CN115896195A - 一种l-草铵膦的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及农药生产技术领域，具体涉及一种L‑草铵膦的制备方法。本发明通过向外消旋草铵膦溶液中加入D‑氨基酸氧化酶，并滴加双氧水溶液，通过控制双氧水溶液的浓度和滴加速率，利用双氧水自身分解为提供氧化反应所需的氧气，氧化反应后又加入异丙醇、氨基酸脱氢酶和辅酶NAD+，在负压条件下加热进行胺化反应，得到L‑草铵膦。本发明提供的L‑草铵膦的制备方法，操作简单，降低了成产成本，避免了产生大量工业有机危废物质，符合绿色环保的工业化生产理念。
Description
技术领域
本发明涉及农药生产技术领域，尤其涉及一种L-草铵膦的制备方法。
背景技术
草铵膦是一种广谱含磷氨基酸类灭生性除草剂，具有高效、低毒、易降解、使用安全方便等特点，对一年生、多年生的双子叶和禾本科杂草具有较好的防除效果。草铵膦有两种光学异构体：L-草铵膦和D-草铵膦，现在市售草铵膦主要为两种异构体的外消旋混合物(DL-草铵膦)。目前已经证实D-草铵膦活性较低，仅为L-草铵膦活性的约10％。因此，L-草铵膦的开发能进一步提高草铵膦的活性，减少资源浪费，研究L-草铵膦的合成方法具有重要的市场价值和社会效益。
目前报道L-草铵膦的合成方法较多，主要有不对称化学合成法和生物酶转化法。化学合成法步骤长、收率低、成本高，产品光学纯度低，制约了工业化大规模生产。生物酶转化法具有反应条件温和，收率和光学纯度高的优点。生物酶转化法主要路线是采用D-草铵膦为原料，经D-氨基酸氧化酶将D-草铵膦氧化为2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸，L-草铵膦不参与反应而被保留，2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸再经转氨酶或氨基酸脱氢酶转化为L-草铵膦，或者利用化学手段合成2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸，经转氨酶或氨基酸脱氢酶转化为L-草铵膦，但成本较高。且在生物酶转化工艺中，不仅需要通入大量空气提供氧化反应需要的氧气，在使用转氨酶时，还需要加入过量的氨基供体(氨基酸或有机胺)保证2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸转化完全，而这些过量的氨基供体和对应的副产物将严重影响后续的分离纯化步骤。所以，生物酶转化合成L-草铵膦的过程中会产生大量含氨、含丙酮尾气，而尾气处理工艺复杂，处理成本较高。因此，研发一种绿色经济的合成L-草铵膦具有重大意义。
发明内容
针对现有技术中合成L-草铵膦过程中会产生大量含氨、含丙酮的尾气，且尾气处理工艺繁琐，处理成本高，不利于环保等问题，本发明提供了一种合成L-草铵膦的方法。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
一种L-草铵膦的制备方法，至少包括以下步骤：
步骤a、将外消旋草铵膦加水溶解，调节pH为7.5～8.5，得外消旋草铵膦溶液；
步骤b，40～45℃条件下，向所述外消旋草铵膦溶液中加入D-氨基酸氧化酶，混合均匀，然后滴加双氧水溶液，滴加过程保持体系pH为7.5～8.5，滴加结束后得氧化反应液；
步骤c、向所述氧化反应液中加入异丙醇、氨基酸脱氢酶和辅酶NAD+，负压条件下加热进行胺化反应，得L-草铵膦。
优选的，所述双氧水溶液的质量浓度为3％～8％，其加入方式为恒速滴加，滴加速率为0.5g/min～1.5g/min。
