CN115710274A - Irak4降解剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Irak4降解剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种IRAK4降解剂及其制备方法和应用。具体的，本发明提供了式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐。本发明提供的化合物能够有效的抑制和/或降解细胞中的IRAK4激酶蛋白；能有效的抑制免疫细胞产生IL‑6。本发明所述化合物可用作制备治疗和/或预防由IRAK4介导的相关疾病或病症的药物，如癌症、免疫性疾病和炎性疾病。PTM‑L‑ULM Ⅰ。

Description

IRAK4降解剂及其制备方法和应用
本申请要求申请日为2021年8月23日的中国专利申请202110966608X的优先权、2022年5月19日的中国专利申请2022105581585的优先权和2022年8月17日的中国专利申请2022109894485的优先权。本申请引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
本发明属于药物领域，具体的本发明涉及靶向IRAK4蛋白降解的化合物、药物组合物及其制备方法和其在制备治疗和/或预防由IRAK4介导的相关疾病或病症的药物中的应用，如癌症、免疫性疾病和炎性疾病。
背景技术
白介素-1受体激酶4(IRAK4)是一种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶，具有生物学上重要的激酶活性，在激活免疫系统中起重要作用。研究表明，IRAK4是白细胞介素(IL)-1β家族受体(包括IL-1R、IL-18R、IL-33R、IL-36R)和Toll样受体(TLR)信号传导通路下游的关键因子，IRAK4缺失的小鼠和IRAK4缺失的患者均对TLR(TLR3除外)和IL-1β家族的刺激不起反应。
根据有无MyD88的参与，TLR/IL-1β介导的信号通路可分为MyD88依赖型信号通路和MyD88非依赖性通路，其中IL-1R和TLR2、TLR4、TLR7/8、TLR9所介导的信号转导通路都依赖MyD88作为调节因子激活下游的炎症信号通路。TLR/IL-1β与配体结合后，募集MyD88分子，MyD88通过其N末端死亡结构域进一步募集IRAK4到TLR/IL-1β复合物中，并与IRAK1或IRAK2相互作用且将其激活，从而向下游传递信号至E3泛素连接酶TNF受体相关因子(TRAF6)，活化丝氨酸/苏氨酸激酶TAK1，进而激活NF－κB及MAPK信号通路，引起多种炎症细胞因子和抗凋亡分子的释放。IRAK4依赖性的TLR/IL-1β信号通路已经被证明与多种疾病相关：如多发性硬化、动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌炎伏格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome)、系统性红斑狼疮(SLE)、肥胖、1型糖尿病、类风湿性关节炎、脊椎关节炎(特别是牛皮癣性脊椎关节炎和别克捷列夫氏病(Bekhterev's disease))、红斑狼疮、银屑病、白癜风、巨细胞动脉炎、慢性炎性肠道疾病和病毒性疾病，例如HIV(人免疫缺陷病毒)、肝炎病毒；皮肤病如银屑病、特应性皮炎、金德勒综合征(Kindler'ssyndrome)、大疱性类天疱疮、变应性接触性皮炎、斑秃、反常性痤疮(acneinversa)和寻常痤疮；其他炎症性疾病如过敏症、贝切特氏病、痛风、成人斯蒂尔氏病(adult-onset Still's disease)、心包炎和慢性炎性肠道疾病例如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、移植排斥反应和移植物抗宿主反应；妇科疾病例如子宫内膜异位症(adenomyosis)、痛经、交媾困难和子宫内膜组织异位症(endometriosis)，特别是与子宫内膜异位症相关的疼痛和其他与子宫内膜异位症相关的症状例如痛经、交媾困难、排尿困难和大便困难；眼部疾病如视网膜缺血、角膜炎、过敏性结膜炎、干燥性角结膜炎、黄斑变性和眼色素层炎；纤维化疾病如肝纤维化、心肌炎、原发性胆汁性肝硬化、囊性纤维化；慢性肝脏疾病，例如脂肪肝肝炎，特别是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、酒精性脂肪性肝炎(ASH)；心血管疾病和神经障碍，例如心肌再灌注损伤、心肌梗死、高血压,以及阿尔茨海默氏病、中风、颅脑创伤、肌萎缩性侧索硬化(ALS)和帕金森氏症；瘙痒和疼痛(包括急性、慢性、炎性和神经性疼痛)如痛觉过敏、异常性疼痛、经前痛、与子宫内膜异位症相关的疼痛、手术后疼痛、间质性膀胱炎、CRPS(复杂性局部疼痛综合征)、三叉神经痛、前列腺炎、脊髓损伤引起的疼痛、炎症引发的疼痛、下腰痛、癌痛、化疗相关的疼痛、HIV治疗诱发的神经病、烧伤引起的疼痛和慢性疼痛；肿瘤疾病如某些淋巴瘤：ABC-DLBCL(活化B细胞弥漫性大细胞B细胞淋巴瘤)、套细胞淋巴瘤和沃尔丹斯特伦疾病(disease)，以及慢性淋巴细胞性白血病、黑色素瘤、胰腺肿瘤和肝细胞癌、ras-依赖性肿瘤、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、头颈部癌、肺癌、前列腺癌。
IRAK4介导的信号传导途径的调节主要与其激酶功能有关，但是，也有一些报道表明在某些细胞类型中，IRAK4对下游过程的信号调节与IRAK4的非激酶功能有关。Cushing等人就表示，尽管在IL-1β刺激的人皮肤成纤维细胞中IRAK4磷酸化水平降低，但IRAK4的药理抑制作用并不会导致IL-6和TNF-α的抑制。支持这些结果的是，IRAK4缺乏的成纤维细胞与野生型细胞相比，IRAK4的支架功能对于IL1信号传导很重要，但是它的激酶作用却是多余的。同时，Chiang和他的同事也表示，IRAK4激酶活性在人类B细胞和T细胞、树突状细胞和单核细胞中不是必要的，且siRNA基因切除也显示IRAK4在这些细胞中具有支架功能作用。现已报道了多种针对IRAK4的强效的选择性抑制剂，如CA-4948、BAY-1834845、BMS-986126以及PF-06650833等，这些抑制剂都能选择性的抑制IRAK4的激酶活性，主要用于自身免疫性疾病，炎性疾病和肿瘤性疾病的预防和治疗。然而，一方面由于IRAK4具有支架蛋白和活性激酶的作用，且另一方面传统的小分子抑制剂易产生耐药性，因此，仅抑制IRAK4激酶活性可能不足以产生治疗效果。
蛋白降解靶向嵌合体(Proteolysis Targeting Chimeria，PROTAC)是一种不同于传统小分子抑制剂的技术，传统小分子抑制剂通常需要作用于靶蛋白的活性位点才能抑制其活性，而PROTAC为一种异质双功能分子，其一端为可识别靶蛋白的小分子抑制剂，通过连接链，另一端为可识别E3泛素连接酶的E3泛素连接酶配体，这种双功能分子在体内识别靶蛋白和E3泛素连接酶，将靶蛋白和E3泛素连接酶拉近，形成三元复合物，将靶蛋白泛素化后，在体内通过泛素－蛋白酶体途径将靶蛋白降解。相较于传统小分子抑制剂，一方面PROTAC只需要将靶蛋白与E3泛素连接酶拉近，使底物降解，这种作用模式使得这种技术可以应用于一些不可成药靶点；另一方面，由于靶蛋白在被降解后，PROTAC分子还可释放出来继续参与下一蛋白的降解过程，因此这种具有催化效果的降解作用，使得较少的PROTAC药物剂量就可以实现高效的降解；再一方面，传统的小分子抑制剂易产生耐药性常常是因为发生了点突变，使得小分子抑制剂失去了对靶点的抑制作用，而PROTAC可以直接将靶蛋白降解，在一定程度上能过避免点突变产生的耐药性。因此，相较于传统小分子抑制剂，运用PROTAC技术进行新药小分子研发具有很高的优势和可行性，有望成为下一代极具前途的新型药物。PROTAC技术也已被应用于多种靶点药物的改造，如雄性激素受体、雌性激素蛋白受体、BTK等等。US2019/0151295、US2019/0192688、WO2019/160915和WO2020/113233中公开了几类靶向IRAK4的降解剂，更多的靶向IRAK4的降解剂丞待开发。
发明内容
本发明提供了式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐；
PTM-L-ULM
Ⅰ
其中：
所述PTM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000031
其中所述PTM-1中：
m是0、1、2、3或者4；
n是0、1、2、3或者4；
环A″为6-10元芳基或含有1个、2个或者3个选自N、O或S杂原子的5-11元单环或双环杂芳基；
环A为6-10元芳基或含有1个、2个或者3个选自N、O或S杂原子的5-11元单环或双环杂芳基；
各个R1独立地选自：C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)1-2、C3-C8环烷基、-O(C3-C8环烷基)、-NH(C3-C8环烷基)、3-8元杂环烷基、-O(3-8元杂环烷基)、-NH(3-8元杂环烷基)、6-10元芳基、-O(6-10元芳基)、-NH(6-10元芳基)、5-6元杂芳基、-O(5-6元杂芳基)、-NH(5-6元杂芳基)、CN、卤素、-OH、-NH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)2(C1-C4烷基)、-COOH、-C(O)NH2、-S(O)2H、-S(O)2NH2、-C(O)(C1-C4烷基)、-C(O)NH(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)2、-C(O)O(C1-C4烷基)、-S(O)(C1-C4烷基)、-S(O)2(C1-C4烷基)、-S(O)2NH(C1-C4烷基)、-S(O)2N(C1-C4烷基)2或者-S(O)NH(C1-C4烷基)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被选自卤素、氰基、-OH、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、甲基哌啶、-S(O)2H、-S(O)2(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)1-2和C(O)O(C1-C4烷基)的基团取代；
或者所述R1与其所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
各个R4独立地为氢、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-6元杂芳基、CN、卤素、-OH、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)2(C1-C4烷基)、-COOH、-C(O)NH2、-S(O)2H、-S(O)2NH2、-C(O)(C1-C4烷基)、-C(O)NH(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)2、-C(O)O(C1-C4烷基)、-S(O)(C1-C4烷基)、-S(O)2(C1-C4烷基)、-S(O)2NH(C1-C4烷基)、-S(O)2N(C1-C4烷基)2、-S(O)NH(C1-C4烷基)或者X(R2)(R3)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选被选自卤素、氰基、-OH、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、甲基哌啶、-S(O)2H、-S(O)2(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)1-2、和-C(O)O(C1-C4烷基)的基团取代；
X为O、S、CH2或者N；
R2、R3独立地选自：氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基或者5-6元杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基各自独立地任选地被一个或多个选自卤素、OH、氧代基、N(Rb)2、氧代基吡咯烷基和吗啉基取代，或R2和R3与它们所连接的原子一起形成C3-C8环烷基或者3-8元杂环烷基，所述环烷基和杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；
Ra独立地选自氧代基、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2，所述烷基任选被C3-C6环烷基或CF3取代；且
Rb独立地选自H或C1-C4烷基；
L为连接链，其通过共价键连接PTM和ULM；
所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000041
其中所述ULM-1中的：
X″为C或N；
Y″为C、N、O或者S；
Q1、Q2、Q3、Q4和Q5各自独立地为CR3″或N；
R3″各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-O(C1-C6烷基)、-O-(C3-C8环烷基)、-O-(3-8元杂环烷基)、N(C1-C6烷基)1-2、NH(C3-C8环烷基)、NH(3-8元杂环烷基)、-O-(6-10芳基)或-O-(5-10元杂芳基)；所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基的基团取代；或者R3″与其所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、杂芳基或者芳基；
m″为1、2或3；
R1″各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基或-O(C1-C6烷基)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基和氨基的基团取代；
R2″为氢、氘、C1-C6烷基或者C3-C6环烷基，所述C1-C6烷基和C3-C6环烷基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基和-OC(O)(C1-C6烷基)的基团取代。
优选的，本发明某些实施方式中，R3″各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-O(C1-C6烷基)、-O-(C3-C8环烷基)、-O-(3-8元杂环烷基)、N(C1-C6烷基)1-2、NH(C3-C8环烷基)、NH(3-8元杂环烷基)、-O-(6-10芳基)或-O-(5-10元杂芳基)；所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基的基团取代；或者R3″与其所连接的原子一起形成环烷基或杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，R3″与其所连接的原子一起形成杂芳基不为
Figure BDA0003811544400000051
Figure BDA0003811544400000052
优选的，本发明某些实施方式中，
其中所述PTM-1中：
m是0或者1；
n是0、1或者2；
环A″为6-10元芳基或含有1个、2个或者3个选自N、O或S杂原子的5-11元单环或双环杂芳基；
环A为6-10元芳基或者5-6元杂芳基；
R1独立地选自：C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)1-2、C3-C8环烷基、-O(C3-C8环烷基)、-NH(C3-C8环烷基)、3-8元杂环烷基、-O(3-8元杂环烷基)、-NH(3-8元杂环烷基)、6-10元芳基、-O(6-10元芳基)、-NH(6-10元芳基)、5-6元杂芳基、-O(5-6元杂芳基)、-NH(5-6元杂芳基)、CN、卤素、-OH、-NH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)2(C1-C4烷基)、-COOH、-C(O)NH2、-S(O)2H、-S(O)2NH2、-C(O)(C1-C4烷基)、-C(O)NH(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)2、-C(O)O(C1-C4烷基)、-S(O)(C1-C4烷基)、-S(O)2(C1-C4烷基)、-S(O)2NH(C1-C4烷基)、-S(O)2N(C1-C4烷基)2、-S(O)NH(C1-C4烷基)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被选自卤素、氰基、-OH、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、甲基哌啶、-S(O)2H、-S(O)2(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)1-2、或者-C(O)O(C1-C4烷基)的基团取代；
或者所述R1与其所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基；
R4为氢、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-6元杂芳基、CN、卤素、-OH、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)2(C1-C4烷基)、-COOH、-C(O)NH2、-S(O)2H、-S(O)2NH2、-C(O)(C1-C4烷基)、-C(O)NH(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)2、-C(O)O(C1-C4烷基)、-S(O)(C1-C4烷基)、-S(O)2(C1-C4烷基)、-S(O)2NH(C1-C4烷基)、-S(O)2N(C1-C4烷基)2、-S(O)NH(C1-C4烷基)或-X(R2)(R3)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被选自卤素、氰基、-OH、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、甲基哌啶、-S(O)2H、-S(O)2(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)1-2、或者-C(O)O(C1-C4烷基)的基团取代；或者
X为O、S、CH2或者N；
R2、R3独立地选自：氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10芳基或者5-6元杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基各自独立地任选地被一个或多个选自卤素、OH、氧代基、N(Rb)2、氧代基吡咯烷基或吗啉基取代，或R2和R3与它们所连接的原子一起形成C3-C8环烷基或者3-8元杂环烷基，所述环烷基或者杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；
Ra独立地选自氧代基、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2，所述烷基任选被C3-C6环烷基或CF3取代；且
Rb独立地选自H或C1-C4烷基；
L为连接链，其通过共价键连接PTM和ULM；
所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000061
其中所述ULM-1中的：
X″为C或N；
Y″为C、N、O或者S；
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5各自独立地为CR3″或N；
R3″各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-O(C1-C6烷基)、-O-(C3-C8环烷基)、-O-(3-8元杂环烷基)、N(C1-C6烷基)1-2、NH(C3-C8环烷基)、NH(3-8元杂环烷基)、-O-(6-10芳基)、-O-(5-10元杂芳基)；所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基的基团取代；或者R3″与其所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、杂芳基或者芳基；
m″为1、2或3；
R1″各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-O(C1-C6烷基)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基的基团取代；
R2″为氢、氘、C1-C6烷基或者C3-C6环烷基，所述C1-C6烷基和C3-C6环烷基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基或-OC(O)(C1-C6烷基)的基团取代。
优选的，本发明某些实施方式中，
其中所述PTM-1中：
m是0、1、2、3或者4；
n是0、1、2、3或者4；
环A″为6-10元芳基或含有1个、2个或者3个选自N、O或S杂原子的5-11元单环或双环杂芳基；
环A为6-10元芳基或含有1个、2个或者3个选自N、O或S杂原子的5-11元单环或双环杂芳基；
R1独立地选自：C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)1-2、C3-C8环烷基、-O(C3-C8环烷基)、-NH(C3-C8环烷基)、3-8元杂环烷基、-O(3-8元杂环烷基)、-NH(3-8元杂环烷基)、6-10元芳基、-O(6-10元芳基)、-NH(6-10元芳基)、5-6元杂芳基、-O(5-6元杂芳基)、-NH(5-6元杂芳基)、CN、卤素、-OH、-NH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)2(C1-C4烷基)、-COOH、-C(O)NH2、-S(O)2H、-S(O)2NH2、-C(O)(C1-C4烷基)、-C(O)NH(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)2、-C(O)O(C1-C4烷基)、-S(O)(C1-C4烷基)、-S(O)2(C1-C4烷基)、-S(O)2NH(C1-C4烷基)、-S(O)2N(C1-C4烷基)2、-S(O)NH(C1-C4烷基)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被选自卤素、氰基、-OH、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、甲基哌啶、-S(O)2H、-S(O)2(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)1-2、或者-C(O)O(C1-C4烷基)的基团取代；
或者所述R1与其所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基；
R4为氢、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-6元杂芳基、CN、卤素、-OH、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)2(C1-C4烷基)、-COOH、-C(O)NH2、-S(O)2H、-S(O)2NH2、-C(O)(C1-C4烷基)、-C(O)NH(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)2、-C(O)O(C1-C4烷基)、-S(O)(C1-C4烷基)、-S(O)2(C1-C4烷基)、-S(O)2NH(C1-C4烷基)、-S(O)2N(C1-C4烷基)2、-S(O)NH(C1-C4烷基)或-X(R2)(R3)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被选自卤素、氰基、-OH、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、甲基哌啶、-S(O)2H、-S(O)2(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)1-2、或者-C(O)O(C1-C4烷基)的基团取代；
X为O、S、CH2或者N；
R2、R3独立地选自：氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基或者5-6元杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基各自独立地任选地被一个或多个选自卤素、OH、氧代基、N(Rb)2、氧代基吡咯烷基或吗啉基取代，或R2和R3与它们所连接的原子一起形成C3-C8环烷基或者3-8元杂环烷基，所述环烷基或者杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；
Ra独立地选自氧代基、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2，所述烷基任选被C3-C6环烷基或CF3取代；且
Rb独立地选自H或C1-C4烷基；
L为连接链，其通过共价键连接PTM和ULM；
所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000081
其中所述ULM-1中的：
X″为C或N；
Y″为C、N、O或者S；
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5各自独立地为CR3″或N；
R3″各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-O(C1-C6烷基)、-O-(C3-C8环烷基)、-O-(3-8元杂环烷基)、N(C1-C6烷基)1-2、NH(C3-C8环烷基)、NH(3-8元杂环烷基)、-O-(6-10芳基)、-O-(5-10元杂芳基)；所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基的基团取代；或者R3″与其所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、杂芳基或者芳基；
m″为1、2或3；
R1″各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-O(C1-C6烷基)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基的基团取代；
R2″为氢、氘、C1-C6烷基或者C3-C6环烷基，所述C1-C6烷基和C3-C6环烷基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基或-OC(O)(C1-C6烷基)的基团取代。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-1中，环A″为含有1个、2个、或者3个选自N、O或S杂原子的9-10元双环杂芳基；优选环A″为
Figure BDA0003811544400000091
Figure BDA0003811544400000092
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM为
Figure BDA0003811544400000093
其中所述PTM-2中：
B为CH、N、O或者S；
M为CH、N、O或者S；
D为CH或者N；
E为CH或者N；
F为CH或者N；
G为CH或者N；
J为CH或者N；
当B或M为S或者O时，D是CH，E是N，F为CH，G是N且J是CH；且B和M不能同时为S和/或者O；
所述环A、R1、n、R4、m如PTM-1中所定义的描述。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-2中的
Figure BDA0003811544400000094
Figure BDA0003811544400000095
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM为
Figure BDA0003811544400000101
其中所述PTM-2′，PTM-2″中：
B为CH、N、O或者S；
M为CH、N、O或者S；
D为CH或者N；
E为CH或者N；
F为CH或者N；
G为CH或者N；
J为CH或者N；
当B或M为S或者O时，D是CH，E是N，F为CH，G是N且J是CH；且B和M不能同时为S和/或者O；
所述环A、环A″、R1、n、R4、m如PTM-1中所定义的描述。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-2′中的
Figure BDA0003811544400000102
Figure BDA0003811544400000103
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM为：
Figure BDA0003811544400000111
其中所述环A、环A″、R1、R2、R3、R4、m和n如PTM-1中所定义和描述。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-1、PTM-2、PTM-2′和PTM-3中：
环A是苯基或含有1个、2个或者3个选自N、O杂原子的5-6元杂芳基；优选环A为苯基、吡啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、嘧啶基、三唑基、四唑基、噻吩基、噻唑基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基或异噻唑基；进一步优选环A为吡唑基或噻吩基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-1、PTM-2、PTM-2′和PTM-3中n为1或2；优选n为2。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-1、PTM-2、PTM-2′和PTM-3中R1独立地选自：C1-C4烷基、C3-C6环烷基、3-6元杂环烷基、CN或卤素，所述烷基、环烷基和杂环烷基任选被卤素、OH、CH3或OCH3取代；优选的R1独立地选自：C1-C4烷基、C3-C6环烷基、含有1个或者2个选自N杂原子的3-6元杂环烷基、CN或卤素，所述烷基、环烷基和杂环烷基任选被卤素、OH、CH3或OCH3取代；进一步优选的所述R1为CHF2、CF3、环己基、哌啶基、甲基、氰基或者哌嗪基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-1、PTM-2、和PTM-3中R1独立地选自：C1-C4烷基、C3-C6环烷基、3-6元杂环烷基、CN或卤素，所述烷基、环烷基和杂环烷基任选被卤素、OH、CH3或OCH3取代；优选的R1独立地选自：C1-C4烷基、C3-C6环烷基、含有1个或者2个选自N杂原子的3-6元杂环烷基、CN或卤素，所述烷基、环烷基和杂环烷基任选被卤素、OH、CH3或OCH3取代；进一步优选的所述R1为CHF2、CF3、环己基、哌啶基或者哌嗪基。
本发明某些实施方式中，R1独立地选自：C1-C4烷基、C3-C6环烷基、含有1个或者2个选自N杂原子的3-6元杂环烷基、CN或卤素，所述烷基、环烷基和杂环烷基任选被卤素、OH、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基取代。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-1、PTM-2和PTM-3中R2、R3各自独立地选自：氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基或3-8元杂环烷基，各自任选地被一个或多个卤素、OH、N(Rb)2或吗啉基取代，或R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；Ra独立地选自C1-C4烷基、C3-C6环烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2，所述烷基任选被C1-C4烷基、C3-C6环烷基或CF3取代；且Rb独立地选自H或C1-C4烷基；更优选的，R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元除连接N原子外另外含有1个选自N或者O杂氧原子的杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；所述Ra独立地选自C1-C4烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2；进一步优选的所述R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成
Figure BDA0003811544400000121
更进一步优选的所述R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成
Figure BDA0003811544400000122
优选的，本发明某些实施方式中，R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元除连接N原子外另外含有1个选自N、S或者O杂氧原子的杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；所述Ra独立地选自C1-C4烷基、被1个、2个或3个卤素取代的C1-C4烷基(优选为被1个、2个或3个氟取代的C1-C4烷基，更优选为被1个、2个或3个氟取代的甲基)、OH、卤素或NH2；优选的所述R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成
Figure BDA0003811544400000123
Figure BDA0003811544400000124
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-1、PTM-2′和PTM-3中R2、R3各自独立地选自：氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基或3-8元杂环烷基，各自任选地被一个或多个卤素、OH、N(Rb)2或吗啉基取代，或R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；Ra独立地选自C1-C4烷基、C3-C6环烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2，所述烷基任选被C3-C6环烷基或CF3取代；且Rb独立地选自H或C1-C4烷基；优选的，R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元除连接N原子外另外含有1个选个N或者O杂氧原子的杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；所述Ra独立地选自C1-C4烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2；优选的所述R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成
Figure BDA0003811544400000125
Figure BDA0003811544400000126
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM-1、PTM-2′和PTM-3中R2和R3各自独立地选自：氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基和3-8元杂环烷基，各自任选地被一个或多个卤素、OH、N(Rb)2和吗啉基取代，或R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；Ra独立地选自C1-C4烷基、C3-C6环烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2，所述烷基任选被C1-C4烷基、C3-C6环烷基和CF3取代；且Rb独立地选自H和C1-C4烷基；优选的，R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元除连接N原子外另外含有1个选个N或者O杂氧原子的杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；所述Ra独立地选自C1-C4烷基、CF3、CHF2、OH、卤素和NH2；优选的所述R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成
Figure BDA0003811544400000131
Figure BDA0003811544400000132
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM具有下式结构：
Figure BDA0003811544400000133
其中，
n′是0、1、2或者3；
所述R1、R2、R3、R4、m和n如PTM-1、PTM-2、PTM-2′和PTM-3中所描述和定义。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM具有下式结构：
Figure BDA0003811544400000141
其中所述R1、R2、R3、R4、m和n如PTM-1、PTM-2、PTM-2′和PTM-3中所描述和定义。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM具有下式结构：
Figure BDA0003811544400000142
其中，
n′是0、1、2或者3；
R各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基或-O(C1-C6烷基)，所述烷基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基和氨基的基团取代；
p为0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；
所述R1、R2、R3、R4、m和n如PTM-1、PTM-2′和PTM-3中所描述和定义。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM具有下式结构：
Figure BDA0003811544400000151
其中所述R1、R2和R3如PTM-1、PTM-2′和PTM-3中所描述和定义。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM具有下式结构：
Figure BDA0003811544400000152
其中所述R′和p如PTM-3b′、PTM-3c′、PTM-3d′中所定义和描述。
优选的，本发明某些实施方式中，所述PTM具有下式结构：
Figure BDA0003811544400000153
Figure BDA0003811544400000161
本发明某些实施方式中，所述ULM-1中的Q1、Q2、Q3、Q4、Q5中的1个或者2个为N，其余各自独立地为CR3″。
本发明某些实施方式中，所述ULM-1中的Q1、Q2、Q3、Q4、Q5各自独立地为CR3″。
本发明某些实施方式中，所述ULM-1中的X″为N。
本发明某些实施方式中，所述ULM-1中的X″为C。
本发明某些实施方式中，所述ULM-1中的Y″为N。
本发明某些实施方式中，所述ULM-1中的R1″各自独立地为氢、氘、-F、-Cl、或C1-C6烷基，所述烷基任选被1-3个卤素取代；优选R1″为氢。
本发明某些实施方式中，所述ULM-1中的R2″为氢或C1-C6烷基，所述烷基任选被1-3个卤素取代；优选R2″为氢。
本发明某些实施方式中，所述ULM-1中的R3″各自独立地为氢、氘、卤素、-O(C1-C6烷基)、或C1-C6烷基，所述烷基任选被1-3个卤素取代；优选R3″各自独立地为氢、氘、F、Cl、甲基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、2-羟基丙-2基或三氟甲基。
本发明某些实施方式中，R3″各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基或-O(C1-C6烷基)；所述烷基任选的被1-3个独立地选自羟基和卤素基团取代。
本发明某些实施方式中，所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000171
其中所述Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、R1″、R2″和m″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中，所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000172
其中所述R1″、R2″、R3″和m″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中，所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000173
其中所述R1″、R2″和R3″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中，所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000181
其中所述R3″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中，所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000182
其中所述Q1、Q2、Q3、Q5、R1″、R2″、m″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中，所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000183
其中所述R1″、R2″、R3″、m″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中，所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000184
其中所述R1″、R2″、R3″如上述ULM-1中所定义。
Figure BDA0003811544400000191
其中所述R3″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中，所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000192
R3″为卤素、C1-C6烷基或-O(C1-C6烷基)。
本发明某些实施方式中，所述ULM选自
Figure BDA0003811544400000193
本发明某些实施方式中，所述ULM选自
Figure BDA0003811544400000194
Figure BDA0003811544400000201
Figure BDA0003811544400000202
优选为
Figure BDA0003811544400000203
或
Figure BDA0003811544400000204
本发明某些实施方式中,所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000205
其中所述Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、R1″、R2″、m″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中,所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000206
其中所述R1″、R2″、R3″、m″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中,所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000211
其中所述R1″、R2″、R3″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中,所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000212
其中所述R3″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中,所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000213
其中所述Q1、Q2、Q3、Q5、R1″、R2″、m″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中,所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000214
其中所述R1″、R2″、R3″、m″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中,所述ULM具有下式结构
Figure BDA0003811544400000221
其中所述R1″、R2″、R3″如上述ULM-1中所定义。
Figure BDA0003811544400000222
其中所述R3″如上述ULM-1中所定义。
本发明某些实施方式中，所述ULM选自
Figure BDA0003811544400000223
本发明某些实施方式中，所述ULM选自
Figure BDA0003811544400000224
Figure BDA0003811544400000231
本发明某些实施方式中，L为键。
本发明某些实施方式中，L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个或多个亚甲基任选地被选自-NR3’-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)NR3’-、-NR3’S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR3’-、-NR3’S(O)2-、-NR4’S(O)2NR3’-、-CR1’R2’-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-NR3’C(O)O-、-OC(O)NR3’-、-C(O)NR3’-、-NR3’C(O)-、-NR4’C(O)NR3’-、-P(O)-、-P(O)O-、-OP(O)-、-OP(O)O-、亚乙烯基、亚乙炔基、C3-C12亚环烷基、含有1个或多个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基、6-10元亚芳基或5-10元亚杂芳基的基团替代，所述亚乙烯基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基和亚杂芳基各自独立地任选地被1个或多个选自卤素、-OR3’、-NR3’R4’、氧代、硝基、氰基、C1-C6烷基、-S(C1-C6烷基)、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-C(O)R1’、-C(O)OR3’、-OC(O)R1’、-C(O)NR3’、-NR3’C(O)R1’、-S(O)R1’、-S(O)NR3’、-S(O)2R1’、-S(O)2NR3’、-NR3’S(O)2R1’、-NR4’S(O)2NR3’、-OC(O)NR3’和NR4’C(O)NR3’的取代基取代，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基各自独立地任选地被1个或多个选自卤素、-OH、-NR3’R4’、氧代、硝基、氰基、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基和5-10元杂芳基的取代基取代；R1’和R2’各自独立为卤素、-OH、-NR3’R4’、C1-C6烷基、氯代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-O(C1-C6烷基)、-NH(C1-C6烷基)、-NH(C1-C6烷基)2、C3-C10环烷基、-O(C3-C10环烷基)、-NH(C3-C10环烷基)、3-10元杂环烷基、-O(3-10元杂环烷基)、-NH(3-10元杂环烷基)、6-10元芳基、-O(6-10元芳基)、-NH(6-10元芳基)、5-10元杂芳基、-O(5-10元杂芳基)或-NH(5-10元杂芳基)，R3’和R4’各自独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基或5-10元杂芳基；j为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
本发明某些实施方式中，L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个或多个亚甲基任选地被选自-NR3’-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)NR3’-、-NR3’S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR3’-、-NR3’S(O)2-、-NR4’S(O)2NR3’-、-CR1’R2’-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-NR3’C(O)O-、-OC(O)NR3’-、-C(O)NR3’-、-NR3’C(O)-、-NR4’C(O)NR3’-、-P(O)-、-P(O)O-、-OP(O)-、-OP(O)O-、亚乙烯基、亚乙炔基、C3-C12亚环烷基、含有1个或多个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基、6-10元亚芳基或5-10元亚杂芳基的基团替代，所述亚乙烯基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基和亚杂芳基各自独立地任选地被1个或多个选自卤素、-OR3’、-NR3’R4’、氧代、硝基、氰基、C1-C6烷基、-S(C1-C6烷基)、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-C(O)R1’、-C(O)OR3’、-OC(O)R1’、-C(O)NR3’、-NR3’C(O)R1’、-S(O)R1’、-S(O)NR3’、-S(O)2R1’、-S(O)2NR3’、-NR3’S(O)2R1’、-NR4’S(O)2NR3’、-OC(O)NR3’和NR4’C(O)NR3’的取代基取代，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基各自独立地任选地被1个或多个选自卤素、-OH、-NR3’R4’、氧代、硝基、氰基、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基和5-10元杂芳基的取代基取代；R1’和R2’各自独立为卤素、-OH、-NR3’R4’、C1-C6烷基、氯代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-O(C1-C6烷基)、-NH(C1-C6烷基)、-NH(C1-C6烷基)2、C3-C10环烷基、-O(C3-C10环烷基)、-NH(C3-C10环烷基)、3-10元杂环烷基、-O(3-10元杂环烷基)、-NH(3-10元杂环烷基)、6-10元芳基、-O(6-10元芳基)、-NH(6-10元芳基)、5-10元杂芳基、-O(5-10元杂芳基)或-NH(5-10元杂芳基)，R3’和R4’各自独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基或5-10元杂芳基；j为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
优选的，本发明某些实施方式中，L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个或多个亚甲基任选地被选自-NR3’-、-O-、-CR1’R2’-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NR3’-、-NR3’C(O)-、-S(O)2NR3’-、-NR3’S(O)2-、亚乙烯基、亚乙炔基、苯基、8-10元双环亚芳基、3-7元饱和/或部分不饱和的亚环烷基、4-11元的饱和/或部分不饱和的亚螺环烷基、4-11元的饱和/或部分不饱和的亚稠环烷基、8-10元双环饱和/或部分不饱和的亚环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-7元饱和/或部分不饱和的亚杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-11元饱和/或部分不饱和的亚螺杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-11元饱和/或部分不饱和的亚稠杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的8-10元双环饱和/或部分不饱和的亚杂环烷基、具有1-4个独立地选自氮、氧或硫杂原子的5-6元亚杂芳基、或具有1-5个选自氮、氧或硫杂原子的8-10元双环杂芳基的基团替代，所述亚乙烯基、亚乙炔基、亚环烷基、亚杂环烷基、苯基、亚螺杂环烷基、亚稠杂环烷基、亚螺环烷基、亚稠环烷基和亚杂芳基各自独立地任选地被1个或多个选自卤素、氧代、-NR3’R4’、-OR3’、硝基、-CN、C1-C6烷基、C3-C10环烷基和3-10元杂环烷基的取代基取代，所述烷基、环烷基和杂环烷基任选被1个或多个选自卤素、-OH、-NH2、-CN、C1-C4烷基和C3-C6环烷基的取代基取代，R1’和R2’各自独立为卤素、-OH、-NH2、C1-C4烷基、C1-C4氯代烷基、C1-C4羟基烷基、-O(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、C3-C6环烷基、-O(C3-C6环烷基)、-NH(C3-C6环烷基)、3-6元杂环烷基、-O(3-6元杂环烷基)或-NH(C3-C6环烷基)；R3’和R4’各自独立地为氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基或3-6元杂环烷基，j为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
优选的，本发明某些实施方式中，L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个或多个亚甲基任选地被选自-NR3’-、-O-、-CR1’R2’-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NR3’-、-NR3’C(O)-、-S(O)2NR3’-、-NR3’S(O)2-、亚乙烯基、亚乙炔基、苯基、8-10元双环亚芳基、3-7元饱和/或部分不饱和的单环亚环烷基、4-11元的饱和/或部分不饱和的亚螺环烷基、4-11元的饱和/或部分不饱和的亚稠环烷基、8-10元双环饱和/或部分不饱和的亚环烷基、具有1-2个独立地选自氮或氧杂原子的4-7元饱和/或部分不饱和的亚杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮或氧杂原子的4-11元饱和/或部分不饱和的亚螺杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮或氧杂原子的4-11元饱和/或部分不饱和的亚稠杂环烷基、具有1-2个独立地选氮或氧杂原子的8-10元双环饱和/或部分不饱和的亚杂环烷基、具有1-4个独立地选自氮或氧杂原子的5-6元亚杂芳基、或具有1-5个选自氮或氧杂原子的8-10元双环杂芳基的基团替代，所述亚乙烯基、亚乙炔基、亚环烷基、亚杂环烷基、苯基、亚螺杂环烷基、亚稠杂环烷基、亚稠环烷基、亚螺环烷基和亚杂芳基各自独立地任选地被1个或多个选自卤素、氧代、-NR3’R4’、-OR3’、硝基、-CN、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和3-6元杂环烷基的取代基取代，所述烷基、环烷基、杂环烷基任选被1个或多个选自卤素、-OH、-NH2、-CN、C1-C4烷基和C3-C6环烷基的取代基取代，R1’和R2’各自独立为卤素、-OH、-NH2、C1-C4烷基、C1-C4氯代烷基、C1-C4羟基烷基、-O(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、C3-C6环烷基、-O(C3-C6环烷基)、-NH(C3-C6环烷基)、3-6元杂环烷基、-O(3-6元杂环烷基)或-NH(C3-C6环烷基)；R3’和R4’各自独立地为氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基或3-6元杂环烷基，j为2、3、4、5、6、7、8、9或10。
优选的，本发明某些实施方式中，L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个、2个、3个或者4个亚甲基任选地被选自-NH-、-NCH3-、-NCH2CH3-、-O-、-C(CH3)2-、-CHF-、-CHCF3-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NCH3-、-NHC(O)-、-NCH3C(O)-、亚乙烯基、亚乙炔基、亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚氧杂环丙基、亚氧杂环丁基、亚氧杂环戊基、亚氧杂环己基、亚氮杂环丙基、亚氮杂环丁基、亚氮杂环戊基、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚吗啉基、亚高吗啉基、亚苯基、亚吡咯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚咪唑基、亚吡唑基、亚三唑基、亚四唑基、亚噁唑基、亚异噁唑基、亚噻唑基、亚异噻唑基、亚吡啶基、亚嘧啶基、亚哒嗪基、亚吡嗪基、
Figure BDA0003811544400000251
Figure BDA0003811544400000252
的基团替代，且所述替代基团任选地被1个或多个选自卤素、氧代、-NR3’R4’、-OR3’、C1-C4烷基的取代基取代，所述烷基任选被1个或多个选自卤素、-OH和-NH2的取代基取代，R3’和R4’各自独立地为氢、氘或C1-C4烷基，j为2、3、4、5、6、7或8。
优选的，本发明某些实施方式中，L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个、2个或者3个亚甲基任选地被选自-NH-、-NCH3-、-NCH2CH3-、-O-、-C(CH3)2-、-CHF-、-CHCF3-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NCH3-、-NHC(O)-、-NCH3C(O)-、亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚氧杂环丙基、亚氧杂环丁基、亚氧杂环戊基、亚氧杂环己基、亚氮杂环丙基、亚氮杂环丁基、亚氮杂环戊基、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚吗啉基、亚高吗啉基、
Figure BDA0003811544400000253
Figure BDA0003811544400000261
的基团替代，且所述替代基团任选地被1个或多个选自F、Cl、氧代、-NR3’R4’、-OR3’和C1-C4烷基的取代基取代，所述烷基任选被1个或多个选自卤素、-OH和-NH2的取代基取代，R3’、R4’各自独立地为氢、氘、甲基、乙基和丙基，j为2、3、4、5、6、7、或8。
