CN115916169A - 使用低分子量疏水改性聚合物用于抑制包膜病毒的方法和组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于抑制包膜病毒的传播的方法和组合物,其需要将含有低分子量疏水改性聚合物的组合物施加到可能含有病毒的可感染或可摄入表面,并且其中所述组合物基本上不含HLB大于约12的表面活性剂。
Description
技术领域
本发明的方法涉及使用低分子量疏水改性聚合物来抑制被称为“包膜”病毒的病毒的传播。其还涉及含有能够抑制所述病毒的传播的所述低分子量疏水改性聚合物的组合物。
背景技术
由于包膜病毒引起的感染导致常见疾病,诸如单纯疱疹、HIV/AIDS、乙型肝炎、流感、水痘、带状疱疹、天花和呼吸道感染。虽然这些疾病的严重程度可从中度困扰到危及生命,但这些感染不利地影响其宿主的生活质量以及我们社会的个人、机构和经济领域。因此,已经作出了大量努力以开发预防病毒感染及其传播的手段。病毒多样性、病毒传播的多种手段(包括:直接接触、体液交换(例如唾液、性传播、母乳喂养)和气溶胶传播(例如咳嗽、打喷嚏等))以及病毒逃避被它们的宿主发现和/或消灭的高度进化的手段,使这些努力复杂化。在发现抗病毒药物并将其商业化于已感染病毒的那些人方面已取得了许多成功。然而,这些治疗常常需要医疗处方,具有不想要的副作用,仅对狭窄范围的病毒类型/菌株起作用,并且/或者具有有限的功效。局部递送的抗病毒治疗还必须是对经治疗的组织非刺激性的,否则有增加感染风险的风险。
因此,具有能够显著降低病毒传播的有效、广谱抗病毒活性的高性价比且温和的药剂将填充对未被满足的抗病毒设备的需求,并且有助于防止病毒感染的扩散,尤其是如果此类药剂的温和特性能够允许和鼓励广泛、频繁的使用,因为与皮肤、眼睛和其它粘膜的优异相容性。
病毒具有高的突变速率和复制速率;这些特性允许响应于外部选择性压力(即药物)而快速进化,常常导致治疗抗性和复发。当抗病毒化合物靶向病毒体上的特定表位时,对抗性的担忧尤其显著。由于高水平的病毒遗传多样性,这种窄特异性通常还限制了对化合物敏感的病毒范围。另选地,其它局部抗病毒治疗,诸如表面活性剂,靶向非特异性病毒区并且在中和各种病毒方面广泛有效,然而,这些常常对人细胞是刺激性和毒性的。刺激组织的治疗可能导致增加的感染速率;损坏细胞膜增加了它们对一些类型的病毒颗粒的渗透率。因此,高度期望一种非刺激性但高效的手段来消灭病毒并显著降低它们的传播可能性。
大多数病毒(例如,HIV和许多动物病毒)在它们处于宿主细胞之间时在它们的生命周期阶段具有病毒包膜作为它们的外层。Robertson等人的(1995年3月)“Recombinationin AIDS viruses.”Journal of Molecular Evolution.40(3):249–59。一些包膜病毒还在包膜与它们的基因组之间具有被称为衣壳的蛋白质层。Id.包膜通常衍生自宿主细胞膜的部分(磷脂和蛋白质),但包括一些病毒糖蛋白。它们可以帮助病毒避开宿主免疫系统。包膜表面上的糖蛋白用于鉴定和结合到宿主膜上的受体位点。然后病毒包膜与宿主的膜融合,从而允许衣壳和病毒基因组进入和感染宿主。
来自病毒本身芽的细胞常常死亡或被削弱,并在较长一段时间内释放更多病毒颗粒。这些病毒的类脂双层包膜对干燥、热和洗涤剂相对敏感;因此,这些病毒比非包膜病毒更容易灭菌,在宿主环境外部具有有限的存活率,并且通常直接从宿主转移到宿主。包膜病毒具有很大的适应性,并且可以在短时间内改变以便逃避免疫系统。包膜病毒可能导致持续性感染。
含有人致病菌的包膜病毒的类别包括例如DNA病毒,诸如疱疹病毒(Herpesvirus)、痘病毒(Poxviruses)、嗜肝病毒(Hepadnaviruses)、鸡瘟病毒(Asfarviridae);RNA病毒,诸如黄病毒、甲病毒、托加病毒、冠状病毒、乙型肝炎病毒、正粘病毒、副粘病毒、鼠伤寒病毒、布尼亚病毒、丝状病毒;和逆转录病毒,诸如HIV。
COVID-19
冠状病毒(CoV)是含有封装在膜包膜内的单链阳性RNA基因组的相对较大病毒。病毒膜用使冠状病毒具有冠状外观的糖蛋白纤突来研究。(参见图1,获取自Liu等人的“Research and Development on Therapeutic Agents and Vaccines for COVID-19andRelated Human Coronavirus Diseases”,ACS Cent.Sci.2020,6,315-331)。虽然冠状病毒感染人和动物,但是某些类型的动物,诸如为最多种类的冠状病毒宿主的蝙蝠,似乎对冠状病毒引起的疾病具有免疫。有四类冠状病毒,被指定为α、β、γ和δ。β冠状病毒类包括严重急性呼吸综合征(SARS)病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征(MERS)病毒(MERS-CoV)和COVID-19致病剂SARS-CoV-2。类似于SARS-CoV和MERS-CoV,SARS-CoV-2攻击下呼吸道系统以导致病毒肺炎,但其也可能影响胃肠道系统、心脏、肾脏、肝脏和中枢神经系统,从而导致多器官衰竭。当前信息指示SARSCoV-2比SARS-CoV更具传播性/传染性。
许多研究已聚焦于病毒结构、病毒传播机制/动力学的阐明,以及抗病毒剂的鉴定和病毒检测的准确诊断。这些趋势反映了来自科学界,包括学术和工业组织以及临床医生对鉴定新的方法以停止这一流行疾病的发展并防止未来的感染和传播的极大兴趣和期望。
COVID-19由SARS-CoV-2导致,这是一种新型冠状病毒,与SARS-CoV和MERS-CoV同属。负责SARS-CoV-2进入宿主细胞中并复制的病毒蛋白在结构上类似于与SARS-CoV相关联的那些。因此,对SARS和MERS的研究和开发可向COVID-19的治疗剂和预防剂的开发提供有益的见解。
靶向S蛋白/ACE2的Arbidol,CAS号131707-23-8,是可以破坏病毒包膜蛋白与宿主细胞的结合并且防止病毒进入已进入用于治疗COVID-19的临床试验的靶细胞的抑制剂。参见上文Liu等人和下文图2,摘自Blaising等人,Arbidol作为一种广谱抗病毒素:Anupdate,Antiviral Research,107(2014)84-94。还参见Kadam等人的“Structural basisof influenza virus fusion inhibition by the antiviral drug Arbidol”,PNAS,2017年1月10日,114(2)206-214。
2003年出现的严重急性呼吸疾病冠状病毒(SARS-CoV)表明,CoV能够在人类中导致严重感染的暴发。第二种严重CoV,中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)于2012年在沙特阿拉伯出现。最近发现的COVID-19被证明特别有害。
鉴于本发明的聚合物已经显示出针对包膜病毒的活性,预期本发明的聚合物还可通过抑制病毒进入宿主细胞中来显示针对COVID-19的活性。参见图3。
加州圣地亚哥的RetroVirox已开发了基于细胞的测定,其可以用于评估针对冠状病毒的实验治疗,包括SARS-CoV-2。公司提供SARS-CoV-2假病毒的测试,以评估针对COVID-19的新型冠状病毒致病剂的进入抑制剂。假病毒测定利用涂覆有SARS-CoV-2(Wuhan分离株)的病毒纤突(S)蛋白的HIV假病毒。该测定重演了新型冠状病毒的进入模式,其可被用于例如评估靶向S病毒蛋白、ACE-2病毒受体或宿主蛋白酶和其它涉及SARS-CoV-2病毒进入的目标的小分子进入抑制剂。
授予Johnson&Johnson Consumer Inc.的美国专利7,803,403和8,025,902公开了含有低分子量、非交联、直链丙烯酸共聚物和至少一种表面活性剂的个人护理组合物;和使用所述个人护理组合物进行清洁的方法。
授予Johnson&Johnson Consumer Inc.的美国专利8,343,902和8,329,626公开了一种皮肤清洁组合物,该皮肤清洁组合物包含低分子量、非交联、直链丙烯酸共聚物和非乙氧基化阴离子表面活性剂。
授予Johnson&Johnson Consumer Inc.的美国专利8,329,627公开了一种透明皮肤清洁组合物,该透明皮肤清洁组合物包含低分子量、非交联、直链丙烯酸共聚物和至少两种两性表面活性剂的共混物。
授予Lubrizol Corp.的美国专利8,293,845公开了一种用于增加表面活性剂组合物的临界胶束浓度的方法,该方法包括在所述组合物中包括直链疏水改性(甲基)丙烯酸聚合物。
