CN115836085A - 用于预防和治疗病毒感染的多肽 - Google Patents
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Abstract
一种用于治疗涉及丝氨酸蛋白酶的病毒引起的病毒感染，并减缓所述病毒的感染扩散的多肽，所述多肽具有选自与LEKTI、SPINK6或SPINK9‑多肽的结构域1‑14中任一具有至少70％序列一致性的氨基酸序列。
Description
本发明的主题是一种用于预防和治疗涉及丝氨酸蛋白质酶(proteinase)的病毒引起的病毒感染的多肽，特别是冠状病毒，如CoV-2或流感病毒。
冠状病毒病(COVID-19)是首次在人类中鉴定的一种由新型病毒SARS-CoV-2引起的传染病。这种病毒还会导致呼吸道疾病，症状包括咳嗽和发热。在更严重的情况下可能会出现肺炎。由冠状病毒引起的流行已经在世界范围内导致了极其严重的健康问题，并且因此导致了相当大的经济和社会破坏。
流感病毒属于正粘病毒(Orthomyxoviridae)科(RNA病毒)，并引起流感(“真正的”流感)。
WO 02/066513 A2和WO 03/070953 A1公开了丝氨酸蛋白质酶抑制剂LEKTI的人类循环片段及其用于治疗急性或慢性皮肤疾病、宫颈炎症、巴氏腺和其它阴道区域的炎症、扁桃体炎、咽炎和喉炎、与过量粘液形成有关的急性或慢性炎症过程以及由此引起的急性紧急情况、纤溶亢进(hypefibrinolysis)引起的术后出血、用于预防α1-蛋白质酶抑制剂缺乏引起的肺气肿、以及用于治疗哮喘、艾滋病、肺炎、肿瘤疾病和白血病。LEKTI是淋巴上皮Kazal型相关抑制剂(Lympho-epithelial Kazal-type-related inhibitor，LEKTI)的首字母缩写，也称为丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型5(SPINK5)，在人类中由基因SPINK5编码。多肽SPINK6和SPINK9也是已知的。
提供减缓或阻止病毒传播的方法，一方面作为预防措施，另一方面为能够对受感染的患者进行治疗，是迫切需要的。
令人惊讶是，LEKTI的结构域1-14，特别是3-14，以及多肽SPINK6和SPINK9被发现充当TMPRSS2和KLK5的肽抑制剂，并且可以预防性地和治疗性地用于治疗病毒感染或由此引起的疾病，例如COVID-19或流感。多肽具有至少70％的序列一致性。
TMPRSS2(上皮素)是一种内源性胰蛋白酶样丝氨酸蛋白质酶(蛋白水解酶)，对于冠状病毒-2或流感病毒的感染是必需的。在不联系理论的情况下，机制原理可以想象如下：TMPRSS2水解切割病毒“刺突”蛋白的一部分，使其激活并使其与宿主细胞的特定表面蛋白对接(dock)。这是感染的必要前提。因此，这种蛋白质酶的抑制剂可作为治疗COVID-19或流感的药物(LiWenShen，Hui JuanMao，YanLingWu，YoshimasaTanaka，Wen Zhang，TMPRSS2：Apotential target for treatment of influenza virus and coronavirus in-fections，Biochimie 142(2017)1-10；Brian S.Hamilton and Gary R.Whit-taker，Cleavage Ac-tivation of Human-adapted Influenza Virus Subtypes by Kal-likrein-related Peptidases 5and 12*，The Journal Of Biological ChemistryVol.288，No.24，pp.17399-17407，June 14，2013)。胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶KLK5(kallikrein-related peptidase 5，激肽释放酶相关肽酶5)可以在赖氨酸残基后切割，优选地在精氨酸后切割(MEROPS数据库http：//www.ebi.ac.uk/merops/cgi-bin/pepsum？id＝S01.017；type＝P)。由于KLK5和TMPRSS2在流感刺突蛋白的激活中具有相当的特性，因此假设两者都具有相似的切割特异性，并且TMPRSS2也倾向于在精氨酸之后切割。
LEKTI的结构域3-14位于抑制中心，“模拟(imitate)”天然底物，并在相应的位点(“P1位点”)具有精氨酸残基。因此，特别是LEKTI的结构域3-14有望作为丝氨酸蛋白质酶KLK5和TMPRSS2的抑制剂，并由此抑制流感和冠状病毒感染。
因此，本发明的主题是，第一，具有选自LEKTI多肽结构域1-14中的至少一个的氨基酸序列的多肽，特别是具有SEQ ID NO：1至35的氨基酸序列的多肽；第二，多肽SPINK6或SPINK9，特别是具有SEQ ID NO：37和39或40和42的多肽，用于治疗涉及丝氨酸蛋白质酶的病毒引起的病毒感染，以及减缓所述病毒(特别是冠状病毒或流感病毒)感染的扩散。
在另一个实施方案中，本发明涉及具有与LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽的结构域1-14中任一至少70％序列一致性的氨基酸序列的多肽在制备药物中的用途，所述药物用于治疗涉及丝氨酸蛋白质酶的病毒感染和减缓病毒感染的扩散。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种治疗涉及丝氨酸蛋白质酶的病毒引起的病毒感染导致的疾病的方法，并通过施用具有与LEKTI、SPINK6或SPINK9-多肽的结构域1-14中任一至少70％序列一致性的氨基酸序列的多肽来减缓所述病毒感染的扩散。
下面将进一步解释这些实施方案。所有优选特征可以以任何组合应用于任何上述实施方案。
图1显示了LEKTI多肽的15个结构域的典型代表的比对。典型的是在氨基酸序列中分别存在四个半胱氨酸(Cys)残基，而六个半胱氨酸的存在显示了抑制作用的增强。除了肽15外，其他结构域中Cys残基的间距是相同的。在肽15中，需要在比对中第二个Cys之前缺失来匹配，这意味着那里存在相同数量的氨基酸。第二个和第三个Cys之间的区域明显是-TREN/SD-基序，其在大多数结构域中是保守的。
图2显示了当氨基酸序列中分别存在四个和六个半胱氨酸时，结构域中半胱氨酸的典型桥接。如果存在四个半胱氨酸，第一个半胱氨酸与第四个桥接，第二个半胱氨酸与第三个桥接。如果存在六个半胱氨酸，S-S键的形成通常发生在第一个和第五个之间，第二个和第四个之间，以及第三个和第六个半胱氨酸之间。
图3显示了Lekti的结构域1-15中所称的P1位点。
图4显示了多肽SPINK6(https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/NP_995313.2)和SPINK9(https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/NP_001035523.1)的氨基酸序列。