优选的，本发明某些实施方式中，L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个、2个或者3个亚甲基任选地被选自-O-、-NH-、-NCH3-、-NCH2CH3-、-C(O)-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NCH3C(O)-、-C(O)NCH3-、
Figure BDA0003811544400000262
的基团替代，j为2、3、4、5、6、7或8。
优选的，本发明某些实施方式中，L选自-(CH2)j-1-C(O)-，所述-(CH2)j-1-C(O)-中的亚甲基如上述L中所定义，任选被1个或多个基团所替代，所述j如上述L中所定义。
优选的，本发明某些实施方式中，L选自
Figure BDA0003811544400000263
Figure BDA0003811544400000271
Figure BDA0003811544400000281
Figure BDA0003811544400000291
Figure BDA0003811544400000301
Figure BDA0003811544400000311
Figure BDA0003811544400000321
Figure BDA0003811544400000331
Figure BDA0003811544400000341
Figure BDA0003811544400000351
Figure BDA0003811544400000361
Figure BDA0003811544400000371
Figure BDA0003811544400000381
Figure BDA0003811544400000391
Figure BDA0003811544400000401
Figure BDA0003811544400000411
Figure BDA0003811544400000421
Figure BDA0003811544400000431
Figure BDA0003811544400000441
Figure BDA0003811544400000451
Figure BDA0003811544400000461
Figure BDA0003811544400000471
Figure BDA0003811544400000481
Figure BDA0003811544400000491
Figure BDA0003811544400000501
Figure BDA0003811544400000511
Figure BDA0003811544400000521
Figure BDA0003811544400000531
Figure BDA0003811544400000541
优选的，本发明某些实施方式中，所述L为LA，
Figure BDA0003811544400000542
其中所述LA中：
环D不存在或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自氘、卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环B不存在或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自氘、卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环C为不存在、C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自氘、卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
X″″为键、-NH-、-NCH3-、-O-、-C(CH3)2-、-S-、-C＝C-、-C≡C-、-CHF-、-CHCF3-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NCH3-、-NHC(O)-或-NCH3C(O)-；
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或两个亚甲基任选地被选自氘、-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)-、-N(C1-C6羟基烷基)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
优选的，本发明某些实施方式中，所述L为LA，
Figure BDA0003811544400000543
其中所述LA中：
环D不存在或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环B不存在或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环C为不存在、C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
X″″为键、-NH-、-NCH3-、-O-、-C(CH3)2-、-S-、-C＝C-、-C≡C-、-CHF-、-CHCF3-、-C(O)-、-
S(O)-、-S(O)2-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NCH3-、-NHC(O)-或-NCH3C(O)-；
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或两个亚甲基任选地被选自-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)-、-N(C1-C6羟基烷基)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
优选的，本发明某些实施方式中，所述L为LA，
Figure BDA0003811544400000551
其中所述LA中：
环D不存在、6-10元芳基、5-10元杂芳基或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环B不存在或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环C为不存在、C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
X″″为键、-NH-、-NCH3-、-O-、-C(CH3)2-、-S-、-C＝C-、-C≡C-、-CHF-、-CHCF3-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NCH3-、-NHC(O)-、-(CH2)t-或-NCH3C(O)-；所述-(CH2)t-中的一个或多个亚甲基任选地被选自-O-、-NH-、-C≡C-、-N(C1-C6烷基)-、-C(O)-替代，t为0、1、2、3、4、5、6或7。
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或两个亚甲基任选地被选自-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)-、-N(C1-C6羟基烷基)-、-C≡C-、-C(O)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。优选的，本发明某些实施方式中，当环A″为含有1个、2个或者3个选自N、O或S杂原子的5-11元双环杂芳基，环D为6-10元芳基、5-10元杂芳基、C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基和-O-(C1-C6烷基)的取代基取代。
优选的，本发明某些实施方式中，当环A″为
Figure BDA0003811544400000561
时，所述环D为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基独立地被1个、2个或3个羟基或被1个、2个或3个-O-(C1-C6烷基)取代。
本发明某些实施方式中，所述L为LA，
Figure BDA0003811544400000562
其中所述LA为方案1、方案2、方案3或方案4
方案1、
环D为C3-C12亚环烷基或含有1-2个N杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、-O-(C1-C6烷基)或羟基；
环B为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环C为不存在；
X″″为-C(O)-；
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或两个亚甲基任选被选自-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)-、-C(O)-、-N(C1-C6羟基烷基)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
方案2、
环D为C3-C12亚环烷基或含有1-2个N杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、甲氧基或羟基；
环B为含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基；
环C为不存在；
X″″为-C(O)-；
L3为-(CH2)k-，k为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
方案3、
环D为C3-C12亚环烷基或含有1-2个N杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、羟基或甲氧基；
环B为含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基；
环C为不存在；
X″″为-C(O)-；
L3为-(CH2)k-，k为1、2、3或4。
方案4、
环D为亚环己基或含有1-2个N杂原子的6元亚杂环烷基，所述亚环己基和6元亚杂环烷基任选被选自卤素、羟基或甲氧基；
环B为
Figure BDA0003811544400000571
(例如
Figure BDA0003811544400000572
Figure BDA0003811544400000573
)；
环C为不存在；
X″″为-C(O)-；
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或两个亚甲基被选自-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)-、-C(O)-、-N(C1-C6羟基烷基)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为1、2、3或4。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环D不存在。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环D为含有1个或者2个氮杂原子的4-7元饱和的单环亚杂环烷基、含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环D为6-10元芳基、含有1个或者2个氮杂原子的4-7元饱和的单环亚杂环烷基、含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环D为含有1个或者2个氮杂原子的4-7元饱和的单环亚杂环烷基、含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环D为含有1个或者1个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环D为含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环D为
Figure BDA0003811544400000581
Figure BDA0003811544400000582
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环B不存在。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环B为含有1个或者2个氮杂原子的4-7元饱和的单环亚杂环烷基、含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环B为含有1个或者2个氮杂原子的4-7元饱和的单环亚杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环B为亚哌啶基、亚哌嗪基、
Figure BDA0003811544400000583
Figure BDA0003811544400000584
优选的，本发明某些实施方式中，环C为4-11元的饱和或部分不饱和的亚螺环烷基、4-11元的饱和或部分不饱和的亚稠环烷基、8-10元双环饱和或部分不饱和的亚环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-7元饱和或部分不饱和的亚杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-11元饱和或部分不饱和的亚螺杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-11元饱和/或部分不饱和的亚稠杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的8-10元双环饱和/或部分不饱和的亚杂环烷基，所述环烷基和杂环烷基任选被选自氘、卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基和-O-(C1-C6烷基)的取代基取代。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环C为3-7元饱和或部分不饱和的亚环烷基、4-11元的饱和或部分不饱和的亚螺环烷基、4-11元的饱和或部分不饱和的亚稠环烷基、8-10元双环饱和或部分不饱和的亚环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-7元饱和或部分不饱和的亚杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-11元饱和或部分不饱和的亚螺杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-11元饱和/或部分不饱和的亚稠杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的8-10元双环饱和/或部分不饱和的亚杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环C为含有1个或者2个氮杂原子的4-7元饱和的单环亚杂环烷基、含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环C为含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环C为
Figure BDA0003811544400000591
Figure BDA0003811544400000592
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，环C为
Figure BDA0003811544400000593
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，X″″为键、-CH2-或-C(O)-。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，X″″为键或-C(O)-。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，X″″为-C(O)-。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，L3为-(CH2)k-，所述L3中一个亚甲基任选地被选自-O-、-NH-、-NCH3-或-NCH2CH3-的基团替代；k为1、2、3或者4。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中，L3为-(CH2)k-，所述L3中一个或两个亚甲基任选地被选自氘-C(O)-、-O-、-NH-、-NCH3-或-NCH2CH3-的基团替代；k为1、2、3或者4。
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中环D和环B不存在，环C为含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基；X″″为-C(O)-；L3为-(CH2)k-；k为1、2、3、4或者5。
优选的，本发明某些实施方式中，式L选自
Figure BDA0003811544400000601
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中环D和环B不存在，环C为含有1个或者2个氮杂原子的4-7元的杂环烷基；X″″为-C(O)-、键或-CH2-；L3为-(CH2)k-；k为1、2、3、4或者5。
优选的，本发明某些实施方式中，式L选自
Figure BDA0003811544400000602
Figure BDA0003811544400000611
优选的，本发明某些实施方式中，所述LA中环D为C4-C7元环烷基或4-7元杂环烷基；环B、环C为不存在或为含有1个或者2个氮杂原子的5-11元的亚杂环烷基；X″″为-C(O)-或-(CH2)t-，t为0、1、2、3、4或5；L3为-(CH2)k-，k为1、2、3、4或者5。
优选的，本发明某些实施方式中，式L选自
Figure BDA0003811544400000612
Figure BDA0003811544400000621
Figure BDA0003811544400000631
Figure BDA0003811544400000641
Figure BDA0003811544400000642
优选
Figure BDA0003811544400000643
Figure BDA0003811544400000651
本发明某些实施方式中，所述药学上可接受的盐可为甲酸盐。
优选的，本发明某些实施方式中，式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐为：
Figure BDA0003811544400000652
Figure BDA0003811544400000661
Figure BDA0003811544400000671
Figure BDA0003811544400000681
Figure BDA0003811544400000691
Figure BDA0003811544400000701
Figure BDA0003811544400000711
Figure BDA0003811544400000721
Figure BDA0003811544400000731
Figure BDA0003811544400000741
Figure BDA0003811544400000751
Figure BDA0003811544400000761
Figure BDA0003811544400000771
Figure BDA0003811544400000781
Figure BDA0003811544400000791
Figure BDA0003811544400000801
Figure BDA0003811544400000811
优选的，本发明某些实施方式中，式Ⅰ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐为
Figure BDA0003811544400000821
本发明还公开了一种式Ⅶ或Ⅷ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物或其盐：
Figure BDA0003811544400000822
Z为
Figure BDA0003811544400000823
Figure BDA0003811544400000824
Figure BDA0003811544400000831
Z’为
Figure BDA0003811544400000832
Figure BDA0003811544400000833
其中，m、n、A、A’、R1、R2、R3和R4如前所述。
本发明某些实施方式中，所述式Ⅶ化合物为式Ⅶ-1所示化合物
Figure BDA0003811544400000834
本发明某些实施方式中，
所述式Ⅶ化合物为如下任一化合物：
Figure BDA0003811544400000841
Figure BDA0003811544400000842
Figure BDA0003811544400000851
Figure BDA0003811544400000861
Figure BDA0003811544400000871
和/或，所述式Ⅷ化合物为如下任一化合物：
Figure BDA0003811544400000872
Figure BDA0003811544400000873
或
Figure BDA0003811544400000874
优选的，本发明某些实施方式中，式Ⅰ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐为式Ⅱ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003811544400000881
其中所述R1、n、R4、B、D、E、F、G、J和环A如PTM-2’中所定义和描述；所述Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、X″、Y″、m″、R1″、R2″如本文ULM-1中所定义和描述；所述L3、环D、环B、环C和X″″如本文LA中所定义和描述。
优选的，本发明某些实施方式中，式Ⅰ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐为式Ⅲ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003811544400000882
其中所述R1、n、R2、R3、环A如PTM-3中所定义和描述；所述Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、X″、Y″、m″、R1″、R2″如本文ULM-1中所定义和描述；所述L3、环D、环B、环C和X″″如本文LA中所定义和描述。
优选的，本发明某些实施方式中，式Ⅰ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐为式Ⅳ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003811544400000891
其中所述R1、n、R2、R3、环A如PTM-3中所定义和描述；所述X″、m″、R3″如本文ULM-1中所定义和描述；所述L3如本文LA中所定义和描述；o、p、q、r各自独立地为1或者2；w1、w2各自独立地为CH或者N，且至少有一个为N。
优选的，本发明某些实施方式中，式Ⅰ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐为式Ⅴ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003811544400000892
其中所述R1、n、R4、B、D、E、F、G、J和环A″如PTM-2′中所定义和描述；所述Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、X″、Y″、m″、R1″、R2″如本文ULM-1中所定义和描述；所述L3、环D、环B、环C和X″″如本文LA中所定义和描述。
优选的，本发明某些实施方式中，式Ⅰ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐为式Ⅵ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003811544400000901
其中所述R1、n、R2、R3、环A″如PTM-3中所定义和描述；所述Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、X″、Y″、m″、R1″、R2″如本文ULM-1中所定义和描述；所述L3、环D、环B、环C和X″″如本文LA中所定义和描述。
本发明提供了式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐的制备方法。
本发明提供了药物组合物，包括治疗有效量的式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明提供了药物组合物，包括治疗有效量的式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
本发明提供了一种降解IRAK4蛋白的方法，包括使式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物与IRAK4蛋白接触。
本发明提供了一种物质A在制备IRAK4蛋白降解剂中的应用，所述物质A包括如前所述式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其前述药物组合物。
本发明所述式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物用作治疗或预防IRAK4介导的疾病或病症的药物使用。
本发明所述式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物用作治疗或预防TLR(除TLR3R以外)或IL-1β受体家族(包括IL-1R、IL-18R、IL-33R、IL-36R)介导的疾病或病症的药物使用。
本发明所述式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物用作治疗或预防IRAK4介导的疾病或病症的药物使用，所述IRAK4介导的疾病或病症为MyD88所驱动的疾病或病症。
本发明提供了式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备治疗或预防IRAK4介导的疾病或病症的药物中的应用。
本发明中，所述IRAK4介导的疾病或病症为MyD88所驱动的疾病或病症。
本发明提供了式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备治疗或预防TLR(除TLR3R以外)或IL-1β受体家族(包括IL-1R、IL-18R、IL-33R、IL-36R)介导的疾病或病症的药物中的应用。
本发明提供了式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备治疗或预防IRAK4调控的疾病或病症的药物中的应用，所述IRAK4介导的疾病或病症为MyD88所驱动的疾病或病症。
本发明提供了式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备治疗或预防癌症、神经退化性病症、病毒性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病、遗传性病症、激素相关疾病、代谢病症、与器官移植相关疾病、免疫缺陷病症、破坏性骨病、增生性病症、感染性疾病、与细胞死亡相关的病况、凝血酶诱发的血小板凝集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病况、心血管病症或CNS病症疾病的药物中的应用。
本发明提供了式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备治疗或预防癌症或增生性疾病中药物的应用，所述癌症或增生性疾病为脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、阴道癌、宫颈癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、皮肤癌、骨癌、甲状腺癌、肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、颈部或头部肿瘤、表皮过度增生、牛皮藓、前列腺增生、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏和非霍奇金氏、乳腺癌、滤泡癌、未分化性瘤、乳头装瘤、精原细胞瘤、黑素瘤、ABC DLBCL、霍奇金氏淋巴瘤、原发性皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、冒烟型惰性多发性骨髓瘤、白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤DLBCL、慢性淋巴细胞性白血病CLL、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt’s Lymphoma)/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstroms′s macroglobulinemia WM)脾边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、或浆细胞瘤或血管内大B细胞淋巴瘤。
本发明提供了式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备治疗或预防神经退化性疾病的药物中的应用，所述神经退化性疾病为阿尔茨海默症、帕金森氏病、肌肉萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病(Huntington′sdisease)、大脑缺血或有创伤性损伤、谷氨酸神经毒性、低氧症、癫痫症、糖尿病治疗、代谢综合症、肥胖、器官移植或移植物抗宿主疾病造成的神经退化性疾病。
本发明提供了式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式Ⅴ、式Ⅵ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备治疗或预防炎性疾病药物中的应用，所述炎性疾病为眼病，如眼过敏、结膜炎、干眼症或春季结膜炎、影响鼻部的疾病，包括过敏性鼻炎；自身免疫性血液病症，如溶血性贫血、再生不全性贫血、纯红细胞贫血和特发性血小板减少、全身性红斑性狼疮症、类风湿性关节炎、多软骨炎、硬皮病、皮肌炎、慢性活性肝炎、重症肌无力、史蒂芬－约翰逊综合症、特发性口炎性腹泻、字体免疫性发炎性肠病、肠易综合症、乳糜泻、齿根骨膜炎、肺透明膜病、肾病、肾小球疾病、酒精性肝病、多发性硬化症、内分泌性眼病、格雷弗氏病(Grave′s disease)、肉瘤病、干眼症、春季结膜角膜炎、间质性肺纤维化、牛皮藓性关节炎、全身性幼年型特发性关节炎、肾炎、血管炎、间质性膀胱炎、憩室炎、肾小球肾炎、慢性肉芽肿性疾病、子宫内膜异位、钩端螺旋体病肾病、青光眼、视网膜疾病、老化、头痛、疼痛、复杂区域疼痛综合症、心肥大、肌肉萎缩、分解代谢症、肥胖、胎儿生长缓慢、高胆固醇血症、心脏病、慢性心脏衰竭、间皮瘤、无汗性外胚层发育不良、白塞氏病、色素失禁症、佩吉特氏病(Paget′sdisease)、胰脏炎、遗传性周期性发热综合症、哮喘、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合症、嗜伊红血球增多、过敏反应、全身性过敏反应、鼻窦炎、眼过敏、二氧化硅诱发的疾病、COPD、肺病、囊肿性纤维化、肝纤维化、肾纤维化、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、心脏纤维化、银屑病、克罗恩病、炎症性肠病、酸诱发的肺损伤、肺动脉高压、多发性神经病、白内障、与全身性硬化症结合的肌肉炎症、包涵体肌炎、重症肌无力、甲状腺炎、阿狄森氏病(Addison′s disease)、扁平苔藓、1型糖尿病、2型糖尿病、阑尾炎、异位性皮炎、哮喘、过敏、细支气管炎、支气管炎、滑囊炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、慢性移植排斥反应、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、泪腺炎、皮炎、皮肌炎、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上踝炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、胃肠炎、亨诺－许兰紫斑病(Henoch-Schonleinpurpura)、肝炎、化脓性汗腺炎、免疫球蛋白A肾病、间质性肺病、喉炎、乳腺炎、脑膜炎、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、卵巢炎、睾丸炎、骨炎、耳炎、胰脏炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、局部肺炎、肺炎、多发性肌炎、直肠炎、前列腺炎、肾盂肾炎、鼻炎、输卵管炎、窦炎、口腔炎、关节膜炎、肌腱炎、扁桃腺炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、阴道炎、血管炎、外阴炎、斑秃、多形性红斑、疱疹样皮炎、硬化病、白斑病、超敏性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、副肿瘤性天疱疮、获得性大疱性表皮松懈、急性和慢性痛风、慢性痛风性关节炎、牛皮藓、牛皮藓性关节炎、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、隐热蛋白相关周其综合症或骨关节炎。
本发明提供一种治疗或预防由IRAK4介导的疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ或式Ⅳ化合物、和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物。
本发明提供一种治疗或预防由IRAK4介导的疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ或式Ⅳ化合物、和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物，所述IRAK4介导的疾病或病症为MyD88所驱动的疾病或病症。
本发明提供一种治疗或预防由TLR(除TLR3R以外)或IL-1受体家族(包括IL-1R、IL-18R、IL-33R、IL-36R)介导的疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ或式Ⅳ化合物、和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物。
本发明提供了式Ⅰ化合物、和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐的制备方法，
Figure BDA0003811544400000931
其中所述
Figure BDA0003811544400000932
为连接链L的部分；所述NH可为伯胺或仲胺；所述NH基团通过与
Figure BDA0003811544400000933
中的酯基在碱性条件下发生取代反应而制备式Ⅰ化合物，所述R100'为五氟苯基或者对硝基苯基；所述PTM为
Figure BDA0003811544400000934
其中所述环A、环A″、n、R1、R4、m如PTM-1中所定义和描述；所述ULM为
Figure BDA0003811544400000935
所述Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、X″、Y″、m″、R1″、R2″如本文ULM-1中所定义；所述取代反应中的碱包括但不限于三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠。
本发明提供了式Ⅱ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐的制备方法，
本发明提供了式Ⅳ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐的制备方法，
Figure BDA0003811544400000941
其中所述环A、n、R1、R2、R3如PTM-3中所定义和描述；L3如LA中所定义和描述；W2为NH；W1为CH、或者N；o、p、q、r各自独立地为1或者2；X″为CH或者N；R3″、m″如ULM-1中多定义和描述；所述R100'为五氟苯基或者对硝基苯基；所述式Ⅳa与式Ⅳb发生取代反应得到式Ⅳ化合物；所述取代反应中的碱包括但不限于三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠。
详细说明：除非有相反陈述、下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“烷基”是指饱和的脂肪族烃基团，包括直链或支链烷基；C1-C8烷基是指含有1-8个碳原子的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1、1-二甲基丙基、1、2-二甲基丙基、2、2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1、1、2-三甲基丙基、1、1-二甲基丁基、1、2-二甲基丁基、2、2-二甲基丁基、1、3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2、3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2、3-二甲基戊基、2、4-二甲基戊基、2、2-二甲基戊基、3、3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2、3-二甲基己基、2、4-二甲基己基、2、5-二甲基己基、2、2-二甲基己基、3、3-二甲基己基、4、4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各种支链异构体；优选C1-C6烷基；进一步优选C1-C4烷基。所述烷基可以是取代的或未取代的。
“环烷基”指饱和或部分不饱和的单环或多环环状烃取代基；“C3-C12环烷基”指包括3至12个碳原子的环烷基；“C3-C8元环烷基”指包括3至8个碳原子的环烷基；“C5-C10元环烷基”指包括5至10个碳原子的环烷基；
单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环丁基、环戊基、环己基；优选C3-C8元环烷基；进一步优选C3-C6环烷基。
多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，他们可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，优选双螺环烷基。螺环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000951
“稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选双环稠环烷基。稠环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000952
“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，他们可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基。桥环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000953
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。所述环烷基可以是任选取代的或未取代的。
“杂环烷基”指饱和的或部分不饱和的单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1或2)，但不包含-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。“3-12元杂环烷基”指包含3至12个环原子的环基，“5-10元杂环烷基”指包含5至10个环原子的环基，“3-8元杂环烷基”指包含3至8个环原子的环基，优选含有1-3个选自N、O或S杂原子的“3-12元杂环烷基”，进一步优选含有1个或2个N原子的3-12元杂环烷基。
单环杂环烷基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等，优选哌啶基和哌嗪基。
多环杂环烷基包括螺环、稠环和桥环的杂环烷基。“螺杂环烷基”指单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环烷基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)，其余环原子为碳。他们可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环烷基、双螺杂环烷基或多螺杂环烷基，优选含有1-3个选自N、O或S杂原子的饱和的“3-12元双螺杂环烷基”；进一步优选含有1个或2个N原子的饱和的“3-12元双螺杂环烷基”。螺杂环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000961
“稠杂环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环烷基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环烷基，优选含有1-3个选自N、O或S杂原子的“3-12元双环稠杂环烷基”；进一步优选含有1个或2个N原子的饱和的“3-12元双环稠杂环烷基”。稠杂环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000962
“桥杂环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环烷基团，他们可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥杂环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000963
所述杂环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环烷基，非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000971
所述杂环烷基可以是任选取代的或未取代的。
“芳基”指全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)且具有共轭的π电子体系的多环基团，“6-10元芳基”指含有6-10个碳的全碳芳基，例如苯基和萘基；优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000972
Figure BDA0003811544400000973
所述芳基可以是任选取代的或未取代的。
“杂芳基”指包含1至4个杂原子的杂芳族体系，所述杂原子包括氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)，5-6元杂芳基指含有5-6个环原子的杂芳族体系，5-10元杂芳基指含有5-10个环原子的杂芳族体系，优选5-6元杂芳基；进一步优选含有1个或2个N原子的5-6元杂芳基；非限制实施例包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑、咪唑基、三唑基、四唑基等；优选吡啶基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含：
Figure BDA0003811544400000974
所述杂芳基可以是任选取代的或未取代的。
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述所定义的烷基，“C2-8烯基”指含有2-8个碳的直链或支链烯基，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3丁烯基等，优选“C2-6烯基”，进一步优选“C2-4烯基”。所述烯基可以是取代的或未取代的。
“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，“C2-8炔基”指含有2-8个碳的直链或支链炔基，包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基，优选“C2-6炔基”，进一步优选“C2-4炔基”。所述炔基可以是取代的或未取代的。
“亚基”指二价基团，如亚烷基指二价烷基，亚烯基指二价烯基，亚炔基指二价炔基，亚环烷基指二价环烷基，亚杂环烷基指二价杂环烷基，亚芳基指二价芳基，亚杂芳基指二价杂芳基，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基如上所定义，所述亚基可以是任选取代的或未取代的。
“烷氧基”指-O-(烷基)，其中所述烷基如上所定义。“C1-C8烷氧基”指含1-8个碳的烷基氧基，非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。所述烷氧基可以是任选取代的或未取代的。
“环烷氧基”指-O-(未取代的环烷基)，其中所述环烷基如上所定义。C3-C8环烷氧基指含3-8个碳的环烷基氧基，非限制性实施例包括环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。所述环烷氧基可以是任选取代的或未取代的。
“卤代烷基”指被一个或多个氟、氯、溴或碘原子取代的烷基，其中所述烷基如上所定义，非限制性实施例包括二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“卤代烷氧基”指烷基上的氢被一个或多个氟、氯、溴或碘原子取代的基团，其中所述烷氧基如上所定义。例如二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、三溴甲氧基等。
“羟基烷基”指任选被一个或多个-OH取代的烷基，其中所述烷基如上所定义，非限制性实施例包括羟甲基、羟乙基、羟基丙基、羟基异丙基。
“氨基烷基”指任选被一个或多个-NH2取代的烷基，其中所述烷基如上所定义，非限制性实施例包括氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、氨基异丙基。
“氨”和“胺”是本领域公认的，并且指取代或未取代的氨。
“氧代”指＝O基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氰基”指-CN。
“羟基”指-OH。
“Raney-Ni”指雷尼镍(氢活性催化还原剂)。
“HATU”指2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。
“DIEA”指二异丙基乙胺。
“MeOH”指甲醇。
“NaBH3CN”指氰基硼氢化钠。
“LiAlH4”指铝锂氢。
“THF”指四氢呋喃。
“DMF”指二甲基甲酰胺。
“Py-BOP”指六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷。
“HATU”指2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。
“TFA”指三乙胺。
“EA”指乙酸乙酯。
“CbzCl”指氯甲酸苄酯。
“Cs2CO3”指碳酸铯。
“NaHCO3”指碳酸氢钠。
“IBX”指2-碘酰基苯甲酸。
“STAB”指三乙酰氧基硼氢化钠。
“DMSO”指二甲基亚砜。
“K2CO3”指碳酸钾。
“DCM”指二氯甲烷。
“KI”指碘化钾。
“NH4Cl”指氯化铵。
“Na2SO4”指硫酸钠。
“LiBH4”指硼氢化锂。
“NMP”指N-甲基吡咯烷酮。
“i-PrOH”指异丙醇。
“EtOH”指乙醇。
“Pd(OH)2/C”指氢氧化钯/碳。
“DCE”指1,2-二氯乙烷。
“PE”指石油醚。
“sat.”指饱和溶液。
“PCC”指氯铬酸吡啶盐。
“CuI”指碘化亚铜。
“TsCl”指4-甲苯磺酰氯。
“HNO3”指硝酸。
“NaBH(OAc)3”指醋酸硼氢化钠。
“Dess-Martin”指(1,1,1-三乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮。
“DMP”指邻苯二甲酸二甲酯。
“TEA”指三乙胺。
“DAST”指二乙氨基三氟化硫。
“NBS”指N-溴代丁二酰亚胺。
“(Ph)2NH”指二苯基氨。
“Pd2(dba)3”指三(二亚苄基丙酮)二钯。
“Xantphos”指4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。
“NaOt-Bu”指叔丁醇钠。
“DPBS”指杜氏磷酸缓冲液。
“PBS”指磷酸缓冲盐溶液。
“SDS-PAGE”指十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
“PVDF”指聚偏二氟乙烯。
“多个”独立地指1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
“任选”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环烷基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环烷基团被烷基取代的情形和杂环烷基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子、优选为最多5个、进一步优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻、取代基仅处在它们的可能的化学位置、本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如、具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物、以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药、利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明还提供式式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ化合物药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指相对无毒的本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。所述酸加成盐为本发明式(I)化合物与合适的无机酸或者有机酸形成的盐，这些盐可在化合物最后的分离和提纯过程中制备，或者可用纯化的式(I)化合物以其游离碱形式与适宜的有机酸或无机酸进行反应来制备。代表性酸加成盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月硅酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、甲苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。所述碱加成盐为式(I)化合物与合适的无机碱或者有机碱形成的盐，包括例如与碱金属、碱土金属、季铵阳离子形成的盐，例如钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、四甲基季铵盐、四乙基季铵盐等；胺盐包括与氨(NH3)、伯胺、仲胺或叔胺形成的盐，如甲胺盐、二甲胺盐、三甲胺盐、三乙胺盐、乙胺盐等。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐可给药于哺乳动物包括人，可口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部给药(粉剂、软膏剂或滴剂)、或瘤内给药。
本发明化合物的给药剂量可以大约为0.05-300mg/kg体重/天，优选10-300mg/kg体重/天，优选10-150mg/kg体重/天。
本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配制为用于口服给药的固体剂型，包括但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂等。在这些固体剂型中，本发明式(I)化合物作为活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，例如与柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(1)填料或增容剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸等；(2)粘合剂，如羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶等；(3)保湿剂，如甘油等；(4)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠等；(5)缓溶剂，如石蜡等；(6)吸收加速剂，如季铵化合物等；(7)润湿剂如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等；(8)吸附剂，如高岭土等；和(9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠等，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中也可包含缓冲剂。
所述固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材料例如肠溶衣和其他本领域公知的材料进行包衣或微囊化。它们可包含不透明剂，并且这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时、活性成分也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配制为用于口服给药的液体剂型，包括但不限于药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酊剂等。除了作为活性成分的式(I)化合物或其药学上可接受的盐外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂如水和其他溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1、3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油类，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油等或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，本发明液体剂型也可包含常规助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料等。
所述悬浮剂包括如乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇只、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂等或这些物质的混合物。
本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配制为用于肠胃外注射的剂型包括但不限于生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
本发明化合物或其药学上可接受的盐也可以配制为用于局部给药的剂型包括如软膏剂、散剂、栓剂、滴剂、喷射剂和吸入剂等。作为活性成分的本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐在无菌条件下和生理上可接受的载体及任选的防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明还提供药物组合物，它含有本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分，以及药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。在制备药物组合物时，通常是将本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂混合。
可以按常规制备方法将所述本发明组合物配制为常规药物制剂。例如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、乳液剂、混浮剂、分散液、溶液剂、糖浆剂、酏剂、软膏剂、滴剂、栓剂、吸入剂、喷射剂等。
本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐可以单独给药，或者(如果需要)与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，如与其他抗肿瘤药物、抗炎症药物或自身免疫性药物组合。待组合的各成分可同时或顺序的给予，以单一制剂形式或以不同制剂的形式给予。所述组合不仅可包括本发明化合物和一种其他活性剂的组合，也可包括本发明化合物和两种或更多种其他活性剂的组合。
本发明通过IRAK4激酶活性测试实验证明本发明所述化合物能够有效的与IRAK4靶蛋白结合或产生抑制效果；通过Western-Blot证明本发明所述化合物能够有效的特异性的降解THP-1细胞中的IRAK4蛋白；通过LPS诱导正常人全血PBMC分泌的细胞因子浓度测定实验证明本发明化合物能有效的抑制免疫细胞IL-6的产生；通过Western-Blot证明本发明所述化合物对人PBMC细胞中IRAK4长链(IRAK4-L)和IRAK4短链(IRAK4-S)均具有显著的降解效果。本发明所述式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ化合物，和/其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药和/或其药学上可接受的盐可有效的降解IRAK4蛋白，从而达到预防或治疗与IRAK4相关的疾病或病症的效果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到、或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。在无特殊说明的情况下，本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。
Ⅰ化合物制备实施例
中间体1：3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸
步骤1：3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸的制备
Figure BDA0003811544400001021
将3-氨基-4-甲氧基苯甲酸(5.0g,2.93mmol)悬浮于丙烯酸(8.05mL,117mmol)中，并在100℃下搅拌反应3h，然后将反应液搅拌冷却至室温。加入乙酸(33ml)，将搅拌的悬浮液在100℃加热10分钟，加入尿素(11.00g,183mmol)，反应液在120℃搅拌过夜。将反应液加入到冰水和浓盐酸(37％)的混合液中，搅拌，将得到的悬浮液在5℃的冰箱中保存过夜，然后过滤，固体用水洗涤并干燥，得到固体。将固体在盐酸溶液(0.05M)中研磨，过滤，甲基叔丁基醚洗涤，40℃下减压干燥，得到目标产物3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.70(s,1H),10.34(s,1H),7.92(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.83(d,J＝2.2Hz,1H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),3.94-3.82(m,3H),3.60(t,J＝6.7Hz,2H),2.69(s,2H).
