CN115856159B - 隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，该隐形眼镜护理液包含泊洛沙姆和羟丙基甲基纤维素，采用高效液相色谱法对待测样品进行检测；其中，采用的色谱条件为：色谱柱为氨基色谱柱；流动相包括乙腈和醋酸铵‑氨水缓冲液；所述乙腈与醋酸铵‑氨水缓冲液的体积比为75:25～65:35。本发明方法具有出峰时间快，灵敏度和准确度高，峰型良好的优点。且通过特定采用体积比为75:25～65:35的乙腈和醋酸铵‑氨水缓冲液作为流动相，在检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素时，可有效避免泊洛沙姆的干扰。

Description

隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法

技术领域

本申请涉及医疗器械及检测分析领域，具体涉及一种羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，尤其涉及一种隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法。

背景技术

羟丙基甲基纤维素（Hypromellose），又名羟丙甲纤维素，属于非离子型纤维素混合醚中的一种。它是一种半合成的、不活跃的、黏弹性的聚合物，具有良好的保湿功能，且由于羟丙基甲基纤维素水溶液的渗透压与眼泪相同，对眼睛刺激小，因此常作为接触眼球水晶体的润滑剂，添加于眼药中。

羟丙基甲基纤维素也常作为保湿剂广泛应用于隐形眼镜护理液中，作为隐形眼镜护理液的有效成分之一，当隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量在一定范围内时，有利于提供合适的液体粘度且利于护理液被眼体吸收。根据医疗器械分类目录，隐形眼镜的护理液被列为国家III类医疗器械。根据相应的法规要求，在规定期限后，护理液的部分成分含量的变化量应保持在较低水平，因此，需要对护理液中的羟丙基甲基纤维素的含量进行检测。

传统的羟丙甲纤维素检测方法为二甲胺显色法和凝胶色谱法，二苯胺显色法反应时间长，灵敏度和准确度较低；凝胶色谱法在示差检测器上的色谱峰峰型较差，出峰时间较长。因此，亟需开发一种出峰时间快，灵敏度和准确度更高的羟丙基甲基纤维素检测方法。

发明内容

基于上述衍生剂的优缺点，本发明的目的在于提供一种隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，具体是采用高效色谱色谱法（HPLC）并应用氨基色谱柱检测羟丙基甲基纤维素。

为了解决上述技术问题，本申请提供下述技术方案。

本申请提供了一种隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，所述隐形眼镜护理液包含泊洛沙姆和羟丙基甲基纤维素，采用高效液相色谱法对待测样品进行检测；

其中，采用的色谱条件为：

色谱柱为氨基色谱柱；

流动相包括乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液；所述乙腈与醋酸铵-氨水缓冲液的体积比为75:25～65:35。

在发明人的研究中发现，色谱柱的选择对羟丙基甲基纤维素的检测至关重要。发明人尝试了采用不同色谱柱进行检测，如采用C18色谱柱、凝胶色谱柱时，均导致了羟丙基甲基纤维素不出峰，从而无法实现检测；而只有特定采用氨基色谱柱时，才可检测到羟丙基甲基纤维素出峰，并进一步分析发现：氨基柱中的氨丙基可以和羟丙基甲基纤维素中羟丙氧基发生键合吸附作用，且吸附强度与护理液中其他成分不同，使其与护理液中泊洛沙姆等其他物质在氨基柱上的保留时间不同，从而进行分离。

在发明人前期的研究中还发现，隐形眼镜护理液中的泊洛沙姆与羟丙基甲基纤维素的出峰时间接近，为实现两者的有效分离，发明人尝试了采用不同流动相进行洗脱，最终意外发现只有采用流动相为乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液，且两者体积比为75:25～65:35时，才能实现泊洛沙姆与羟丙基甲基纤维素的有效分离。而若两者的体积比超出该范围，则会导致帕洛沙姆出峰时间提前或羟丙基甲基纤维素出峰时间延后，从而使得两者的色谱峰无法分离，无法实现对羟丙基甲基纤维素的定量检测。

在本发明前期的实验中进一步发现，因为隐形眼镜护理液中可能会含有酸性物质，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。采用乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液为流动相溶液，醋酸铵-氨水缓冲液中因铵离子的存在，能够对氨基柱的氨基官能团起到一定的补充作用，从而能够有效防止柱效降低、提高检测结果的准确性及稳定性，同时能够更好的保护氨基柱，延长色谱柱的使用寿命。

