glu Tyr Pro Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 9

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 9

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 10

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 11

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

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65 70 75 80

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275 280 285

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<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

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180 185 190

Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser

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Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu

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Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly

275 280 285

Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu

290 295 300

Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg

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Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val

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Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala

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<220>

<221> 来源

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Gly Tyr Gly Met Ser

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 15

Thr Ile Thr Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

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Gly

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 16

Ser Leu Ala Gly Asn Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 17

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 17

Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 18

Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 19

Gln Asn Gly His Gly Phe Pro Arg Thr

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr

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<210> 21

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

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Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Tyr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 22

Asn Tyr Asn Met His

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<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 23

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Asp

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 24

Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr

1 5

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 25

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly

1 5 10 15

<210> 26

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 26

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成肽"

<400> 27

Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr

1 5

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 28

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 29

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

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<210> 30

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 30

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

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Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 31

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

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<210> 32

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

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<210> 33

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 33

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

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Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

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<210> 34

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

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Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

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Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

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Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

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Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

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<210> 35

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列的描述: 合成多肽"

<400> 35

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

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Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

Claims

1.一种药物组合，其包括抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽，所述药物组合用于治疗癌症。

2.根据权利要求1所述的药物组合，其用于治疗癌症，其中所述癌症是血液癌症。

3.根据权利要求2所述的药物组合，其用于治疗血液癌症，其中所述血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性成淋巴细胞白血病(ALL)。

4.根据权利要求3所述的药物组合，其用于治疗NHL，其中所述NHL选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。

5.根据前述权利要求中任一项所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以单独的方式施用。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段以及阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽以同时的方式施用。

7.根据前述权利要求中任一项所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、包含序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区和包含序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区，所述轻链可变区包含：包含序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、包含序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和包含序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区。

8.根据权利要求7所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述抗-CD19抗体或其抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区为

所述轻链可变区为

9.根据权利要求8所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述抗-CD19抗体包含重链，所述重链为

10.根据权利要求9所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述抗-CD19抗体或其抗原片段包含轻链，所述轻链为

11.根据前述权利要求中任一项所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是多肽SIRPα试剂或者与人CD47或人SIRPα特异性地结合的抗体或抗体片段。

12.根据前述权利要求中任一项所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽是抗-CD47抗体或其片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含序列NYNMH(SEQ ID NO:22)的HCDR1区、包含序列TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ ID NO:23)的HCDR2区和包含序列GGYRAMDY(SEQ IDNO:24)的HCDR3区，所述轻链可变区包含：包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:25)的LCDR1区、包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:26)的LCDR2区和包含序列FQGSHVPYT(SEQ ID NO:27)的LCDR3区。

13.根据权利要求12所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述抗-CD47抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区为

所述轻链可变区为

14.根据权利要求13所述的用于根据前述权利要求中任一项所述用途的药物组合，其中所述抗-CD47抗体或其片段包含重链和轻链，所述重链为

所述轻链为

15.一种试剂盒，其用于根据前述权利要求中任一项所述的治疗，所述试剂盒包含根据前述权利要求中任一项所述的抗-CD19抗体或其抗体片段，以及将所述抗-CD19抗体或其抗体片段与根据前述权利要求中任一项所述的阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽组合施用的说明。

16.一种治疗患有癌症的人受试者的方法，其包括：

(a)向所述人受试者施用阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽；和

(b)向所述人受试者施用抗-CD19抗体或其抗体片段。

17.一种减小人受试者中癌症大小的方法，其包括：

(b)向所述人受试者施用抗-CD19抗体或其抗体片段。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述癌症是血液癌症，包括但不限于慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或急性成淋巴细胞白血病(ALL)。