CN115894474A - Rad51抑制剂化合物的晶型及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了作为RAD51抑制剂的化合物的晶型，其相应的制备方法、包含所述晶型的药物组合物，以及所述晶型或包含所述晶型的药物组合物在制备用于预防或治疗相关药理学病症的药物中的用途。

Description

RAD51抑制剂化合物的晶型及其应用

本发明要求2021年8月19日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202110955406.5，发明名称为“RAD51抑制剂化合物的晶型及其应用”的在先申请的优先权。上述在先申请的全文通过引用的方式结合于本发明中。

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是涉及作为RAD51抑制剂的化合物的晶型，其相应的制备方法、包含所述晶型的药物组合物，以及所述晶型或包含所述晶型的药物组合物在制备用于预防或治疗相关药理学病症的药物中的用途。

背景技术

RAD51是真核生物基因。这个基因编码的蛋白质是RAD51蛋白家族的一员，它能够帮助修复DNA双链断裂。RAD51家族成员与细菌RecA、古菌RadA和酵母RAD51同源。从酵母到人类，这种蛋白质在大多数真核细胞中高度保守。在人类中，RAD51是一种含有339个氨基酸组成的蛋白质，拥有DNA依赖性ATP激酶活性。在DNA双链断裂(Double strand breaks,DSBs)修复过程中，它对同源重组起着重要作用。RAD51参与将断裂序列与未受损的同源序列之间的相互转移，使受损区域得以重新合成。

DNA损伤反应对于维持细胞基因组稳定性和细胞存活发挥着重要作用。DNA双链断裂是DNA损伤最严重的形式。同源重组修复是体内参与DSBs损伤修复的重要机制之一，其中RAD51是体内参与同源重组性DNA修复的关键因子。RAD51在人类的多种肿瘤组织中高表达，如乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌等，与肿瘤的转移和恶化相关(Klein et al.,DNARepair(Amst).2008May 3；7(5):686-693)。如何有效下调肿瘤组织中的RAD51的水平,降低肿瘤细胞的DNA损伤修复能力，从而提高肿瘤治疗的疗效具有潜在的临床应用价值。

同源重组在DNA损伤修复中具有多重作用，包括修复DNA双链断裂以及恢复由DNA交联剂引起的DNA复制阻断的损伤。同源重组通过定位DNA的同源片段并从同源模板中复制缺失的遗传信息来修复DNA双链断裂。大量研究表明，同源重组在维持基因组稳定性方面至关重要。研究表明，细胞中促进同源重组修复的蛋白质的缺陷与某些DNA损伤治疗的敏感性相关。这种敏感作用对DNA交联化疗药物和电离辐射尤为显著(Takata et al.,Mol CellBiol.2001Apr；21(8):2858-2866；Godthelp et al.,Nucleic Acids Res.2002May15；30(10):2172-2182)。

最近有研究小组证明，可以通过对同源重组的部分抑制进一步提高细胞对DNA损伤疗法的敏感性。比如，使用对应于另一个旁系同源蛋白的合成肽可以抑制XRCC3(RAD51的旁系同源蛋白)。该合成肽使得中华仓鼠卵巢(CHO)细胞对顺铂更加敏感，并且抑制了DNA损伤所导致的RAD51foci的形成(Connell et al.,Cancer Res.2004May 1；64(9):3002-3005)。

因此，鉴于DNA同源重组修复的相关蛋白的缺陷可以提高细胞对DNA损伤治疗的敏感性，需要开发能够抑制RAD51活性的小分子。目前Cyteir Therapeutics,Inc.发表了三篇有关RAD51抑制剂的化合物专利申请(WO2019014315A1、WO2019051465A1和WO2020186006A1)。

发明内容

PCT/CN2021/076939(申请日2021年2月19日)描述了反式-N-[4-[5-[2-(环丙基磺酰亚胺基)]-4-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(化合物(II))

本发明提供了理化性质或药学性质优异的化合物(II)的晶型，及其制备方法。

本发明提供了化合物(II)的晶型I，所述晶型I以衍射角2θ表示的X-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、22.20±0.2°处有衍射峰。

在可选实施方案中，所述晶型I，以衍射角2θ表示的X-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、15.20±0.2°、15.37±0.2°、16.46±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、20.54±0.2°、22.20±0.2°、22.71±0.2°、27.48±0.2°处有衍射峰。

在可选实施方案中，所述晶型I，以衍射角2θ表示的X-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、15.20±0.2°、15.37±0.2°、16.46±0.2°、16.64±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、20.54±0.2°、22.20±0.2°、22.71±0.2°、24.57±0.2°、25.33±0.2°、26.07±0.2°、26.21±0.2°、26.71±0.2°、27.48±0.2°处有衍射峰。

在可选实施方案中，所述晶型I，以衍射角2θ表示的X-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、13.55±0.2°、13.94±0.2°、15.20±0.2°、15.37±0.2°、16.46±0.2°、16.64±0.2°、17.52±0.2°、18.00±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、20.54±0.2°、20.98±0.2°、21.67±0.2°、22.20±0.2°、22.71±0.2°、24.57±0.2°、25.33±0.2°、26.07±0.2°、26.21±0.2°、26.71±0.2°、26.92±0.2°、27.48±0.2°、28.11±0.2°、31.17±0.2°、33.82±0.2°处有衍射峰。