成熟的SPINK6蛋白(SEQ ID NO：39)的范围是SEQ ID NO：37的第24-80位氨基酸。SEQ ID NO：38的第1-23位氨基酸对应分泌信号肽。
成熟的SPINK9蛋白(SEQ ID NO：42)的范围是SEQ ID NO：40的第20-86位氨基酸。SEQ ID NO：41的第1-19位氨基酸对应分泌信号肽。
在本发明的一个实施方案中，多肽是来自LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽结构域的同源或异源二聚体。例如，LEKTI的结构域2的多肽可以与LEKTI的结构域3的多肽连接。在这种情况下，存在结构域2和3的异源二聚体。例如，如果两个结构域5相互连接，则存在同源二聚体。结构域可以通过例如一个结构域的N末端和另一个结构域的N末端之间的肽键连接。其他分子间连接也是可能的。
在本发明的一个实施方案中，多肽包含猪(porcine)、牛(bovine)来源的LEKTI、SPINK6或SPINK9序列，或灵长类(primates)，特别是人类的LEKTI形式。
在本发明的另一个实施方案中，多肽是具有治疗活性的LEKTI、SPINK6或SPINK9片段，且是人类LEKTI结构域、SPINK6或SPINK9的突变体和/或衍生物。
LEKTI、SPINK6或SPINK9变体也包括多肽及其突变体或衍生物的修饰。修饰的LEKTI、SPINK6或SPINK9是天然序列中的一个或多个氨基酸被修饰的多肽，使得非天然存在的氨基酸残基存在于多肽链中。这种修饰原则上可以在蛋白质翻译期间或之后进行，并包括例如磷酸化、糖基化、磺化、交联、酰化或蛋白水解切割。
除了LEKTI，SPINK6或SPINK9多肽、衍生物、变体及其片段由于在涉及丝氨酸蛋白质酶的病毒(例如冠状病毒或流感病毒)引起的感染中产生抑制，也可用作抗冠状病毒感染剂，与天然LEKTI、SPINK6或SPINK9片段的抑制相当。
氨基酸取代通常可以以保守的方式进行。保守取代是指一个密码子被另一个密码子取代的突变。在这种情况下，编码了不同的氨基酸，然而其与原始氨基酸化学上相关，例如甘氨酸与丙氨酸或苏氨酸与丝氨酸。另一方面，当原始密码子被编码不同化学性质的氨基酸的密码子取代时，发生非保守取代，例如甘氨酸取代赖氨酸。
在两种或更多多肽的情况下，术语“相同”或“相同百分比”是指两种或多种序列或子序列是相同的，或者当使用序列比较算法进行比较和“比对”以获得最大一致性时具有一定百分比的相同的氨基酸。用于比较序列的优化比对可以使用例如以下算法进行：Smith&Waterman的局部同源比对，Adv.Appl.Math.2：482(1981)；Needleman&Wunsch的同源性比对算法，J.Mol.Biol.48：443(1970)；Pearson&Lipman，Proc.Nat′l.Acad.Sci.USA 85：2444(1988)；(GAP，BESTFIT，FASTA，and TFASTA in Wisconsin Genetics Software Package，Genetics Computer Group，575Science Dr.，Madison，WI)，以及视觉检查【com-pare，Current Protocols in Molecular Biology，(Ausubel，F.M.et al.，eds.)John Wiley&Sons，Inc，New York(1987-1999，including Supplement 46(April 1999))】。
在两种多肽的情况下，使用的表述“基本上相同”或类似表述是指当使用序列比较算法进行最大一致性比较和比对时，具有至少70％，特别地至少80％，特别地至少90％，特别地至少95％的序列一致性的两种或多种序列或子序列。特别是当存在长度至少为40-60个氨基酸，特别地60-80个氨基酸，优选地超过90-100个氨基酸残基的序列区域时，存在基本一致性，特别是在天然多肽的氨基酸序列的全长上基本相同。
多肽的片段通常可以通过切割LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽链的相应结构域来获得。通过切割多肽链进行片段化的方法对于专家是已知的。
例如，多肽可以被称为蛋白酶的酶切割。蛋白质酶(也称为内肽酶，endopeptidase)之间的区别取决于蛋白酶是在氨基酸链内还是在末端切割多肽(蛋白质)。它们在氨基酸链内切割蛋白质。它们主要识别蛋白质中的特定序列片段，并在那里攻击和切割。
另一方面，外切蛋白酶(也称为外肽酶，exopeptidase)在蛋白质的末端切割单个氨基酸。与蛋白质酶相反，它们主要分解较小的肽，而不是蛋白质。对比以下的不同：
·羧肽酶类，在羧基末端(C末端)切割氨基酸
·氨肽酶类，在氨基末端(N末端)切割氨基酸。
特异性蛋白酶切割两个特定氨基酸之间的肽键；在某些情况下，它们识别多于一种底物。这些蛋白酶用于，例如研究蛋白质的亲和力，制备用于测序的蛋白质和分离蛋白质的活性结构域。此类蛋白酶的一些例子如下表1所示：
表1-特异性蛋白酶及其特性
与特异性蛋白酶相反，非特异性蛋白酶在一系列氨基酸之前或之后切割肽链，因此产生小得多的切割片段。此类非特异性蛋白酶的一些例子如下表2所示：
表2-非特异性蛋白酶及其特性
除了蛋白酶之外，特定化学物质也可用于肽的蛋白水解分析。氰溴胺(BrCN)是这种类型中最重要的试剂，它在甲硫氨酸残基C端切割蛋白质。在该过程中形成肽基-高丝氨酸内酯(peptidyl-homoserine lactone)。然后可以在聚丙烯酰胺凝胶中分离得到的肽片段，并通过染色可视化。
表3-化学蛋白水解的典型试剂及其特性
蛋白质水解的一个特例是所谓的有限蛋白质水解(limited proteolysis)。与完全水解相反，在这种方法中蛋白质消化并不完全，并在精确的反应条件下发生(因此蛋白水解以有限的方式进行)。在天然蛋白质的球状区域，肽键比蛋白质表面的肽键暴露得少得多。这意味着如果短时间使用蛋白酶，或者如果蛋白酶浓度非常低，在蛋白酶到达更内部的切割位点之前，可能首先分离单个蛋白质的结构域。这意味着有限蛋白质水解是在蛋白酶稀释液和/或次最佳反应条件下进行的，并在短时间后停止。在这种方法中，蛋白质以其天然形式被蛋白水解切割(而不是在变性后)；这有时会影响蛋白酶的选择。如果蛋白质需要例如EDTA以获得最佳稳定性，则金属蛋白酶不能用于消化。
关于蛋白质分析和多肽的蛋白水解切割流程的更多信息可以在教科书“Arbeitsmethoden der Biochemie”(“生物化学中的工作方法”)中找到，作者是AlfredPingoud、Claus Urbanke、Walter de Gruyter，例如章节5.1.6。
