CN115786344A - 一种靶向基因tmem215抑制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用，属于分子生物医学技术领域。通过考察TMEM215在血管内皮细胞中的促存活功能，发现该分子与内皮细胞的凋亡有关；通过考察TMEM215对小鼠肿瘤生长和肿瘤新生血管形成的影响，发现该分子的诱导性剔除可显著抑制小鼠肿瘤新生血管形成和肿瘤发展，且不影响机体正常血管的稳态；通过考察抑制TMEM215的siRNA的抗肿瘤血管新生治疗效果，发现靶向肿瘤内皮细胞递送TMEM215的siRNA可显著抑制小鼠肿瘤新生血管形成和肿瘤发展。因此，TMEM215有潜力成为抗肿瘤血管新生治疗的新靶点。

Description

一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用

技术领域

本发明属于分子生物医学技术领域，具体涉及一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用。

背景技术

肿瘤是危害人类健康的最重要问题之一，对于肿瘤治疗主要通过手术切除、传统的放疗化疗、免疫疗法、肿瘤细胞靶向治疗和肿瘤血管靶向治疗等方式。肿瘤的生长可以分为两个时期，即无血管期和有血管期。无血管期的肿瘤体积通常小于2mm³，主要依靠弥散的方式吸收营养和氧气，瘤体生长缓慢。随着肿瘤体积的增大，仅仅依靠弥散吸收营养和氧气难以维持生长需求，此时肿瘤细胞就会分泌出一些化学物质，激活血管内皮细胞生长因子，促使肿瘤血管新生。一旦肿瘤血管出现，营养和氧气大量供给，肿瘤生长进入快速增殖期。因此，肿瘤血管已成为肿瘤治疗的重要靶标之一。

自首个血管靶向药物贝伐珠单抗获批以来，无论是大分子或是小分子抗血管生成药物的研究均取得显著成就，临床广泛用于甲状腺髓样癌、肾细胞癌、和肝癌等恶性实体瘤的治疗。其中小分子多靶点酪氨酸激酶抑制剂，通过抑制肿瘤血管生成和改善肿瘤微环境发挥抗肿瘤作用，作用显著，临床使用方便，得到广泛应用。然而，抗血管生成药物不仅具有抑制肿瘤血管生成的作用，还可能对人体正常血管造成损伤，引起高血压、蛋白尿、手足综合征等不良反应。随着精准医疗的推进，如何根据不同的肿瘤类型和个体差异实施科学合理的精准治疗策略，进一步研发针对肿瘤血管的特异性药物和用药方案，提高其抗肿瘤疗效的同时，减轻药物毒副作用，规范抗血管生成药物的临床应用，仍需要进一步研究探索。因此，深入研究血管生成的调控机制，并在此基础上发展新的抗肿瘤血管新生的治疗手段，依然具有重要的现实意义。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用，在实现抗肿瘤疗效的同时，减轻药物毒副作用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一种靶向基因TMEM215抑制剂，所述靶向基因TMEM215抑制剂为抑制TMEM215的siRNA分子，序列如SEQ.ID.NO.5所示。

