CN115786202A - 一种益生菌裂解物组合物及其在制备具有抗肠炎作用产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明具体公开了一种益生菌裂解物组合物及其在制备具有抗肠炎作用产品中的应用。所述的益生菌裂解物组合物包含鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物。研究表明,本发明所述的益生菌裂解物组合物具有抗肠炎,同时还具有缓解肠炎导致的肠道损伤作用。因此,将本发明所述的益生菌裂解物组合物作为有效成分用于制备具有抗肠炎作用和/或缓解肠炎导致的肠道损伤作用的食品、功能性食品或药品具有重要应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,具体涉及一种益生菌裂解物组合物及其在制备具有抗肠炎作用产品中的应用。
背景技术
肠炎是细菌、病毒、真菌以及寄生虫等引起的小肠炎和结肠炎。其中,腹痛腹泻、溃疡糜烂是肠炎的主要临床表现。针对肠炎的治疗主要有西医、中医、微生物制剂和大肠透析疗法,治疗效果不尽人意的同时也极易复发。
研究表明,肠道菌群的平衡对人体肠道健康至关重要,肠道菌群失衡可导致肠内炎症等相关疾病的发生,如慢性直肠炎。益生菌作为常见的微生物,可定植于人体肠道中,调节肠道微环境,对人体肠道健康至关重要。益生菌活菌或其分泌的短链脂肪酸等活性物质在肠道疾病治疗发挥重要作用。而大量的研究数据表明,补充益生菌是预防、治疗胃肠道疾病的有效方法。益生菌活菌或其分泌的短链脂肪酸等活性物质在提高细胞免疫反应,调节细胞因子分泌及稳定肠道屏障等方面发挥了重要活性。益生菌死菌或者其裂解物是否具有生物活性,尤其是在抗炎方面,是否能够缓解肠炎却鲜有报道,其作用机制也不甚清楚。
发明内容
为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题,本发明首先提供了一种益生菌裂解物组合物。
本发明所要解决的上述技术问题,通过以下技术方案予以实现:
本发明首先提供了一种益生菌裂解物组合物,所述的益生菌裂解物组合物包含鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物。
研究表明,由益生菌裂解物组合物包含鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物组成的益生菌裂解物组合物,其具有抗肠炎活性,同时还具有缓解肠炎导致的肠道损伤作用。
优选地,鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物的质量比为1:1~100:1~100。
进一步优选地,鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物的质量比为1:1~25:1~25。
最优选地,鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物的质量比为1:12:5。
优选地,所述的鼠李糖乳杆菌裂解物通过如下方法制备得到:
S11.将鼠李糖乳杆菌加入到PBS缓冲液中,进行超声裂解,得鼠李糖乳杆菌初步裂解物;
S12.将鼠李糖乳杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析,取经3kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的鼠李糖乳杆菌裂解物(即分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物)。
进一步优选地,PBS缓冲液的质量用量为鼠李糖乳杆菌的4~6倍。
进一步优选地,所述的PBS缓冲液为pH为6.5的PBS缓冲液;所述的超声裂解,其超声时间为10~20min。
优选地,所述的双歧杆菌裂解物通过如下方法制备得到:
S21.将双歧杆菌加入到PBS缓冲液中,进行超声裂解,得双歧杆菌初步裂解物;
S22.将双歧杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析,取经3kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的双歧杆菌裂解物(即分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物)。
进一步优选地,PBS缓冲液的质量用量为双歧杆菌的4~6倍。
进一步优选地,所述的PBS缓冲液为pH为6.5的PBS缓冲液;所述的超声裂解,其超声时间为10~20min。
优选地,所述的副干酪乳酪杆菌裂解物通过如下方法制备得到:
S31.将副干酪乳酪杆菌加入到PBS缓冲液中,进行超声裂解,得副干酪乳酪杆菌初步裂解物;
S32.将副干酪乳酪杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析;再将经3kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用5kDa的超滤膜进行超滤透析,取经5kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的副干酪乳酪杆菌裂解物(即分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物)。
进一步优选地,PBS缓冲液的质量用量为副干酪乳酪杆菌的4~6倍。
进一步优选地,所述的PBS缓冲液为pH为6.5的PBS缓冲液;所述的超声裂解,其超声时间为10~20min。
发明人在大量的实验中惊奇的发现:将按照本发明上述方法制备得到的分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组合后,其抗肠炎及缓解肠炎导致的肠道损伤作用要显著优于单独的分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物或分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物;这说明三者联合使用具有显著的协同的抗肠炎及缓解肠炎导致的肠道损伤的作用。
此外,发明人在研究中还发现,分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物任意二者组合后,或者采用其它方法制备得到的其它分子量的鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物组合后,它们之间并不能产生协同的抗肠炎及缓解肠炎导致的肠道损伤的作用。他们的抗肠炎及缓解肠炎导致的肠道损伤的作用要显著小于将按照本发明上述方法制备得到的分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组合后得到的组合物。
本发明还提供了一种上述益生菌裂解物组合物在制备具有抗肠炎作用的产品中的应用。
进一步优选地,所述的抗肠炎为抗肠道上皮细胞炎。
优选地,所述的益生菌裂解物组合物在制备具有肠炎作用以及同时具有缓解肠炎导致的肠道损伤作用的产品中的应用。
优选地,所述的产品为食品、功能性食品或药品。
有益效果:本发明提供了一种新的益生菌裂解物组合物;研究表明,所述的益生菌裂解物组合物具有抗肠炎作用,同时还具有缓解肠炎导致的肠道损伤作用。因此,将本发明所述的益生菌裂解物组合物作为有效成分用于制备具有抗肠炎作用和/或缓解肠炎导致的肠道损伤作用的食品、功能性食品或药品具有重要的应用价值。此外,本发明所述的益生菌裂解物组合物可以从鼠李糖乳杆菌、双歧杆菌及副干酪乳酪杆菌中裂解得到,制备工艺简单、操作方便,可以实现大规模的生产应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例的附图,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1益生菌裂解物组合物提高肠道上皮细胞活力、抑制DSS诱导的肠道上皮细胞SOD活性降低、抑制MDA分泌增加实验结果图。
图2益生菌裂解物组合物调控DSS诱导的肠道上皮细胞炎性细胞因子分泌实验结果图。
图3益生菌裂解物组合物对DSS诱导的肠道上皮细胞NF-κB信号通路蛋白表达影响实验结果图。
图4益生菌裂解物组合物对DSS诱导的小鼠体重、结肠长度影响实验结果图。
图5益生菌裂解物组合物抑制DSS诱导的小鼠细胞炎性因子分泌实验结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1鼠李糖乳杆菌裂解物的制备方法
S11.取鼠李糖乳杆菌20g,混悬于100g pH为6.5的PBS缓冲液中,超声裂解15min,得鼠李糖乳杆菌初步裂解物;
S12.将鼠李糖乳杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析,取经3kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的鼠李糖乳杆菌裂解物(即分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物)。
实施例2双歧杆菌裂解物的制备方法
S21.取双歧杆菌20g,混悬于100g pH为6.5的PBS缓冲液中,超声裂解15min,得双歧杆菌初步裂解物;
S22.将双歧杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析,取经3kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的双歧杆菌裂解物(即分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物)。
实施例3副干酪乳酪杆菌的制备方法
S31.取副干酪乳酪杆菌20g,混悬于100g pH为6.5的PBS缓冲液中,超声裂解15min,得副干酪乳酪杆菌初步裂解物;
S32.将副干酪乳酪杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析;再将经3kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用5kDa的超滤膜进行超滤透析,取经5kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的副干酪乳酪杆菌裂解物(即分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物)。
实施例4益生菌裂解物组合物的制备方法
取按照实施例1、实施例2、实施例3制备得到的分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物(1g)、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物(12g)及分子量为3-5kDa的的副干酪乳酪杆菌裂解物(5g),混匀,得本发明所述的益生菌裂解物组合物。
效果实施例1益生菌裂解物组合物体外抗炎活性评价
以下效果实验例中的实验对象为实施例1~4制备得到的鼠李糖乳杆菌初步裂解物、双歧杆菌初步裂解物、副干酪乳酪杆菌初步裂解物、分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物、分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物及按照实施例4制备得到的益生菌裂解物组合物。
Hcoepic细胞以5×103/mL的密度接种在Costa 96孔板中,培养24h。此后与终浓度为0.5% DSS孵育12h。收集细胞,冷PBS洗涤2次,将Hcoepic细胞分别与鼠李糖乳杆菌初步裂解物(1.0mg/mL)、双歧杆菌初步裂解物(1.0mg/mL)、副干酪乳酪杆菌初步裂解物(1.0mg/mL)、分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物(1.0mg/mL)、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物(1.0mg/mL)、分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物(1.0mg/mL)及益生菌裂解物组合物(1.0mg/mL)孵育24小时,收集细胞及培养液。CCK 8方法检测细胞活力,ELISA试剂盒测量SOD活性及MDA含量及炎性细胞因子含量;Western blotting方法检测相关蛋白表达变化。
空白对照组标记为Control;DSS组标记为DSS;鼠李糖乳杆菌初步裂解物组标记为A组、双歧杆菌初步裂解物标记为B组、副干酪乳酪杆菌初步裂解物标记为C组、分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物标记为D组、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物标记为E组、分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物标记为F组,益生菌裂解物组合物标记为G组。
分析实验结果发现(如图1A所示),本发明益生菌裂解物组合物能够有效缓解DSS暴露导致的细胞损伤,提高细胞活力。相比于DSS组,益生菌裂解物组合物治疗后细胞活力提高17.4%(p<0.01);相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的细胞保护活性强于单一益生菌初步裂解物;相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的细胞保护活性强于分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物或分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物或分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物单独使用。我们认为,分子量为1-3kDa鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组合后,可通过协同作用提高细胞的抗损伤能力。
DSS诱导的肠道上皮细胞氧化损伤会进一步诱发细胞凋亡,加重肠道损伤。因此,抑制DSS诱导的肠道上皮细胞氧化损伤对于抑制肠道炎症、缓解损伤具有重要意义。细胞等的抗氧化系统包括酶和非酶抗氧化剂,如SOD、CAT以及GSH等。本发明中,DSS暴露使肠道上皮细胞SOD活性显著降低,而分泌的MDA显著升高。与空白对照组相比,DSS暴露组SOD活性降低46.8%(p<0.01),MDA含量升高289.6%(p<0.01)。而益生菌裂解物组合物治疗后,DSS诱发的上皮细胞SOD活性降低及MDA含量升高被显著抑制。相比于DSS组,益生菌裂解物组合物治疗后SOD活性升高38.3%(p<0.01),MDA含量减少63.5%(p<0.01,图1B,C)。分析实验结果,相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的肠道上皮细胞的SOD活性及MDA含量的影响强于单一益生菌初步裂解物;相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的肠道上皮细胞的SOD活性及MDA含量的影响强于分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物或分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物或分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物单独使用。我们认为,分子量为1-3kDa鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组合后,可通过协同作用提高细胞的抗氧化能力。
据报道,细胞炎症及氧化损伤的存在会造成恶性循环,加重肠炎。DSS暴露诱导肠道上皮细胞炎症反应,诱发细胞炎性因子释放。因此,抑制DSS诱导的炎症反应可以减轻对细胞的炎性损伤。本实验中,DSS暴露使肠道上皮细胞分泌的促炎性细胞因子显著增加。与空白对照组相比,DSS暴露组(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-13、IL-18)含量分别增加159.3%(p<0.01)、201.2%(p<0.01)、238.2%(p<0.01)、118.1%(p<0.01)、91.6%(p<0.01)、231.1%(p<0.01,图2A,B,C,D,E,F);相反的,与空白对照组相比,DSS暴露使抗炎性细胞因子IL-4、IL-10含量减少34.6%(p<0.01)、29.6%(p<0.01,图2G,H)。以上结果说明,DSS暴露显著诱发炎性因子大量分泌,而抗炎因子分泌受到抑制。益生菌裂解物组合物治疗后,DSS诱发的细胞炎性因子分泌紊乱被有效抑制。相比于DSS组,益生菌裂解物组合物组TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-13、IL-18含量减少48.6%(p<0.01)、55.4%(p<0.01)、59.5%(p<0.01)、13.1%(p<0.05)、24.6%(p<0.01)、53.1%(p<0.01);相比于DSS暴露组,益生菌裂解物组合物组IL-4、IL-10含量增加41.6%(p<0.01)、8.21%。进一步分析实验结果发现,相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的肠道上皮细胞的炎性因子的分泌调控活性强于单一益生菌初步裂解物;相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的肠道上皮细胞炎性因子的分泌调控活性强于分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物或分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物或分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物单独使用。我们认为,分子量为1-3kDa鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组合后可通过协同作用调控肠道上皮细胞的炎性因子的分泌,进而发挥更优秀的抗炎活性。
炎症是多种细胞及细胞因子参与的机体防御性反应,但严重或长期的炎症则会造成机体损伤。核因子Kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)与炎症反应关系非常密切。本发明中,DSS暴露使肠道上皮细胞IKKα、IKKβ及IκBα蛋白磷酸化显著增加,而IKKα、IKKβ及IκBα蛋白含量显著减少,说明DSS暴露激活肠道上皮细胞NF-κB信号通路。而益生菌裂解物组合物组DSS暴露诱导的肠道上皮细胞IKKα、IKKβ及IκBα蛋白磷酸化被有效抑制(图3A)。实验结果说明,益生菌裂解物组合物可通过抑制DSS暴露诱导的肠道上皮细胞NF-κB信号通路激活减轻DSS暴露导致的炎性损伤。类似的,分析实验结果发现,相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的肠道上皮细胞的NF-κB信号通路激活抑制活性强于单一益生菌初步裂解物;相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的肠道上皮细胞NF-κB信号通路激活抑制活性,强于分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物或分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物或分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物单独使用。我们认为,分子量为1-3kDa鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组合后,可通过协同作用抑制NF-κB信号通路激活,进而发挥更好的抗炎活性。
效果实施例2益生菌裂解物组合物体内抗炎活性评价
以下效果实验例中的实验对象为实施例1~4制备得到的鼠李糖乳杆菌初步裂解物、双歧杆菌初步裂解物、副干酪乳酪杆菌初步裂解物、分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物、分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物及按照实施例4制备得到的益生菌裂解物组合物。
C57BL/6小鼠被随机分为A组,每组8只,分别为:空白对照组(Control)、DSS模型组(DSS)、鼠李糖乳杆菌初步裂解物组、双歧杆菌初步裂解物组、副干酪乳酪杆菌初步裂解物组、分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物组、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物组、分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组及益生菌裂解物组合物组。除对照组外,其余各组将饮水中加入DSS粉末,制成质量浓度为30g/L的DSS溶液给小鼠自由饮用,连续7d,制成肠炎模型(DSS组小鼠一直引用DSS溶液,直到实验结束)。造模结束后,第8d开始小鼠灌胃给药,1次/d,连续14d,鼠李糖乳杆菌初步裂解物、双歧杆菌初步裂解物、副干酪乳酪杆菌初步裂解物、分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物、分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物及益生菌裂解物组合物溶于水中,浓度为50mg/mL,每次0.2mL/10g灌胃,按照小鼠体重计算药量给药。空白对照组标记为Control;DSS组标记为DSS;鼠李糖乳杆菌初步裂解物组标记为a组、双歧杆菌初步裂解物标记为b组、副干酪乳酪杆菌初步裂解物标记为c组、分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物标记为d组、分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物标记为e组、分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物标记为f组,益生菌裂解物组合物标记为g组。
实验结束后,眼球取血,离心,参考ELISA试剂盒使用说明检测炎性因子含量;小鼠被脱臼处死,从盲肠至肛门处完整取出结肠并测量长度。
实验过程中DSS组小鼠出现腹泻、便血症状,而益生菌裂解物组合物治疗组小鼠无腹泻、便血情况;实验结果显示,DSS组小鼠活动度降低、毛发紊乱;实验结束时,小鼠体重明显下降。而益生菌裂解物组合物治疗组,DSS导致的小鼠体重减轻被有效抑制;实验结束时,与空白组比较,体重无显著性差异(图4A)。益生菌裂解物组合物治疗组DAI评分显著低于DSS组(图4B)。进一步的,比较小鼠结肠长度,DSS组小鼠结肠变细,缩短;在益生菌裂解物组合物治疗后,DSS暴露导致的小鼠结肠变细,缩短被有效缓解(图4C)。进一步的我们发现,相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS暴露导致的小鼠腹泻、便血以及DAI评分升高和对小鼠结肠变细,缩短的治疗活性强于单一益生菌初步裂解物,强于分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物或分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物或分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物单独使用。我们认为,分子量为1-3kDa鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组合后,可通过协同作用提高小鼠的抗损伤能力,减轻DSS对小鼠肠道造成的损伤。
DSS暴露会诱发小鼠肠道上皮细胞炎症反应,加剧炎性损伤。本实验中,DSS刺激使小鼠炎性因子分泌显著增加。与空白对照组相比,DSS暴露组(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-13、IL-18)含量增加176.2%(p<0.01)、89.5%(p<0.01)、154.2%(p<0.01)、116.6%(p<0.01)、201.2%(p<0.01,图5A,B,C,D,E);相反的,DSS暴露组小鼠血清中IL-4含量减少45.6%(p<0.01,图5F);说明,DSS暴露显著诱发小鼠肠道炎症。而益生菌裂解物组合物治疗后,DSS诱导的炎性因子分泌失衡被有效缓解。与DSS组相比较,益生菌裂解物组合物组TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-13、IL-18含量分别减少35.9%(p<0.01)、28.6%(p<0.01)、45.3%(p<0.01)、38.9%(p<0.01)、54.8%(p<0.01);IL-4含量增加49.1%(p<0.01)。类似的,相同浓度条件下,益生菌裂解物组合物对DSS诱导的炎性因子的分泌调节活性强于单一益生菌初步裂解物单独使用,强于分子量为1-3kDa的鼠李糖乳杆菌裂解物或分子量为1-3kDa的双歧杆菌裂解物或分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物单独使用。本部分动物实验结果再次证明分子量为1-3kDa鼠李糖乳杆菌裂解物、分子量为1-3kDa双歧杆菌裂解物及分子量为3-5kDa的副干酪乳酪杆菌裂解物组合后具有协同作用,能够有效调控肠道上皮细胞炎性因子分泌,发挥抗肠炎活性。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已,当然不能以此来限定本发明之权利范围,本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程,并依本发明权利要求所作的等同变化,仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (10)
1.一种益生菌裂解物组合物,其特征在于,所述的益生菌裂解物组合物包含鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物。
2.根据权利要求1所述的益生菌裂解物组合物,其特征在于,鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物的质量比为1:1~100:1~100。
3.根据权利要求1所述的益生菌裂解物组合物,其特征在于,鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物的质量比为1:1~25:1~25;
最优选地,鼠李糖乳杆菌裂解物、双歧杆菌裂解物及副干酪乳酪杆菌裂解物的质量比为1:12:5。
4.根据权利要求1所述的益生菌裂解物组合物,其特征在于,所述的鼠李糖乳杆菌裂解物通过如下方法制备得到:
S11.将鼠李糖乳杆菌加入到PBS缓冲液中,进行超声裂解,得鼠李糖乳杆菌初步裂解物;
S12.将鼠李糖乳杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析,取经3kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的鼠李糖乳杆菌裂解物。
5.根据权利要求4所述的益生菌裂解物组合物,其特征在于,PBS缓冲液的质量用量为鼠李糖乳杆菌的4~6倍;
所述的PBS缓冲液为pH为6.5的PBS缓冲液;所述的超声裂解,其超声时间为10~20min。
6.根据权利要求1所述的益生菌裂解物组合物,其特征在于,所述的双歧杆菌裂解物通过如下方法制备得到:
S21.将双歧杆菌加入到PBS缓冲液中,进行超声裂解,得双歧杆菌初步裂解物;
S22.将双歧杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析,取经3kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的双歧杆菌裂解物。
7.根据权利要求6所述的益生菌裂解物组合物,其特征在于,PBS缓冲液的质量用量为双歧杆菌的4~6倍;
所述的PBS缓冲液为pH为6.5的PBS缓冲液;所述的超声裂解,其超声时间为10~20min。
8.根据权利要求1所述的益生菌裂解物组合物,其特征在于,所述的副干酪乳酪杆菌裂解物通过如下方法制备得到:
S31.将副干酪乳酪杆菌加入到PBS缓冲液中,进行超声裂解,得副干酪乳酪杆菌初步裂解物;
S32.将副干酪乳酪杆菌初步裂解物先用1kDa的超滤膜进行超滤透析;接着将经1kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用3kDa的超滤膜进行超滤透析;再将经3kDa的超滤膜超滤透析后的截留液用5kDa的超滤膜进行超滤透析,取经5kDa的超滤膜超滤透析后的超滤液冻干后即得所述的副干酪乳酪杆菌裂解物。
9.根据权利要求8所述的益生菌裂解物组合物,其特征在于,PBS缓冲液的质量用量为副干酪乳酪杆菌的4~6倍;
所述的PBS缓冲液为pH为6.5的PBS缓冲液;所述的超声裂解,其超声时间为10~20min。
10.权利要求1~9任一项所述的益生菌裂解物组合物在制备具有抗肠炎作用的产品中的应用。
进一步优选地,所述的抗肠炎为抗肠道上皮细胞炎。
优选地,所述的益生菌裂解物组合物在制备具有肠炎作用以及同时具有缓解肠炎导致的肠道损伤作用的产品中的应用。
优选地,所述的产品为食品、功能性食品或药品。
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