在本发明的另一个实施方案中，所述多肽具有与LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽的结构域1-14中任一，尤其是选自由SEQ ID NO：1至35、37、39、40和42组成的组中至少80％、特别地至少90％、特别地至少95％的序列一致性。优选地，所述多肽具有与LEK-TI、SPINK6或SPINK9多肽的结构域2-14中任一，尤其是选自由SEQ ID NO：2至35、37、39、40和42组成的组中至少80％，特别地至少90％，特别地至少95％的序列一致性。具体而言，所述多肽具有与LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽的结构域3-14中任一，尤其是选自由SEQ ID NO：3至35、37、39、40和42组成的组中至少80％、特别地至少90％、特别地至少95％的序列一致性。
在另一个实施方案中，多肽基本上存在于水溶液中，特别是含有药物辅料(pharmaceutical excipient)的水溶液中。
辅料(excipient)可以单独或以组合加入到多肽中，也可以加入到最终配方中。辅料可以在药物产品的盖仑制剂中的不同点(point)加入。
建议稳定多肽以防止聚集或寡聚化。如果需要，还可以向配方中加入抑菌剂如苯甲醇、表面活性剂如吐温20、等渗剂如甘露醇、一种或多种稳定氨基酸如赖氨酸或精氨酸以及抗氧化剂。
在另一个实施方案中，配制多肽用于肠胃外给药。
在另一个实施方案中，多肽以每剂量单位1微摩尔至50微摩尔，优选地2微摩尔至25微摩尔，特别优选地6微摩尔至12微摩尔的量存在。
在下文中，将通过非限制性方式进行进一步解释本发明。
实施例：
1.使用基于VSV(水疱性口炎病毒)的假粒子(pseudoparticles)测试LEKTI结构域抗SARS-CoV-2的活性
携带外源病毒糖蛋白的复制缺陷型病毒用作假型病毒。
将10,000个Caco2(结肠直肠癌细胞)接种在100μl相应的培养基中。第二天，去除培养基并用60μl无血清的Caco2培养基代替。向细胞中加入20μl纯化的LEKTI制剂，并在37℃下孵育2小时。
用20μl携带SARS-CoV-2刺突(VSV(Luc-eGFP)-CoV-2)或VSV-G糖蛋白(VSV(Luc-eGFP)-G)的基于VSV的假粒子(VSV(Luc-eGFP))感染细胞。16小时后测量感染。
加入EK1或CM(甲磺酸卡莫司他)制剂而不是LEKTI作为对照。这些是抗病毒剂。EK1是病毒/细胞融合的肽抑制剂，而甲磺酸卡莫司他为合成蛋白质酶抑制剂，抑制例如蛋白质酶TMPRSS2(“冠状刺突蛋白激活剂(corona spike protein activator)”)。
感染率的评估依据LEKTI结构域、EK 1和CM各自的浓度。然后，计算半抑制浓度(IC50)。LD6和LD6(III)在测试的(两个)最大浓度下是有毒性的。在确定IC50值时，不考虑LD6和LD6(III)的毒性浓度。结果如下表4所示：
表4：
LD：重组LEKTI结构域
EK 1：肽抑制剂
CM：甲磺酸卡莫司他
LD2/3是LEKTI结构域2和3(SEQ ID NO：2和3)的组合，其中LD3的氨基酸直接连接在LD2的氨基酸之后。LD6和LD 6(III)分别对应于SEQ ID NO：17和18。LD15对应于SEQ IDNO：36。
2.使用基于慢病毒(Lentivirus)的假颗粒(基于LV的假颗粒)测试LEKTI结构域抗SARS-CoV-2的活性
携带外源病毒糖蛋白的复制缺陷型病毒用作假型病毒。
将10,000个Caco2(结肠直肠癌细胞)接种在100μl相应的培养基中。第二天，去除培养基并用60μl无血清Caco2培养基代替。
向细胞中加入20μl纯化的LEKTI制剂，并在37℃下孵育1小时。用20μl携带SARS-CoV-2刺突(LV(Luc)-CoV-2)或VSV-G糖蛋白(LV(Luc)-G)或MLV糖蛋白(LV(Luc)-MLV)的基于LV的假颗粒感染细胞。48小时后测量感染。
感染率的评估依据LEKTI结构域、EK 1和CM各自的浓度。然后，计算半抑制浓度(IC50)。LD2/3、LD6、LD6(III)和LD15在测试的(两个)最大浓度下是有毒性的。在确定IC50时，不考虑目测的毒性浓度。结果如下表5所示：
表5：
SEQUENCE LISTING
<110> 法里斯生物技术有限责任公司
<120> 用于预防和治疗病毒感染的多肽
<130> P22117144WP
<140> PCT/EP2021/058150
<141> 2021-03-29
<150> EP20167370.4
<151> 2020-03-31
<150> EP20184401.6
<151> 2020-07-07
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<213> 人类(human)
<400> 13
Glu Ser Gly Lys Ala Thr Ser Tyr Ala Glu Leu Cys Asn Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Leu Val Arg Asn Gly Lys Leu Ala Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Gln Gly Pro Asp Gly Lys Val His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Val Phe Phe Gln Ala Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Gly
50 55 60
Lys Ser Arg Asn Lys Arg
65 70
<210> 14
<211> 70
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 14
Glu Ser Gly Lys Ala Thr Ser Tyr Ala Glu Leu Cys Asn Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Leu Val Arg Asn Gly Lys Leu Ala Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Cys Gly Pro Asp Gly Lys Val His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Val Phe Phe Gln Ala Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Gly
50 55 60
Lys Cys Arg Asn Lys Arg
65 70
<210> 15
<211> 70
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 15