本发明设计了一种L-草铵膦的制备方法，通过控制双氧水的浓度和加入速率，可控制双氧水的分解速率，为氧化反应提供充足的氧气，实现氧化反应的高效进行；并且，本发明利用氨基酸脱氢酶避免了添加大量的氨基供体，引入大量含氨杂质。我们通过大量实验，意外发现在特定条件下，双氧水能稳定自分解，无需加入过氧化氢酶，即实现D-草铵膦的高效氧化，而双氧水具有较强的氧化性，加入速度过快或浓度过高则产物易发生氧化，收率降低，通过控制双氧水的浓度和加入速度，很好的实现了D-草铵膦的高效催化氧化。2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸在异丙醇和NAD+存在下，通过氨基酸脱氢酶还原为L-草铵膦，异丙醇被氧化为丙酮，该反应是一个可逆反应，通过移除反应生成的丙酮，使反应进行完全。本发明提供的L-草铵膦的制备方法，操作简单，降低了成产成本，避免产生大量工业有机危废物质，符合绿色环保的工业化生产理念。
优选的，所述外消旋草铵膦溶液的质量浓度为5％～15％。
优选的，所述双氧水溶液中H2O2、异丙醇和外消旋草铵膦摩尔比为0.5～0.8:0.6～1:1。
优选的，所述辅酶NAD+的加入量为外消旋草铵膦摩尔量的0.05％～0.5％。
优选的，所述D-氨基酸氧化酶为含有D-氨基酸氧化酶的湿菌体或经过提纯的酶。
优选的，所述D-氨基酸氧化酶的加入量为400U/L～1500U/L。
优选的，所述氨基酸脱氢酶的加入量为700U/L～1750U/L。
优选的，步骤c中，所述胺化反应的温度为40～45℃，压力为-0.10MPa～-0.08MPa，反应时间为2h～5h。
优选的，步骤c中，采用无油立式真空泵抽负压，并将真空泵抽取的气体进行冷凝回收丙酮。
本发明通过负压抽取冷凝生产中的气体，促进反应的高效进行，通过负移除回收丙酮，加快了反应的速率，促使反应向正反应方向进行完全。
优选的，步骤c中，冷凝温度为-20℃～-10℃。
本发明通过控制反应体系温度，利用负压冷凝移除反应体系中的丙酮，实现了丙酮高效回收，避免了尾气中丙酮回收率低，导致产生含丙酮等环境危废物质的问题。
优选的，步骤a和步骤b中，采用质量浓度10％～35％的氨水溶液调节pH。
针对现有外消旋草铵膦生物酶转化工艺中产生大量含氨、含丙酮尾气，环保处理工艺复杂，处理成本高的问题，本发明提供一种外消旋草铵膦生物酶转化合成L-草铵膦的绿色合成方法。相对于现有技术，本发明提供的外消旋草铵膦生物酶转化合成L-草铵膦的方法中，使用低浓度双氧水替代空气或氧气，不需要加入昂贵的过氧化氢酶，降低了生产成本，且利用氨基酸脱氢酶避免了添加大量的氨基供体，引入大量含氨杂质，避免了反应尾气中含氨物质的产生，解决了尾气处理的一大难题。同时采用负压冷凝回收反应生产的丙酮，避免丙酮对反应的抑制作用，减少了丙酮逸散环境风险，回收丙酮经处理后可作为副产品，减少资源浪费。本发明工艺简单，无复杂的废气处理系统，在大规模工业化生产L-草铵膦中具有极高的应用价值。
附图说明
图1为实施例2中D/L-草铵膦的高效液相色谱图；
图2为实施例2中2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中的D-氨基酸氧化酶、氨基酸脱氢酶和辅酶NAD+均为已知，所述D-氨基酸氧化酶菌体、氨基酸脱氢酶菌体的制备采用中国专利CN109609474B、CN109576236A、CN112391363A中公开方法制备。
酶活力定义：1个酶活力单位是指在特定条件(30℃)下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量，称为一个国际单位(IU，又称U)。
比酶活(U/g)：单位酶重量的酶活力单位量
D-氨基酸氧化酶的酶活力测定：
将称取好的D/L-草铵膦加入到适量水中溶解，用20％的氨水调pH至8.0，溶液总量为300ml，加入称量好的D-氨基酸氧化酶菌体，菌体浓度为15g/L，底物(D-草铵膦)浓度为400mM，通入空气，通气量为3vvm，在30℃，转速500rpm的条件下进行反应，反应1h后，取样500μL，向其中加入500μL5％的盐酸，震荡混匀，反应终止；12000rpm离心三分钟，取上清液，通过液相色谱测定D-草铵膦的含量，计算反应过程中D-草铵膦减少量。
酶活(U)＝D-草铵膦减少量(μmol)/反应时间60min。
D-氨基酸氧化酶菌体的比酶活(U/g)＝酶活U/D-氨基酸氧化酶菌体重量
氨基酸脱氢酶酶活力测定：