在可选实施方案中，所述晶型I，以衍射角2θ表示的X-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、13.03±0.2°、13.55±0.2°、13.94±0.2°、15.20±0.2°、15.37±0.2°、15.90±0.2°、16.46±0.2°、16.64±0.2°、17.52±0.2°、18.00±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、20.54±0.2°、20.98±0.2°、21.34±0.2°、21.67±0.2°、22.20±0.2°、22.71±0.2°、23.53±0.2°、24.57±0.2°、25.33±0.2°、26.07±0.2°、26.21±0.2°、26.71±0.2°、26.92±0.2°、27.48±0.2°、28.11±0.2°、29.15±0.2°、29.46±0.2°、30.31±0.2°、31.17±0.2°、32.55±0.2°、33.82±0.2°、34.62±0.2°、35.84±0.2°处有衍射峰。

在可选实施方案中，所述晶型I以衍射角2θ表示的X-射线粉末衍射图谱基本上如图1所示。

在可选实施方案中，所述晶型I通过单晶衍射结构分析确定属于三斜晶系，P1空间群，其晶胞参数和晶胞体积为：

α＝71.47(3)°，β＝71.36(3)°，γ＝80.56(3)°，

本发明还提供了制备前述任一项晶型I的方法一，包括：将化合物(II)加入溶剂(i)中，室温溶解或加热溶解，溶清后，冷却析晶，即得。

在可选实施方案中，所述方法一中溶剂(i)选自乙醇、正丙醇、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸甲酯、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃、乙腈、4-甲基-2-戊酮、乙酸和丙酸中的一种或多种，优选乙酸乙酯、乙酸甲酯、正丙醇、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃或2-丁酮中的一种或多种，更优选自乙腈、乙酸乙酯、正丙醇或2-丁酮中的一种或多种。

在可选实施方案中，所述方法一中溶剂(i)的体积(mL)为化合物(II)重量(g)的5～150倍，优选10～50倍，更优选20～35倍。

在可选实施方案中，所述方法一中采用加热溶解的方式，所述加热温度为50～80℃，优选60～80℃，例如可以是60℃、70℃或77℃。

本发明还提供了制备前述任一项晶型I的方法二，包括：将化合物(II)加入良溶剂中，室温溶解或加热溶解后，再向其中加入反溶剂，析出晶体，即得。

在可选实施方案中，所述方法二中的良溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、正丙醇、乙酸和丙酸中的一种或多种，优选四氢呋喃或二氯甲烷。

在可选实施方案中，所述方法二中的反溶剂选自水、异丙醚、甲基叔丁醚、乙醚、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、环己烷和甲苯中的一种或多种，优选甲基叔丁醚、环己烷或甲苯中的一种或多种。

在可选实施方案中，所述方法二中良溶剂的体积(mL)为化合物(II)重量(g)的1～50倍，优选5～20倍，更优选10～15倍；所述良溶剂与反溶剂的体积比为1：(0.5～20)，优选1：(0.5～10)，更优选1：(0.5～7)。

在可选实施方案中，所述方法二中采用室温溶解的方式。

本发明还涉及一种药物组合物，其包含前述任一项所述的化合物(II)的晶型I，以及药学上可接受的辅料。

本发明还涉及由前述任一项所述的化合物(II)的晶型I制备而成的药物组合物。

本发明还涉及前述任一项所述的化合物(II)的晶型I在制备用于预防或治疗已知或可显示抑制RAD51会产生有益效应的疾病或病症的药物的用途。

本分明还涉及一种预防或治疗已知或可显示抑制RAD51会产生有益效应的疾病或病症的方法，其包括给予所需的个体治疗有效量的前述任一项所述的化合物(II)的晶型I，或包含其的药物组合物。

本发明所述的已知或可显示抑制RAD51会产生有益效应的疾病或病症包括但不限于肿瘤(如淋巴瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌等)和自身免疫病(如风湿性关节炎、炎症性肠炎和系统性红斑狼疮)等。

本发明的药物组合物中含有的化合物(II)的晶型I的治疗有效量选自0.01mg/kg到50mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。

本发明的化合物(II)晶型I的典型给药途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。

在可选的实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。

术语定义和说明

除非另有说明，本发明中所用的术语具有下列含义，本发明中记载的术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

术语“约”在本发明中用于指近似地、在……左右、大略地或大约。当术语“约”与数字范围结合使用时，通过扩大所陈述的数字范围的上下限值来对该范围来进行修饰。除非另作说明，否则术语“约”在本文中用于以10％偏差的数字值修饰所陈述的值的上限和下限。

除非另作说明，否则术语“包括(comprise)”、“含有(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。

