CN105218639B

CN105218639B - 一种七肽及其应用

Info

Publication number: CN105218639B
Application number: CN201510631168.7A
Authority: CN
Inventors: 张学武; 曾巧辉
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2015-09-28
Filing date: 2015-09-28
Publication date: 2019-03-26
Anticipated expiration: 2035-09-28
Also published as: CN105218639A

Abstract

本发明公开了一种七肽及其应用。所述合成多肽的氨基酸序列如下所示：Glu‑Tyr‑Phe‑Asp‑Ala‑Leu‑Ala，缩写为EYFDALA，分子量826.2，纯度达到95%以上。本发明的多肽使用多肽合成仪，采用固相合成法合成，高效液相色谱进行纯化，真空冷冻干燥所得。本发明的目的是公开一种具有体外抗氧化活性、保护红细胞溶血以及促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原蛋白产生的多肽的合成方法及其应用实例，为其在生物制药与化妆品等领域的应用提供依据。

Description

一种七肽及其应用

技术领域

本发明涉及生物制药与化妆品等领域，具体涉及一种合成七肽及其应用。

背景技术

自二十世纪中叶以来，随着人们生活水平的提高以及细胞生物学、分子生物学等学科的飞速发展，科学家们对于衰老机制的探索取得了长足的进步，其中广泛研究的理论有自由基-氧化应激学说，炎性学说，免疫学说，线粒体DNA学说等，其中，自由基-氧化应激学说最受重视，并能与其他学说联系起来，起到纽带作用。该学说的发展始于Harman于1956年提出，他认为自由基才是真正引发的机体老化的罪魁祸首，也是引起机体组织恶性增生等各种恶性疾病的关键所在。1990年，美国Sohal教授发展了该学说，率先提出了氧化应激的概念，并在自由基学说的基础上发展形成了 “自由基-氧化应激学说”。具体而言，正常的机体自身建立并形成一套完善的防御系统以规避自由基的损伤和破坏，如细胞内存在的各种抗氧化物酶，如Superoxide Dismutase, SOD；Glutathione Peroxidase, GSH-Px等，机体清除氧自由基的能力与其活性的高低直接相关。一旦机体因内因或外因导致自由基增加过量从而无法及时清除时，由于自由基都带有不成对的单电子，可以攻击体内细胞，会氧化生物膜不饱和脂肪酸、诱导蛋白质交联变性、甚至损伤细胞核及线粒体DNA或RNA等，从而损伤细胞和组织，最终导致机体功能的缺失和老化相关疾病的发生。因此，清除体内过量的自由基在预防某些疾病的过程中具有重要作用。

生物活性肽是具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，是具有促进免疫调节、抗菌、降血压、抗癌、抗氧化等作用的二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，由25个天然氨基酸通过肽键以不同组成和排列方式构成。活性肽安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。现代营养学表明，蛋白质经消化道酶作用后并不完全以游离氨基酸的形式吸收，大多以低肽的形式吸收，并且低肽比游离氨基酸具有更高的营养价值和生物效价。

样品清除自由基的能力是评价其抗氧化活性最常见的方法。清除体内过量的自由基在预防某些疾病的过程中具有重要作用。ABTS，2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐，是一种水溶性物质，可被 MnO₂氧化为比较稳定的蓝绿色 ABTS 自由基，此自由基在736 nm 有稳定的最大吸收峰，抗氧化剂能够提供氢原子将自由基还原为无色 ABTS，可根据溶液在 736 nm 处的吸光度变化来评估抗氧化剂清除ABTS⁺的能力。DPPH（1,1-二苯基-2-苦肼基）是一种醇溶性物质，在醇溶液中生成以氮原子为中心的稳定自由基、并呈深紫色，该自由基在 522 nm 处有最大吸收峰，加入抗氧化样品后，溶液会褪色，可以通过其吸光值的变化来检测样品的抗氧化活性。FRAP方法(Ferric reducing antioxidantpotential Assay)是测定物质抗氧化能力的一种方法。原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine (Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的Fe²⁺-TPTZ，随后在596 nm测定蓝色的Fe²⁺-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。以上三种模型操作简便、快捷、可控性好得到广泛应用。