授予Lubrizol Advanced Materials,Inc.的美国专利7,892,525公开了包含阳离子疏水改性聚合物胶凝剂和酸性止汗剂化合物的止汗剂组合物。
授予Lubrizol Advanced Materials,Inc.的美国专利9,068,148公开了一种丙烯酸聚合物共混物,该丙烯酸聚合物共混物包含至少一种交联丙烯酸共聚物和至少一种丙烯酸直链、非交联聚合物;用于制备所述丙烯酸聚合物共混物的方法;和用于增稠包含丙烯酸聚合物共混物的水性组合物的方法。
授予Lubrizol Advanced Materials,Inc.的美国专利9,931,290公开了一种表面活性剂组合物,该表面活性剂组合物包含表面活性剂和交联丙烯酸共聚物;和包含表面活性剂组合物的个人护理清洁组合物。
授予Ecolab USA Inc.的美国专利10,517,806要求包含阳离子活性成分的发泡抗微生物真皮清洁剂的权益;阳离子相容表面活性剂;泡沫增强剂;泡沫结构增强剂;皮肤调理剂;和水。参考文献要求一种降低哺乳动物的真皮组织上的细菌、微生物、杀真菌或病毒群体的方法的权益,该方法包括使所述真皮组织与所述发泡抗微生物真皮清洁剂接触。参考文献还公开了阳离子活性成分是可用于本发明中的抗微生物剂,并且泡沫结构增强剂可以是聚乙二醇。参考文献公开了金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为测试微生物培养物以测试其中的配方的微生物功效的用途。
授予Ecolab USA,Inc.的美国专利10,435,308要求一种用于通过泡沫分馏来改善从油/水相溶液中去除油的组合物的权益,该组合物包括缔合型增稠剂;表面活性剂,所述表面活性剂包含脱水山梨糖醇酯;和粘弹性表面活性剂,其中所述粘弹性表面活性剂是甜菜碱、氧化胺和/或乙氧基化脂肪胺。参考文献公开了可以将组合物用于例如清洁剂、化妆品、衣壳、水性颜料糊剂、汽车饰面、工业涂覆、印刷油墨、润滑脂、石膏涂料和墙壁涂料、纺织物涂层、药物制剂、作物保护制剂、填料分散液、粘合剂、洗涤剂、蜡分散体、抛光剂、用于三级矿物油生产的助剂等。
授予Ecolab USA Inc.的美国公布的申请20160262999要求包含阳离子活性成分的抗微生物真皮浓缩物的权益;泡沫增强表面活性剂;泡沫增强共聚物;泡沫稳定结构;和水。参考文献声称可使用所述浓缩物以降低哺乳动物的真皮组织上的细菌、微生物、杀真菌或病毒群体。参考文献公开了阳离子活性物质"是提供抗微生物活性的成分。参考文献公开了浓缩物可以含有皮肤调理剂,诸如聚乙二醇。
Menachery等人的“Pathogenic Influenza Viruses and CoronavirusesUtilize Similar and Contrasting Approaches To Control Interferon-StimulatedGene Responses”,美国微生物协会,2014,5(3):1-11公开了流感病毒和冠状病毒在复制、免疫刺激和总体致命性方面表现出差异。
Li,Structure,Function and Evolution of Coronavirus Spike Proteins,Annu.Rev.Virul.2016,3(1):237-261,在其它病毒和宿主细胞的对应功能的上下文中讨论了冠状病毒刺突蛋白的两个关键功能:受体识别和膜融合。
Johnson&Johnson Consumer Inc.推销和出售产品,包括Johnson的从头到脚婴儿洗剂;Johnson的婴儿保湿洗剂;和Johnson的婴儿擦拭物,其含有丙烯酸钾共聚物作为增粘剂的使用。
手消毒剂通常用于减少手上的感染剂。它们可作为液体、凝胶和泡沫获得。可获得基于醇的版本和基于非醇的版本。基于醇的版本通常含有一些异丙醇、乙醇(乙基醇)或正 丙醇的组合,其中含有60%至95%醇的版本是最有效的。应当注意,因为它们是易燃的。基于醇的手消毒剂可针对各种各样的微生物起作用。基于非醇的版本,其通常含有苯扎氯铵或三氯生,不如基于醇的版本有效。
在2020年,BlueWillow Biologics,Inc.推出了含有OTC专文苯扎氯铵的NanoBio项目鼻腔消毒溶液。该产品通过彻底擦拭每个鼻孔内部的皮肤来施加。
发明内容
本发明涉及一种抑制包膜病毒进入细胞中的方法,所述方法包括、基本上由以下组成和由以下组成:使所述病毒与包含至少一种低分子量疏水改性聚合物的抗病毒组合物接触,所述至少一种低分子量疏水改性聚合物的量有效抑制这些病毒进入细胞中,其中所述组合物基本上不含亲水亲脂平衡(下文,“HLB”)大于12的表面活性剂。
令人惊讶的是,我们已经发现,以它们的温和的特性而闻名的低浓度的某些低分子量疏水改性聚合物能够成功地抑制包膜病毒进入宿主细胞中,并且从而抑制病毒向宿主的传播。
我们相信,这些聚合物不会遇到或导致抗病毒治疗的历史问题中的一些历史问题,诸如耐药性、窄的中和宽度和宿主细胞毒性。可用于本发明的方法和组合物中的低分子量疏水改性聚合物针对若干病毒类型和跨越多种病毒株广泛具有活性。另外,这些聚合物通过非特异性进入抑制机制来起作用,从而增加它们抑制成功的机会并降低抗性的可能性。此外,由于这些聚合物在粘膜组织上特别温和,因此它们对人的组织具有很少毒性或没有毒性。
我们的身体每天都受到病毒的挑战,并且我们的免疫系统(包括我们的皮肤屏障)被设计成最小化到达可感染表面的病毒的数量。可用于本发明的方法和组合物中的低分子量疏水改性聚合物阻断病毒与细胞结合和/或进入细胞的能力,从而降低感染性病毒可以到达靶细胞并导致全身性感染的能力。病毒感染部分地是随机过程的结果–与可感染细胞进行接触的病毒越多,组织越可能被感染–因此,使用这些聚合物以阻断感染性病毒有益于免疫系统,进一步降低了感染的机会并促进了总体良好的健康。使用低分子量疏水改性聚合物的本发明的方法和组合物令人惊讶地有效降低跨越广泛病毒类型和菌株的感染性病毒体的数量,同时对人的组织保持温和和非刺激性。
具体实施方式
如本文所用,术语“可感染表面”意指活动物的其细胞可以被病毒感染的表面,包括哺乳动物诸如人类。此类可感染表面的示例是外部皮肤组织和粘膜组织。粘膜组织包括口腔、眼、鼻、阴道和直肠组织。
如本文所用,术语“可摄入表面”是指食物的表面,包括水果和蔬菜的表面。如本文所用,术语“硬质表面”是指存在于环境中的表面,诸如桌子、椅子、墙壁和其它无生命表面,皮肤和/或粘膜组织可能接触所述硬质表面并且病毒可能驻留在其上。术语“内表面”是指活生物体的体内的内部器官表面以及内部组织和流体。
如本文所用,术语“病毒”意指可以仅在活细胞或生物体内部复制的小感染剂。病毒颗粒含有以下部分:由RNA或DNA制成的遗传物质和保护遗传物质的蛋白质涂层。在一些情况下,当病毒颗粒在细胞外部时,病毒颗粒被围绕蛋白质涂层的类脂的包膜包围。含有此类类脂的包膜的病毒颗粒在本文中被称为“包膜病毒”。包膜病毒可以包括以下生物体:痘病毒,包括但不限于传染性软疣、水痘、天花和其它痘病毒;冠状病毒;黄病毒;疱疹病毒,包括单纯疱疹病毒1和单纯疱疹病毒2;逆转录病毒,包括慢病毒,包括人免疫缺陷病毒。
如本文所用,术语“表面活性剂”是一种表面活性剂,或者当溶解于水或水性溶液中时,是降低其表面张力或其与另一种液体之间的界面张力的物质。
如本文所用,术语“抑制传播”意指以下中的一者或多者:(i)阻碍病毒进入宿主细胞;(ii)基本上阻止病毒从一个个体、可感染表面或接触表面传播到另一个;和/或(iii)降低针对粘膜的损伤,使得膜保持它们的完整性并且防止被病毒感染。
如本文所用,亲水-亲脂平衡(“HLB”)是表面活性剂亲水或亲脂程度的量度,如通过根据本领域中那些技术人员已知的方法计算表面活性剂分子的不同区域的值所确定。
优选地,本发明的方法涉及一种抑制包膜病毒进入细胞中的方法,所述方法包括、基本上由以下组成和由以下组成:使所述病毒与包含至少一种低分子量疏水改性聚合物、基本上由至少一种低分子量疏水改性聚合物组成和由至少一种低分子量疏水改性聚合物组成的抗病毒组合物接触,所述至少一种低分子量疏水改性聚合物的量有效抑制病毒进入细胞中,所述组合物基本上不含HLB大于12的表面活性剂。本发明的方法进一步包括将本文所阐述的组合物施加到可感染表面上以及可摄入表面上。所述方法进一步包括使病毒与本发明的抗病毒组合物接触。
本发明的方法还包括将本发明的组合物施加到可摄入表面,诸如食物以及皮肤和粘膜组织可能进行接触的硬质表面。因此,本发明的组合物的存在将起作用以抑制存在于可摄入表面和硬质表面上的病毒进入包含在皮肤和粘膜以及内部组织和流体上的细胞中。
优选地,本发明的组合物含有至少约50%并且优选地至少约55%的水。另选地,本发明的组合物可以含有至少50%质子溶剂,所述质子溶剂可以选自以下溶剂:水、甘油、尿素、烷醇、乙酸、甲酸等。更优选地,可用于本发明的组合物中的质子溶剂包括甲酸、乙酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇等。
