CN115813918A - 吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用 - Google Patents
吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115813918A CN115813918A CN202211214660.0A CN202211214660A CN115813918A CN 115813918 A CN115813918 A CN 115813918A CN 202211214660 A CN202211214660 A CN 202211214660A CN 115813918 A CN115813918 A CN 115813918A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- indoleacetic acid
- depression
- acid
- medicament
- mice
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 162
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 title claims abstract description 77
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- 208000020401 Depressive disease Diseases 0.000 title description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 3
- -1 infusion Substances 0.000 claims description 3
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 claims description 3
- 241000792859 Enema Species 0.000 claims description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 claims description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 239000007920 enema Substances 0.000 claims description 2
- 229940095399 enema Drugs 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 29
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 abstract description 10
- 230000007267 depressive like behavior Effects 0.000 abstract description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 abstract description 5
- 208000036110 Neuroinflammatory disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 abstract description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003959 neuroinflammation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 36
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 33
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 19
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 13
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 9
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 9
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 8
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 6
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 101150053137 AIF1 gene Proteins 0.000 description 4
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 230000006724 microglial activation Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- BEPSIKQQPOTABL-UHFFFAOYSA-M sodium;2-(1h-indol-2-yl)acetate Chemical compound [Na+].C1=CC=C2NC(CC(=O)[O-])=CC2=C1 BEPSIKQQPOTABL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 101100447432 Danio rerio gapdh-2 gene Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150112014 