本发明中提到的“可选实施方案”或“实施方案”是指在至少一实施方案中包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素、结构或特征。因此，本发明中不同位置出现的短语“可选实施方案”或“实施方案”不必全部指同一实施方案。此外，具体要素、结构或特征可以任何适当的方式在一个或多个实施方案中结合。

本发明所述室温是指20±5℃。

本发明中所述的范围“m～n”表示m到n之间的任意实数组合的缩略表示，其中m和n都是实数。例如，数值范围“20～35”表示本文中已经列出了其中的20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、31.5、32、32.5、33、33.5、34、34.5或35，“20～35”只是这些数值组合的缩略表示。

本发明中所述的“X-射线粉末衍射图谱”为使用Cu-Kα辐射测量得到。

本发明中所述的“X-射线粉末衍射图谱或XRPD图谱”是指根据布拉格公式2d Sinθ＝nλ(式中，d为晶面间距，θ为衍射角，λ为入射X射线的波长，

衍射的级数n为任何正整数，一般取一级衍射峰，n＝1)，当X射线以掠角θ(入射角的余角，又称为布拉格角)入射到晶体或部分晶体样品的某一具有d点阵平面间距的原子面上时，就能满足布拉格方程，从而测得了这组X射线粉末衍射图。

对于同种化合物的同种晶型，其XRPD图谱的峰位置在整体上具有相似性，相对强度误差可能较大。还应指出的是，在混合物的鉴定中，由于含量下降等因素会造成部分衍射线的缺失，此时，无需依赖高纯试样中观察到的全部衍射峰，甚至一个衍射峰也可能对给定的晶体而言是特征性的。

本发明中所述的“2θ或2θ角度”是指衍射角，θ为布拉格角，单位为°或度。

本领域技术人员认识到对于同一化合物的给定结晶形式的XRPD峰位置和/或强度的测量数据将在误差范围内变化。本发明中的2θ值涵盖了适当的误差范围，通常该误差范围是由“±”表示。例如，本发明中用具体角度值±0.2°表示的2θ值即代表其中的具体角度值具有±0.2°的误差浮动范围，即5.72±0.2°2θ表示2θ在5.52至5.92范围内。取决于样品制备技术、应用于仪器的校准技术、人类操作偏差等，本领域技术人员认识到对于XRPD衍射角的适当的误差范围可为±0.2°、±0.15°、±0.1°、±0.05°或更小，且峰强度允许一定的可变性。当用于描述XRPD图时，术语“基本上相同”或“基本上如……所示”是指包括至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％的衍射角在±0.2°2θ的标准偏差范围内的衍射峰的图。

本发明中所述干燥温度一般为20℃～100℃，优选25℃-70℃，更优选40℃～60℃，可以常压干燥，也可以减压干燥。优选地，干燥是在减压下干燥。

术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。

术语“个体”是哺乳动物。在部分实施方案中，所述个体是小鼠。在部分实施方案中，所述个体是人。

术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用，可以是治疗性的。本发明中的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗，包括：(a)抑制疾病的症状，即阻止其发展；或(b)缓解疾病的症状，即导致疾病或症状退化。

术语“有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本发明化合物的用量。构成“治疗有效量”的本发明化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。

术语“施用”表示使用本领域技术人员已知的多种方法和递送系统中的任一种，向主体物理引入包含治疗剂的组合物。

本发明的晶型也可以是同位素标记的。本发明还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本发明化合物。可结合到本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、¹²³I、¹²⁵I和³⁶Cl等。

某些同位素标记的本发明化合物(例如用³H及¹⁴C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即³H)和碳-14(即¹⁴C)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如¹⁵O、¹³N、¹¹C和¹⁸F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本发明化合物。

此外，用较重同位素(诸如氘(即²H))取代可以提供某些由更高的代谢稳定性产生的治疗优点(例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求)，并且因此在某些情形下可能是优选的，其中氘取代可以是部分或完全的，部分氘取代是指至少一个氢被氘取代。本发明实验所用仪器的测试条件：

1、单晶X-射线结晶学测量

(1)设备名称：单晶衍射仪

检测器型号：Bruker D8 Advance

光源：Ga Kα

波长：1.34139

(2)设备名称：偏振光显微镜

仪器型号：奥林巴斯BX53

光源：LED

目镜倍数：10倍

2、X-射线粉末衍射谱(X-ray Powder Diffraction,XRPD)

仪器型号：Bruker D8 Focus

射线：Cu Kα，Kα1

1.54060；Kα2

1.54439

Kα1/Kα2：2

狭缝(°)：2.5

扫描方式：θ/2θ，扫描范围：3-40°

停留时间(秒)：0.12

扫描步长(°2θ)：0.01

电压：40kV，电流：40mA

本发明提供的化合物(II)的晶型I纯度高、溶解性好、稳定性好，同时其还具有制备方法简便、结晶条件温和、结晶度高、稳定性好和不易吸湿等优点，适合制备成为所期望的药物组合物。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。

附图说明

图1为式(II)化合物晶型I的XRPD图谱；

图2为式(II)化合物的单晶的X射线单晶衍射图谱。

具体实施方式

以下结合实施例或试验例更详细地解释本发明，本发明中的实施例或试验例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质和范围。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用BRUKER AV-400型核磁共振仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)等，内标为四甲基硅烷(TMS)。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂、纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯体系，C：石油醚/乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺或醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。