构建细胞氧化损伤模型是评价样品是否具有抗氧化能力的常用方法，而红细胞由于来源丰富、取材方便，是体外生物实验中的常用材料。自由基首先攻击红细胞膜上的脂质和蛋白质，使细胞膜破损，释放出红细胞中的血红蛋白，称为红细胞溶血。AAPH、H₂O₂和Hemin为常用的诱导红细胞溶血的物质。样品清除体系中存在的自由基从而抑制红细胞溶血。原子力显微镜(AFM)是一种高分辨率的新型成像工具，在生物医学界已被广泛用于细胞形貌及其超微结构的表征，其原理是通过检测探针扫描样品时所产生的原子间相互作用力来获得样品形貌结构信息，经计算机软件处理成像。自由基攻击细胞膜使之结构和功能丧失，发生细胞溶血。这一结论通过用原子力显微镜（AFM）观察对照组、损伤组和保护组红细胞形貌得到进一步验证。

皮肤老化主要是人的遗传倾向性(也称为年代老化)和人对环境应激的生理反应(也称为光老化)的结果。光老化是外界环境对皮肤的生物学应答的效果，是可被广泛应用的老化实验模型。皮肤对光老化的应答通常与正常的水合作用的缺乏、皮肤下垂以及线条和皱纹外观有关。UVB 照射可使成纤维细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)堆积，超过了其清除能力，打破氧化与抗氧化平衡，发生氧化应激反应，调节一系列程序化的细胞反应，甚至调控衰老相关的信号通路，促进细胞衰老的发生。人皮肤成纤维细胞是人皮肤产胶原蛋白的主要场所，其数量的多少和细胞胶原蛋白的产率与皮肤衰老状态息息相关。因此，人皮肤成纤维细胞的存活率和胶原蛋白的产率是被广泛认可的评价皮肤衰老状态的指标。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有体外抗氧化活性、保护红细胞溶血以及促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原蛋白产生的合成七肽，可应用于生物制药与化妆品等领域。

本发明以 ABTS 自由基、DPPH 自由基清除实验、FRAP实验、APPH 诱导的红细胞溶血实验以及紫外损伤人皮肤成纤维细胞来评价多肽的抗氧化及抗皮肤衰老活性。

本发明所述的合成七肽缩写为EYFDALA，分子量826.2。序列为：Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala。其中，

Glu 表示英文名称为Glutamic acid，中文名称为谷氨酸的氨基酸的相应残基；

Tyr表示英文名称为Tyrosine，中文名称为酪氨酸的氨基酸的相应残基；

Phe表示英文名称为phenylalanine，中文名称为苯丙氨酸的氨基酸的相应残基；

Asp表示英文名称为Aspartic acid，中文名称为天冬氨酸的氨基酸的相应残基；

Ala表示英文名称为Alanine，中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基；

Leu表示英文名称为Leucine，中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基。

本发明所述的氨基酸序列采用标准 Fmoc 方案，通过树脂的筛选，合理的多肽合成方法。将目标多肽的 C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这个氨基酸的氨基作为起点，与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程，即可以得到目标多肽产物。合成反应完成后，去除保护基，将肽链与树脂分离，即得到目标产物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序从C端向N 端合成。

本发明将终浓度为1-100 µg/mL 的合成七肽与正常人血红细胞混匀，孵育，经AAPH损伤2 h 后，使得细胞溶血抑制率为58.12%~89.51%。用100 µg/mL的本发明合成多肽处理后的与仅用AAPH损伤的红细胞组相比，其形貌比单纯AAPH处理组光滑，有序，呈现饼状结构， T-SOD 活力由 2.5976 mgprot/ml上升到5.3830 mgprot/ml，结果表明，合成多肽处理后红细胞的SOD活性有较大提高，可在生物医药与化妆品等制备领域应用。

本发明将浓度为1-10 µg/mL的合成多肽加入人皮肤成纤维细胞培养液中孵育，经中波紫外（UVB）80mJ/cm²损伤后，与模型组相比，使得细胞存活率提高了0-6.86%。同时，胶原蛋白得率由模型组的11.9512±1.2067 µg/mL上升为合成多肽组的13.1951 ±1.6583 µg/mL，胶原蛋白得率提高了4.29-10.41%。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：