Gapdh gene Proteins 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012346 open field test Methods 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- ZADWXFSZEAPBJS-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-amino-3-(1-methylindol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2N(C)C=C(C[C@@H](N)C(O)=O)C2=C1 ZADWXFSZEAPBJS-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- RTHCYVBBDHJXIQ-MRXNPFEDSA-N (R)-fluoxetine Chemical compound O([C@H](CCNC)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 RTHCYVBBDHJXIQ-MRXNPFEDSA-N 0.000 description 1
- QOPBEBWGSGFROG-UHFFFAOYSA-N 2-(1h-indol-2-yl)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(CC(=O)O)=CC2=C1 QOPBEBWGSGFROG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCC(=O)O)=CNC2=C1 GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 208000029751 Amino acid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010048909 Boredom Diseases 0.000 description 1
- 101100348341 Caenorhabditis elegans gas-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010051288 Central nervous system inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010144 Completed suicide Diseases 0.000 description 1
- 206010012374 Depressed mood Diseases 0.000 description 1
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 206010024642 Listless Diseases 0.000 description 1
- 101100447658 Mus musculus Gas1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100447665 Mus musculus Gas2 gene Proteins 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150033527 TNF gene Proteins 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000001642 activated microglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 description 1
- 229960000913 crospovidone Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000007357 depressive behavior Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxomagnesium;hydrate Chemical compound O.[Mg]=O.[Mg]=O.[Mg]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 1
- DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dodecahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010944 ethyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229960002464 fluoxetine Drugs 0.000 description 1