以下中间体参照中间体1的方法制备：
Figure BDA0003811544400001022
Figure BDA0003811544400001031
中间体8：3-(2,6-二氧代基哌啶-3-基)-4-氟苯甲酸
步骤1：2,6-双(苄氧基)吡啶的制备
Figure BDA0003811544400001032
在0℃下，向氢化钠(60％矿物油混合物,54.0g,1.35mol)的N,N-二甲基甲酰胺(600mL)溶液中加入苄醇(109.6g,1.01mol)。搅拌30分钟后，随后加入2,6-二氯吡啶(50.0g,0.338mol)。将该反应混合物加热至80℃并搅拌反应过夜，冷却至室温后，将反应混合物用冰水(1000mL)淬灭。过滤固体并干燥，得到目标产物2,6-双(苄氧基)吡啶。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ7.68(t,J＝8.4Hz,1H),7.48-7.36(m,10H),6.45(d,J＝8.4Hz,2H),5.38(s,4H).
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝292.2.
步骤2：2,6-双(苄氧基)-3-溴吡啶的制备
Figure BDA0003811544400001041
向2,6-双(苄氧基)吡啶(75.9g,0.26mol)在乙腈(600mL)中的溶液中添加N-溴代琥珀酰亚胺(41.7g,0.23mol)。将该反应混合物在80℃下搅拌反应2小时。反应完成后，将反应混合物减压浓缩。浓缩物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水和饱和食盐水洗涤。收集有机层并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。浓缩物经硅胶柱纯化，得到目标产物2,6-双(苄氧基)-3-溴吡啶。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.45-7.37(m,10H),6.44(d,J＝8.4Hz,1H),5.42(s,2H),5.33(s,2H).
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝372.1.
步骤3：3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-4-氟苯甲酸的制备
Figure BDA0003811544400001042
向2,6-双(苄氧基)-3-溴吡啶(3.1g,8.37mmol)和3-硼酸基-4-氟苯甲酸(1.85g,10.05mmol)的二氧六环(31mL)和水(7.5mL)的混合物中加入PdCl2(dppf)-氯仿复合物(612mg,0.84mmol)和碳酸钠(1.77g,16.74mmol)。在氮气保护下将反应混合物加热至90℃并保持反应16小时。反应完成后，加入15％盐酸溶液(20mL)，并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，并将浓缩物经硅胶柱纯化，得到目标产物3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-4-氟苯甲酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝430.2
步骤4:3-(2,6-二氧代基哌啶-3-基)-4-氟苯甲酸的制备
Figure BDA0003811544400001043
向3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-4-氟苯甲酸(1.50g,3.49mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入钯/碳(10％,120mg)。室温下，反应混合物在氢气氛围下搅拌反应48小时。反应完成后，反应混合物经硅藻土过滤，并将滤液减压浓缩。浓缩物经柱纯化，得到目标产物3-(2，6-二氧代基哌啶-3-基)-4-氟苯甲酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝252.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.04(s,1H),10.92(s,1H),7.91–7.95(m,2H),7.30-7.34(m,1H),4.15-4.19(m,1H),2.70-2.79(m,1H),2.53-2.57(m,1H),2.23-2.27(m,1H),2.01-2.07(m,1H).
中间体9：3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯基酯
Figure BDA0003811544400001051
3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(2.0g,7.58mmol)，2,3,4,5,6-五氟苯酚(1.67g,9.09mmol)和N,N'-二环己基碳酰亚胺(1.87g,9.09mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中的混合物在室温下搅拌反应3h。将反应液倒入水(200mL)中并搅拌0.5h，溶液用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。收集有机相，并用水(500mL×2)和饱和食盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。浓缩物经硅胶柱纯化，得到目标产物3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯基酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝431.1
以下中间体参照中间体9的方法制备：
Figure BDA0003811544400001052
Figure BDA0003811544400001061
中间体17：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-3-甲酸
步骤1：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400001062
5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(5.0g,22.1mmol)和(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷盐酸盐(3.0g,22.1mmol)用乙腈(60mL)溶解，加入N,N-二异丙基乙胺(11.4g,88.5mmol)，60℃搅拌2小时，减压旋出溶剂后加水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL x3)提取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到目标粗产物5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝289.0.
步骤2：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-3-甲酸的制备
Figure BDA0003811544400001071
将5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(5.5g,19.0mmol)加入到乙醇(50mL)和四氢呋喃(25mL)中，加入氢氧化锂饱和水溶液(912mg氢氧化锂加0.75mL水配置而成的水溶液)，反应混合物室温下搅拌过夜，减压浓缩，浓缩物直接反相纯化(0.05％甲酸,15％乙腈)得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-3-甲酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝261.0.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.67(s,1H),8.76(dd,J＝7.6,3.8Hz,1H),8.22(d,J＝3.8Hz,1H),6.90-6.30(m,1H),5.30-5.00(m,1H),4.85-4.74(m,1H),3.93-3.70(m,2H),3.65-3.50(m,2H),1.90–2.05(m,2H).
中间体18：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(甲苯磺酰氧基)哌啶-1-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001072
将4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(8.0g,34mmol)，对甲苯磺酰氯(7.8g,40.1mmol)，三乙胺(10.3g,102mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.41g,3.4mmol)在二氯甲烷(100mL)溶液中的混合物于室温下搅拌反应过夜。反应混合物用水(100mL)稀释并用二氯甲烷(100mL×3)萃取。收集有机层并用饱和食盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。浓缩物经柱纯化，得到目标产物4-(甲苯磺酰氧基)哌啶-1-甲酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝412.1.
步骤2：4-(3-甲醛基-1H-吡咯-1-基)哌啶-1-甲酸苄基酯的制备
Figure BDA0003811544400001081
将1H-吡唑-3-甲醛(2.5g,26mmol)，4-(甲苯磺酰氧基)哌啶-1-甲酸苄酯(12.5g,32.1mmol)，碳酸铯(25.4g,78mmol)和碘化钾(5.33g,32.1mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)溶液中的混合物中在50℃下搅拌反应过夜。反应混合物用水(250mL)稀释并用乙酸乙酯(250mL×3)萃取。收集有机层并用饱和食盐水(500mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。浓缩物经柱纯化，得到目标产物4-(3-甲醛基-1H-吡咯-1-基)哌啶-1-甲酸苄基酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝336.3.
步骤3：4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001082
在0℃下，向4-(3-甲醛基-1H-吡咯-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯(1.5g,4.8mmol)在二氯甲烷(50mL)溶液中的混合物加入二乙胺基三氟化硫(4.62g,28.7mmol)。反应混合物在室温下搅拌反应过夜。反应混合物减压浓缩，浓缩物经柱纯化，得到目标产物4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝336.1.
步骤4：4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶的制备
Figure BDA0003811544400001083
在0℃下，向4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯(1.0g,3.0mmol)在硫酸(5mL)中的混合物中加入硝酸(1mL)。反应混合物在室温下搅拌反应过夜。将反应混合物倒入冰水(30mL)中并用甲醇/二氯甲烷(10％,50mL×3)萃取。收集有机层，有机层饱和食用盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到目标产物4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶。所得粗品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝247.1.
步骤5：4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001091
将4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶(650mg,2.6mmol)，二碳酸二叔丁酯(680mg,3.1mmol)，三乙胺(788mg,7.8mmol)和4-二甲氨基吡啶(32mg,0.26mmol)在二氯甲烷(10mL)溶液中的混合物于室温下搅拌反应过夜。反应混合物用水(20mL)稀释并用二氯甲烷(20mL×3)萃取。收集有机层并用饱和食盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。浓缩物经色谱层析中纯化，得到目标产物4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-57+2H]+＝291.1.
步骤6：4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001092
向4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(710mg,2.052mmol)在乙醇(20mL)的溶液中加入Raney-Ni(70mg)和水合肼(85％,1.0mL)。反应混合物在室温下搅拌反应2小时，过滤，滤液减压浓缩，得到目标产物4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。所得粗品无需进一步纯化即可用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-57+2H]+＝261.3.
步骤7：4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001093
向4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(560mg,1.77mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中的混合物中加入5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(461mg,1.77mmol)，HATU(874mg,2.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(685mg,5.1mmol)。反应混合物在室温下搅拌反应2小时。用水(100mL)淬灭反应混合物。所得溶液用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。收集有机层并用饱和食盐水(150mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。浓缩物经色谱层析柱纯化。得到目标产物4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝559.2.
步骤8：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001101
将4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(540mg,0.97mmol)在三氟乙酸/二氯甲烷(8mL,1:3)中的溶液在室温下搅拌反应1小时。减压浓缩得到粗品5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。粗产物直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝459.2.
中间体19：N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-((4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001102
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg,粗品,0.334mmol)的甲醇(10mL)溶液加入N,N-二异丙基乙胺(0.5mL)，9-甲酰基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(94mg,0.334mmol)，混合物搅拌30分钟后，加入氰基硼氢化钠(106mg,1.67mmol)，反应混合物室温搅拌反应3小时。所得混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。收集有机层并用饱和食盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。浓缩物经色谱层析柱纯化，得到目标产物9-((4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝724.4.
步骤2：N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001111
将9-((4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(130mg,0.18mmol)在三氟乙酸/二氯甲烷(6mL,1:2)中的混合物在室温下搅拌反应1小时。减压浓缩得到粗品N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。粗产物直接用于下一步。
LC-MS：(ESI,m/z):[M+H]+＝624.4.
中间体20：N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯的制备
Figure BDA0003811544400001112
将在四氢呋喃(15mL)溶液中的5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150mg,0.31mmol)，3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(86mg,0.34mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(326mg,1.55mmol)的反应混合物在室温下搅拌反应过夜。用水(50mL)淬灭反应混合物。所得溶液用二氯甲烷(20mL×3)萃取。收集有机层并用饱和食盐水(60mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。浓缩物经柱层析纯化，得到9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝724.3.
步骤2：N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001121
向搅拌的9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯(200mg,0.27mmol)二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(2mL)。反应混合物在室温下搅拌反应2小时。浓缩反应混合物，得到粗产物N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。粗产物直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝624.3.
中间体21.((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇
步骤1：(1S,4S)-4-(对甲苯磺酰氧基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001122
化合物(1S,4S)-4-羟基环己烷-1-羧酸甲酯(5.0g,31.6mmol)溶解于DCM(50mL)中，加入DMAP(1.9g,15.8mmol)，TEA(16.0g,158mmol)和TsCl(9.1g,47.5mmol)，室温搅拌过夜，反应液中加水(100mL)，用DCM(100mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，粗品使用柱层析(EA/PE＝1:1)纯化得到(1S,4S)-4-(对甲苯磺酰氧基)环己烷-1-羧酸甲酯。
LC-MS:(ES,m/z):[M+NH4 +]+＝330.0.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.83–7.76(m,2H),7.47(d,J＝7.9Hz,2H),4.66(s,1H),3.59(s,3H),2.42(s,3H),1.67–1.53(m,8H).
步骤2：(1R,4R)-4-(3-醛基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001123
将1H-吡唑-3-甲醛(2.4g,25.0mmol)溶解于DMF(50mL))中，加入(1S,4S)-4-(对甲苯磺酰氧基)环己烷-1-羧酸甲酯(9.4g,30.0mmol)，Cs2CO3(24.5g,75mmol)和KI(5.0g,30.0mmol)，50℃搅拌过夜，加水(500mL)，搅拌5min后用EA(500mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，粗品使用柱层析(EA:PE＝7:13)纯化得到(1R,4R)-4-(3-醛基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯。
LC-MS:(ES,m/z):[M+H]+＝237.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,1H),7.97(d,J＝2.4Hz,1H),6.77(d,J＝2.4Hz,1H),4.39–4.29(m,1H),3.62(s,3H),2.47–2.38(m,1H),2.14–2.01(m,4H),1.91–1.77(m,2H),1.62–1.48(m,2H).
步骤3：(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001131
将(1R,4R)-4-(3-醛基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(1.0g,4.2mmol)溶解于无水DCM(20mL)中，0℃下加入DAST(4.1g,25.4mmol)，缓慢升至室温搅拌过夜。冰浴下滴加饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分液，水相用二氯甲烷萃取2次，减压浓缩，粗品使用柱层析(EA:PE＝1:4)纯化得到(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯。
LC-MS:(ES,m/z):[M+H]+＝259.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88(s,1H),7.08-6.85(m,1H),6.49(s,1H),4.28-4.17(m,1H),3.62(s,3H),2.47-2.36(m,1H),2.15-1.95(m,4H),1.86–1.73(m,2H),1.61–1.48(m,2H).
步骤4：(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001132
将(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(1.0g,3.9mmol)用浓H2SO4(5mL)溶解，0℃下滴加浓HNO3(1mL)，缓慢升至室温搅拌过夜。将反应液缓慢倒入冰水混合物(20mL)中，过滤，滤饼用水洗3次，然后真空干燥得到(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯，所得产品直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),7.39-7.20(m,1H),4.42-4.30(m,1H),3.62(s,3H),2.46–2.37(m,1H),2.16–2.00(m,4H),1.93-1.72(m,2H),1.59-1.40(m,2H).
步骤5：(1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001141
将(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(880mg,2.9mmol)溶解于THF(10mL)中，加入Pd/C(440mg,50％)，用H2置换3次，并在H2氛围中室温下搅拌4h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到(1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯。所得粗品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ES,m/z):[M+H]+＝274.1.
步骤6：((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇的制备
Figure BDA0003811544400001142
将(1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(750mg,2.7mmol)溶解于无水THF(5mL)中，0℃下加入BH3/THF(27.5mL,1M/THF,27.5mmol)，缓慢升至室温搅拌过夜。冰浴下向反应液中滴加MeOH至无明显气泡产生，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇。
LC-MS:(ES,m/z):[M+H]+＝246.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.17(d,J＝14.3Hz,1H),7.06–6.68(m,1H),4.46(t,J＝5.3Hz,1H),4.03(s,2H),3.94(td,J＝8.2,4.0Hz,1H),3.27–3.22(m,2H),1.97(d,J＝9.5Hz,2H),1.83(d,J＝11.4Hz,2H),1.69-1.57(m,2H),1.39(d,J＝2.9Hz,1H),1.12–0.97(m,2H).
中间体22.5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001151
将((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(360mg,1.5mmol)溶解于DMF(10mL)中，加入5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(380mg,1.5mmol)，DIEA(566mg,4.4mmol)和HATU(726g,1.9mmol)，室温搅拌过夜，加水(50mL)，搅拌5min后用EA(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ES,m/z):[M+H]+＝488.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(d,J＝5.4Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.39(d,J＝4.2Hz,1H),8.23(d,J＝5.4Hz,1H),7.30-6.94(m,1H),6.90-6.34(m,1H),5.33-5.03(m,1H),4.77(d,J＝16.7Hz,1H),4.52-4.30(m,1H),4.22–4.05(m,1H),3.89–3.69(m,2H),3.67–3.42(m,2H),3.17-2.97(m,2H),2.12–1.80(m,6H),1.80–1.61(m,2H),1.48-1.36(m,1H),1.19-1.01(m,2H).
步骤2：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001152
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(400mg,0.82mmol)的ACN(20mL)溶液中加入IBX(460mg,1.64mmol)，然后反应液再85℃搅拌1h。反应额有减压浓缩后，加水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ES,m/z):[M+H]+＝486.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.62(s,1H),9.51(d,J＝5.7Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.44–8.35(m,1H),8.26(d,J＝5.2Hz,1H),7.27-6.98(m,1H),6.93-6.40(m 1H),5.30-5.05(m,1H),4.77(d,J＝16.6Hz,1H),4.26-4.15(m,1H),3.84–3.72(m,2H),3.67–3.59(m,2H),3.45(d,J＝9.9Hz,1H),2.45-2.35(m,1H),2.18-1.74(m,8H),1.45-1.28(m,2H).
中间体23：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-(苯基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001161
N2保护下，向4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g,4.41mmol)的DCE(3mL)溶液中加N-甲基-1-苯基甲胺(1.067g,8.82mmol)和AcOH(0.79g,13.23mmol)，混合液在室温搅拌30min后，再加入STAB(2.8g,13.23mmol)，然后反应液在室温搅拌2h。反应液中加水(20mL)稀释，用EA(30mL×2)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析(MeOH:DCM＝0～1:20)纯化得到4-(2-(苯基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝333.2.
步骤2：4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001162
向4-(2-(苯基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g,3.01mmol)的THF(3mL)溶液中加Pd(OH)2/C(250mg)，然后反应液在H2氛围中室温下搅拌2h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝243.2.
步骤3：4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001163
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(300mg,0.618mmol)的THF(3mL)溶液中加4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(329mg,0.928mmol)和STAB(419mg,1.862mmol)，然后反应在N2氛围中室温下搅拌2h。反应加水(20mL)淬灭，用DCM(20mL×2)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝712.4.
步骤4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001171
向4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.281mmol)的DCM(3mL)溶液中加TFA(1mL)，然后反应液在N2氛围中室温下搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝612.4.
中间体24：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(醛基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
步骤1：5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400001172
将5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸叔丁酯(6g,27mmol)，吗啡啉(2.3g,27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(10.4g,81mmol)溶于乙腈(60mL)中并升温至60℃搅拌过夜，反应液直接减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯)纯化得到5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝277.3.
步骤2：5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400001181
将5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(4.3g,16mmol)溶于混合溶液(甲醇/水＝5:1,40mL)中，氢氧化锂(2.6g,64mmol)加入并升温至60℃搅拌2小时，反应液用稀盐酸(2mol/L)调节pH值＝2，过滤，固体真空干燥得到5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
步骤3：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001182
将5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(248mg,1.0mmol)，((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(245mg,1.0mmol)和HATU(494mg,1.3mmol)溶于DMF(5mL)中，加入DIEA(387mg,3.0mmol)，反应液室温搅拌16h。反应结束后反应液用水(50mL)稀释，搅拌，过滤，滤饼用水(5mL x 3)洗涤，真空干燥得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝476.1.
步骤4：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(醛基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001183
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80mg,0.17mmol)溶于DCM(4mL)中，然后加入Dess-Martin(144mg,0.34mmol)试剂，反应液室温搅拌过夜。过滤，固体用DCM洗涤(10mL x 3)，有机相减压浓缩，粗品经正向柱层析纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(醛基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝474.1.
中间体25：N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001191
25℃时向5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(470mg,1.9mmol)和DIEA(1mL,4.7mmol)的DMF(20ml)溶液中加入HATU(900mg,2.4mmol)，混合物在25℃搅拌2h后再加入4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.5g,1.5mmol)，反应液再在25℃搅拌过夜。反应液中加水(30mL)，然后用EA(50mL×3)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(EA)纯化得到4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝547.4.
步骤2：N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001192
25℃时向4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.2g,0.366mmol)的DCM(3mL)溶液中加TFA(1mL)。反应液在25℃搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝447.2.
步骤3：9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001201
25℃时向N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg,0.45mmol)和DIEA(0.5ml,1.35mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入9-醛基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(150mg,0.45mmol)和NaBH3CN(100mg,2.25mmol)。反应液在25℃搅拌16h。过滤，减压浓缩，所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝3:97)纯化得到9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝712.4.
步骤4：N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001202
25℃时向9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(0.14g,0.2mmol)的DCM(3mL)溶液中加TFA(1mL)。反应液在25℃搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。所得产品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝612.5.
中间体26：((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇
Figure BDA0003811544400001203
将(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(4.0g,13.2mmol)的THF(50mL)溶液冷却到-20℃，滴加LiAlH4(1M THF溶液,16mL)，反应液室温搅拌0.5小时后，缓慢加入15％的氢氧化钠溶液(8mL)，加水(50mL)，用MeOH/DCM混合溶液(V/V＝1:9,50mL x 3)萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-56]+＝276.0.
中间体27：N-(1-(1-(2-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(2-氧代乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001211
将9-(2-羟基乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(250mg,0.842mmol)和PCC(543.8mg,2.523mmol)加入到DCM(5mL)中，室温搅拌2h,然后过滤,加入水(20mL)，用乙酸乙酯(25mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品9-(2-氧代乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-56]+＝240.1.
步骤2：9-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001212
将N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(140mg,0.314mmol)和9-(2-氧代乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(185mg,0.628mmol)加入到THF中,然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(133mg,0.628mmol)，室温搅拌2h,加入水(20mL)，用乙酸乙酯(25mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(MeOH:DCM＝1:19)纯化得到9-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝726.4.
步骤3：N-(1-(1-(2-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001213
将9-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(121mg,0.167mmol)加入到TFA(0.5mL)和DCM(2.5mL)中，室温搅拌2h，反应液减压浓缩，得到粗品N-(1-(1-(2-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝626.4.
中间体28：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：(S)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400001221
将5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(1.0g,4.4mmol)，(S)-哌啶-3-醇(445mg,4.4mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.7g,13.3mmol)用乙腈(10mL)溶解，反应液升温至60℃搅拌过夜。反应液直接减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝87:13)纯化得到(S)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝291.1.
步骤2：(S)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400001222
将(S)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(1.1g,3.9mmol)用混合溶液(甲醇/水＝5:1,10mL)溶解，加入氢氧化锂(643mg,16mmol)并升温至60℃搅拌2小时。反应液用稀盐酸(2mol/L)调节pH值＝2,过滤，滤饼真空干燥得到(S)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝263.1.
步骤3：5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400001231
(S)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(300mg,1.14mmol)用四氢呋喃(15mL)溶解，加入3,4-二氢-2H-吡喃(962mg,11.4mmol)和四丁基三溴化铵(111mg,0.23mmol)，升温至60℃，搅拌过夜。反应液减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯)纯化得到5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝347.2.
步骤4：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001232
5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(180mg,0.52mmol)和((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(137mg,0.52mmol)用DMF(10mL)溶解，搅拌下加入N,N-二异丙基乙胺(201mg,1.56mmol)和py-BOP(348mg,0.67mmol)，60℃下搅拌过夜。反应液冷却至室温，加水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝574.3.
步骤5：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001241
N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg,0.35mmol)用乙腈(20mL)溶解，加入IBX(196mg,0.70mmol)，80℃下搅拌2小时。反应液减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝572.3.
中间体29：(S)-N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001242
5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(210mg,0.61mmol)和4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(191mg,0.61mmol)用DMF(10mL)溶解，搅拌下加入N,N-二异丙基乙胺(236mg,1.83mmol)和Py-BOP(475mg,0.91mmol)，加热至60℃搅拌过夜。反应液中加水(100mL)，乙酸乙酯(30mL x3)萃取，有机相经饱和食盐水(60mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝645.3.
步骤2：(S)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001251
将4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(180mg,0.28mmol)用二氯甲烷(3mL)溶解，三氟乙酸(1mL)加入并室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到(S)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝461.2.
步骤3：(S)-9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001252
将(S)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(180mg,粗品,0.28mmol)和9-甲酰基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(87mg,0.31mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(180mg,0.84mmol)，室温搅拌过夜。反应液中加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到(S)-9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝726.3.
步骤4：(S)-N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001253
(S)-9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(160mg,0.22mmol)用二氯甲烷(3mL)溶解，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时。反应液直接减压浓缩得到(S)-N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝626.4.
中间体30：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400001261
将5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(1.0g，4.4mmol)，2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷(439mg,4.4mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.7g,13.3mmol)用乙腈(10mL)溶解，反应液升温至60℃搅拌过夜。反应液直接减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯)纯化得到5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝289.2.
步骤2：5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400001262
将5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(1.1g,3.8mmol)用10mL混合溶液(甲醇/水＝5:1)溶解，氢氧化锂(639mg,15mmol)加入并升温至60℃搅拌2小时,反应液用2mol/L稀盐酸调节pH值＝2,过滤，固体真空干燥得到5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝261.1.
步骤3：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001271
将5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(110mg,0.41mmol)和((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(100mg,0.41mmol)用DMF(3mL)溶解，加入HATU(202mg,0.53mmol)和DIEA(212mg,1.6mmol)，反应液升温至90℃搅拌过夜，用水(80mL)稀释，乙酸乙酯(100mL x 2)萃取，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品使用柱层析(PE:EA＝1：9)纯化得到化合物N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝488.2.
步骤4：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001272
将化合物N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(120mg,0.246mmol)用DCM(3mL)溶解，然后加入PCC(107mg,0.493mmol)，反应液室温搅拌2小时。反应液用水(20mL)稀释，二氯甲烷(25mL x 4)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品使用柱层析(DCM：MEOH＝1:10)纯化得到化合物N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝486.3.
中间体31：N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400001281
将5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(1.0g,4.4mmol)，硫代吗啡啉1,1-二氧化物(906mg,5.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.3g,18mmol)溶于乙腈(10mL)中并升温至60℃搅拌过夜，反应液直接减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝9:1)纯化得到5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝325.0.
步骤2：5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400001282
将5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(900mg,2.8mmol)溶于混合溶液(甲醇/水＝5:1,10mL)中，加入氢氧化锂(470mg,11.2mmol)并升温至60℃搅拌2小时，反应液用稀盐酸(2mol/L)调节pH值＝3,过滤，滤饼真空干燥得到5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝297.0.
步骤3：4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001283
将5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(150mg,0.51mmol)和4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(161mg,0.51mmol)用DMF(5mL)溶解，搅拌下加入DIEA(271mg,2.1mmol)和HATU(251mg,0.66mmol)，反应液室温搅拌12小时。反应液终加水(60mL)稀释，用乙酸乙酯(60mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝7:3)纯化得到4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝617.1.
步骤4：N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001291
将4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.13mmol)用二氯甲烷(2mL)溶解，加入三氟乙酸(0.4mL)并室温搅拌2小时。反应液直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝495.2.
中间体32：3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛
步骤1：3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛的制备
Figure BDA0003811544400001292
将9-甲酰基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(200mg,0.71mmol)溶于DCM(2mL)中，加入TFA(0.4mL)，反应液室温搅拌1小时。直接减压浓缩得到3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝182.2.
步骤2：3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛的制备
Figure BDA0003811544400001293
将3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛(345mg,0.71mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸五氟苯酯(295mg,0.71mmol)溶于DMSO(5mL)中，室温搅拌1小时。反应液终加入水(50mL)，EA萃取(30mL x 3)，合并有机相并用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经正相柱层析纯化得到3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝412.2.
中间体33：3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛
Figure BDA0003811544400001301
制备方法参照中间体32。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝432.1.
中间体34：(S)-(1-(3-((3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
步骤1:(S)-5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400001302
将5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(2.0g,8.9mmol)，(S)-哌啶-3-基羧酸叔丁酯(1.8g,8.9mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.5g,27mmol)用乙腈(20mL)溶解，反应液加热至60℃搅拌过夜，直接减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝9:1)纯化得到(S)-5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝390.0.
步骤2：(S)-5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400001303
将(S)-5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(3.2g,8.2mmol)用混合溶液(甲醇/水＝5:1,30mL)溶解，加入氢氧化锂(787mg,32.8mmol)并升温至60℃搅拌2小时,反应液用稀盐酸(2mol/L)调节至pH值＝2,过滤，滤饼真空干燥得到(S)-5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝362.5.
步骤3：4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶的制备
Figure BDA0003811544400001311
4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g,3mmol)用浓硫酸(10mL)溶解并冷却到零度，缓慢滴加浓硝酸(1mL)，反应液室温搅拌过夜。反应液缓慢倒入冰水(300mL)中，水相用碳酸钠调节pH值＝8，用甲醇/二氯甲烷混和溶液(10/1,60mL x 3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝247.0.
步骤4：4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001312
4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶(460mg,1.9mmol)用二氯甲烷(6mL)溶解，加入DIEA(735mg,5.7mmol)和CbzCl(391mg,2.3mmol)并室温搅拌2小时。反应液中加水(80mL)，用二氯甲烷(100mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:1)纯化得到4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝381.2.
步骤5：4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001313
4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(500mg,1.3mmol)，铁粉(294mg,5.2mmol)和NH4Cl(418mg,7.9mmol)加入到水(10mL)中，反应液加热到在90℃搅拌2小时，过滤，加水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝351.2.
步骤6：(S)-4-(4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001321
将(S)-5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(56mg,0.15mmol)，4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(54mg,0.15mmol)和Py-BOP(240mg,0.45mmol)溶于DMF(5mL)中，然后加入DIEA(60mg,0.45mmol)，室温搅拌16小时。反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经正相柱层析纯化得到(S)-4-(4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝694.4.
步骤7：(S)-(1-(3-((3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001322
将(S)-4-(4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(90mg,0.13mmol)溶于THF(3mL)中，加入Pd/C(10％,50mg)，置换H2三次，在氢气保护下室温搅拌1小时。反应液经硅藻土过滤，滤饼用THF洗涤(10mL x 3)，滤液减压浓缩得到粗品(S)-(1-(3-((3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝560.3.
实施例1：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001331
将N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150mg,粗品,0.18mmol)，4-氯-3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯基酯(78mg,0.18mmol)和N,N-二异丙基乙胺(116mg,0.9mmol)在二甲亚砜(5mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。将所得混合物倒入水(50mL)中并搅拌10分钟。过滤，滤饼通过制备型HPLC纯化，得到目标产物5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝874.5.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.50(d,J＝5.9Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.39(d,J＝4.0Hz,1H),8.26(d,J＝5.7Hz,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.39(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),7.27-6.96(m,1H),6.90–6.41(m,1H),5.30-5.05(m,1H),4.77(d,J＝17.4Hz,1H),4.26-4.14(m,1H),3.86–3.70(m,3H),3.66–3.41(m,5H),3.30-3.25(m,2H),2.96-2.84(m,2H),2.79–2.70(m,2H),2.22-2.08(m,2H),2.06–1.83(m,8H),1.75-1.65(m,2H),1.63–1.24(m,7H),1.19–0.91(m,4H).
实施例2：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1r,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001332
制备方法参照实施例1。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝874.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.50(d,J＝6.3Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.38(d,J＝4.4Hz,1H),8.25(d,J＝5.7Hz,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.26-6.95(m,1H),6.91-6.41(m,1H),5.32-5.03(m,1H),4.77(d,J＝17.4Hz,1H),4.17(t,J＝12.9Hz,1H),3.84–3.71(m,3H),3.67-3.57(m,4H),3.45(d,J＝9.8Hz,1H),3.30-3.25(m,2H),2.79–2.71(m,2H),2.38-2.24(m,4H),2.13–1.77(m,8H),,1.79-1.66(m,2H),1.60-1.35(m,9H),1.12-0.92(m,2H).