本发明首次合成了该肽，并且采用了体外化学抗氧化方法检测了合成多肽的抗氧化活性，所述合成多肽具有很强的ABTS⁺ 自由基清除能力，同时应用于AAPH损伤的正常人红细胞进行保护，使得红细胞溶血率显著降低，SOD活性有较大的提高，同时，合成多肽对紫外损伤的人皮肤成纤维细胞的生长具有促进作用，同时能促进其胶原蛋白的产生。

附图说明

图1 为合成多肽Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala 的ESI-MS图谱，其中横坐标为m/z (质荷比值)、纵坐标为relative abundance (相对强度)。

图2为合成肽Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala 的ABTS自由基清除活性。

图3为合成肽Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala 的DPPH 自由基清除活性。

图4为合成肽Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala的还原能力图。

图5 为合成多肽添加后进行AAPH损伤的正常人红细胞溶血抑制率变化曲线，

其中横坐标为Concentration(浓度)、纵坐标为Hemolysis inhibition(溶血抑制率)。

图6为不同处理组红细胞的原子力显微镜（AFM）成像图。

具体实施方式

以下结合具体实例对本发明作进一步说明，但本发明的实施和保护范围不限于此。对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。

多肽固相合成：选用2-Cl树脂（上海杰肽生物科技有限公司），按照氨基酸序列Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala 的特征，先将Ala的羧基以共价键的形式与一个树脂相连，然后Ala的氨基和Leu的羧基缩水反应，处理后，再添加Ala，Leu的氨基和Ala的羧基反应，依次从右到左添加氨基酸，加好最后一个Glu氨基酸后，再切除树脂即得到目标多肽。高效液相色谱纯化得到最后的产品，纯化过程使用kromasil C₁₈-5（4.6*250mm）色谱柱，流速为1.0mL/min采用溶剂A: 含有0.1% 三氟乙酸的乙腈，溶剂 B: 含有0.1% 三氟乙酸的水，洗脱梯度过程中A初始比例为20%，在0.01min到25min内，A的比例上升到45%，在25min到25.1min内，A的比例上升为100%，保持100%运行至30min停止，检测波长220nm。收集多肽溶液，液氮速冷，然后冻干。得到纯度为95%以上的产品，并经ESI-MS 鉴定结构（如图1 所示）。

合成多肽的DPPH自由基清除活性实验

DPPH实验：180 μL DPPH 试剂（150 μM DPPH，溶剂为80%乙醇的水溶液，v/v）混合20 μL 1~100 μg/mL 的样品，加至96孔板中。同时设置空白组和模型组，空白组为180 μL80%乙醇混合20 μL超纯水，模型组为180 μL DPPH 试剂混合20 μL超纯水。用酶标仪（infinite M200 pro, TECAN, Switzerland）测定522 nm处的吸光度值，设定程序，震荡30s，每2min测一次，一共测20个周期，需注意的是，实验前将模型组吸光度值调为0.7-0.8之间，测定过程中保持室温避光，结果见图2。

图2为合成肽Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala 的ABTS自由基清除活性。a为40min内不同浓度的样品对ABTS自由基的清除动力学曲线；b为作用40min 时样品不同浓度间效果的显著性分析。图2中a的横坐标为Time(时间)、纵坐标为ABTS scavenging rate (ABTS自由基清除率)。图2中b的横坐标为Concentration(浓度)、纵坐标为ABTS scavengingrate (ABTS自由基清除率)。

结果表明，该肽对ABTS自由基的清除效果显著，加入样品后2min内已基本达到最大清除效果，其清除ABTS自由基的IC₅₀值为13.37 µM，低于阳性对照维生素C 的26.18 µM。

合成多肽的ABTS自由基清除活性实验

ABTS实验：180 μL ABTS 反应液混合20 μL 1~100 μg/mL 的样品，加至96孔板中，震荡，混匀。同时设置空白组和模型组，空白组为180 μL 80%乙醇混合20 μL超纯水，模型组为180 μL DPPH 试剂混合20 μL超纯水。用酶标仪（infinite M200 pro, TECAN,Switzerland）测定736 nm处的吸光度值。设定程序，震荡30 s，每2min测一次，一共测20个周期，需注意的是，实验前将模型组吸光度值调为0.7-0.8之间，测定过程中保持室温避光，结果见图3。