- AYEFPRGMJJIAOQ-UHFFFAOYSA-N formaldehyde 1H-indole Chemical compound C=O.N1C=CC2=CC=CC=C12 AYEFPRGMJJIAOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 239000008172 hydrogenated vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOAMBXDOGPRZLP-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetamide Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)N)=CNC2=C1 ZOAMBXDOGPRZLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 208000017971 listlessness Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229940031703 low substituted hydroxypropyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 229920003087 methylethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 230000008035 nerve activity Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000013809 polyvinylpolypyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000523 polyvinylpolypyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- ZADWXFSZEAPBJS-UHFFFAOYSA-N racemic N-methyl tryptophan Natural products C1=CC=C2N(C)C=C(CC(N)C(O)=O)C2=C1 ZADWXFSZEAPBJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用，属于医药技术领域。实验结果表明，吲哚乙酸可显著改善小鼠的抑郁样行为，具有良好的抗抑郁作用，可通过抑制小胶质细胞激活，缓解神经炎症。本发明中吲哚乙酸针对抑郁症的治疗见效较快，用药周期短，且未见明显的副作用，安全性较高。将吲哚乙酸应用于抗抑郁症的药物制备，不仅挖掘出了吲哚乙酸的药用新价值，也具有一定的医用前景和经济价值。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用。
背景技术
抑郁症，又称抑郁障碍，是一种常见的慢性疾病。患者以长期的情绪低落、精神萎靡、悲观厌世、快感丧失为特点，常伴有自杀行为或意图，部分病例也呈现出明显的焦虑状态。据世界卫生组织统计，全球范围内已有超过3亿人罹患抑郁症，平均发病率在4.4％左右。研究表明，抑郁症的发生、发展过程中常伴随着严重的CNS炎症反应，而肠道菌群的代谢产物对大脑的稳态及功能具有重要调节作用。广泛的菌群氨基酸代谢紊乱是抑郁症患者的特征性变化之一，其中的活性代谢物可直接调控神经活动，进而影响生物体情绪处理和行为决策。
抑郁症发病机制复杂，涉及遗传、心理、环境等多种因素影响。抑郁症通常通过心理干预、药物或两者兼用进行治疗，然而迄今为止针对抑郁症的治疗仍存在效果不理想、药效延迟、副作用多等缺点。因此，深入探索抑郁症的发病机制，并就不同发病机制开发新型的治疗靶点及药物具有重要的研究意义。
目前对于抑郁症进程中发挥关键效应的菌群氨基酸代谢物认识仍然比较局限，也少见利用菌群代谢物进行抑郁症防治的研究。色氨酸可被肠道微生物分解代谢成吲哚乙酸、吲哚丙酸、吲哚乙酰胺、吲哚甲醛等系列吲哚同系物，但是其中参与抑郁等行为调控的代谢物尚未见报道。
吲哚乙酸(indole-3-aceticacid,IAA)是色氨酸重要的微生物分解代谢物之一。吲哚乙酸主要用作医药中间体及植物生长激素，具有良好的抗神经炎症、抗氧化应激等作用。作为芳烃受体AHR的配体，吲哚乙酸可透过血脑屏障参与大脑小胶质细胞和星形胶质细胞的调节，抑制中枢神经系统炎症，从而发挥脑保护作用。
目前，全球范围内抑郁症发病率仍处于逐年上升趋势，抑郁症人群基数大，且在多个年龄段均有分布，对于开发出疗效好、副作用低、耐受性好的新型抗抑郁症治疗药物仍然存在持续迫切的需求。
发明内容
发明目的：本发明目的在于针对现有技术的不足，提供一种细菌代谢物吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用。本发明通过相关研究证实，吲哚乙酸具有良好的抗抑郁作用，可通过抑制小胶质细胞激活并缓解神经炎症，从而改善动物抑郁样行为。将吲哚乙酸应用于抗抑郁症的药物制备，不仅挖掘出了吲哚乙酸的药用新价值，也具有一定的医用前景和经济价值。
技术方案：本发明的目的通过下述技术方案实现：
本发明提供了吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用。
优选地，所述药物包含吲哚乙酸及其衍生物或其药学上可接受的盐。
进一步优选地，所述药物还包含药学上可接受的辅料。
更进一步地，所述辅料包含稀释剂、润湿剂、乳化剂、抗氧剂、黏合剂、润滑剂、增溶剂、防腐剂、崩解剂、金属络合剂中的一种或几种。
所述稀释剂选自淀粉类、糖类、纤维素类以及无机盐类中的至少一种。所述润湿剂选自水以及乙醇中的至少一种。所述乳化剂选自吐温类、司盘类、甘油脂肪酸酯类、明胶水、果胶、琼脂、硫酸化物、海藻酸钠以及二氧化硅中的至少一种。所述抗氧剂选自抗坏血酸、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、没食子酸及其脂类中的至少一种。所述黏合剂选自淀粉浆、羧甲基纤维素钠、聚维酮、羟丙基纤维素、甲基纤维素及乙基纤维素中的至少一种。所述润滑剂选自硬脂酸镁、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇类、微粉硅胶中的至少一种。所述增溶剂选择吐温类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、硫酸化物以及磺酸化物中的一种。所述防腐剂选自苯甲酸及其盐类、山梨酸及其盐类及尼泊金酯类中的至少一种。所述崩解剂选自淀粉、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯比咯烷酮中的至少一种。所述金属络合物选自乙二胺四乙酸二钠及多羧酸化合物中的一种。