实施例3：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001341
5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(130mg,0.268mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg,0.322mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，室温搅拌，三乙酰氧基硼氢化钠(284mg,1.34mmol)加入并室温搅拌2小时，加水(30mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到4-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝656.3.
步骤2：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(哌嗪-1-基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001342
4-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(120mg,0.183mmol)用二氯甲烷(5mL)溶解，加入三氟乙酸(1mL)并室温搅拌2小时。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(哌嗪-1-基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝556.3
步骤3：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001351
5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(哌嗪-1-基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(120mg,0.185mmol,三氟乙酸盐)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(96mg,0.22mmol)用二甲亚砜(10mL)溶解，室温搅拌，DIEA(0.5mL)加入并室温搅拌2小时，加水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经过pre-HPLC纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝806.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.49(d,J＝6.0Hz,1H),8.78(d,J＝7.8Hz,1H),8.38(d,J＝4.3Hz,1H),8.25(d,J＝5.6Hz,1H),7.65(d,J＝8.2Hz,1H),7.57(d,J＝2.0Hz,1H),7.41(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.27-6.94(m,1H),6.89-6.38(m,1H),5.32-5.02(m,1H),4.77(d,J＝17.6Hz,1H),4.25–4.15(m,1H),3.86–3.71(m,3H),3.68–3.57(m,4H),3.45(d,J＝10.3Hz,2H),2.80-2.70(m,2H),2.45–2.25(m,4H),2.16(d,J＝7.0Hz,2H),2.11–1.83(m,7H),1.1-1.67(m,2H),1.68–1.50(m,1H),1.16–0.98(m,2H).
实施例4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001361
5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(130mg,0.268mmol)和4-((甲基氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(73mg,0.320mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，室温搅拌，加入三乙酰氧基硼氢化钠(284mg,1.34mmol)并室温搅拌2小时，加水(30mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到4-(((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝698.4.
步骤2：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001362
4-(((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg,0.215mmol)用二氯甲烷(5mL)溶解，加入三氟乙酸(1mL)并室温搅拌2小时，直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝598.3.
步骤3：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001371
5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150mg,0.251mmol,三氟乙酸盐)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(134mg,0.309mmol)用二甲亚砜(10mL)溶解，室温搅拌，DIEA(0.5mL)加入并室温搅拌2小时，加水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经过pre-HPLC纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝848.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.50(d,J＝5.8Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.38(d,J＝4.4Hz,1H),8.25(d,J＝5.5Hz,1H),8.17(s,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.38(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.27-7.94(m,1H),6.90-6.42(m,1H),5.33-5.00(m,1H),4.77(d,J＝17.4Hz,1H),4.52-4.33(m,1H),4.17(t,J＝10.6Hz,1H),3.86-3.70(m,3H),3.68-3.53(m,3H),3.45(d,J＝10.1Hz,1H),3.14-2.96(m,1H),2.90–2.68(m,3H),2.25–1.46(m,19H),1.18–0.88(m,4H).
实施例5：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：(1R,4R)-4-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001372
4-硝基-1H-吡唑(1.8g,15.9mmol)和(1S,4S)-4-(对甲苯磺酰基)环己烷-1-羧酸甲酯(5.2g,16.7mmol)用DMF(50mL)溶解，Cs2CO3(15.6g,47.7mmol)和KI(2.78g,16.7mmol)加入，50℃搅拌过夜，加水(200mL)并搅拌10min，用乙酸乙酯(100mLx3)萃取，饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(EA:PE＝7:11)纯化得到(1R,4R)-4-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝254.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(s,1H),8.26(s,1H),4.33-4.25(m,1H),3.63(s,3H),2.42–2.35(m,1H),2.15–2.00(m,4H),1.89–1.76(m,2H),1.59–1.45(m,2H).
步骤2：(1R,4R)-4-(4-氨基-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001381
(1R,4R)-4-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(1.4g,5.5mmol)溶解在乙醇(45mL)中，加入HCl(4.6mL,55.3mmol)和Pd(5％,氧化铝负载,140mg)，N2保护下滴加三乙基硅烷(3.85g,33.2mmol)，室温搅拌过夜。用NaHCO3饱和溶液调节pH至8，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，饱和食盐水(200mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:19)纯化得到(1R,4R)-4-(4-氨基-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝258.1和[M+14]+＝272.1.
步骤3：((1R,4R)-4-(4-氨基-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇的制备
Figure BDA0003811544400001382
(1R,4R)-4-(4-氨基-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(1.0g,3.9mmol)用THF(20mL)溶解，BH3/THF(1M,39mL,39mmol)加入，室温下反应过夜。加入MeOH(10mL)淬灭后，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:19)纯化得到((1R,4R)-4-(4-氨基-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝230.2.
步骤4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001383
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(260mg,1.0mmol)的DMF(10mL)溶液中加入((1R,4R)-4-(4-氨基-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(300mg,1.3mmol)，HATU(570mg,1.5mmol)和DIEA(387mg,3.0mmol)，室温搅拌过夜。加水(100mL)并搅拌10min，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝472.0.
步骤5：5-((1R,4R)-2-氧代-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001391
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(250mg,0.53mmol)的ACN(20mL)溶液中加入IBX(297mg,1.06mmol)，85℃搅拌1.5h，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧代-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝470.2.
步骤6：9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001392
向5-((1R,4R)-2-氧代-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(210mg,0.45mmol)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(114mg,0.45mmol)的THF(10mL)溶液中加入STAB(285mg,1.34mmol)，室温搅拌过夜，减压浓缩，加水(30mL)，用乙酸乙酯(30mLx3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝708.2.
步骤7：N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-氯-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001401
向9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-氯-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(190mg,0.27mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1mL)，室温搅拌2小时，减压浓缩得到N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-氯-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝608.3.
步骤8：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001402
将N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-氯-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(190mg,0.31mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(136mg,0.31mmol)用DMSO(5mL)溶解，然后加入DIEA(202mg,1.6mmol)，反应液在室温搅拌2小时。加入水(50mL)到反应液中，搅拌10分钟，过滤，固体通过反相制备纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-氯-1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝858.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.44(d,J＝8.7Hz,1H),8.80(d,J＝7.7Hz,1H),8.24(d,J＝3.5Hz,1H),8.06(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(s,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),6.95-6.39(m,1H),5.30-5.00(m,1H),4.79(s,1H),4.25–4.15(m,1H),3.92–3.38(m,9H),2.80–2.68(m,2H),2.40–2.20(m,4H),2.11(d,J＝6.5Hz,2H),2.06–1.95(m,2H),1.94–1.76(m,6H),1.70–1.30(m,9H),1.10–0.95(m,2H).
实施例6：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：(1-(3-氯-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲醇的制备
Figure BDA0003811544400001411
将K2CO3(1.57g,11.4mmol)和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇(0.78g,6.8mmol)加入2-氯-4-氟-1-硝基苯(1.0g,5.7mmol)的DMF(20mL)中，100℃搅拌1h，加水(200mL)并搅拌10min，用乙酸乙酯(100mLx3)萃取，饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(EA:PE＝1:1)纯化得到(1-(3-氯-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲醇。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝271.0.
步骤2：(1-(4-氨基-3-氯苯基)哌啶-4-基)甲醇的制备
Figure BDA0003811544400001412
将(1-(3-氯-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲醇(1.3g,4.8mmol)溶解在乙醇(30mL)中，加入Raney-Ni(1mL)和N2H4-H2O(1mL)，室温搅拌1h，过滤，浓缩干燥得到(1-(4-氨基-3-氯苯基)哌啶-4-基)甲醇。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝241.1.
步骤3：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001413
向(1-(4-氨基-3-氯苯基)哌啶-4-基)甲醇(1.0g,4.2mmol)的DMF(20mL)溶液中加入5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(0.6g,2.3mmol)，HATU(1.33g,3.5mmol)和DIEA(0.89g,6.9mmol)，室温搅拌过夜，加水(200mL)并搅拌10min，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝483.1.
步骤4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-醛基哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001421
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(500mg,1.0mmol)的CAN(20mL)溶液中加入IBX(560mg,2.0mmol)，100℃搅拌1.5h，反应液直接减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-醛基哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝481.1.
步骤5：9-((1-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-氯苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001422
5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-醛基哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(400mg,0.83mmol)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(232mg,0.91mmol)的THF(10mL)溶液中加入STAB(528mg,2.49mmol)室温搅拌过夜，减压浓缩，加水(20mL)，用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:9)纯化得到9-((1-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-氯苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝719.3.
步骤6：N-(4-(4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-氯苯基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]十一烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001423
9-((1-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-氯苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(150mg,0.21mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1mL)，室温搅拌2小时，减压浓缩得到N-(4-(4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-氯苯基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]十一烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝619.2.
步骤7：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001431
将N-(4-(4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-氯苯基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]十一烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150mg,0.24mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(105mg,0.24mmol)用DMSO(5mL)溶解，DIEA(155mg,1.2mmol)加入，然后反应液室温搅拌2小时，水(50mL)加入到反应液中，搅拌2分钟，过滤，固体通过反相制备纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(2-氯-4-(4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝869.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.60(d,J＝11.9Hz,1H),8.80(d,J＝7.7Hz,1H),8.26(d,J＝3.3Hz,1H),8.08(dd,J＝15.0,9.1Hz,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝2.0Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.00(d,J＝2.4Hz,1H),6.99-6.92(m,1H),6.90-6.44(m,1H),5.34-5.04(m,1H),4.77(d,J＝12.1Hz,1H),3.84–3.70(m,3H),3.68-3.43(m,7H),3.30–3.20(m,2H),2.78–2.70(m,2H),2.64(t,J＝11.6Hz,2H),2.39–2.21(m,4H),2.14(d,J＝6.9Hz,2H),2.07–1.92(m,2H),1.82–1.30(m,11H),1.23–1.08(m,2H).
实施例7：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：(1R,4R)-4-(3-甲基-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001441
将(1S,4S)-4-(对甲苯磺酰基)环己烷-1-羧酸甲酯(2.0g,15.7mmol),3-甲基-4-硝基-1H-吡唑(5.9g,18.8mmol)，Cs2CO3(15.4g,47.1mmol)和KI(3.1g,18.8mmol)的DMF(30.0mL)溶液在120℃搅拌2h。反应液中加水(200mL)，然后用EA(200mL x 2)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析纯化(EA:PE＝0～1:5)得到(1R,4R)-4-(3-甲基-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝268.0.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),4.24-4.14(m,1H),3.61(s,3H),2.42(s,3H),2.44-2.34(m,1H),2.14-1.96(m,4H),1.87–1.71(m,2H),1.62–1.41(m,2H).
步骤2：(1R,4R)-4-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400001442
将(1R,4R)-4-(3-甲基-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(2.0g,7.4mmol)，Fe(2.5g,37.0mmol)和NH4Cl(4.8g,74.0mmol)的MeOH(50.0mL)溶液在80℃搅拌3h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经Prep-HPLC(乙腈/0.05％NH4OH水溶液,5％～95％)纯化得到(1R,4R)-4-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝238.3.
步骤3：((1R,4R)-4-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇的制备
Figure BDA0003811544400001443
将(1R,4R)-4-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(300.0mg,1.3mmol)和LiBH4(111.0mg,4.0mmol)的THF/MeOH(10.0mL/2.0mL)溶液在60℃搅拌1h。反应加水(20.0mL)淬灭，然后用DCM(50mL x 2)萃取。有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析纯化(MeOH:DCM＝0～1:9)得到((1R,4R)-4-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝210.1.
步骤4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001451
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(260.0mg,1.0mmol)，HATU(418.0mg,1.1mmol)和DIEA(387.0mg,3.0mmol)的DMF(500.0mL)溶液中加((1R,4R)-4-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(230.0mg,1.1mmol)。反应液在室温搅拌1.0h。反应液中加入冷水(250.0mL)。所得悬浊液过滤，滤饼经水洗并真空干燥得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。所得粗品无需纯化，直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝452.1.
步骤5：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001452
将5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(羟基甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(320.0mg,0.7mmol)和IBX(392mg,1.4mmol)在ACN(10mL)中的混合物在60℃搅拌1h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经柱层析纯化(MeOH:DCM＝0～1:9)得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝450.1.
步骤6：9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001453
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(250.0mg,0.6mmol)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(203.0mg,0.8mmol)的THF(10mL)溶液中加STAB(381.6mg,1.8mmol)。然后反应液在25℃搅拌1.0h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经柱层析纯化(MeOH:DCM＝0～1:9)得到9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝688.3.
步骤7：N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001461
将9-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(300.0mg,0.4mmol)的TFA/DCM(1.0mL/3.0mL)溶液在室温搅拌1.0h。反应液直接真空减压浓缩得到N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。所得粗品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝588.6.
步骤8：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001462
向N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200.0mg,0.3mmol)的DMSO(5.0mL)溶液中加DIEA(54.20mg,0.42mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(143.2mg,0.33mmol)，反应混合物在室温搅拌2h。反应液中加水(15.0mL)，然后用DCM(30.0mL x 2)萃取。合并有机相，用食盐水洗，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经Prep-HPLC(乙腈/0.05％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺.
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝838.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.21(d,J＝7.6Hz,1H),8.80(d,J＝7.8Hz,1H),8.22(s,1H),8.04(s,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),6.92-6.43(m,1H),5.25-5.05(m,1H),4.78(s,1H),4.05-3.88(m,1H),3.88–3.57(m,7H),3.45(d,J＝10.1Hz,1H),3.30–3.26(m,2H),2.78–2.68(m,2H),2.41-1.93(m,12H),1.86(d,J＝11.5Hz,2H),1.77-1.62(m,2H),1.60-1.31(m,10H),1.11-0.95(m,2H).
实施例8：N-(2-((1S,4S)-4-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲氧基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺
步骤1：(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001471
0℃时，搅拌下向Me3OS+I-(6.2g,28.2mmol)的DMSO(50mL)溶液中加入NaH(1.17g,29.3mmol)，反应混合物在室温搅拌1h，然后滴加(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(5.0g,23.5mmol)的DMSO(20mL)溶液，滴加完毕，反应液在室温继续搅拌1h。反应液中加水(700mL)，用EtOAc(100mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。粗产物经柱层析(EA:PE＝0～1:1)纯化得到(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.79(d,J＝7.2Hz,1H),3.37(m,1H),2.57(s,2H),1.83(td,J＝13.3,4.1Hz,2H),1.77–1.64(m,2H),1.48–1.40(m,2H),1.38(s,9H),1.20(d,J＝13.1Hz,2H).
步骤2：(4-羟基-4-(羟基甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001472
搅拌下向(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯(4.7g,20.7mmol的NMP(50mL)溶液中加入2N NaOH(47mL)，然后反应液在100℃搅拌2h。反应液中加水(500mL)，用EA(100mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。粗品经flash柱(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到(4-羟基-4-(羟基甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.67(d,J＝7.9Hz,1H),4.46(t,J＝5.8Hz,1H),3.81(s,1H),3.11(t,J＝6.8Hz,3H),1.56–1.45(m,4H),1.44–1.34(m,13H).
步骤3：(4-羟基-4-((吡啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001473
0℃时向(4-羟基-4-(羟基甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(600mg,2.4mmol)的THF(20mL)溶液中加NaH(292mg,7.3mmol)，反应混合物保持在0℃搅拌20min，然后在室温再继续搅拌30min后加入4-(溴甲基)吡啶溴化氢盐(617mg,2.4mmol)。反应液在室温搅拌过夜。反应液中加水(30mL)，用EA(20mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(60mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗产物经flash柱(EA:PE＝0～4:1)纯化得到(4-羟基-4-((吡啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝337.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝5.8Hz,2H),7.34(d,J＝5.6Hz,2H),6.69(d,J＝7.6Hz,1H),4.55(s,2H),4.19(s,1H),3.23(s,2H),3.18–3.07(m,1H),1.60-1.48(m,6H),1.42-1.35(m,J＝9.2Hz,11H).
步骤4：(4-羟基-4-((哌啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001481
将(4-羟基-4-((吡啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(700mg,2.07mmol)和Pd/C(400mg)的i-PrOH/H2O(18mL/21mL)混合液在H2氛围中75℃下搅拌过夜。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到(4-羟基-4-((哌啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯。所得粗品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝343.2.
步骤5：4-(((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001482
将(4-羟基-4-((哌啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(630mg,1.83mmol)，CbzCl(376mg,2.20mmol)的ACN(10mL)溶液和饱和NaHCO3水溶液(10mL)室温搅拌过夜。反应液先减压浓缩，再用DCM(50mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。粗品经flash柱(EA:PE＝0～7:3)纯化得到4-(((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝499.3.
步骤6：4-(((4-氨基-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001491
-10～0℃下，边搅拌边向4-(((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(300mg,0.63mmol)的DCM(12mL)溶液中加入TFA(3mL)，然后反应液在室温搅拌2h。反应混合液用DIEA调节pH至9.0，然后直接减压浓缩得到4-(((4-氨基-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯。所得粗产品无需纯化，直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝377.2.
步骤7：4-((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001492
搅拌下向4-(((4-氨基-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(237mg,0.63mmol)的甲苯(10mL)溶液中加2-叠氮-4-甲氧基-5-硝基苯甲醛(170mg,0.76mmol)。反应液在100℃搅拌3h。反应液直接减压浓缩。粗产物先经flash柱(EA:PE＝0～4:1)纯化，再经Prep-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到4-((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝553.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),8.37(s,1H),7.40–7.29(m,5H),7.26(s,1H),5.07(s,2H),4.45(t,J＝12.0Hz,1H),4.36(s,1H),4.06–3.99(m,2H),3.90(s,3H),3.29(d,J＝6.2Hz,2H),3.20(s,2H),2.85-2.75(m,2H),2.35–2.20(m,2H),1.89(d,J＝11.8Hz,2H),1.76-1.61(m,7H),1.15-1.02(m,2H).
步骤8：4-((((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001493
向4-((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(200mg,0.36mmol)的EtOH(20mL)溶液中加Raney-Ni(0.3mL)和N2H4H2O(0.3mL)。反应液在室温搅拌2h。反应液经硅藻土过滤，滤液直接减压浓缩得到4-((((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。所得粗产物直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝523.2.
步骤9：4-((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001501
搅拌下向4-((((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(190mg,0.36mmol)的DMF(5mL)溶液中加6-(三氟甲基)吡啶甲酸(90mg,0.47mmol)，HATU(178mg,0.47mmol)和DIEA(140mg,1.08mmol)。然后反应液在室温搅拌2h。反应液中加水(30mL)，用EA(20mL×3)。有机相用饱和食盐水(60mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(EA:PE＝0～4:1)纯化得到4-((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝696.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),8.69(s,1H),8.47(d,J＝7.7Hz,1H),8.41(t,J＝7.8Hz,1H),8.32(s,1H),8.22(d,J＝7.7Hz,1H),7.41–7.29(m,5H),7.16(s,1H),5.08(s,2H),4.40–4.29(m,2H),4.15-3.95(m 5H),3.29(d,J＝6.2Hz,2H),3.21(s,2H),2.91-2.70(m,2H),2.35-2.15(m,2H),1.90(d,J＝9.5Hz,2H),1.85-1.60(m,7H),1.12-.1.02(m,2H).
步骤10：N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((哌啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001502
向4-((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(170mg,0.24mmol)的EA(20mL)溶液中加入Pd(OH)2/C(80mg)。然后反应液在H2氛围中70℃下搅拌过夜。反应液经硅藻土过滤，滤液直接减压浓缩得到N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((哌啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝562.3.
步骤11：N-(2-((1S,4S)-4-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲氧基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001511
将N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((哌啶-4-基甲氧基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺(130mg,0.23mmol)，4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(121mg,0.28mmol)和DIEA(89mg,0.69mmol)在DMSO(6mL)中的混合液在室温搅拌过夜。反应液加水(50mL)稀释，用DCM(20mL×3)。有机相用饱和食盐水(60mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经Prep-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(2-((1S,4S)-4-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲氧基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝812.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(d,J＝7.5Hz,2H),8.69(s,1H),8.46(d,J＝7.7Hz,1H),8.40(t,J＝7.8Hz,1H),8.32(s,1H),8.21(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝8.2Hz,1H),7.57(d,J＝1.4Hz,1H),7.40(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),7.16(s,1H),4.58–4.29(m,3H),3.99(s,3H),3.84–3.55(m,3H),3.33–3.28(m,2H),3.22(s,2H),3.13-3.03(m,1H),2.88–2.70(m,3H),2.35-2.20(m,2H),1.94–1.59(m,9H),1.21-1.15(m,2H).
实施例9：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-(((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001512
0℃向((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(1.0g,3.64mmol)的无水THF(30mL)溶液中加NaH(60％,580mg,14.5mmol)，然后在室温搅拌1h后，加入4-(2-(对甲苯磺酰基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.79g,7.28mmol)和KI(1.21g,7.28mmol)，反应液在70℃搅拌过夜。向反应液中缓慢加水(50mL)，用EtOAc(100mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(EA:PE＝0～7:13)纯化得到4-(2-(((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝509.2.
步骤2：4-(2-(((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001521
向4-(2-(((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(185mg,0.38mmol)的乙醇(10mL)溶液中加Raney-Ni(0.4mL)和水合肼(85％,0.4mL)，然后反应液在室温搅拌1h。过滤，滤液直接减压浓缩得到4-(2-(((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝457.2.
步骤3：4-(2-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基l)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001522
向4-(2-(((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg,0.33mmol)的DMF(5mL)溶液中加入5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(86mg,0.33mmol)，HATU(188mg,0.50mmol)和DIEA(128mg,0.99mmol)。反应液在室温搅拌2h。反应液中加水(50mL)稀释，然后用EA(50mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经反相(CH3CN/H2O(0.5％FA),5％～95％,)纯化得到4-(2-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基l)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝721.2.
步骤4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001531
将4-(2-(((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基l)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.11mmol)在TFA/DCM(3mL,1/5)中的反应液在室温搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。所得产物直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝599.3
步骤5：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001532
将5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80mg,0.13mmol)，3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(58mg,0.13mmol)和DIEA(86mg,0.66mmol)的DMSO(5mL)溶液在室温搅拌过夜。反应液倒入水中(50mL)并搅拌10min。过滤，滤饼经flash柱(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝849.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.50(d,J＝5.7Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.39(d,J＝4.3Hz,1H),8.25(d,J＝5.6Hz,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.38(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.29–6.93(m,1H),6.90-6.40(m,1H),5.30-5.03(m,1H),4.77(d,J＝17.2Hz,1H),4.50-4.35(m,1H),4.24-4.11(m,1H),3.86–3.70(m,3H),3.66–3.52(m,3H),3.50-3.40(m,3H),3.22(d,J＝6.4Hz,2H),3.12-2.95(m,1H),2.83-2.70(m,3H),2.08–1.91(m,4H),1.88–1.54(m,8H),1.55–1.44(m,2H),1.19-1.04(m,4H).
实施例10：N-(2-((1S,4S)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺
步骤1：4-(2-((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001541
0℃向(4-羟基-4-(羟基甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(770mg,3.13mmol)的THF(20mL)溶液中加NaH(376mg,9.4mmol)，并在0℃搅拌2h，然后加入4-(2-(对甲苯磺酰基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(2.62g,6.26mmol)和KI(1.04g,6.26mmol)。反应液在70℃搅拌过夜。反应液加水(50mL)稀释，用EA(30mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(EA:PE＝0～3:2)得到4-(2-((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝513.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.41–7.29(m,5H),6.67(d,J＝7.5Hz,1H),5.06(s,2H),4.05-3.90(m,3H),3.42(t,J＝6.4Hz,2H),3.10(s,3H),2.88-2.68(m,2H),1.65(d,J＝12.6Hz,2H),1.55-1.32(m,20H),1.13-0.92(m,2H).
步骤2：4-(2-((4-氨基-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001542
-10～0℃时，搅拌下向4-(2-((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(270mg,0.55mmol)的DCM(3mL)溶液中加TFA(1.2mL)，然后反应液在室温搅拌2h。反应液中加DIEA调节pH至9.0，减压浓缩得到4-(2-((4-氨基-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝391.2.
步骤3：4-(2-(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001543
搅拌下向4-(2-((4-氨基-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(400mg,0.55mmol)的甲苯(15mL)溶液中加2-叠氮-4-甲氧基-5-硝基苯甲醛(150mg,0.66mmol)。反应液在100℃搅拌3h。反应液减压浓缩，所得粗品经flash柱(EA:PE＝0～9:1)纯化得到4-(2-(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝567.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.38(s,1H),7.41–7.29(m,5H),7.27(s,1H),5.07(s,2H),4.50-4.40(m,1H),4.34(s,1H),4.05-3.95(m,2H),3.91(s,3H),3.47(t,J＝6.4Hz,2H),3.21(s,2H),2.90-2.70(m,2H),2.35–2.19(m,2H),1.90(d,J＝9.7Hz,2H),1.75-1.50(m,7H),1.50-1.40(m,2H),1.11–0.98(m,2H).
步骤4：4-(2-(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001551
向4-(2-(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(250mg,0.44mmol)的EtOH(20mL)溶液中加Raney-Ni(0.5mL)和N2H4.H2O(0.5mL)。反应液在室温搅拌2h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到4-(2-(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。所得产物直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝537.3
步骤5：4-(2-(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001552
边搅拌边向4-(2-(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(236mg,0.44mmol)的DMF(5mL)溶液中加6-(三氟甲基)吡啶甲酸(101mg,0.53mmol)，HATU(217mg,0.57mmol)和DIEA(170mg,1.32mmol)。然后反应液在室温搅拌2h。反应液中加水(50mL)稀释，用EA(20mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(60mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(EA:PE＝0～4:1)纯化得到4-(2-(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝710.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),8.69(s,1H),8.46(d,J＝7.7Hz,1H),8.40(t,J＝7.8Hz,1H),8.32(s,1H),8.21(d,J＝7.7Hz,1H),7.41–7.28(m,5H),7.16(s,1H),5.06(s,2H),4.40-4.20(m,2H),4.10-3.90(m,5H),3.47(t,J＝6.4Hz,2H),3.21(s,2H),2.90-2.70(m,2H),2.32–2.18(m,2H),1.90(d,J＝10.4Hz,2H),1.72-1.53(m,7H),1.52-1.40(m,2H),1.15-1.00(m,2H).
步骤6：N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001561
向4-(2-(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(200mg,0.28mmol)的EA(20mL)溶液中加Pd(OH)2/C(100mg)。然后反应液在H2氛围中70℃下搅拌过夜。反应液经硅藻土过滤，滤液浓缩得到N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺，所得产品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝576.2.
步骤7：N-(2-((1S,4S)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001562
将N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺(130mg,0.22mmol)，4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(118mg,0.27mmol)和DIEA(87mg,0.68mmol的DMSO(3mL)溶液在室温搅拌过夜。反应液加水(30mL)稀释，用DCM(10mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到N-(2-((1S,4S)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝826.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(d,J＝5.7Hz,2H),8.69(s,1H),8.46(d,J＝7.8Hz,1H),8.41(t,J＝7.8Hz,1H),8.33(s,1H),8.22(d,J＝7.7Hz,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.8Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.16(s,1H),4.50-4.26(m,3H),3.98(s,3H),3.83–3.53(m,3H),3.48(t,J＝6.3Hz,2H),3.21(s,2H),3.13-2.97(m,1H),2.86–2.71(m,3H),2.32–2.18(m,2H),1.90(d,J＝9.8Hz,2H),1.85-1.45(m,9H),1.15-1.05(m,2H).
实施例11：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-(苯基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001571
N2保护下，向4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g,4.41mmol)的DCE(3mL)溶液中加N-甲基-1-苯基甲胺(1.067g,8.82mmol)和AcOH(0.79g,13.23mmol)，混合液在室温搅拌30min后，再加入STAB(2.8g,13.23mmol)，然后反应液在室温搅拌2h。反应液中加水(20mL)稀释，用EA(30mL×2)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析(MeOH:DCM＝0～1:20)纯化得到4-(2-(苯基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝333.2.
步骤2：4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001572
向4-(2-(苯基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g,3.01mmol)的THF(3mL)溶液中加Pd(OH)2/C(250mg)，然后反应液在H2氛围中室温下搅拌2h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝243.2.
步骤3：4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001573
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(300mg,0.618mmol)的THF(3mL)溶液中加4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(329mg,0.928mmol)和STAB(419mg,1.862mmol)，然后反应在N2氛围中室温下搅拌2h。反应加水(20mL)淬灭，用DCM(20mL×2)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝712.4.
步骤4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001581
向4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.281mmol)的DCM(3mL)溶液中加TFA(1mL)，然后反应液在N2氛围中室温下搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝612.4.
步骤5：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001582
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(175mg,0.521mmol)的DMSO(3mL)溶液中加DIEA(109mg,1.564mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(134mg,1.043mmol)，然后反应液在室温搅拌3h。反应液中加水(15mL)，用DCM(30mL×2)萃取，无水Na2SO4干燥，有机相减压浓缩，所得粗品经Prep-HPLC(乙腈/0.05％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝862.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.50(d,J＝6.0Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.38(d,J＝4.4Hz,1H),8.25(d,J＝5.6Hz,1H),7.62(t,J＝7.7Hz,1H),7.54(d,J＝1.9Hz,1H),7.38(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.26-6.95(m,1H),6.90-6.42(m,1H),5.31-5.05(m,1H),4.77(d,J＝17.3Hz,1H),4.52-4.34(m,1H),4.24-4.12(m,1H),3.86-3.70(m,3H),3.65–3.53(m,3H),3.45(d,J＝10.0Hz,1H),3.11-2.94(m,1H),2.77–2.65(m,3H),2.29(t,J＝7.0Hz,2H),2.15–2.07(m,5H),2.05–1.82(m,6H),1.80–1.68(m,3H),1.66-1.46(m,3H),1.41-1.32(m,2H),1.18–0.95(m,4H).
实施例12：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丙-2-炔基-1-基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(3-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丙-1-炔基-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001591
将5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150mg,TFA盐,0.33mmol)，4-(3-溴丙-1-炔基-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(99mg,0.33mmol)和K2CO3(227mg,1.65mmol)在THF(20mL)中的混合液在70℃搅拌过夜。反应液加水(20mL)稀释，用DCM(20mL×3)萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗品经flash柱(EA:PE＝0～1)纯化得到4-(3-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丙-1-炔基-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝680.3.
步骤2：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(哌啶-4-基)丙-2-炔基-1-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001592
将4-(3-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丙-1-炔基-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg,0.10mmol)的TFA/DCM(3mL,1/5)混合液在室温搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(哌啶-4-基)丙-2-炔基-1-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。所得产品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝580.2.
步骤3：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丙-2-炔基-1-基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001601
将5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(哌啶-4-基)丙-2-炔基-1-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(70mg,crude,0.12mmol)，4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(52mg,0.12mmol)和DIEA(774mg,0.60mmol)在DMSO(5mL)中的混合液在室温搅拌过夜。反应液倒入水(50mL)中并搅拌10min。过滤，滤饼经flash柱(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丙-2-炔基-1-基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝830.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.51(d,J＝5.8Hz,1H),8.79(d,J＝7.7Hz,1H),8.42(s,1H),8.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.58(d,J＝1.9Hz,1H),7.41(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.28-6.97(m,1H),6.90-6.43(m,1H),5.30-5.02(m,1H),4.77(d,J＝18.9Hz,1H),4.30–4.20(m,1H),4.18–3.90(m,1H),3.88-3.70(m,3H),3.68–3.56(m,3H),3.54–3.36(m,3H),3.30–3.21(m,2H),3.00–2.64(m,5H),2.40-2.20(m,2H),2.12–1.73(m,8H),1.62–1.42(m,2H).
实施例13：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001602
将N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(160mg,0.26mmol)，3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(110mg,0.26mmol)和DIEA(168mg,1.3mmol)在DMSO(5mL)中的混合物在室温搅拌过夜。反应液倒入水中(50mL)并搅拌10min。过滤，滤饼经Prep-HPLC纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝870.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),9.50(d,J＝5.7Hz,1H),8.79(d,J＝7.7Hz,1H),8.39(d,J＝4.0Hz,1H),8.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.41–7.29(m,2H),7.27–6.95(m,2H),6.91-6.40(m,1H),5.31-5.00(m,1H),4.77(d,J＝17.5Hz,1H),4.27-4.15(m,1H),3.86–3.71(m,5H),3.65–3.39(m,8H),2.89(d,J＝10.4Hz,2H),2.68(t,J＝6.5Hz,2H),2.15(d,J＝6.1Hz,2H),2.08–1.87(m,8H),1.76-1.65(m,2H),1.63-1.38(m,5H),1.36-1.21(m,2H),1.19-0.95(m,4H).
实施例14：5-((1R,4R)-2氧杂--5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001611
将IBX(2.88g,10.285mmol)加入到4-(3-羟基丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0g,4.115mmol)的ACN(30mL)溶液中，80℃搅拌2h，反应完成后，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(PE:EA＝1:1)纯化得到4-(3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.68(t,J＝1.5Hz,1H),3.96-3.86(m,2H),2.70-2.60(m,2H),2.46(td,J＝7.5,1.4Hz,2H),1.66-1.56(m,3H),1.56-1.36(m,4H),1.39(s,9H).
步骤2：4-(3-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001612
4-(3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(95mg,0.394mmol)和STAB(208mg,0.981mmol)加入到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150mg,0.327mmol)的THF(30mL)溶液中，室温搅拌2h，用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(PE:EA＝3:7)纯化得到4-(3-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝684.2.
步骤3：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001621
将TFA(5ml)加入到4-(3-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.293mmol)的DCM(20mL)溶液中，常温下搅拌2h，加饱和NaHCO3溶液调成碱性，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，减压浓缩，得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝584.2.
