CN115894625A - 一种具有抗衰老功效的多肽及其应用 - Google Patents

一种具有抗衰老功效的多肽及其应用 Download PDF

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CN115894625A CN202310055686.3A CN202310055686A CN115894625A CN 115894625 A CN115894625 A CN 115894625A CN 202310055686 A CN202310055686 A CN 202310055686A CN 115894625 A CN115894625 A CN 115894625A
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段小群
李小川
王宇晖
卢曦
刘梦
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Suzhou Xiaoxiao Biopharmaceutical Co ltd
Guilin Medical University
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Suzhou Xiaoxiao Biopharmaceutical Co ltd
Guilin Medical University
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Abstract

本发明公开了一种具有抗衰老功效的多肽,该多肽的氨基酸序列为:Gly‑Pro‑Arg‑Pro‑Ala‑Try;多肽的结构如式Ⅰ所示。本发明多肽具有清除ROS、抑制MMP‑1生成、增加I型胶原产生、促进HaCat迁移和增殖以重建表皮并恢复屏障功能,具有抗衰老作用,因而具有开发成抗衰老化妆品如眼霜、唇膜、面霜、面膜、精华液、爽肤水、润肤乳、身体乳和沐浴露的前景。本发明还公开了所述的多肽在制备抗衰老化妆品中的应用。
Figure DDA0004060516750000011

Description

一种具有抗衰老功效的多肽及其应用
技术领域
本发明属于多肽领域,具体涉及一种具有抗衰老功效的多肽及其应用。
背景技术
衰老是生理机能下降和代谢紊乱的表现。分为内在的时间老化和由各种外部刺激引起的外在老化。与时间老化不同,紫外线、环境污染、吸烟、酗酒等都会引起外在老化。其中,紫外线是最重要的因素。因此,外在老化也称为光老化。即使皮肤可以自我再生和修复,但内在的时间老化是不可逆的,而过度暴露在紫外线下会加剧皮肤老化,累积的皮肤损伤会增加皮肤癌的发病率,降低生活质量,并带来经济负担。因此,如果要改善皮肤健康并维持生活质量,就必须减轻光老化。
太阳辐射是与皮肤老化损伤相关的最重要因素。太阳光中的紫外线(UV)分为三种:长波UVB(315-400nm)、中波UVB(280-315nm)和短波UVC(100-280nm)。在接触皮肤之前,UVC几乎全部被臭氧层吸收,与UVB相比,UVB能量更大,主要被表皮细胞吸收。因此,UVB被认为是造成光老化损伤的主要原因。当紫外线照射强度每天大于3.7mJ/cm2时,皮肤内氧化还原平衡可能被破坏,随后细胞膜脂质过氧化,乳酸脱氢酶(LDH)释放,抗氧化剂如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和抗氧化肽如还原型谷胱甘肽的水平降低(GSH)。当皮肤暴露于过多的紫外线辐射时,还会导致活性氧(ROS)的积累,过量的ROS不能被人体正常代谢,从而激活各种信号通路,包括MAPK和NF-κB信号通路,并攻击生物大分子,如核酸、蛋白质和脂质,导致角质形成细胞(HaCat)的炎症、凋亡和细胞毒性,最终引起皮肤老化和光损伤,皮肤老化和光损伤表现包括红斑、烧伤、炎症激活和皮肤癌。因此,对抗太阳辐射造成的氧化损伤在一定程度上可以减轻光老化。