将称取好的底物2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸、异丙醇和NAD+加入到适量水中溶解，用20％的氨水调pH至8.0，溶液总量为300ml，加入氨基酸脱氢酶菌体，菌体浓度为15g/L，2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸浓度为400mM的、异丙醇浓度为500mM、NAD+浓度为4mM，通入空气，通气量为1vvm，在30℃，转速500rpm的条件下进行反应，反应1h后，取样500μL，向其中加入500μL5％的盐酸震荡混匀，反应终止；12000rpm离心三分钟，取上清液，通过液相色谱测定2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸的含量，计算反应过程中2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸的减少量。
酶活(U)＝2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸减少量(μmol)/反应时间60min。
氨基酸脱氢酶菌体的比酶活(U/g)＝酶活U/氨基酸脱氢酶菌体重量
D-草铵膦/L-草铵膦含量采用高效液相色谱进行测定，具体测试条件如下：
色谱柱：SUMICHIRAL OA-5000L，4.6mm*150mm，5μm；
流动相：0.5g硫酸铜加3mL乙腈，加水溶解，定容至1000mL，用0.45μm滤膜过滤，超声脱气后备用；
流动相流速：1mL/min；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
进样体积：10μL；
保留时间：D-草铵膦10.2min；L-草铵膦12.3min。
2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸含量采用高效液相色谱法测定，具体测试条件如下：
色谱柱Welchrom QS-C18，4.6×250mm，5μm
流动相配置：称量5.75g磷酸二氢胺(纯度>99％)和1g四丁基溴化铵(纯度>99％)，加入1L超纯水，完全溶解后，加磷酸调pH到3.8，用0.45μm的水系膜抽滤，与136mL色谱级乙腈混匀，超声脱气30min后备用；
检测波长为：232nm；
进样体积：10μL；
柱温：40℃；
流动相流速：1mL/min；
2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸保留时间11.2min。
实施例1
本实施例提供一种L-草铵膦，其制备方法具体包括如下步骤：
取外消旋草铵膦166.7g(D/L草铵膦含量为95％，0.8mol)加水500g搅拌溶解，加质量分数为20％的氨水调节pH至7.5，继续加水稀释至溶液总质量1056g(1L)，加热至40℃，加入D-氨基酸氧化酶菌体5g(比酶活300U/g)，即体系D-氨基酸氧化酶加入量为1500U/L，取质量分数为8％双氧水285.7g，以0.8g/min的滴加速率恒速滴加，滴加双氧水过程中用质量分数为20％的氨水控制反应pH为7.5，并用高效液相色谱法检测D-草铵膦含量，滴加完毕后，得到氧化反应液。
向氧化反应液中加入异丙醇48g(0.8mol)、NAD+2.7g(4.07mmol)、氨基酸脱氢酶菌体5g(比酶活350U/g)，即体系氨基酸脱氢酶加入量为1750U/L，升温至40℃，搅拌，利用真空泵抽负压，压力为-0.10Mpa，反应产生的气体进入低温冷凝罐回收丙酮，回收罐内温度-15℃，反应液在40℃的条件下反应4h，利用高效液相色谱法检测2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸剩余量，反应完成后得到胺化反应液，将胺化反应液降至室温，过滤，洗涤得到L-草铵膦溶液1420g，测定L-草铵膦含量11.0％，D-草铵膦含量0％，两步反应L-草铵膦收率98.6％，ee 100％，回收丙酮26g，丙酮收率为85％，纯度为95.2％。