Glu Ser Gly Lys Ala Thr Ser Tyr Ala Glu Leu Cys Ser Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Leu Val Arg Asn Gly Lys Leu Ala Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Gln Gly Pro Asp Gly Lys Val His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Val Phe Phe Gln Ala Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Gly
50 55 60
Glu Ser Arg Asn Lys Arg
65 70
<210> 16
<211> 70
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 16
Glu Ser Gly Lys Ala Thr Ser Tyr Ala Glu Leu Cys Ser Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Leu Val Arg Asn Gly Lys Leu Ala Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Cys Gly Pro Asp Gly Lys Val His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Val Phe Phe Gln Ala Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Gly
50 55 60
Glu Cys Arg Asn Lys Arg
65 70
<210> 17
<211> 70
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 17
Glu Ser Gly Lys Ala Thr Ser Tyr Ala Glu Leu Cys Asn Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Leu Val Arg Asn Gly Lys Leu Ala Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Gln Gly Pro Asp Gly Lys Val His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Val Phe Phe Gln Ala Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Gly
50 55 60
Glu Ser Arg Asn Lys Arg
65 70
<210> 18
<211> 70
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 18
Glu Ser Gly Lys Ala Thr Ser Tyr Ala Glu Leu Cys Asn Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Leu Val Arg Asn Gly Lys Leu Ala Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Cys Gly Pro Asp Gly Lys Val His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Val Phe Phe Gln Ala Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Gly
50 55 60
Glu Cys Arg Asn Lys Arg
65 70
<210> 19
<211> 64
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 19
Gln Ser Lys Ser Thr Ala Ser Phe Glu Glu Leu Cys Ser Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Ser Arg Lys Asn Gly Arg Leu Phe Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Gln Gly Pro Asp Gly Lys Met His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Ala Phe Phe Gln Gln Glu Glu Arg Ala Arg Ala Lys Ala Lys Arg
50 55 60
<210> 20
<211> 71
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 20
Glu Ala Ala Lys Glu Ile Cys Ser Glu Phe Arg Asp Gln Val Arg Asn
1 5 10 15
Gly Thr Leu Ile Cys Thr Arg Glu His Asn Pro Val Arg Gly Pro Asp
20 25 30
Gly Lys Met His Gly Asn Lys Cys Ala Met Cys Ala Ser Val Phe Lys
35 40 45
Leu Glu Glu Glu Glu Lys Lys Asn Asp Lys Glu Glu Lys Gly Lys Val
50 55 60
Glu Ala Glu Lys Val Lys Arg
65 70
<210> 21
<211> 71
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 21
Glu Ala Ala Lys Glu Ile Cys Ser Glu Phe Arg Asp Gln Val Arg Asn
1 5 10 15
Gly Thr Leu Ile Cys Thr Arg Glu His Asn Pro Val Cys Gly Pro Asp
20 25 30
Gly Lys Met His Gly Asn Lys Cys Ala Met Cys Ala Ser Val Phe Lys
35 40 45
Leu Glu Glu Glu Glu Lys Lys Asn Asp Lys Glu Glu Cys Gly Lys Val
50 55 60
Glu Ala Glu Lys Val Lys Arg
65 70
<210> 22
<211> 65