步骤4：5-((1R,4R)-2氧杂--5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001622
将5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150mg,0.257mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(134mg,0.308mmol)用DMSO(5mL)溶解，DIEA(100mg,0.775mmol)加入，然后室温搅拌2小时，水(50mL)加入到反应液中，搅拌2分钟，过滤，滤饼通过反相制备纯化得到5-((1R,4R)-2氧杂--5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝834.0.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.50(d,J＝5.8Hz,1H),8.79(d,J＝7.7Hz,1H),8.40(d,J＝3.7Hz,1H),8.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.8Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.27–6.96(m,1H),6.90-6.40(m,1H),5.30-5.05(m,1H),4.77(d,J＝17.5Hz,1H),4.52-4.33(m,1H),4.26-4.14(m,1H),3.85–3.72(m,3H),3.66–3.57(m,3H),3.45(d,J＝10.2Hz,1H),3.11-2.89(m,3H),2.79–2.66(m,3H),2.30(t,J＝6.9Hz,2H),2.09-1.84(m,9H),1.82-1.69(m,1H),1.68-1.58(m,1H),1.56-1.40(m,3H),1.30-1.20(m,2H),1.16-1.02(m,2H).
实施例15：N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001631
25℃时向5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(470mg,1.9mmol)和DIEA(1mL,4.7mmol)的DMF(20ml)溶液中加入HATU(900mg,2.4mmol)，混合物在25℃搅拌2h后再加入4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.5g,1.5mmol)，反应液再在25℃搅拌过夜。反应液中加水(30mL)，然后用EA(50mL×3)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(EA)纯化得到4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝547.4.
步骤2：N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001632
25℃时向4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.2g,0.366mmol)的DCM(3mL)溶液中加TFA(1mL)。反应液在25℃搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝447.2.
步骤3：9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001641
25℃时向N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg,0.45mmol)和DIEA(0.5ml,1.35mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入9-醛基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(150mg,0.45mmol)和NaBH3CN(100mg,2.25mmol)。反应液在25℃搅拌16h。过滤，减压浓缩，所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝3:97)纯化得到9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝712.4.
步骤4：N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001642
25℃时向9-((4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(0.14g,0.2mmol)的DCM(3mL)溶液中加TFA(1mL)。反应液在25℃搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。所得产品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝612.5.
步骤5：N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001643
25℃时向N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(110mg,0.18mmol)和1-(2-氯-5-五氟苯甲酰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(90mg,0.19mmol)的DMSO(2mL)溶液中加DIEA(0.1mL,0.54mmol)。反应液在25℃搅拌16h。反应液倒入水中(10mL)，过滤，滤饼经Prep-HPLC纯化得到.
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝862.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.25-6.95(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.26-4.14(m,1H),3.87–3.68(m,9H),3.66–3.50(m,3H),3.31–3.20(m,2H),2.95-2.83(m,2H),2.80–2.68(m,2H),2.21-2.08(m,2H),2.07–1.87(m,6H),1.70(d,J＝8.7Hz,2H),1.63–1.41(m,5H),1.38–1.25(m,2H),1.16–1.02(m,4H).
实施例16：5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400001651
向5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(2.0g,8.9mmol)的ACN(20mL)溶液中加8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.3g,8.9mmol)和DIEA(3.4g,26mmol)，然后反应液加热到60℃反应2h。反应加水(200mL)淬灭，用EA(200mL×2)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗产物经层析柱(PE:EA＝1～5:1)纯化得到5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝303.2.
步骤2：5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400001652
向5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(2.6g,8.6mmol)的H2O/MeOH(3ml/26mL)混合液中加LiOH(1.4g,34mmol)，然后反应液加热到60℃反应12h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩。所得粗产物经Prep-HPLC(乙腈/0.05％NH4OH水溶液,5％～95％)纯化得到5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝275.3.
步骤3：4-(4-(5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001661
向5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(274mg,1mmol)的DMF(5mL)溶液中加4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(316mg,1mmol)，HATU(456mg,1.2mmol)和DIEA(387mg,3mmol)，然后反应液在25℃反应12h。反应液倒入水中，然后用EA(50mL×2)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗产物经层析柱(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到4-(4-(5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝573.4.
步骤4：5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001662
将4-(4-(5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(240mg,0.42mmol)的HCl/1.4-二氧六环(5mL)溶液在室温搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝473.4.
步骤5：9-((4-(4-(5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001663
向5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(130mg,0.27mmol)的THF(10mL)溶液中加9-醛基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(77mg,0.27mmol和STAB(175mg,0.8mmol)。然后反应液在25℃搅拌12h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩。所得粗产物经柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到9-((4-(4-(5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝738.3.
步骤6：N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001671
将9-((4-(4-(5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(100mg,0.14mmol)的HCl/1.4-二氧六环(4mL)溶液在25℃搅拌1h。然后反应液直接减压浓缩得到N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝638.3.
步骤7：5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001672
向N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150.0mg,0.24mmol)的DMSO(2mL)溶液中加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(123mg,0.28mmol)和DIEA(93mg,0.72mmol)，然后反应液在室温搅拌12h。反应液倒入水(20mL)中，用EA(30mL×2)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，减压浓缩。所得粗品经Prep-HPLC(乙腈/0.05％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝884.5.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),9.41(s,1H),8.81(d,J＝7.8Hz,1H),8.39(s,1H),8.28(d,J＝1.3Hz,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.27–6.95(m,2H),6.82(d,J＝7.9Hz,1H),4.50-4.37(m,2H),4.30-4.00(m,2H),3.84(s,3H),3.68-3.34(m,6H),3.28-3.11(m,2H),2.98-2.78(m,2H),2.73-2.60(m,2H),2.22–1.63(m,14H),1.61–1.17(m,8H),1.18-0.93(m,4H).
实施例17：N-(2-((1S,4S)-4-((((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺
步骤1：(4-羟基-4-(甲基氨基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001681
向(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯(4.2g,18.42mmol)的EtOH/H2O(90mL/15mL)混合液中加甲胺(40mL,25％～30％水溶液)。然后反应液在25℃搅拌过夜。反应液直接减压浓缩，所得粗品经flash(MeOH:DCM＝0～1:1)纯化得到(4-羟基-4-(甲基氨基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝259.2.
步骤2：((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001682
将(4-羟基-4-(甲基氨基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g,4.61mmol)和氯甲酸苄酯(941mg,5.53mmol)的ACN/sat.NaHCO3(20mL/20mL)的混合液在室温搅拌过夜。反应液用水(50mL)稀释，然后用EA(50mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash(EA:PE＝0～7:3)纯化得到((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝415.2.
步骤3：((4-氨基-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001683
0℃时，边搅拌边向((4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯(1.5g,3.81mmol)的DCM(15mL)溶液中加TFA(5mL)，然后反应液在0℃搅拌2h。反应液用DIEA调节pH至9.0，然后直接减压浓缩得到((4-氨基-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯，所得粗品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝293.1.
步骤4：(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001691
搅拌下向((4-氨基-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯(1.5g,3.8mmol)的甲苯(40mL)溶液中加2-叠氮-4-甲氧基-5-硝基苯甲醛(1.2g,5.7mmol)。反应液在100℃搅拌3h。反应液直接减压浓缩。所得粗品经flash柱(EA:PE＝0～1)纯化得到(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝469.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),8.38(s,1H),7.45–7.23(m,6H),5.09(s,2H),4.66-4.36(m,2H),3.91(s,3H),3.28(s,2H),3.10-2.95(m,3H),2.30-2.20(m,2H),1.95-1.60(m,2H),1.78-1.63(m,2H),1.59–1.41(m,2H).
步骤5：(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001692
向(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯(1.1g,2.34mmol)的EtOH(20mL)溶液中加N2H4 H2O(1.2mL)和Raney-Ni(0.5mL)。反应液在室温搅拌2h。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯，所得粗品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝439.2
步骤6：(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001693
搅拌下向(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲哚-2-基)-1-羟基环己基甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯(940mg,2.14mmol)的DMF(10mL)溶液中加6-(三氟甲基)吡啶甲酸(538mg,2.78mmol)，HATU(1.06g,2.78mmol)和DIEA(828mg,6.42mmol)。然后反应液在室温搅拌过夜。反应液加水(100mL)稀释，用EA(30mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(EA:PE＝0～9:1)纯化得到(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝612.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),8.69(s,1H),8.46(d,J＝7.5Hz,1H),8.40(t,J＝7.8Hz,1H),8.31(s,1H),8.21(dd,J＝7.7,1.0Hz,1H),7.42–7.28(m,5H),7.16(s,1H),5.09(s,2H),4.60-4.31(m,2H),3.98(s,3H),3.28(s,2H),3.10-2.95(m,3H),2.30-2.15(m,2H),1.95-1.60(m,2H),1.67(t,J＝14.9Hz,2H),1.57–1.40(m,2H).
步骤7：N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((甲基氨基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001701
向(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基甲酸苄酯(500mg,0.81mmol)的EA(20mL)溶液中加Pd(OH)2/C(200mg)。然后反应液在H2氛围下70℃下搅拌过夜。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((甲基氨基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺，所得粗品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝478.1.
步骤8：9-(((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001702
将N-(2-((1S,4S)-4-羟基-4-((甲基氨基)甲基)环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺(200mg,0.41mmol)，9-醛基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(141mg,0.50mmol)和STAB(434mg,2.05mmol)在THF(10mL)中的混合液在室温搅拌过夜。反应液加水(30mL)稀释，然后用DCM(10mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到9-(((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝743.3.
步骤9：N-(2-((1S,4S)-4-((((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001711
0℃向9-(((((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲哚-2-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(200mg,0.27mmol)的DCM(5mL)溶液中加TFA(2mL)。然后反应液在室温搅拌2h。反应液用DIE调节pH至9.0。有机相用水(100mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩得到N-(2-((1S,4S)-4-((((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺，所得粗品直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝643.3.
步骤10：N-(2-((1S,4S)-4-((((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001712
将N-(2-((1S,4S)-4-((((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺(130mg,0.20mmol)，4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(105mg,0.24mmol)和DIEA(77mg,0.60mmol)在DMSO(5mL)中的混合液在室温搅拌过夜。反应液加水(50mL)稀释，然后用DCM(20mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(60mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经Prep-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(2-((1S,4S)-4-((((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝893.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,2H),8.69(s,1H),8.47(d,J＝7.8Hz,1H),8.41(t,J＝7.8Hz,1H),8.32(s,1H),8.22(d,J＝7.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.7Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.15(s,1H),4.37-4.27(m,1H),4.10-3.90(m,4H),3.82–3.49(m,4H),3.35-3.25(m,1H),2.80-2.70(m,2H),2.36-2.15(m,9H),1.95-1.85(m,2H),1.78–1.22(m,14H),1.18-0.98(m,4H).
实施例18：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-((2-羟基乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001721
0℃时N2保护下向4-((2-甲氧基-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸甲酯(1.1g,3.83mmol)的无水THF(30mL)溶液中滴加LiAlH4(1.0mol/L,5.8mL)，然后反应液在室温搅拌3h。边搅拌边向反应液中缓慢滴加15％NaOH溶液，过滤，滤液用EA(30mL×2)，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析(MeOH:DCM＝0～3:97)纯化得到4-((2-羟基乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝260.1.
步骤2：4-((2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001722
将4-((2-羟基乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(700mg,2.7mmol)和IBX(1.5g,5.4mmol)在乙腈(15mL)中的混合液在80℃搅拌2h。过滤，加水(30mL)稀释，用EA(30mL×2)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析(EA:PE＝0～2:3)纯化得到4-((2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-t-Bu]+＝202.1.
步骤3：4-((2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001723
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(220.0mg,0.48mmol)和4-((2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(185.2mg,0.72mmol)的THF(5mL)溶液中加STAB(277.8mg,1.44mmol)。然后反应液在室温搅拌4h。加水(20mL)淬灭反应，然后用DCM(20mL×2)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到4-((2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝700.2.
步骤4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基甲氧基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001731
向4-((2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(150.0mg,0.214mmol)的DCM(3.0mL)溶液中加TFA(1.0mL)，反应液在室温搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基甲氧基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝600.4.
步骤5：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001732
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基甲氧基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(120.0mg,0.2mmol)的DMSO(5.0mL)溶液中加DIEA(77.5mg,0.6mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(95.6mg,0.22mmol)，然后反应液在室温搅拌2h。反应加水(15mL)淬灭，然后用DCM(30mL×2)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经Prep-HPLC(乙腈/0.05％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝850.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.50(d,J＝5.6Hz,1H),8.79(d,J＝7.7Hz,1H),8.39(d,J＝3.8Hz,1H),8.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝2.0Hz,1H),7.38(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.25-6.95(m,1H),6.91-6.40(m,1H),5.30-5.05(m,1H),4.77(d,J＝17.6Hz,1H),4.55-4.35(m,1H),4.28-4.10(m,1H),3.83-3.75(m,3H),3.66-3.57(m,3H),3.53-3.42(m,3H),3.30-3.26(m,2H),3.06-2.96(m,3H),2.77-2.66(m,3H),2.34-2.20(m,3H),2.06-1.85(m,10H),1.14-1.08(m,2H).
实施例19：N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400001741
将5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(3.0g,13.3mmol)和benzyl哌嗪-1-羧酸苄酯(2.9g,13.3mmol)溶于ACN(30mL)溶液中，再加DIEA(5.2g,40mmol)，将反应液加热到60℃搅拌2小时，减压浓缩，粗品用乙酸乙酯(100mL)溶解，饱和食盐水洗，减压浓缩，粗品用柱层析(PE:EA＝2:1)纯化得到5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝410.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(d,J＝7.9Hz,1H),8.22(s,1H),7.41–7.33(m,5H),6.86(d,J＝7.9Hz,1H),5.13(s,2H),4.19(q,J＝7.1Hz,2H),3.88-3.74(m,4H),3.62-3.49(m,4H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2：5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400001742
将5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(2.6g,6.3mmol)溶于甲醇(26mL)中，加入氢氧化锂(1.0g,25.2mmol)，反应液60℃搅拌2小时，反应结束后向反应液加稀盐酸(2mol/L)使反应液pH至2，然后过滤，所得滤饼用水洗并真空干燥得到5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝382.2.
步骤3：4-(3-((1-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001751
25℃时向5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(270mg,0.4mmol和DIEA(0.5ml,1.0mmol)的DMF(5ml)溶液中加HATU(380mg,0.50mmol)，然后在室温搅拌2h后再加4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.21g,0.3mmol)，反应液在25℃搅拌过夜。反应加水(30mL)淬灭，用EA(50mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，所得粗品经层析柱(MeOH:DCM＝0～3:97)纯化得到4-(3-((1-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝680.4.
步骤4：4-(3-((3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001752
向4-(3-((1-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(0.29g,0.42mmol)的DCM(5mL)溶液中加TFA(1mL)，然后反应液在室温搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到4-(3-((3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯.
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝580.5.
步骤5：9-((4-(4-(5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001761
向4-(3-((3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(230mg,0.4mmol)和DIEA(0.35mL,2.0mmol)的MeOH(10mL)溶液中9-醛基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(144mg,0.45mmol)和NaBH3CN(138mg,1.2mmol)。反应液在25℃搅拌过夜。反应加水(30mL)淬灭，然后用EA(50mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝0～3:97)纯化得到9-((4-(4-(5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝845.5.
步骤6：4-(3-((1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001762
向9-((4-(4-(5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(0.29g,0.34mmol)的DCM(3mL)溶液中加TFA(1mL)，然后在25℃搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到4-(3-((1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝745.4.
步骤7：4-(3-((1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001763
向4-(3-((1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(240mg,0.32mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(144mg,0.33mmol)的DMSO(5mL)溶液中加DIEA(0.1mL,0.6mmol)。然后反应液在25℃搅拌16h。反应液中加水(30mL)，用EA(50mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝0～3:97)纯化得到4-(3-((1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝995.0.
步骤8：N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001771
0℃时向4-(3-((1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(290mg,0.29mmol)的DCM(15mL)溶液中加碘代三甲硅烷(0.85mL,0.6mmol)，然后反应液在25℃搅拌16h。反应液倒入水中，用DCM(20mL×3)萃取，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，所得粗品经Prep-HPLC纯化得到N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝861.1.
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.62(d,J＝7.9Hz,1H),8.43(brs,2.67H,FA),8.35(s,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.54(d,J＝1.6Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,1H),7.08–6.77(m,2H),4.57-4.43(m,1H),4.15-4.03(m,4H),3.79(t,J＝6.4Hz,2H),3.75-3.65(m,2H),3.63-3.48(m,2H),3.47-3.37(m,2H),3.37-3.30(m,2H),3.05-2.95(m,2H),2.95-2.77(m,4H),2.43-2.27(m,4H),1.92-1.75(m,3H),1.74-1.65(m,3H),1.65-1.45(m,2H),1.39-1.12(m,5H).
实施例20：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：(2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)(甲基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯的制备
Figure BDA0003811544400001781
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(120mg,0.26mmol)的THF(10mL)溶液中加甲基(2-氧代乙基)羧酸(9H-芴-9-基)甲基(91mg,0.31mmol)和STAB(165mg,0.78mmol)。反应液在室温搅拌16h。反应加水(50mL)淬灭，用DCM(20mL×3)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到(2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)(甲基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝738.5.
步骤2：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001782
向(2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)(甲基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯(120mg,0.16mmol)的DCM(5mL)溶液中加吡啶(0.1mL)。反应液在室温搅拌16h。反应液直接减压浓缩。所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝516.6.
步骤3：4-(((2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001791
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(90mg,0.17mmol)的THF(10mL溶液中加4-醛基哌啶-1-羧酸叔丁酯(54mg,0.26mmol)和STAB(108mg,0.51mmol)。反应液在室温搅拌16h。反应加水(50mL)淬灭，用DCM(20mL×3)萃取。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经flash柱(MeOH:DCM＝0～1:4)纯化得到4-(((2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝713.4.
步骤4：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001792
向4-(((2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.14mmol)的DCM(5mL)溶液中加TFA(1mL)。反应液在室温搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，所得产物直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝613.3.
步骤5：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001801
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80mg,0.13mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(67mg,0.156mmol)的DMSO(2mL)溶液中加DIEA(52mg,0.4mmol)。然后反应液在室温搅拌2h。反应液倒入水中，过滤，滤饼经Prep-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝863.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.49(s,1H),9.50(d,J＝5.8Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.39(d,J＝3.6Hz,1H),8.25(d,J＝5.6Hz,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝1.9Hz,1H),7.38(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.25-6.95(m,1H),6.92-6.43(m,1H),5.40-5.06(m,1H),4.77(d,J＝17.3Hz,1H),4.60-4.40(m,1H),4.30-4.10(m,1H),3.92-3.75(m3H),3.68–3.56(m,3H),3.55-3.45(m,1H),3.10-2.90(m,3H),2.84–2.68(m,3H),2.48-2.40(m,4H),2.24-1.55(m,16H),
实施例21：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(4-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001802
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(110mg,0.24mmol)的THF(5mL)溶液中加4-(4-氧代丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.36mmol)和STAB(170mg,0.71mmol)。反应液在25℃搅拌2h。反应加水(30mL)淬灭，用DCM(30mL×3)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得粗产物经flash柱(MeOH:DCM＝0～3:97)纯化得到4-(4-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝698.0.
步骤2：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(哌啶-4-基)丁基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001811
向4-(4-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.2g,0.26mmol)的DCM(5mL)溶液中加TFA(1mL)。反应液在25℃搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(哌啶-4-基)丁基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝598.1.
步骤3：5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001812
向5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(哌啶-4-基)丁基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(160mg,0.26mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(130mg,0.26mmol)的DMSO(4mL)溶液中加DIEA(0.14mL,0.78mmol)。反应液在25℃搅拌2h。反应加水(10mL)淬灭，用DCM(20mL×3)萃取，用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，所得粗品经Prep-HPLC纯化得到5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝848.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.49(s,1H),9.50(d,J＝5.3Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.40(s,1H),8.25(d,J＝5.0Hz,1H),7.63(d,J＝8.3Hz,1H),7.54(s,1H),7.38(d,J＝8.1Hz,1H),7.20-7.00(m,1H),6.98-6.45(m,1H),5.40-5.05(m,1H),4.77(d,J＝17.3Hz,1H),4.54-4.34(m,1H),4.28-4.12(m,1H),3.83–3.72(m,3H),3.67–3.57(m,3H),3.45(d,J＝9.6Hz,1H),3.02-2.85(m,3H),2.80-2.70(m,2H),2.36-2.26(m,2H),2.08–1.88(m,8H),1.76–1.47(m,4H),1.47-1.22(m,6H),1.18-1.02(m,2H).
实施例22：N-(2-((1S,4S)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)-4-甲氧基环己基)-6-甲氧基-2H-吲哚-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶酰胺
步骤1：4-(2-(((1S,4S)-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲唑-2-基)-1-((甲硫基)甲氧基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001821
将化合物4-(2-(((1S,4S)-1-羟基-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲唑-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(700mg,1.24mmol)和Ac2O(151mg,1.48mmol)溶于无水DMSO(20mL)中，氮气保护下室温搅拌16h。反应液中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:9)纯化，得到4-(2-(((1S,4S)-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲唑-2-基)-1-((甲硫基)甲氧基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝627.2.
步骤2：4-(2-(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-1-甲氧基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001822
将化合物4-(2-(((1S,4S)-4-(6-甲氧基-5-硝基-2H-吲唑-2-基)-1-((甲硫基)甲氧基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(600mg,0.96mmol)和预处理后的Raney-Ni(200mg)(预处理方法：先用水洗3次，再用丙酮洗3次，最后用乙醇洗3次)溶于无水乙醇(50mL)中，氢气气氛下，室温搅拌3h，过滤，滤液直接减压浓缩，粗品使用反相硅胶柱(ACN:H2O＝1:1，流速40mL/min)纯化，得到4-(2-(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-1-甲氧基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝551.3.
步骤3：4-(2-(((1S,4S)-1-甲氧基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲唑-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001831
将化合物6-(三氟甲基)吡啶甲酸(60mg,0.3mmol),HATU(114mg,0.3mmol)和DIEA(100mg,0.78mmol)溶于DMF(10mL)中，室温搅拌20min后，加入4-(2-(((1S,4S)-4-(5-氨基-6-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-1-甲氧基环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(150mg,0.26mmol)，室温反应1h。反应液中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:1)纯化，得到4-(2-(((1S,4S)-1-甲氧基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲唑-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝724.4.
步骤4：N-(6-甲氧基-2-((1S,4S)-4-甲氧基-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-2H-吲唑-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001832
4-(2-(((1S,4S)-1-甲氧基-4-(6-甲氧基-5-(6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺)-2H-吲唑-2-基)环己基)甲氧基)乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(70mg,0.097mmol)溶解于三氟乙酸(3mL)中，升温至90℃搅拌1小时，反应液直接减压浓缩得到N-(6-甲氧基-2-((1S,4S)-4-甲氧基-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-2H-吲唑-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝590.4.
步骤5：N-(2-((1S,4S)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)-4-甲氧基环己基)-6-甲氧基-2H-吲唑-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001833
N-(6-甲氧基-2-((1S,4S)-4-甲氧基-4-((2-(哌啶-4-基)乙氧基)甲基)环己基)-2H-吲唑-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺(70mg,0.097mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(48mg,0.11mmol)和N,N-二异丙基乙胺(37mg,0.29mmol)。室温下搅拌2小时后，加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，饱和食盐水(3x 60mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，粗品经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(2-((1S,4S)-4-((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙氧基)甲基)-4-甲氧基环己基)-6-甲氧基-2H-吲唑-5-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝840.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(d,J＝4.5Hz,2H),8.68(s,1H),8.49–8.37(m,2H),8.32(s,1H),8.22(d,J＝7.6Hz,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.18(s,1H),4.52-4.30(m,2H),3.98(s,3H),3.80–3.52(m,3H),3.47(t,J＝6.2Hz,2H),3.34(s,2H),3.19(s,3H),3.15-2.95(m,1H),2.85–2.70(m,3H),2.19-1.97(m,2H),-1.96-1.85(m,4H),1.85-1.55(m,3H),1.55-1.45(m,4H),1.25-1.05(m,2H).
实施例23：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)氧)丙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(3-羟基丙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400001841
4-(3-甲氧基-3-氧丙基)哌啶-1-羧酸苄酯(500mg,1.49mmol)溶解于无水THF(10mL)中，0℃下加入BH3/THF溶液(15mL,14.9mmol)，室温搅拌16小时。向反应液加入甲醇淬灭，减压浓缩得到粗品。粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝9:1)纯化得到4-(3-羟基丙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝294.2.
步骤2：3-(哌啶-4-基氧)丙烷-1-醇的制备
Figure BDA0003811544400001842
4-(3-羟基丙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(200mg,0.68mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)中，加入Pd(OH)2/C(80mg)，在氢气氛围下升温至70℃，搅拌过夜。反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到3-(哌啶-4-基氧)丙烷-1-醇，粗品无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝160.2.
步骤3：1-(2-氯-5-(4-(3-羟基丙氧基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400001843
3-(哌啶-4-基氧)丙烷-1-醇(100mg,0.62mmol)溶解于DMSO(10mL)中，加入4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(300mg,0.69mmol)和DIEA(240mg,1.86mmol)，室温下搅拌2小时。向反应液加入水(100mL)，用二氯甲烷(30mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到1-(2-氯-5-(4-(3-羟基丙氧基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝410.1.
步骤4：3-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)氧)丙醛的制备
Figure BDA0003811544400001851
1-(2-氯-5-(4-(3-羟基丙氧基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(60mg,0.147mmol)溶解于DCM(5mL)中，加入PCC(63mg,0.294mmol)，室温下搅拌16小时。反应液减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到3-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)氧)丙醛。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝408.1.
步骤5：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)氧)丙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001852
3-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)氧)丙醛(55mg,0.135mmol)溶于THF(5mL)中，加5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(粗产品:70mg,0.135mmol)和STAB(86mg,0.405mmol)，室温下搅拌2小时。向反应液加入水(100mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。粗品经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(3-((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)氧)丙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝850.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.50(d,J＝5.7Hz,1H),8.79(d,J＝7.8Hz,1H),8.40(d,J＝3.2Hz,1H),8.26(d,J＝5.5Hz,1H),7.67–7.55(m,2H),7.40(d,J＝8.7Hz,1H),7.30-6.92(m,1H),6.88-6.45(m,1H),5.28-5.08(m,1H),4.77(d,J＝17.7Hz,1H),4.30-4.10(m,1H),4.02–3.68(m,4H),3.62-3.47(m,7H),3.30-3.10(m,2H),3.00-2.85(m,2H),2.78–2.69(m,2H),2.45-2.31(m,2H),2.10-1.55(m,12H),1.52-1.37(m,2H).
实施例24：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001861
N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.14mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酸五氟苯酯(58mg,0.14mmol)和N,N-二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)。室温下搅拌2小时后，加水(50mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝846.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.50(d,J＝7.7Hz,1H),7.36(d,J＝4.0Hz,2H),7.23-6.97(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.25–4.15(m,1H),3.84–3.69(m,10H),3.65-3.49(m,2H),3.31–3.24(m,2H),2.89(d,J＝10.3Hz,2H),2.73(t,J＝6.6Hz,2H),2.20-2.04(m,2H),2.04-1.80(m,6H),1.70-1.43(m,7H),1.43-1.20(m,2H),1.20-0.96(m,4H).
实施例25：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001862
N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.14mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲基)苯甲酸五氟苯酯(65mg,0.14mmol)和N,N-二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)。室温下搅拌2小时后，加水(50mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝896.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.71(s,1H),7.59(d,J＝7.9Hz,1H),7.23-6.97(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.28-4.12(m,1H),3.94-3.80(m,1H),3.80-3.70(m,8H),3.65-3.55(m,2H),3.51–3.41(m,1H),3.30-3.20(m,2H),2.94-2.80(m,2H),2.75-2.60(m,2H),2.24-2.06(m,2H),2.06-1.90(m,6H),1.80-1.60(m,2H),1.60-1.30(m,6H),1.30-1.20(m,1H),1.17-0.92(m,4H).
实施例26：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(4-(2,6-氧代哌啶-3-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001871
N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.14mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯甲酸五氟苯酯(56mg,0.14mmol)和N,N-二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)。室温下搅拌2小时后，加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，饱和食盐水(60mL x 3)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(4-(2,6-氧代哌啶-3-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝827.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.40-7.25(m,4H),7.23-6.95(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.35-4.06(m,1H),3.97-3.88(m,1H),3.84–3.73(m,8H),3.64-3.50(m,2H),3.31-3.22(m,2H),2.92-2.80(m,2H),2.75-2.62(m,1H),2.56-2.51(m,1H),2.30-1.90(m,10H),1.76-1.25(m,9H),1.20-0.93(m,4H).
实施例27：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(4-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001881
N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.14mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入4-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(56mg,0.14mmol)和N,N-二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)。室温下搅拌2小时后，加水(50mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(4-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝828.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.39(s,4H),7.23-6.97(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.26–4.15(m,1H),3.92-3.70(m,10H),3.68-3.50(m,2H),3.31–3.22(m,2H),2.89(d,J＝10.1Hz,2H),2.72(t,J＝6.6Hz,2H),2.24-2.09(m,2H),2.07–1.84(m,6H),1.75-1.29(m,9H),1.18-0.92(m,4H).
实施例28：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(3-(3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001882
将N-(1-(1-(2-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(103mg,0.165mmol)和3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(85mg,0.198mmol)加入到DMSO(3mL)中，然后加入DIEA(63.8mg,0.495mmol)，室温搅拌16h,然后加入水(20mL)，用乙酸乙酯(25mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经Prep-HPLC制备纯化(乙腈/0.5％甲酸水溶液,5％～95％)得到产物N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(3-(3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的甲酸盐。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝872.5.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),8.27(s,0.62H,HCOOH),7.42–7.28(m,2H),7.26–6.94(m,2H),6.91(d,J＝7.9Hz,1H),4.30-4.10(m,1H),3.84(s,3H),3.79-3.61(m,8H),3.62–3.54(m,6H),2.97-2.91(m,2H),2.71-2.65(m,2H),2.37-2.17(m,2H),2.05–1.85(m,6H),1.75-1.62(m,2H),1.55–1.17(m,9H),1.17-0.93(m,4H).
实施例29：N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001891
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(醛基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(50mg,0.10mmol)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(24mg,0.10mmol)溶于THF(3mL)中，在搅拌下向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(67mg,0.32mmol)，反应液室温搅拌2h。向反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(30mL x 3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经正向柱层析纯化得到9-(((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝712.3.
步骤2：N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001892
将9-(((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(95mg,0.13mmol)溶于DCM(3mL)，加入TFA(1mL)，反应液室温搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(粗品)，直接用于下步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝612.3.
步骤3：N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001901
将N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(130mg,0.13mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(57mg,0.13mmol)溶于DMSO(5mL)中，在搅拌下向反应液中加入DIEA(84mg,0.65mmol)后，使反应液在室温下搅拌反应1h。反应结束后将反应液倒入水(50mL)中，用EA萃取(30mL x 3)，合并有机相并用饱和食盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后经prep-HPLC分离纯化得到N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝862.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.39(s,1H),8.82(d,J＝6.3Hz,1H),8.37(s,1H),8.28(s,1H),7.63(d,J＝7.9Hz,1H),7.55(s,1H),7.39(d,J＝7.9Hz,1H),7.25-6.95(m,1H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H),4.27-4.07(m,1H),3.90-3.50(m,12H),3.40-3.30(m,2H),2.79-2.70(m,2H),2.43-2.23(m,4H),2.20-1.95(m,4H),1.93-1.83(m,2H),1.82-1.30(m,11H),1.09-0.94(m,2H).
实施例30：N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001902
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(醛基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(110mg,0.23mmol)用THF(10mL)溶解，加入4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(56mg,0.23mmol)和STAB(146mg,0.69mmol)，室温反应2h，加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用柱层析(MeOH:DCM＝1:11)纯化得到4-(2-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝700.4.
步骤2：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001911
将4-(2-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(95mg，0.14mmol)溶于DCM(3mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h。反应额有直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝600.3.
步骤3：N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的准备
Figure BDA0003811544400001912
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(95mg,0.14mmol)溶于DMSO(5mL)，加入DIEA(77mg,0.60mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(61mg,0.14mmol)，室温反应2h。加水(50mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用反相制备得到N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝850.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.39(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.38(s,1H),8.29(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝1.8Hz,1H),7.38(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.24-6.97(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.49–4.38(m,1H),4.23-4.13(m,1H),3.83–3.76(m,4H),3.75–3.70(m,4H),3.66–3.52(m,2H),3.10–2.95(m,1H),2.84-2.67(m,3H),2.29(t,J＝7.0Hz,2H),2.14–2.01(m,7H),1.93-1.84(m,2H),1.82–1.46(m,7H),1.41–1.32(m,2H),1.17–0.95(m,4H).
实施例31：5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001921
将((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(410mg,1.67mmol)溶于DMF(10mL)，加入5-(8-氧-3-氮杂螺双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(459mg,1.67mmol)，HATU(825mg,2.17mmol)和DIEA(646mg,5.01mmol)，室温反应2h。加水(50mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析纯化得到5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝502.3.
步骤2：5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001922
将5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(290mg，0.58mmol)，溶于ACN(10mL)，加入IBX(324mg,1.16mmol)，85℃反应1.5h，减压浓缩除去ACN，加水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析纯化得到5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝500.3.
步骤3：4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001931
将5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.20mmol)用THF(10mL)溶解，加入4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(48mg,0.20mmol)和STAB(127mg,0.6mmol)，室温反应2h，加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:11)纯化得到4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝726.4.
步骤4：5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001932
将4-(2-((((1R,4R)-4-(4-(5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(110mg,0.15mmol)溶于DCM(3mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h，减压浓缩，得到5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝626.3.