近年来,由于化学抗氧化添加剂的潜在毒性,高效低毒的天然抗氧化剂成为皮肤光老化研究的重要方向。尽管已有的抗氧化剂如维生素C(VC)、维生素E、白藜芦醇和SOD等对紫外线辐射等因素造成的皮肤损伤具有保护作用,但长期使用仍会导致多种不良反应。此外,许多抗氧化剂由于其抗氧化活性低、不稳定性和难以大规模合成,应用受到限制。因此,如何开发新的抗氧化剂仍然是一个重要的挑战。
多肽是目前皮肤抗衰老的另外一个重要方向。生物体内许多具有抗氧化性的物质属于蛋白质和肽类,由于蛋白质和肽类具有优良的乳化特性,能在油水界面起介导作用,因此在清除体内过量自由基、抑制膜脂质过氧化方面有重要意义。肌肽具有很强的抗氧化活性,可抑制氧自由基、金属离子等催化的脂类氧化,保护机体清除自由基的能力,从而具有广泛的细胞保护作用,可以减慢细胞衰老进程。谷胱甘肽能够抗氧化损伤和解毒抗细胞凋亡,对身体的每个细胞、组织和器官实施着全面保护,影响衰老的速度。白蛋白肽是鸡卵清白蛋白通过酶解获得的小分子肽,与卵清蛋白相比,它更有利于人体吸收,并且对机体具有多种生理调节功能,如抗氧化延缓衰老、增强机体免疫力、抑制血管紧张素转换酶产生降血压作用等。信号类胜肽和胶原蛋白相关,它可以刺激胶原蛋白的生成,还能促进弹性蛋白、透明质酸、糖胺聚糖和纤维连接蛋白的生成以延缓衰老。
发明内容
光老化是由紫外线辐射引起的皮肤表皮增生、干燥和细胞外基质降解。光老化的主要原因是紫外线辐射产生的ROS通过信号通路如MAPK信号传导介导基质金属蛋白酶(MMPs)和I型前胶原蛋白的表达通路,从而导致皮肤细胞外基质(ECM)的降解和成纤维细胞的凋亡。MMPs的表达是皮肤光老化的重要指标之一,MMPs包括MMP-1、MMP-3和MMP-9,具有降解胶原蛋白和其他ECM蛋白的能力,然而,其过表达会导致广泛的生理和病理过程,MMPs的产生会降解胶原蛋白片段从而干扰新胶原蛋白的合成。MMP-1是通过光老化降解ECM中最重要的MMP,它主要负责降解支持真皮结构的最丰富的I型胶原。在MMP-1之后,MMP-9进一步分解胶原碎片。MMP-9降解ECM并影响皮肤皱纹形成和皮肤厚度。由此可见,MMPs的产生和I型胶原蛋白的降解在光老化中起着重要的作用,众多治疗药物的筛选关键主要取决于抑制MMP-1产生和控制胶原代谢的能力。如今,具有抑制MMPs能力的天然化合物,尤其是抗氧化剂,已成功用于预防光老化。因此,发现那些具有ROS清除活性的MMPs抑制剂似乎是增加用于皮肤光老化疗法的I型胶原产生的前景治疗方法。
基于此,发明人通过结构修饰得到新的多肽,以该多肽为研究对象,通过建立UVB辐射的HaCaT细胞模型,探讨其对UVB照射HaCaT细胞损伤的保护作用,研究表明本发明多肽具有清除ROS、抑制MMP-1生成,增加I型胶原产生,促进HaCat迁移和增殖以重建表皮并恢复屏障功能,具有抗衰作用,因而具有开发成抗衰老化妆品如眼霜、唇膜、面霜、面膜、精华液、爽肤水、润肤乳、身体乳和沐浴露的前景。
本发明的目的在于提供一种具有抗衰老功效的多肽。
一种具有抗衰老功效的多肽,该多肽的氨基酸序列为:Gly-Pro-Arg-Pro-Ala-Try。
Gly表示英文名称为Glycine,中文名称为L-甘氨酸的相应残基;
Pro表示英文名称为Proline,中文名称为L-脯氨酸的相应残基;
Arg表示英文名称为Arginine,中文名称为L-精氨酸的相应残基;
Ala表示英文名称为Alanine,中文名称为丙氨酸的相应残基;
Try表示英文名称为D-Tyrosine,中文名称为D-酪氨酸的相应残基;
所述的多肽的结构如式Ⅰ所示:
Figure BDA0004060516730000031
本发明的另一个目的是提供所述的多肽在制备抗衰老化妆品中的应用。
优选的,所述的应用为在制备具有清除ROS、抑制MMP-1生成、增加I型胶原产生、促进人永生化角质形成细胞HaCat迁移和增殖以重建表皮并恢复屏障功能的至少一种功能的抗衰老化妆品中的应用。
本发明的另一个目的是提供一种抗衰老化妆品,它是以本发明所述的具有抗衰老功效的多肽为活性成分。
所述的化妆品可以为眼霜、唇膜、面霜、面膜、精华液、爽肤水、润肤乳、身体乳和沐浴露。
附图说明
图1为UVB照射剂量的筛选结果。
图2为多肽对HaCaT细胞活力的影响。
图3为多肽对UVB诱导HaCaT细胞ROS的影响。
图4为HaCaT细胞伤口愈合实验的代表性图片。
图5为HaCaT细胞伤口愈合实验的伤口愈合率。
图6为各组HaCaT细胞中抗衰老相关蛋白的条带。
图7为各组HaCaT细胞中抗衰老相关蛋白条带的数据统计结果。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容,但并不以此限定本发明的保护范围。
实施例1
多肽的合成方法,步骤如下:
步骤(1)、根据目标多肽的重量(10mg)计算每种原料(均为带保护基团的原料)的重量:0.24mmol Fmoc-D-Tyr(tBu)-OH、0.72mmol Fmoc-Ala-OH、0.72mmol Fmoc-Pro-OH、0.72mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、0.72mmol Fmoc-Pro-OH、0.72mmol Fmoc-Gly-OH;
步骤(2)、将500mg Rink Amide-MBHA Resin树脂放入150mL反应器中,加入50mlDCM(二氯甲烷)浸泡2小时,用循环水式真空泵抽掉DCM,再加入50mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺),把反应器放在脱色摇床上摇晃30s,用循环水式真空泵抽掉DMF,再次加入50mL DMF,如此重复四次,将树脂抽干;
步骤(3)、称取0.24mmol Fmoc-D-Tyr(tBu)-OH(C端第一个氨基酸)、50mL DCM、0.1mL DIEA加入到反应器中,将反应器置于30℃的摇床中反应2小时;待反应结束,加入50mL DCM,再加入甲醇和DIEA各0.1mL,封闭树脂上未反应的官能团结构,防止参与下一步反应,将反应器置于30℃的摇床中反应30min(树脂和甲醇的摩尔比为1:3,DCM作为溶剂,DIEA主要提供碱性环境,起到催化的作用),反应结束后,用循环水式真空泵抽掉反应器中的液体,并加入50mL DMF,把反应器放在脱色摇床上摇晃30s,用循环水式真空泵抽掉DMF,再次加入50mL DMF,如此重复四次,将树脂抽干;
步骤(4)、向反应器中加入50mL 20%哌啶溶液(由哌啶和DMF的体积比为=1:4配制而成),把反应器放在脱色摇床上摇晃20min以脱去Fmoc保护基团,反应结束后,用循环水式真空泵抽掉反应器中的液体,并加入50mL DMF,把反应器放在脱色摇床上摇晃30s,用循环水式真空泵抽掉DMF,再次加入50mL DMF,如此重复四次,将树脂抽干;
步骤(5)、取少量树脂,用茚三酮法检测,若树脂检测显蓝色,说明脱保护成功;若树脂无颜色,则重复步骤(4)直至用茚三酮法检测后树脂显蓝色;
步骤(6)、称取0.72mmol Fmoc-Ala-OH(C端第二个氨基酸)、0.72mmol HOBT(HOBT主要是防止消旋)、0.1mL DIC(DIC主缩合试剂),加入到反应器中,再加入50mL DMF使氨基酸与树脂混合,将反应器置于30℃的恒温摇床中反应1小时;待反应完全后,抽掉液体,加入50mL DMF,把反应器放在脱色摇床上摇晃30s,再用循环水式真空泵抽掉DMF,如此重复四次,将树脂抽干;
