CN115792038B - 一种拉米夫定片中硬脂酸镁的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种拉米夫定片中硬脂酸镁的检测方法，是将对照品溶液和供试品溶液分别进行液相色谱检测，色谱柱为C18色谱柱，进样量1～100μl，流速为0.3～2.0ml/min，柱温20～50℃，流动相为乙腈‑水‑三氟乙酸；对照品溶液为硬脂酸镁浓度范围在0.05～5mg/ml的梯度浓度溶液，供试品溶液为供试品加稀释剂超声提取离心后所得的上清液，稀释剂为三氟乙酸丙酮溶液；以对照品溶液中硬脂酸镁浓度与相应峰面积进行线性回归，计算标准曲线，以标准曲线法计算供试品中硬脂酸镁的含量。该检测方法不需对样品进行衍生、专属性好、准确性高，可用于拉米夫定片中硬脂酸镁的含量测定以及硬脂酸镁中硬脂酸和棕榈酸的组成分析。

Description

一种拉米夫定片中硬脂酸镁的检测方法

技术领域

本发明涉及成品药物辅料成分检测技术领域，具体涉及一种拉米夫定片中硬脂酸镁的检测方法。

背景技术

在仿制药开发中，为了达到和原研药品质量和疗效一致，需尽可能对原研药品进行深入透彻的剖析，了解原研药的辅料组成，为仿制药的开发提供参考，提高仿制药开发的效率。

硬脂酸镁是一种主要由硬脂酸和棕榈酸组成的盐，常作为胶囊剂和片剂的润滑剂，是一种触感滑腻、堆密度小、质轻蓬松、具有吸附性且流动性差的白色细粉，被列在FDA的非活性成分指南中，用于口服片剂、胶囊剂、粉剂、口含片、阴道片和局部制剂等。硬脂酸镁一般用量为0.3％～1％，它的特性包括以下3种：抗粘性、增流性和润滑性。许多产品如果不使用硬脂酸镁，就可能出现颗粒流动性差，压片时粘冲、涩冲等现象。更进一步的，我们发现硬脂酸镁中硬脂酸与棕榈酸的比例也会对药品质量产生影响，改变药物的稳定性及溶出行为。因此，对药品中硬脂酸镁含量的测定，并对硬脂酸与棕榈酸的比例进行测定，对仿制药的开发尤为重要。

目前文献资料中大多数硬脂酸镁含量测定方法为气相色谱法，需将样品中的硬脂酸和棕榈酸先以浓硫酸作催化剂，进行衍生化处理，操作不当易造成安全事故，该方法主要用于纯的硬脂酸镁原材料的测定，由于药物制剂中存在很多其他复杂组分，如糖、纤维素等，与浓硫酸存在相容性问题，且药物制剂中硬脂酸镁的含量较低，使衍生化效率受到影响，衍生不完全，导致测定结果不准确。

《中国药典》和《美国药典》中硬脂酸镁含量测定方法为酸碱滴定法，通过对镁离子进行测定而推算硬脂酸镁含量，而镁离子仅占整个硬脂酸镁的4％～5％，不能全面反应硬脂酸镁的整体含量。另外由于制剂中组分复杂，硬脂酸镁含量极低，所以该方法易受其他组分干扰，不适用于药品中少量硬脂酸镁含量的测定，且该方法无法测定硬脂酸镁和棕榈酸镁组成。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物制剂中硬脂酸镁的检测方法，专属性好，测定无干扰，灵敏度高，准确度高。

本发明技术方案详述如下：

一种拉米夫定片中硬脂酸镁的检测方法，包括以下步骤：

将对照品溶液和供试品溶液分别进行液相色谱检测，色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，进样量1～100μl，流速为0.3～2.0ml/min，柱温20～50℃，流动相为体积比80～95:5～20:0.05～0.10的乙腈-水-三氟乙酸混合液；

所述对照品溶液为硬脂酸镁经稀释剂稀释至含硬脂酸镁浓度范围在0.05～5mg/ml的梯度浓度溶液；所述供试品溶液为供试品加稀释剂后超声提取、涡旋、离心后所得的上清液；所述稀释剂为三氟乙酸体积百分浓度为0.01～10.00％的三氟乙酸丙酮溶液；