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 22
Glu Ala Val Gln Glu Leu Cys Ser Glu Tyr Arg His Tyr Val Arg Asn
1 5 10 15
Gly Arg Leu Pro Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro Ile Glu Gly Leu Asp
20 25 30
Gly Lys Ile His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys Glu Ala Phe Phe Gln
35 40 45
Gln Glu Ala Lys Glu Lys Glu Arg Ala Glu Pro Arg Ala Lys Val Lys
50 55 60
Arg
65
<210> 23
<211> 65
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 23
Glu Ala Val Gln Glu Leu Cys Ser Glu Tyr Arg His Tyr Val Arg Asn
1 5 10 15
Gly Arg Leu Pro Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro Ile Cys Gly Leu Asp
20 25 30
Gly Lys Ile His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys Glu Ala Phe Phe Gln
35 40 45
Gln Glu Ala Lys Glu Lys Glu Arg Ala Glu Pro Arg Cys Lys Val Lys
50 55 60
Arg
65
<210> 24
<211> 64
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 24
Glu Ala Glu Lys Glu Thr Cys Asp Glu Phe Arg Arg Leu Leu Gln Asn
1 5 10 15
Gly Lys Leu Phe Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro Val Arg Gly Pro Asp
20 25 30
Gly Lys Thr His Gly Asn Lys Cys Ala Met Cys Lys Ala Val Phe Gln
35 40 45
Lys Glu Asn Glu Glu Arg Lys Arg Lys Glu Glu Glu Asp Gln Arg Asn
50 55 60
<210> 25
<211> 64
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 25
Glu Ala Glu Lys Glu Thr Cys Asp Glu Phe Arg Arg Leu Leu Gln Asn
1 5 10 15
Gly Lys Leu Phe Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro Val Cys Gly Pro Asp
20 25 30
Gly Lys Thr His Gly Asn Lys Cys Ala Met Cys Lys Ala Val Phe Gln
35 40 45
Lys Glu Asn Glu Glu Arg Lys Arg Lys Glu Glu Glu Cys Gln Arg Asn
50 55 60
<210> 26
<211> 74
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 26
Ala Ala Gly His Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Asn Thr Gln Asp
1 5 10 15
Glu Cys Ala Glu Tyr Arg Glu Gln Met Lys Asn Gly Arg Leu Ser Cys
20 25 30
Thr Arg Glu Ser Asp Pro Val Arg Asp Ala Asp Gly Lys Ser Tyr Asn
35 40 45
Asn Gln Cys Thr Met Cys Lys Ala Lys Leu Glu Arg Glu Ala Glu Arg
50 55 60
Lys Asn Glu Tyr Ser Arg Ser Arg Ser Asn
65 70
<210> 27
<211> 74
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 27
Ala Ala Gly His Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Asn Thr Gln Asp
1 5 10 15
Glu Cys Ala Glu Tyr Arg Glu Gln Met Lys Asn Gly Arg Leu Ser Cys
20 25 30
Thr Arg Glu Ser Asp Pro Val Cys Asp Ala Asp Gly Lys Ser Tyr Asn
35 40 45
Asn Gln Cys Thr Met Cys Lys Ala Lys Leu Glu Arg Glu Ala Glu Arg
50 55 60
Lys Asn Glu Tyr Ser Arg Ser Cys Ser Asn
65 70
<210> 28
<211> 74
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 28
Ala Ala Gly His Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Asn Thr Gln Asp
1 5 10 15
Glu Cys Ala Glu Tyr Gln Glu Gln Met Lys Asn Gly Arg Leu Ser Cys
20 25 30
Thr Arg Glu Ser Asp Pro Val Arg Asp Ala Asp Gly Lys Ser Tyr Asn
35 40 45
Asn Gln Cys Thr Met Cys Lys Ala Lys Leu Glu Arg Glu Ala Glu Arg
50 55 60
Lys Asn Glu Tyr Ser Arg Ser Arg Ser Asn
65 70
<210> 29
<211> 74
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 29