本发明所用试剂可通过商业途径获得。本发明中使用的所有溶剂均是市售的，无需进一步纯化即可使用。

除非另作说明，混合溶剂表示的比例是体积混合比例。

除非另作说明，否则％是指质量百分比wt％。

化合物经手工或

软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

“IC₅₀”指半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；Boc₂O：二碳酸二叔丁酯；MeOH：甲醇；NBS：N-溴代丁二酰亚胺；DCM：二氯甲烷；(BPin)₂：双联频哪醇硼酸酯；Pd(dppf)Cl₂：[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)；KOAc：乙酸钾；THF：四氢呋喃；tBuONO：亚硝酸叔丁酯；MeCN：乙腈；BrettPhos Pd G₃：甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(II)；PhI(OAc)₂：二乙酰氧基碘苯。

实施例1：反式-N-[4-[5-[2-(环丙基磺酰亚胺基)-4-][(5-氟-2-吡啶基)氨基]苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(化合物(II))的合成

合成方法：

步骤1：3-环丙基硫烷基苯胺的合成

将3-氨基苯硫酚(10g，79.88mmol)溶于N,N–二甲基甲酰胺(60mL)中，在氮气保护下加入钠氢(3.19g，79.88mmol)。反应液于30℃搅拌反应1小时。然后将环丙基溴(9.66g，79.88mmol)加入反应液，反应液于100℃搅拌回流16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，然后柱层析纯化(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到3-环丙基硫烷基苯胺(10g)。

MS m/z(ESI):165.9[M+H]⁺；

步骤2：N-(3-环丙基硫烷基苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将3-环丙基硫烷基苯胺(21g，127.08mmol)溶于甲醇(315mL)中，加入Boc₂O(416.01g，1.91mol)，反应液于30℃搅拌反应16小时。将氨水(250mL)加入到反应液中，反应液于0℃搅拌反应2小时。将二氯甲烷(300mL)加入反应液萃取3次，有机相减压浓缩至干，然后柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝20/1)得到产物N-(3-环丙基硫烷基苯基)氨基甲酸叔丁酯(25g)。

MS m/z(ESI):210.1[M+H-叔丁基]⁺；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 9.37(s,1H),7.52(s,1H),7.25-7.13(m,2H),6.94(dd,J＝1.5,7.3Hz,1H),2.26-2.14(m,1H),1.47(s,9H),1.14-1.01(m,2H),0.62-0.50(m,2H).

步骤3：N-(4-溴-3-环丙基硫烷基-苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将N-(3-环丙基硫烷基苯基)氨基甲酸叔丁酯(25g，94.21mmol)溶于二氯甲烷(1L)中，然后将溶于二氯甲烷(1L)的N-溴代丁二酰亚胺(16.77g，94.21mmol)慢慢滴入反应液。反应液-20℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到N-(4-溴-3-环丙基硫烷基-苯基)氨基甲酸叔丁酯(10g)。

MS m/z(ESI):289.9[M+H-叔丁基]⁺；

步骤4：N-[3-环丙基硫烷基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯的合成

将N-(4-溴-3-环丙基硫烷基-苯基)氨基甲酸叔丁酯(3.2g，9.30mmol)和双联频哪醇硼酸酯(7.08g，27.90mmol)溶于四氢呋喃(80mL)中，在氮气保护下加入[1，1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(759.47mg，930.00μmol)，和乙酸钾(2.74g，27.90mmol)。反应液100℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。往反应液中加入300mL二氯甲烷(100mL*3)和50mL水，有机相用无水硫酸钠进行干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到N-[3-环丙基硫烷基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(3.4g)。

MS m/z(ESI):392.1[M+H]⁺；

步骤5：反式-N-[4-[5-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2-环丙基硫烷基-苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯的合成

将N-[3-环丙基硫烷基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(3.4g，5.21mmol)和反式-N-[4-(5-溴噻唑-2-基)环己基]氨基甲酸异丙酯(1.81g，5.21mmol)溶于二氧六环(100mL)中，然后在通氮气条件下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(425.71mg，521.30μmol)和碳酸钠(2M，7.82mL)。反应液100℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得到黄色物质反式-N-[4-[5-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2-环丙基硫烷基-苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(2.6g)。

MS m/z(ESI):532.3[M+H]⁺；

步骤6：反式-N-[4-[5-(4-氨基-2-环丙基硫烷基-苯基)噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯的合成

将反式-N-[4-[5-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2-环丙基硫烷基-苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(2.6g，4.89mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入盐酸/二氧六环(4M，24.45mL)。反应液30℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。减压浓缩至干。加入氢氧化钠(1M，10mL)，往反应液中加入60mL二氯甲烷(20mL*3)，有机相用无水硫酸钠进行干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得到反式-N-[4-[5-(4-氨基-2-环丙基硫烷基-苯基)噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(2.1g)。