步骤5：5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001941
将5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(110mg,0.15mmol)溶于DMSO(5mL)，加入DIEA(97mg,0.75mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(65mg,0.15mmol)，室温反应2h。加水(50mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(50mL x 3)提取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用反相制备得到5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝876.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.41(s,1H),8.82(d,J＝7.9Hz,1H),8.38(s,1H),8.28(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝1.9Hz,1H),7.38(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.30-6.95(m,1H),6.82(d,J＝8.0Hz,1H),4.48–4.42(m,2H),4.26–4.09(m,2H),3.79–3.50(m,4H),3.27–3.17(m,2H),3.10-2.90(m,1H),2.85-2.70(m,3H),2.29(t,J＝6.8Hz,2H),2.15–2.07(m,5H),2.07-2.01(m,2H),1.95-1.83(m,4H),1.82–1.47(m,9H),1.41–1.31(m,2H),1.17–0.96(m,4H).
实施例32：5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(((1R,4R)-4-(4-(5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001942
将5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.20mmol)用THF(10mL)溶解，加入3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(48mg,0.20mmol)和STAB(127mg,0.6mmol)，室温反应2h，加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝1:11)纯化得到9-(((1R,4R)-4-(4-(5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝738.5.
步骤2：N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001951
将9-(((1R,4R)-4-(4-(5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(105mg,0.14mmol)溶于DCM(3mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h。减压浓缩，得到N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，直接用于下一步。
步骤3：5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001952
将N-(1-((1R,4R)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(110mg,0.14mmol)溶于DMSO(5mL)，加入DIEA(90mg,0.70mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(61mg,0.14mmol)，室温反应2h。加水(50mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用反相制备得到5-(8-氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝888.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.41(s,1H),8.81(d,J＝7.9Hz,1H),8.37(s,1H),8.28(s,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.8Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.24-6.97(m,1H),6.82(d,J＝8.0Hz,1H),4.47-4.41(m,2H),4.31-3.93(m,3H),3.81–3.72(m,1H),3.67–3.51(m,3H),3.25-3.15(m,2H),2.77-2.72(m,2H),2.35-2.25(m,4H),2.15-2.07(m,2H),2.16-2.98(m,2H),1.96-1.29(m,19H),1.10-0.92(m,2H).
实施例33：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001961
5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(90mg,0.12mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酸五氟苯酯(68mg,0.14mmol)和N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)。室温下搅拌2小时后，加水(50mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝912.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.54(s,1H),9.50(d,J＝6.1Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.39(d,J＝4.2Hz,1H),8.25(t,J＝4.6Hz,1H),7.60(d,J＝1.9Hz,1H),7.54–7.43(m,2H),7.28–6.95(m,1H),6.88-6.44(m,1H),5.28-5.08(m,1H),4.77(d,J＝18.1Hz,1H),4.52-4.40(m,1H),4.24-4.15(m,1H),3.86–3.42(m,7H),3.10-2.95(m,1H),2.80-2.60(m,3H),2.30(t,J＝7.0Hz,2H),2.14-1.48(m,17H),1.43-1.30(m,2H),1.20–0.93(m,4H).
实施例34：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400001962
N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.12mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸五氟苯酯(58mg,0.14mmol)和N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)。室温下搅拌2小时后，加水(50mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝842.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.37–7.29(m,2H),7.28-6.96(m,2H),6.91(d,J＝7.9Hz,1H),4.25-4.15(m,1H),3.83-3.63(m,9H),3.61-3.47(m,3H),3.32–3.24(m,2H),2.95-2.65(m,4H),2.25-1.85(m,11H),1.70(d,J＝9.3Hz,2H),1.58-1.15(m,7H),1.12-0.91(m,4H).
实施例35：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-((((1S,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001971
N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(120mg,0.21mmol)和4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(51mg,0.21mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(222mg,1.05mmol)。室温搅拌过夜，加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，饱和食盐水(60mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到4-(2-((((1S,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝798.5.
步骤2：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001981
4-(2-((((1S,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.10mmol)用二氯甲烷(3mL)溶解，三氟乙酸(1mL)加入并室温搅拌2小时，反应液直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝614.3.
步骤3：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400001982
N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80mg,0.10mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(47mg,0.11mmol)和N,N-二异丙基乙胺(38mg,0.30mmol)。室温下搅拌过夜，加水(50mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝860.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),9.37(s,1H),8.72(d,J＝8.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.24(d,J＝5.1Hz,1H),7.36(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),7.32(d,J＝2.1Hz,1H),7.24–6.94(m,2H),6.86(d,J＝8.1Hz,1H),4.89(d,J＝4.1Hz,1H),4.50-4.15(m,2H),4.03-3.80(m,5H),3.72-3.53(m,4H),3.51-3.40(m,1H),3.10-2.65(m,4H),2.30(t,J＝7.0Hz,2H),2.15-1.95(m,7H),1.92-1.25(m,15H),1.17–0.95(m,4H).
实施例36：5-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)氨基甲酰)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001991
将(S)-5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(150mg,0.42mmol)溶于DMF(10mL)，加入((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(112mg,0.46mmol)，DIEA(163mg,1.26mmol)和py-BOP(284mg,0.55mmol)，室温反应2h。加水(50mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(50mL x 3)提取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(EA:PE＝0～1)纯化得到((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)氨基甲酰)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝589.3.
步骤2：((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)氨基甲酰)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400001992
将((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)氨基甲酰)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯(190mg,0.32mmol)，溶于ACN(10mL)，加入IBX(181mg,0.65mmol)，85℃反应1.5h。向反应液中加水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(EA:PE＝0～1)纯化得到((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)氨基甲酰)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝586.6.
步骤3：N-苄基-N-甲基-2-(哌啶-4-基)乙烷-1-胺的制备
Figure BDA0003811544400002001
将4-(2-(苄基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(345mg,1.04mmol)溶于DCM(5mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h。反应液直接减压浓缩得到N-苄基-N-甲基-2-(哌啶-4-基)乙烷-1-胺，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝233.2.
步骤5：1-(5-(4-(2-(苄基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002002
将N-苄基-N-甲基-2-(哌啶-4-基)乙烷-1-胺(250mg,1.04mmol)溶于DMSO(10mL)，加入DIEA(671mg,5.2mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(451mg,1.04mmol)，室温反应2h。反应液中加水(100mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(100mLx 3)萃取，饱和食盐水(150mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到1-(5-(4-(2-(苄基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝479.2.
步骤6：1-(2-甲氧基-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002003
将1-(5-(4-(2-(苄基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(240mg，0.5mmol)溶于MeOH(10mL)中，加入Pd/C(72mg,30％)，室温反应2h。过滤后减压浓缩，得到1-(2-甲氧基-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝411.1.
步骤7：((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002011
将1-(2-甲氧基-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(95mg,0.24mmol)用THF(10mL)溶解，加入((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)氨基甲酰)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯(120mg,0.20mmol)和STAB(127mg,0.60mmol)，室温反应2h。反应液中加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝0～1；9)纯化得到((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝959.4.
步骤8：5-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002012
将((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)羰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯(100mg,0.10mmol)溶于DCM(5mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h。反应液直接减压浓缩，粗品使用反相制备纯化得到5-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝859.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),9.36(s,1H),8.74(d,J＝8.0Hz,1H),8.38(s,1H),8.24(s,1H),7.36(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),7.32(d,J＝2.1Hz,1H),7.27–6.97(m,2H),6.88(d,J＝8.1Hz,1H),4.52-4.15(m,4H),3.84(s,3H),3.59(t,J＝6.6Hz,2H),3.24–2.93(m,3H),2.80-2.60(m,4H),2.40-2.25(m,2H),2.16–1.99(m,8H),1.95-1.80(m,3H),1.80–1.29(m,13H),1.17–0.96(m,4H).
实施例37：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002021
将N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(125mg,0.280mmol)加入到4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(95.466mg,0.421mmol)的THF(3mL)溶液中，加入STAB(178.5mg,0.842mmol)，室温搅拌2h。反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(25mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(EA:PE＝3:7)得到4-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝658.5.
步骤2：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡零吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002022
将4-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(160mg,0.347mmol)加入到TFA(1mL)和DCM(3mL)中,室温搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到粗产品N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡零吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝558.4.
步骤3：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002031
将N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡零吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(121mg,0.217mmol)加入到3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酸五氟苯酯(90.8mg,0.217mmol)的DMSO(5mL)溶液中，加入DIEA(84.1mg,0.652mmol)，室温搅拌16h。反应液用水(40mL)稀释，乙酸乙酯(40mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品使用反相制备(乙腈–0.05％NH4HCO3水溶液,5％～95％)得到产物N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝792.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),9.40(s,1H),8.82(s,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.59-7.27(m,3H),7.24-6.83(m,2H),4.51-4.15(m,2H),3.83-3.55(m,11H),3.12-2.85(m,3H),2.81-2.64(m,3H),2.38-2.30(m,2H),2.08-1.55(m,9H),1.46-1.31(m,2H),1.20-0.99(m,2H).
实施例38：N-(1-((1R,4R)-4-((4-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氧)哌啶-1-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(丙基-2-炔-1-基氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002032
在0℃下,将NaH(2.98g,124.2mmol)缓慢加入到4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(5g,24.84mmol)的无水THF(60mL)中并搅拌30min，然后加入3-溴丙基-1-炔(5.91g,49.68mmol),反应液缓慢升至室温并搅拌5h,然后过滤,加入水(100mL)，用乙酸乙酯(60mLx 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(EA:PE＝1:9)得到4-(丙基-2-炔-1-基氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-56]+＝184.1.
步骤2：4-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002033
将4-(丙基-2-炔-1-基氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯(232mg,0.971mmol)加入到1-(5-溴-2-氯苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(350mg,1.164mmol)的无水DMF(10mL)中，加入CuI(47.5mg,0.146mmol)，CsCO3(948mg,2.913mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(102.1mg,0.146mmol)，反应液在N2保护下80℃搅拌4h。反应液中加入水(40mL)，用乙酸乙酯(40mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(EA:PE＝2:3)得到4-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝462.2.
步骤3：1-(2-氯-5-(3-(哌啶-4-基氧)丙-1-炔-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002041
将4-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯(160mg,0.347mmol)加入到TFA(1mL)和DCM(3mL)中，室温搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到粗产品1-(2-氯-5-(3-(哌啶-4-基氧)丙-1-炔-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝362.1.
步骤4：N-(1-((1R,4R)-4-((4-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氧)哌啶-1-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002042
将1-(2-氯-5-(3-(哌啶-4-基氧)丙-1-炔-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(137.4mg,0.381mmol)和DIEA(73.6mg,0.570mmol)加入到THF(5mL)中并室温搅拌10min，然后加入N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(醛基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(90mg,0.190mmol)并搅拌10min，然后加入STAB(120.9mg,0.914mmol)，反应液室温搅拌2h。反应液中加水(20mL)加入，乙酸乙酯(25mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品使用反相制备(乙腈–0.05％FA水溶液,5％～95％)得到N-(1-((1R,4R)-4-((4-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氧)哌啶-1-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝819.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.38(s,1H),8.29(s,1H),7.67-7.54(m,2H),7.48-7.41(m,1H),7.27-6.94(m,1H),6.92-6.86(m,1H),4.43(s,2H),4.23-4.13(m,1H),3.86–3.65(m,10H),3.64–3.54(m,2H),2.77–2.65(m,4H),2.10–1.66(m,11H),1.63-1.40(m,3H),1.13–0.93(m,2H).
实施例39：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002051
将4-(2-(甲胺基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.82mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，加入三乙胺(249,2.46mmol)和CbzCl(139mg,0.82mmol)，反应液室温搅拌1个小时。反应液加水(50mL)稀释，二氯甲烷(80mL x 3)萃取，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经柱层析(PE:EA＝3:7)纯化得到化合物4-(2-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H-100]+＝277.2.
步骤2：苄基甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸酯的制备
Figure BDA0003811544400002052
将化合物4-(2-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.53mmol)溶于氯化氢/1-4,二氧六环(4mL)溶液中，反应液室温下搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到苄基甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝277.2.
步骤3：苄基(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基甲酸酯的制备
Figure BDA0003811544400002053
将化合物苄基甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸酯(200mg,0.72mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(309mg,0.72mmol)加入到DMSO(4mL)溶液中，然后加入DIEA(278mg,2.1mmol)，反应液室温搅拌3小时。反应液用水(50mL)稀释，乙酸乙酯(70mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品使用柱层析(PE:EA＝1:3)纯化得到化合物苄基(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基甲酸酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝523.2.
步骤4：1-(2-甲氧基-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002061
将化合物苄基(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基甲酸酯(120mg 0.23mmol)溶于甲醇(3mL)溶液中，加入钯碳(10％，24mg)，反应液室温搅拌1小时。反应液经硅藻过抽滤，滤液减压浓缩得到化合物1-(2-甲氧基-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝389.2.
步骤5：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002062
将化合物N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80mg,0.165mmol)和1-(2-甲氧基-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(64mg,0.165mmol)溶于DCE(3mL)中，STAB(70mg,0.330mmol)加入，反应液室温搅拌2小时。反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(25mL x 4)萃取，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品使用反相制备得到化合物N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝858.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),9.69(s,1H),8.76(d,J＝7.6Hz,1H),8.37(s,1H),8.25(s,1H),7.35(s,1H),7.42-7.00(m,3H),6.38(d,J＝7.6Hz,1H),4.78-4.70(m,4H),4.48-4.35(m,4H),4.25-4.10(m,1H),3.84(s,3H),3.59(t,J＝5.0Hz,2H),3.30-3.10(m,3H),2.75-2.63(m,2H),2.36-2.25(m,2H),2.20-1.99(m,7H),1.93-1.83(m,2H),1.77-1.50(m,7H),1.44-1.30(m,2H),1.20-0.96(m,4H).
实施例40：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-基)正丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002071
将4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(450mg,1.037mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(386.28mg,2.074mmol)加入到DMSO(5mL)中，后加入DIEA(401.31mg,3.111mmol),室温搅拌2h。反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(25mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正向柱层析(MeOH:DCM＝1:19)纯化得到4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝459.1
步骤2：1-(2-氯-5-(哌嗪-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002072
将4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(402mg,0.922mmol)加入到TFA(0.5Ml)和DCM(2.5mL)中，室温搅拌2h。反应液直接减压浓缩得到粗品1-(2-氯-5-(哌嗪-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝337.0.
步骤3：1-(5-(4-(3-(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)丙基)哌嗪-1-羰基)-2-氯苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002073
将1-(2-氯-5-(哌嗪-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(295mg,0.878mmol)和2-(3-溴丙基)-1,3-二氧杂环戊烷(256.9mg,1.316mmol)加入到DMF(5mL)中，然后加入CsCO3(858.2mg,2.634mmol)，反应液100℃搅拌16h。反应液中加入水(40mL)，用乙酸乙酯(30mL x 4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正向柱层析(MeOH:DCM＝1:11)纯化得到1-(5-(4-(3-(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)丙基)哌嗪-1-羰基)-2-氯苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝451.1.
步骤4：4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-基)正丁醛的制备
Figure BDA0003811544400002081
将1-(5-(4-(3-(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)丙基)哌嗪-1-羰基)-2-氯苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(100mg,0.22mmol)溶于DCM(0.5mL)中，加入TFA(0.5mL)，室温反应48h。反应液中加入DCE(10mL)，DIEA(1mL)，室温下减压浓缩得到4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-基)正丁醛，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝407.1。
步骤5：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-基)正丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002082
向4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-基)正丁醛(粗品)的DCE溶液中加入5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(40mg,0.087mmol)，室温搅拌0.5h，加入STAB(55mg,0.26mmol)，室温反应2h，加水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL x 3)提取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用反相制备纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌嗪-1-基)正丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝849.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.50(d,J＝5.7Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.39(d,J＝3.9Hz,1H),8.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.57(d,J＝1.9Hz,1H),7.40(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.26-6.95(m,1H),6.87-6.44(m,1H),5.28-5.07(m,1H),4.77(d,J＝16.2Hz,1H),4.25–4.12(m,1H),3.84-3.70(m,3H),3.67–3.55(m,4H),3.45(d,J＝10.2Hz,1H),2.93(d,J＝10.9Hz,2H),2.82-2.70(m,2H),2.45–2.25(m,9H),2.12–1.78(m,9H),1.51–1.38(m,4H).
实施例41：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400002091
将5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(1g,4.4mmol)，1-甲基哌嗪(445mg,4.4mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.7g,13.3mmol)溶于乙腈(10mL)并升温至60℃搅拌过夜。反应液直接减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝290.3.
步骤2：5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400002092
将5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(900mg,3.1mmol)溶于混合溶液(甲醇/水＝5:1,10mL)中，加入氢氧化锂(520mg,12.4mmol)并升温至60℃搅拌2小时，反应液用盐酸(2mol/L)调节pH值＝3,过滤，滤饼真空干燥得到5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸。
步骤3：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002101
将5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(265mg,1.02mmol)溶于DMF(10mL)，加入((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲醇(250mg,1.02mmol)，DIEA(395mg,3.06mmol)和pyBOP(690mg,1.33mmol)，50℃反应过夜。反应液中加水(50mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝489.2.
步骤4：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002102
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(羟甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(350mg,0.72mmol)，溶于ACN(10mL)，加入IBX(402mg,1.43mmol)，85℃反应1.5h。反应液减压浓缩除去ACN，然后加水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝487.3.
步骤5：4-(2-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002111
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(180mg,0.37mmol)和4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(107mg,0.44mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，加入STAB(235mg,1.11mmol)，室温反应2h。反应液中加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到4-(2-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝713.4.
步骤6：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002112
将4-(2-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(220mg,0.31mmol)溶于DCM(5mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h。反应液直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。所得产物直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝613.3.
步骤7：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002121
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(220mg,0.31mmol)溶于DMSO(10mL)，加入DIEA(200mg,1.55mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酸五氟苯酯(130mg,0.31mmol)，室温反应2h。反应液中加水(100mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用反相制备纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝847.8.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.54(s,1H),9.41(s,1H),8.79(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.27(s,1H),7.50(d,J＝6.9Hz,1H),7.37(d,J＝7.8Hz,2H),7.26-6.97(m,1H),6.92(d,J＝8.0Hz,1H),4.50–4.37(m,1H),4.22–4.10(m,1H),3.85-3.75(m,6H),3.70–3.50(m,2H),3.10–2.95(m,1H),2.72(t,J＝6.6Hz,2H),2.45–2.38(m,4H),2.32-2.25(m,2H),2.24(s,3H),2.11–1.97(m,7H),1.93-1.85(m,2H),1.81-1.45(m,6H),1.41–1.31(m,2H),1.18–0.95(m,4H).
实施例42：N-(1-(1-(2-(3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400002122
N-(1-(1-(2-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(23mg,0.03mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(14mg,0.03mmol)和N,N-二异丙基乙胺(38mg,0.30mmol)，室温下搅拌2小时。反应液中加水(20mL)，过滤，滤饼经p-TLC(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到N-(1-(1-(2-(3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝876.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.42–7.35(m,1H),7.26-6.97(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.31-4.11(m,1H),3.86-3.66(m,9H),3.61-3.50(m,3H),3.29–3.24(m,1H),2.99-2.90(m,2H),2.80–2.71(m,2H),2.43-2.30(m,2H),2.15-1.84(m,6H),1.73-1.60(m,2H),1.55-1.23(m,10H),1.16-1.01(m,4H).
实施例43：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-(3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002131
5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(50mg,0.11mmol)和9-(2-氧代乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(40mg,0.13mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，加入三乙酰氧基硼氢化钠(70mg,0.33mmol)，室温搅拌2小时。反应液中加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，有机相饱和食盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经p-TLC(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到9-(2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝738.4.
步骤2：N-(1-(1-(2-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002132
9-(2-(4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(40mg,0.05mmol)用二氯甲烷(3mL)溶解，三氟乙酸(1mL)加入并室温搅拌2小时。反应液直接减压浓缩得到N-(1-(1-(2-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。所得产品无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝638.3.
步骤3：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-(3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002141
N-(1-(1-(2-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(40mg,0.05mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(24mg,0.05mmol)和N,N-二异丙基乙胺(64mg,0.50mmol)，室温下搅拌过夜。反应液中加水(30mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(2-(3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)乙基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝888.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.50(d,J＝5.7Hz,1H),8.78(d,J＝7.8Hz,1H),8.39(d,J＝3.9Hz,1H),8.25(d,J＝5.6Hz,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.8Hz,1H),7.39(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.26-6.97(m,1H),6.88-6.47(m,1H),5.28-5,07(m,1H),4.77(d,J＝17.8Hz,1H),4.30-4.10(m,1H),3.85–3.72(m,3H),3.67–3.41(m,5H),3.30–3.24(m,2H),2.97-2.88(m,2H),2.80-2.70(m,2H),2.35-2.27(m,2H),2.03-1.80(m,8H),1.72-1.65(m,2H),1.55-1.26(m,9H),1.24-0.97(m,4H).
实施例44：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-((4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002151
将5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,粗品)用THF(10mL)溶解，加入9-甲酰基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(50mg,0.18mmol)和STAB(115mg,0.54mmol)，室温反应2h。反应液中加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到9-((4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝724.3.
步骤2：N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002152
将9-((4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(100mg,0.14mmol)溶于DCM(4mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h。反应液直接减压浓缩得到N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝624.4.
步骤3：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002161
将N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.14mmol)溶于DMSO(10mL)，加入DIEA(90mg,0.70mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸五氟苯酯(58mg,0.14mmol)，室温反应2h。反应液中加水(100mL)并搅拌5分钟，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用反相制备纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝854.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),9.50(d,J＝5.7Hz,1H),8.78(d,J＝7.6Hz,1H),8.39(d,J＝3.6Hz,1H),8.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.36–7.29(m,2H),7.26–6.96(m,2H),6.88-6.44(m,1H),5.28-5.07(m,1H),4.77(d,J＝17.6Hz,1H),4.31-4.11(m,1H),3.88–3.71(m,3H),3.63-3.45(m,5H),2.95–2.85(m,2H),2.81–2.65(m,2H),2.25-2.10(m,5H),2.07–1.87(m,8H),
实施例45：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(((1S,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002162
N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲醛环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(90mg,0.15mmol)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(40mg,0.15mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，加入三乙酰氧基硼氢化钠(95mg,0.45mmol)，室温搅拌2小时，加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到9-(((1S,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝810.4.
步骤2：N-(1-((1R,4S)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002171
9-(((1S,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-((3S)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(100mg,0.12mmol)用二氯甲烷(3mL)溶解，三氟乙酸(1mL)加入并室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到N-(1-((1R,4S)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝626.3.
步骤3：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002172
N-(1-((1R,4S)-4-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.12mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，加入3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸五氟苯酯(55mg,0.13mmol)和N,N-二异丙基乙胺(155mg,1.2mmol)，室温搅拌过夜。反应液中加水(30mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-((S)-3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝856.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.38(s,1H),8.72(d,J＝8.0Hz,1H),8.36(s,1H),8.24(s,1H),7.36–7.29(m,2H),7.27–6.94(m,2H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),4.93-4.88(m,1H),4.20-4.10(m,1H),4.01–3.74(m,3H),3.70-3.44(m,6H),3.33–3.25(m,2H),2.84-2.64(m,2H),2.40-2.21(m,4H),2.21(s,3H),2.15-1.96(m,4H),1.87-1.70(m,6H),1.65-1.26(m,11H),1.10-0.95(m,2H).
实施例46：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(2-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)乙基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：2-(4-羟基环己基)乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400002181
在0℃下,将NaBH4(3.28g,86.96mmol)缓慢加入到2-(4-氧代环己基)乙酸乙酯(8g,43.48mmol)的无水甲醇(100mL)溶液中并搅拌2h，然后加入10％的NH4Cl水溶液淬灭反应,用水(100mL)稀释，乙酸乙酯(150mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗产品2-(4-羟基环己基)乙酸乙酯。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.13(q,J＝7.1Hz,2H),3.60-3.47(m,1H),2.25–2.14(m,2H),2.05-1.93(m,2H),1.81–1.69(m,3H),1.35–1.20(m,5H),1.11–0.97(m,2H).
步骤2：2-(4-(对甲苯磺酰氧基)环己基)乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400002182
将TsCl(11.55g,60.48mmol)加入到2-(4-羟基环己基)乙酸乙酯(7.5g,40.32mmol)的DCM(120mL)溶液中，DMAP(1.49g,12.10mmol)和TEA(12.3g,120.96mmol)加入，N2保护下室温搅拌16h，用水(100mL)稀释，乙酸乙酯(80mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(EA:PE＝3:7)得到2-(4-(对甲苯磺酰氧基)环己基)乙酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+18]+＝358.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(d,J＝8.3Hz,2H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),4.41–4.30(m,1H),4.04-4.01(m,2H),2.42(s,3H),2.16(dd,J＝23.3,6.9Hz,2H),1.81–1.73(m,2H),1.70–1.55(m,3H),1.48–1.36(m,2H),1.17-1.13(m,3H),1.09–0.94(m,2H).
步骤3：2-(4-(3-甲酰基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400002191
将2-(4-(对甲苯磺酰氧基)环己基)乙酸乙酯(9.1g,26.76mmol)加入到1H-吡唑-3-甲醛(2.98g,26.76mmol)的DMF(120mL)溶液中，然后加入CsCO3(14.4g,36.49mmol)和KI(5.85g,29.19mmol)，N2保护下50℃搅拌16h。用水(100mL)稀释，乙酸乙酯(80mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(EA:PE＝1:4)得到2-(4-(3-甲酰基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝265.3.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.97(s,1H),7.54(s,1H),6.81(s,1H),4.35-4.28(m,1H),4.18-4.08(m,2H),2.64-2.34(m,2H),2.28-2.15(m,4H),2.06-1.81(m,3H),1.79-1.65(m,2H),1.30-1.21(m,3H).
步骤4：2-(4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400002192
将2-(4-(3-甲酰基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯(7.2g,27.27mmol)溶解于无水二氯甲烷(100mL)中，在0℃下缓慢加入DAST(17.58g,109.08mmol)，N2保护下室温搅拌16h。反应液中缓慢加入甲醇(50mL)，用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(80mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(EA:PE＝3:17)得到2-(4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝287.0.
步骤5：2-(4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400002201
将2-(4-(3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯(2.7g,9.44mmol)加入到HNO3(2.9g,47.2mmol)的乙酸溶液(30mL)中，加入乙酸酐(1.9g,18.9mmol)，N2保护下50℃搅拌16h。反应液中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(80mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(EA:PE＝1:9)纯化得到2-(4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝332.2.
步骤6：2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400002202
将2-(4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯(1.45g,4.38mmol)经SFC制备纯化(乙腈–0.1％FA水溶液,5％～95％)得到产物2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝332.2.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.23(s,1H),7.24-6.98(m,1H),4.32-4.28(m,1H),4.14(q,J＝7.1Hz,2H),2.35(d,J＝7.5Hz,2H),2.28-2.13(m,3H),2.02-1.98(m,2H),1.76-1.74(m,2H),1.57-1.49(m,2H),1.26(t,J＝5.2Hz,3H).
步骤7：2-((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003811544400002203
将2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-硝基-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯(850mg,2.56mmol)加入到无水乙醇(4mL)溶液中，Raney-Ni固水混合物(1mL)和水合肼(0.8mL)加入,常温搅拌2h。反应液过滤，滤饼用乙醇洗涤，滤液直接减压浓缩得到2-((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝302.5.
步骤8：2-((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基-1-醇的制备
Figure BDA0003811544400002211
将2-((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙酸乙酯(100mg,0.33mmol)溶解于无水四氢呋喃(5mL)中，氮气氛围下，向溶液中缓慢加入硼烷四氢呋喃溶液(4.98mL,4.98mmol)，反应液升温至50℃并搅拌3小时。反应液冷却至室温，缓慢滴加甲醇至无气泡产生，所得溶液减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到2-((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基-1-醇。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝260.2.
步骤9：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-羟基乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002212
2-((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基-1-醇(80mg,0.30mmol)和5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(156mg,0.60mmol)用DMF(5mL)溶解，搅拌下加入N,N-二异丙基乙胺(116mg,0.90mmol)和Py-BOP(203mg,0.39mmol)，60℃下搅拌过夜。反应液冷却至室温，加水(50mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经p-TLC(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-羟基乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝502.2.
步骤10：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-氧代乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002221
将5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-羟基乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.20mmol)用乙腈(10mL)溶解，加入IBX(112mg,0.40mmol)，80℃下搅拌2小时。反应液减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-氧代乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝500.2.
步骤11：4-(((2,4-二甲氧基苯基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002222
4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,1.0mmol)和1-(2,4-二甲氧基苯基)-N-甲基甲胺(190mg,1.1mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(636mg,3.0mmol)，室温下搅拌2小时。反应液中加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝4:1)纯化得到4-(((2,4-二甲氧基苯基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝379.2.
步骤12：4-((甲氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002223
将4-(((2,4-二甲氧基苯基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.26mmol)用乙酸乙酯(10mL)溶解，加入10％钯炭(32mg,0.03mmol)，所得混合物在氢气氛围下升温至70℃并搅拌过夜。反应液冷却至室温后，用硅藻土过滤，滤液直接减压浓缩得到4-((甲氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝229.2.
步骤13：4-(((2-((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)比作并[1,5-a]嘧啶-3-羧氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002231
将5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-氧代乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(60mg,0.12mmol)和4-((甲氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(60mg,0.26mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(127mg,0.6mmol)，室温下搅拌2小时。反应液中加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到4-(((2-((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)比作并[1,5-a]嘧啶-3-羧氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝712.4.
步骤14：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002232
将4-(((2-((1R,4R)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)比作并[1,5-a]嘧啶-3-羧氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg,0.10mmol)用二氯甲烷(3mL)溶解，然后加入三氟乙酸(1mL)并室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝612.3.
步骤15：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(2-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)乙基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002241
将5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(70mg,0.10mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(43mg,0.10mmol)和N,N-二异丙基乙胺(130mg,1.0mmol)，室温下搅拌2小时。反应液中加水(50mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.10％FA水溶液,5％～95％)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1R,4R)-4-(2-(((1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)乙基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝862.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.50(d,J＝6.3Hz,1H),8.79(d,J＝7.7Hz,1H),8.42(d,J＝4.0Hz,1H),8.25(d,J＝5.5Hz,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝1.8Hz,1H),7.38(d,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.26-6.97(m,1H),6.88-6.45(m,1H),5.28-5.08(m,1H),4.77(d,J＝16.7Hz,1H),4.50-4.38(m,1H),4.30-4.22(m,1H),3.84–3.71(m,3H),3.66–3.58(m,3H),3.48-3.43(m,1H),3.10-3.02(m,1H),2.84–2.69(m,3H),2.35-2.25(m,2H),2.18-2.08(m,5H),2.08–1.91(m,4H),1.85-1.70(m,4H),1.70-1.55(m,4H),1.49-1.40(m,4H),1.20-1.04(m,2H).
实施例47：5-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-N-(1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002242
将4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(240mg,1.0mmol)用DCM(20mL)溶解，加入FmocCl(311mg,1.2mmol)和吡啶(237mg,3.0mmol)，室温反应过夜。反应液加水(50mL)稀释，用DCM(30mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(EA:PE＝0～4:1)纯化得到4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝487.3.
步骤2：(9H-芴-9-基)甲基甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸的制备
Figure BDA0003811544400002251
将4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(210mg,0.45mmol)溶于DCM(4mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h。反应液直接减压浓缩得到(9H-芴-9-基)甲基甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝365.2.
步骤3：1-(2-氯-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002252
将(9H-芴-9-基)甲基甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸(210mg,0.45mmol)溶于DMSO(5mL)，加入DIEA(264mg,2.05mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(178mg,0.41mmol)，室温反应过夜。反应溶液使用反相色谱纯化(45％ACN/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化得到1-(2-氯-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝393.1.
步骤4：((S)-1-(3-((1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002253
将1-(2-氯-5-(4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(50mg,0.13mmol)用THF(10mL)溶解，加入((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.05mmol)和STAB(83mg,0.39mmol)，反应0.5小时后，((S)-1-(3-((3-(二氟甲基)-1-((1R,4S)-4-甲酰基环己基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.10mmol)1小时内分两次加入，然后室温反应2小时。反应液中加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相经饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(MeOH:DCM＝0～1:9)纯化得到((S)-1-(3-((1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝963.3.
步骤5：5-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-N-(1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002261
将((S)-1-(3-((1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.10mmol)溶于DCM(5mL)中，加入TFA(1mL)，室温反应1h。反应液直接减压浓缩，然后加入NaHCO3饱和溶液调节pH至8～9，用MeOH/DCM(10％,20mL x 3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品使用反相制备纯化得到5-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-N-(1-((1R,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝863.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.18–9.87(s,1H),9.36(s,1H),8.74(d,J＝8.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.24(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝2.0Hz,1H),7.38(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.26-6.97(m,1H),6.87(d,J＝8.0Hz,1H),4.50-4.25(m,2H),4.18(t,J＝11.9Hz,2H),3.80-3.70(m,1H),3.70-3.51(m,2H),3.26–3.18(m,1H),3.08-2.97(m,2H),2.85–2.64(m,5H),2.30(t,J＝7.2Hz,2H),2.14-2.07(m,5H),2.07-1.97(m,2H),1.95-1.83(m,3H),1.80-1.30(m,12H),1.18–0.95(m,4H).
实施例48：N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002271
3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(100mg,0.39mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(205mg,0.47mmol)和N,N-二异丙基乙胺(153mg,1.18mmol)，室温搅拌过夜。反应液中加水(50mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经柱层析(乙酸乙酯)纯化得到9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-Boc]+＝405.1.
步骤2：1-(2-氯-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002272
9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(170mg,0.34mmol)用二氯甲烷(2.5mL)溶解，三氟乙酸(0.5mL)加入并室温搅拌2小时。反应液直接减压浓缩得到1-(2-氯-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝405.1.