步骤(7)、取少量树脂,用茚三酮法检测,若树脂为无色,说明反应完全,用循环水式真空泵抽掉液体,加入50mL DMF,把反应器放在脱色摇床上摇晃30s,再用循环水式真空泵抽掉DMF,如此重复四次,将树脂抽干;若树脂有颜色,说明缩合反应不完全,继续反应1h,直到检测无色;
步骤(8)、向反应器中加入50mL 20%哌啶(由哌啶和DMF体积比=1:4配制而成),放在脱色摇床上摇晃20min,再用循环水式真空泵抽掉液体,再次加入50mL DMF,将反应器放在脱色摇床上摇晃30s,再用循环水式真空泵抽掉DMF,如此重复四次,将树脂抽干;
步骤(9)、检测是否脱去保护基团:取少量树脂,用茚三酮法检测,若树脂无色,说明脱保护不成功,则按照步骤(8)再次加入哌啶反应,直到树脂有颜色;若树脂显蓝色,则重复步骤(6);
步骤(10)、按照步骤(6)-步骤(9),将Fmoc-Ala-OH替换为Fmoc-Pro-OH(C端第三个氨基酸)连接氨基酸;再按照步骤(6)-步骤(9),将Fmoc-Ala-OH替换为Fmoc-Arg(Pbf)-OH(C端第四个氨基酸)连接氨基酸;再按照步骤(6)-步骤(9),将Fmoc-Ala-OH替换为Fmoc-Pro-OH(C端第五个氨基酸)连接氨基酸;再按照步骤(6)-步骤(9),将Fmoc-Ala-OH替换为Fmoc-Gly-OH(C端第六个氨基酸)连接氨基酸;
步骤(11)、按照TFA和水的体积比=19:1配制切割试剂,量取10mL切割液,倒进锥形瓶中,将锥形瓶置于脱色摇床上25℃反应2h;待反应结束后,将锥形瓶中的液体倒入50ml离心管中,再向离心管中加入40ml冰乙醚,盖上盖子,放入转速为3000r/min的离心机中,离心将多肽沉降在管底,倒去上清液,得到多肽粗品;
步骤(12)、多肽粗品用水溶解,通过高效液相色谱仪器(HPLC)将目标肽段与杂质分离,将目标肽段冻干成粉末;
其中,HPLC色谱条件为:色谱柱:YMC-Triart C18(4.6×250mm,5μm);流动相:A:0.1%三氟乙酸水溶液,B:0.1%三氟乙酸乙腈溶液;流速:1mL/min;检测波长:214nm;进样体积:10μl;洗脱程序如表1:
表1.洗脱程序
Figure BDA0004060516730000051
多肽的氨基酸序列为:Gly-Pro-Arg-Pro-Ala-Try;ESI-MS m/z:659.45[M+H]+;多肽的结构式如式Ⅰ所示:
Figure BDA0004060516730000061
实施例2
1.材料
1.1细胞株
人永生化角质形成细胞HaCaT(编号:KCB200442YJ)购自中科院昆明细胞库,由本实验室自行培养和传代。使用含有青霉素(100IU/mL)-链霉素(100μg/mL)和10%热灭活FBS的DMEM,在37℃、5% CO2的湿润培养箱中培养。
1.2实验试剂
Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)、胎牛血清(FBS)和100×青霉素-链霉素溶液购自Invitrogen Inc.(Grand Island,NY,USA)。二甲基亚砜(DMSO)和3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)购自Amresco Inc.(Solon,OH,USA)。VC购自上海源聚生物科技有限公司。活性氧检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司。基质金属蛋白酶1(MMP-1)和I型胶原蛋白抗体购自沈阳万类生物科技有限公司。GAPDH抗体购自美国BD公司。