MS m/z(ESI):432.1[M+H]⁺；

步骤7：反式-N-[4-[5-(4-溴-2-环丙基硫烷基-苯基)噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯的合成

将反式-N-[4-[5-(4-氨基-2-环丙基硫烷基-苯基)噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(242.99mg，562.99μmol)溶于乙腈(4mL)中，在0℃加入亚硝酸叔丁酯(174.17mg，1.69mmol)。反应液25℃搅拌反应1小时。将溴化亚铜(201.90mg，1.41mmol)在0℃加入到反应液，反应液25℃搅拌反应15小时。LCMS检测反应完毕。减压浓缩至干。加入饱和氯化铵50mL，往反应液中加入90mL二氯甲烷(30mL*3)，有机相用无水硫酸钠进行干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：2)得到黄色物质反式-N-[4-[5-(4-溴-2-环丙基硫烷基-苯基)噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(66mg)。

MS m/z(ESI):497.1[M+H]⁺。

步骤8：反式-N-[4-[5-[2-环丙基硫烷基]-4-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯的合成

将反式-N-[4-[5-(4-溴-2-环丙基硫烷基-苯基)噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(190mg，383μmol)和2-氨基-5-氟吡啶(51.6mg，460μmol)溶于四氢呋喃(12mL)中，加入甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(II)(34.8mg，38.4μmol)和乙酸钾(113mg，1.15mmol)。反应液于100℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。往反应液中加入水(3mL)用乙酸乙酯(9mL)萃取3次，有机相用无水硫酸钠进行干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，然后经薄层色谱纯化(二氧化硅，二氯甲烷：甲醇＝15：1)得到白色固体化合物反式-N-[4-[5-[2-环丙基硫烷基]-4-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(80.0mg)。

MS m/z(ESI):527.2[M+H]+；

步骤9：反式-N-[4-[5-[2-(环丙基磺酰亚胺基)-4-][(5-氟-2-吡啶基)氨基]苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯的合成

将反式-N-[4-[5-[2-环丙基硫烷基]-4-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(80mg，152μmol)溶于氨甲醇溶液(6mL)中，加入二乙酰氧基碘苯(734mg，2.28mmol)，反应液于-20℃搅拌反应1小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，然后经制备液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱：5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(48％-68％)的混合物作为洗脱液)纯化得到白色固体化合物反式-N-[4-[5-[2-(环丙基磺酰亚胺基)-4-][(5-氟-2-吡啶基)氨基]苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(20.0mg)。

MS m/z(ESI):558.0[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.67(s,1H),8.21(dd,J＝2.7,18.1Hz,2H),8.11(dd,J＝2.4,8.5Hz,1H),7.71(s,1H),7.62(dt,J＝3.1,8.7Hz,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),7.04-6.90(m,2H),4.78-4.71(m,1H),4.32(s,1H),3.29-3.24(m,1H),2.97-2.84(m,1H),2.31-2.26(m,1H),2.13(br d,J＝10.8Hz,2H),1.91(br d,J＝10.8Hz,2H),1.63-1.49(m,2H),1.41-1.26(m,2H),1.16(d,J＝6.1Hz,6H),0.94-0.76(m,4H).

实施例2：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(50mg)加入3mL棕色小瓶中，加入乙酸乙酯(1750μL)，搅拌并加热至77℃，溶清后缓慢降温至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得晶型I。

该结晶样品的XRPD图见图1，其XRPD衍射峰位置如下表1所示。

表1

实施例4：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(50mg)加入3mL棕色小瓶中，加入正丙醇(1000μL)，搅拌并加热至60℃，溶清后缓慢降温至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得。经X-粉末衍射检测为晶型I。

实施例5：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(50mg)加入3mL棕色小瓶中，加入2-丁酮(1000μL)，搅拌并加热至70℃，溶清后缓慢降温至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得。经X-粉末衍射检测为晶型I。

实施例6：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(10mg)加入5mL离心管中，加入四氢呋喃(150μL)，搅拌溶清后再加入甲基叔丁基醚(500μL)，继续搅拌至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得，经X-粉末衍射检测为晶型I。

实施例7：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(10mg)加入5mL离心管中，加入四氢呋喃(150μL)，搅拌溶清后再加入环己烷(300μL)，继续搅拌至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得，经X-粉末衍射检测为晶型I。

实施例8：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(10mg)加入5mL离心管中，加入四氢呋喃(150μL)，搅拌溶清后再加入甲苯(1000μL)，继续搅拌至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得，经X-粉末衍射检测为晶型I。

实施例9：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(10mg)加入5mL离心管中，加入二氯甲烷(150μL)，搅拌溶清后再加入甲基叔丁基醚(200μL)，继续搅拌至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得，经X-粉末衍射检测为晶型I。

实施例10：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(10mg)加入5mL离心管中，加入二氯甲烷(150μL)，搅拌溶清后再加入环己烷(100μL)，继续搅拌至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得，经X-粉末衍射检测为晶型I。