以对照品溶液中硬脂酸镁浓度与相应峰面积进行线性回归，计算标准曲线，以标准曲线法计算供试品中硬脂酸镁的含量。

在本发明的一实施方式中，所述液相色谱检测所用检测器为蒸发光散射检测器、电雾式检测器或质谱检测器。

高效液相色谱仪包含进样器、流动相泵入系统、柱温箱、检测器，待测试样经过柱温箱中的色谱柱分离，自动流入检测器分析。

在本发明的一实施方式中，所述色谱条件为进样量20μl，流速1.0ml/min，柱温40℃。

在本发明的一实施方式中，所述稀释剂为三氟乙酸体积百分浓度2.00％的三氟乙酸丙酮溶液。

在本发明的一实施方式中，所述对照品溶液制备方法为：精密称定硬脂酸镁，加稀释剂至75％量瓶体积，超声1小时，放至室温，再加稀释剂稀释至所需浓度。

在本发明的一实施方式中，所述供试品溶液制备方法为：精密称定供试品药物，加稀释剂至75％量瓶体积，超声提取10分钟，振摇1小时，再超声提取10分钟，继续加稀释剂至100％量瓶体积，摇匀，涡旋，取适量溶液，13000rpm离心5分钟，取上清液即可。

与现有技术相比，本发明拉米夫定片中硬脂酸镁的检测方法，具有如下

有益效果：

本发明建立的药物中制剂的硬脂酸镁含量测定方法，可以采用毫克级的样品，方便快捷地直接对硬脂酸镁的含量进行测定，不需对样品进行衍生；更进一步的，本发明的方法可检测出硬脂酸镁中硬脂酸和棕榈酸的组成，进而更好地指导药物开发，选择合适来源的硬脂酸镁。该方法专属性好、灵敏度高，定量限低至0.03mg/ml；准确性高，测得回收率为97.5％～103.7％范围内，RSD为2.1％。样品制备简单，可用于拉米夫定片中硬脂酸镁的含量测定以及硬脂酸镁中硬脂酸和棕榈酸的组成分析，可更好地指导药品开发中辅料的用量及来源选择。

附图说明

图1是根据本发明一实施方式的硬脂酸镁测定-空白溶液图谱；

图2是根据本发明一实施方式的硬脂酸镁测定-对照品溶液图谱；

图3是根据本发明一实施方式的硬脂酸镁测定-供试品溶液图谱。

具体实施方式

下面结合较佳的具体实施例和附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

除非另有其它明确表示，否则在整个说明书中，所用试剂均为能够根据本领域常规知识配制或能够在市面购买的产品。

实施例1专属性试验

色谱柱：waters Symmetry C18，4.6×150mm，3.5μm

流动相：乙腈-水-三氟乙酸(90:10:0.1，v/v/v)

流速：1.0ml/min

柱温：35℃

进样量：20μl

检测器：Thermo Scientific公司的电雾式检测器(CAD)；

溶液的配制：

稀释剂：三氟乙酸和丙酮组成的溶液，其中三氟乙酸体积百分浓度为2.00％；

对照品溶液：精密称取硬脂酸镁适量，加稀释剂至75％量瓶体积，超声1小时，放至室温，再用稀释剂稀释制成含硬脂酸镁0.1mg/ml的溶液；

空白溶液：稀释剂。

测定方法：

精密量取空白溶液和对照品溶液各3μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，空白溶液在硬脂酸镁出峰处均无干扰，表明方法专属性良好，典型色谱图见图1和图2。

实施例2线性试验

色谱柱：Agilent SB C18，4.6×150mm，3.5μm

流动相：乙腈-水-三氟乙酸(90:10:0.1，v/v/v)

流速：1.5ml/min

柱温：25℃

进样量：3μl

检测器：电雾式检测器

溶液的配制：

稀释剂：三氟乙酸体积百分浓度为2.00％的三氟乙酸丙酮溶液；

线性溶液(即对照品溶液)：精密称取硬脂酸镁适量，加稀释剂至75％量瓶体积，超声1小时，放至室温，再用稀释剂稀释制成分别约含硬脂酸镁0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml的溶液；

测定方法：

精密量取上述对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以系列线性溶液中硬脂酸镁浓度与相应峰面积计算回归方程，结果见表1。

表1线性试验结果

编号	1	2	3	4	5
						浓度x(mg/ml)	0.11	0.23	0.42	0.83	1.02
峰面积y	3.174	6.257	12.834	25.193	30.281

结果表明：硬脂酸镁的线性方程为y＝30.242x-0.239，线性相关系数为0.999，线性关系良好。

实施例3准确度试验

色谱柱：Agilent SB C18，2.1×150mm，5μm

流动相：乙腈-水-三氟乙酸(95:5:0.05，v/v/v)

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

进样量：100μl

检测器：电雾式检测器

溶液的配制：

稀释剂：三氟乙酸体积百分浓度为0.50％三氟乙酸丙酮溶液。

对照品溶液：精密称取硬脂酸镁适量，加稀释剂至75％量瓶体积，超声1小时，放至室温，再用稀释剂稀释制成分别约含硬脂酸镁0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml的溶液。