优选地，所述药物中吲哚乙酸的有效剂量为20～60mg/kg。
进一步优选地，所述药物中吲哚乙酸的有效剂量为40mg/kg。
优选地，所述药物剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、丸剂、丹剂、散剂、乳剂或混悬剂。
优选地，所述药物剂型还可以为注射剂、输液剂、软膏剂、喷雾剂或贴剂。
优选地，所述药物的给药途径为口服给药、灌肠给药或注射给药。
本发明实验研究发现吲哚乙酸对抑郁样行为有明显的改善作用。吲哚乙酸(40mg/kg)于每日应激前30min单次灌胃给予小鼠。与模型组相比，给药组在旷场实验中，进入中心的次数与运动时间增加；社交实验中，社交得分明显升高；悬尾实验中，不动时间明显缩短，表明吲哚乙酸能改善抑郁样行为。由于吲哚乙酸具有抗炎活性，通过免疫荧光染色实验发现，吲哚乙酸给药后，与模型组比，海马脑区Iba1+阳性细胞数明显下降，表明吲哚乙酸可抑制海马脑区小胶质细胞激活。与此相一致地，实时荧光定量PCR结果显示，模型组促炎性细胞因子Tnf-α、Il-1β显著升高，而吲哚乙酸给药后上述因子水平具有一定的下降趋势，表明吲哚乙酸可抑制中枢炎症反应。以上结果表明吲哚乙酸具有一定的抗抑郁作用和制备用于抑郁症治疗药物的价值。
有益效果：
发明人发现吲哚乙酸可显著改善小鼠的抑郁样行为，具有良好的抗抑郁作用，可通过抑制小胶质细胞激活，缓解神经炎症。本发明中吲哚乙酸针对抑郁症的治疗见效较快，用药周期短，且未见明显的副作用，安全性较高。将吲哚乙酸应用于抗抑郁症的药物制备，不仅挖掘出了吲哚乙酸的药用新价值，也具有一定的医用前景和经济价值。
附图说明
图1为不可预测温和应激诱导的抑郁样小鼠体内吲哚乙酸含量的变化。图1A为血清中色氨酸含量；图1B为海马组织中色氨酸含量；图1C为血清中吲哚乙酸含量；图1D为海马组织中吲哚乙酸含量。
图2为吲哚乙酸对不可预测温和应激诱导的小鼠抑郁样行为的影响。图2A为吲哚乙酸给药的流程图；图2B为旷场实验小鼠运动轨迹图；图2C为旷场实验小鼠进入中心格的次数统计图；图2D为旷场实验小鼠进入中心格的时间统计图；图2E为社交实验小鼠运动轨迹图；图2F为社交实验小鼠的社交评分统计图；图2G为悬尾实验小鼠的不动时间统计图。
图3为吲哚乙酸对应激引起的小胶质细胞激活的影响。图3A为小鼠海马小胶质细胞荧光图；图3B为海马脑区Iba1+细胞数目统计图。
图4为吲哚乙酸对应激引起的促炎性细胞因子mRNA含量的影响。图4A为促炎性细胞因子Tnf-αmRNA含量；图4B为促炎性细胞因子Il-1βmRNA含量；图4C为促炎性细胞因子Il-6mRNA含量。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明技术方案进行详细说明，但是本发明的保护范围不局限于所述实施例。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
实施例1不可预测温和应激诱导的抑郁样小鼠体内吲哚乙酸含量的变化
为了寻找差异代谢物，本实施例建立了不可预知温和刺激抑郁小鼠模型，检测了色氨酸代谢通路中吲哚乙酸的变化，通过比较造模组与正常组中色氨酸以及下游代谢物含量的变化，为后续考察补充吲哚乙酸是否可产生抗抑郁作用提供研究基础。
(1)实验动物：C57BL/6J小鼠(雄性，6周龄)，18～22g，购买于浙江维通利华实验动物技术有限公司。
(2)不可预知温和刺激(unpredictable mild stress,UMS)抑郁小鼠模型的建立
每天采用多种不同的方式刺激小鼠，持续刺激1周以建立不可预知温和刺激(unpredictable mild stress,UMS)抑郁小鼠模型。小鼠接受的不可预知温和刺激情况如表1：
表1小鼠接受的不可预知温和刺激情况
(3)LC/MS检测色氨酸代谢通路中吲哚乙酸的变化
处死小鼠，取血清、脑组织，采用蛋白沉淀法进行样品前处理(匀浆液或血清样品中加入5倍体积乙腈，含2μg/mL内标1-甲基色氨酸(Sigma-Aldrich；CAS号26988-72-7；860646-250MG)，18000rpm离心，取上清液真空浓缩挥干后用甲醇复溶，18000rpm离心后吸取上清液60μL加入进样瓶。
采用API5500(LC-Q-IT)仪器进行检测。
色谱条件：色谱柱为WatersAtlantis T3 Column(2.1×100mm，3μm)。
流动相组成为：水相(溶剂A)为含0.1％甲酸的水溶液，有机相(溶剂B)为乙腈，梯度洗脱：0.5～5min(5-80％B)、5～6min(80～80％B)、6～6.1min(80％B)、6.1～8min(5％B)、8～8.2min(5％B)；流速为0.4mL/min，柱温为40℃，进样量5μL。
质谱条件：电喷雾离子化(ESI)；正离子检测模式；IonSource Gas1(GS1):50psi；Ion Source Gas2(GS2):50psi；Curtain Gas:30psi；离子源温度：500℃；鞘气N2流速：65Arb；辅助气N2：70Arb；碰撞气Ar压力：10Pa；选择性反应离子检测(SRM)。基于Analyst1.5.2(Applied Biosystems)软件进行数据采集及后处理。
(4)数据分析方法：实验数据以Mean±SEM表示，并采用GraphPad Prism 8软件对结果进行分析处理，数据采用t-test进行分析，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001，*p<0.05表示数据差异具有统计意义。
(5)实验结果
图1为不可预测温和应激诱导的抑郁样小鼠体内吲哚乙酸含量的变化。从图中可知：与空白组相比，UMS模型组小鼠无论在血清还是脑组织中，色氨酸及其代谢产物吲哚乙酸IAA含量都显著下降(****p＜0.0001,**p＜0.01；**p＜0.01，**p＜0.01)。
实施例2：吲哚乙酸对不可预测温和应激诱导的小鼠抑郁样行为的影响