1.3实验仪器
UVB照射灯,英国皇家飞利浦电子公司;
酶标仪(型号:Epoch),美国Bio-tek;
倒置荧光显微镜(型号:Nikon),日本尼康;
水平摇床(型号:WD-9405F),北京六一;
小型台式冷冻离心机(型号:5418),德国Eppendorf;
掌上离心机(型号:D1008E),美国SCILOGEX;
低速自动平衡离心机(型号:TD4B),上海卢湘;
分析天平(型号:TB214),北京塞托利斯;
电热恒温水槽(型号:DK-8B),上海精宏科技;
全自动雪花制冰机(型号:IMS-50),常熟雪科;
旋涡混合器(型号:VORTEX-5),江苏海门其林贝尔;
超净工作台(型号:WOL-SY020),广州沃霖实验设备;
液氮罐(型号:YDZ-15),北京君方科仪;
二氧化碳恒温培养箱(型号:15AIC),日本SANYO。
2.实验方法及结果
2.1细胞培养
(1)细胞复苏
将装有HaCaT细胞的冻存管从液氮中迅速移出,置于37℃水浴锅中融化约60s,完全溶解后将含细胞的冻存液转移至15mL离心管中,加入9mL DMEM完全培养基,2000rpm/min离心5min后弃去上清液,加入1mL DMEM完全培养基,反复吹打混匀,待细胞完全悬浮后,转移到细胞培养瓶中,再向培养瓶中加入3mL完全培养基,加盖后十字水平摇匀10次以上,然后置于培养箱中培养。
(2)细胞传代
待HaCaT细胞贴壁面积达到80%-90%时开始传代培养。轻轻吹打细胞,收集散落的细胞于15mL离心管。向培养瓶中加入1mL含有EDTA的胰酶,倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热,然后将培养瓶翻转使胰酶与细胞面接触约3min,倒置显微镜下观察细胞,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲培养瓶后加少许完全培养基终止消化。然后,吹打细胞至细胞完全脱落,收集含有细胞的培养基于15mL离心管中,2000rpm/min离心5min。最后,弃去15mL离心管中的培养基,加入1mL DMEM完全培养基,反复吹打混匀,待细胞完全悬浮后,转移到细胞培养瓶中,再向培养瓶中加入3mL完全培养基,加盖后十字水平摇匀10次以上,然后置于培养箱中培养。
(3)细胞冻存
选择处于对数生长期的HaCaT细胞进行细胞冻存。首先,收集细胞于离心管中,加入1mL细胞冻存液(DMSO和FBS的体积比=1:9)吹打混匀,使细胞密度维持在5×106/mL左右;将含有细胞的冻存液转移至冻存管中。标记后,先置于程序降温盒中,再转移至-80℃冻存,最后置于液氮中保存。
2.2UVB照射剂量的筛选
对数生长期的HaCaT细胞经EDTA消化后,以1×104个细胞/孔接种于96孔板,培养12h,吸出培养液,加入200μL无血清培养基,如图1,进行不同剂量的UVB灯照射(处理组),对照组不做UVB照射处理。UVB灯照射完成,采用MTT法检测细胞活性,在酶标仪492nm波长处测定各孔光吸光度(A)值,记录结果,计算细胞存活率,筛选照射剂量。
细胞存活率(%)=处理组OD值/对照组OD值×100%
采用GraphPad Prism 9.0统计软件对数据进行处理,实验结果以平均值±SD表示。组间比较采用t检验,p<0.05代表具有显著性差异(下同)。
不同剂量UVB照射可诱导HaCaT的活性降低,并呈现一定的趋势,根据MTT法检测细胞活性结果分析,如图1,随着UVB照射强度增加,HaCaT细胞活性逐渐减小,大量文献表明,紫外线损伤模型多采用UVB照射后细胞存活率为80%的UVB照射强度为UVB损伤模型参考剂量,故采用UVB照射强度为40mJ/cm2进行后续实验。
2.3多肽对HaCaT细胞活性的影响