作为优选方案，所述醋酸铵-氨水缓冲液中，醋酸铵的浓度和氨水的含量不做特别的限定，其不会对实验造成明显影响，只要含有即可用于本发明中。例如可采用醋酸铵的浓度为10 mmol,氨水的质量百分含量为0.1%。

作为优选方案，所述氨基色谱柱包括ZORBAX NH2 色谱柱。

作为优选方案，所述乙腈与醋酸铵-氨水缓冲液的体积比为70:30。

作为优选方案，所述检测采用的检测器为示差折光检测器。

作为优选方案，所述检测器温度为30～40 ℃。

作为优选方案，所述色谱条件还包括：

流动相的流水为0.5～2 ml/min；

柱温为30～40 ℃；

运行时间为10 min；

进样量为5～20 μl。

作为优选方案，所述色谱条件还包括：

流动相的流水为1 ml/min；

柱温为35 ℃；

运行时间为10 min；

进样量为10 μl。

作为优选方案，所述的隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法的具体步骤如下：

A、准确移取待测试的隐形眼镜护理液，稀释后形成待测样品溶液；

B、配制羟丙基甲基纤维素对照溶液；

C、配制醋酸铵-氨水缓冲液；

D、将待测样品溶液上样至高效液相色谱仪中，采用氨基色谱柱，以乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相进行洗脱，并利用示差折光检测器检测羟丙基甲基纤维素含量。

与现有技术相比，本发明积极效果在于：

1）本发明提供了一种采用高效色谱色谱法（HPLC）并应用氨基色谱柱检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素的方法，羟丙基甲基纤维素中的羟丙氧基能够与氨基柱中的氨丙基产生键合吸附作用，且键合吸附强度与护理液中其他物质不同，使其与护理液中泊洛沙姆等其他物质在氨基柱上的保留时间不同，从而能使羟丙甲基甲基纤维素的特征峰与泊洛沙姆等其他物质的特征峰有效分离，检测专属性好，且具有出峰时间快，灵敏度和准确度高，峰型良好的优点。

2）本发明通过特定采用体积比为75:25～65:35的乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相，在检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素时，可有效避免泊洛沙姆的干扰。通过选择合适的流动相的成分和配比，对于护理液中的羟丙基甲基纤维素的检测，能够有利于获得良好的分离效果和提高检测的准确度。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1显示根据实施例1方法测定空白溶液的高效液相色谱图；

图2显示根据实施例1方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图3显示根据实施例1方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图4显示根据实施例1方法得到的羟丙基甲基纤维素线性方程；

图5 显示根据实施例2方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图6显示根据实施例2方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图7 显示根据实施例3方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图8显示根据实施例3方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图9 显示根据实施例4方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图10显示根据实施例4方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图11 显示根据实施例5方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图12显示根据实施例5方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图13 显示根据实施例6方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图14显示根据实施例6方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图15 显示根据对比例1方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图16显示根据对比例1方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图17 显示根据对比例2方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图18显示根据对比例2方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图19 显示根据对比例3方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图20显示根据对比例3方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图21 显示根据对比例4方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图22显示根据对比例4方法测定供试品溶液的高效液相色谱图；

图23 显示根据对比例5方法测定对照溶液的高效液相色谱图；

图24显示根据对比例5方法测定供试品溶液的高效液相色谱图。

具体实施方式

除非另有说明、从上下文暗示或属于现有技术的惯例，否则本申请中所有的份数和百分比都基于重量。在适用的情况下，本申请中涉及的任何专利、专利申请或公开的内容全部结合于此作为参考，且其等价的同族专利也引入作为参考。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。