准确度供试品溶液：取不含硬脂酸镁的常用辅料，分别加硬脂酸镁2mg，5mg及20mg，使相当于含硬脂酸镁0.2％、0.5％、2％，置20ml量瓶中，加稀释剂约15ml，超声10分钟，振摇1h，再超声10分钟，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，取适量溶液，13000rpm离心5分钟，取上清液，即得。每种含量梯度平行制备3份供试品溶液。

测定方法：

精密量取稀释剂、对照品溶液、供试品溶液各100μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算测得量，计算回收率，结果见表2。

表2准确度供试品溶液硬脂酸镁检测结果

结果表明：三种浓度水平的准确度溶液中硬脂酸镁的回收率为97.5％～103.7％，RSD为2.1％。本方法可对供试品中硬脂酸镁进行准确定量。

实施例4拉米夫定片中硬脂酸镁的测定

色谱柱：waters Symmetry C18，4.6×150mm，3.5μm

流动相：乙腈-水-三氟乙酸(90:10:0.1，v/v/v)

流速：1.0ml/min

柱温：35℃

进样量：20μl

检测器：电雾式检测器

溶液的配制：

空白溶液(即稀释剂)：三氟乙酸体积百分浓度为3.00％三氟乙酸丙酮溶液

对照品溶液：精密称取硬脂酸镁适量，加稀释剂至75％量瓶体积，超声1小时，放至室温，再用稀释剂稀释制成分别约含硬脂酸镁0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml的溶液。

供试品溶液：取拉米夫定片1片，称重，置20ml量瓶中，加稀释剂约15ml，超声15分钟，再振摇15分钟，稀释剂稀释至刻度，摇匀，涡旋，取适量溶液，10000rpm离心10分钟，取上清液，即得。

测定方法：

精密量取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见表3，供试品溶液图谱见图3。

表3拉米夫定片中硬脂酸镁含量检测结果

实施例5不同厂家硬脂酸镁组成测定

色谱柱：Agilent SB C18，4.6×250mm，5μm

流动相：乙腈-水-三氟乙酸(90:10:0.1，v/v/v)

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

进样量：5μl

检测器：蒸发光散射检测器

溶液的配制：

空白溶液(即稀释剂)：三氟乙酸体积百分浓度为2.00％三氟乙酸丙酮溶液

供试品溶液：分别取不同厂家生产的硬脂酸镁适量，称重，置20ml量瓶中，加稀释剂约15ml，超声15分钟，再振摇15分钟，稀释剂稀释至刻度，摇匀。

精密量取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，峰面积归一化法计算样品中硬脂酸镁和硬脂酸镁的组成，结果见表4。

表4不同厂家硬脂酸镁组成检测结果

硬脂酸镁生产厂家	棕榈酸镁(％)	硬脂酸镁(％)
			A	40.8	59.2
B	20.2	79.8
			C	20.3	79.7
D	39.9	60.1

备注：硬脂酸镁是棕榈酸镁和硬脂酸镁组成，因此供试品溶液注入高效液相色谱仪后，色谱图中有2个峰，分别为棕榈酸、硬脂酸，每个峰占峰面积之和的百分数(该计算方式为峰面积归一化法)，即为组成。

前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (6)

1.一种拉米夫定片中硬脂酸镁的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

将对照品溶液和供试品溶液分别进行液相色谱检测，色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，进样量1～100μl，流速为0.3～2.0ml/min，柱温20～50℃，流动相为体积比80～95:5～20:0.05～0.10的乙腈-水-三氟乙酸混合液；

所述对照品溶液为硬脂酸镁经稀释剂稀释至含硬脂酸镁浓度范围在0.05～5mg/ml的梯度浓度溶液；所述供试品溶液为供试品加稀释剂后超声提取、涡旋、离心后所得的上清液；所述稀释剂为三氟乙酸体积百分浓度为0.01～10.00％的三氟乙酸丙酮溶液；

以对照品溶液中硬脂酸镁浓度与相应峰面积进行线性回归，计算标准曲线，以标准曲线法计算供试品中硬脂酸镁的含量。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱检测所用检测器为蒸发光散射检测器、电雾式检测器或质谱检测器。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件为进样量20μl，流速1.0ml/min，柱温40℃，流动相乙腈-水-三氟乙酸体积比为90:10:0.10。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述稀释剂为三氟乙酸体积百分浓度2.00％的三氟乙酸丙酮溶液。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液制备方法为：精密称定硬脂酸镁，加稀释剂至75％量瓶体积，超声1小时，放至室温，再加稀释剂稀释至所需浓度。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备方法为：精密称定供试品药物，加稀释剂至75％量瓶体积，超声提取10分钟，振摇1小时，再超声提取10分钟，继续加稀释剂至100％量瓶体积，摇匀，涡旋，取适量溶液，13000rpm离心5分钟，取上清液即可。