图3为合成肽Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala 的DPPH 自由基清除活性。其中a为40min内不同浓度的样品对DPPH自由基的清除动力学曲线；b为作用40min 时样品不同浓度间效果的显著性分析。其中图3a横坐标为Time(时间)、纵坐标为DPPH scavenging rate(DPPH自由基清除率)。图3b横坐标为Concentration(浓度)、纵坐标为DPPH scavengingrate (DPPH自由基清除率)。

结果表明，该肽对DPPH自由基的清除效果较弱，在40min内，样品对DPPH自由基的清除效果呈现浓度依赖性。在24min内，其清除效果呈现时间和浓度依赖型。超过24min 后清除效果有减弱的趋势。由图3a可知，作用时间为24min 时，样品有最大的清除效果。因此，对此时不同浓度的样品的清除效果进行显著性分析，如图3中b，结果表明，在测试浓度范围内，样品对DPPH自由基的清除随着浓度的增加呈现显著递增的趋势。但仍然远远弱于阳性对照VC的效果。

合成多肽的FRAP实验

FRAP实验：180 μL FRAP 反应液（V_{300 mM 醋酸缓冲液}: V_{20 mM TPTZ}: V_{20 mM 氯化铁}= 10:1:1）混合20 μL 1~100 μg/mL 的样品，加至96孔板中，震荡，混匀。同时设置空白组和模型组，空白组为200 μL 超纯水，模型组为180 μL FRAP 反应液混合20 μL超纯水。用酶标仪（infiniteM200 pro, TECAN, Switzerland）测定596 nm处的吸光度值，设定程序，震荡30 s，每2min测一次，一共测20个周期，结果见图4。

图4为合成肽Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala的还原能力图。其中a的横坐标为Time(时间)、纵坐标为FRAP value (抗氧化活性)。B的横坐标为Concentration(浓度)、纵坐标为FRAP value (抗氧化活性)。结果表明，该合成肽几乎不具备还原能力。

合成多肽对人皮肤成纤维细胞UVB损伤的保护应用

人皮肤成纤维细胞使用完全培养基进行培养，完全培养基主要由基础培养基高糖DMEM，10％胎牛血清（v/v），以及1%双抗(由青霉素和链霉素组成，v/v) 组成。置于37 ℃、CO₂ 体积分数为5% 的饱和湿度培养箱中。每隔2 d 换液1 次。待细胞长满培养瓶的90%左右，取其接种于96 孔培养板中, 每孔100μL, 浓度为5×10⁴cells/mL。细胞生长24 h后,吸弃培养液，用 200μL PBS洗1次，加入200μL PBS，用80 mJ/cm² UVB照射，吸弃PBS，每孔加入200μL样品(零浓度用高糖DMEM取代,即为正常对照)，继续培养72 h，吸弃培养液，采用MTT 法检测细胞存活率，结果见表1。

表1

	UVB	合成多肽+ UVB
			人皮肤成纤维细胞存活率	1	1.0686

合成多肽促进UVB损伤人皮肤成纤维细胞胶原蛋白产生的应用

取上述处理租的细胞，吸弃培养液，用无菌水洗细胞表面两次，加入冰冷70%乙醇200μL进行固定，在-80 ^oC冰箱放置至少10min，取出后，用无菌水洗细胞表面两次，风干水分后，每孔加入200 μL 1%饱和苦味酸-猩红染液（m/v），于4^oC条件下轻晃（18-24 h），吸弃染液，用无菌水洗2-4次，直至没有染色液洗出为止，加入150μL 1M NaOH溶液，150 r/min，震荡15 min，每孔取出100μL置于96孔板中，测定492nm处的吸光度值，结果见表2。

