CN115737477A - 一种美白组合物、美白防腐组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种美白组合物、美白防腐组合物及其应用，属于化妆品技术领域。本发明通过将包裹在环糊精内的辛酰羟肟酸和对羟基苯乙酮与环庚三烯酚酮、1‑甲基乙内酰脲‑2‑酰亚胺合理复配，以对抑制酪氨酸酶活性产生协同增效的作用，同时赋予其良好的抗氧化作用，使其具有较好的美白功效；在此基础上复配羟苯基丙酰胺苯甲酸和多元醇，还具有很好的防腐、抗炎等功效，而且温和无刺激，能减少化妆品中其他组分的刺激性。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种美白组合物、美白防腐组合物及其应用。
背景技术
具有美白功效的化妆品一直以来都深受消费者的喜爱，也是化妆品领域研究人员的重要研究方向。皮肤的黑白程度与皮肤细胞中的黑色素含量密切相关。黑色素的生成与酪氨酸酶密切相关，具体表现在：酪氨酸酶催化酪氨酸形成多巴，再继续催化形成多巴醌，多巴醌之后经过重新排列、聚合、与黑素体内的结构蛋白，形成黑色素。酪氨酸酶是黑色素生成的重要限速酶，抑制酪氨酸酶活性就能减少黑色素的生成，有利于美白。
因此，有必要开发一种具有良好酪氨酸酶活性抑制作用的产品，以获得较好的美白效果。
发明内容
基于现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种美白组合物、美白防腐组合物及其应用。
为了达到上述目的，第一方面，本发明提供了一种美白组合物，包括辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精，其中，辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精的质量比为辛酰羟肟酸：对羟基苯乙酮：环庚三烯酚酮：1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺：环糊精 =（3-20）：（6-30）：（0.5-1）：（0.5-2）：（3-10），所述辛酰羟肟酸和所述对羟基苯乙酮包裹在所述环糊精内。
辛酰羟肟酸和环庚三烯酚酮通过络合酪氨酸酶中的Cu2+以抑制酪氨酸酶的活性；对羟基苯乙酮对酪氨酸酶有竞争性抑制作用，但对酪氨酸酶活性没有抑制作用；1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺同时具有抑制酪氨酸酶活性、抑制黑素小体转移的双重功能。所述美白组合物将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺合理复配，对抑制酪氨酸酶的活性产生了协同增效的作用；另外，辛酰羟肟酸和环庚三烯酚酮还能通过络合作用防止二价、三价等金属离子对氧化过程产生催化作用，对羟基苯乙酮本身具有抗氧化作用，赋予所述美白组合物较好的抗氧化功效。在辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺共同作用下，所述美白组合物具有较好的抑制酪氨酸酶活性作用和较好的抗氧化作用，从而具有较好的美白功效。
辛酰羟肟酸和对羟基苯乙酮较难溶于水，在水中的溶解度小于0.1wt%。经X射线衍射和核磁共振研究证实，环糊精分子呈锥柱状或圆锥状花环，有许多可旋转的键和羟基，内有一个空腔，表观外型类似于接导管的橡胶塞；其分子构型为葡萄糖的C-1椅式构型，在它的圆筒内部有-CH-葡萄糖苷结合的O原子，故呈疏水性；葡萄糖的2位和3位的-OH基在圆筒的一端开口处，6位的-OH基在圆筒的另一端开口处，所以圆筒的二端开口处都呈亲水性；环糊精内腔可以包结物质形成包合物，环糊精作为主体，被包合物作为客体，被包合物能全部或部分进入环糊精空穴内部，形成环糊精包合物，可以改善被包合物的性能。上述美白组合物通过将辛酰羟肟酸和对羟基苯乙酮与环糊精混合，以将其包裹在环糊精内，提高它们在水中的溶解度，从而使该组合物在含水的化妆品中具有较好的溶解性，能有效发挥辛酰羟肟酸及对羟基苯乙酮的作用。
在一些实施例中，所述美白组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀后，再加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺等混合均匀，得到所述美白组合物。
优选地，所述辛酰羟肟酸、所述对羟基苯乙酮、所述环庚三烯酚酮、所述1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和所述环糊精的质量比为辛酰羟肟酸：对羟基苯乙酮：环庚三烯酚酮：1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺：环糊精=12：23：1：1：10。当该特定配比下，所述美白组合物具有更好的抑制酪氨酸酶活性的作用，从而具有更好的美白功效。
第二方面，本发明提供了一种美白防腐组合物，包括以下质量百分含量的组分：辛酰羟肟酸3-20%，对羟基苯乙酮6-30%，环庚三烯酚酮0.5-1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺0.5-2%，环糊精3-10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.005-0.05%，余量多元醇；所述辛酰羟肟酸和所述对羟基苯乙酮包裹在所述环糊精内。
所述美白防腐组合物通过将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺合理复配，利用这四种物质对酪氨酸酶活性的协同抑制作用以及辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环庚三烯酚酮的抗氧化作用，以产生非常好的美白作用。当上述组合物作为美白剂时，其在化妆品中的添加量在0.5-5wt%范围内，即能产生比较好的美白效果。
所述美白防腐组合物在辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、多元醇等的共同作用下，还具有非常好的防腐功效，其在化妆品中添加量在0.5-0.8wt%范围内即能产生非常好的防腐效果，满足CTFA和USP评价标准。
所述美白防腐组合物因羟苯基丙酰胺苯甲酸能抗组胺，环庚三烯酚酮能增加血管通透性，对羟基苯乙酮能抑制环氧化酶-2活性，而具有较好的抗炎作用，其在化妆品中添加量在0.5-5wt%范围内即能产生非常好的抗炎效果。
所述美白防腐组合物温和无刺激，还能减少其他物质的刺激性，当其在化妆品中添加量在0.5-5wt%范围内，即能很好的降低化妆品中其他组分的刺激性。
上述美白防腐组合物温和无刺激，不仅具有良好的美白、防腐、抗炎等功效，还能减少化妆品中其他组分的刺激性。
优选地，所述美白防腐组合物包括以下质量百分含量的组分：辛酰羟肟酸12%，对羟基苯乙酮23%，环庚三烯酚酮1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%。所述美白防腐组合物在特定含量的各组分的共同作用下，不仅温和安全，还具有更好的美白、防腐功效。
优选地，所述多元醇包括乙二醇、丙二醇、丙三醇、丁二醇、乙氧基二乙二醇中的至少一种。
优选地，所述多元醇包括丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇，所述丙二醇、所述丙三醇、所述丁二醇和所述乙氧基二乙二醇的质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=（5-30）：（10-50）：（1-15）：1。
优选地，所述丙二醇、所述丙三醇、所述丁二醇和所述乙氧基二乙二醇的质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。
第三方面，本发明提供了所述美白组合物或所述美白防腐组合物在制备化妆品中的应用。
第四方面，本发明还提供了一种化妆品，包括所述美白防腐组合物，所述美白防腐组合物在所述化妆品中的质量百分含量为0.5-5%。当所述美白防腐组合物用于美白、抗刺激、减少化妆品其他组分刺激性等时，其在化妆品中的添加量通常在0.5-5%范围内，即能获得较好的相应功效。
优选地，所述美白防腐组合物在所述化妆品中的质量百分含量为0.5-0.8%。当所述美白防腐组合物作为防腐剂时，其在化妆品中的添加量通常在0.5-0.8%范围内，即能获得较好的防腐功效。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
（1）本发明美白组合物通过将包裹在环糊精内的辛酰羟肟酸和对羟基苯乙酮与环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺合理复配，对抑制酪氨酸酶活性产生了协同增效的作用，还赋予其良好的抗氧化作用，从而使其具有较好的美白功效，而且其制备方法简单，易于生产，在水中溶解性好，方便在化妆品中添加使用。
（2）本发明美白防腐组合物除具有非常好的美白功效外，还具有非常好的防腐、抗炎等功效，不仅本身温和无刺激，还能减少化妆品中其他组分的刺激性，而且其制备方法简单，易于生产，在水中溶解性好，方便在化妆品中添加。
附图说明
图1为实施例5美白防腐组合物抗炎结果图。
具体实施方式
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例及对比例对本发明作进一步说明，其目的在于详细地理解本发明的内容，而不是对本发明的限制。本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。本发明实施所涉及的实验试剂及仪器，除非特别说明，均为常用的普通试剂及仪器。
实施例1
本实施例提供了一种美白组合物，其包括辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精，其中辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精的质量比为辛酰羟肟酸：对羟基苯乙酮：环庚三烯酚酮：1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺：环糊精 =12：23：1：1：10。该美白组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入环庚三烯酚酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺，混合均匀，即得该美白组合物。
实施例2
本实施例提供了一种美白组合物，其包括辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精，其中辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精的质量比为辛酰羟肟酸：对羟基苯乙酮：环庚三烯酚酮：1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺：环糊精 =12：23：1：1：5。该美白组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入环庚三烯酚酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺，混合均匀，即得该美白组合物。
实施例3
本实施例提供了一种美白组合物，其包括辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精，其中辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精的质量比为辛酰羟肟酸：对羟基苯乙酮：环庚三烯酚酮：1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺：环糊精 =3：30：0.5：0.5：3。该美白组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入环庚三烯酚酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺，混合均匀，即得该美白组合物。
实施例4
本实施例提供了一种美白组合物，其包括辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精，其中辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精的质量比为辛酰羟肟酸：对羟基苯乙酮：环庚三烯酚酮：1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺：环糊精 =20：6：1：2：10。该美白组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入环庚三烯酚酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺，混合均匀，即得该美白组合物。
实施例5
本实施例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸12%，对羟基苯乙酮23%，环庚三烯酚酮1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
实施例6
本实施例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸12%，对羟基苯乙酮23%，环庚三烯酚酮1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，环糊精5%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
实施例7
本实施例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸3%，对羟基苯乙酮30%，环庚三烯酚酮0.5%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺0.5%，环糊精3%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.005%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
实施例8
本实施例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸20%，对羟基苯乙酮6%，环庚三烯酚酮1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺2%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.05%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例1
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸12%，对羟基苯乙酮23%，环庚三烯酚酮1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸和对羟基苯乙酮混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例2
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：对羟基苯乙酮23%，环庚三烯酚酮1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例3
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸12%，对羟基苯乙酮23%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例4
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸12%，环庚三烯酚酮1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例5
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸12%，对羟基苯乙酮23%，环庚三烯酚酮1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例6
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：对羟基苯乙酮23%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例7
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分： 1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：在丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物加入1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例8
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸2%，对羟基苯乙酮3%，环庚三烯酚酮0.1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
对比例9
本对比例提供了一种美白防腐组合物，其包括以下重量百分含量的组分：辛酰羟肟酸1%，对羟基苯乙酮2%，环庚三烯酚酮0.05%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%，余量多元醇，其中，多元醇由丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇组成，质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。该美白防腐组合物的制备方法包括以下步骤：将辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮和环糊精混合均匀，再加入丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇的混合物中，混合均匀后加入环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和羟苯基丙酰胺苯甲酸，混合均匀，即得该美白防腐组合物。
（1）溶解性测试
在5℃和常温（25℃）下，将5重量份实施例5-8美白防腐组合物与0.2重量份氢化蓖麻油（欣浪生化CO-40）混合后，加入95重量份水中，搅拌10min后，观察是否水溶，结果见表1。
表1
由表1可知，实施例5-8美白防腐组合物在水中具有很好的溶解性，而对比例1却不能水溶。这是因为辛酰羟肟酸和对羟基苯乙酮本身极难溶于水，但实施例5-8通过用环糊精对辛酰羟肟酸和对羟基苯乙酮进行包裹，大大增加了它们在水中的溶解度。
（2）酪氨酸酶活性抑制效果测试
对实施例5和对比例2-9的美白防腐组合物进行酪氨酸酶活性抑制效果测试。
测试原理：酪氨酸酶可作为酪氨酸羟基酶和多巴羟基酶，前者将酪氨酸转变成多巴(二羟基苯基丙氨酸)，后者将多巴转变成多巴醌，本实验以L-多巴为底物，测试样品对酪氨酸酶催化L-多巴转变成多巴胺的活性的抑制程度。
具体方法：将酪氨酸酶加入L-多巴溶液（1mol/L）中，通过分光光度计测定上述反应液加入不同种类不同浓度的皮肤美白剂于475nm处的OD值，来评价各种美白剂对酪氨酸酶的抑制效果。测定前，按表2分别准确吸取A1、A2、B1、B2四组反应液，混匀，置于37℃水浴中恒温10min，再加入0.2mL酪氨酸酶溶液（酶活浓度为500U/mL）混匀，移至3mL比色皿中，测定475nm处的吸光值，记录5min内（包括5min时）的最大吸光值，每组平行试验3次。测试结果见表2。
表2
注：PBS溶液的pH值=6.8。
酪氨酸酶活性抑制率按如下公式进行计算：
式中，LB1为B1组最大吸光值，LB2为B2组最大吸光值，LA1为A1组最大吸光值，LA2为A2组最大吸光值。
计算半数抑制率IC50，具体结果见表3。
表3
由表3可知，对比例2和对比例3没有辛酰羟肟酸或环庚三烯酚酮，对酪氨酸酶活性的抑制效果较差。对比例6中仅采用对羟基苯乙酮，对酪氨酸酶活性基本无抑制作用；对比例7中仅采用1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺，对酪氨酸酶活性的抑制作用较差，但对比例4-5缺少对羟基苯乙酮或1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺，对酪氨酸酶活性的抑制效果显著减低，且将各组合物中的多元醇和羟苯基丙酰胺苯甲酸全部替换成去离子水，对IC50无明显影响，这些说明羟基苯乙酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺能促进辛酰羟肟酸和环庚三烯酚酮对酪氨酸酶活性的抑制作用，即辛酰羟肟酸、环庚三烯酚酮、羟基苯乙酮和1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺间具有协同抑制酪氨酸酶活性的作用。
（3）自由基（DPPH）清除实验方法
1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（简称DPPH）是一种稳定的长寿命自由基，其乙醇溶液呈深紫色，在517nm附近有强吸收。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使DPPH乙醇溶液光吸收减弱。DPPH乙醇溶液褪色程度与其接受的电子数呈线性关系，由此可评价试验样品清除自由基的能力，即抗氧化活性的大小。各组按表4取样混匀，37℃下在黑暗中放置20min，以95%乙醇为空白对照测定514nm的吸光度。
表4
注：DPPH乙醇溶液中DPPH浓度为0.12mg/mL ，具体制备方法如下：称取 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 12mg 于烧杯中，加入 100mL 95%乙醇，搅拌均匀，即得该溶液。
按如下公式计算DPPH自由基清除率：
式中，T为T-样品管的吸光度，T0为T0-样品本底的吸光度，C为C-DPPH管的吸光度，C0为溶剂本底的吸光度。
计算各样品的 IC50 ，样品 IC 50 越小代表活性越强，具体结果见表5。
表5
| 样品 | IC50/ppm |
| 维生素E | 60 |
| 对羟基苯乙酮 | 75 |
| 实施例5 | 10 |
（4）最小抑菌浓度（MIC）测定——琼脂稀释法
最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵育，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度，即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。
配制细菌菌液，先配制0.5号麦氏标准比浊管（0.05mL 1wt%BaCl2+9.95mL 1 wt %H2SO4，细菌近似浓度为1.5×108cfu/mL）。紫外分分光度计于波长530nm处调零后，测定0.5号麦氏标准比浊管的吸光度。取出菌株斜面培养基，用生理盐水冲刷斜面稀释成肉眼可见与0.5号麦氏标准比浊管的浊度相近的菌液，测量吸光度直至与麦氏标准比浊管吸光度一致，此时菌液浓度约为1.5×108cfu/ml。再用生理盐水稀释10倍，得琼脂法测定MIC所需菌液浓度约为1.5×107cfu/mL 。
配制真菌菌液，实验前将菌株接种到培养基斜面上，将已培养好的活性菌种，用灭菌的生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中，充分振荡摇匀；用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作依次的10倍稀释，每次的稀释用血球计数板计数，必须5个中格的真菌总数在190～210，落在此范围内的菌悬液为我们所需的1×108cfu/mL的真菌菌悬液。再用生理盐水稀释10倍，得琼脂法测定MIC所需菌液浓度约为1×107cfu/mL。
采用琼脂稀释法测试MIC，具体如下：
细菌：加2.5mL抑菌药品到50℃ 17.5mL琼脂培养基中，混匀后凝固，将培养基均分为3个区域，每个区域滴加一种细菌，每种细菌分5次滴加在相应区域不同位置，每次滴加菌液1微升，然后37℃下培养18-24h；
真菌：加2.5mL抑菌药品到50℃ 17.5mL琼脂培养基中，混匀后凝固，将培养基均分为2个区域，每个区域滴加一种真菌，每种真菌分5次滴加在相应区域不同位置，每次滴加菌液1微升，然后28℃下培养48h。
抑菌能力主要通过检测抗菌药物对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和黑曲霉菌菌株的最小抑菌浓度。
测试结果见表6。
表6
（5）防腐挑战试验
通过给化妆品样品接种菌株，并在测试期内定期评估其受污染程度，能够模拟化妆品生产和使用过程中受到高强度的微生物污染的潜在可能性，用于评价配方防腐体系的有效性。使用菌株为大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和黑曲霉菌菌株。
将实施例5-8和对比例2-7美白防腐组合物制成精华或膏霜。
其中，精华由以下组分组成：88重量份去离子水、0.1重量份尿囊素、3重量份丁二醇、0.2重量份透明质酸钠、3重量份美容紧肤肽Siped POPT（欣浪生化）、0.5重量份欣敏婷Ad YZ-05-S（欣浪生化）、0.5重量份美白防腐组合物、2重量份丁二醇、0.4重量份氢化蓖麻油（欣浪生化CO-40）和0.1重量份香精。
膏霜由以下组分组成：1重量份SS乳化剂、1.5重量份SSE-20乳化剂、1重量份乳化剂165（EVONIK-DEGUSSA/德国赢创德固赛-高施米特的TEGO CARE 165）、2重量份C16-18醇、2重量份氢化聚葵烯（欣浪生化的DS166）、2重量份聚二甲基硅氧烷（DC-350硅油）、0.3重量份维生素E、64.95重量份去离子水、0.3重量份卡波940、3重量份三甲基甘氨酸、0.15重量份尿囊素、5重量份包合硫辛酸、0.8重量份10wt%浓度氢氧化钠溶液、5重量份棕榈酰五肽-3、5重量份乙酰基六肽-8、3重量份乙酰基四肽-5、0.2重量份透明质酸、1.5重量份烟酰胺、0.6重量份美白防腐组合物、0.2重量份香精和0.5重量份聚丙烯酰胺。
取100g各精华或膏霜样品接种1mL三种细菌/真菌菌悬液（细菌含菌量约为1×108cfu/mL，真菌含菌量约为1×107cfu/mL），样品中细菌菌量为1×106 cfu/mL，真菌菌量为1×105 cfu/mL，并搅拌均匀。
防腐挑战评价标准：
①CTFA评价标准：初始的霉菌和细菌的接种量分别为1×104cfu/g(mL)和1×106cfu/g(mL)，要求在第7天时霉菌降低90%，细菌降低99.9%，并且在28天内菌数持续下降。
②USP评价标准：微生物接种浓度为105 - 106cfu/g (mL)，要求在第14天，细菌总数必须＜原浓度的0.1%（即从初始到14天细菌总数对数减少值≥2），并且细菌总数从14天到28天不再增加；前14天，真菌浓度保持或低于原浓度，且在28天内每次取样的微生物浓度不再增加。
测试结果见表7和表8。
表7
表8
由表7和表8可知，对于细菌，本发明美白防腐组合物在1d内已抑制其生长且未有增长，细菌防腐挑战效果优良；对于真菌，本发明美白防腐组合物在第1天微生物数量降至10cfu/mL以下，且未有增长，真菌防腐挑战效果优良。
（6）鸡胚绒毛尿囊膜试验
参照中华人民共和国出入境检验检疫行业标准发布的《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验标准》（国标SN/T 2329-2009），采用反应时间法。鸡胚绒毛尿囊膜试验（HET-CAM）模拟兔子眼结膜，利用孵化的鸡胚中期绒毛尿囊膜血管系统完整、清晰和透明的特点，将受试物直接与鸡胚尿囊膜接触，5分钟内观察绒毛尿囊膜毒性效应指标（如：出血、血管融解和凝血）的变化，并记录出现这些变化的时间，算出平均值，然后根据计算公式得到一个评分，用于评估受试物的眼刺激性。评分越高，刺激性就越大，具体见表9。
表9
出血：指血液从尿囊膜的血管或毛细血管流出，表现为多种形式，如以菜花状、平滑状、弥散的纱状或点状出血。
血管溶解：指尿囊膜上血管消失，可能是由于出血、血管壁张力变化等多因素变化所致。
凝血：指血管内和血管外蛋白的变性，通常仅见于大和中等大的血管，不包括毛细血管发生的变化。凝血可表现为血管内血流的中断、血管内外出现深色的凝血点、尿囊膜浑浊呈现乳白色薄纱样。
采用反应时间法进行试验，应用式（1）计算刺激评分（IS），结果保留小数点后两位：
式中，sec H（出血时间hemorrhage time）——CAM膜上观察到开始发生出血的平均时间，单位为秒（s）；
sec L（血管融解时间vessel lysis time）——CAM膜上观察到开始发生血管融解的平均时间，单位为秒（s）；
sec C（凝血时间coagulation time）——CAM膜上观察到开始出现凝血的平均时间，单位为秒（s）。
实验结果见表10。
表10
注：表中实施例5 2%所用样品制备方法如下：将2重量份的实施例5组合物用去离子水稀释至100重量份；实施例6 2%所用样品制备方法如下：将2重量份的实施例6组合物用去离子水稀释至100重量份；对照组所用样品制备方法如下：将2重量份的苯乙基间苯二酚用去离子水稀释至100重量份；实施例5 2%+苯乙基间苯二酚2%所用样品制备方法如下：将2重量份的实施例5组合物和2重量份的苯乙基间苯二酚用去离子水稀释至100重量份；实施例6 2%+苯乙基间苯二酚2%所用样品制备方法如下：将2重量份的实施例6组合物和2重量份的苯乙基间苯二酚用去离子水稀释至100重量份。
由表10可知，实施例5和实施例6组合物本身非常温和，且能降低其他物质的刺激性。
（7）眼刺激试验
确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物的眼睛是否有眼刺激作用或腐蚀作用及其程度，具体试验如下：
每组选用3只健康家兔，轻轻拉开这些家兔一侧眼睛的下眼睑，将受试物 0.1 mL（100mg）滴入(或涂入)结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合 1s，以防止受试物丢失。另一侧眼睛不处理作自身对照。滴入受试物后 24h 内不冲洗眼睛。若认为必要，在 24h 时可进行冲洗。若上述试验结果显示受试物有刺激性，需另选用 3 只家兔进行冲洗效果试验，即给家兔眼滴入受试物后 30s，用足量、流速较快但又不会引起动物眼损伤的水流冲洗至少 30s。
临床检查和评分：在滴入受试物后 1 h、24 h、48 h、72h 以及第 4d 和第 7d 对动物眼睛进行检查。如果 72 h 未出现刺激反应，即可终止试验。如果发现累及角膜或有其他眼刺激作用，7d 内不恢复者，为确定该损害的可逆性或不可逆性需延长观察时间，一般不超过 21d，并提供 7d、14d 和 21d 的观察报告。除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其他损害效应均应当记录并报告。在每次检查中均应按表11中眼损害的评分标准记录眼刺激反应的积分。
表11
评价标准：以给受试物后动物角膜、虹膜或结膜各自在 24 h、48 h 和 72h 观察时点的刺激反应积分的均值和恢复时间评价，按表12中眼刺激反应分级判定受试物对眼的刺激强度。
表12
测试结果见表13。
表13 刺激性结果
由表10可知，实施例5-6组合物温和，无刺激，可入眼。
（8）抗炎性测试
对不同浓度的实施例5美白防腐组合物的抗组胺效果进行研究分析，研究方法为：培养小鼠腹膜肥大细胞，传代至96孔板中，添加不同浓度的测试物(1 wt%，2 wt%，3 wt%)和对照组（培养液），培养24小时后用P物质刺激细胞释放组胺，离心法收集上清液，用试剂盒测组胺含量。测试结果见图1。
由图1可知，实施例5美白防腐组合物能有效抑制组胺释放，具有较好的抗炎效果。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种美白组合物，其特征在于，包括辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精，其中，辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮、环庚三烯酚酮、1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和环糊精的质量比为辛酰羟肟酸：对羟基苯乙酮：环庚三烯酚酮：1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺：环糊精 =（3-20）：（6-30）：（0.5-1）：（0.5-2）：（3-10），所述辛酰羟肟酸和所述对羟基苯乙酮包裹在所述环糊精内。
2.如权利要求1所述的美白组合物，其特征在于，所述辛酰羟肟酸、所述对羟基苯乙酮、所述环庚三烯酚酮、所述1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺和所述环糊精的质量比为辛酰羟肟酸：对羟基苯乙酮：环庚三烯酚酮：1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺：环糊精=12：23：1：1：10。
3.一种美白防腐组合物，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：辛酰羟肟酸3-20%，对羟基苯乙酮6-30%，环庚三烯酚酮0.5-1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺0.5-2%，环糊精3-10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.005-0.05%，余量多元醇；所述辛酰羟肟酸和所述对羟基苯乙酮包裹在所述环糊精内。
4.如权利要求3所述的美白防腐组合物，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：辛酰羟肟酸12%，对羟基苯乙酮23%，环庚三烯酚酮1%，1-甲基乙内酰脲-2-酰亚胺1%，环糊精10%，羟苯基丙酰胺苯甲酸 0.025%。
5.如权利要求3所述的美白防腐组合物，其特征在于，所述多元醇包括乙二醇、丙二醇、丙三醇、丁二醇、乙氧基二乙二醇中的至少一种。
6.如权利要求5所述的美白防腐组合物，其特征在于，所述多元醇包括丙二醇、丙三醇、丁二醇和乙氧基二乙二醇，所述丙二醇、所述丙三醇、所述丁二醇和所述乙氧基二乙二醇的质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=（5-30）：（10-50）：（1-15）：1。
7.如权利要求5所述的美白防腐组合物，其特征在于，所述丙二醇、所述丙三醇、所述丁二醇和所述乙氧基二乙二醇的质量比为丙二醇：丙三醇：丁二醇：乙氧基二乙二醇=15：26.5：10：1。
8.如权利要求1或2所述的美白组合物或如权利要求3~7任一项所述的美白防腐组合物在制备化妆品中的应用。
9.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包含如权利要求3~7任一项所述的美白防腐组合物，所述美白防腐组合物在所述化妆品中的质量百分含量为0.5-5%。
10.如权利要求9所述的化妆品，其特征在于，所述美白防腐组合物在所述化妆品中的质量百分含量为0.5-0.8%。
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