本发明还公开了靶向基因TMEM215抑制剂在制备抗肿瘤血管新生药物中的应用。

优选地，所述靶向基因TMEM215抑制剂的序列如SEQ.ID.NO.5所示。

优选地，靶向基因TMEM215抑制剂通过抑制血管内皮细胞实现抗肿瘤血管新生。

优选地，所述药物的剂型为注射剂型。

本发明还公开了一种抗肿瘤血管新生的药物组合物，包括靶向基因TMEM215抑制剂。

优选地，所述药物组合物还包括其他肿瘤药物。

优选地，所述药物包括药学上可接受的一种或多种载体。

进一步优选地，所述载体包括稀释剂、粘合剂、吸附载体、填充剂和崩解剂。

优选地，所述药物还包括添加剂，所述添加剂包括稳定剂、杀菌剂、缓冲剂、等渗剂、螯合剂、pH值控制剂和表面活性剂。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供的一种靶向基因TMEM215抑制剂，通过探究TMEM215在维持血管内皮细胞存活中的作用，发现TMEM215对于血管内皮细胞的存活至关重要，敲低TMEM215后内皮细胞存活数目显著减少，Annexin V阳性的凋亡细胞的数目以及内源性凋亡信号通路的cl.Caspase3和cl.Caspase9蛋白水平显著升高，说明TMEM215可作为抗新生血管治疗的重要靶点。通过探究内皮细胞TMEM215剔除对小鼠肿瘤生长和肿瘤新生血管形成的影响，发现剔除TMEM215能够显著抑制小鼠肿瘤的生长，小鼠的肿瘤质量显著减小，肿瘤组织坏死面积显著增大，CD31和cl.Caspase3共同标记的凋亡内皮细胞数目显著增多，说明剔除TMEM215后肿瘤新生血管形成和肿瘤发展受到抑制，并且其它正常脏器的生理性血管不受影响。通过探究靶向肿瘤内皮递送抑制TMEM215的siRNA对小鼠肿瘤生长和肿瘤新生血管形成的影响，发现使用肿瘤内皮细胞靶向材料cRGD-PEI-PEG递送靶向基因TMEM215抑制剂能够显著减小小鼠肿瘤质量，小鼠肿瘤组织坏死面积显著增大，小鼠肿瘤组织CD31标记的血管密度显著降低，CD31和cl.Caspase3共同标记的凋亡内皮细胞数目显著增多。综上实验说明靶向基因TMEM215能够为抗肿瘤新生血管治疗提供参考，抑制TMEM215可有效抑制肿瘤新生血管形成和肿瘤发展，提示以TMEM215为抗肿瘤血管新生药物的靶点可改善现有药物不良副作用多的现状，具有良好的医学转化前景。

附图说明

图1为本发明感染人脐静脉内皮细胞表达TMEM215-shRNA的慢病毒后存活情况图；

图2为本发明的流式细胞术检测内皮细胞的凋亡情况图；其中，A为流式细胞术检测凋亡细胞流式结果图，B为凋亡细胞数量统计图；

图3为本发明Western Blot检测细胞凋亡信号通路的标志蛋白变化水平图；

图4为本发明的通过对内皮细胞TMEM215诱导性剔除的基因修饰小鼠皮下接种肺癌细胞系，建立的皮下荷瘤模型图；

图5为本发明的基因修饰小鼠肿瘤生长曲线图；

图6为本发明的基因修饰小鼠肿瘤取材结果图；其中，A为基因修饰小鼠肿瘤取材实物形貌图，B为基因修饰小鼠肿瘤取材质量统计图；

图7为本发明的小鼠肿瘤组织切片HE染色结果图；其中，A为对照小鼠肿瘤组织切片HE染色图，B为内皮特异性敲除TMEM215小鼠肿瘤组织切片HE染色图，C为小鼠肿瘤组织坏死面积统计图；

图8为本发明的基因修饰小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色结果图；其中，蓝色为hoechst，红色为血管标志物CD31，A为对照小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色图，B为内皮特异性敲除TMEM215小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色图，C为小鼠肿瘤组织免疫荧光染色结果统计图；

图9为本发明的基因修饰小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色结果图；其中，蓝色为hoechst，红色为血管标志物CD31，绿色为凋亡标志物cl.Casp3，A为对照小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色图，B为内皮特异性敲除TMEM215小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色图，C为小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色结果统计图；

图10为本发明的肿瘤内皮细胞靶向材料递送抑制TMEM215的siRNA的治疗方案示意图；

图11为本发明的靶向治疗小鼠肿瘤取材结果图；其中，A为靶向治疗小鼠肿瘤取材实物形貌图，B为靶向治疗小鼠肿瘤取材质量统计图；

图12为本发明的靶向治疗小鼠肿瘤内皮细胞TMEM215的mRNA水平qRT-PCR检测图；

图13为本发明的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片HE染色图和坏死面积统计图；其中，A为负载对照siRNA的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片HE染色图，B为负载抑制TMEM215的siRNA的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片HE染色图，C为靶向治疗小鼠肿瘤组织坏死面积统计图；