实施例2
本实施例提供一种L-草铵膦，其制备方法具体包括如下步骤：
取外消旋草铵膦166.7g(D/L草铵膦含量为95％，0.8mol)加水500g搅拌溶解，加质量分数为20％的氨水调节pH至8.5，继续加水稀释至溶液总质量3168g(3L)，加热至45℃，加入D-氨基酸氧化酶菌体4g(比酶活300U/g)，即体系D-氨基酸氧化酶加入量为400U/L，取质量分数为5％双氧水453.3g，以0.9g/min的滴加速率恒速滴加，滴加双氧水过程中用质量分数为20％的氨水控制反应pH为8.5，并用高效液相色谱法检测D-草铵膦含量，滴加完毕后，得到氧化反应液。
向氧化反应液中加入异丙醇28.8g(0.48mol)、NAD+0.27g(0.41mmol)、氨基酸脱氢酶菌体6g(比酶活350U/g)，即体系氨基酸脱氢酶加入量为1050U/L，升温至45℃，搅拌，利用真空泵抽负压，压力为-0.10Mpa，反应产生的气体进入低温冷凝罐回收丙酮，回收罐内温度-10℃，反应液在45℃的条件下反应5h，利用高效液相色谱法检测2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸剩余量，反应完成后得到胺化反应液，将胺化反应液降至室温，过滤，洗涤得到L-草铵膦溶液3820g，测定L-草铵膦含量4.1％，D-草铵膦含量0％，两步反应L-草铵膦收率98.9％，ee100％，回收丙酮30g，丙酮收率为89％，纯度为95.9％。
实施例3
本实施例提供一种L-草铵膦，其制备方法具体包括如下步骤：
取外消旋草铵膦166.7g(D/L草铵膦含量为95％，0.8mol)加水500g搅拌溶解，加质量分数为20％的氨水调节pH至8.0，继续加水稀释至溶液总质量1056g(1L)，加热至40℃，加入D-氨基酸氧化酶菌体5g(比酶活300U/g)，即体系D-氨基酸氧化酶加入量为1500U/L，取质量分数为5％双氧水353.6g，以1.0g/min的滴加速率恒速滴加，滴加双氧水过程中用质量分数为20％的氨水控制反应pH为8.0，并用高效液相色谱法检测D-草铵膦含量，滴加完毕后，得到氧化反应液。
向氧化反应液中加入异丙醇35g(0.58mol)、NAD+0.4g(0.60mmol)、氨基酸脱氢酶菌体5g(比酶活350U/g)，即体系氨基酸脱氢酶加入量为1750U/L，升温至40℃，搅拌，利用真空泵抽负压，压力为-0.11Mpa，反应产生的气体进入低温冷凝罐回收丙酮，回收罐内温度-15℃，反应液在40℃的条件下反应4h，利用高效液相色谱法检测2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸剩余量，反应完成后得到胺化反应液，将胺化反应液降至室温，过滤，洗涤得到L-草铵膦溶液1610g，测定L-草铵膦含量9.6％，D-草铵膦含量0％，两步反应L-草铵膦收率97.6％，ee100％，回收丙酮30g，丙酮收率为72％，纯度为93.1％。
实施例4
本实施例提供一种L-草铵膦，其制备方法具体包括如下步骤：
取外消旋草铵膦166.7g(D/L草铵膦含量为95％，0.8mol)加水500g搅拌溶解，加质量分数为300g/L的氨水调节pH至8.0，继续加水稀释至溶液总质量1056g(1L)，加热至40℃，加入D-氨基酸氧化酶菌体5g(比酶活300U/g)，即体系D-氨基酸氧化酶加入量为1500U/L，取质量分数为5％双氧水353.6g，以1.0g/min的滴加速率恒速滴加，滴加双氧水过程中用质量分数为20％的氨水控制反应pH为8.0，并用高效液相色谱法检测D-草铵膦含量，滴加完毕后，得到氧化反应液。
向氧化反应液中加入异丙醇35g(0.58mol)、NAD+0.4g(0.60mmol)、氨基酸脱氢酶菌体4g(比酶活350U/g)，即体系氨基酸脱氢酶加入量为1400U/L，升温至40℃，搅拌，利用真空泵抽负压，压力为-0.09Mpa，反应产生的气体进入低温冷凝罐回收丙酮，回收罐内温度-25℃，反应液在40℃的条件下反应5h，利用高效液相色谱法检测2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸剩余量，反应完成后得到胺化反应液，将胺化反应液降至室温，过滤，洗涤得到L-草铵膦溶液1580g，测定L-草铵膦含量9.8％，D-草铵膦含量0％，两步反应L-草铵膦收率97.7％，ee100％，回收丙酮25g，丙酮收率为76％，纯度为93.6％。