Ala Ala Gly His Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Asn Thr Gln Asp
1 5 10 15
Glu Cys Ala Glu Tyr Gln Glu Gln Met Lys Asn Gly Arg Leu Ser Cys
20 25 30
Thr Arg Glu Ser Asp Pro Val Cys Asp Ala Asp Gly Lys Ser Tyr Asn
35 40 45
Asn Gln Cys Thr Met Cys Lys Ala Lys Leu Glu Arg Glu Ala Glu Arg
50 55 60
Lys Asn Glu Tyr Ser Arg Ser Cys Ser Asn
65 70
<210> 30
<211> 68
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 30
Gly Thr Gly Ser Glu Ser Gly Lys Asp Thr Cys Asp Glu Phe Arg Ser
1 5 10 15
Gln Met Lys Asn Gly Lys Leu Ile Cys Thr Arg Glu Ser Asp Pro Val
20 25 30
Arg Gly Pro Asp Gly Lys Thr His Gly Asn Lys Cys Thr Met Cys Lys
35 40 45
Glu Lys Leu Glu Arg Glu Ala Ala Glu Lys Lys Lys Lys Glu Asp Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Asn
65
<210> 31
<211> 68
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 31
Gly Thr Gly Ser Glu Ser Gly Lys Asp Thr Cys Asp Glu Phe Arg Ser
1 5 10 15
Gln Met Lys Asn Gly Lys Leu Ile Cys Thr Arg Glu Ser Asp Pro Val
20 25 30
Cys Gly Pro Asp Gly Lys Thr His Gly Asn Lys Cys Thr Met Cys Lys
35 40 45
Glu Lys Leu Glu Arg Glu Ala Ala Glu Lys Lys Lys Lys Glu Asp Glu
50 55 60
Cys Arg Ser Asn
65
<210> 32
<211> 79
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 32
Thr Gly Glu Arg Ser Asn Thr Gly Glu Arg Ser Asn Asp Lys Glu Asp
1 5 10 15
Leu Cys Arg Glu Phe Arg Ser Met Gln Arg Asn Gly Lys Leu Ile Cys
20 25 30
Thr Arg Glu Asn Asn Pro Val Arg Gly Pro Tyr Gly Lys Met His Ile
35 40 45
Asn Lys Cys Ala Met Cys Gln Ser Ile Phe Asp Arg Glu Ala Asn Glu
50 55 60
Arg Lys Lys Lys Asp Glu Glu Lys Ser Ser Ser Lys Pro Ser Asn
65 70 75
<210> 33
<211> 79
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 33
Thr Gly Glu Arg Ser Asn Thr Gly Glu Arg Ser Asn Asp Lys Glu Asp
1 5 10 15
Leu Cys Arg Glu Phe Arg Ser Met Gln Arg Asn Gly Lys Leu Ile Cys
20 25 30
Thr Arg Glu Asn Asn Pro Val Cys Gly Pro Tyr Gly Lys Met His Ile
35 40 45
Asn Lys Cys Ala Met Cys Gln Ser Ile Phe Asp Arg Glu Ala Asn Glu
50 55 60
Arg Lys Lys Lys Asp Glu Glu Cys Ser Ser Ser Lys Pro Ser Asn
65 70 75
<210> 34
<211> 67
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 34
Asn Ala Lys Asp Glu Cys Ser Glu Phe Arg Asn Tyr Ile Arg Asn Asn
1 5 10 15
Glu Leu Ile Cys Pro Arg Glu Asn Asp Pro Val His Gly Ala Asp Gly
20 25 30
Lys Phe Tyr Thr Asn Lys Cys Tyr Met Cys Arg Ala Val Phe Leu Thr
35 40 45
Glu Ala Leu Glu Arg Ala Lys Leu Gln Glu Lys Pro Ser His Val Arg
50 55 60
Ala Ser Gln
65
<210> 35
<211> 67
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 35
Asn Ala Lys Asp Glu Cys Ser Glu Phe Arg Asn Tyr Ile Arg Asn Asn
1 5 10 15
Glu Leu Ile Cys Pro Arg Glu Asn Asp Pro Val Cys Gly Ala Asp Gly
20 25 30
Lys Phe Tyr Thr Asn Lys Cys Tyr Met Cys Arg Ala Val Phe Leu Thr
35 40 45
Glu Ala Leu Glu Arg Ala Lys Leu Gln Glu Lys Cys Ser His Val Arg
50 55 60
Ala Ser Gln
65
<210> 36
<211> 87
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 36
Glu Glu Asp Ser Pro Asp Ser Phe Ser Ser Leu Asp Ser Glu Met Cys
1 5 10 15
Lys Asp Tyr Arg Val Leu Pro Arg Ile Gly Tyr Leu Cys Pro Lys Asp
20 25 30