本申请中的数字范围是近似值，因此除非另有说明，否则其可包括范围以外的数值。数值范围包括以1个单位增加的从下限值到上限值的所有数值，条件是在任意较低值与任意较高值之间存在至少2个单位的间隔。例如，如果记载组分、物理或其它性质（如分子量，熔体指数等）是100至1000，意味着明确列举了所有的单个数值，例如100， 101, 102等，以及所有的子范围，例如100到166,155到170,198到200等。对于包含小于1的数值或者包含大于1的分数（例如1.1， 1.5等）的范围，则适当地将1个单位看作0.0001， 0.001， 0.01或者0.1。对于包含小于10（例如1到5）的个位数的范围，通常将1个单位看作0.1。这些仅仅是想要表达的内容的具体示例，并且所列举的最低值与最高值之间的数值的所有可能的组合都被认为清楚记载在本申请中。还应指出，本文中的术语“第一”、“第二”等不限定先后顺序，只是为了区分不同结构的物质。

关于化学化合物使用时，除非明确地说明，否则单数包括所有的异构形式，反之亦然（例如，“己烷”单独地或共同地包括己烷的全部异构体）。另外，除非明确地说明，否则用“一个”，“一种”或“该”形容的名词也包括其复数形式。

术语“包含”，“包括”，“具有”以及它们的派生词不排除任何其它的组分、步骤或过程的存在，且与这些其它的组分、步骤或过程是否在本申请中披露无关。为消除任何疑问，除非明确说明，否则本申请中所有使用术语“包含”，“包括”，或“具有”的组合物可以包含任何附加的添加剂、辅料或化合物。相反，除了对操作性能所必要的那些，术语“基本上由……组成”将任何其他组分、步骤或过程排除在任何该术语下文叙述的范围之外。术语“由……组成”不包括未具体描述或列出的任何组分、步骤或过程。除非明确说明，否则术语“或”指列出的单独成员或其任何组合。

以下实施例提供了一种隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，所述隐形眼镜护理液包含泊洛沙姆和羟丙基甲基纤维素，采用高效液相色谱法（HPLC）对待测样品进行检测；

其中，采用的色谱条件为：

色谱柱为氨基色谱柱；

流动相包括乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液；所述乙腈与醋酸铵-氨水缓冲液的体积比为75:25～65:35（v/v）。

在一种具体实施方式中，乙腈与醋酸铵-氨水缓冲液的体积比可以为75:25、70:30、65:35或者它们中任意两个数值之间的范围或子范围。

在一种具体实施方式中，采用的醋酸铵-氨水缓冲液中，醋酸铵的浓度和氨水的含量不做特别的限定，其不会对实验造成明显影响，只要含有即可用于本发明中。如采用醋酸铵的浓度为10 mmol,氨水的质量百分含量为0.1%。

在一种具体实施方式中，采用的液相色谱仪可以为Agilent 1260的HPLC系统，或者为其他相当的HPLC系统。

在一种具体实施方式中，采用的氨基色谱柱可以为ZORBAX NH2 Analytical 4.6*250mm 5μm，或者为其他相当的氨基色谱柱。

在一种具体实施方式中，所述检测采用的检测器为示差折光检测器，所述检测器温度为30～40 ℃，例如可为30℃、35℃、40℃或者它们中任意两个数值之间的范围或子范围。

在一种具体实施方式中，色谱条件如下所述：流动相流速为0.5～2 ml/min，例如为0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4 、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0 mL/min或者它们中任意两个数值之间的范围或者子范围。色谱柱的柱温为30～40℃，例如可为30℃、35℃、40℃或者它们中任意两个数值之间的范围或子范围。色谱仪运行时间为10 min。待测样品的进样体积为5～20μl。

实施例

下面将结合本申请的实施例，对本申请的技术方案进行清楚和完整的描述。如无特别说明，所用的试剂和原材料都可通过商业途径购买。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1

本实施例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，具体包括以下步骤：

1、样品溶液及试剂配制

（1）空白溶液（稀释剂）：纯化水（自制）

（2）羟丙基甲基纤维素对照溶液（2.88 mg/ml）： 精密称取288.0 mg 羟丙基甲基纤维素对照品，置于100 ml容量瓶中，加适量稀释剂稀释溶解后，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。精密移取上述溶液1 ml，置于10 ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。

（3）供试品溶液：精密移取隐形眼镜护理液产品（本公司自制产品，其包含泊洛沙姆和羟丙基甲基纤维素，且羟丙基甲基纤维素添加量为2.88 mg/L）1 ml，置于10 ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。