(1)材料：C57BL/6J小鼠(雄性，6周龄)，18～22g，浙江维通利华实验动物技术有限公司。吲哚乙酸钠盐，Sigma-Aldrich；CAS号6505-45-9，货号I5148-2G。
吲哚乙酸溶液配制：精密称取IAA-Na，加入生理盐水，涡旋混匀，配制成浓度为4mg/ml的溶液。
实验开始前将小鼠适应性喂养7天，在标准条件下饲养(12h光/暗循环；温度24±1℃；相对湿度55±10％)，允许自由摄食和饮水。然后随机分为三组(每组n＝15)：空白组(Control)、不可预测温和应激模型组(UMS)、不可预测温和应激+吲哚乙酸组(UMS+IAA(40mg/kg))。每日UMS造模前30min，均按0.1mL/10g的给药体积灌胃给药一次，空白对照组和模型组均给予相应体积的生理盐水。
吲哚乙酸给药的流程图参见图2A：小鼠适应性喂养7天后开始造模，每日UMS造模前30min，均按0.1mL/10g的给药体积灌胃给药一次，总共给药7天。从第15天到第17天依次进行旷场实验、社交实验、悬尾实验一系列行为学评价。第18天处死小鼠并收集小鼠血浆和脑组织。
(2)旷场实验
实验处于安静的环境下进行。动物适应测试环境1h后开始实验。实验总区域为40*40cm，中心区域为20*20cm。将动物单独放入旷场试验箱箱壁面中心位置，同时进行摄像和计时，观察8min。测试后用75％乙醇擦拭方箱内壁及底面，再放入下一受试动物，避免相互影响。通过ANYMAZE软件计算单位时间内动物总运动距离，在中央格停留时间及运动距离，进入中央格次数等参数。
(3)社交实验
实验处于安静的环境下进行。动物适应测试环境1h后开始实验。实验总区域为40*40cm，社交区域为14*24cm。分为两个阶段：第一阶段：旷场试验箱箱壁一侧中部放置一10*4.5cm的隔离罩，将动物面朝隔离罩放置于试验箱中央，记录其在箱中2.5min的活动轨迹；第二阶段：将一CD-1退役鼠(8-10月龄，100～120g，购买于浙江维通利华实验动物技术有限公司)放入隔离罩中，再次将受试动物以同样方式放入旷场箱中并记录其在2.5min内的活动轨迹。实验结束后，移出受试动物及CD-1鼠，擦拭旷场箱底部及边缘区域。采用ANYMAZE软件计算放置CD-1鼠前后两次同一只受试动物在社交区域内的活动时间及进出次数。计算SI得分：第二阶段受试动物在社交区域的时间/第一阶段受试动物在社交区域的时间。若SI得分≥1，则定义小鼠为抑郁不易感型(stress resilient)，否则为易感型(stresssusceptible)。
(4)悬尾实验
实验处于安静的环境下进行。动物适应测试环境1h后开始实验。将小鼠尾部(离尾尖约2.5cm处)用胶带粘于悬尾支架，使小鼠头部与地面距离约为40cm。此时开始计时，采用摄像机录像记录6min内小鼠的活动状态。实验结束后，两个实验人员在单盲情况下进行不动时间的计算(前2min为适应时间)，其不动状态定义为小鼠停止挣扎，四肢不动或仅有微小摆动。
(5)数据分析方法：实验数据以Mean±SEM表示，并采用GraphPad Prism 8软件对结果进行分析处理，数据采用One-wayANOVA进行分析，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001，*p<0.05表示数据差异具有统计意义。
(6)结果
图2为吲哚乙酸对不可预测温和应激诱导的小鼠抑郁样行为的影响。其中，图2A为吲哚乙酸给药的流程图；图2B为旷场实验小鼠运动轨迹图；图2C为旷场实验小鼠进入中心格的次数统计图；图2D为旷场实验小鼠进入中心格的时间统计图；图2E为社交实验小鼠运动轨迹图；图2F为社交实验小鼠的社交评分统计图；图2G为悬尾实验小鼠的不动时间统计图。
从图中可以看出：在旷场实验中，与空白组相比，UMS模型组小鼠在旷场中心区域停留次数以及移动时间显著降低(****p<0.0001，****p<0.0001)，而给予IAA后，能够显著升高小鼠在中心区域停留次数以及移动时间(*p<0.05，*p<0.05)。与旷场实验结果一致，在社交实验中，给予IAA之后能够明显改善UMS小鼠的社交得分(p＝0.07)。在悬尾实验中，给予IAA能够显著减少小鼠的不动时间(**p<0.01)。这些结果表明IAA能够逆转不可预知温和应激引起的小鼠抑郁样行为。
实施例3：吲哚乙酸对应激引起的小胶质细胞激活的影响
(1)材料：C57BL/6J小鼠(雄性，6周龄，18～22g，浙江维通利华实验动物技术有限公司)。吲哚乙酸钠盐，Sigma-Aldrich；CAS号6505-45-9，货号I5148-2G。
实验开始前将小鼠适应性喂养7天，在标准条件下饲养(12h光/暗循环；温度24±1℃；相对湿度55±10％)，允许自由摄食和饮水。然后随机分为三组：空白组(Control)、不可预测温和应激模型组(UMS)、不可预测温和应激+吲哚乙酸组(UMS+IAA(40mg/kg))。每日UMS造模前30min，均按0.1mL/10g的给药体积灌胃给药一次，空白对照组和模型组均给予相应体积的生理盐水。
(2)处死小鼠，取全脑，将脑组织浸泡于4％的多聚甲醛固定。次日更换溶液，采用10％、20％及30％的蔗糖溶液梯度脱水。待脑组织完全沉底后，用冰冻切片机对脑组织进行切片处理，切片厚度为14μm。PBS(1LPBS溶液配制：称取氯化钾(KCl，购于南京化学试剂股份有限公司，批号：171116678F)粉末0.2g，磷酸二氢钾(KH2PO4，购于上海凌峰化学试剂有限公司，批号：批号20190322)粉末0.2g，氯化钠(NaCl，购于西陇科学股份有限公司，批号：2204022)粉末8g，十二水合磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O，购于南京化学试剂股份有限公司，批号：220121278D)2.08g加入1L超纯水中)洗3次后，用含0.3％Triton-100溶液(上海碧云天生物技术有限公司，产品编号ST795)的10％驴血清(北京索莱宝科技有限公司；货号SL050)封闭1h，之后孵育一抗Iba-1(Abcam，货号：ab178847)，4℃过夜。用含0.1％吐温20(南京化学试剂股份有限公司，CAS号9005-64-5，批号211228916F)的PBST洗5次后，孵育荧光二抗Alexa-555(Abcam，货号：ab150062)1h。PBST清洗5次，用含荧光抗淬灭剂DAPI溶液(Abcam；货号ab104139)孵育5min后封片，共聚焦观察。