实施例11：化合物(II)晶型I的制备

将化合物(II)(10mg)加入5mL离心管中，加入二氯甲烷(150μL)，搅拌溶清后再加入甲苯(400μL)，继续搅拌至固体析出，抽滤，滤饼室温真空干燥即得，经X-粉末衍射检测为晶型I。

实施例12：化合物(II)晶型I的单晶研究

将化合物(II)(10mg)放入1.5mL塑料离心管中，加入乙腈(1.5mL)，加热使其溶清，溶清后离心管用封口膜封口，用针头在瓶口处扎两个小孔，室温放置3天，即制得化合物(II)的单晶。经X-粉末衍射检测确定其为前述晶型I。

其单晶结构数据如表2所示。单晶的X射线单晶衍射图如图2所示，该单晶结构确定了化合物(II)的绝对构型。

表2单晶结构数据

所得单晶样品经X-粉末衍射检测为晶型I。

测试试验例1：人淋巴瘤细胞Daudi增殖抑制试验

试验原理简介：将待测RAD51抑制剂与癌细胞共孵育一段时间后，采用基于细胞内ATP含量定量检测的细胞增殖计数方法来测量待测化合物对细胞增殖的影响。

材料与细胞：Daudi细胞购于ATCC；胎牛血清、1640培养基和青霉素-链霉素购于Gibco公司(美国)，96孔板购于康宁公司(美国)，Cell-Titer Glo试剂购于普洛麦格公司(美国)。

细胞培养：Daudi细胞用含10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的1640培养液，于37℃、5％CO₂条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。

细胞增殖活性检测：利用Cell-Titer Glo试剂检测化合物对Daudi细胞株增殖的抑制活性。调整细胞浓度接种96孔板，置于37℃、5％CO₂条件下培养24小时。将化合物粉末用100％DMSO溶解至10mM溶液，取10μl化合物溶液转移至含有20μl DMSO溶液96孔化合物板中进行3倍稀释，连续稀释10个梯度。然后从相应孔中取2μl化合物对应加到含有78μl完全培养基的96孔中间化合物稀释板中，混匀，1000转/分离心1分钟。最后从96孔中间化合物稀释板对应孔中吸取、转移10μl化合物溶液至含有90μl完全培养基的细胞培养板相应孔中，DMSO终浓度为0.25％。实验另设阴性对照组和阳性对照组，分别作为Bottom和Top。阴性对照组未种细胞，仅加入同体积培养基，其他操作与实验组一致；阳性对照组正常种细胞，但不加测试化合物，仅加同体积的DMSO，其他操作与实验组一致。置于37℃、5％CO₂条件下继续培养3天。加入Cell-Titer Glo试剂，检测细胞活性。

数据分析：

计算化合物抑制百分数(％Compound inhibition)并拟合化合物IC₅₀；

化合物抑制百分数(％Compound inhibition)＝1-100％*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom)

Signal指实验组的信号值，Bottom指阴性对照组的平均信号值，Top指阳性对照组的平均信号值。

实验结果：

待测化合物相应的抗Daudi细胞增殖活性具体见表3。

表3化合物对Daudi细胞的增殖抑制活性

测试试验例2：人胚肺细胞WI-38增殖抑制试验

试验原理简介：将待测RAD51抑制剂与人胚肺细胞共孵育一段时间后，采用基于细胞内ATP含量定量检测的细胞增殖计数方法来测量待测化合物对细胞增殖的影响。

材料与细胞：WI-38细胞购于ATCC；胎牛血清、1640培养基和青霉素-链霉素购于Gibco公司(美国)，96孔板购于康宁公司(美国)，Cell-Titer Glo试剂购于普洛麦格公司(美国)。

细胞培养：WI-38细胞用含10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的EMEM培养液，于37℃、5％CO₂条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。

细胞增殖活性检测：利用Cell-Titer Glo试剂检测化合物对WI-38细胞株增殖的抑制活性。调整细胞浓度接种96孔板，置于37℃、5％CO₂条件下培养24小时。将化合物粉末用100％DMSO溶解至10mM溶液，取10μl化合物溶液转移至含有20μl DMSO溶液96孔化合物板中进行3倍稀释，连续稀释10个梯度。然后从相应孔中取2μl化合物对应加到含有78μl完全培养基的96孔中间化合物稀释板中，混匀，1000转/分离心1分钟。最后从96孔中间化合物稀释板对应孔中吸取、转移10μl化合物溶液至含有90μl完全培养基的细胞培养板相应孔中，DMSO终浓度为0.25％。实验另设阴性对照组和阳性对照组，分别作为Bottom和Top。阴性对照组未种细胞，仅加入同体积培养基，其他操作与实验组一致；阳性对照组正常种细胞，但不加测试化合物，仅加同体积的DMSO，其他操作与实验组一致。置于37℃、5％CO₂条件下继续培养3天。加入Cell-Titer Glo试剂，检测细胞活性。

数据分析：

计算化合物抑制百分数(％Compound inhibition)并拟合化合物IC₅₀；

化合物抑制百分数(％Compound inhibition)＝1-100％*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom)