（4）10mmol醋酸铵+0.1%氨水溶液：将醋酸铵溶于纯化水中配制10mmol醋酸铵溶液，然后加入一定量氨水，使所得溶液中氨水的质量百分含量为0.1%。

2、上样检测

将步骤1制备的空白溶液、对照溶液和供试品溶液分别上样至高效液相色谱仪中，采用氨基色谱柱，以乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相进行洗脱，并利用示差折光检测器检测羟丙基甲基纤维素含量。

具体色谱条件如下：

（1）液相色谱仪：Agilent 1260的HPLC系统

（2）检测器：示差折光检测器（RID）

（3）色谱柱：ZORBAX NH2 Analytical 4.6*250mm 5μm

（4）柱温：35℃

（5）检测器温度：35℃

（6）样品盘温度：室温

（7）进样量：10 μl

（8）泵参数

流速：1.0 ml/min

运行时间：10 min

（9）流动相系统：乙腈（HPLC级）：10mmol醋酸铵+0.1%氨水=70:30（v/v）

3、定性鉴别

将空白溶液、对照溶液和供试品溶液进出检测后，得到的色谱图依次如图1、图2和图3所示。由图2和图3可见，在基准峰的相同位置，供试品溶液与羟丙基甲基纤维素对照溶液出现保留时间（参考值：1.5 min）一致的色谱峰，证明该处即为羟丙基甲基纤维素的出峰。

由图1可见，空白溶液在羟丙基甲基纤维素处无干扰峰，说明本方法可以满足隐形眼镜护理液中羟丙基甲基纤维素含量检测。

4、计算及报告方法

对羟丙基甲基纤维素对照溶液色谱图（图2）中的基准峰进行积分处理，计算平均峰面积。

对供试品溶液色谱图（图3）中的基准峰进行积分处理，计算平均峰面积。

采用以下公式计算供试溶液中羟丙基甲基纤维素的含量：

式中：

Aspl：供试品溶液中羟丙基甲基纤维素的峰面积；

P：对照品含量；

：两份对照溶液的平均响应因子，ml/mg；

5、准确度试验

对本发明方法的准确度进行考察，具体采用的准确度溶液及其回收率结果如表1所示。其中，各浓度水平（50%、100%、150%）的准确度溶液的配制方法与前述步骤1中对照溶液配制方法相同，仅羟丙基甲基纤维素对照品的称样量不同（各浓度水平的准确度溶液称样量如表1所示）。

表1 准确度溶液及其回收率结果

由表1的结果可见，本发明方法的样品回收率为99.15-100.51%，说明本发明方法的准确度高。

6、线性

对本发明方法的线性方程进行拟合，配制的溶液浓度水平（采用羟丙基甲基纤维素配制，具体配制方法为：准确称取羟丙基甲基纤维素标准品，用稀释液稀释后得储备液，然后取储备液分别稀释到表2所示的各浓度）及峰面积如表2所示。所得羟丙基甲基纤维素线性方程如图4所示。

表2 配制的溶液浓度及峰面积

 由图4可见，本发明所得线性方程为：y=58133x+17.145，R²=0.9999，其中x表示色谱图中羟丙基甲基纤维素特征峰的积分峰面积，y表示羟丙基甲基纤维素的浓度（单位为mg/mL），R²表示相关系数。因此，本实施例所述的高效液相色谱法检测浓度在0.5～5.0 mg/ml范围内的羟丙基甲基纤维素具有良好的线性相关性。

实施例2

本实施例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，具体包括以下步骤：

将采用与实施例1相同方法制备的对照溶液和供试品溶液分别上样至高效液相色谱仪中，采用氨基色谱柱，以乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相进行洗脱，并利用示差折光检测器检测羟丙基甲基纤维素含量。

具体色谱条件如下：

（1）液相色谱仪：Agilent 1260的HPLC系统

（2）检测器：示差折光检测器（RID）

（3）色谱柱：ZORBAX NH2 Analytical 4.6*250mm 5μm

（4）柱温：35℃

（5）检测器温度：35℃

（6）样品盘温度：室温

（7）进样量：10 μl

（8）泵参数

流速：1.0 ml/min

运行时间：10 min

（9）流动相系统：乙腈（HPLC级）：10mmol醋酸铵+0.1%氨水=70:30（v/v）

将对照溶液和供试品溶液上样检测所得色谱图如图5和图6所示，所得峰面积如表3所示。

表3 供试品溶液峰面积和含量结果

实施例3

本实施例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，具体包括以下步骤：

将采用与实施例1相同方法制备的对照溶液和供试品溶液分别上样至高效液相色谱仪中，采用氨基色谱柱，以乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相进行洗脱，并利用示差折光检测器检测羟丙基甲基纤维素含量。