图14为本发明的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色结果图；其中，蓝色为hoechst，红色为血管标志物CD31，A为负载对照siRNA的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色图，B为负载抑制TMEM215的siRNA的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色图，C为靶向治疗小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色结果统计图；

图15为本发明的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色结果图；其中，蓝色为hoechst，红色为血管标志物CD31，绿色为凋亡标志物cl.Casp3，A为负载对照siRNA的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色图，B为负载抑制TMEM215的siRNA的靶向治疗小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色图，C为靶向治疗小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色结果统计图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

下面结合附图对本发明做进一步详细描述：

实施例1：TMEM215在血管内皮细胞中的维持存活功能

本发明公开了TMEM215在维持血管内皮细胞存活中的作用，将表达TMEM215-shRNA的慢病毒感染人脐静脉内皮细胞敲低TMEM215表达水平，然后检测内皮细胞的存活情况，包括台盼蓝染色、流式细胞术检测、凋亡信号通路蛋白Caspase3、Caspase9检测等。具体步骤如下：

步骤1，建立体外人脐静脉内皮细胞TMEM215敲低的细胞模型

经产妇知情同意，原代人脐静脉内皮细胞取材分离自产妇脐带，传代6～8小时后细胞完全贴壁，细胞体外培养条件是5％ CO₂，37℃，含5％血清的内皮细胞专用培养基。内皮细胞以MOI＝10感染表达TMEM215-shRNA的慢病毒或对照慢病毒，24小时后换液，48小时后进行实验观察。台盼蓝染色细胞存活情况如图1所示，敲低内皮细胞TMEM215后内皮细胞存活数目显著减少。

步骤2，流式细胞术检测内皮细胞的凋亡情况

按照Annexin V-FITC/PI Kit凋亡检测试剂盒(四正柏生物，中国)说明书收集流式细胞样品和进行染色。步骤1中感染慢病毒48小时后，收集细胞培养液到一离心管内备用，用不含EDTA的胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻吹打下来时，加入完全细胞培养基，吹打下所有的贴壁细胞，再次收集到离心管中。1200rpm离心5min，小心吸除上清，收集细胞沉淀。加入1mL预冷的PBS重悬细胞，1200rpm离心5min，小心吸除上清，再次收集细胞沉淀。用去离子水按1:3稀释结合缓冲液，用1×结合缓冲液重悬细胞，调节其浓度为1～5×10⁶/mL，取100μL的细胞悬液于5mL流式管中，加入5μL Annexin V-FITC混匀后于室温避光孵育5min，加入10μL 20μg/mL的碘化丙啶溶液(PI)，并加入400μLPBS，立刻进行流式检测。检测结果如图2所示，Annexin V阳性的凋亡细胞的数目在TMEM215敲低组显著增多。

步骤3，蛋白提取及Western blot

步骤1中感染慢病毒48小时后，吸除原有的细胞培养液，用预冷的PBS洗涤细胞1遍，加入含1％ PMSF的RIPA细胞裂解液，于冰上孵育20min，细胞刮刮下细胞，将裂解溶液全部转移至新的离心管中，4℃，12000rpm离心15min，舍弃沉淀，所得上清即为提取的蛋白溶液。使用SDS-PAGE配胶试剂盒(碧云天，中国)制备12％分离胶/5％浓缩胶的凝胶并进行样品电泳，120V，60min，将分离的蛋白转移到PVDF膜上，冰浴条件下180mA恒流转膜2小时。然后，室温下，用含5％脱脂奶粉的TBST溶液进行PVDF膜抗原封闭2小时。接着，4℃孵育一抗过夜，使用TBST溶液在摇床上清洗3次，每次不少于5min，室温孵育二抗1小时，清洗3次。使用化学发光试剂盒进行发光，使用IMAGEJ软件对条带灰度值进行分析。Western blot结果如图3所示，说明内源性凋亡信号通路的cl.Caspase3和cl.Caspase9蛋白水平在TMEM215敲低组显著升高。