最优选地,本发明的组合物基本上不含HLB大于约12的表面活性剂。尽管有上述规定,但本发明的组合物可附加地含有HLB小于12的表面活性剂。HLB大于12的表面活性剂可以破坏可感染表面的细胞膜,从而降低病毒进入和感染细胞的能力。
优选地,可用于本发明的方法中的组合物具有至少为6的跨上皮细胞渗透率(下文中,“TEP”),如下文所述。
可将本发明的组合物施加到活实体(包括哺乳动物、爬行动物、鸟、鱼、细菌等)的可感染表面。这些活实体的可感染表面可以包括但不限于皮肤、粘膜和内部组织。粘膜组织包括但不限于口腔组织、眼组织、鼻组织、阴道组织、直肠组织或它们的组合。重要的是,本发明的组合物和方法不会破坏这些生物表面或导致那些表面的显著刺激。
聚合物材料
可用于本发明的组合物和方法中的聚合物材料的示例包括低分子量丙烯酸、其它烯键式不饱和聚合物、聚酯、聚碳酸酯、聚酐、聚酰胺、聚氨酯、聚脲、聚酰亚胺、聚砜、聚硫化物、它们中两种或更多种的组合等。合适的低分子量丙烯酸类聚合物的示例包括疏水改性的丙烯酸、多糖、纤维素、淀粉聚合物、它们中的两者或更多者的组合等等。合适的低分子量丙烯酸类聚合物包括疏水改性的丙烯酸类聚合物以及其它丙烯酸类聚合物,它们中的任一者可经由如下形成:溶液、悬浮液、沉淀物、分散体、乳液、反相乳液、微乳液、胶束聚合法、以及它们中的两者或更多者的组合。用于本发明的丙烯酸类聚合物可衍生自选自如下的任意一个或多个单体:(甲基)丙烯酸酯,(甲基)丙烯酰胺,乙烯基醚、酯和酰胺,烯丙基醚、酯、胺和酰胺,衣康酸酯,巴豆酸酯,苯乙烯系,和烯烃。丙烯酸类聚合物可为非离子亲水性的、非离子疏水性的、阳离子的、两性离子的、非缔合型大分子单体的、缔合型大分子单体的、或多官能/交联的。
如本文所用,术语“低分子量”聚合物指具有约100,000或更低数均分子量(Mn)的聚合物,该分子量是由用聚(甲基丙烯酸甲酯)(PMMA)标准品校准的凝胶渗透色谱法(GPC)测得。在某些优选的实施方案中,低分子量聚合物是分子量范围为约5,000Mn至约80,000Mn,更优选地约10,000Mn至约50,000Mn,并且更优选地介于约15,000Mn与40,000Mn之间的那些低分子量聚合物。在某些优选的实施方案中,低分子量聚合物是分子量范围为约5,000Mn至约80,000Mn,更优选地约10,000Mn至约50,000Mn,并且更优选地介于约15,000Mn与40,000Mn之间的那些低分子量聚合物。
制备此类聚合物的某些疏水改性聚合物和方法描述于授予Marchant等人的美国专利6,433,061中,并且以引用方式并入本文。可用于本发明的组合物中的聚合物材料优选地是对皮肤和粘膜非常温和的非交联、直链丙烯酸共聚物。这些非交联、直链聚合物优选地具有数均分子量为100,000或更小的低分子量,如通过用聚(甲基丙烯酸甲酯)(PMMA)标准物校准的凝胶渗透色谱法(GPC)所测量(如本文所用,除非另有说明,所有数均分子量(Mn)是指以此类方式测量的分子量)。因此,聚合物材料充当共聚物化合物。共聚物化合物由至少两种单体组分聚合而来。第一单体组分选自一种或多种含有至少一个羧酸基团的α,β-烯键式不饱和单体。该酸基团可衍生自一元酸或二元酸、二羧酸的酸酐、二元酸的单酯、以及它们的盐。第二单体组分是疏水改性的(相对于第一单体组分)并且选自含有C1至C9烷基基团的一种或多种α,β-烯键式不饱和非酸单体,包括直链和支链(甲基)丙烯酸的C1至C9烷基酯,直链和支链C1至C10羧酸的乙烯基酯以及它们的混合物。在本发明的一个方面,第二单体组分由下式表示:
CH2=CRX
其中R是氢或甲基;X是–C(O)OR1或-OC(O)R2;R1是直链或支链C1至C9烷基;并且R2是氢或直链或支链C1至C9烷基。在本发明的另一个方面,R1和R2是直链或支链C1至C8烷基,并且在另外的方面,R1和R2是直链或支链C2至C5烷基。
因此,优选地,可用于本发明的组合物和方法中的疏水改性聚合物包括低分子量、非交联、直链丙烯酸共聚物、基本上由低分子量、非交联、直链丙烯酸共聚物组成以及由低分子量、非交联、直链丙烯酸共聚物组成,所述低分子量、非交联、直链丙烯酸共聚物衍生自选自由(甲基)丙烯酸组成的组的至少一种第一单体组分和选自由一种或多种(甲基)丙烯酸C1至C9烷基酯组成的组的至少一种第二单体组分,其中低分子量共聚物具有约100,000或更小的数均分子量。
示例性的第一单体组分包括(甲基)丙烯酸、衣康酸、柠康酸、马来酸、富马酸、巴豆酸、乌头酸、以及它们的混合物。示例性的第二单体组分包括(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸丁酯、(甲基)丙烯酸-2-乙基己酯、甲酸乙烯酯、乙酸乙烯酯、乙酸-1-甲基乙烯酯、丙酸乙烯酯、丁酸乙烯酯、2-乙基己酸乙烯酯、新戊酸乙烯酯、新癸酸乙烯酯、以及它们的混合物。如本文所用,术语“(甲基)丙烯酸”和“(甲基)丙烯酸酯”意指包括对应的丙烯酸的甲基衍生物和对应的丙烯酸烷基酯。例如,“(甲基)丙烯酸”是指丙烯酸和/或甲基丙烯酸,并且“(甲基)丙烯酸酯”是指丙烯酸烷基酯和/或甲基丙烯酸烷基酯。
更优选地,所述第一单体组分选自由(甲基)丙烯酸组成的组,并且所述第二单体组分选自由至少一种(甲基)丙烯酸C1至C9烷基酯组成的组。
可用于本发明的组合物和方法中的非交联、直链丙烯酸共聚物化合物可以经由本领域中已知的自由基聚合技术来合成。在本发明的一个方面,基于聚合介质中的所有单体的总重量计,所利用的第一单体组分与第二单体组分的量的范围为约20重量%:80重量%至约50重量%:50重量%。在另一个方面,第一单体组分与第二单体组分的重量比为约35重量%:65重量%,并且在又一个方面,第一单体组分与第二单体组分的重量比为约25重量%:75重量%,全部基于聚合介质中全部单体的总重量计。
在本发明的组合物和方法中有用的合成聚合物的方法可见于美国6,433,061中,该专利以引用形式并入本文。
在本发明的方法和组合中有用的直链共聚物材料在去离子水中聚合物固体浓度为5重量%且用18重量%的NaOH溶液中和至PH7时,优选地具有500mPa·s或更小的粘度(Brookfield RVT,20rpm,1号转子)。在另一个方面,该粘度可在约1mPa·s至约500mPa·s的范围内,在又一个方面,在约10mPa·s至约250mPa·s的范围内,并且在另一个方面,在约15mPa·s至约150mPa·s的范围内。
优选地,存在于本发明的组合物和方法中的低分子量、非交联直链丙烯酸共聚物是丙烯酸钾共聚物。
可用于本发明的组合物和方法中的低分子量疏水改性聚合物优选地以有效地基本上抑制包膜病毒进入细胞中和/或抑制病毒传播到细胞的量存在于所述组合物中。因此,本发明的组合物和方法抑制病毒进入所述细胞并且导致病毒感染的可能性降低。优选地,它们应该以组合物的约0.00005重量%至约10%重量百分比的量存在于本发明的组合物中。甚至更优选地,它们应该以按组合物的重量计约0.00005%至约3%的量存在。更优选地,低分子量疏水改性聚合物以组合物的约0.00005重量%至约0.5重量%的量存在。最优选地,低分子量疏水改性聚合物以组合物的约0.00005%至约0.01%重量百分比的量存在。
本发明的组合物可以呈能够被施加在皮肤的表面上或可以含有病毒或细菌的无生命表面上的洗剂或液体的形式。其还可以是被施加到粘膜表面的组合物,诸如鼻腔或阴道腔的表面,并且可以被用作阴道微生物。这些类型的组合物可以更粘稠并且可以基于凝胶形成。可以将本发明的组合物涂覆到吸收制品(诸如用于放置成与粘膜表面接触的阴道棉条或鼻腔棉条)上,以抑制此类生物环境中的病毒。本发明的组合物还可以使得它们可以在适当位点处注射到体内的递送形式配制,其中病毒可以驻留在内表面上。
本发明的组合物可以被制成各种各样的产品类型,所述产品类型包括但不限于液体、洗剂、乳膏、凝胶、棒、喷剂、剃刮膏、软膏、清洁液体洗剂和固体棒、洗发剂、糊剂、粉末、摩丝、擦拭物、贴剂、伤口敷料和粘合绷带、水凝胶和膜。这些产品类型可含有几种类型的美容上可接受的局部用载体,包括但不限于溶液、乳液(例如微乳液和纳米乳液)、凝胶、固体和脂质体。下面是此类载体的非限制性示例。其它载体可以由配制此类产品类型的领域中那些技术人员来配制。
本发明的优选组合物包括含有凝胶的聚合物;含有液滴的聚合物,包括例如滴眼剂;含有接触镜片溶液的聚合物;含有喷剂的聚合物,例如面部/身体喷剂、鼻喷剂以及口和喉喷剂;和含有吸入剂的聚合物。
本发明的组合物还可以用作个人防护设备上或其中的涂层。通常称为“PPE”的个人防护设备是磨损以最小化暴露于各种危险的任何设备。PPE的示例包括全身防护服、手套、长袍、面罩、呼吸器以及眼睛和足部防护。