Signal指实验组的信号值，Bottom指阴性对照组的平均信号值，Top指阳性对照组的平均信号值。

实验结果：

待测化合物相应的抗WI-38细胞增殖活性具体见表4。

表4化合物对WI-38细胞的增殖抑制活性

在测试试验例1和测试试验例2的条件下，化合物(II)对Daudi细胞展现出了较强的增殖抑制活性，对WI-38细胞展现出了较弱的增殖抑制活性，并且对Daudi细胞和WI-38细胞的增殖抑制活性还表现出一定的选择性。

测试试验例3：肝微粒体中的代谢稳定性测定

一、试验材料及仪器

1.肝微粒体来源：人肝微粒体(Corning 452117)，CD-1小鼠肝微粒体(XENOTECHM1000)

2.Na₂HPO₄(天津市光复精细化工研究所20180130)

3.KH₂PO₄(天津市光复精细化工研究所20180920)

4.MgCl₂(天津市光复精细化工研究所20191216)

5.NADPH(Solarbio 1216C022)

6.阳性对照化合物维拉帕米(Sigma MKBV4993V)

7.AB Sciex Triple Quad 4000液质联用仪

二、试验步骤

1.100mM磷酸缓冲液(PBS)的配制：称取7.098g Na₂HPO₄，加入500mL纯水超声溶解，作为溶液A。称取3.400g KH₂PO₄，加入250mL纯水超声溶解，作为溶液B。将A溶液放置在搅拌器上缓慢加入B溶液直到pH值达到7.4配制成100mM的PBS缓冲液。

2.反应体系的配制

按下表5配制反应体系：

表5反应体系配制信息

3.将反应体系置于37℃水浴中预孵育10分钟。向反应体系中加入40μL 10mMNADPH溶液(NADPH由100mM的磷酸缓冲液溶解)，NADPH的最终浓度为1mM。用40μL磷酸缓冲液代替NADPH溶液作为阴性对照。阴性对照的作用是排除化合物自身化学稳定性的影响。

4.在反应体系中加入4μL 100μM(溶媒为DMSO)的本发明化合物和阳性对照化合物维拉帕米启动反应，化合物的最终浓度为1μM。

5.在0.5、15、30、45和60分钟，涡旋振荡器充分混匀后，分别取出50μL孵育样品，用4倍的含有内标的冰乙腈终止反应。样品在3220g转速下离心45分钟。离心结束后转移90μL上清液到进样板，加入90μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。

所有的数据均通过Microsoft Excel软件进行计算。通过提取离子图谱检测峰面积。通过对母药消除百分比的自然对数与时间进行线性拟合，检测母药的体外半衰期(t_1/2)。

体外半衰期(t_1/2)通过斜率计算：

in vitro t_1/2＝0.693/k

经上述公式计算得到的t_1/2值见表6。

表6化合物在肝微粒体中的半衰期

测试试验例4：血浆蛋白结合率测定

一、试验材料及仪器

1.CD-1小鼠血浆(BioIVT)

2.Na₂HPO₄(Sigma S5136-500G)

3.NaH₂PO₄(Sigma S3139-500G)

4.NaCl(Sigma S5886-IKG)

5.96孔平衡透析板(HTDialysis LLC,Gales Ferry,CT，HTD96B)，平衡透析膜(MWCO12-14K,#1101)

6.阳性对照化合物华法林

7.ABI QTrap 5500液质联用仪

二、试验步骤

1.浓度为100mM磷酸钠盐和150mM NaCl的缓冲液的配制：用超纯水配制浓度为14.2g/L Na₂HPO₄和8.77g/L NaCl的碱性溶液，用超纯水配制浓度为12.0g/L NaH₂PO₄和8.77g/LNaCl的酸性溶液。用酸性溶液滴定碱性溶液至pH值为7.4配制成浓度为100mM磷酸钠盐和150mM NaCl的缓冲液。

2.透析膜的准备：将透析膜浸泡在超纯水中60分钟以便将膜分离成两片，然后用20％乙醇浸泡20分钟，最后用透析所用缓冲液浸泡20分钟。

3.血浆的准备：将冷冻的血浆迅速在室温下解冻，然后将血浆在4℃、3220g下离心10分钟去除凝块，并将上清收集到新的离心管中。测定和记录血浆的pH值，使用pH值为7-8的血浆。

4.含化合物的血浆样品的配制：用DMSO稀释10mM的本发明化合物或阳性对照化合物的储备液得到200μM的工作液。597μl小鼠血浆中加入3μl 200μM的化合物工作液得到终浓度为1μM的血浆样品。

5.平衡透析步骤：按照操作说明将透析装置组装起来。在透析膜的一侧加入120μL含1μM化合物的血浆样品，另一侧加入等体积的透析液(磷酸盐缓冲液)。试验设双样本。封上透析板，放入孵育装置，在37℃、5％CO₂及约100rpm转速下孵育6小时。孵育结束后，去除封膜，从每个孔的缓冲液和血浆侧吸取50μl到新板的不同孔中。在磷酸盐缓冲液样品中加入50μl空白血浆，在血浆样品中加入等体积的空白磷酸盐缓冲液，然后加入300μl含内标的乙腈沉淀蛋白。涡旋5分钟，在4℃、3220g下离心30分钟。取100μl上清液至进样板，加入100μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。