为了测试多肽的细胞安全性,发明人使用MTT评估细胞毒性。将HaCaT细胞以2×105个/孔的密度接种在96孔板中,每孔180μL细胞悬液,置于5% CO2、37℃的CO2培养箱中24h培养。培养完成后,吸出孔板中培养基,处理组加入含有不同浓度多肽(12.5、25、50、100μg/mL)的DMEM培养基(含2.5%的FBS),对照组加入不含多肽的DMEM培养基(含2.5%的FBS),继续培养48h,每个浓度设置5个复孔。48h后每孔用20μL MTT(5mg/mL)处理4小时,使用DMSO溶解形成的紫色甲臜,并使用酶标仪在490nm波长下测OD值。待培养完成后,取出96孔板,按2.2项下方法计算细胞活性。
多肽对HaCaT细胞活力的影响如图2所示,用不同浓度的多肽处理HaCaT细胞,均未显示出显著的细胞毒性作用。因此发明人以100μg/mL为高浓度来进行下一步的实验。
2.4细胞紫外线损伤模型的建立
将处于生长指数期的HaCat细胞接种于培养皿中贴壁培养,随后将细胞分为6组,对照组(control)不经UVB照射且不添加多肽,UVB(模型组)经UVB照射,VC组加入VC终浓度为100μg/mL的DMEM培养基,多肽测试组(25、50、100μg/mL)分别加入多肽终浓度为25、50、100μg/mL的DMEM培养基,细胞培养箱(37℃、5% CO2)预处理12h,PBS清洗细胞3次后采用40mJ/cm2的UVB照射细胞,培养24h后用于实验。
2.5多肽对UVB诱导HaCaT细胞ROS的影响
按照ROS试剂盒说明书评估HaCaT细胞内ROS水平。首先,将HaCaT细胞以每孔2×105个细胞的密度接种在96孔培养板中,对照组(Control):HaCaT细胞不经UVB照射且不添加多肽;模型组:HaCaT细胞经40mJ/cm2 UVB照射;多肽处理组:用不同浓度的多肽(25、50、100μg/mL,采用DMEM培养基配制)预处理12h后采用40mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞,VC组:用100μg/mL的VC(采用DMEM培养基配制)预处理12h后采用40mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞。,PBS洗3次,各孔加入含10μmol/L的DCFH-DA的无血清培养基100μL,37℃避光孵育30min,酶标仪测定吸光度(488nm激发波长,525nm发射波长)。
越来越多的证据表明,ROS是UVB刺激细胞衰老的主要原因之一。为了观察多肽处理是否可以抑制UVB诱导的细胞ROS产生,我们进行了DCFDA-ROS测定。正如预期的那样,如图3所示,与对照组(Control)相比,UVB照射(40mJ/cm2)显著增加了细胞ROS的产生(P<0.01)。然而,与UVB组相比,多肽处理以剂量依赖性方式抑制UVB刺激的细胞ROS生成(P<0.05)。尤其是高剂量(100μg/mL)的多肽对ROS清除能力与阳性对照药VC相当(P<0.01)。
2.6角质细胞划痕实验
伤口愈合与衰老密切相关。随着年龄的增长,皮肤的形态和结构发生变化。这些变化不仅会影响伤口愈合,还会使皮肤更容易受到伤害。当皮肤受损时,靠近伤口边缘的表皮角质形成细胞迁移到伤口部位以重建表皮并恢复屏障功能。
使用伤口愈合试验研究细胞迁移和增殖,以确定多肽在皮肤被划伤时促进愈合的能力。取直尺在新开封的6孔板底部画直线,随后将处于对数生长期的HaCat细胞以2×105个/mL密度接种于6孔板,设置对照组,待细胞融合至90%时,去除原培养基,在单层细胞表面用10μL微量移液器垂直于底部直线划线,PBS洗三遍以除去划下的细胞,用不同浓度(25、50和100μg/mL)的多肽处理划伤的细胞,并在37℃下孵育。补充有10% FBS的新鲜DMEM培养基用作对照组,放入培养箱中培养。倒置显微镜下观察记录0、6和12h的划痕中细胞迁移情况,记录划痕面积。用Image J软件测试划痕面积。实验重复3次。
