CN115746077A - 黄瑞香中的三萜类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
黄瑞香中的三萜类化合物及其制备方法和应用，属于医药技术领域，具体涉及从瑞香科(Thymelaeaceae)瑞香属(Daphne L.)植物黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)植的干燥根皮、茎中提取分离得到的3个新的三萜类化合物，通过将黄瑞香粗提物经硅胶柱色谱，快速将其分成五个粗流份，依次通过聚酰胺柱色谱，HP20柱色谱，ODS柱色谱，HPLC分离的色谱方法进行分离。本发明还通过测试上述化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性，确定所述三萜类化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性，本发明提供的新三萜类化合物可在制备治疗和/或预防阿尔茨海默症药物中应用。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及从瑞香属药用植物黄瑞香中分离得到的3个三萜类化合物，并提供了其在抗乙酰胆碱酯酶方面的用途。
背景技术
黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)为瑞香科(Thymelaeaceae)瑞香属(DaphneL.)植物。落叶直立灌木，分布于中国黑龙江、辽宁、陕西、甘肃、青海、新疆、四川等省区。生长于海拔1600-2600米的山地林缘或疏林中。其根皮和茎皮入药，是祖师麻的重要基源植物之一，主治跌打损伤、风湿及类风湿性关节炎等症状，疗效显著，为民间传统常用中药。
乙酰胆碱酯酶(AChE)可以水解乙酰胆碱(ACh)以终止胆碱能突触的脉冲传递，存在于胆碱能脑突触和神经肌肉接头。阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种主要发生在老年人中的神经退行性疾病。随着人口老龄化的加剧，AD的发病率逐年上升。通过增加神经系统中乙酰胆碱的水平来预防AD是最常见的方法之一，这意味着可以通过降低AChE水平来预防AD。乙酰胆碱酯酶抑制剂的使用是提高大脑乙酰胆碱水平的最有前景的方法之一，可用于阿尔茨海默病和相关神经退行性疾病。
发明内容
本发明的目的在于提供从瑞香科瑞香属植物黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)的根皮和茎皮中分离得到的3个三萜类化合物，并提供该类三萜类化合物的提取、制备方法，还提供其在抗阿尔兹海默方面的用途。所述三萜类化合物结构式为：
所述黄瑞香中的三萜类化合物的制备方法，具体包括以下步骤：
取黄瑞香干燥根皮、茎皮以工业乙醇加热回流提取，合并提取液浓缩得浸膏，所得浸膏用水混悬，用乙酸乙酯萃取3-4次，萃取后的水层用正丁醇萃取3-4次，将所得乙酸乙酯层和正丁醇层去除溶剂后的干浸膏分别经硅胶柱色谱，均以二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，将所得流份进行交叉合并后共得到5个流份Fr.1-Fr.5；
流份Fr.1经聚酰胺柱色谱，以乙醇-水为洗脱剂梯度洗脱，得到流份Fr.1.1、Fr.1.2，其中流份Fr.1.2经HP20柱色谱以乙醇-水系统进行梯度洗脱，经硅胶薄层检识和HPLC分析合并后得到4个流份Fr.1.2.1、Fr.1.2.2、Fr.1.2.3、Fr.1.2.4；
Fr.1.2.1、Fr.1.2.2、Fr.1.2.3分别经ODS柱色谱以乙醇-水系统进行梯度洗脱，经硅胶薄层检识和HPLC分析进行合并共得到7个流份Fr.A、Fr.B、Fr.C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G；
利用制备HPLC对Fr.A、Fr.B以甲醇-水系统53:47进行分离，得到15个组分；
利用半制备HPLC对上述15个组分以乙腈-水系统40:60进行洗脱，得到化合物1-3。
所述的制备方法中，采用的黄瑞香的根皮和茎皮来自瑞香科瑞香属植物黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)。
所述的制备方法中，黄瑞香干燥根皮、茎皮以70-80％工业乙醇回流提取2-3次；二氯甲烷-甲醇系统的梯度为50:0-3:1。
所述的制备方法中，流份Fr.1经聚酰胺柱色谱以乙醇-水系统20:80-90:10进行梯度洗脱，采用的乙醇的浓度为20％-90％；流份Fr.1.2经HP20柱色谱以乙醇-水系统20:80-90:10进行梯度洗脱，采用的乙醇的浓度为20％-90％。
所述的制备方法中，Fr.1.2.1-Fr.1.2.3经ODS柱色谱以乙醇-水系统20:80-90:10进行梯度洗脱，采用的乙醇的浓度为20％-90％。
本发明所得化合物的结构鉴定结果如下：
利用紫外光谱、高分辨质谱、一维和二维NMR技术对化合物1-3结构及相对构型进行确定。通过X-射线单晶衍射和比较实测ECD和计算ECD谱图对其绝对构型进行确定(如图1-图25)。
化合物1：
化合物1为无色块状结晶(甲醇)。HRESI-MS给出准分子离子峰m/z 521.3615[M+Na]+(calcd.for C32H50O4Na,521.3601)，结合1H、13C NMR数据确定分子式为C32H50O4，不饱和度为8。1H-NMR(600MHz,CDCl3)谱中给出五个角甲基的特征信号δH 0.87(3H,s),0.88(3H,s),0.98(3H,s),1.05(3H,s),1.21(3H,s),1.38(3H,s)，两个仲甲基氢信号δH 0.92(3H,d,J＝6.6Hz),1.02(3H,d,J＝6.6Hz)，推测其为三萜类化合物。δH 4.60(1H,q,J＝8.2Hz)和4.56(1H,dd,J＝10.6,5.4Hz)为两个连氧次甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,CDCl3)谱中给出32个碳信号，结合HSQC谱可将其归属为一个α,β-不饱和酮系统(δC 200.6,142.4,159.8)，一个乙酰氧取代基(δC 171.2,21.4)，两个连氧次甲基碳信号(δC 80.2,67.2)，8个甲基碳信号(δC 38.3,27.6,25.3,22.8,22.6,19.9,16.3,16.2)，8个亚甲基碳信号(δC40.7,37.6,36.9,33.3,33.2,29.6,24.1,23.9)，3个次甲基碳信号(δC 48.8,36.1,31.9)，5个季碳信号(δC 40.8,40.5,39.8,38.1,31.4)。化合物1具有乌苏烷型三萜特征甲基信号，即29、30位的甲基质子均裂分成二重峰，其化学位移值在δH 0.8-1.0之间，耦合常数J约为6.0Hz，推测化合物1可能为乌苏烷型三萜。文献检索发现化合物1与先前文献报的3β-Acetoxy-6α-hydroxy-11-oxoisobauerene碳氢数据高度相似(B.Vouffo,K.Krohn,S.F.Kouam,H.Hussain,E.Dongo,K.Meier,B.Schulz,Dinklagenonoate:a newisobauerane-type triterpenoid and other minor constituents from the twigs ofDorstenia dinklagei,Biochem.Syst.Ecol.36(2008)655-658.)，推测其更可能为isobauerane型五环三萜。在HMBC谱中，甲基质子信号δH 2.07与δC 80.2(C-3)之间的相关以及连氧次甲基质子δH 4.56(H-3)与171.2(-C＝O)之间的相关表明乙酰氧基连接在C-3位。δH1.72(H-5),2.46,2.37(H-6)与δC 200.6(C-7)之间的相关，以及δH 1.21(25-CH3)与δC159.8(C-9)之间的相关，δH 1.38(26-CH3)与δC142.4(C-8)之间的相关，δH 4.60(H-11)与δC142.4(C-8),159.8(C-9)之间的相关表明α,β-不饱和酮系统位于7,8,9位，且酮羰基取代在7位，同样可以确定羟基取代在11位。综上，化合物1的平面结构为3-acetoxy-11-hydroxy-7-oxoisobauerene。
化合物的相对构型结合耦合常数和NOESY相关确定。H-3/H-5,H-3/23-CH3之间的相关表明其均为α构型，H3-24/H3-25和H3-25/H-2(δH 1.78,m)之间相关表明其均为β构型,H-11/27-CH3之间相关表明其均为α构型，26-CH3/28-CH3/29-CH3之间的相关表明其均为β构型。此外，H-3(δH 3.30,dd,J＝10.4,6.4Hz)的耦合常数也表明了3-乙酰氧基在equatorial的β位置。
其绝对构型通过单晶(二氯甲烷：甲醇1:1)确定[Flack parameter＝0.08(3)]。化合物1的绝对构型确定为3S,5R,10S,13S,14S,17R,18R,19S,20R。综上，确定了化合物1的结构，归属了其碳氢信号，文献检索后确定为一未见报道的新化合物，命名为daphgirine A。
化合物2:
化合物2为白色无定形粉末(甲醇)。HRESI-MS给出准分子离子峰m/z 499.3797[M+H]+(calcd.for C32H51O4,499.3782)，结合1H、13C NMR数据确定分子式为C32H50O4，不饱和度为8。1H-NMR(600MHz,CDCl3)谱中，高场区给出八个甲基的特征信号，包括δH 0.70(3H,s),0.87(3H,d,J＝6.6Hz),0.88(3H,s),0.98(3H,s),1.14(3H,s),1.27(3H,s),1.61(3H,s),1.68(3H,s)，推测其可能为三萜类化合物。此外，1H-NMR给出的δH 4.69(1H,q,J＝8.1Hz),4.56(1H,dd,J＝10.8,5.2Hz)为两个连氧次甲基质子信号。δH 5.09(1H,t,J＝7.1Hz)为一个三取代双键上的氢信号。13C-NMR(150MHz,CDCl3)显示有32个碳信号，综合分析1H,13C-NMR数据并结合HSQC谱可知该分子中含有一个α,β-不饱和酮系统(δC 199.9,140.7,161.1)，一个三取代双键(δC 125.0,131.3)。一个乙酰氧取代基(δC 171.1,21.4)，两个连氧次甲基(δC80.0,68.3)，8个亚甲基(δC 42.9,35.7,33.4,31.9,27.9,24.9,23.9)，3个次甲基(δC 49.5,48.8,35.6)，4个季碳(δC 48.1,46.3,39.5,38.0)以及8个甲基(δC 27.6,25.9,25.8,19.9,18.9,17.9,16.4,16.3)。该化合物不饱和度为8，以上分析证明含有2个羰基、2个.双键，共占据4个不饱和度，表明其为四环三萜类化合物。进一步分析化合物2的二维核磁数据(1H-1HCOSY,HSQC,HMBC,NOESY)以确定其结构。
在HMBC谱中，利用甲基与碳信号之间的相关确定母核中α,β-不饱和酮以及两个连氧亚甲基的位置。其中，δH 4.56(H-3)与δC 171.1(-C＝O),33.4(C-1),38.0(C-4),49.5(C-5)之间的相关以及δH 2.07与δC 80.0(C-3)的相关表明分子中3位被乙酰氧基取代。结合3位氢信号较大的耦合常数(J2,3＝10.8Hz)可知该取代基为β构型。此外，δH 1.27(19-CH3)与δC33.4(C-1),49.5(C-5),161.1(C-9)之间的相关，δH 1.14(30-CH3)与δC 140.7(C-8),46.3(C-14),31.9(C-15)之间的相关，表明α,β-不饱和酮的双键应该是在8,9位之间。此外，δH1.74(H-5),2.42,2.45(H-6)与δC 199.9(C-7)之间的相关表明α,β-不饱和酮的羰基应在7位。δH 4.69(H-11)与δC 140.7(C-8),161.1(C-9),42.9(C-12)之间的相关表明有羟基取代在11位。由于羊毛甾烷型、甘遂烷型、大戟烷型三萜具有相同的平面结构，进一步分析其NOESY数据以确定其立体构型。在化合物2的NORSY谱中，30-CH3/H-17,18-CH3/H-20,H-17/21-CH3,21-CH3/H-16之间有相关，确定化合物2为大戟烷型四环三萜。通过比较1H,13C-NMR,1H-1H COSY,HSQC,HMBC,NOESY谱图发现化合物2与已知化合物eupha-8,24-diene-3β,11β-diol-7-one结构相似，唯一的不同点是化合物2的三位羟基被乙酰化。HMBC谱中δH 2.05与δC80.17(C-3),171.1(-C＝O)之间的相关，以及δH 4.56(H-3)与δC 171.1(-C＝O)之间的相关证实了化合物2的平面结构为eupha-7,24-diene-3-ol-6-one。
化合物的相对构型结合耦合常数及NOESY谱确定，H-3/H-5,H-3/28-CH3之间的相关表明其均为α构型，19-CH3/29-CH3,17-H/21-CH3/30-CH3之间的相关表明其均为β构型。H-11/H-18/H-20之间相关表明其均为α构型。H-3(δH 3.30,dd,J＝10.4,6.4Hz)的耦合常数表明在3-OH在equatorialβ位。由此确定了化合物2的相对构型。
其绝对构型通过比较实测ECD和计算ECD确定为3S,5R,9R,10R,13S,14S,17S,20R。
综上，确定了化合物2的结构，归属了其碳氢信号，查阅文献后未检索到相关报道，确定为一新化合物，将其命名为daphgirine B。
化合物3:
化合物3为白色无定形粉末(甲醇)。HRESI-MS给出准分子离子峰m/z 463.3547[M+Na]+(calcd.for C30H48O2Na,463.3547)，结合1H、13C NMR数据确定分子式为C30H48O2，不饱和度为7。1H-NMR(600MHz,CDCl3)中，高场区给出八个甲基的特征信号，包括δH 0.82(3H,s),0.86(3H,s),0.87(3H,d,J＝6.5Hz),1.05(3H,s),1.13(3H,s),1.32(3H,s),1.61(3H,s),1.69(3H,s)，推测其可能为三萜类化合物。此外，1H-NMR谱中给出的δH 3.22(1H,dd,J＝11.6,4.0Hz)为一个连氧次甲基质子信号。δH 5.09(1H,t,J＝7.1Hz),5.70(1H,d,J＝2.8Hz)为两个三取代双键上的氢信号。13C-NMR(CDCl3,150MHz)显示有30个碳信号，结合HSQC谱可知该分子中含有一个α,β-不饱和酮系统(δC 200.1,170.8,125.0)，一个三取代双键(δC 131.3,124.9)，一个连氧次甲基(δC 79.2)，8个亚甲基(δC 37.1,35.2,33.0,32.9,28.0,26.7,25.4,17.7)，4个次甲基(δC 65.3,52.8,50.5,35.7)，4个季碳(δC 52.5,43.9,43.1.38.1)以及8个甲基(δC 28.5,25.9,25.1,22.1,18.6,17.8,15.0,14.4)。该化合不饱和度为7，以上分析表明存在1个羰基、2个双键，占据了3个不饱和度，推测其可能为四环三萜类化合物。将化合物3的核磁数据与已知化合物3β-acetoxyeupha-7,24-dien-6-one对比发现两者有着相似的碳氢数据，区别在于化合物3的3位羟基未乙酰化。进一步分析化合物3的二维核磁数据(1H-1H COSY,HSQC,HMBC,NOESY)以确定其结构。
在HMBC谱中，利用甲基与碳信号之间的相关确定母核中α,β-不饱和酮以及连氧亚甲基的位置。其中，δH 3.21(H-3)与δC 26.7(C-2),38.1(C-4),28.5(C-28)之间的相关表明分子中3位被羟基取代。结合3位氢较大的耦合常数(J2,3＝11.6,4.0Hz)可知3-OH为β构型。δH 1.05(30-CH3)与δC 170.8(C-8),52.5(C-14),33.0(C-15)之间的相关，δH 2.70(H-9)与δC125.0(C-7),170.8(C-8)之间的相关，δH 2.12(H-5)与δC 200.1(C-6),125.0(C-7)之间的相关表明α,β-不饱和酮的双键位于7,8位之间且羰基应在6位。由此确定了化合物3的平面结构。进一步分析其NOESY数据以确定其立体构型。在化合物3的NORSY谱中，30-CH3/H-17,18-CH3/H-20,H-17/21-CH3,21-CH3/H-16之间有相关，确定化合物3为大戟烷型四环三萜。
化合物的相对构型通过耦合常数及NOESY谱确定，H-3/H-5,H-3/28-CH3之间的相关表明其均为α构型，19-CH3/29-CH3,17-H/30-CH3,17-H/21-CH3之间的相关表明其均为β构型。H-9/18-CH3/H-20相关表明其均为α构型，由此确定了化合物3的相对构型。
其绝对构型通过计算ECD确定为3S,5R,10S,11S,13S,14S,17S,20R。
综上，确定了化合物3的结构，归属了其碳氢数据(表1)，查阅文献后未见报道，确定为一新化合物，命名为daphgirine C。
表1化合物1-3在CDCl3中1H(600MHz)与13C(150MHz)NMR数据
本发明还提供一种药物组合物，以所述的三萜类化合物中任一种或几种或其药学上可接受的盐作为活性成分，与药学上可接受的赋形剂混合制备成的组合物，并制备成临床上可接受的剂型，所述赋形剂是指能够用于药学领域的稀释剂、辅助剂或载体，所述剂型为注射剂、片剂或胶囊剂。
所述三萜类化合物或其药学上可接受的盐或所述的药物组合物在制备治疗和/或预防阿尔茨海默症药物中的应用。
本发明的有益效果：
对本发明所述三萜类化合物1-3对乙酰胆碱酯酶抑制活性进行了考察，结果表明化合物3显示出对乙酰胆碱酯酶的抑制活性，其IC50值为19.53±1.21μM。
本发明为抗阿尔兹海默症领域提供新的三萜类化合物，所述化合物易于分离纯化，且均为立体构型确定的光学纯化合物，具有进一步开发的价值。此外本发明方法设计合理，具有工艺过程简单、成本低和能够工业化生产的特点。
附图说明
图1化合物1的HRESIMS谱；
图2化合物1的UV谱；
图3化合物1的1H NMR谱(600MHz,CDCl3)；
图4化合物1的13C NMR谱(150MHz,CDCl3)；
图5化合物1的HSQC谱(600MHz,CDCl3)；
图6化合物1的HMBC谱(600MHz,CDCl3)；
图7化合物1的NOESY谱(600MHz,CDCl3)；
图8化合物1的1H-1H COSY谱(600MHz,CDCl3)；
图9化合物1-3的关键HMBC；
图10化合物1-3的关键NOE相关；
图11化合物1的单晶X衍射图；
图12化合物2的HRESIMS谱；
图13化合物2的UV谱；
图14化合物2的1H NMR谱(600MHz,DMSO-d6)；
图15化合物2的13C NMR谱(150MHz,DMSO-d6)；
图16化合物2的HSQC谱(600MHz,DMSO-d6)；
图17化合物2的HMBC谱(600MHz,DMSO-d6)；
图18化合物3的HRESIMS谱；
图19化合物3的UV谱；
图20化合物3的1H NMR谱(600MHz,CDCl3)；
图21化合物3的13C NMR谱(600MHz,CDCl3)；
图22化合物3的HSQC谱(600MHz,CDCl3)；
图23化合物3的HMBC谱(600MHz,CDCl3)；
图24化合物3的1H-1H COSY谱(600MHz,CDCl3)；
图25化合物2-3实测ECD与计算ECD比对图；
图26化合物3与乙酰胆碱酯酶结合相互作用。
具体实施方式
实施例1
所述三萜类化合物1-3的制备，包括如下步骤：
取黄瑞香干燥根皮、茎皮(100kg)以80％工业乙醇加热回流提取2次，每次2h，合并提取液浓缩得浸膏，所得浸膏用水混悬，用乙酸乙酯萃取3次，萃取后的水层用正丁醇萃取3次，将所得乙酸乙酯层和正丁醇层去除溶剂后的干浸膏分别经硅胶柱色谱，均以二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱(50:0-3:1,v:v)，将所得流份进行交叉合并后共得到5个流份Fr.1(375g)(二氯甲烷-甲醇50:0和50:1流份合并)、Fr.2(400g)(二氯甲烷-甲醇40:1和30:1流份合并)、Fr.3(360g)(二氯甲烷-甲醇20:1和15:1流份合并)、Fr.4(500g)(二氯甲烷-甲醇10:1和5:1流份合并)、Fr.5(600g)(二氯甲烷-甲醇3:1和0:1流份合并)；
流份Fr.1经聚酰胺柱色谱，以乙醇-水为洗脱剂梯度洗脱(20:80-90:10,v:v)，得到流份Fr.1.1(47g)、Fr.1.2(215g)，其中流份Fr.1.2经HP20柱色谱以乙醇-水系统进行梯度洗脱(20:80-90:10,v:v)，经硅胶薄层检识和HPLC分析合并后得到4个流份Fr.1.2.1(40g)(乙醇-水20:80和30:70流份合并)、Fr.1.2.2(60g)(乙醇-水40:60和50:50流份合并)、Fr.1.2.3(80g)(乙醇-水60:40流份)、Fr.1.2.4(40g)(乙醇-水70:30,80:20和90:10流份合并)；
Fr.1.2.1、Fr.1.2.2、Fr.1.2.3分别经ODS柱色谱以乙醇-水系统进行梯度洗脱(20:80-90:10,v:v)，经硅胶薄层检识和HPLC分析进行合并共得到7个流份Fr.A(10.5g)(乙醇-水20:80和30:70流份合并)、Fr.B(14.5g)(乙醇-水40:60流份)、Fr.C(12.5g)(乙醇-水50:50流份)、Fr.D(18.0g)(乙醇-水60:40流份)、Fr.E(20.4g)(乙醇-水65:35流份)、Fr.F(22.7g)(乙醇-水70:30和80:20流份合并)、Fr.G(15.8g)(乙醇-水90:10流份)；上述过程中采用的乙醇浓度为70％。
利用制备HPLC对Fr.A、Fr.B以甲醇-水系统(53:47v:v)进行分离，得到15个组分；
利用半制备HPLC对上述15个组分以乙腈-水系统(40:60v:v)进行洗脱，得到化合物1(9.3mg),2(13.6mg),3(27.0mg)。
实施例2
所述化合物1-3对乙酰胆碱酯酶抑制活性研究
使用PBS将样品(化合物1-3及对照品)释成合适的浓度(100,40,20,10,1μmol/L)，预先在96孔板的孔中加入50μL PBS溶液，样品溶液25μL，酶溶液12.5μL，DTNB溶液125μL，混合后在冷藏过夜，然后加入50μL的ATCI溶液，立刻使用酶标仪在412nm处测定吸光度，5min以后再测一次，以多奈哌齐为阳性对照。
结果表明化合物3显示出对乙酰胆碱酯酶的抑制活性，其IC50值为19.53±1.21μM，优于对照品(15.53±1.04μM)。化合物3与乙酰胆碱酯酶结合相互作用示意图如图26所示。
Claims (10)
1.一种黄瑞香中的三萜类化合物，其特征在于，所述三萜类化合物为如下所示结构式中任一种：
2.一种权利要求1所述黄瑞香中的三萜类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取黄瑞香干燥根皮、茎皮以乙醇加热回流提取，合并提取液浓缩得浸膏，所得浸膏用水混悬，用乙酸乙酯萃取3-4次，萃取后的水层用正丁醇萃取3-4次，将所得乙酸乙酯层和正丁醇层去除溶剂后的干浸膏分别经硅胶柱色谱，均以二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，将所得流份进行交叉合并后共得到5个流份Fr.1-Fr.5；
流份Fr.1经聚酰胺柱色谱，以乙醇-水为洗脱剂梯度洗脱，得到流份Fr.1.1、Fr.1.2，其中流份Fr.1.2经HP20柱色谱以乙醇-水系统进行梯度洗脱，经硅胶薄层检识和HPLC分析合并后得到4个流份Fr.1.2.1、Fr.1.2.2、Fr.1.2.3、Fr.1.2.4；
Fr.1.2.1、Fr.1.2.2、Fr.1.2.3分别经ODS柱色谱以乙醇-水系统进行梯度洗脱，经硅胶薄层检识和HPLC分析进行合并共得到7个流份Fr.A、Fr.B、Fr.C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G；
利用制备HPLC对Fr.A、Fr.B以甲醇-水系统进行分离，得到15个组分；
利用半制备HPLC对上述15个组分以乙腈-水系统进行洗脱，得到化合物1-3。
3.根据权利要求2所述的黄瑞香中的三萜类化合物的制备方法，其特征在于，采用的黄瑞香的根皮和茎皮来自瑞香科瑞香属植物黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)。
4.根据权利要求2所述的黄瑞香中的三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法中，黄瑞香干燥根皮、茎皮以70-80％工业乙醇回流提取2-3次；二氯甲烷-甲醇系统的梯度为50:0-3:1。
5.根据权利要求2所述的黄瑞香中的三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法中，流份Fr.1经聚酰胺柱色谱以乙醇-水系统20:80-90:10进行梯度洗脱，采用的乙醇的浓度为20％-90％；流份Fr.1.2经HP20柱色谱以乙醇-水系统20:80-90:10进行梯度洗脱，采用的乙醇的浓度为20％-90％。
6.根据权利要求2所述的黄瑞香中的三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法中，Fr.1.2.1-Fr.1.2.3经ODS柱色谱以乙醇-水系统20:80-90:10进行梯度洗脱，采用的乙醇的浓度为20％-90％。
7.根据权利要求2所述的黄瑞香中的三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法中，利用制备HPLC对Fr.A、Fr.B以甲醇-水系统53:47进行分离，得到15个组分。
8.根据权利要求2所述的黄瑞香中的三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法中，利用半制备HPLC对15个组分以乙腈-水系统40:60进行洗脱，得到化合物1-3。
9.一种药物组合物，其特征在于，以权利要求1所述的三萜类化合物中任一种或几种或其药学上可接受的盐作为活性成分，与药学上可接受的赋形剂混合制备成的组合物，并制备成临床上可接受的剂型，所述赋形剂是指能够用于药学领域的稀释剂、辅助剂或载体，所述剂型为注射剂、片剂或胶囊剂。
10.权利要求1所述三萜类化合物或其药学上可接受的盐或权利要求9所述的药物组合物在制备治疗和/或预防阿尔茨海默症药物中的应用。
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| CN103479623A (zh) * | 2013-09-18 | 2014-01-01 | 上海大学 | 香豆素类化合物双白瑞香素的新用途 |
| CN111423403A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-07-17 | 沈阳药科大学 | 黄瑞香中的异戊烯基黄酮类化合物及其用途 |
| CN115745922A (zh) * | 2022-11-22 | 2023-03-07 | 沈阳药科大学 | 藏东瑞香中的二芳基戊烷类化合物及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
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| 王艳;王艳杰;宋少江;柳春;赵丹玉;: "知母总皂苷对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用", 实用中医内科杂志, no. 06 * |
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