Leu Lys Pro Val Cys Gly Asp Asp Gly Gln Thr Tyr Asn Asn Pro Cys
35 40 45
Met Leu Cys His Glu Asn Leu Ile Arg Gln Thr Asn Thr His Ile Arg
50 55 60
Ser Thr Gly Lys Cys Glu Glu Ser Ser Thr Pro Gly Thr Thr Ala Ala
65 70 75 80
Ser Met Pro Pro Ser Asp Glu
85
<210> 37
<211> 80
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 37
Met Lys Leu Ser Gly Met Phe Leu Leu Leu Ser Leu Ala Leu Phe Cys
1 5 10 15
Phe Leu Thr Gly Val Phe Ser Gln Gly Gly Gln Val Asp Cys Gly Glu
20 25 30
Phe Gln Asp Pro Lys Val Tyr Cys Thr Arg Glu Ser Asn Pro His Cys
35 40 45
Gly Ser Asp Gly Gln Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Ala Phe Cys Lys Ala
50 55 60
Ile Val Lys Ser Gly Gly Lys Ile Ser Leu Lys His Pro Gly Lys Cys
65 70 75 80
<210> 38
<211> 23
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 38
Met Lys Leu Ser Gly Met Phe Leu Leu Leu Ser Leu Ala Leu Phe Cys
1 5 10 15
Phe Leu Thr Gly Val Phe Ser
20
<210> 39
<211> 57
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 39
Gln Gly Gly Gln Val Asp Cys Gly Glu Phe Gln Asp Pro Lys Val Tyr
1 5 10 15
Cys Thr Arg Glu Ser Asn Pro His Cys Gly Ser Asp Gly Gln Thr Tyr
20 25 30
Gly Asn Lys Cys Ala Phe Cys Lys Ala Ile Val Lys Ser Gly Gly Lys
35 40 45
Ile Ser Leu Lys His Pro Gly Lys Cys
50 55
<210> 40
<211> 86
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 40
Met Arg Ala Thr Ala Ile Val Leu Leu Leu Ala Leu Thr Leu Ala Thr
1 5 10 15
Met Phe Ser Ile Glu Cys Ala Lys Gln Thr Lys Gln Met Val Asp Cys
20 25 30
Ser His Tyr Lys Lys Leu Pro Pro Gly Gln Gln Arg Phe Cys His His
35 40 45
Met Tyr Asp Pro Ile Cys Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Lys Asn Asp
50 55 60
Cys Phe Phe Cys Ser Lys Val Lys Lys Thr Asp Gly Thr Leu Lys Phe
65 70 75 80
Val His Phe Gly Lys Cys
85
<210> 41
<211> 19
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 41
Met Arg Ala Thr Ala Ile Val Leu Leu Leu Ala Leu Thr Leu Ala Thr
1 5 10 15
Met Phe Ser
<210> 42
<211> 67
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 42
Ile Glu Cys Ala Lys Gln Thr Lys Gln Met Val Asp Cys Ser His Tyr
1 5 10 15
Lys Lys Leu Pro Pro Gly Gln Gln Arg Phe Cys His His Met Tyr Asp
20 25 30
Pro Ile Cys Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Lys Asn Asp Cys Phe Phe
35 40 45
Cys Ser Lys Val Lys Lys Thr Asp Gly Thr Leu Lys Phe Val His Phe
50 55 60
Gly Lys Cys
65
<210> 43
<211> 55
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 43
Lys Asn Glu Asp Gln Glu Met Cys His Glu Phe Gln Ala Phe Met Lys
1 5 10 15
Asn Gly Lys Leu Phe Cys Pro Gln Asp Lys Lys Phe Phe Gln Ser Leu
20 25 30
Asp Gly Ile Met Phe Ile Asn Lys Cys Ala Thr Cys Lys Met Ile Leu
35 40 45
Glu Lys Glu Ala Lys Ser Gln
50 55
<210> 44
<211> 68
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 44
Glu Ser Gly Lys Ala Thr Ser Tyr Ala Glu Leu Cys Asn Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Leu Val Arg Asn Gly Lys Leu Ala Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Gln Gly Pro Asp Gly Lys Val His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Val Phe Phe Gln Ala Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Gly