(3)结果
图3为吲哚乙酸对应激引起的小胶质细胞激活的影响。其中，图3A为小鼠海马小胶质细胞荧光图；图3B为海马脑区Iba1+细胞数目统计图。Iba-1为小胶质细胞的标志性蛋白，主要用于标记激活的小胶质细胞。与空白组相比，UMS模型组小鼠海马组织内Iba-1蛋白表达显著升高(***p<0.001)，而给予IAA治疗之后能够显著降低Iba-1阳性细胞的数量(*p<0.05)，表明IAA能够抑制海马内小胶质细胞的激活。
实施例4：吲哚乙酸对应激引起的促炎性细胞因子含量的影响。
(1)材料：C57BL/6J小鼠(雄性，6周龄，18～22g，浙江维通利华实验动物技术有限公司)。吲哚乙酸钠盐，Sigma-Aldrich；CAS号6505-45-9，货号I5148-2G。
实验开始前将小鼠适应性喂养7天，在标准条件下饲养(12h光/暗循环；温度24±1℃；相对湿度55±10％)，允许自由摄食和饮水。然后随机分为三组：空白组(Control)、不可预测温和应激模型组(UMS)、不可预测温和应激+吲哚乙酸组(UMS+IAA(40mg/kg))。每日UMS造模前30min，均按0.1mL/10g的给药体积灌胃给药一次，空白对照组和模型组均给予相应体积的生理盐水。
(2)海马总RNA的抽提
造模期结束后，处死小鼠。取上述三组小鼠的海马组织于EP管中，加入匀浆珠进行充分研磨。研磨后加入500μLRNA-easy(RNA-easy Isolation Reagent，南京诺唯赞生物科技有限公司，货号R701-01)，剧烈振荡或移液枪吹打，使样品充分裂解。向裂解液中加入2/5体积的RNase-free ddH2O(上海碧云天生物技术有限公司，产品编号R0021，每500μLRNA-easy使用200μL)，上下颠倒混匀，室温静置5min后，以12000×g转速室温离心15min。取出离心管，小心吸取上层水相至一个新的离心管中。加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀，室温静置10min后，以12000×g室温离心10min，小心弃去上清。加入500μL 75％乙醇(RNase-freeddH2O配制)，轻弹管底，让沉淀悬浮起来，并上下颠倒数次。8000×g室温离心3min，弃去上清。重复加入75％乙醇并离心，弃尽上清。室温放置晾干，加入适量的RNase-free ddH2O溶解沉淀，室温涡旋3min，使RNA沉淀充分溶解。取2μL稀释100倍，通过OD260/280进行定量。
(3)逆转录RNA(RT-PCR)
取2μL上述提取的RNA，加入4μL 5×HiScript III qRT Supermix(南京诺唯赞生物科技有限公司，货号R323-01),14μL RNase-free ddH2O水，按下列程序反应：37℃15min，85℃5s进行反应。反应后将RT产物稀释至100μL，置于-20℃保存备用，通过PCR反应考察参照基因Gapdh的表达验证RT效果。
(4)实时荧光定量PCR反应(Q-PCR)：
材料：ChamQ Universal SYBR qPCR MasterMix：南京诺唯赞生物科技有限公司；货号Q711-02；
正向引物、反向引物均由Invitrogen(Life Technologies,美国)公司合成。
待测基因Il1β，其特异性引物对如下：
正向引物碱基序列：5′-GAAATGCCACCTTTTGACAGTG-3′；
反向引物碱基序列：5′-TGGATGCTCTCATCAGGACAG-3′；
待测基因Il6，其特异性引物对如下：
正向引物碱基序列：5′-TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC-3′；
反向引物碱基序列：5′-TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC-3′；
待测基因Tnfa，其特异性引物对如下：
正向引物碱基序列：5′-CATCTTCTCAAAATTCGAGTGACAA-3′；
反向引物碱基序列：5′-TGGGAGTAGACAAGGTACAACCC-3′；
参照基因Gapdh，其特异性引物对如下：
正向引物碱基序列：5′-CTCTCTGCTCCTCCTGTTCGAC-3′；
反向引物碱基序列：5′-TGAGCGATGTGGCTCGGCT-3′。
反应体系(15μL)：2×ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix 7.5μL；PCRForward Primer(10μM)1μL；PCR Reverse Primer(10μM)1μL；cDNA 5μL；RNase-free ddH2O0.5μL；
反应条件：
采用以参照基因为标准而进行相对定量，即2-ΔΔCT法。定义实验样本的目标基因为CT(TARGET,TEST)，参照基因的CT值为CT(REF,TEST)。类似地，校准样本的为：CT(TARGET,CAL)和CT(REF,CAL)。计算步骤如下：对所有的实验样本和校准样本，用参照基因的CT值归一目标基因的CT值：ΔCT(TEST)＝CT(TARGET,TEST)-CT(REF,TEST)，ΔCT(CAL)＝CT(TARGET,CAL)-CT(REF,CAL)；再用校准样本的ΔCT值归一实验样本的ΔCT值：ΔΔCT＝ΔCT(TEST)-ΔCT(CAL)，计算目标基因在实验样本和校准样本间的表达水平比率即2-ΔΔCT。
(5)结果