可用于本发明的方法中的局部用组合物可作为溶液配制。溶液优选地含有水性溶剂(例如,约50%至约99.99%或约90%至约99%的美容上可接受的水性溶剂)。
可用于本发明的方法中的局部用组合物可被配制为含有润肤剂的溶液。此类组合物优选含有约2%至约50%的润肤剂。如本文所用,“润肤剂”是指用于防止或缓解干燥以及用来保护皮肤的材料。各种各样的合适的润肤剂是已知的,并且可用于本文。Sagarin,Cosmetics,Science and Technology,第2版,第1卷,第32-43页(1972)和InternationalCosmetic Ingredient Dictionary and Handbook,编。Wenninger and McEwen,第1656-61页、第1626页和第1654-55页(华盛顿特区的The Cosmetic,Toiletry,and FragranceAssoc.,第7版,1997)(下文“ICI手册”)含有用于本发明的组合物和方法中的多种材料的示例。
还可由此类溶液制备洗剂。洗剂优选地含有约1%至约20%(更优选地,约5%至约10%)的一种或多种润肤剂和约50%至约90%(更优选地,约60%至约80%)的水。
可由溶液配制的另一类产品为霜膏。霜膏优选地含有约5%至约50%(更优选地,约10%至约20%)的一种或多种润肤剂和约45%至约85%(更优选地,约50%至约75%)的水。
还可由溶液配制的另一类产品是膏剂。膏剂可含有动物油或植物油或半固体烃类的简单底料。膏剂可优选地含有约2%至约10%的一种或多种润肤剂和约0.1%至约2%的一种或多种增稠剂。可用于本文的增稠剂或增粘剂的更完整公开可以在Sagarin,Cosmetics,Science and Technology,第2版,第1卷,第72-73页(1972)和ICI手册第1693-1697页中找到。
可用于本发明的方法中的局部用组合物还可作为乳液配制。如果载体是乳液,则优选地约1%至约10%(例如,约2%至约5%)的载体包含一种或多种乳化剂。乳化剂可为非离子的、阴离子的或阳离子的。合适的乳化剂阐述于例如美国专利3,755,560、美国专利4,421,769、McCutcheon'sDetergents and Emulsifiers,北美版,第317-324页(1986)和ICI手册,第1673--1686页中,其通过引用方式并入本文。
洗剂和霜膏还可被配制为乳液。优选地,此类洗剂含有0.5%至约5%的一种或多种乳化剂。此类霜膏将优选地含有约1%至约20%(更优选地,约5%至约10%)的一种或多种润肤剂;约20%至约80%(更优选地,30%至约70%)的水;以及约1%至约10%(更优选地,约2%至约5%)的一种或多种乳化剂。
可用于本发明的方法中的其它组合物包括可以适用于粘膜表面以抑制病毒传播的凝胶和液体组合物。粘膜表面包括但不限于阴道、直肠、鼻通道、口和喉。优选地,此类组合物应包括至少一种多元醇,包括甘油、聚乙二醇、丙二醇、山梨糖醇或它们的组合。可将本领域中那些普通技术人员已知的其它多元醇用于本发明的组合物和方法中,包括分子量范围为约300至约1450的聚乙二醇。优选地,应该有约0.1重量%至约50重量%的甘油和约2重量%至约40重量%的丙二醇。
本发明的粘膜组合物还应含有一种或多种水溶性纤维素衍生聚合物。优选地,此类聚合物应为纤维素树胶,诸如一种或多种羟烷基纤维素的聚合物。更优选地,羟烷基纤维素聚合物应是羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等中的一种或多种。优选地,纤维素衍生的聚合物应以组合物的约0.1重量%至约2重量%的量存在于本发明的组合物中。
旨在用于阴道用途的本发明的组合物还可以含有一种或多种杀精剂,包括但不限于壬苯醇醚-9等。尽管此类杀精剂可以被分类为表面活性剂,但是它们通常具有小于16的HLB,并且不可用作清洁组合物或用于清洁组合物中并且不起泡。
优选地,无机碱可用于调节组合物的pH以与阴道、口腔或直肠粘膜相容。氢氧化钾或另一种碱金属或碱土金属碱可用于提供适当的pH。当然,也可以这种方式使用任何其它生理可接受的碱。优选使用约0.05至约5重量%的无机碱。
本发明的组合物可以根据本领域中那些技术人员已知的那些方法和过程或者根据本发明的制备方法来制备。例如,可以将水溶性组分诸如甘油、丙二醇、山梨糖醇、无机碱、防腐剂等溶解在水中,并且可以添加组合纤维素衍生的聚合物。另一种制备方法是将所有成分混合到不含水的浆料中,并且然后将浆料添加到水中。
组合物优选基本上不含表面活性剂,包括阴离子、阳离子、两性或非离子表面活性剂。
被包括在组合物的液体或洗剂形成中的可以是水、油、防腐剂、乳化剂、粘度增强剂、润肤剂、电解质、芳香剂、缓冲剂、pH调节剂、皮肤保护剂、金属离子螯合剂等。
本发明的组合物可用于配制手洗剂和/或身体洗剂、水果洗剂和/或植物洗剂、可摄入组合物、栓剂、鼻喷剂、术后棉条等,其可以被施加到表面或置于体内以抑制病毒的传播。可以将本发明的组合物涂覆到吸收制品(诸如用于放置成与粘膜表面接触的阴道棉条或鼻拭子)上,以抑制此类生物环境中的病毒。
方法
本文已经采用的有各种测试方法,以评估本发明的方法和组合物的不同方面以及当暴露于本发明的组合物时它们对皮肤、粘膜和病毒的影响。本方法和以下实施例中使用了跨上皮细胞渗透率(“TEP”)。TEP测试用于确定组合物对皮肤或粘膜刺激到何种程度。
跨上皮细胞渗透率测试(“TEP测试”):
根据Invittox Protocol编号86(1994年5月)、“跨上皮细胞渗透率(TEP)测定”和美国专利7,157,414中所阐述,测量给定配方预期对眼睛和/或皮肤的刺激,所述专利以引用方式并入本文。一般来讲,可以通过确定其对细胞层渗透率的影响来评估产物对眼和/或皮肤刺激的可能性,如通过荧光素通过层的泄漏所评估。使马-达二氏犬肾(MDCK)细胞的单层生长汇合于24孔板(其下孔中含有培养基或分析缓冲液)中的微孔插入物上。在暴露于产品的稀释物15分钟之后,通过测量细胞单层中渗透性屏障的受损来评估产品的潜在刺激性。如分光光度法所确定,通过30分钟后渗到下孔的荧光素钠的量来评估屏障的损伤。针对测试材料的浓度绘制荧光素泄漏以确定EC50(导致50%的最大染料泄漏的测试材料的浓度,即对渗透性屏障造成50%的损伤)。更高的分数指示更温和的配方。
将微孔膜上生长的MDCK细胞层暴露于测试样品,作为刺激物接触眼睛时所发生的第一事件的模型。在体内,由于细胞之间存在紧密结合,角膜上皮的最外层形成可选择性透过的屏障。在暴露于刺激剂时,紧密连接分离,从而去除渗透性屏障。流体被吸收到上皮的下面的层和基质;使胶原层分离,从而导致不透明度。TEP分析测量刺激物对打破微孔插入物上生长的MDCK细胞层中的细胞间紧密连接的影响。采用分光光度法通过测量标记染料(荧光素钠)渗过细胞层和微孔膜进入下孔的量来评价损害。
杀病毒悬浮测试:
实验概述:当被单纯疱疹I-1)(II-1)病毒1型(HSV-1)菌株HF(ATCC#VR-260)挑战时,可使用杀病毒悬浮测试(体外时间杀灭方法)来评估可用于本发明的组合物和方法中的疏水改性聚合物的杀病毒特性。
原材料,例如丙烯酸钾共聚物,可作为30%储备溶液从供应商供应。用于针对HSV-1测试的挑战病毒菌株是单纯疱疹病毒1型菌株HF(ATCC#VR-260)。宿主细胞应如下制备:Vero细胞(ATCC#CCL-81)在一次性细胞培养物实验室器皿中维持为单层并且用于HSV-1菌株HF的杀病毒悬浮测试。在测试之前,将宿主细胞培养物接种到适当的细胞培养板上。细胞单层应100%汇合并且在接种病毒之前小于48小时。生长培养基(GM)和维持培养基(MM)为具有适当补充剂的1X最小必需培养基(MEM)。
测试病毒如下制备:来自BSL1高滴度病毒原料的HSV-1菌株HF可以用于此研究。在使用当天,从-70℃冷冻机中去除储备病毒的等分试样,并在用于测试中之前解冻。本发明的测试产品组合物可以如下制备:将5.0ml的测试产品30%溶液添加到具有0.5ml的氢氧化钠的4.5ml磷酸盐缓冲盐水中。涡旋混合物并且使用pH条带测量pH。溶液的pH(测试产品的15%v/v)应为6.0至6.5。由于病毒接种和病毒接种的模拟,将测试产品稀释至90%(v/v)浓度。测试产品以13.5%(v/v)浓度来评估。在暴露于测试产品15分钟、30分钟和1小时之后,确定病毒株的初始种群的百分比和log10降低。镀覆在四个重复样品中执行。根据良好实验室规范执行测试,如21CFR第58部分中所指定。
中和测试:
可以在杀病毒悬浮测试之前执行中和测试。在病毒接种的模拟中,将维持培养基(下文中,“MM”)添加到测试产品的样品中,以实现测试产品的90%(v/v)浓度。将混合物添加到适当量的中和剂中并充分混合。丢弃中和剂/MM/产物的等分试样并用测试病毒代替。在MM中制备经中和产物的后续10倍稀释液。将稀释液镀在四个重复样品中。
为了执行细胞毒性测试,在病毒接种的模拟中,将MM添加到测试产品的样品中。将混合物添加到适当量的中和剂中并充分混合。在MM中制备经中和产物的后续10倍稀释液。将稀释液镀在四个重复样品中。
对测试病毒的中和剂毒性的评估可以如下执行:
病毒对照#1用于确定中和剂是否对测试病毒具有显著的抑制作用以及定义待用如中和测试中的中和剂处理的测试病毒的滴度。在中和剂中稀释测试病毒,并且在MM中执行后续稀释。将每种稀释液镀在四个重复样品中。病毒对照#2用于确定当未用中和剂处理时测试病毒的滴度。在MM中制备测试病毒的10倍稀释液。将每种稀释液镀在四个重复样品中。细胞培养物对照:完整细胞培养物单层用作细胞培养物活力的对照。在所有细胞培养物对照孔中,GM被MM代替。
将板在37℃±2℃下在CO2培养箱中孵育5天至14天。使用倒置复式显微镜监测细胞毒性/细胞毒性作用。
杀病毒测试:将适当量的测试病毒添加到测试产品的样品中,并且充分混合以实现产品的90%(v/v)浓度。使用校准的分钟/秒定时器使测试病毒暴露于测试产品15分钟、30分钟和1小时。每次暴露后立即将测试病毒/产物悬浮液中和并在MM中1:10稀释。将每种稀释液镀在四个重复样品中。
病毒对照:以与杀病毒测试中相同的方式用中和剂处理适当量的测试病毒,并且随后在MM中1:10稀释。将每种稀释液镀在四个重复样品中。
细胞毒性对照:将MM的等分试样添加到测试产品的样品中以模拟病毒接种。将MM/产物混合物中和并在MM中1:10稀释。将每种稀释液镀在四个重复样品中。
中和对照:将MM的等分试样添加到每个测试产品和比较产品的样品中以模拟病毒接种。将MM/产物混合物中和并在MM中1:10稀释。将大约100-1000个感染单位的病毒添加到中和产物的样品中。将稀释液镀在四个重复样品中。
细胞培养物对照:完整细胞培养物单层用作细胞培养物活力的对照。在所有细胞培养物对照孔中,GM被MM代替。将板在37℃±2℃下在CO2培养箱中孵育5天至14天。使用倒置复式显微镜监测细胞毒性/细胞毒性作用。
测试接受标准
有效测试要求:1)至少4log10的TCID50(组织培养感染剂量)从病毒对照中回收;2)细胞培养物对照孔中的细胞保持存活并且附接到孔的底部;3)培养基在板的所有孔中保持不被污染;4)当细胞毒性明显时,至少3log10滴度降低表明超过细胞毒性水平,并且5)测试产品在定时暴露后立即被完全中和,使得病毒感染性不受影响。
以下方案可用于确定本发明实施方案针对HIV-1、乙型肝炎、流感、腺病毒和鼻病毒方案的活性。
针对CEM-SS细胞中HIV-1IIIB的活性的评估
处于10%完整的Roswell Park Memorial Institute Medium(“RPMI”)-1640(10%FBS,1%L-谷氨酰胺和1%青霉素/链霉素,可从位于加利福尼亚州卡尔斯巴德的Invitrogen商购获得)介质中的密度为2.5×103细胞/孔的五十微升(50μL)的CEM-SS细胞被镀在96孔圆底板中。将一百微升(100μL)的每种聚合物按6种浓度一式三份地加入,随后以预先确定的滴度加入50μL的HIV-1IIIB。将培养物在37℃/5%CO2下孵育6天。孵育之后,将细胞用XTT染色以评估化合物功效和细胞毒性,如下文所述。将AZT作为测定阳性对照化合物进行并行评估。
细胞活力和化合物细胞毒性的XTT染色:
测试材料的TC50值通过测量四唑染料XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯胺基)羰基]-2H-氢氧化四唑)的降低而得出。代谢活性细胞中的XTT被线粒体酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(“NADPH”)代谢为可溶性甲臜产物。在无添加剂的情况下,XTT溶液每天作为1mg/ml的原液在RPMI-1640中制备。在DPBS中以0.15mg/ml制备吩嗪甲基硫酸酯(PMS)溶液,并在-20℃下储存在黑暗中。XTT/PMS原料通过每ml的XTT溶液添加40μL的PMS来在使用前立即制备。向板的每孔加入五十μL(50μL)的XTT/PMS,并且在37℃下孵育4小时。已经凭经验将4小时孵育确定为在XTT染料降低的直链响应范围内,其中所指示细胞数用于每次测定。将板密封并倒置若干次以将可溶性甲臜产物混合,并且用MolecularDevices SpectraMax Plus 384 96孔板格式分光光度计读取450nm(650nm参考波长)下的板。
评估HIV-1在人外周血单核细胞(“PBMCs”)中的活性:
用Dulbeccos磷酸盐缓冲盐水(DPBS)将白细胞再生血细胞洗涤若干次。洗涤后,用DPBS将白细胞再生血1:1稀释,并在50ml锥形离心管中并将其分层于15ml的Ficoll-Hypaque密度梯度上。然后将这些管在600×g下离心30分钟。将带状PBMC从所得接口轻轻抽吸,并且随后通过低速离心用DPBS洗涤三次。在最后洗涤后,细胞通过台盼蓝染料排除并重新悬浮在1×106个细胞/ml的具有15%胎牛血清(FBS)、2mmol/L L-谷氨酰胺、2μg/ml PHA-P、100单元/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI 1640中,并且允许在37℃下孵育48小时至72小时。孵育后,将PBMC离心并重悬于组织培养基(具有15%FBS、2mmol/L L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和3.6ng/ml重组人IL-2的RPMI 1640)中。然后维持培养物,直到每3天用含有IL-2的新鲜组织培养基改变一半的培养体积。用已经被诱导与PHA-P增殖72小时的PBMC开始测定。对于PBMC测定,将来自两个供体的PHA-P刺激的PBMC汇集在一起,以最小化当使用来自单个供体的细胞时在新鲜组织培养基中以1×106个细胞/ml重悬并以50μL/孔镀于96孔圆底微量滴定板的内部孔中时的波动。将一百微升(100μL)的含2倍浓度的聚合物的培养基转移到圆底96孔板的含有一式三份的细胞的指定孔中。在将聚合物添加到孔之后立即添加50μL的预定稀释的病毒,并且充分混合。在5%CO2/37℃下培养7天后,通过测量组织培养上清液中无细胞的HIV-1RT活性来量化HIV-1复制,如下所述。如上所述使用四唑染料XTT来评估细胞毒性。
慢性HIV-1复制抑制的评估:
将慢性感染HIV-1IIIB的CEM-SS细胞以2.5×103个细胞/孔的密度添加到96孔微量滴定板中,体积为100μL。连续稀释一种或多种化合物,使得评估总共六种浓度。将一百微升(100mL)的每种浓度一式三份地添加到细胞中。将板在37℃/5%CO2下孵育6天。孵育之后,从96孔板的每个孔收集无细胞上清液样品并分析逆转录酶(RT)活性。用XTT四唑染料对板进行染色以测量细胞活力。
逆转录酶活性测定:
使用标准放射性合并聚合测定在无细胞上清液中测量逆转录酶。购买1Ci/ml的氚化胸苷三磷酸(TTP),并且每次酶反应使用1μL。分别以0.5mg/ml和1.7单元/ml的浓度从保持在-20℃下的储备溶液制备聚rA和寡dT。每天新鲜制备RT反应缓冲液,并且由125μL的1MEGTA、125μL的dH2O、125μL的20%Triton X-100、50μL的1M Tris(pH 7.4)、50μL的1M DTT和40μL的1M MgCl2组成。对于每个反应,将1μL的TTP、4μL的dH2O、2.5μL的rAdT和2.5μL的反应缓冲液混合。将10微升(10μL)的此反应混合物置于具有15μL的含病毒上清液的圆底微量滴定板中。将板在37℃下在潮湿的培养箱中孵育60分钟至90分钟。孵育之后,将10μL的反应体积以适当的板格式点样到DEAE过滤器垫上,在5%磷酸钠缓冲液中洗涤5次,每次5分钟,在蒸馏水中洗涤2次,每次1分钟,在试剂醇中洗涤2次,每次1分钟,并且然后空气干燥。将干燥的过滤器垫置于塑料套筒中,并且将4ml的Opti-Fluor O添加到每个套筒中。利用Wallac1450Microbeta Trilux液体闪烁计数器定量合并的放射性。
细胞对细胞病毒传播抑制的评估
未感染的CEM-SS细胞以1×105个细胞/孔的密度镀在96孔平底板中,总体积为50μL。慢性HIV-1IIIB感染的CEM-SS细胞以1×105个细胞/孔至1×100个细胞/孔范围内的细胞密度添加,体积为50μL。连续稀释测试化合物以实现测试浓度,并且以100μL的体积添加到三个重复孔中。将板在5%CO2/37℃下孵育48小时。孵育之后,计数每孔合胞体的数量。在另外24小时孵育之后,分析来自96孔板的每个孔的无细胞上清液样品的逆转录酶(RT)活性,如上文所描述。