步骤3：N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002273
N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-醛基环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(50mg,0.10mmol)和1-(2-氯-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(42mg,0.10mmol)用二氯乙烷(10mL)溶解，加入三乙酰氧基硼氢化钠(44mg,0.20mmol)，升温至70℃搅拌过夜。反应液中加水(50mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(1-((1R,4R)-4-((9-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝874.2.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.76(s,1H),8.44(s,1H),8.39(d,J＝5.3Hz,2H),8.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.58-7.48(m,2H),7.43(d,J＝1.8Hz,1H),7.38–7.34(m,1H),6.97-6.65(m,1H),6.02(d,J＝7.5Hz,1H),4.98-4.85(m,4H),4.47-4.37(m,4H),4.13-4.06(m,1H),3.86-3.74(m,4H),3.46-3.38(m,2H),3.00-2.74(m,3H),2.39-2.29(m,3H),2.29-2.10(m,3H),2.10-2.00(m,2H),1.92-1.76(m,3H),1.40-1.10(m,10H),0.95-0.85(m,1H).
实施例49：(S)-5-(3-氨基哌啶-1-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：(S)-(1-(3-((3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002281
将(S)-(1-(3-((3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(45mg,0.08mmol)和3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛(33mg,0.08mmol)溶于DMF(2mL)中，NaBH(OAc)3(51mg,0.24mmol)加入，室温搅拌2小时。反应液中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，合并上层有机相并用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经正相柱层析纯化得到(S)-(1-(3-((3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝955.5.
步骤2：(S)-5-(3-氨基哌啶-1-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002291
将(S)-(1-(3-((3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯(30mg,0.03mmol)溶于DCM(0.5mL)中，然后加入TFA(0.1mL)，室温搅拌1小时。饱和NaHCO3水溶液加入到反应液中直至溶液pH值至弱碱性，用混合有机溶剂(MeOH:DCM＝1:10,30mL x 3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经p-HPLC纯化得到(S)-5-(3-氨基哌啶-1-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝855.7.
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.49(d,J＝8.0Hz,1H),8.35(s,1H),8.29(s,1H),7.40(d,J＝7.9Hz,1H),7.35–7.29(m,2H),7.04–6.74(m,2H),4.60-4.50(m,1H),4.50-4.25(m,2H),4.25-4.15(m,1H),3.97-3.79(m,1H),3.80-3.63(m,3H),3.50-3.38(m,3H),3.15-3.08(m,1H),3.06-3.01(m,2H),2.94–2.79(m,3H),2.31(s,3H),2.27-2.21(m,2H),2.21-2.04(m,7H),1.93-1.83(m,1H),1.83-1.76(m,2H),1.70-1.44(m,8H),1.22-1.02(m,4H).
实施例50：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(4-(5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002292
将5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(130mg,0.5mmol)，4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(158mg,0.5mmol)和Py-BOP(780mg,1.5mmol)用DMF(6mL)溶解，然后加入DIEA(780mg,1.5mmol)，室温搅拌16小时。反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，合并上层有机相并用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经正相柱层析纯化得到4-(4-(5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝559.2.
步骤2：N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002301
将4-(4-(5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg,0.45mmol)用DCM(4mL)溶解，然后加入TFA(1mL)，室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到粗品N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝459.3.
步骤3：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002302
将N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(114mg,0.25mmol)和3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛(102mg,0.25mmol)用THF(5mL)溶解，三乙酰氧基硼氢化钠(160mg,0.75mmol)加入，室温搅拌16小时。反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，合并上层有机相并用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经prep-HPLC纯化得到白色固体N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(2-氧-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝854.6.
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.47(d,J＝7.8Hz,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),7.40(d,J＝7.4Hz,1H),7.36-7.27(m,2H),7.05-6.95(m,1H),6.31(d,J＝8.0Hz,1H),4.62-4.50(m,2H),4.50-4.39(m,4H),4.26-4.11(m,1H),3.95-3.82(m,1H),3.77-3.60(m,3H),3.49-3.40(m,2H),3.05-2.97(m,2H),2.89–2.79(m,2H),2.37-2.20(m,5H),2.20-2.09(m,6H),1.83-1.75(m,2H),1.71-1.41(m,7H),1.37-1.27(m,2H),1.24-1.08(m,4H).
实施例51：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺步骤1：4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002311
1-氯-4-氟-2-硝基苯(10.0g,56.81mmol)用DMSO(100mL)溶解，然后加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(21g,85.27mmol)和DIEA(52mL)，加热至110℃反应48h。反应液中国加水(1000mL)并搅拌10min，乙酸乙酯(600mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(1000mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(PE:EA＝5:1)纯化得到4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-t-Bu]+＝286.0.
步骤2：1-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪的制备
Figure BDA0003811544400002312
将4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.73g,10.9mmol)用DCM(30mL)溶解，然后加入TFA(10mL)，室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到1-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝242.0.
步骤3：4-(4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-基)丁基-1-醇的制备
Figure BDA0003811544400002313
1-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪(4.0g,10.9mmol)用DMF(25mL)溶解，然后加入4-溴丁基-1-醇(1.75g,11.4mmol)，碳酸钾(4.51g,32.7mmol)和KI(1.89g,11.4mmol)，反应液加热至60℃搅拌过夜。反应液中加水(200mL)稀释并搅拌10min，乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(DCM:MeOH＝1:19)纯化得到4-(4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-基)丁基-1-醇。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝314.1.
步骤4：4-(4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯的制备
Figure BDA0003811544400002321
将4-(4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-基)丁基-1-醇(1.0g,3.19mmol)用THF(15mL)溶解，然后加入苯甲酰氯(0.58g,4.15mmol)和TEA(0.97g,9.57mmol)，反应液加热至70℃搅拌过夜。反应液中加水(50mL)，乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(DCM:MeOH＝1:13)纯化得到4-(4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝418.1.
步骤5：4-(4-(3-氨基-4-氯苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯的制备
Figure BDA0003811544400002322
将4-(4-(4-氯-3-硝基苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯(1.2g,2.87mmol)用乙醇(15mL)溶解，加入水合肼(1.5mL)和Raney-Ni(固液混合物,1.5mL)，常温反应1h。过滤，滤液减压浓缩得到4-(4-(3-氨基-4-氯苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝388.1.
步骤6：3-((5-(4-(4-(苯酰氧基)丁基)哌嗪-1-基)-2-氯苯基)氨基)丙酸的制备
Figure BDA0003811544400002323
将4-(4-(3-氨基-4-氯苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯(1.0g,2.6mmol)用乙酸/水混合液(1/5,12mL)溶解，然后加入丙烯酸(0.558g,7.75mmol)，反应液加热至110℃搅拌过夜。反应液中加水(50mL)，乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(DCM/MeOH＝12％)纯化得到3-((5-(4-(4-(苯酰氧基)丁基)哌嗪-1-基)-2-氯苯基)氨基)丙酸。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝460.1.
步骤7：4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯的制备
Figure BDA0003811544400002331
将3-((5-(4-(4-(苯酰氧基)丁基)哌嗪-1-基)-2-氯苯基)氨基)丙酸(1.12g,2.44mmol)用乙酸(15mL)溶解，然后加入尿素(2.92g,48.8mmol)，反应液加热至110℃搅拌48小时。反应液中加水(50mL)，用MeOH/DCM混合有机溶剂(10％,50mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(DCM:MeOH＝1:9)纯化得到4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝485.1.
步骤8：1-(2-氯-5-(4-(4-羟基丁基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002332
将4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)丁基苯甲酸酯(0.74g,1.5mmol)加入到浓盐酸(15mL)中，加热至70℃搅拌过夜。反应液直接减压浓缩，粗品使用反相(ACN/H2O＝16％,0.1％FA水溶液)纯化得到1-(2-氯-5-(4-(4-羟基丁基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝381.1.
步骤9：4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)正丁醛的制备
Figure BDA0003811544400002341
将1-(2-氯-5-(4-(4-羟基丁基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(280mg,0.74mmol)用DCM(10mL)溶解，然后加入Dess-Martin(628mg,1.48mmol)，反应液室温搅拌过夜。直接减压浓缩，粗品经反相(ACN/H2O＝16％,0.1％FA水溶液)纯化，所得产物经分析并不是4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)正丁醛，实际得到1-(2-氯-5-(哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝309.2.
步骤10：1-(5-(4-(3-(1,3-二氧戊烷-2-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-氯苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002342
将1-(2-氯-5-(哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(65mg,0.21mmol)用ACN(10mL)溶解，然后加入2-(3-溴丙基)-1,3-二氧戊烷(41mg,0.21mmol)，K2CO3(87mg,0.63mmol)和KI(18mg,0.21mmol)，反应液加热至80℃搅拌过夜。减压浓缩除去ACN，然后加水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(DCM:MeOH＝1:9)纯化得到1-(5-(4-(3-(1,3-二氧戊烷-2-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-氯苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝423.1.
步骤11：4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)正丁醛的制备
Figure BDA0003811544400002343
将1-(5-(4-(3-(1,3-二氧戊烷-2-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-氯苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(20mg,
0.047mmol)用DCM(1mL)溶解，然后加入TFA(1mL)，室温反应48h后，加入DCE(10mL)和DIEA
(1mL)，室温下减压浓缩得到4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)正丁醛(粗品，二氯乙烷溶液)，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝379.1.
步骤12：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002351
向4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)正丁醛(粗品)的DCE溶液中加入5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(20mg,0.044mmol)，室温搅拌0.5h后，加入STAB(28mg,0.13mmol)，室温反应2h。反应液中加水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用反相制备纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-(1-(4-(4-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)丁基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝821.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.50(d,J＝5.8Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.40(d,J＝3.9Hz,1H),8.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.32(d,J＝8.9Hz,1H),7.27-6.96(m,2H),6.92(dd,J＝9.0,2.9Hz,1H),6.88-6.44(m,1H),5.28-5.07(m,1H),4.77(d,J＝17.3Hz,1H),4.26-4.15(m,1H),3.85-3.42(m,6H),3.23-3.10(m,4H),2.94(d,J＝11.9Hz,2H),2.80-2.62(m,2H),2.49-2.46(m,4H),2.40-2.25(m,4H),2.05-1.80(m,8H),1.53-1.41(m,4H).
实施例52：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400002352
将N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.164mmol)和3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酸五氟苯基酯(87mg,0.180mmol)溶于DMSO(5mL)中，加入DIEA(65mg,0.492mmol)，反应液室温搅拌过夜。反应液中加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(25mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品使用反相制备得到化合物N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝912.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.54(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.60(d,J＝1.9Hz,1H),7.52(d,J＝7.5Hz,1H),7.47(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.24–6.87(m,2H),4.24-4.17(m,1H),3.83-3.50(m,13H),3.30-3.26(m,1H),2.93-2.85(m,2H),2.75-2.65(m,2H),2.18-2.10(m,2H),2.05-1.88(m,6H),1.70(d,J＝9.0Hz,2H),1.61-1.42(m,5H),1.35-1.20(m,2H),1.12-0.95(m,4H).
实施例53：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400002361
将4-羟基哌啶-1-羧酸苄酯(3g,12.8mmol)用无水四氢呋喃(30mL)溶解，在零度下加入钠氢(1.1g,25.6mmol)并搅拌60分钟，2-溴乙酸乙酯(2.6g,15.4mmol)加入，反应液室温搅拌过夜。反应液中加水(100mL)，用乙酸乙酯(150mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:1)纯化得到4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝344.1.
步骤2：4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400002362
4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(1.1g,3.4mmol)用无水四氢呋喃(10mL)溶解，在零度下加硼烷四氢呋喃溶液(2.9g,34mmol)，反应液室温搅拌过夜，在零度下缓慢加水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝7:3)纯化得到4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝302.1.
步骤3：4-(2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400002371
4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(400mg,1.4mmol)用DCM(4mL)溶解，加入PCC(602mg,2.8mmol)，反应液室温搅拌3小时。过滤，直接减压浓缩得到4-(2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝278.1.
步骤4：4-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003811544400002372
将N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(120mg,0.27mmol)和4-(2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(75mg,0.27mmol)用四氢呋喃(5mL)溶解，搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(172mg,0.81mmol)，室温搅拌3小时。反应液中加水(50mL)，用乙酸乙酯(60mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯乙烷＝1:7)纯化得到4-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝708.3.
步骤5：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基氧)乙基)拍档-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002373
将4-(2-(4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(50mg,0.07mmol)用四氢呋喃(3mL)溶解，然后加入钯碳(10％,10mg)并室温搅拌1小时。反应液经硅藻土过滤，滤液直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基氧)乙基)拍档-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝574.4.
步骤6：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002381
将N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-(哌啶-4-基氧)乙基)拍档-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(26mg,0.045mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(20mg,0.045mmol)用DMSO(2mL)溶解，搅拌下加入N,N-二异丙基乙胺(18mg,0.14mmol)，室温搅拌3小时。反应液中加水(20mL)，用乙酸乙酯(20mLx 3)萃取，有机相经饱和食盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(2-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝820.6.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(d,J＝8.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.32(s,1H),7.47-7.38(m,2H),7.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.00-6.72(m,2H),3.92(s,3H),3.89-3.77(m,8H),3.70-3.67(m,3H),3.15-3.10(m,1H),2.80(t,J＝6.8Hz,2H),2.68(t,J＝5.5Hz,2H),2.40-2.28(m,2H),2.19(t,J＝7.6Hz,1H),2.14-2.08(m,2H),2.04-1.90(m,3H),1.64-1.55(m,2H),1.34-1.26(m,8H).
实施例54：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((2-(1-(3-(2,6-二氧代吡啶-3-基)-4-氟苯甲酰l)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨甲酰基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003811544400002382
将5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(200mg,0.73mmol)溶于DMF(4mL)中，(1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(182mg,0.73mmol)，HATU(139mg,0.95mmol)和DIEA(377mg,2.92mmol)加入，反应液室温搅拌过夜。反应液加水(50mL)稀释，乙酸乙酯(40mL x3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(EA:PE＝9:1)纯化得到(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝504.1.
步骤2：(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸的制备
Figure BDA0003811544400002391
将(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸甲酯(230mg,0.46mmol)用混合溶液甲醇/水(5mL,V/V＝5/1)溶解，加入氢氧化锂(44mg,1.84mmol)，反应液加热至60℃搅拌2小时。反应液用稀盐酸(2mol/L)调节至pH＝4，乙酸乙酯(40mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸，直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝490.6.
步骤3：4-(2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)-N-甲基环己烷-1-羧酰氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002392
将(1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-羧酸(140mg,0.29mmol)和4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg,0.29mmol)溶于DMF(4mL)中，加入HATU(144mg,0.38mmol)和DIEA(155mg,1.2mmol)，反应液室温搅拌过夜。反应液加水(40mL)稀释，用乙酸乙酯(40mL x 4)萃取，有机相经饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(EA)纯化得到4-(2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)-N-甲基环己烷-1-羧酰氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝714.8.
步骤4：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨甲酰基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002401
将4-(2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)-N-甲基环己烷-1-羧酰氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(130mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(0.3mL)并室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨甲酰基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝614.2.
步骤5：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((2-(1-(3-(2,6-二氧代吡啶-3-基)-4-氟苯甲酰l)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨甲酰基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002402
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨甲酰基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(130mg,0.18mmol)和3-(2,6-二氧代基哌啶-3-基)-4-氟苯甲酸五氟苯基酯(75.3mg,0.18mmol)溶于DMSO(2mL)中，加入DIEA(93mg,0.72mmol)，反应液室温搅拌3小时。反应液中加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mLx 3)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((2-(1-(3-(2,6-二氧代吡啶-3-基)-4-氟苯甲酰l)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨甲酰基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝847.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.40(d,J＝5.5Hz,1H),8.29(s,1H),7.40–7.33(m,2H),7.31–7.23(m,1H),7.23-6.96(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.52-4.20(m,2H),4.12(dd,J＝12.7,4.9Hz,1H),3.88-3.66(m,8H),3.62-3.48(m,1H),3.433.34(m,1H),3.01(s,3H),2.82–2.62(m,4H),2.60-2.54(m,1H),2.29-2.17(m,1H),2.08-1.98(m,3H),1.95–1.67(m,6H),1.66–1.35(m,6H),1.21–1.02(m,2H).
实施例55：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-)-5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002411
将N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(60mg,0.1mmol)和3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛(41mg,0.1mmol)用四氢呋喃(2mL)溶解，搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(84mg,0.4mmol)并室温搅拌3小时。反应液中加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-)-5-(1,1-二氧代硫代吗啡啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝890.1
1H NMR(400MHz,CD3OD-d4)δ8.64(d,J＝7.9Hz,1H),8.37(d,J＝5.8Hz,2H),7.40(d,J＝7.8Hz,1H),7.36-7.29(m,2H),7.06-6.77(m,2H),4.60-4.52(m,2H),4.42-4.34(m,4H),4.25-4.14(m,1H),3.92-3.82(m,1H),3.77-3.62(m,3H),3.49-3.40(m,2H),3.30-3.22(m,4H),3.06-3.00(m,2H),2.92-2.82(m,2H),2.31(s,3H),2.28-2.22(m,2H),2.20-2.06(m,6H),1.82-1.72(m,2H),1.70-1.63(m,2H),1.55-1.39(m,2H),1.33-1.25(m,2H),1.24-1.12(m,3H).
实施例56：(S)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400002412
将(S)-N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80mg,粗品,0.11mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸五氟苯酯(46mg,0.11mmol)和N,N-二异丙基乙胺(142mg,1.1mmol)，室温搅拌过夜。反应液中加水(50mL)，过滤，滤饼经Pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到(S)-N-(3-(二氟甲基)-1-(1-((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝856.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),9.38(s,1H),8.72(d,J＝8.0Hz,1H),8.38(s,1H),8.24(s,1H),7.37-7.29(m,2H),7.26-6.96(m,2H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),4.89(d,J＝2.0Hz,1H),4.26-4.14(m,1H),4.00-3.75(m,3H),3.70-3.39(m,6H),3.30-3.24(m,2H),2.93-2.64(m,4H),2.21(s,3H),2.18-2.10(m,2H),2.06-1.65(m,10H),1.61-1.22(m,9H),1.16-0.95(m,4H).
实施例57：(S)-N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400002421
将(S)-N-(1-(1-((3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80mg,粗品,0.11mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入perfluorophenyl 4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯酯(48mg,0.11mmol)和N,N-二异丙基乙胺(142mg,1.1mmol)，室温下搅拌过夜。反应液中加水(30mL)，过滤，滤饼经Pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到(S)-N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(3-羟基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝876.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.38(s,1H),8.72(d,J＝7.9Hz,1H),8.38(s,1H),8.24(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(s,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),7.26-6.97(m,1H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),4.88(d,J＝2.0Hz,1H),4.25-4.15(m,1H),3.97-3.40(m,9H),3.30-3.18(m,2H),2.93-2.85(m,2H),2.78-2.72(m,2H),2.20-2.10(m,2H),2.05-1.65(m,10H),1.60-1.31(m,9H),1.20-0.94(m,4H).
实施例58：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-羟基乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002431
2-((1R,4R)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基-1-醇(70mg,0.27mmol)和5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(74mg,0.30mmol)用DMF(10mL)溶解，搅拌下加入N,N-二异丙基乙胺(104mg,0.81mmol)和Py-BOP(210mg,0.40mmol)，反应液加热至60℃搅拌过夜。反应液中加水(100mL)，乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经p-TLC(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-羟基乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝490.2.
步骤2：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-氧代乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002432
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-羟基乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(70mg,0.14mmol)用二氯甲烷(5mL)溶解，加入Dess-Martin试剂(118mg,0.28mmol)，室温下搅拌1小时。反应液中加水(20mL)，用二氯甲烷(20mLx 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经p-TLC(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-氧代乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝488.1.
步骤3：9-(2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002441
将N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-氧代乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(50mg,0.10mmol)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(30mg,0.12mmol)用四氢呋喃(10mL)溶解，搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(64mg,0.30mmol)，室温搅拌2小时。反应液中加水(20mL)，用二氯甲烷(20mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经p-TLC(甲醇:二氯甲烷＝1:9)纯化得到9-(2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝726.6.
步骤4：N-(1-((1R,4R)-4-(2-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002442
9-(2-((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(60mg,0.08mmol)用二氯甲烷(3mL)溶解，三氟乙酸(1mL)加入，室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到N-(1-((1R,4R)-4-(2-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝626.4.
步骤5：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002443
将N-(1-((1R,4R)-4-(2-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(60mg,粗品,0.08mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯酯(39mg,0.09mmol)和N,N-二异丙基乙胺(103mg,0.8mmol)，室温搅拌2小时。反应液中加水(30mL)，过滤，滤饼经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝872.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),9.40(s,1H),8.82(d,J＝7.9Hz,1H),8.41(s,1H),8.28(s,1H),7.36(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.32(d,J＝2.0Hz,1H),7.25–6.95(m,2H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.30-4.20(m,1H),3.84(s,3H),3.82-3.70(m,8H),3.62-3.30(m,6H),2.68(t,J＝6.6Hz,2H),2.36–2.22(m,6H),2.10-1.98(m,2H),1.87-1.73(m,2H),1.70-1.30(m,15H).
实施例59：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(苄氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002451
苄胺(0.267g,2.5mmol)和9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(0.66g,2.5mmol)用THF(10mL)溶解，然后加入NaBH(OAc)3(1.58g,7.48mmol)，反应液室温搅拌2h。反应液中加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:24)纯化得到9-(苄氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝359.3.
步骤2：9-氨基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002452
将9-(苄氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(330mg,0.92mmol)，Pd/C(100mg)和Pd(OH)2(100mg)加入到甲醇(10mL)中，氢气置换3次，室温搅拌2小时。过滤，减压浓缩得到9-氨基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝269.2.
步骤3：9-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002461
N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(醛基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg,0.21mmol)和9-氨基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(70mg,0.23mmol)用THF(4mL)溶解，加入NaBH(OAc)3(135mg,0.63mmol)并室温搅拌2小时。反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:24)纯化得到9-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝726.5.
步骤4：9-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002462
向9-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(100mg,0.13mmol)和甲醛水溶液(37％,1mL)的THF(10mL)中加入NaBH(OAc)3(100mg,0.47mmol)，加热到60℃搅拌2h。反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:19)纯化得到9-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝740.4.
步骤5：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002471
9-((((1R,4R)-4-(3-(二氟甲基)-4-(5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酰氨基)-1H-吡唑-1-基)环己基)甲基)(甲基)氨基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(0.10g,0.13mmol)用DCM(5mL)溶解，TFA(1mL)加入并室温搅拌2小时，反应液直接减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无须纯化直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝640.4.
步骤6：N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002472
N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-((甲基(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(70mg,0.1mmol)和3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯基酯(51mg,0.12mmol)用DMSO(1mL)溶解，加入DIEA(130mg,1mmol)并室温搅拌2h。反应液用水(10mL)稀释，过滤，滤饼用Prep-HPLC纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-((1R,4R)-4-(((3-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝886.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),9.39(s,1H),8.82(d,J＝7.9Hz,1H),8.38(s,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),7.32(s,1H),7.22-6.95(m,2H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.22-4.12(m,1H),3.84(s,3H),3.81-3.75(m,4H),3.74-3.70(m,4H),3.62-3.55(m,5H),2.68(t,J＝6.4Hz,2H),2.37-2.26(m,2H),2.25-2.23(m,2H),2.21(s,3H),2.06-2.00(m,2H),1.95-1.85(m,2H),1.78-1.70(m,4H),1.56-1.24(m,9H),1.14-0.97(m,4H).
实施例60：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002481
将3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(200mg,0.79mmol)用二甲亚砜(4mL)溶解，搅拌下加入3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸五氟苯基酯(340mg,0.79mmol)和N,N-二异丙基乙胺(413mg,3.24mmol)，反应液室温搅拌3小时。反应液加水(40mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝9:1)纯化得到9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝501.2.
步骤2：1-(2-甲氧基-5-(3,9-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002482
将9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(230mg,0.46mmol)用二氯甲烷(3mL)溶解，加入三氟乙酸(0.3mL)并室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩得到1-(2-甲氧基-5-(3,9-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝401.1.
步骤3：1-(5-(9-(2-(1,3-二氧戊烷-2-基)乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002491
将1-(2-甲氧基-5-(3,9-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(180mg,0.45mmol)和2-(2-溴乙基)-1,3-二氧戊烷(121mg,0.67mmol)用DMF(5mL)溶解，搅拌下加入K2CO3(186mg,1.3mmol)，反应液加热至80℃并搅拌12小时。反应液加水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x3)萃取，有机相用饱和食盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:7)纯化得到1-(5-(9-(2-(1,3-二氧戊烷-2-基)乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝501.7.
步骤4：3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙醛的制备
Figure BDA0003811544400002492
1-(5-(9-(2-(1,3-二氧戊烷-2-基)乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(200mg,0.5mmol)用丙酮(5mL)溶解，加入盐酸(2mol/L,10mL)，室温下搅拌6小时。反应液用碳酸氢钠调节反应液pH＝8，乙酸乙酯(50mL x3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙醛，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝457.7.
步骤5：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002493
将3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙醛(70mg,0.15mmol)和N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(67mg,0.15mmol)用二氯乙烷(5mL)溶解，搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(126mg,0.6mmol)，反应液室温搅拌3小时。反应液加水(50mL)稀释，用二氯甲烷(60mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经pre-HPLC(CH3CN/0.08％NH4HCO3水溶液,5％～95％)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝887.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),9.40(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.29(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(d,J＝2.1Hz,1H),7.26-6.97(m,2H),6.91(d,J＝7.9Hz,1H),4.25-4.15(m,1H),3.84(s,3H),3.82-3.70(m,8H),3.62-3.33(m,6H),2.95-2.89(m,2H),2.72-2.62(m,2H),2.36-2.23(m,8H),2.05-1.80(m,6H),1.60-1.24(m,10H).
实施例61：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丁基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：1-(5-(9-(3-(1,3-二氧戊烷-2-基)丙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002501
将1-(2-甲氧基-5-(3,9-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(151mg,0.377mmol),和2-(3-溴丙基)-1,3-二氧戊烷(110.5mg,0.566mmol)加入到乙腈(5mL)中，加入K2CO3(518.3mg,1.132mmol)，反应液加热至80℃搅拌16h。反应液中加入水(40mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL x4)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过正相柱层析(MeOH:DCM＝1:7)纯化得到1-(5-(9-(3-(1,3-二氧戊烷-2-基)丙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝515.3.
步骤2：4-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)正丁醛的制备
Figure BDA0003811544400002502
将1-(5-(9-(3-(1,3-二氧戊烷-2-基)丙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(80mg,0.16mmol)溶于DCM(2mL)中，加入TFA(0.5mL)并室温搅拌过夜。反应液中加入DCE(10mL)和DIEA(1mL)，直接室温减压浓缩10min，得到4-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)正丁醛，直接用于下一步。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝471.5.
步骤3：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丁基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002511
向4-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)正丁醛(粗品，DCE溶液)加入N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(70mg,0.15mmol)，室温搅拌0.5小时，然后加入STAB(97mg,0.46mmol)并室温搅拌2h。反应液中加水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(30mLx 3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用反相制备纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丁基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝901.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),9.41(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.28(s,1H),8.15(s,1H),7.38(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),7.33(d,J＝1.9Hz,1H),7.24–6.95(m,2H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.33-4.23(m,1H),3.85(s,3H),3.83-3.75(m,4H),3.74-3.68(m,4H),3.64-3.52(m,6H),3.07-2.95(m,6H),2.95-2.86(m,2H),2.68(t,J＝6.6Hz,2H),2.43(t,J＝6.4Hz,2H),2.18(t,J＝11.2Hz,2H),2.05-1.93(m,4H),1.73-1.57(m,6H),1.56-1.42(m,6H).
实施例62：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟苯甲酰)哌嗪-1-基)丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-羟基丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002521
将N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(160mg,0.35mmol)，4-羟基丁酸(36mg,0.35mmol)和HATU(130mg,0.42mmol)溶于DMF(5mL)中，然后加入DIEA(135mg,1.35mmol)，反应液加热至90℃搅拌16小时。反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(30mL x 3)，合并有机相并用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经正相柱层析纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-羟基丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝533.4.
步骤2：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-氧代丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002522
将N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-羟基丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺((26mg,0.05mmol)溶于DCM(2mL)中，加入DMP(42mg,0.10mmol)并室温搅拌2小时。过滤，滤饼用THF洗涤(10mL x 3)，滤液减压浓缩得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-氧代丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝531.5.
步骤3：4-(3-(2,6-氧代哌啶-3-基)-4-氟苯甲酰)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002523
将3-(2,6-二氧代基哌啶-3-基)-4-氟苯甲酸五氟苯基酯(56mg,0.30mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(125mg,0.30mmol)溶于DMSO(2mL)中，加入DIEA(112mg,0.90mmol)并室温搅拌2小时。反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(30mL x 3)，合并有机相并用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经正相柱层析纯化得到4-(3-(2,6-氧代哌啶-3-基)-4-氟苯甲酰)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M-Boc]+＝320.2.
步骤4：3-(2-氟-5-(哌嗪-1-羰基)苯基)哌啶-2,6-二酮的制备
Figure BDA0003811544400002531
将4-(3-(2,6-氧代哌啶-3-基)-4-氟苯甲酰)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.19mmol)溶于DCM(0.5mL)中，加入TFA(0.1mL)并室温搅拌1小时。反应液减压浓缩得到3-(2-氟-5-(哌嗪-1-羰基)苯基)哌啶-2,6-二酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝320.2.
步骤5：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟苯甲酰)哌嗪-1-基)丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002532
将N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-氧代丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(55mg,0.10mmol)和3-(2-氟-5-(哌嗪-1-羰基)苯基)哌啶-2,6-二酮(32mg,0.10mmol)溶于DCE(2mL)中，加入NaBH(OAc)3(63mg,0.30mmol)并室温搅拌2小时。反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL x 3)，合并有机相并用饱和食盐水(30mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经Prep-HPLC纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-(4-(4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟苯甲酰)哌嗪-1-基)丁酰)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-吗啡啉吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝834.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),9.40(s,1H),8.82(d,J＝4.3Hz,1H),8.42(s,1H),8.29(s,1H),7.37(s,2H),7.29-6.87(m,3H),4.55-4.49(m,2H),4.14-4.07(m,1H),4.02-3.95(m,1H),3.89-3.65(m,10H),3.20-3.13(m,2H),2.88-2.53(m,4H),2.46-2.16(m,9H),2.10-1.95(m,3H),1.90-1.83(m,1H),1.83-1.56(m,3H).
实施例63：N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003811544400002541
将N-(3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80mg,0.16mmol)和3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛(70mg,0.16mmol)溶于THF(3mL)中，加入三乙酰氧基硼氢化钠(102mg,0.48mmol)并室温搅拌16小时。反应液中加入水(50mL)，EA(30mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经Prep-HPLC分离纯化得到N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(1,1-二氧代硫代吗啉基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝910.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.25(s,1H),8.92(d,J＝7.9Hz,1H),8.39(s,1H),8.34(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(d,J＝1.8Hz,1H),7.39(d,J＝8.2Hz,1H),7.25–6.97(m,2H),4.31-4.20(m,5H),3.77-3.70(m,1H),3.67-3.57(m,3H),3.33-3.23(m,5H),2.90(d,J＝9.3Hz,2H),2.75-2.67(m,3H),2.18-2.11(m,2H),2.07-1.87(m,6H),1.73-1.65(m,2H),1.62-1.23(m,7H),1.15-0.92(m,4H).
实施例64：(S)-5-(3-氨基哌啶-1-基)-N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：(S)-(1-(3-((1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002542
(S)-(1-(3-((3-(二氟甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg,0.12mmol)和3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲醛(70mg,0.15mmol)用THF(2mL)溶解，加入NaBH(OAc)3(56mg,0.37mmol)，反应液室温搅拌2h。反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL x 3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:24)纯化得到(S)-(1-(3-((1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝975.4.
步骤2：(S)-5-(3-氨基哌啶-1-基)-N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002551
将(S)-(1-(3-((1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)哌啶-3-基)羧酸叔丁酯(30mg,0.03mmol)用DCM(5mL)溶解，加入TFA(1mL)，反应液室温搅拌1小时。反应液直接减压浓缩，粗品使用Prep-HPLC纯化得到(S)-5-(3-氨基哌啶-1-基)-N-(1-(1-((3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝875.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(d,J＝7.9Hz,1H),8.37(s,1H),8.34-8.30(m,2H),7.65(d,J＝8.2Hz,1H),7.53(s,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,1H),7.26-6.95(m,1H),6.85(d,J＝7.9Hz,1H),4.23-4.13(m,2H),3.82-3.74(m,1H),3.70-3.40(m,7H),3.30-3.10(m,3H),2.97-2.92(m,2H),2.77-2.73(m,2H),2.25-1.75(m,11H),1.75-1.15(m,12H),1.15-0.96(m,4H).
实施例65：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1S,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基4-甲基苯磺酸盐的制备
Figure BDA0003811544400002552
1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-醇(25.7g,163mmol)用二氯甲烷(100mL)溶解，搅拌下加入TsCl(46.6g,244mmol)，TEA(49.3g,488mmol)和DMAP(4.0g,33.0mmol)。反应液室温搅拌过夜。减压浓缩，加水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝3:7)纯化得到1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基4-甲基苯磺酸盐。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+Na]+＝335.1.
步骤2：1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-3-甲醛的制备
Figure BDA0003811544400002561
1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基4-甲基苯磺酸盐(48.5g,156.25mmol)和1H-吡唑-3-甲醛(12.5g,
130.21mmol)用DMF(200mL)溶解，搅拌下加入碳酸铯(127.0g,390.63mmol)和KI(25.9g,156.25mmol)，反应液加热至50℃搅拌过夜。反应液用水(2000mL)稀释，乙酸乙酯(200mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:4)纯化得到1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-3-甲醛。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝237.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),7.99(d,J＝2.3Hz,1H),6.77(d,J＝2.4Hz,1H),4.49–4.39(m,1H),3.96–3.86(m,4H),2.08–1.99(m,4H),1.84–1.75(m,2H),1.75–1.64(m,2H).
步骤3：3-(二氟甲基)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑的制备
Figure BDA0003811544400002562
1-(1,4-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-3-甲醛(13.3g,56.36mmol)用无水二氯甲烷(50mL)溶解，在0℃下缓慢加入DAST(54.4g,338.14mmol)，反应液室温搅拌过夜。反应液中缓慢加入甲醇淬灭反应，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝3:7)纯化得到3-(二氟甲基)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝259.1.