伤口愈合率(%)=1-(各时间节点的划痕面积/0h的划痕面积)
如图4、图5所示,100μg/mL的多肽治疗组的划痕闭合速度显著快于对照组(P<0.05),而25和50μg/mL的多肽治疗组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。
2.7对HaCaT细胞中抗衰老相关蛋白表达的影响
对照组(Control):HaCaT细胞不经UVB照射且不添加多肽;模型组:HaCaT细胞经40mJ/cm2 UVB照射;多肽处理组:HaCaT细胞用不同浓度的多肽(25、50、100μg/mL,采用DMEM培养基配制)预处理(12h)后采用40mJ/cm2 UVB照射;VC组:HaCaT细胞用100μg/mL的VC(采用DMEM培养基配制)预处理12h后采用40mJ/cm2 UVB照射,24h后弃上清,PBS洗3次,用含有体积分数1%苯甲基磺酰氟(PMSF,蛋白酶抑制剂)的RIPA裂解液裂解细胞。BCA试剂盒测定蛋白浓度,各组取50μg蛋白进行SDS-PAGE电泳,转移至NC膜,5%BSA封闭,将膜与一抗(Collagen I、MMP-1和GAPDH)在4℃孵育过夜,TBST洗膜,加入二抗室温孵育2h,ECL法显色、曝光,化学发光成像系统拍照,Image J分析。
如图6、图7所示,与对照组相比,模型组HaCat细胞中Collagen I表达下调、MMP-1大量表达(P<0.01);与模型组相比,多肽可剂量依赖性上调HaCat细胞中Collagen I的表达水平,下调MMP-1的表达水平(P<0.05),尤其是高剂量(100μg/mL)的多肽对效果与阳性对照药VC相当(P<0.01)。
以上结果说明,本发明提供的多肽具有清除ROS、抑制MMP-1生成,增加I型胶原产生,促进HaCat迁移和增殖以重建表皮并恢复屏障功能,具有抗衰作用,因而具有开发成抗衰老化妆品如眼霜、唇膜、面霜、面膜、精华液、爽肤水、润肤乳、身体乳和沐浴露的前景。

Claims (7)

1.一种具有抗衰老功效的多肽,其特征在于:该多肽的氨基酸序列为:Gly-Pro-Arg-Pro-Ala-Try。
2.根据权利要求1所述的具有抗衰老功效的多肽,其特征在于:多肽的结构如式Ⅰ所示:
Figure FDA0004060516720000011
3.权利要求1或2所述的具有抗衰老功效的多肽在制备抗衰老化妆品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述的应用为在制备具有清除ROS、抑制MMP-1生成、增加I型胶原产生、促进HaCat细胞迁移和增殖以重建表皮并恢复屏障功能的至少一种功能的抗衰老化妆品中的应用。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述的化妆品为眼霜、唇膜、面霜、面膜、精华液、爽肤水、润肤乳、身体乳、沐浴露。
6.一种抗衰老化妆品,其特征在于:它是以权利要求1或2所述的具有抗衰老功效的多肽为活性成分。
7.根据权利要求1所述的抗衰老化妆品,其特征在于:所述的化妆品为眼霜、唇膜、面霜、面膜、精华液、爽肤水、润肤乳、身体乳、沐浴露。
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CN117700487A (zh) * 2023-12-16 2024-03-15 北京越思生物科技有限公司 一种细胞外基质蛋白在修复皮肤的化妆品中的应用

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