对TZM-bl-FcRI细胞中HIV-1BaL进入抑制的评估
在化合物暴露之前二十四小时,将TZM-bl-FcRI细胞以1×104个细胞/孔镀在96孔平底板中,体积为100μL。在5%CO2/37℃下孵育之后,在添加HIV-1BaL10分钟至15分钟之前,将50μL连续稀释的化合物一式三份地添加到细胞中。将HIV-1BaL稀释至预定滴度,并且以50μL的体积添加到功效板中。将培养基以相同体积添加到毒性板中。在5%CO2/37℃下孵育两小时之后,洗涤培养物以去除残留病毒和化合物。将板在5%CO2/37℃下孵育另外48小时,此时使用化学发光底物(Gal筛选,Tropix)评估功效板,并且如上所述使用XTT评估毒性。
使用化学发光检测对化合物功效进行评估
将所有培养基从功效板中取出并用50mL的DPBS代替。将Gal筛选缓冲液中1:25稀释的五十微升(50μl)的Gal筛选底物添加到板的所有孔中。将板在室温下孵育90分钟。孵育之后,将孔的内容物转移到透明底板。将板覆盖并使用Microbeta闪烁计数器检测化学发光。
细胞对TZM-bl-FcRI细胞中细胞融合的抑制的评估
HeLa-CD4-LTR-β-Gal细胞以5×103个细胞/孔的密度被镀,体积为50μL,其中50μL的6 1/2-log10连续稀释化合物一式三份,在37℃/5%CO2下1小时。孵育之后,将100μL的HL2/3细胞添加到板中。将培养物在37℃/5%CO2下孵育另外48小时。孵育之后,使用化学发光底物对功效板进行β-半乳糖苷酶产生的评估,并且用XTT对毒性板进行染色以如上所述评估细胞活力。
对HIV-1酶的抑制的评估
对HIV-1逆转录酶的抑制的评估
HIV-1逆转录酶(RT)抑制测定利用由ChimerX提供的HIV-1逆转录酶(RT)酶。在96孔U型底板中加入6种浓度的连续对数稀释的水,其中50μL的反应混合物含有2M Tris-HCl、pH 8.0、3M KCl、1M MgCl2、2M DTT、10mM dGTP、25U/mL rC:dG模板、10μL[32P]-α-dGTP(800Ci/mMol)和20μL的含有5μL的HIV-1逆转录酶的酶反应混合物、BSA和Triton X-100。将反应板在37℃下孵育50分钟。孵育之后,将10μg/mL的超声大麻哈鱼精子DNA和150μL的10%TCA添加到孔中,以有助于DNA沉淀和回收,并允许在室温下孵育15分钟。然后将孔中的内容物转移到DEAE阴离子交换纸中,并且通过使用真空歧管通过过滤器抽吸来洗涤。然后将板用200μL的10%TCA如上洗涤一次。将十五微升(15μL)的Wallac Supermix闪烁剂添加到每个孔中,并且使用Wallac MicroBeta闪烁计数器读取板。
对HIV-1蛋白酶的抑制的评估
使用合并Hilyte FluorTM488/QXLTM520FRET肽的520HIV-1蛋白酶测定试剂盒来确定HIV-1蛋白酶活性。在FRET肽中,HiLyte FlourTM488的荧光被QXLTM520猝灭,直到该肽被HIV-1蛋白酶裂解成两个单独的片段。在裂解时,HiLyte FlourTM488的荧光在激发/发射=490nm/520nm处回收并监测。将重组HIV-1蛋白酶在蛋白酶测定缓冲液中稀释至2.5ng/mL的浓度,并且将40μL的稀释蛋白酶添加到NUNC 96孔平底黑色荧光板的除两个孔以外的所有孔中。将测试化合物和沙奎那韦(阳性对照化合物)的6 1/2-log10系列稀释液制备为蛋白酶测定缓冲液中最终孔浓度的10倍。将10微升(10μL)的稀释化合物置于测定板的含有蛋白酶的三个重复孔中。将单独的10微升(10μL)的缓冲液也置于含有蛋白酶的六个孔中,以建立无化合物阳性对照。将板在37℃下孵育15小时。将五十微升(50μL)的荧光蛋白酶底物(在测定缓冲液中稀释为1:500)添加到每个孔中,并且将板在室温中孵育60分钟。将五十微升(50μL)的终止溶液添加到每个孔中。使用激发/发射=490nm/520nm来测量荧光强度。EC50根据化合物中的每种化合物的终点荧光数据来计算。
对HIV-1整合酶抑制的评估
使用HIV-1整合酶测定试剂盒(XpressBio Life Science)来评估HIV-1蛋白酶活性。链霉亲和素涂覆的96孔板涂覆有含有末端标记的生物素的双链HIV-1LTR U5供体底物(DS)DNA。将一百微升(100μL)的1X DS DNA溶液添加到指定的孔中,并且将板在37℃下孵育30分钟。孵育之后,用洗涤缓冲液将板洗涤3次,并且将200μL的阻断缓冲液添加到每个孔中并在37℃下孵育30分钟。将一百微升(100μL)的反应缓冲液(阴性对照)或整合酶溶液(阳性对照)添加到指定的孔中并在37℃下孵育30分钟。如上所述洗涤板并将50μL在反应缓冲液中稀释的每个测试制品(单独的反应缓冲液用于阳性对照和阴性对照)添加到指定的孔中并在室温下孵育5分钟。将五十微升(50μL)的1X TS DNA溶液添加到板中,混合,并且将板在37℃下孵育30分钟。在用洗涤缓冲液将板洗涤5次后,添加100μL的HRP抗体溶液,并且将板在37℃下孵育30分钟。在另外5次洗涤之后添加100μL的TMB过氧化物酶底物溶液,并将板在室温下孵育10分钟。将一百微升(100μL)的TMB终止溶液直接添加到含有TMB底物的孔中。在450nM的吸光度下读取板。
对化合物添加在HeLa-CD4-LTR-β-Gal细胞中的时间的评估
在测定开始之前24小时,HeLa-CD4-LTR-β-Gal细胞以1×104个细胞/孔的密度接种,体积为100μL,并在37℃/5%CO2下孵育。在孵育之后,将化合物以指定浓度连续稀释并且在添加病毒前或后30分钟、0小时、1小时、2小时、4小时、8小时和24小时的时间点一式三份地添加到细胞中,体积为100μL。HIV-1IIIB以预定滴度添加到细胞中。将培养物在37℃/5%CO2下孵育48小时,此时使用化学发光底物(Gal-筛选)评估功效并使用四唑染料XTT评估毒性(三个时间点为0小时、4小时和24小时)。
针对AD38细胞中HBV的活性的评估:
AD38细胞在tet操纵子的转录控制下含有稳定转染的HBV基因组。当在四环素的存在下培养细胞时,HBV的表达被抑制,并且可以通过从培养基中去除四环素来诱导。AD38细胞以1×105个细胞/孔的密度接种在96孔平底板中,并且在37℃/5%CO2下在0.3μg/ml四环素的存在下培养2天2。孵育之后,去除培养基并且洗涤细胞以去除残留的四环素。将六种浓度的连续稀释的聚合物(1/2对数增量)添加到细胞中,并且在37℃/5%CO2下孵育6天,在第3天改变培养基(将聚合物添加回)。在第六天,从每个孔收集100μL的上清液以通过qPCR分析病毒DNA,并且细胞单层用XTT重新染色以如上所述评估细胞毒性。
qPCR方法:
用90μL含有10μM Tris和40μg/ml大麻哈鱼DNA的稀释缓冲液稀释一百微升(100μL)的细胞培养物上清液。将样品加热至102℃,持续15分钟。然后将6微升(6μL)的样品与12.5μL的2×铂PCR超级混合物与ROX、0.5μL的HBV正向引物(10μM AD38 qF1)、0.5μL的HBV反向引物(10μM AD38qR1)、0.5μL的Taqman探针(AD38 qP1)和6μL的分子级水混合。聚合酶链反应(PCR)在以下条件下执行:95℃的50个循环持续15秒,随后60℃持续1分钟。
针对流感A和流感B病毒的活性进行评估:
在补充有10%FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的DMEM中培养的MDCK细胞以1x104/孔的细胞密度接种在96孔平底板中,体积为100μL。将板在37℃/5%CO2下孵育24小时。孵育之后,将聚合物以半对数增量顺序稀释(总共6个浓度),并且一式三份地将100μl的每种浓度添加到细胞中。流感ACA/27/07或流感BAllen病毒在测定培养基中稀释至预定滴度,并且以100μL的体积添加到培养物中。这种病毒滴度是被确定为在感染后4天产生80%细胞杀伤的量。将培养物在37℃/5%CO2下孵育4天。孵育之后,如上所述用四唑染料XTT染色测试板。
针对腺病毒和鼻病毒的活性的评估:
通过XTT四唑染料测量腺病毒在HeLa细胞中复制或人鼻病毒在MRC-5细胞中复制之后病毒诱导的细胞毒性作用(CPE)和细胞活力的抑制。将细胞(1×104个细胞/孔)接种在96孔平底组织培养板中,并且允许其在37℃/5%CO2下粘附过夜。孵育之后,将培养基从细胞单层中去除,并且将连续稀释的聚合物(6种浓度)和病毒稀释至预定滴度,以在将感染添加到板之后6天时产生85%至95%细胞杀伤。将利巴韦林(Ribavirin)作为阳性测定对照化合物进行并行评估。在37℃、5%CO2下孵育六天之后,如下所述通过XTT染色来测量细胞活力。
对Ca Ski和ME180细胞毒性的评估
在化合物暴露之前二十四小时,将100μL的细胞以5×104个细胞/孔镀在平底板中并且。在5%CO2/37℃下孵育24小时之后,将连续稀释的化合物和培养基一式三份地添加到细胞中。将培养物在5%CO2/37℃下孵育另外24小时,此时将其洗涤以去除残留的化合物。将板在5%CO2/37℃下孵育另外24小时,并且然后如上所述使用XTT来评估。
对正常阴道菌群乳杆菌种类的毒性的评估
在化合物暴露之前,使詹森乳杆菌(Lactobacillus jensenii)和卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)的冷冻甘油储备液在MRS液体培养基中生长48小时。将六(6)种浓度的每种化合物在MRS液体培养基中连续稀释,并且将每种浓度一式三份地添加到96孔圆底板中。在MRS液体培养基中将每种种类的乳杆菌稀释至OD625=0.06并且添加到板的适当孔中。将培养物厌氧孵育24小时,此时在490nM下以分光光度法评估细菌生长。将青霉素/链霉素溶液用作测定对照。
对阴道外宫颈组织的毒性的评价
在测定当天,使MatTek测定培养基升温并将900μL添加到6孔板的每个孔中。在给药之前一小时,从冷藏机中取出外阴道组织并置于6孔板中,并且然后将板在37℃/5%CO2下孵育1小时。孵育之后,将培养基从6孔板中去除,并且添加900μL的新鲜培养基。将一百微升(100μL)的每种浓度一式两份地添加到外阴道组织中。然后将板在37℃/5%CO2下孵育另外24小时。在孵育结束之前一小时,在DMEM中制备1mg/mL(3-(4,5二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(下文中,“MTT”可购自加利福尼亚州卡尔斯巴德的Invitrogen)。在孵育结束之前十五分钟,将300μL的MTT添加到24孔板的每个孔中。孵育之后,从组织中去除残留的液体,并且然后用PBS轻轻冲洗两次。然后将每个外阴道组织插入物转移到24孔板的含有MTT溶液的单独孔中。然后将板在37℃/5%CO2下孵育3小时。然后将每个插入物转移到预标记的萃取板中,并且将2.0mL的萃取溶液添加到孔中,使得组织插入物完全浸没。萃取在室温下进行两小时,此时将萃取溶液充分混合并且将200μL转移到96孔圆底板中。在570nm处确定每个样品的光密度,其中背景为650nm。活力%被确定为100×[OD(样品)/OD(阴性对照)]。将TritonTMX-100和N-9用作测定对照。
材料:
将低分子量疏水改性聚合物、丙烯酸钾共聚物(Lubrizol,Brecksville,OH)作为低分子量疏水改性聚合物用于本发明的组合物中。
实施例1
本发明实施例E1–E3和比较例C1-C3:待测试的组合物的制备
根据下面阐述的描述,用表1中列出的量的材料制备E1-E3、A1和C1-C3的组合物。组合物E1-E3根据本发明的组合物和方法。组合物A1根据与本文同时提交的共同待决的专利申请代理人案卷号JCO6079USNP中所阐述的组合物和方法。组合物C1-C3是比较组合物。
表1
*以%w/w活性物质表示
表1的组合物中的每种组合物独立地如下制备:
E1-将1.7g的丙烯酸钾共聚物(活性30%)与98.3g的去离子水混合,并且使用20%氢氧化钠溶液将pH调节至6.5。
A1-在轻微加热的情况下将0.5g的PEG6000溶解于水中,并且pH被测量为6.65。
C1-将17.4g的椰油酰胺丙基甜菜碱、23.4g的月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠和8.3gm的PEG 80脱水山梨糖醇月桂酸酯添加到150.9g的去离子水中,并且在6.8下测量pH。
C2-将3.4g的丙烯酸钾共聚物、17.4g的椰油酰胺丙基甜菜碱、23.4gm的月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠和8.3g的PEG 80脱水山梨糖醇月桂酸酯添加到150.9gm的去离子水中,并且使用20%氢氧化钠中和丙烯酸钾共聚物。测量的最终pH为6.5。
E2-将10.0gm的丙烯酸钾共聚物(活性30%)与88.56gm的去离子水混合,并且使用1.44gm的20%氢氧化钠溶液将pH调节至6.7。
E3-将3gm的壬苯醇醚-9与86.24gm的去离子水混合并在混合板上搅拌,直到壬苯醇醚-9完全溶解。将10gm的丙烯酸钾共聚物添加到混合物中,并且使用20%氢氧化钠溶液将pH调节至6.4-6.6。
C3-将3gm的壬苯醇醚-9与97gm的去离子水混合并在混合板上搅拌,直到壬苯醇醚完全溶解并且测量的pH为5.2-5.4。
实施例2
本发明实施例E4–E11:本发明的组合物的例示性实施方案的制备
根据表2中列出的材料和量以及下文阐述的方法来制备E4–E11的稳定抗病毒组合物。
表2
*以%w/w活性物质表示
表2的实施方案组合物中的每种实施方案组合物独立地如下制备:
E4-E5-对于E4:在主烧杯中测量水。在混合时将卡波姆撒入水中。允许卡波姆均匀地分散。添加丙烯酸钾共聚物并开始加热,直到温度达到65℃。将鲸蜡基磷酸钾(和)氢化棕榈甘油酯、矿物油添加到混合物中。10分钟后,关闭热量并冷却混合物。在室温下,苯氧基乙醇;添加乙基己基甘油,并且将组合物的pH调节至6.7-7.00适量并储存。将洗剂的pH记录为6.8。
对于E5,遵循与E5相同的规程,不同的是在将矿物油添加到混合物中之后添加聚甘油基-10月桂酸酯和硬脂醇。
E6-将丙烯酸酯交联聚合物和水一起添加到烧杯中。添加丙烯酸钾共聚物,并且使用20%氢氧化钠溶液中和。形成透明凝胶。pH记录为7.2。
E7-将水添加到烧杯中,并且将羟乙基纤维素搅拌到水中,并允许混合45分钟。将混合物加热至50℃。将丙烯酸钾共聚物、椰油基葡糖苷(和)甘油基油酸酯、月桂基葡糖苷(和)聚甘油基-2脱聚羟基硬脂酸酯(和)甘油添加到烧杯中。将加热关闭,并且当组合物达到约30℃时,将甘油、苯氧基乙醇;乙基己基甘油和苯甲酸钠添加到烧杯中。将pH调节至7并且添加丙烯酸酯交联聚合物。
E8-将水添加到烧杯中并混合。在混合时将卡波姆撒入。允许卡波姆均匀地分散。将丙烯酸钾共聚物添加到组合物中并开始加热,直到温度达到65℃。将鲸蜡基磷酸钾(和)氢化棕榈甘油酯、硬脂醇和矿物油添加到组合物中。在10分钟后关闭加热,并且允许混合物冷却至室温。苯氧基乙醇;添加乙基己基甘油,并且将pH调节至6.7-7.00适量并储存。
E9-将水和丙二醇添加到主烧杯中。在搅拌下将丙烯酸钾共聚物添加到烧杯中。添加氢氧化钠以中和丙烯酸钾共聚物(直到溶液变得透明并且pH介于6.5与7之间)。添加苯甲酸钠,并且允许组合物混合30分钟。将混合物加热至55℃至60℃。缓慢添加羟乙基纤维素并混合组合物,直到获得平滑的凝胶。将混合物冷却至室温,并且将凝胶的pH记录为4.5。
E10-在混合时向烧杯中添加水、卡波姆。在加热至高达50℃时在羟乙基纤维素中搅拌并且使其混合45分钟。从加热中取出,并且当组合物达到约30℃时,添加丙烯酸钾共聚物。添加氢氧化钠以中和丙烯酸钾共聚物(直到溶液变得透明并且pH介于约6.5与约7之间。添加甘油、苯氧基乙醇;乙基己基甘油和苯甲酸钠适量并且调节pH至6.5-7.0。
E11-将卡波姆和水一起添加到烧杯中。然后添加Kathon CG。随后,将丙烯酸钾共聚物添加到组合物中,并且在搅拌下使用20%氢氧化钠溶液中和。形成透明凝胶,并且将pH记录为7.2。
实施例3
经由跨上皮细胞渗透(TEP)测试的温和度测试
按照上文详述的方法来测试E2、E3和C3的样品的TEP。
表3
样品 | <![CDATA[TEP:EC<sub>50</sub>]]> |
E2 | >8 |
E3 | 4.77+/-0.77 |
C3 | 3.46+/-0.62 |
与两者均含有丙烯酸钾共聚物的E2和E3(E3还含有壬苯醇醚N9)相比,含有壬苯醇醚N9和水的C3表现出显著的泄漏。E2和E3两者均在TEP测定中表明优异的温和性,而C3显示可能导致药剂经由粘膜组织渗透的膜损伤的可能性。
实施例4
丙烯酸钾共聚物(疏水改性聚合物)使用体外时间杀灭方法针对HSV-1的杀病毒作用。
使用上述方案,执行E1与挑战病毒菌株的中和研究,以确保采用的中和溶液(DeEngle[D/E]中和肉汤)在中和产物的杀病毒活性方面有效。中和溶液(D/E)有效地中和测试产品的杀病毒活性,并且显示为对病毒和细胞培养物无毒。