图4为吲哚乙酸对应激引起的促炎性细胞因子mRNA含量的影响。其中，图4A为促炎性细胞因子Tnf-αmRNA含量；图4B为促炎性细胞因子Il-1βmRNA含量；图4C为促炎性细胞因子Il-6mRNA含量。与空白组相比，UMS模型组小鼠海马内促炎性细胞因子Tnf-α、Il-1βmRNA含量显著升高(**p<0.01,**p<0.01)，Il-6mRNA含量变化不明显，而给予IAA治疗后这些炎症因子水平均有下降趋势，表明IAA能够抑制应激引起的炎症反应。
以上研究结果表明，吲哚乙酸对抑郁样行为有明显的改善作用。吲哚乙酸(40mg/kg)于每日应激前30min单次灌胃给予小鼠。与模型组相比，给药组在旷场实验中，进入中心的次数与运动时间增加；社交实验中，社交得分明显升高；悬尾实验中，不动时间明显缩短，表明吲哚乙酸能改善抑郁样行为。由于吲哚乙酸具有抗炎活性，通过免疫荧光染色实验发现，吲哚乙酸给药后，与模型组比，海马脑区Iba1+阳性细胞数明显下降，表明吲哚乙酸可抑制海马脑区小胶质细胞激活。与此相一致地，实时荧光定量PCR结果显示，模型组促炎性细胞因子Tnf-α、Il-1β显著升高，而吲哚乙酸给药后上述因子水平具有一定的下降趋势，表明吲哚乙酸可抑制中枢炎症反应。
本发明中，吲哚乙酸用药一周即起效，传统抑郁药例如氟西汀从用药到起效至少需要两周以上，且易复发。同时，传统抑郁药作用患者常出现嗜睡、胃肠道反应等副作用，在本发明实验中吲哚乙酸用药未见以上不良反应。因此，吲哚乙酸针对抑郁症的治疗见效较快，用药周期短，且未见明显的副作用，安全性较高。
如上所述，尽管参照特定的优选实施例已经表示和表述了本发明，但其不得解释为对本发明自身的限制。在不脱离所附权利要求定义的本发明的精神和范围前提下，可对其在形式上和细节上作出各种变化。
Claims (9)
1.吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包含吲哚乙酸及其衍生物或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物还包含药学上可接受的辅料。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述辅料包含稀释剂、润湿剂、乳化剂、抗氧剂、黏合剂、润滑剂、增溶剂、防腐剂、崩解剂、金属络合剂中的一种或几种。
5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述药物中吲哚乙酸的有效剂量为20～60mg/kg。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物中吲哚乙酸的有效剂量为40mg/kg。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、丸剂、丹剂、散剂、乳剂或混悬剂。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物剂型还可以为注射剂、输液剂、软膏剂、喷雾剂或贴剂。
9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的给药途径为口服给药、灌肠给药或注射给药。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211214660.0A CN115813918B (zh) | 2022-09-30 | 2022-09-30 | 吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211214660.0A CN115813918B (zh) | 2022-09-30 | 2022-09-30 | 吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115813918A true CN115813918A (zh) | 2023-03-21 |
| CN115813918B CN115813918B (zh) | 2024-04-02 |
Family
ID=85524293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211214660.0A Active CN115813918B (zh) | 2022-09-30 | 2022-09-30 | 吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115813918B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1670444B1 (en) * | 2003-10-03 | 2011-04-27 | Veijlen N.V. | Use of indoleacetic acid derivatives which increase the serum igf-1 level for the preparation of a therapeutical composition for treatment of various diseases |
-
2022
- 2022-09-30 CN CN202211214660.0A patent/CN115813918B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1670444B1 (en) * | 2003-10-03 | 2011-04-27 | Veijlen N.V. | Use of indoleacetic acid derivatives which increase the serum igf-1 level for the preparation of a therapeutical composition for treatment of various diseases |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SIMON N YOUNG 等: "Tryptophan, 5-hydroxyindoleacetic acid