对比例1
本对比例提供一种L-草铵膦，其制备方法具体包括如下步骤：
取外消旋草铵膦166.7g(D/L草铵膦含量为95％，0.8mol)加水500g搅拌溶解，加质量分数为20％的氨水调节pH至8.0，继续加水稀释至溶液总质量1056g(1L)，加热至40℃，加入D-氨基酸氧化酶菌体5g(比酶活300U/g)，即体系D-氨基酸氧化酶加入量为1500U/L，取质量分数为5％的双氧水353.6g直接加入反应体系中，用质量分数为20％的氨水控制反应pH为8.0，并用高效液相色谱法检测D-草铵膦含量，得到氧化反应液。
向氧化反应液中加入异丙醇35g(0.58mol)、NAD+0.4g(0.6mmol)、氨基酸脱氢酶菌体5g(比酶活350U/g)，即体系氨基酸脱氢酶加入量为1750U/L，升温至40℃，搅拌，利用真空泵抽负压，压力为-0.10Mpa，反应产生的气体进入低温冷凝罐回收丙酮，回收罐内温度-15℃，反应液在40℃的条件下反应5h，利用高效液相色谱法检测2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸剩余量，反应完成后得到胺化反应液，将胺化反应液降至室温，过滤，洗涤得到L-草铵膦溶液1590g，测定L-草铵膦含量8.8％，D-草铵膦含量0％，两步反应L-草铵膦收率88.3％，ee100％，回收丙酮25g，丙酮收率为85％，纯度为94.2％。
对比例2
本对比例提供一种L-草铵膦，其制备方法具体包括如下步骤：
取外消旋草铵膦166.7g(D/L草铵膦含量为95％，0.8mol)加水500g搅拌溶解，加质量分数为20％的氨水调节pH至7.5，继续加水稀释至溶液总质量1056g(1L)，加热至40℃，加入D-氨基酸氧化酶菌体5g(比酶活300U/g)，即体系D-氨基酸氧化酶加入量为1500U/L，取质量分数为25％双氧水91.6g，以0.8g/min的滴加速率恒速滴加，滴加双氧水过程中用质量分数为20％的氨水控制反应pH为7.5，并用高效液相色谱法检测D-草铵膦含量，滴加完毕后，得到氧化反应液。
向氧化反应液中加入异丙醇48g(0.8mol)、NAD+2.7g(4.07mmol)、氨基酸脱氢酶菌体5g(比酶活350U/g)，即体系氨基酸脱氢酶加入量为1750U/L，升温至40℃，搅拌，利用真空泵抽负压，压力为-0.10Mpa，反应产生的气体进入低温冷凝罐回收丙酮，回收罐内温度-15℃，反应液在40℃的条件下反应5h，利用高效液相色谱法检测2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸剩余量，反应完成后得到胺化反应液，将胺化反应液降至室温，过滤，洗涤得到L-草铵膦溶液1220g，测定L-草铵膦含量8.1％，D-草铵膦含量0％，两步反应L-草铵膦收率62.4％，ee100％，回收丙酮15g，丙酮收率为62％，纯度为93.1％。
对比例3
本对比例提供一种L-草铵膦，其制备方法具体包括如下步骤：
取外消旋草铵膦166.7g(D/L草铵膦含量为95％，0.8mol)加水500g搅拌溶解，加质量分数为20％的氨水调节pH至8.0，继续加水稀释至溶液总质量1056g(1L)，加热至40℃，加入D-氨基酸氧化酶菌体5g(比酶活300U/g)，即体系D-氨基酸氧化酶加入量为1500U/L，取质量分数为10％双氧水228.5g，以0.8g/min的滴加速率恒速滴加，滴加双氧水过程中用质量分数为20％的氨水控制反应pH为8.0，并用高效液相色谱法检测D-草铵膦含量，滴加完毕后，得到氧化反应液。