表4
+存在CPE(细胞毒性/细胞毒性作用)
0未检测到CPE(细胞毒性/细胞毒性作用)
NT未测试
N/A不适用
CT细胞毒性
从病毒对照#1回收的病毒群体为6.50log10,从病毒对照#2回收的病毒群体为6.25log10,并且从中和对照回收的病毒群体为6.25log10。观察到的差异不超过1log10,因此,测试病毒感染性不受影响。
令人惊讶的是,在15分钟、30分钟和1小时暴露之后,含有丙烯酸钾共聚物的E1组合物将HSV-1菌株HF(ATCC#VR-260)的感染性降低了4.00log10(99.99%)(表4)。
实施例5
针对HIV-1、乙型肝炎、流感、腺病毒和鼻病毒的实施方案的活性
按照上述方案,实施方案E1、A1、C1和C2针对广泛范围的HIV-1亚型和表示HIV-1全球多样性的广度的趋性来测试(表5)。
表5
*在抑制浓度水平或低于抑制浓度时,配方对细胞具有毒性。未确定活性。
nd:未完成
实施方案E1还显示针对表示另外的地理和遗传多样性的若干其它HIV-1菌株的类似活性,包括92UG029、92HT599、98IN017、92UG024、92RW020、92BR003、97ZA003、92UG035和93TH073,但不针对流感。实施方案A1令人惊讶地显示针对流感病毒的活性,同时不显示针对测试的其它包膜病毒的活性,如共同未决的专利申请代理人案卷号JCO6079USNP中所反映。我们推断,含有聚亚烷基二醇的组合物将有效抑制流感病毒,更理想的是聚乙二醇和聚丙二醇,最理想的是分子量更高的聚乙二醇,诸如约6000。我们进一步推断,含有低分子量疏水改性聚合物和聚亚烷基二醇两者的组合物在抑制包括流感在内的包膜病毒方面应当具有广谱活性。
如图所示,本发明实施方案在非常低的浓度下针对广泛范围的HIV-1亚型和趋性表现出活性。这些数据表明实施方案E1针对HIV-1的广谱活动。
实施例6:抗HIV-1活性的机制
在多个体外HIV-1作用机制确定测定中评估E1,以评估和确定其抗HIV作用机制。
结果:
如表6中所示,E1对治疗慢性感染HIV-1的细胞没有作用。另外,实施方案E1在防止HIV-1的细胞到细胞传播或防止HIV-1感染的细胞的融合方面是非活性的。实施方案E1在TZM-bl-FcRI细胞中的进入抑制测定中确实显示功效,表明聚合物是弱的进入抑制剂。E1能够抑制整合酶、蛋白酶和逆转录酶的HIV-1酶;然而,这种活性可能是非特异性的,并且预期无助于其针对细胞培养物中的病毒的功效。基于表6和表7中所含的数据,实施方案E1可能阻断HIV复制中的早期步骤,诸如病毒附接、融合或进入靶细胞中,但在逆转录之前。聚合物必须在感染之后的前1-2小时内存在,与阻断病毒复制中的早期步骤的其它活性物质一致。
表6:
TI:治疗指数(TC50/EC50)
*由于E1聚合物性质而得到的活性制品
表7:
化合物(MOA) | 其中抗病毒活性丧失的时间 |
Efavirenz(逆转录酶) | 4至8小时 |
T20(融合) | 0至2小时 |
PRO2000(CD4/gp120附接) | 0至2小时 |
E1 | 0至2小时 |
实施例7-粘膜细胞毒性测试
使用上述方案测试实施例E1的粘膜细胞毒性。将E1与广泛活性的抗病毒表面活性剂N-9进行比较。在所有测试的情况下,E1对细胞和组织的毒性比壬苯醇醚-9低,如表8中所阐述。另外,E1的毒性浓度是针对HIV-1显示功效的E1浓度的100-1000倍(表7)。这些数据表明E1的温和性和粘膜组织上的类似实施方案。
表8
在上述测试中,实施方案E1还表明在生物相关浓度(TC50>1450μg/ml)下对乳酸菌种群没有毒性。这进一步表明其与粘膜表面的相容性。
Claims (25)
1.一种抑制包膜病毒进入细胞中的方法,所述方法包括使所述病毒与包含至少一种低分子量疏水改性聚合物的抗病毒组合物接触,所述至少一种低分子量疏水改性聚合物的量有效抑制病毒进入细胞中,其中所述组合物基本上不含HLB大于12的表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述抗病毒组合物的TEP大于约6。
3.根据权利要求1所述的方法,所述方法进一步包括将所述抗病毒组合物施加到受试者的可感染表面。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述可感染表面包括由受试者的皮肤和粘膜组织组成的组中的一种或多种。
5.根据权利要求4所述的方法,其中所述粘膜组织包括选自由以下组成的组的组织:口腔组织、眼组织、鼻组织、阴道组织或直肠组织以及它们的组合。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述低分子量疏水改性聚合物选自由以下组成的组:低分子量丙烯酸类、纤维素、其它烯键式不饱和聚合物、聚酯、聚碳酸酯、聚酐、聚酰胺、聚氨酯、聚脲、聚酰亚胺、聚砜、聚硫化物、它们中两种或更多种的组合等。
7.根据权利要求6所述的方法,其中所述低分子量疏水改性聚合物包括聚合物,所述聚合物衍生自选自由(甲基)丙烯酸组成的组的至少一种第一单体组分和选自由一种或多种(甲基)丙烯酸C1至C9烷基酯组成的组的至少一种第二单体组分,其中低分子量共聚物具有约100,000或更小的数均分子量。
8.根据权利要求1所述的方法,其中所述低分子量疏水改性聚合物以所述组合物的约0.00005%至约10%重量百分比的量存在于所述组合物中。
9.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合物进一步包含至少50%的质子溶剂。
10.根据权利要求10所述的方法,其中所述组合物包含至少97%的水。
11.根据权利要求1所述的方法,其中所述病毒选自由以下组成的组:痘病毒、疱疹病毒、逆转录病毒科慢病毒以及它们的组合。
12.根据权利要求12所述的方法,其中选自疱疹病毒科的所述病毒是单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2以及它们的组合。
13.根据权利要求12所述的方法,其中选自逆转录病毒科慢病毒科的所述病毒是人免疫缺陷病毒1型。
14.根据权利要求1所述的方法,其中所述抑制病毒进入所述细胞中导致病毒感染的可能性降低。
15.根据权利要求1所述的方法,其中所述抗病毒组合物基本上不破坏生物表面。
16.一种抑制包膜病毒的进入的方法,所述方法包括使可感染表面与包含至少一种低分子量疏水改性聚合物的抗病毒组合物接触,所述至少一种低分子量疏水改性聚合物的量有效抑制病毒进入细胞中,其中所述组合物基本上不含表面活性剂。
17.根据权利要求17所述的抑制包膜病毒的进入的方法,所述方法进一步包括使所述病毒与所述抗病毒组合物接触。
18.一种抗病毒组合物,所述抗病毒组合物包含至少一种低分子量疏水改性聚合物和至少55%的水,所述至少一种低分子量疏水改性聚合物的量有效抑制病毒进入细胞中,其中所述组合物基本上不含表面活性剂。
19.一种抗病毒组合物,所述抗病毒组合物包含至少一种低分子量疏水改性聚合物和至少55%的水,所述至少一种低分子量疏水改性聚合物的量有效抑制病毒进入细胞中,其中所述组合物基本上不含HLB大于12的表面活性剂。
20.一种抑制病毒的传播的方法,所述方法包括向非生物表面施加包含至少一种低分子量疏水改性聚合物的组合物,所述至少一种低分子量疏水改性聚合物的量有效抑制病毒进入细胞中,其中所述组合物基本上不含表面活性剂。
21.一种抑制病毒的传播的方法,所述方法包括向可摄入表面施加包含至少一种低分子量疏水改性聚合物的组合物,所述至少一种低分子量疏水改性聚合物的量有效抑制病毒进入细胞中,其中所述组合物基本上不含表面活性剂。
22.根据权利要求18所述的组合物,其中所述组合物包含选自由以下组成的组的剂型:液体、洗剂、乳膏、凝胶、棒、喷剂、剃刮膏、软膏、清洁液体洗剂、固体棒、洗发剂、糊剂、粉末、摩丝、擦拭物、贴剂、伤口敷料、粘合绷带、水凝胶和膜。
23.根据权利要求19所述的组合物,其中所述疏水改性低分子量聚合物包括低分子量非交联直链丙烯酸共聚物,所述低分子量非交联直链丙烯酸共聚物衍生自选自由(甲基)丙烯酸组成的组的至少一种第一单体组分和选自由一种或多种(甲基)丙烯酸C1至C9烷基酯组成的组的至少一种第二单体组分,其中所述低分子量共聚物具有约100,000或更小的数均分子量。
24.根据权利要求19所述的组合物,其中所述疏水改性低分子量聚合物是丙烯酸钾共聚物。
25.根据权利要求25所述的组合物,其中所述组合物进一步包含壬苯醇醚-9。
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