50 55 60
Glu Ser Arg Asn
65
<210> 45
<211> 32
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 45
Cys Pro Asp Tyr Tyr Glu Ala Val Cys Gly Thr Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10 15
Asp Asn Arg Cys Ala Leu Cys Ala Glu Asn Ala Lys Thr Gly Ser Gln
20 25 30
<210> 46
<211> 32
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 46
Cys Pro Arg Asp Tyr Asp Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10 15
Ala Asn Glu Cys Ile Leu Cys Phe Glu Asn Arg Lys Phe Gly Thr Ser
20 25 30
<210> 47
<211> 34
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 47
Cys Pro Lys Asp Leu Lys Pro Val Cys Gly Asp Asp Gly Gln Thr Tyr
1 5 10 15
Asn Asn Pro Cys Met Leu Cys His Glu Asn Leu Ile Arg Gln Thr Asn
20 25 30
Thr His
<210> 48
<211> 35
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 48
Cys Pro Lys Ile Leu Lys Pro Val Cys Gly Ser Asp Gly Arg Thr Tyr
1 5 10 15
Ala Asn Ser Cys Ile Ala Arg Cys Asn Gly Val Ser Ile Lys Ser Glu
20 25 30
Gly Ser Cys
35
<210> 49
<211> 68
<212> PRT
<213> 人类(human)
<400> 49
Glu Ser Gly Lys Ala Thr Ser Tyr Ala Glu Leu Cys Asn Glu Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Leu Val Arg Asn Gly Lys Leu Ala Cys Thr Arg Glu Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Gln Gly Pro Asp Gly Lys Val His Gly Asn Thr Cys Ser Met Cys
35 40 45
Glu Val Phe Phe Gln Ala Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Gly
50 55 60
Glu Ser Arg Asn
65
Claims (16)
1.一种用于治疗涉及丝氨酸蛋白酶的病毒引起的病毒感染，并减缓所述病毒的感染扩散的多肽，所述多肽的氨基酸序列与选自LEKTI、SPINK6或SPINK9-多肽的结构域1-14中任一具有至少70％序列一致性。
2.如权利要求1中所述的多肽，其具有选自SEQ ID NO:1至35、37、39、40和42中的至少一个氨基酸序列。
3.如权利要求1或2所述的多肽，其中所述多肽为来自LEKTI多肽或SPINK6或SPINK9的结构域的同源或异源二聚体。
4.如权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含猪的(procine)、牛的(bovine)LEKTI、SPINK6或SPINK9序列，或者灵长类(primate)，例如人类的LEKTI、SPINK6或SPINK9序列形式。
5.如权利要求1至4中任一项所述的多肽，其中所述多肽为LEKTI、SPINK6或SPINK9片段，人类LEKTI、SPINK6或SPINK9结构域的突变体和/或衍生物，且具有治疗效果。
6.如权利要求1至5中任一项所述的多肽，其中所述多肽与LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽的结构域1-14中任一具有至少80％、特别地至少90％、特别地至少95％的序列一致性；特别地，所述多肽选自由SEQ ID NO:1至20、21、23、24和26组成的组。
7.如权利要求1到6中任一项所述的多肽，其中所述病毒为流感病毒或冠状病毒，特别地为CoV-2。
8.如权利要求1至7中任一项所述的多肽，其基本上存在于水溶液中，特别地在含有药物辅料(pharmaceutical excipient)的水溶液中。
9.如权利要求1到8中任一项所述的多肽，其中所述多肽经配制以用于肠胃外给药。
10.如权利要求1到9中任一项所述的多肽，其中所述多肽以每剂量单位6摩尔到12微摩尔的量存在。
11.具有与选自LEKTI、SPINK6或SPINK9-多肽的结构域1-14中任一具有至少70％序列一致性的氨基酸序列的多肽在制备药物中的用途，所述药物用于治疗涉及丝氨酸蛋白酶的病毒引起的病毒感染，并减缓所述病毒的感染扩散。
12.如权利要求11所述的用途，其中所述病毒为流感病毒或冠状病毒，特别地为CoV-2。
13.如权利要求11或12所述的用途，其中所述多肽与LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽的结构域1-14中任一具有至少80％、特别地至少90％、特别地至少95％的序列一致性；特别地，所述多肽选自SEQ ID NO:1至20、21、23、24和26组成的组。
14.一种治疗涉及丝氨酸蛋白酶的病毒引起的病毒感染导致的疾病，并减缓所述病毒的感染扩散的方法，所述方法通过施用具有与选自LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽的结构域1-14中任一具有至少70％序列一致性的氨基酸序列的多肽来治疗。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述病毒为流感病毒或冠状病毒，特别地为CoV-2。
16.如权利要求14或15所述的方法，其中所述多肽与LEKTI、SPINK6或SPINK9多肽的结构域1-14中任一具有至少80％、特别地至少90％、特别地至少95％的序列一致性；特别地，所述多肽选自SEQ ID NO:1至20、21、23、24和26组成的组。
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