向氧化反应液中加入异丙醇48g(0.8mol)、NAD+2.7g(4.07mmol)、氨基酸脱氢酶菌体5g(比酶活350U/g)，即体系氨基酸脱氢酶加入量为1750U/L，升温至40℃，搅拌，利用真空泵抽负压，压力为-0.10Mpa，反应产生的气体进入低温冷凝罐回收丙酮，回收罐内温度-15℃，反应液在40℃的条件下反应5h，利用高效液相色谱法检测2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸剩余量，反应完成后得到胺化反应液，将胺化反应液降至室温，过滤，洗涤得到L-草铵膦溶液1245g，测定L-草铵膦含量11.5％，D-草铵膦含量0％，两步反应L-草铵膦收率90.4％，ee100％，回收丙酮20g，丙酮收率为85.4％，纯度为91.7％。
综上所述，本发明提供的外消旋草铵膦生物酶转化合成L-草铵膦的方法中，氧化反应利用低浓度双氧水分解产生氧气，避免了反应尾气的产生，不需要加入昂贵的过氧化氢酶，降低了生产成本，也不需要添加大量的氨基酸供体引入含氨杂质，同时胺化反应采用负压冷凝回收处理反应生产的丙酮，避免丙酮对反应的抑制作用，减少了丙酮逸散环境风险，回收的丙酮经处理后可作为副产品，减少资源浪费。本发明工艺简单，无复杂的废气处理系统，在大规模工业化生产L-草铵膦中具有极高的应用价值。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种L-草铵膦的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤a、将外消旋草铵膦加水溶解，调节pH为7.5～8.5，得外消旋草铵膦溶液；
步骤b，40～45℃条件下，向所述外消旋草铵膦溶液中加入D-氨基酸氧化酶，混合均匀，然后滴加双氧水溶液，滴加过程保持体系pH为7.5～8.5，滴加结束后得氧化反应液；
步骤c、向所述氧化反应液中加入异丙醇、氨基酸脱氢酶和辅酶NAD+，负压条件下加热进行胺化反应，得L-草铵膦；
其中，所述双氧水溶液的质量浓度为3％～8％，其加入方式为恒速滴加，滴加速率为0.5g/min～1.5g/min。
2.如权利要求1所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：所述外消旋草铵膦溶液的质量浓度为5％～15％。
3.如权利要求1所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：所述双氧水溶液中H2O2、异丙醇和外消旋草铵膦摩尔比为0.5～0.8:0.6～1:1。
4.如权利要求1所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：所述辅酶NAD+的加入量为外消旋草铵膦摩尔量的0.05％～0.5％。
5.如权利要求1所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：所述D-氨基酸氧化酶的加入量为400U/L～1500U/L。
6.如权利要求1所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：所述氨基酸脱氢酶的加入量为700U/L～1750U/L。
7.如权利要求1所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：步骤c中，所述胺化反应的温度为40℃～45℃，压力为-0.10MPa～-0.08MPa，反应时间为2h～5h。
8.如权利要求1所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：步骤c中，采用采用无油立式真空泵抽负压，并将真空泵抽取的气体进行冷凝回收丙酮。
9.如权利要求8所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：步骤c中，冷凝温度为-20℃～-10℃。
10.如权利要求1所述L-草铵膦的制备方法，其特征在于：步骤a和步骤b中，采用质量浓度10％～35％的氨水溶液调节pH。
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