具体色谱条件如下：

（1）液相色谱仪：Agilent 1260的HPLC系统

（2）检测器：示差折光检测器（RID）

（3）色谱柱：ZORBAX NH2 Analytical 4.6*250mm 5μm

（4）柱温：30℃

（5）检测器温度：30℃

（6）样品盘温度：室温

（7）进样量：10 μl

（8）泵参数

流速：1.0 ml/min

运行时间：10 min

（9）流动相系统：乙腈（HPLC级）：10mmol醋酸铵+0.1%氨水=70:30（v/v）

将对照溶液和供试品溶液上样检测所得色谱图如图7和图8所示，所得峰面积如表4所示。

表4 供试品溶液峰面积和含量结果

实施例4

本实施例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，具体包括以下步骤：

将采用与实施例1相同方法制备的对照溶液和供试品溶液分别上样至高效液相色谱仪中，采用氨基色谱柱，以乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相进行洗脱，并利用示差折光检测器检测羟丙基甲基纤维素含量。

具体色谱条件如下：

（1）液相色谱仪：Agilent 1260的HPLC系统

（2）检测器：示差折光检测器（RID）

（3）色谱柱：ZORBAX NH2 Analytical 4.6*250mm 5μm

（4）柱温：40℃

（5）检测器温度：40℃

（6）样品盘温度：室温

（7）进样量：10 μl

（8）泵参数

流速：1.0 ml/min

运行时间：10 min

（9）流动相系统：乙腈（HPLC级）：10mmol醋酸铵+0.1%氨水=70:30（v/v）

将对照溶液和供试品溶液上样检测所得色谱图如图9和图10所示，所得峰面积如表5所示。

表5 供试品溶液峰面积和含量结果

实施例5

本实施例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，具体包括以下步骤：

将采用与实施例1相同方法制备的对照溶液和供试品溶液分别上样至高效液相色谱仪中，采用氨基色谱柱，以乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相进行洗脱，并利用示差折光检测器检测羟丙基甲基纤维素含量。

具体色谱条件如下：

（1）液相色谱仪：Agilent 1260的HPLC系统

（2）检测器：示差折光检测器（RID）

（3）色谱柱：ZORBAX NH2 Analytical 4.6*250mm 5μm

（4）柱温：35℃

（5）检测器温度：35℃

（6）样品盘温度：室温

（7）进样量：10 μl

（8）泵参数

流速：1.0 ml/min

运行时间：10 min

（9）流动相系统：乙腈（HPLC级）：10mmol醋酸铵+0.1%氨水=65:35（v/v）

将对照溶液和供试品溶液上样检测所得色谱图如图11和图12所示，所得峰面积如表6所示。

表6 供试品溶液峰面积和含量结果

实施例6

本实施例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，具体包括以下步骤：

将采用与实施例1相同方法制备的对照溶液和供试品溶液分别上样至高效液相色谱仪中，采用氨基色谱柱，以乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相进行洗脱，并利用示差折光检测器检测羟丙基甲基纤维素含量。

具体色谱条件如下：

（1）液相色谱仪：Agilent 1260的HPLC系统

（2）检测器：示差折光检测器（RID）

（3）色谱柱：ZORBAX NH2 Analytical 4.6*250mm 5μm

（4）柱温：35℃

（5）检测器温度：35℃

（6）样品盘温度：室温

（7）进样量：10 μl

（8）泵参数

流速：1.0 ml/min

运行时间：10 min

（9）流动相系统：乙腈（HPLC级）：10mmol醋酸铵+0.1%氨水=75:25（v/v）

将对照溶液和供试溶液上样检测所得色谱图如图13和图14所示，所得峰面积如表7所示。

表7 供试品溶液峰面积和含量结果

对比例1

本对比例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，与实施例2的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比例中采用的流动相系统为乙腈（HPLC级）：10mmol醋酸铵+0.1%氨水=60:40（v/v）。