表2

	UVB	合成多肽+ UVB
			人皮肤成纤维细胞胶原蛋白产率（µg/mL）	11.9512±1.2067	13.1951 ±1.6583

合成多肽对正常人红细胞AAPH损伤的保护应用

用含有1：9柠檬酸钠的抗凝管(抗凝剂柠檬酸钠：血液=1：9，v/v)抽取健康成人（30岁以下）血液放于 4℃冰箱保存，一周内使用。临用时，将血液放在离心管中于 1000~1500g 离心 8-15 min，移去上层的血浆，红细胞用 PBS（pH=7.4）洗 2-3 次，直至上清液为无色。最后于离心机中1000~1500 g 离心8-15 min，去除上清液，得到紧密的红细胞压积，用PBS 稀释成浓度为20%（体积，v/v）的红细胞悬液。单独用100 μg/mL的合成多肽处理红细胞，以 0.1 mL 20%红细胞悬液和 0.3 mL PBS 共同孵育 2 h 作为空白对照组，确定样品不具有溶血性。

应用实施例1

0.1 mL 20%红细胞悬液经 0.1 mL浓度为 0 μg/mL的合成多肽（用PBS 取代，即为模型组）预处理 20 min 后，加入 0.2 mL 终浓度为 100 mM 的 AAPH 溶液，微震、避光孵育 2 h，取各处理组的反应物溶液 50 μL 用 PBS 缓冲液稀释至 1 mL，1500 g 离心 12min，取上清液于 96 孔板中，用酶标仪在 540 nm 处测其吸光度，同样地，用蒸馏水稀释反应混合物作为全溶血对照，计算溶血率，结果见图5。同时，将各处理组细胞用离心机于1500g离心12 min，收集细胞沉淀，用PBS洗3次离心，弃去上清液，再次重悬。制片时，取10 μL红细胞重悬液均匀涂于洁净的云母片上（要求细胞无重叠、不团聚），然后用20%（体积，v/v）的戊二醛固定细胞，5 min后，用超纯水冲洗硅片3次，自然风干硅片，最后置于原子力显微镜上，在轻敲模式下扫描观察细胞形貌，用NanoScope软件分析实验数据，结果见图6。

应用实施例2

0.1 mL 20%红细胞悬液经 0.1 mL浓度为 1 μg/mL的合成多肽预处理 20 min后，加入 0.2 mL 终浓度为 100 mM 的 AAPH 溶液，微震、避光孵育 2 h，取各处理组的反应物溶液 50 μL 用 PBS 缓冲液稀释至 1 mL，1500 g 离心 12 min，取上清液于 96 孔板中，用酶标仪在 540 nm 处测其吸光度，同样地，用蒸馏水稀释反应混合物作为全溶血对照，计算溶血率，结果见图5。

应用实施例3

0.1 mL 20%红细胞悬液经 0.1 mL浓度为 10 μg/mL的合成多肽预处理 20 min后，加入 0.2 mL 终浓度为 100 mM 的 AAPH 溶液，微震、避光孵育 2 h，取各处理组的反应物溶液 50 μL 用 PBS 缓冲液稀释至 1 mL，1500 g 离心 12 min，取上清液于 96 孔板中，用酶标仪在 540 nm 处测其吸光度，同样地，用蒸馏水稀释反应混合物作为全溶血对照，计算溶血率，结果见图5。

应用实施例4

0.1 mL 20%红细胞悬液经 0.1 mL浓度为 100 μg/mL的合成多肽预处理 20 min后，加入 0.2 mL 终浓度为 100 mM 的 AAPH 溶液，微震、避光孵育 2 h，取各处理组的反应物溶液 50 μL 用 PBS 缓冲液稀释至 1 mL，1500 g 离心 12 min，取上清液于 96 孔板中，用酶标仪在 540 nm 处测其吸光度，同样地，用蒸馏水稀释反应混合物作为全溶血对照，计算溶血率，结果见图5。同时，将各处理组细胞用离心机于1500 g离心12 min，收集细胞沉淀，用PBS洗3次离心，弃去上清液，再次重悬。制片时，取10 μL红细胞重悬液均匀涂于洁净的云母片上（要求细胞无重叠、不团聚），然后用2.5%的戊二醛固定细胞，5 min后，用超纯水冲洗硅片3次，自然风干硅片，最后置于原子力显微镜上，在轻敲模式下扫描观察细胞形貌，用NanoScope软件分析实验数据，结果见图6。