and indoleacetic acid in human cerebrospinal fluid: interrelationships and the influence of age, sex, epilepsy and anticonvulsant drugs", 《JOURNAL OF NEUROLOGY, NEUROSURGERY, AND PSYCHIATRY》, vol. 43, pages 438 - 445 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115813918B (zh) | 2024-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhao et al. | Deoxycholic Acid‐Mediated Sphingosine‐1‐Phosphate Receptor 2 Signaling Exacerbates DSS‐Induced Colitis through Promoting Cathepsin B Release | |
| EP2464358B1 (en) | Improved pharmacokinetics of s-adenosylmethionine formulations | |
| KR20200032044A (ko) | 고정 용량 제형 | |
| KR20210136081A (ko) | 화합물의 제제 및 그의 용도 | |
| Li et al. | Fisetin administration improves LPS-induced acute otitis media in mouse in vivo | |
| EP3569250A1 (en) | Prophylactic and therapeutic drug for nonalcoholic fatty liver disease | |
| CN113712987A (zh) | 用于提高nad+水平的组合物及其用途 | |
| Fan et al. | Libertellenone M, a diterpene derived from an endophytic fungus Phomopsis sp. S12, protects against DSS-induced colitis via inhibiting both nuclear translocation of NF-κB and NLRP3 inflammasome activation | |
| CN109414427A (zh) | 包含基于萘醌的化合物作为活性成分的用于预防或改善作为与抗癌药物治疗相关的副作用的疲劳、恶病质、疼痛、认知衰退和造血干细胞减少的组合物 | |
| Holmstrom et al. | Pharmacokinetics of spinosad and milbemycin oxime administered in combination and separately per os to dogs | |
| Tao et al. | Exploring the mechanism through which Phyllanthus emblica L. Extract exerts protective effects against acute gouty arthritis: a network pharmacology study and experimental validation | |
| Menegola et al. | Dysmorphogenic effects of some fungicides derived from the imidazole on rat embryos cultured in vitro | |
| CN102924456A (zh) | 当以乳清酸盐衍生物给药时降低甲氨蝶呤副作用和毒性的组合物和方法 | |
| CN107595798B (zh) | 一种琥珀酸普芦卡必利片剂及其制备方法 | |
| EP3653603A1 (en) | Fenlean (flz) crystal g form, preparation method, and composition and use thereof | |
| CN113057947A (zh) | 一种低ndma、小骨架盐酸二甲双胍缓释片及制备方法 | |
| CN115813918A (zh) | 吲哚乙酸在制备抑郁症治疗药物中的应用 | |
| AU2017345468A1 (en) | Bromodomain inhibitor | |
| Um et al. | Rice bran component γ‐oryzanol promotes sleep in mice by antagonism of histamine H1 receptor | |
| WO2023220404A1 (en) | Treatment of non-alcoholic steatohepatitis | |
| Haraschak et al. | Pharmacokinetic evaluation of oral dantrolene in the dog | |
| Yang et al. | Release property study on the novel divalproex sodium enteric-coated capsules | |
| CN111265517A (zh) | 褪黑素和吗啡联合在制备镇痛药物中的应用 | |
| JP2023508844A (ja) | 左旋性二環式モルホリン及びその塩、その調製方法、医薬組成物、並びに使用 | |
| CN111728968A (zh) | 瑞香素在制备治疗银屑病的药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |