CN115737476A - 一种美白组合物及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种美白组合物及其制备和应用。本发明的美白组合物包括以下重量百分比的组分:木质素多酚0.01~0.5%、透明质酸钠0.1~0.5%、白藜芦醇0.05~0.1%、烟酰胺0.05~0.2%、4‑丁基间苯二酚0.001~0.01%、双‑二乙氧基二甘醇环己烷1,4‑二羧酸酯0.5~2%、丁二醇2~5%,余量为去离子水。本发明在多种物质多条通路的共同作用下,可以有效抵御紫外线对皮肤的损伤,降低细胞衰老率,有效降低ROS,对抗由于ROS过量引起的氧化应激反应,从而达到协同美白效果。本发明的美白组合物制备方法简单易行,原料易得,能够大规模进行生产。可以用于多种类型的化妆品,满足不同类型化妆品的美白需求。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域,特别涉及一种美白组合物及其制备和应用。
背景技术
世界范围内,亚洲女性更喜欢白色皮肤,近些年,皮肤美白产品是护肤市场中最大的和持续增长的部分,因此具有很大的经济价值和社会价值。
人体皮肤颜色最主要取决于皮肤内黑色素、胡萝卜素、皮肤血管内血红蛋白、还原血红蛋白的含量以及皮肤厚度,其中黑色素起主要作用。皮肤黑色素是一种普遍存在的生物色素,黑素细胞中黑色素合成转运、代谢等步骤是多种酶参与的复杂生物化学过程。因此,皮肤美白需要从黑色素合成、黑素小体运输、代谢、氧化应激、紫外线刺激等环境刺激多方面入手以达到预期效果。皮肤美白机制主要从以下三个方面进行:抑制黑色素的合成,调节黑色素代谢途径,促进黑色素代谢。
首先是黑色素合成的三个影响因素,分别是酪氨酸酶抑制剂、信号通路和酪氨酸相关蛋白-2。由于酪氨酸酶是通过黑素生成合成黑色素的关键酶,酪氨酸酶成为直接抑制黑素生成抑制剂最关键的靶点,包括使用铜离子络合剂或者通过结合酪氨酸酶铜离子的活性部分来抑制催化活性;使用与酪氨酸酶或者多巴结构相似的物质发挥竞争性抑制作用。此外,许多信号通路都参与了对MITF的调控,可以通过调节上述信号通路影响MITF水平,进一步抑制酪氨酸酶的表达,从而实现皮肤美白。例如,在黑色素的合成过程中,TYR、TYRP1、Pmel17、MART-1和MITF可以识别黑素细胞并特异性表达,MITF还可以调控TYR、TYRP-1、DCT、Pmel17、Rab27和bcl-2的表达,这些基因对黑素细胞的分化、树突状结构、增殖和凋亡以及黑色素的合成都有重要的作用。MAPK/ERK(丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶)信号通路是非常重要的,该信号通路是激酶MEK和ERK配体结合其胞外结构域,激活Ras-Raf-MEK-ERK通路,进一步激活黑素细胞受体,上调MITF的表达,从而促进黑色素的合成。信号通路cAMP/PKA被称为MC1R/α-MSH(环状腺苷单磷酸/蛋白激酶A),当黑素细胞受体及其配体被激活时,细胞内cAMP水平和PKA活性水平增加,改善MITF的表达。信号通路PI3K/Akt(磷脂酰肌醇30-激酶/Akt)在黑素细胞增殖中起着重要作用,协同调节黑素细胞活性。NO信号传导,角质形成细胞中NO的产生是由紫外线辐射引起的,黑素细胞和角质形成细胞同时响应炎症细胞因子而产生NO。通过激活第二信使,NO增加了酪氨酸酶的活性和黑色素的产生。还有一个重要的蛋白质是酪氨酸相关蛋白-2(TRP-2),也被称为dopa色素互变异构酶,主要调控DHICA的产生速率,从而影响黑色素分子的结构、类型和大小,从而控制黑素的生成。
其次是调节黑素代谢途径。黑素细胞信号通路受到多种细胞因子的影响,如碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和内皮素-1(ET-1),这些都会影响黑素细胞增殖的生长和色素沉着,也可能会刺激酪氨酸酶的活性,使黑素细胞高度着色。另一个重要的外源性因素是紫外线和活性氧,二者影响黑色素形成的生理过程。紫外线辐射是影响皮肤美白的一个最重要的环境因素,紫外线(UV)会负面影响黑素细胞的增殖、黑色素的合成,长期的紫外线照射会导致代谢缓慢、黑色素沉积,研究表明,紫外线照射增加了MITF及其下游黑色素合成蛋白的表达,例如PMEL17、Mart-1、Tyr、TRP1和TRP2的表达,最终增强黑色素的合成;紫外线照射也上调了角质形成细胞膜表面的蛋白酶活性受体2(PAR2)的水平,从而增加了黑素小体在角质形成细胞上的吸收和分布。同时,许多细胞因子上调,如IL-1α/1β、ACTH、NGF、α-MSH、PGE2/PGF2α、GM-CSF、TNF-α、BMP-4、NO,影响黑素细胞的增殖、黑素生成和转移。UVA、UVB、可见光、红外光谱、污染物和心理应激等,会损害健康的皮肤。在受损的皮肤中,炎症细胞可以产生或释放活性氧(ROS),如超氧化物、超氧阴离子自由基、羟基自由基、过氧化氢和一氧化氮。这些ROS也是黑素细胞和皮肤老化的刺激因子,在黑素生成过程中,ROS水平升高,GHS水平降低。此外,在黑素生成过程中,ROS可能与人类黑素细胞的胞质和线粒体Ca2+相互作用,说明ROS在皮肤美白过程中起着重要的作用。
最后是促进黑素代谢。促进黑色素代谢有两个方向,一个是抑制黑素小体的黑色素转移,另一个是促进表皮细胞的脱落。
目前,研究和应用最多的是通过抑制酪氨酸酶活性来达到美白皮肤的目的,美白效果有限,此外,市场上较少在防护紫外线的情况下多个途径同时进行。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此,本发明的目的在于提供一种具有全方位整体美白效果和良好生物安全性能的美白组合物。
为了实现上述目的,本发明所采取的技术方案是:
本发明的第一个方面提出了一种美白组合物。
本发明的第二个方面提出了一种第一方面所述美白组合物的制备方法。
本发明的第三个方面提出了一种美白化妆品。
本发明的第四个方面提出了一种美白精华液。
本发明的第五个方面提出了一种第一方面所述美白组合物的应用。
根据本发明的第一个方面,提出了一种美白组合物,包括如下重量百分比的组分:木质素多酚0.01~0.5%、透明质酸钠0.1~0.5%、白藜芦醇0.05~0.1%、烟酰胺0.05~0.2%、4-丁基间苯二酚0.001~0.01%、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯0.5~2%、丁二醇2~5%,余量为去离子水。
在本发明的一些实施方式中,所述美白组合物包括如下重量百分比的组分:木质素多酚0.05~0.2%、透明质酸钠0.1~0.3%、白藜芦醇0.08~0.1%、烟酰胺0.05~0.1%、4-丁基间苯二酚0.001~0.005%、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯1~2%、丁二醇2~4%,余量为去离子水。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述美白组合物包括如下重量百分比的组分:木质素多酚0.05~0.2%、透明质酸钠0.1~0.3%、白藜芦醇0.08~0.1%、烟酰胺0.05~0.1%、4-丁基间苯二酚0.001~0.005%、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯1~2%、丁二醇2~4%,余量为去离子水。
在本发明中,所述美白组合物通过以下四方面实现美白功效:(1)加速角质细胞脱落,有效降低黑色素向表皮转移,增加黑色素代谢速率;(2)通过清除自由基、抑制脂质过氧化等有效调控黑素细胞合成黑素的速率;(3)抑制黑素细胞过量增殖;(4)抑制黑色素合成相关蛋白的表达水平;(5)通过吸收紫外线减少氧化应激等情况发生,增强皮肤屏障功能。利用双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯具有对4-丁基间苯二酚良好的促渗作用,帮助其突破角质层屏障,有效抑制酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),调控黑素合成途径,达到较好的黑素合成抑制效果;该组合物中的透明质酸钠除了保湿锁水外,与植物多酚及其他组分协同增效,增强其抗氧化以及防御紫外线的效果;另外角质形成细胞中一氧化氮的产生间接增加酪氨酸酶的活性和黑素的生成,组合物中木质素多酚有效抑制各个波段的紫外辐射,减少一氧化氮的产生从而抑制黑色素的合成。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述木质素多酚选自对羟基苯甲酸、原儿茶酸、没食子酸、鞣花酸、对香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、丹参素、迷迭香酸中的至少一种。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述透明质酸钠是包括以下分子量的透明质酸钠的混合物:<5000Da、20W Da、120W Da、200W Da。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述分子量为<5000Da、20W Da、120W Da、200WDa的透明质酸钠的质量比为2:1:4:2。
在本发明中,透明质酸钠采用上述配比可在保证功效的基础上具有良好的肤感,更适于化妆品配方中的使用。透明质酸钠是理想的天然保湿因子,本发明选择一定质量比的分子量分别为<5000Da、20WDa、120WDa和200WDa的透明质酸钠制备美白组合物,分子量较小的透明质酸钠极易被皮肤吸收到达皮肤深层,修复皮肤损伤,淡化细纹,大分子量的透明质酸钠在皮肤表面成膜,有较好的锁水保湿的作用,美白组合物中上述因透明质酸钠的加入具有很好的润肤,维护皮肤屏障的作用。
在本发明的一些更优选的实施方式中,所述美白组合物包括如下重量百分比的组分:0.2%木质素多酚、1.5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.005%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水。
根据本发明的第二个方面,提供一种第一方面所述的美白组合物的制备方法,包括如下步骤:
按第一方面所述的配比,
S1:将透明质酸钠与去离子水混合,搅拌加热,使透明质酸钠完全溶解,冷却,得到A相溶液;
S2:将木质素多酚、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、白藜芦醇与丁二醇混合,搅拌加热,溶解,冷却,得到B相溶液;
S3:将A相溶液和B相溶液混合,加入烟酰胺、4-丁基间苯二酚,即得所述美白组合物。
在本发明的一些实施方式中,S1所述加热的温度为70℃~80℃。
在本发明的一些实施方式中,S1所述搅拌的转速为200rpm~300rpm。
在本发明的一些实施方式中,S1所述冷却的温度为40℃以下,优选25℃~35℃。
在本发明的一些实施方式中,S2所述加热的温度为70℃~80℃。
在本发明的一些实施方式中,S2所述搅拌的转速为200rpm~300rpm。
在本发明的一些实施方式中,S2所述冷却的温度为40℃以下,优选25℃~35℃。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述木质素多酚的制备方法包括:
SS1:将木质素、催化剂、反应溶剂加入反应容器中,氧气置换排尽釜内空气后,充入0.5~1.5MPa氧气,在120-180℃下搅拌反应2~12h,冷却至室温,过滤分离所述催化剂,收集反应液,再用所述反应溶剂洗涤滤饼,合并洗出液和反应液,减压蒸馏、真空干燥后得到中间产物A;
SS2:将所述中间产物A、碘代环己烷、N,N-二甲基甲酰胺加入反应容器中,搅拌回流反应12~36h,停止反应,冷却至室温,用正己烷洗涤,洗涤后反应液经减压蒸馏、真空干燥后得到所述木质素多酚。
在本发明的一些优选的实施方式中,SS1中所述的催化剂选自MnOx/C、MoOx/C、CuOx/C中的至少一种。
在本发明的一些优选的实施方式中,SS1中所述的反应溶剂为乙二醇。
根据本发明的第三个方面,提供一种美白化妆品,所述美白化妆品包括第一方面所述的美白组合物。
在本发明的一些实施方式中,所述美白化妆品中所述美白组合物的重量百分比为30%~90%。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述美白化妆品中所述美白组合物的重量百分比为40%~90%。
在本发明的一些更优选的实施方式中,所述美白化妆品中所述美白组合物的重量百分比为50%~65%。
在本发明的一些更优选的实施方式中,所述美白化妆品的类型选自喷雾、精华液、面膜、膏霜、乳液中的一种。
根据本发明的第四个方面,提出了一种美白精华液,包括如下质量百分比的组分:第一方面所述美白组合物30%~90%,甘油1%,丙二醇3%,苯氧乙醇0.5%,对羟基苯乙酮0.5%,甘油葡糖苷0.5%,余量为去离子水。
根据本发明的第五个方面,提出了第一方面所述的美白组合物在制备化妆品中的应用。
本发明的有益效果是:
1.本发明的美白组合物通过多靶点多通路作用,一方面通过烟酰胺加快含有黑色素较多的角质形成细胞脱落,并降低黑色素向表皮转移,另一方面通过木质素多酚、白藜芦醇等抵御紫外线,抑制酪氨酸酶活性,减少NO产生,减少黑色细胞增殖,提升黑素代谢,同时通过白藜芦醇调节MITF,抑制酪氨酸酶的表达,多靶点多途径共同作用,有效提升本发明组合物的美白功效。
2.本发明的美白组合物中透明质酸钠和木质素多酚及其他组分的协同作用可提升木质素多酚的作用,有效抵御紫外线对皮肤的损伤,降低细胞衰老率,有效降低ROS,对抗由于ROS过量引起的氧化应激反应。
3.本分明的美白组合物,其中的木质素多酚,含有化合物对羟基苯甲酸、原儿茶酸、没食子酸、鞣花酸、对香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、丹参素、迷迭香酸中的至少一种,天然提取,应用于化妆品中减少皮肤敏感等问题的发生且环境友好。
4.本发明的美白组合物制备方法简单易行,原料易得,能够大规模进行生产。
5.本发明的美白组合物应用于化妆品中可以起到良好的美白效果,且可以用于多种类型的化妆品,满足不同类型化妆品的美白需求。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。实施例和对比例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明,均可从常规商业途径得到,或者可以通过现有技术方法得到。除非特别说明,试验或测试方法均为本领域的常规方法。
以下各实施例对比例中所述透明质酸钠由分子量分别为<5000Da、20W Da、120WDa和200WDa质量比为2:1:4:2的透明质酸钠混合得到。
实施例1
本实施例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.01%木质素多酚、1%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.005%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程为:
按上述配比,将透明质酸钠加入到去离子水中,搅拌加热至70~80℃,使透明质酸钠完全溶解,冷却至40℃以下,得到A相溶液;
将木质素多酚、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、白藜芦醇加入丁二醇中,搅拌加热至70~80℃,充分溶解后,冷却至40℃以下,得到B相溶液;
将A相和B相溶液混匀,最后加入烟酰胺、4-丁基间苯二酚,混匀,即得到美白组合物。
实施例2
本实施例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.05%木质素多酚、1%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.05%烟酰胺、0.008%4-丁基间苯二酚、0.2%透明质酸钠、0.05%白藜芦醇、2%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
实施例3
本实施例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.2%木质素多酚、1.5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.005%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
实施例4
本实施例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.4%木质素多酚、2%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.2%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.5%透明质酸钠、0.1%白藜芦醇、5%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
实施例5
本实施例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.2%木质素多酚、1.5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.005%4-丁基间苯二酚、0.2%透明质酸钠、0.05%白藜芦醇、4%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
实施例6
本实施例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.2%木质素多酚、1.5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.2%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.05%白藜芦醇、2%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
实施例7
本实施例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.2%木质素多酚、2%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.2%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.4%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
实施例1~7的美白组合物各组分的质量百分比见表1。
表1实施例1~7美白组合物组分质量百分比(单位:%)
实施例8
本实施例制备了一种美白精华液,由以下重量百分比的组分组成:
实施例3制备得到的美白组合物30%,甘油1%,丙二醇3%,苯氧乙醇0.5%,对羟基苯乙酮0.5%,甘油葡糖苷0.5%,余量去离子水(补足至100%)。
具体制备过程为:
按上述配比取甘油、丙二醇、甘油葡糖苷,加入余量水搅拌至完全溶解,得到A相溶液;
按取对羟基苯乙酮和苯氧乙醇,水浴加热至60~70℃,搅拌至完全溶解,待温度降至40℃以下,得到B相溶液,加入A相溶液和美白组合物,搅拌均匀得美白精华液。
实施例9
本实施例制备了一种美白精华液,由以下重量百分比的组分组成:
实施例3制备得到的美白组合物50%,甘油1%,丙二醇3%,苯氧乙醇0.5%,对羟基苯乙酮0.5%,甘油葡糖苷0.5%,余量去离子水(补足至100%)。
具体制备过程参照实施例8进行。
实施例10
本实施例制备了一种美白精华液,由以下重量百分比的组分组成:
实施例3制备得到的美白组合物70%,甘油1%,丙二醇3%,苯氧乙醇0.5%,对羟基苯乙酮0.5%,甘油葡糖苷0.5%,余量去离子水(补足至100%)。
具体制备过程参照实施例8进行。
实施例11
本实施例制备了一种美白精华液,由以下重量百分比的组分组成:
实施例3制备得到的美白组合物90%,甘油1%,丙二醇3%,苯氧乙醇0.5%,对羟基苯乙酮0.5%,甘油葡糖苷0.5%,余量去离子水(补足至100%)。
具体制备过程参照实施例8进行。
对比例1
本对比例制备了一种精华液,与实施例8~11的区别在于,不包含实施例3制备得到的美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
甘油1%,丙二醇3%,苯氧乙醇0.5%,对羟基苯乙酮0.5%,甘油葡糖苷0.5%,余量去离子水(补足至100%)。
具体制备过程为:
按上述配比取甘油、丙二醇、甘油葡糖苷,加入余量水搅拌至完全溶解,得到A相溶液;
取对羟基苯乙酮和苯氧乙醇,水浴加热至60~70℃,搅拌至完全溶解,待温度降至40℃以下,得到B相溶液,加入A相溶液,搅拌均匀得精华液。
对比例2
本对比例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
1.5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
对比例3
本对比例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.005%木质素多酚、1.5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.5%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
对比例4
本对比例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.2%木质素多酚、1.5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
对比例5
本对比例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
2%木质素多酚、1.5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
对比例6
本对比例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.2%木质素多酚、0.1%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
对比例7
本对比例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.2%木质素多酚、0.1%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
对比例8
本对比例制备了一种美白组合物,由以下重量百分比的组分组成:
0.2%木质素多酚、5%双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、0.1%烟酰胺、0.01%4-丁基间苯二酚、0.3%透明质酸钠、0.08%白藜芦醇、3%丁二醇,余量为去离子水(补足100%)。
具体制备过程参照实施例1进行。
对比例2~8的美白组合物各组分的质量百分比见表2。
表2对比例2~8美白组合物组分质量百分比(单位:%)
试验例
1.透皮吸收实验
使用透皮扩散装置通过皮肤模型缓慢渗透,模拟化妆品的透皮吸收过程,参照SCCS/1358/10指导原则进行透皮吸收实验。使用实施例3的比例,只改变促渗剂双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸的量,测定随着促渗剂含量的变化,皮肤表面、皮肤中、透过皮肤的4-丁基间苯二酚的量。4-丁基间苯二酚与促渗剂双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸的透皮吸收实验数据如表3。
表3
由表3可知,本申请的美白组合物中双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸具有明显的促渗作用,双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸的添加可以促进4-丁基间苯二酚在皮肤中的滞留。在添加量为1.5%时有效提高组合物中4-丁基间苯二酚在皮肤中的滞留量,提升组合物的黑素抑制能力。
2.B16细胞黑素合成抑制试验
B16小鼠黑素瘤细胞是常用的研究黑素生成的细胞模型,通过测定实施例1~11和对比例1~8的样品作用于黑素细胞后黑素合成量的变化,评价其美白活性。
(1)MTT法测定细胞毒性
将细胞按1×104个/μL、100μL/孔接种至96孔板,培养箱(37℃、5%CO2)中孵育过夜,细胞培养液为DMEM(1×,含4.5g/L D-(+)-葡萄糖)+10%(V/V)胎牛血清+1%(V/V)混合抗生素(100×)。设置实验调零组、对照组和样品组,样品组中,每个样品设置8个浓度梯度,浓度设置(%,V/V),0.500、0.250、0.125、0.063、0.031、0.016、0.008、0.004,每个浓度梯度下设置2个平行。待96孔板中细胞铺板率达到40%~60%时进行给药。对照组每孔加入200μL上述细胞培养液;样品组每孔加入200μL含有各实施例、对比例相同浓度样品的培养液;调零组无细胞接种,仅加入200μL细胞培养液。给药完成后将96孔板放置培养箱(37℃、5%CO2)中培养,细胞孵育培养24h后,弃掉上清液,加入50μL的MTT溶液(1mg/mL),37℃避光孵育2h,孵育结束后,弃掉上清,每孔加100μL异丙醇,在570nm处读取OD值。
细胞存活率计算:
存活率(%)=(OD-OD0)/(OD1-OD0)*100%
OD代表试验样品液的OD平均值;OD1代表对照组的OD平均值;OD0代表调零组的OD平均值。
(2)黑素合成抑制实验
收集对数生长期细胞,按照细胞密度为1×105个/孔接种至6孔板,在培养箱(37℃、5%CO2)中培养24h后,吸走上清液,根据细胞毒性结果,加入样品2mL/孔,以未处理培养基培养的细胞作为空白对照,每组设置3个平行。给药后在培养箱(37℃、5%CO2)中继续培养72h,弃去上清,加入药物3mL/孔,继续培养72h,直到细胞铺板率达到90%以上,弃去上清液,加入0.5mL黑素提取液,放入80℃水浴锅孵育1h,恢复室温后每孔转移200μL至96孔板,以黑素提取液作为本底对照,于405nm下读取吸光度值并计算细胞黑素合成抑制率,结果见表4。
黑素合成抑制率(%)=(C-T)/(C-C0)*100%。
T代表受试样品孔吸光度;C代表阴性对照组吸光度的3次平均值;C0代表黑素提取液本底吸光度。
3.人皮肤成纤维测定细胞光老化
(1)细胞培养及分组
将人皮肤成纤维细胞复苏后,用含10%(V/V)胎牛血清的DMEM培养基培养,待细胞融合率达80%,吸去培养基,并用PBS冲洗,加入胰酶消化,收集细胞按按照细胞密度为1×105个/mL接种于新鲜培养基中;实验分为空白组、对照组和实验组,空白组仅接种细胞,对照组接种细胞后UVB照射处理,实验组组接种细胞后UVB照射处理并分别加入实施例1~11和对比例1~8的样品;UVB照射组在细胞融合率达40~50%时,吸去培养基用PBS冲洗后,加入PBS覆盖细胞,继续进行UVB照射,照射剂量50mJ/cm2,1次/天,连续照射3天。
(2)细胞衰老检测
取各组对数生长期细胞接种于6孔板,培养24h后,吸去培养基用PBS冲洗后,加入1mLβ半乳糖苷酶染色固定液,室温下固定15min,吸去染色液,用PBS冲洗细胞3次。然后每孔加入染色工作液1mL,37℃下过夜孵育。在倒置显微镜下观察细胞染色情况,蓝绿色细胞为衰老细胞,随机选取5个视野范围,×400倍镜下计数衰老细胞,并计算衰老细胞占总细胞数的百分比,结果见表4。
4.角质形成细胞活性氧抑制实验
(1)细胞培养及实验分组
如前述MTT法测定细胞毒性,确定活性氧抑制实验中受试物浓度,除培养基使用无血清培养基(使用前加入补充试剂──0.1ng/mL重组人表皮生长因子、30~40μg/mL牛垂体浸出液、1~4mmol/L L-谷氨酰胺、30μg/mL庆大霉素、15μg/mL两性霉素)外,其余实验分组及操作步骤同2(1)。
使用体积分数为0.25%胰酶消化细胞,倒置显微镜下观察,至大部分细胞变圆并处于悬浮状态时,加入含血清的培养基终止消化并收集至离心管中,800r/min离心6min。离心结束后,弃掉上清液,向离心管中加入一定体积的细胞培养基,吹打混匀细胞,细胞计数仪计数。按照细胞密度为1×104个/mL接种至24孔板中,放置于CO2培养箱中培养24h。分别设置空白组、阴性对照组和实验组,实验组依据细胞毒性结果加入1mL含受试物的培养基,阴性对照、空白对照和裸细胞孔中加入1mL正常培养基。
(2)装载探针和检测DCFH-DA工作液的配置按照1:1000的稀释比例,采用PBS稀释DCFH-DA至终浓度为10μmol/L。弃去阴性对照组和实验组培养基,用PBS清洗后,每孔加入1mL DCFH-DA工作液,CO2培养箱孵育30min,孵育结束后,PBS清洗各孔内细胞3次。将96孔板置于荧光酶标仪检测台上,设置入射光波长525nm,激发光波长488nm,读数,完成检测,结果见表4。
ROS清除率的计算公式:
抑制率(100%)=(1-(T-C0/C-C0))*100%
T代表受试样品荧光强度的3次平均值;C代表阴性对照荧光强度的3次平均值;C0代表裸细胞组荧光强度的3次平均值。
5.感官评价
采用化妆品成对比较检验,是根据中华人民共和国国家标准GB12310-2012确定的一种检验化妆品感官特性的感官分析方法,对各实施例和对比例的肤感进行了评价。对结果进行评分,5分为非常满意,4分为满意,3分为一般,2分为不满意,1分为非常不满意。
上述2、3、4、5项目中关于实施例1~11、对比例1~8的测试结果如表4所示。
表4
由表1可知,相对于对比例来讲,本发明的美白组合物通过提高有效活性物在皮肤中的滞留量而非通过添加量的提升去达到较好的黑素合成抑制效果,最高可达69.6%,有效保护皮肤免受紫外线损伤,细胞衰老率明显降低,ROS抑制率明显提升,减少由于ROS过量引起的氧化应激反应;本发明的美白组合物各组分之间通过整体的协同作用多靶点多通路提升美白效果,强化皮肤屏障。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种美白组合物,其特征在于,包括以下重量百分比的组分:木质素多酚0.01~0.5%、透明质酸钠0.1~0.5%、白藜芦醇0.05~0.1%、烟酰胺0.05~0.2%、4-丁基间苯二酚0.001~0.01%、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯0.5~2%、丁二醇2~5%,余量为去离子水。
2.根据权利要求1所述的美白组合物,其特征在于,所述木质素多酚选自对羟基苯甲酸、原儿茶酸、没食子酸、鞣花酸、对香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、丹参素、迷迭香酸中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的美白组合物,其特征在于,所述透明质酸钠是包括以下分子量的透明质酸钠的混合物:<5000Da、20W Da、120W Da、200W Da。
4.根据权利要求1所述的美白组合物,其特征在于,所述分子量为<5000Da、20W Da、120W Da、200W Da的透明质酸钠的质量比为2:1:4:2。
5.权利要求1~4任一项所述的美白组合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1:将透明质酸钠与去离子水混合,搅拌加热,使透明质酸钠完全溶解,冷却,得到A相溶液;
S2:将木质素多酚、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、白藜芦醇与丁二醇混合,搅拌加热,溶解,冷却,得到B相溶液;
S3:将A相溶液和B相溶液混合,加入烟酰胺、4-丁基间苯二酚,即得所述美白组合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,S1和S2所述的加热温度均为70℃~80℃。
7.一种美白化妆品,其特征在于,所述美白化妆品包括权利要求1~4任一项所述的美白组合物,所述美白化妆品中所述美白组合物的重量百分比为30%~90%。
8.根据权利要求7所述的美白化妆品,其特征在于,所述化妆品的类型选自喷雾、精华液、面膜、膏霜、乳液中的一种。
9.一种美白精华液,其特征在于,包括如下质量百分比的组分:权利要求1~4任一项所述美白组合物30%~90%,甘油1%,丙二醇3%,苯氧乙醇0.5%,对羟基苯乙酮0.5%,甘油葡糖苷0.5%,余量为去离子水。
10.权利要求1~4任一项所述的美白组合物在制备化妆品中的应用。
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