应用实施例5

0.1 mL 20%红细胞悬液经 0.1 mL浓度为 0 μg/mL（用PBS 取代，即为正常对照组）的合成多肽预处理 20 min 后，加入 0.2 mL 终浓度为 0 mM 的 AAPH 溶液（用PBS 取代，即为正常对照），微震、避光孵育 2 h，取各处理组的反应物溶液 50 μL 用 PBS 缓冲液稀释至 1 mL，1500 g 离心 12 min，取上清液于 96 孔板中，用酶标仪在 540 nm 处测其吸光度，同样地，用蒸馏水稀释反应混合物作为全溶血对照，计算溶血率，结果见图5。同时，将各处理组细胞用离心机于1500 g离心12 min，收集细胞沉淀，用PBS洗3次离心，弃去上清液，再次重悬。制片时，取10 μL红细胞重悬液均匀涂于洁净的云母片上（要求细胞无重叠、不团聚），然后用2.5%的戊二醛固定细胞，5 min后，用超纯水冲洗硅片3次，自然风干硅片，最后置于原子力显微镜上，在轻敲模式下扫描观察细胞形貌，用NanoScope软件分析实验数据，结果见图6。

图5 为合成多肽添加后进行AAPH损伤的正常人红细胞溶血抑制率变化曲线，其中横坐标为Concentration(浓度)、纵坐标为Hemolysis inhibition(溶血抑制率)。结果表明，1µg/mL合成多肽即能对红细胞溶血产生显著的作用。继续增大浓度，在1~100µg/mL范围内，呈现显著增加的方式，但100µg/mL 仍与正常组的溶血率仍存在显著性的差异。

图6为不同处理组红细胞的原子力显微镜（AFM）成像图。其中a 为正常红细胞，b为100 mM 的AAPH 处理 2 h 的红细胞，c 为用 100 µg/mL 的合成肽Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala预处理 20 min 之后再加 100 mM AAPH 培养 2 h 的红细胞。结果表明，正常红细胞具有典型的双凹面结构，细胞表面光滑，四周高度基本一致。AAPH处理组细胞表面变得粗糙，细胞严重塌陷，高度有所降低，形状不规则。合成多肽预处理的保护组，细胞损伤程度明显减弱，表面光滑，呈现饼状结构。

应用实施例6

表3

	AAPH	合成多肽+AAPH
			T-SOD活性 (mgprot/mL)	2.5976	5.3830

0.1 mL 20%红细胞悬液经 0.1 mL浓度为 5 μg/mL（用PBS 取代，即为正常对照组）的合成多肽预处理 20 min 后，加入 0.2 mL 终浓度为 0 mM 的 AAPH 溶液（用PBS 取代，即为正常对照），微震、避光孵育 2 h，将各处理组细胞用离心机于1500 g离心12 min，收集细胞沉淀，用PBS洗3次离心，加入4^oC预冷的超纯水，150r/min震荡10min，10000g离心30min，收集上清液备用，按照试剂盒（南京建成）的说明书进行测定其中的SOD活性，结果见表3。

Claims

1.一种七肽，其特征是该七肽的氨基酸序列为Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala；所述七肽在浓度为1-100 µg/mL时与红细胞混合，在AAPH的作用下，孵育2 h 后，使得细胞溶血抑制率达到58.12%~89.51%，其形貌比单纯用AAPH处理组光滑，有序，呈现饼状结构；

所述七肽与人皮肤成纤维混合，在UVB的作用下，孵育72 h后，能使得细胞存活率提高0-6.86%，同时，胶原蛋白得率提高4.29-10.41%，所述七肽的浓度为1-10 µg/mL。

2.根据权利要求1 所述的一种七肽，其特征在于所述七肽使细胞溶血抑制率达到89.51±0.93%。

3.根据权利要求1 所述的一种七肽，其特征在于所述七肽能使细胞SOD活性由2.5976mgprot/mL上升到5.3830 mgprot/mL；所述七肽浓度为100 µg/mL。