测定化合物在缓冲液侧和血浆侧的峰面积。计算化合物的血浆蛋白结合率公式如下：

％游离率＝(缓冲液侧的化合物峰面积与内标峰面积比值/血浆侧的化合物峰面积与内标峰面积比值)*100％

％结合率＝100％-％游离率

所有的数据均通过Microsoft Excel软件进行计算。计算得到的本发明化合物的血浆蛋白结合率值见表7。

表7化合物在CD-1小鼠血浆中的蛋白结合率

化合物	％结合率
		化合物(II)	99.7％

测试试验例5：药代动力学评价

实验材料：

CB17-SCID小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

DMSO、HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)、PEG400(聚乙二醇400)、Vitamin E TPGS(D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)购自Sigma。

乙腈购自Merck(USA)。

实验方法：

雌性CB17-SCID小鼠6只(20-30g，4-6周)，随机分成2组，每组3只。第1组尾静脉注射给予化合物，溶媒5％二甲基亚砜和95％的羟丙基-β-环糊精(10％，w/v)水溶液，第2组口服给予相应剂量的化合物，溶媒30％聚乙二醇400和70％的D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸(10％，w/v)水溶液。动物实验前正常喂食喂水。每组小鼠于给药前及给药后0.083(仅静脉注射组)、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24h进行静脉采血。收集的全血样品置于K2EDTA抗凝管中，离心5min后(4000rpm，4℃)取血浆待测。

取小鼠血浆样品10μL，加入150μL乙腈溶剂(其中含内标化合物)沉淀蛋白，涡旋0.5min后，离心(4700rpm，4℃)15min，上清液用含0.05％(v/v)FA的水稀释2倍，于LC-MS/MS系统(AB Sciex Triple Quad 6500+)进行定量检测。在测定样品浓度时随行CB17-SCID小鼠血浆标准曲线和质控样品。对10x稀释样品，取2μL样品加入18μL的空白血浆，涡旋0.5min后，加入300μL乙腈溶剂(其中含内标化合物)沉淀蛋白，其余处理步骤同不稀释样品。

PK测试结果如下表8所示。

表8化合物的小鼠PK评价

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.式(II)化合物的晶型I，其中所述晶型I以衍射角2θ表示的X-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、22.20±0.2°处有衍射峰

2.根据权利要求1所述的式(II)化合物晶型I，其中，所述晶型I通过单晶衍射结构分析确定属于三斜晶系，P1空间群，其晶胞参数和晶胞体积为：

α＝71.47(3)°，β＝71.36(3)°，γ＝80.56(3)°，

3.权利要求1或2所述的式(II)化合物的晶型I的制备方法，包括：将式(II)化合物加入溶剂(i)中，室温溶解或加热溶解，溶清后，冷却析晶，即得。

4.根据权利要求3所述的式(II)化合物的晶型I的制备方法，其中，溶剂(i)选自乙醇、正丙醇、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸甲酯、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃、乙腈、4-甲基-2-戊酮、乙酸和丙酸中的一种或多种，优选乙酸乙酯、乙酸甲酯、正丙醇、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃或2-丁酮中的一种或多种，更加优选乙腈、乙酸乙酯、正丙醇或2-丁酮中的一种或多种。

5.根据权利要求3或4所述的式(II)化合物的晶型I的制备方法，其中，所述溶剂(i)的体积(mL)为式(II)化合物重量(g)的5～150倍，优选10～50倍，更优选20～35倍。

6.权利要求1或2所述的式(II)化合物的晶型I的制备方法，包括：将式(II)化合物加入良溶剂中，室温溶解或加热溶解后，再向其中加入反溶剂，析出晶体，即得。

7.根据权利要求6所述的式(II)化合物的晶型I的制备方法，其中，所述良溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、正丙醇、乙酸和丙酸中的一种或多种，优选四氢呋喃或二氯甲烷；所述反溶剂选自水、异丙醚、甲基叔丁醚、乙醚、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、环己和甲苯中的一种或多种，优选甲基叔丁醚、环己烷或甲苯中的一种或多种。

8.根据权利要求6或7所述的式(II)化合物的晶型I的制备方法，其中，所述良溶剂的体积(mL)为式(II)化合物重量(g)的1～50倍，优选5～20倍，更优选10～15倍；所述良溶剂与反溶剂的体积比为1：(0.5～20)，优选1：(0.5～10)，更优选1：(0.5～7)。

9.一种药物组合物，含有根据权利要求1或2所述的式(II)化合物的晶型I，以及药学上可接受的辅料。

10.权利要求1或2所述的式(II)化合物的晶型I或权利要求9所述的药物组合物在制备用于治疗或预防已知或可显示抑制RAD51会产生有益效应的疾病或病症的药物的用途，所述已知或可显示抑制RAD51会产生有益效应的疾病或病症优选肿瘤和自身免疫病。

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