将对照溶液和供试溶液上样检测所得色谱图如图15和图16所示，结果显示护理液中羟丙基甲基纤维素出峰时间延后，羟丙基甲基纤维素和泊洛沙姆的色谱峰无法分离，无法进行定量计算。

对比例2

本对比例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，与实施例2的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比例中采用的流动相系统为乙腈（HPLC级）：10mmol醋酸铵+0.1%氨水=80:20（v/v）。

将对照溶液和供试溶液上样检测所得色谱图如图17和图18所示，结果显示护理液中泊洛沙姆出峰时间提前，羟丙基甲基纤维素和泊洛沙姆的色谱峰无法分离，无法进行定量计算。

对比例3

本对比例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，与实施例2的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比例中采用的色谱柱为流动相系统为YMC Pack ODS-AQ 4.6*150mm 5μm。

将对照溶液和供试溶液上样检测所得色谱图如图19和图20所示，结果显示护理液中羟丙基甲基纤维素不出峰，无法进行定量计算。

本对比例3采用YMC Pack ODS-AQ 4.6*150mm 5μm色谱柱(十八烷基硅烷键合硅胶填料，也可以称为C18色谱柱)，其是根据待测物分子极性大小进行选择性分离，实验结果显示护理液中羟丙基甲基纤维素不出峰，因此不适用于检测护理液中羟丙甲基纤维素的含量。

对比例4

本对比例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，与实施例2的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比例中采用的色谱柱为流动相系统为凝胶色谱柱Biocore SEC-300，7.8*300mm 5μm。

将对照溶液和供试溶液上样检测所得色谱图如图21和图22所示，结果显示护理液中羟丙基甲基纤维素不出峰，无法进行定量计算。

对比例5

本对比例提供了一种采用高效色谱色谱法检测隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的方法，与实施例2的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比例中采用的检测器为二极管阵列检测器（DAD）。

将对照溶液和供试溶液上样检测所得色谱图如图23和图24所示，结果显示护理液中羟丙基甲基纤维素不出峰，无法进行定量计算。

二极管阵列检测器（DAD）用于检测有共轭结构紫外吸收的物质，本对比例5结果说明羟丙甲纤维素没有紫外吸收，因此DAD不适用于羟丙甲基纤维素含量的检测。

上述对实施例的描述是为了便于本技术领域的普通技术人员能理解和应用本申请。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其它实施例中而不必付出创造性的劳动。因此，本申请不限于这里的实施例，本领域技术人员根据本申请披露的内容，在不脱离本申请范围和精神的情况下做出的改进和修改都本申请的范围之内。

Claims (8)

1.一种隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，其特征在于，所述隐形眼镜护理液包含泊洛沙姆和羟丙基甲基纤维素，采用高效液相色谱法对待测样品进行检测；

其中，采用的色谱条件为：

色谱柱为氨基色谱柱；

流动相包括乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液；所述乙腈与醋酸铵-氨水缓冲液的体积比为75:25～65:35。

2. 根据权利要求1所述的隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，其特征在于，所述氨基色谱柱包括ZORBAX NH2 色谱柱。

3.根据权利要求1所述的隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，其特征在于，所述乙腈与醋酸铵-氨水缓冲液的体积比为70:30。

4.根据权利要求1所述的隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，其特征在于，所述检测采用的检测器为示差折光检测器。

5. 根据权利要求4所述的隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，其特征在于，所述检测器温度为30～40 ℃。

6.根据权利要求1所述的隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：

流动相的流速为0.5～2 ml/min；

柱温为30～40 ℃；

运行时间为10 min；

进样量为5～20 μl。

7.根据权利要求1所述的隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：

流动相的流速为1 ml/min；

柱温为35 ℃；

运行时间为10 min；

进样量为10 μl。

8.根据权利要求1所述的隐形眼镜护理液中的羟丙基甲基纤维素含量的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

A、准确移取待测试的隐形眼镜护理液，稀释后形成待测样品溶液；

B、配制羟丙基甲基纤维素对照溶液；

C、配制醋酸铵-氨水缓冲液；

D、将待测样品溶液上样至高效液相色谱仪中，采用氨基色谱柱，以乙腈和醋酸铵-氨水缓冲液作为流动相进行洗脱，并利用示差折光检测器检测羟丙基甲基纤维素含量。

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