实施例2：内皮细胞TMEM215剔除对小鼠肿瘤生长和肿瘤新生血管形成的影响

通过对内皮细胞TMEM215诱导性剔除的基因修饰小鼠皮下接种Lewis肺癌细胞系，建立皮下荷瘤模型，测量小鼠成瘤体积和质量，绘制小鼠肿瘤生长曲线，分析内皮细胞TMEM215诱导性剔除对小鼠肿瘤生长的影响。通过组织取材HE染色、血管标志物和凋亡标志物免疫荧光染色等方法分析内皮细胞TMEM215诱导性剔除后肿瘤血管的结构和功能改变。具体步骤如下：

步骤1，基因修饰小鼠的繁育及基因型鉴定

将TMEM215^Floxed小鼠(百奥赛图基因生物，中国)与Cdh5(PAC)Cre^ERT2小鼠(获赠于RH Adams)交配，获得内皮特异性敲除TMEM215的TMEM215^iEC-KO小鼠(Cdh5-CREE^RT2-TMEM215^{Floxed/Floxed})，以及对照小鼠(Cdh5-CRE^ERT2-TMEM215^+/+)。小鼠出生一周后，剪鼠尾进行基因型鉴定，向鼠尾中加入含有5μL蛋白酶K液(工作浓度为20mg/mL)的500μL消化缓冲液，55℃消化过夜。加入300μL Tris饱和酚溶液和氯仿异戊醇混合溶液(体积比24:1)，室温静置30min以上，12000rpm离心10min，取上层澄清液于新的离心管中，加入800μL预冷的无水乙醇，12000rpm离心10min，弃上清，加入800μL的75％酒精，12000rpm离心10min，弃上清，晾干，加入适量双蒸水溶解提取的基因组。小鼠基因型鉴定采用PCR技术，PCR反应体系为：10μL 2×Taq Master Mix，2μL DNA，双蒸水7μL，上下游引物各0.5μL。

Cre基因型PCR引物为Cre-Forward和Cre-Reverse，PCR反应条件为：95℃5min，变性；95℃30s；62℃30s，72℃1min，37个循环。

TMEM215基因型PCR引物为TMEM215-Forward和TMEM215-Reverse，PCR反应条件为：95℃5min，变性；95℃30s；63℃30s，72℃1min，35个循环。其中，引物序列如表1所示：

表1引物序列

步骤2，内皮细胞TMEM215剔除成年小鼠的诱导方案

如图4，内皮特异性敲除TMEM215的TMEM215^iEC-KO小鼠(Cdh5-CREE^RT2-TMEM215^{Floxed /Floxed})以及对照小鼠(Cdh5-CRE^ERT2-TMEM215^+/+)6～8周时，腹腔注射20mg/mL他莫昔芬100μL/天，连续注射5天后，于诱导结束后的第1天进行后续实验操作。

步骤3，小鼠皮下荷瘤模型的建立

诱导结束后第1天，在内皮特异性敲除TMEM215的TMEM215^iEC-KO小鼠(Cdh5-CREE^RT2-TMEM215^{Floxed/Floxed})以及对照小鼠(Cdh5-CRE^ERT2-TMEM215^+/+)右后背部皮下接种Lewis肺癌细胞系，每只小鼠接种含5×10⁶肿瘤细胞的悬液100μL。自接种后第7天开始，每3天用游标卡尺测量一次小鼠背部肿瘤体积，记录肿瘤的长径和短径，肿瘤体积的计算公式为：体积＝长径×短径²×3.14/6。测量结果如图5所示，说明内皮细胞TMEM215剔除显著抑制了小鼠肿瘤的进展。

步骤4，肿瘤取材

在肿瘤接种后的第22天取材分析，腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉小鼠，PBS溶液行左心室灌注，分离肿瘤周围皮下结缔组织并取下肿瘤，称量肿瘤重量，如图6所示，内皮细胞TMEM215剔除组小鼠的肿瘤质量显著减小，平均分配肿瘤组织进行后续的实验操作。

步骤5，制备石蜡切片和HE染色

肿瘤取材后，固定于4％ PFA中，送武汉赛维尔生物公司进行石蜡包埋、切片以及HE染色。结果如图7所示，内皮细胞TMEM215剔除组小鼠肿瘤组织坏死面积显著增大。

步骤6，制备冰冻切片和免疫荧光染色

肿瘤取材后，固定于4％ PFA中4小时，再放入30％蔗糖溶液中脱水过夜，取出组织用OCT包埋试剂包埋，冻于-20℃。使用冰冻切片机制备10μm厚的组织切片，进行组织切片免疫荧光染色。染色步骤如下：使用含有5％ BSA的封闭液室温封闭60min，弃去封闭液，加入含一抗抗体的一抗稀释液，4℃孵育过夜，PBS洗3遍，每遍5min，加入含二抗抗体的二抗稀释液，37℃孵育60min，PBS洗3遍，每遍5min，使用Hoechst于室温染细胞核15min，PBS洗3遍，每遍5min，50％甘油封片，激光共聚焦显微镜下观察。结果如图8和图9所示，内皮细胞TMEM215剔除组小鼠肿瘤组织CD31标记的血管密度显著降低，CD31和cl.Caspase3共同标记的凋亡内皮细胞数目显著增多。

实施例3：靶向肿瘤内皮递送TMEM215的siRNA对小鼠肿瘤生长和肿瘤新生血管形成的影响

使用肿瘤内皮细胞靶向材料cRGD-PEI-PEG将抑制TMEM215的siRNA递送至接种Lewis肺癌细胞系的小鼠，检测靶向递送后TMEM215的抑制效率，测量小鼠成瘤质量，分析内皮细胞TMEM215抑制对小鼠肿瘤生长的影响。通过组织取材HE染色、血管标志物和凋亡标志物免疫荧光染色等方法分析内皮细胞TMEM215抑制后肿瘤血管的结构和功能改变。具体步骤如下：

步骤1，递送靶向治疗药物

如图10所示，在6～8周龄C57BL/6小鼠的右后背部皮下接种Lewis肺癌细胞系，每只小鼠接种含5×10⁶肿瘤细胞的悬液100μL。自接种后第7天开始至第19天，每隔两天尾静脉注射一次负载抑制TMEM215的siRNA或对照siRNA的cRGD-PEI-PEG(4mg/kg)，siRNA均合成自上海艾博思生物，序列见表2，于接种后第21天取材分析。其中，siRNA与靶向材料cRGD-PEI-PEG的质量比例为1:1，注射前将二者用PBS充分溶解后于室温共孵育10min，现配现用；靶向材料cRGD-PEI-PEG购买自西安瑞禧生物。

表2抑制TMEM215的siRNA和对照siRNA的序列

Name	Sequence(5’to 3’)	Number
			抑制TMEM215的siRNA	GACAGAUACUGUUGCUACAUC	SEQ.ID.NO.5
对照siRNA	UUCUCCGAACGUGUCACGUTT	SEQ.ID.NO.6

步骤2，肿瘤取材

步骤1中的小鼠，于接种后第21天取材，腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉小鼠，PBS溶液行左心室灌注，分离肿瘤周围皮下结缔组织并取下肿瘤，称量肿瘤重量，如图11所示，递送TMEM215的siRNA的小鼠较递送对照siRNA的小鼠肿瘤质量显著减小，平均分配肿瘤组织进行后续的实验操作。

步骤3，分离肿瘤内皮细胞

将步骤2中的部分肿瘤组织剪碎，在消化液(含1mg/mL I型胶原酶，100μg/mL DNA酶I，Hank’s液配制)中于37℃消化30min。接着，用70μm筛网将组织块过滤为单细胞悬液，离心弃上清，加入红细胞裂解液裂红，加入PBS溶液终止裂解。离心弃上清后，加入磁珠缓冲液洗涤细胞，随后，每1×10⁷细胞加入90μL磁珠缓冲液，再加入10μL CD31磁珠抗体，混匀后于4℃避光孵育30min。孵育结束并洗涤细胞后，再加入2mL磁珠缓冲液重悬细胞。同时，将已润洗的MS柱放在磁力架上，加入细胞悬液，待未与MS柱结合的细胞悬液完全流出后，用3mL磁珠缓冲液洗涤MS柱，待磁珠缓冲液完全流出后，取下MS柱，加入2mL磁珠缓冲液并用活塞将液体推入新的离心管中，离心弃上清，沉淀即为肿瘤内皮细胞。

步骤4，qRT-PCR验证肿瘤内皮细胞TMEM215的抑制效率

步骤3分离得到的肿瘤内皮细胞加入Invitrogen公司的TRIzol试剂，按照说明书进行细胞RNA的提取。随后，按照Takara公司反转录试剂盒说明书进行反转录。得到cDNA后，按照Takara公司SYBR GREEN实时荧光定量PCR说明书进行操作，结果使用ΔΔCT法进行相对定量，以β-actin作为内参基因，结果如图12所示，递送TMEM215的siRNA的小鼠较递送对照siRNA的小鼠肿瘤内皮细胞的TMEM215水平显著降低。

步骤5，制备石蜡切片和HE染色

步骤2中的部分肿瘤组织固定于4％ PFA中，送武汉赛维尔生物公司进行石蜡包埋、切片以及HE染色。如图13所示，递送TMEM215的siRNA的小鼠较递送对照siRNA的小鼠肿瘤组织坏死面积显著增大。

步骤6，制备冰冻切片和免疫荧光染色

步骤2中的部分肿瘤组织固定后，按照实施例2中所描述的步骤制作冰冻切片和进行免疫荧光染色，结果如图14和图15所示，递送TMEM215的siRNA的小鼠较递送对照siRNA的小鼠肿瘤组织CD31标记的血管密度显著降低，CD31和cl.Caspase3共同标记的凋亡内皮细胞数目显著增多。

所有数据以均数±标准差表示，使用SPSS 22.0软件进行统计检验分析。先对数据进行正态性分析和方差齐性检验。两样本间比较时采用独立样本t检验；多样本组间两两比较分析时采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，组间两两比较使用LSD post hoc检验，P<0.05为差异有统计学意义。

以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种靶向基因TMEM215抑制剂，其特征在于，所述靶向基因TMEM215抑制剂为抑制TMEM215的siRNA分子，序列如SEQ.ID.NO.5所示。

2.靶向基因TMEM215抑制剂在制备抗肿瘤血管新生药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述靶向基因TMEM215抑制剂的序列如SEQ.ID.NO.5所示。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，靶向基因TMEM215抑制剂通过抑制血管内皮细胞实现抗肿瘤血管新生。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为注射剂型。

6.一种抗肿瘤血管新生的药物组合物，其特征在于，包括靶向基因TMEM215抑制剂。

7.根据权利要求6所述的一种抗肿瘤血管新生的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括其他肿瘤药物。

8.根据权利要求6所述的一种抗肿瘤血管新生的药物组合物，其特征在于，所述药物包括药学上可接受的一种或多种载体。

9.根据权利要求8所述的一种抗肿瘤血管新生的药物组合物，其特征在于，所述载体包括稀释剂、粘合剂、吸附载体、填充剂和崩解剂。

10.根据权利要求6所述的一种抗肿瘤血管新生的药物组合物，其特征在于，所述药物还包括添加剂，所述添加剂包括稳定剂、杀菌剂、缓冲剂、等渗剂、螯合剂、pH值控制剂和表面活性剂。

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