步骤4：4-溴-3-(二氟甲基)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑的制备
Figure BDA0003811544400002563
3-(二氟甲基)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑(8.6g,33.33mmol)用DMF(50mL)溶解，搅拌下加入NBS(7.12g,40.00mmol)，反应液加热到60℃搅拌2小时。反应液用水(500mL)稀释，乙酸乙酯(100mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝3:7)纯化得到4-溴-3-(二氟甲基)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝337.0.
步骤5：4-(4-溴-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-酮的制备
Figure BDA0003811544400002571
4-溴-3-(二氟甲基)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑(10.4g,30.95mmol)用丙酮(40mL)溶解，搅拌下加入HCl(2mol/L,60mL)，反应液0℃下搅拌1h。反应液用饱和碳酸氢钠溶液调至弱碱性，乙酸乙酯(100mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:4)纯化得到4-(4-溴-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-酮。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝293.0.
步骤6：4-溴-3-(二氟甲基)-1-(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑的制备
Figure BDA0003811544400002572
三甲基碘化亚砜(1.36g,6.16mmol)用二甲基亚砜(20mL)溶解，在0℃下加入NaH(246mg,10.27mmol)，反应液室温搅拌1h后，加入4-(4-溴-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)环己烷-1-酮(1.2g,5.14mmol)，然后于室温搅拌过夜。反应液用水(100mL)稀释，乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:4)纯化得到4-溴-3-(二氟甲基)-1-(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝307.0.
步骤7：N-(3-(二氟甲基)-1-(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1,1-二苯甲胺的制备
Figure BDA0003811544400002573
将4-溴-3-(二氟甲基)-1-(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑(800mg,3.104mmol)和(Ph)2NH(618mg,3.415mmol)用1,4-dioxane二氧六环(40mL)溶解，搅拌下加入Pd2(dba)3(568mg,0.62mmol)，Xantphos(717mg,1.24mmol)和NaOt-Bu(894mg,9.31mmol)，反应液在氮气保护下加热到90℃搅拌过夜。反应液直接减压浓缩，加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:3)纯化得到N-(3-(二氟甲基)-1-(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1,1-二苯甲胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝408.1.
步骤8：4-(2-((((1S,4S)-4-(3-(二氟甲基)-4-((二苯基亚甲基)氨基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002581
N-(3-(二氟甲基)-1-(1-氧杂螺[2.5]辛烷-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1,1-二苯甲胺(180mg,0.44mmol)和4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(128mg,0.53mmol)用乙醇(4mL)溶解，再加入水(2mL)，加入K2CO3(122mg,0.88mmol)。反应液用微波110℃反应半个小时后，加水(10mL)，用甲醇/二氯甲烷溶液(V/V＝1/9,25mL x 4)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:9)纯化得到4-(2-((((1S,4S)-4-(3-(二氟甲基)-4-((二苯基亚甲基)氨基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝650.5.
步骤9：4-(2-((((1S,4S)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002582
4-(2-((((1S,4S)-4-(3-(二氟甲基)-4-((二苯基亚甲基)氨基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg,0.23mmol)用四氢呋喃(2mL)溶解，加入HCl(2mol/L,1mL)，反应液室温搅拌30分钟。反应液中加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(25mL x 2)萃取。水相用饱和碳酸氢钠溶液调至弱碱性，用甲醇/二氯甲烷混合溶液(V/V＝1/9，25mL x 3)萃取，有机相饱和食盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到4-(2-((((1S,4S)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝486.2.
步骤10：4-(2-((((1S,4S)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003811544400002591
将4-(2-((((1S,4S)-4-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(85mg,0.17mmol)和5-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(91mg,0.34mmol)用DMF(5mL)溶解，搅拌下加入N,N-二异丙基乙胺(68mg,0.51mmol)和HATU(158mg,0.26mmol)，反应液室温搅拌过夜。反应液用水(50mL)稀释，用甲醇/二氯甲烷混合溶液(V/V＝1/9,25mL x 3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品使用柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:9)纯化得到4-(2-((((1S,4S)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝728.3.
步骤11：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1S,4S)-4-羟基-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002592
4-(2-((((1S,4S)-4-(4-(5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧氨基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-羟基环己基)甲基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(120mg,0.16mmol)用二氯甲烷(2.5mL)溶解，加入三氟乙酸(0.5mL)并室温搅拌2小时。反应液直接减压浓缩得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1S,4S)-4-羟基-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，无需纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝628.3.
步骤12：5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1S,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003811544400002601
5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(3-(二氟甲基)-1-((1S,4S)-4-羟基-4-((甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)甲基)环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(120mg,0.19mmol)用二甲亚砜(3mL)溶解，搅拌下加入4-氯-3-(2,4-二氧代基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸五氟苯基酯(100mg,0.23mmol)和N,N-二异丙基乙胺(148mg,1.14mmol)，反应液室温搅拌2h。反应液加水(5mL)稀释，过滤，固体用p-TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得到5-((1R,4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-N-(1-((1S,4S)-4-(((2-(1-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-4-羟基环己基)-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
LC-MS:(ESI,m/z):[M+H]+＝878.2.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.51(s,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.38(s,1H),8.26(s,1H),7.63(d,J＝8.3Hz,1H),7.55(s,1H),7.38(d,J＝7.9Hz,1H),7.26-6.96(m,1H),6.90-6.42(m,1H),5.33-5.05(m,1H),4.77(d,J＝17.1Hz,1H),4.50-4.39(m,1H),4.20-3.97(m,2H),3.87-3.70(m,3H),3.64-3.40(m,4H),3.12-2.92(m,1H),2.82-2.67(m,3H),2.46-2.38(m,2H),2.32-2.21(m,5H),2.12-1.92(m,4H),1.86-1.55(m,7H),1.52-1.32(m,4H),1.18-1.04(m,2H).
Ⅱ生物活性测试实施例
测试实施例1：IRAK4激酶活性测试
用KinEASE-STK S1丝/苏氨酸激酶试剂盒(Cisbio)检测化合物对IRAK4激酶活性的抑制作用，具体方法为：化合物溶解于二甲亚砜中，再用试剂盒的缓冲液进行等梯度稀释，使受试化合物在反应体系中的终浓度范围为10000nM～0.038nM，再依次加入2.5nMIRAK4激酶(Carna)、1μM生物素化的多肽底物(Cisbio)和7μM三磷酸腺苷(Sigma-Aldrich)在37℃下孵育120min。随后向反应体系中加入偶联有铕系元素化合物的抗磷酸化丝/苏氨酸抗体(Cisbio)和偶联有修饰化的XL665链霉亲和素(Cisbio)以终止反应，在室温下孵育1h后，在酶标仪EnVision(PerkinElmer)上以HTRF模式测定各孔在激发波长为337nm，读取各孔在发射波长为620nm和665nm的荧光强度，使用公式Ratio＝(665nm/620nm)×104算出Ratio值。通过与对照组荧光强度比值进行对比，计算化合物在各浓度下的抑制率，进而通过GraphPad Prism 7以对数浓度-抑制率进行非线性曲线拟合，得出化合物的IC50值。
表1：
Figure BDA0003811544400002602
Figure BDA0003811544400002611
Figure BDA0003811544400002621
Figure BDA0003811544400002631
“-”表示未检测。
实验结果：本发明所述化合物能够有效的与靶蛋白相结合，且抑制IRAK4激酶活性。
测试实施例2：化合物对THP-1细胞中IRAK4的降解
24孔细胞培养板每孔接种0.95mL THP-1细胞(中国科学院干细胞库)，细胞密度为5×105个/孔；细胞板置于5％二氧化碳培养箱中37℃培养过夜，然后再加入50μL化合物二甲亚砜溶液，化合物终浓度在0.03～3000nM范围内，继续培养24小时后，收集细胞至1.5mL的离心管中，1000rpm、4℃离心5分钟。细胞沉淀用1×DPBS清洗2次，重悬的细胞用200μL裂解液(细胞裂解液为Western及IP细胞裂解液(碧云天)，补充1mM苯甲基磺酰氟和蛋白酶抑制剂混合物(碧云天))裂解，冰上静置30分钟后14000g、4℃离心10分钟，取上清液用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测IRAK4蛋白水平。
人IRAK4 AlphaLISA检测
上述细胞裂解液同时使用人IRAK4 AlphaLISA检测试剂盒(PerkinElmer，AL3117C)测定IRAK4降解作用，具体方法为取2μL待测的细胞裂解上清液样品加入白色384孔板(PerkinElmer，6007299)，然后再加入4μL的5×抗IRAK4受体微珠(PerkinElmer,终浓度为10μg/mL)，23℃孵育30分钟。接着再加入4μL的5×生物素标记的抗IRAK4抗体(PerkinElmer,终浓度为1nM)，23℃孵育60分钟。最后在各孔中加入10μL的2×链霉亲和素标记的供体微珠(终浓度为40μg/mL)，23℃避光孵育30分钟。孵育结束后，在酶标仪EnVision(PerkinElmer，2105)上以AlphaScreen标准设置模式测定AlphaLISA信号值，据此计算IRAK4浓度。再用GraphPad Prism 7以对数浓度-抑制率进行非线性曲线拟合，得出化合物的DC50和Dmax值。
表2：
Figure BDA0003811544400002632
Figure BDA0003811544400002641
Figure BDA0003811544400002651
“-”表示未检测。
实验结果：本发明所述化合物能够有效的降解细胞中的IRAK4激酶蛋白，且具有优良的降解活性。
测试实施例3：LPS诱导正常人全血﹑PBMC分泌的细胞因子浓度测定
(1)LPS诱导正常人全血分泌的细胞因子浓度测定
在96孔透明细胞板(Labserv，310109008)每孔中铺190μL肝素钠抗凝的新鲜的正常人全血(年龄为22-50的健康人，现采集的血液)，然后在相应的孔中加入10μL稀释后的化合物溶液，使化合物的终浓度在10～20000nM范围内。二甲亚砜终浓度为0.1％。加化合物处理的细胞板贴上封板膜，置于5％二氧化碳培养箱中37℃培养20小时后，加入10μL LPS(0111:B4)(Sigma，L4391)，终浓度为100ng/mL。细胞板贴上封板膜，再次置于5％二氧化碳培养箱中37℃培养5小时后，2000rpm离心10分钟，每孔取30μL上清血浆转移到一块新的96孔透明细胞板，用于细胞因子浓度测试，冻存于-80℃待测。
白介素-6(IL-6)AlphaLISA检测。
使用白介素-6(IL-6)AlphaLISA检测试剂盒(PerkinElmer，AL223 C)测定LPS诱导的人全血(年龄为22-50的健康人，现采集的血液)的上清血浆样品中的IL-6浓度。
按照产品说明书配制不同浓度的IL-6标准液，浓度范围为0～100000pg/mL。取2μL各浓度的IL-6标准液和待测的细胞上清液样品分别加入白色384孔板(PerkinElmer，6007299)，然后在各孔中加入8μL的5×抗IL-6受体微珠(PerminElmer,终浓度为10μg/mL)和生物素标记的抗IL-6抗体(PerminElmer,终浓度为1nM)混合溶液，23℃孵育60分钟。最后在各孔中加入10μL的2×链霉亲和素标记的供体微珠(终浓度为40μg/mL)，再23℃避光孵育30分钟。孵育结束后，在酶标仪EnVision(PerkinElmer，2105)上以AlphaScreen标准设置模式测定AlphaLISA信号值。通过各浓度IL-6标准液的AlphaLISA信号值绘制标准曲线，再根据待测样品的AlphaLISA信号值在标准曲线上相应的浓度，从而确定各细胞裂解上清液的IL-6浓度。再与对照组IL-6浓度进行对比，计算化合物在各浓度下的抑制率，进而通过GraphPad Prism 7以对数浓度-抑制率进行非线性曲线拟合，计算化合物的IC50值。
(2)LPS诱导人PBMC分泌的细胞因子浓度测定
冻存的人PBMC(妙顺，PB010C)复苏后重悬至RPMI 1640培养基(Gibco，A1049101)，补充10％胎牛血清(Gibco，10099141)，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素(Gibco，15140122)。同一天在96孔透明细胞板(Labserv，310109008)每孔中铺150μL的PBMC，使细胞密度为2×105个/孔。然后在相应的铺有细胞的孔中加入50μL稀释后的化合物溶液，使化合物的终浓度在0.026～10000nM范围内。DMSO终浓度为0.25％。加药处理的细胞板置于5％CO2培养箱中37℃培养1小时或者20小时后，加入10μL LPS(0111:B4)(Sigma，L4391)，终浓度为100ng/mL。细胞板再次置于5％CO2培养箱中37℃培养5小时后，2000rpm离心10分钟，每孔取100μL细胞上清液转移到一块新的96孔透明细胞板，用于细胞因子浓度测试，冻存于-80℃待测。
白介素-6(IL-6)AlphaLISA检测
使用白介素-6(IL-6)AlphaLISA检测试剂盒(PerkinElmer，AL223 C)测定LPS诱导人PBMC细胞上清液中的IL-6浓度。
按照产品说明书配制不同浓度的IL-6标准液，浓度范围为0～100000pg/mL。取2μL各浓度的IL-6标准液和待测的细胞上清液样品分别加入白色384孔板(PerkinElmer，6007299)，然后在各孔中加入8μL的5×抗IL-6受体微珠(终浓度为10μg/mL)和生物素标记的抗IL-6抗体(终浓度为1nM)混合溶液，23℃孵育60分钟。最后在各孔中加入10μL的2×链霉亲和素标记的供体微珠(终浓度为40μg/mL)，再23℃避光孵育30分钟。孵育结束后，在酶标仪EnVision(PerkinElmer，2105)上以AlphaScreen标准设置模式测定AlphaLISA信号值。通过各浓度IL-6标准液的AlphaLISA信号值绘制标准曲线，再根据待测样品的AlphaLISA信号值在标准曲线上相应的浓度，从而确定各细胞裂解上清液的IL-6浓度。再与对照组IL-6浓度进行对比，计算化合物在各浓度下的抑制率，进而通过GraphPad Prism 7以对数浓度-抑制率进行非线性曲线拟合，计算化合物的IC50值。
表3：
实施例 人全血IC<sub>50</sub>(nM) hPBMC IC<sub>50</sub>(nM)
实施例1 287 3.1
实施例2 246 2.2
实验结果：本发明化合物对免疫细胞产生IL-6具有很好的抑制作用。

Claims (34)

1.式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐：
PTM-L-ULM
Ⅰ
其中：
所述PTM具有下式结构
Figure FDA0003811544390000011
其中所述PTM-1中：
m是0、1、2、3或者4；
n是0、1、2、3或者4；
环A”为6-10元芳基或含有1个、2个或者和3个选自N、O或S杂原子的5-11元单环或双环杂芳基；
环A为6-10元芳基或含有1个、2个或者和3个选自N、O或S杂原子的5-11元单环或双环杂芳基；
各个R1独立地选自：C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)1-2、C3-C8环烷基、-O(C3-C8环烷基)、-NH(C3-C8环烷基)、3-8元杂环烷基、-O(3-8元杂环烷基)、-NH(3-8元杂环烷基)、6-10元芳基、-O(6-10元芳基)、-NH(6-10元芳基)、5-6元杂芳基、-O(5-6元杂芳基)、-NH(5-6元杂芳基)、CN、卤素、-OH、-NH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)2(C1-C4烷基)、-COOH、-C(O)NH2、-S(O)2H、-S(O)2NH2、-C(O)(C1-C4烷基)、-C(O)NH(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)2、-C(O)O(C1-C4烷基)、-S(O)(C1-C4烷基)、-S(O)2(C1-C4烷基)、-S(O)2NH(C1-C4烷基)、-S(O)2N(C1-C4烷基)2或者-S(O)NH(C1-C4烷基)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被选自卤素、氰基、-OH、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、甲基哌啶、-S(O)2H、-S(O)2(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)1-2和-C(O)O(C1-C4烷基)的基团取代；
或者所述R1与其所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
各个R4独立地为氢、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-6元杂芳基、CN、卤素、-OH、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)(C1-C4烷基)、-NHS(O)2(C1-C4烷基)、-COOH、-C(O)NH2、-S(O)2H、-S(O)2NH2、-C(O)(C1-C4烷基)、-C(O)NH(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)2、-C(O)O(C1-C4烷基)、-S(O)(C1-C4烷基)、-S(O)2(C1-C4烷基)、-S(O)2NH(C1-C4烷基)、-S(O)2N(C1-C4烷基)2、-S(O)NH(C1-C4烷基)或者X(R2)(R3)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被选自卤素、氰基、-OH、C1-C4烷基、-O(C1-C4烷基)、甲基哌啶、-S(O)2H、-S(O)2(C1-C4烷基)、-C(O)N(C1-C4烷基)1-2、和-C(O)O(C1-C4烷基)的基团取代；X为O、S、CH2或者N；
R2、R3独立地选自：氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基或者5-6元杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基各自独立地任选地被一个或多个选自卤素、OH、氧代基、N(Rb)2、氧代基吡咯烷基和吗啉基取代，或R2和R3与它们所连接的原子一起形成C3-C8环烷基或者3-8元杂环烷基，所述环烷基或者杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；
Ra独立地选自氧代基、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2，所述烷基任选被C3-C6环烷基或CF3取代；且
Rb独立地选自H或C1-C4烷基；
L为连接链，其通过共价键连接PTM和ULM；
所述ULM具有下式结构
Figure FDA0003811544390000021
其中所述ULM-1中的：
X”为C或N；
Y”为C、N、O或者S；
Q1、Q2、Q3、Q4和Q5各自独立地为CR3”或N；
R3”各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-O(C1-C6烷基)、-O-(C3-C8环烷基)、-O-(3-8元杂环烷基)、N(C1-C6烷基)1-2、NH(C3-C8环烷基)、NH(3-8元杂环烷基)、-O-(6-10芳基)或-O-(5-10元杂芳基)；所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基的基团取代；或者R3”与其所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、杂芳基或者芳基；
m”为1、2或3；
R1”各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基或-O(C1-C6烷基)，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基和氨基的基团取代；
R2”为氢、氘、C1-C6烷基或者C3-C6环烷基，所述C1-C6烷基和C3-C6环烷基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基和-OC(O)(C1-C6烷基)的基团取代。
2.如权利要求1所述的式I化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述PTM为
Figure FDA0003811544390000031
其中所述PTM-2’，PTM-2”中：
B为CH、N、O或者S；
M为CH、N、O或者S；
D为CH或者N；
E为CH或者N；
F为CH或者N；
G为CH或者N；
J为CH或者N；
当B或者M为S或者O时，D是CH，E是N，F为CH,G是N且J是CH，且B和M不能同时为S和/或者O；
所述环A、环A”、R1、n、R4和m如权利要求1中PTM-1中所定义和描述。
3.如权利要求2所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于所述PTM-2’中的
Figure FDA0003811544390000032
为
Figure FDA0003811544390000033
Figure FDA0003811544390000034
和/或，所述ULM具有下式结构
Figure FDA0003811544390000041
R3”为卤素、C1-C6烷基或-O(C1-C6烷基)；
和/或，所述药学上可接受的盐为甲酸盐。
4.如权利要求2所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述PTM为
Figure FDA0003811544390000042
其中所述环A、环A”、R1、R2、R3、R4、m和n如权利要求1中PTM-1中所定义和描述。
5.如权利要求1、2或4任一项所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述环A是苯基或含有1个、2个或者3个选自N、O杂原子的5-6元杂芳基；优选环A为苯基、吡啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、嘧啶基、三唑基、四唑基、噻吩基、噻唑基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基、异噻唑基；进一步优选环A为吡唑基或噻吩基；
和/或，R3”各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3-8元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-O(C1-C6烷基)、-O-(C3-C8环烷基)、-O-(3-8元杂环烷基)、N(C1-C6烷基)1-2、NH(C3-C8环烷基)、NH(3-8元杂环烷基)、-O-(6-10芳基)或-O-(5-10元杂芳基)；所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选的被1-3个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基的基团取代；或者R3”与其所连接的原子一起形成环烷基或杂环烷基；
和/或，所述R1独立地选自：C1-C4烷基、C3-C6环烷基、3-6元杂环烷基、CN或卤素，所述烷基、环烷基和杂环烷基任选被卤素、OH、CH3或OCH3取代；优选的R1独立地选自：C1-C4烷基、C3-C6环烷基、含有1个或者2个选自N杂原子的3-6元杂环烷基、CN或卤素，所述烷基、环烷基和杂环烷基任选被卤素、OH、CH3或OCH3取代；进一步优选的所述R1为CHF2、CF3、环己基、哌啶基、甲基、氰基或者哌嗪基；
和/或，所述R2、R3各自独立地选自：氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基或3-8元杂环烷基，各自任选地被一个或多个卤素、OH、N(Rb)2或吗啉基取代，或R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；Ra独立地选自C1-C4烷基、C3-C6环烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2，所述烷基任选被C3-C6环烷基或CF3取代；且Rb独立地选自H或C1-C4烷基；优选的，R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成3-8元除连接N原子外另外含有1个选个N或者O杂氧原子的杂环烷基，所述杂环烷基任选地被一个或多个选自Ra的取代基取代；所述Ra独立地选自C1-C4烷基、CF3、CHF2、OH、卤素或NH2；进一步优选的所述R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成
Figure FDA0003811544390000051
Figure FDA0003811544390000052
6.如权利要求1、2或4任一项所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述PTM具有下式结构：
Figure FDA0003811544390000053
其中，
n′是0、1、2或者3；
所述R1、R2、R3、R4、m和n如权利要求1中PTM-1、PTM-2’和PTM-3中所定义和描述。
7.如权利要求1、2或4任一项所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述PTM具有下式结构：
Figure FDA0003811544390000061
其中，
n′是0、1、2或者3；
R′为各自独立地为氢、氘、羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6烷基或-O(C1-C6烷基)，所述烷基任选的被1-3个独立的选自羟基、卤素、氰基和氨基的基团取代；
p为0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；
所述R1、R2、R3、R4、m和n如权利要求1中PTM-1、PTM-2’和PTM-3中所定义和描述；
较佳地，所述PTM具有下式结构：
Figure FDA0003811544390000062
Figure FDA0003811544390000071
或，所述PTM具有下式结构：
Figure FDA0003811544390000072
Figure FDA0003811544390000081
8.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述ULM-1中的Q1、Q2、Q3、Q4、Q5中的1个或者2个为N，其余各自独立地为CR3”。
9.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所ULM-1中的Q1、Q2、Q3、Q4、Q5各自独立地为CR3”；和/或，所述ULM-1中的Y”为N；
和/或，所述ULM-1中的R1”各自独立地为氢、氘、-F、-Cl、或C1-C6烷基，所述烷基任选被1-3个卤素取代；优选R1”为氢；
和/或，所述ULM-1中的R2”为氢或C1-C6烷基，所述烷基任选被1-3个卤素取代；优选R2”为氢。
10.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述ULM-1中的R3”各自独立地为氢、氘、卤素、-O(C1-C6烷基)、或C1-C6烷基，所述烷基任选被1-3个卤素取代；优选R3”各自独立地为氢、氘、F、Cl、甲基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、2-羟基丙-2基或三氟甲基。
11.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述ULM选自
Figure FDA0003811544390000082
Figure FDA0003811544390000091
和/或，所述L为键。
12.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于所述L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个或多个亚甲基任选地被选自-NR3’-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)NR3’-、-NR3’S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR3’-、-NR3’S(O)2-、-NR4’S(O)2NR3’-、-CR1’R2’-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-NR3’C(O)O-、-OC(O)NR3’-、-C(O)NR3’-、-NR3’C(O)-、-NR4’C(O)NR3’-、-P(O)-、-P(O)O-、-OP(O)-、-OP(O)O-、亚乙烯基、亚乙炔基、C3-C12亚环烷基、含有1个或多个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基、6-10元亚芳基或5-10元亚杂芳基的基团替代，所述亚乙烯基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基和亚杂芳基各自独立地任选地被1个或多个选自卤素、-OR3’、-NR3’R4’、氧代、硝基、氰基、C1-C6烷基、-S(C1-C6烷基)、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基、-C(O)R1’、-C(O)OR3’、-OC(O)R1’、-C(O)NR3’、-NR3’C(O)R1’、-S(O)R1’、-S(O)NR3’、-S(O)2R1’、-S(O)2NR3’、-NR3’S(O)2R1’、-NR4’S(O)2NR3’、-OC(O)NR3’、-NR4’C(O)NR3’的取代基取代，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基各自独立地任选地被1个或多个选自卤素、-OH、-NR3’R4’、氧代、硝基、氰基和C1-C6烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基、5-10元杂芳基的取代基取代；R1’、R2’各自独立为卤素、-OH、-NR3’R4’、C1-C6烷基、氯代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-O(C1-C6烷基)、-NH(C1-C6烷基)、-NH(C1-C6烷基)、C3-C10环烷基、-O(C3-C10环烷基)、-NH(C3-C10环烷基)、3-10元杂环烷基、-O(3-10元杂环烷基)、-NH(3-10元杂环烷基)、6-10元芳基、-O(6-10元芳基)、-NH(6-10元芳基)、5-10元杂芳基、-O(5-10元杂芳基)或-NH(5-10元杂芳基)，R3’和R4’各自独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基或5-10元杂芳基；j为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
13.如权利要求12所述的式Ⅰ化合物，和/或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，其特征在于所述L为-(CH2)j，所述-(CH2)j-中的1个、2个、3个或者4个亚甲基任选地被选自-NH-、-NCH3-、-NCH2CH3-、-O-、-C(CH3)2-、-CHF-、-CHCF3-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NCH3-、-NHC(O)-、-NCH3C(O)-、亚乙烯基、亚乙炔基、亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚氧杂环丙基、亚氧杂环丁基、亚氧杂环戊基、亚氧杂环己基、亚氮杂环丙基、亚氮杂环丁基、亚氮杂环戊基、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚吗啉基、亚高吗啉基、亚苯基、亚吡咯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚咪唑基、亚吡唑基、亚三唑基、亚四唑基、亚噁唑基、亚异噁唑基、亚噻唑基、亚异噻唑基、亚吡啶基、亚嘧啶基、亚哒嗪基、亚吡嗪基、
Figure FDA0003811544390000101
Figure FDA0003811544390000102
的基团替代，且所述替代基团任选地被1个或多个选自卤素、氧代、-NR3’R4’、-OR3’、C1-C4烷基的取代基取代，所述烷基任选被1个或多个选自卤素、-OH、-NH2的取代基取代，R3’、R4’各自独立地为氢、氘、C1-C4烷基，j为2、3、4、5、6、7或8。
14.如权利要求12所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，其特征在于所述L为-(CH2)j-，所述-(CH2)j-中的1个、2个或者3个亚甲基任选地被选自-O-、-NH-、-NCH3-、-NCH2CH3-、-C(O)-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NCH3C(O)-、-C(O)NCH3-、
Figure FDA0003811544390000111
的基团替代，j为2、3、4、5、6、7或8。
15.如权利要求12所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，其特征在于所述L为-(CH2)j-1-C(O)-，所述-(CH2)j-1-C(O)-中的亚甲基如权利要求11中所定义，任选被1个或多个基团所替代，所述j如权利要求20中所定义。
16.如权利要求12所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药和/或其药学上可接受的盐，其特征在于所述L为
Figure FDA0003811544390000112
Figure FDA0003811544390000121
Figure FDA0003811544390000131
Figure FDA0003811544390000141
Figure FDA0003811544390000151
Figure FDA0003811544390000161
Figure FDA0003811544390000171
Figure FDA0003811544390000181
Figure FDA0003811544390000191
Figure FDA0003811544390000201
Figure FDA0003811544390000211
Figure FDA0003811544390000221
Figure FDA0003811544390000231
Figure FDA0003811544390000241
Figure FDA0003811544390000251
Figure FDA0003811544390000261
Figure FDA0003811544390000271
Figure FDA0003811544390000281
Figure FDA0003811544390000291
Figure FDA0003811544390000301
Figure FDA0003811544390000311
Figure FDA0003811544390000321
Figure FDA0003811544390000331
Figure FDA0003811544390000341
Figure FDA0003811544390000351
Figure FDA0003811544390000361
Figure FDA0003811544390000371
Figure FDA0003811544390000381
17.如权利要求12所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述L为LA，
Figure FDA0003811544390000391
其中所述LA中：
环D不存在、6-10元芳基、5-10元杂芳基或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环B不存在或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环C为不存在、C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
X””为键、-NH-、-NCH3-、-O-、-C(CH3)2-、-S-、-C＝C-、-C≡C-、-CHF-、-CHCF3-、-C(O)-、-S(O)-、
-S(O)2-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NCH3-、-NHC(O)-、-(CH2)t-或-NCH3C(O)-；所述-(CH2)t-中的一个或多个亚甲基任选地被选自-O-、-NH-、-C≡C-、-N(C1-C6烷基)-、-C(O)-替代，t为0、1、2、3、4、5、6或7；
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或多个亚甲基任选地被选自-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)-、-N(C1-C6羟基烷基)-、-C≡C-、-C(O)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
18.如权利要求17所述的式I化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述L为LA，所述LA中环D和环B不存在，环C为含有1个或者2个氮杂原子的的7-11元的亚螺杂环烷基；X””为-C(O)-；L3为-(CH2)k-；k为1、2、3、4或者5。
19.如权利要求18所述的式I化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述L选自
Figure FDA0003811544390000392
Figure FDA0003811544390000401
20.如权利要求17所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述L为LA，所述LA中环D和环B不存在，环C为含有1个或者2个氮杂原子的4-7元的杂环烷基；X””为-C(O)-、键或-CH2-；L3为-(CH2)k-；k为1、2、3、4或者5。
21.如权利要求20所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述L选自
Figure FDA0003811544390000402
Figure FDA0003811544390000411
22.如权利要求17所述的式I化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述L为LA，所述LA中环D为C4-C7元环烷基或4-7元杂环烷基；环B、环C为不存在或为含有1个或者2个氮杂原子的的5-11元的亚杂环烷基；X””为-C(O)-或-(CH2)t-，t为0、1、2、3、4或5；L3为-(CH2)k-，k为1、2、3、4或者5。
23.如权利要求22所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述L选自
Figure FDA0003811544390000412
Figure FDA0003811544390000421
Figure FDA0003811544390000431
Figure FDA0003811544390000441
Figure FDA0003811544390000451
24.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，
所述L为LA，
Figure FDA0003811544390000452
其中所述LA中：
环D不存在或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自氘、卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环B不存在或者为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自氘、卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环C为不存在、C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自氘、卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
X””为键、-NH-、-NCH3-、-O-、-C(CH3)2-、-S-、-C＝C-、-C≡C-、-CHF-、-CHCF3-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)NCH3-、-NHC(O)-或-NCH3C(O)-；
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或两个亚甲基任选地被选自氘、-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)、-C≡C-、-C(O)-、-N(C1-C6羟基烷基)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
和或，当环A”为含有1个、2个或者3个选自N、O或S杂原子的5-11元双环杂芳基，环D为6-10元芳基、5-10元杂芳基、C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基和-O-(C1-C6烷基)的取代基取代。
25.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，
当环A”为
Figure FDA0003811544390000461
时，所述环D为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基独立地被1个、2个或3个羟基或被1个、2个或3个-O-(C1-C6烷基)取代。
26.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，
所述L为LA，
Figure FDA0003811544390000462
其中所述LA为方案1、方案2、方案3或方案4
方案1、
环D为C3-C12亚环烷基或含有1-2个N杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、羟基或-O-(C1-C6烷基)取代；
环B为C3-C12亚环烷基或含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基或-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
环C为不存在；
X””为-C(O)-；
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或两个亚甲基被选自-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)-、-C(O)-、-N(C1-C6羟基烷基)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
方案2、
环D为C3-C12亚环烷基或含有1-2个N杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、羟基或甲氧基取代；
环B为含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基；
环C为不存在；
X””为-C(O)-；
L3为-(CH2)k-，k为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
方案3、
环D为C3-C12亚环烷基或含有1-2个N杂原子的3-12元亚杂环烷基，所述亚环烷基和亚杂环烷基任选被选自卤素、羟基或甲氧基取代；
环B为含有1-2个选自N、O或S杂原子的3-12元亚杂环烷基；
环C为不存在；
X””为-C(O)-；
L3为-(CH2)k-，k为1、2、3或4；
方案4、
环D为亚环己基或含有1-2个N杂原子的6元亚杂环烷基，所述亚环己基和6元亚杂环烷基任选被选自卤素、羟基或甲氧基取代；
环B为
Figure FDA0003811544390000471
环C为不存在；
X””为-C(O)-；
L3为-(CH2)k-，所述L3中的一个或两个亚甲基被选自-O-、-NH-、-N(C1-C6烷基)-、-N(C1-C6卤代烷基)-、-C(O)-、-N(C1-C6羟基烷基)-或-N(C3-C8环烷基)-替代，k为1、2、3或4。
27.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，
所述LA中，环D为6-10元芳基、含有1个或者2个氮杂原子的4-7元饱和的单环亚杂环烷基、含有1个或者2个氮杂原子的7-11元的亚螺杂环烷基或者亚稠杂环烷基；
和或，环C为4-11元的饱和或部分不饱和的亚螺环烷基、4-11元的饱和或部分不饱和的亚稠环烷基、8-10元双环饱和或部分不饱和的亚环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-7元饱和或部分不饱和的亚杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-11元饱和或部分不饱和的亚螺杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的4-11元饱和/或部分不饱和的亚稠杂环烷基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫杂原子的8-10元双环饱和/或部分不饱和的亚杂环烷基，所述环烷基和杂环烷基任选被选自氘、卤素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基和-O-(C1-C6烷基)的取代基取代；
和或，所述LA中，L3为-(CH2)k-，所述L3中一个或两个亚甲基任选地被选自氘、-C(O)-、-C≡C-、-O-、-NH-、-NCH3-或-NCH2CH3-的基团替代；k为1、2、3或者4。
28.如权利要求1所述的式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述式Ⅰ化合物为
Figure FDA0003811544390000481
Figure FDA0003811544390000491
Figure FDA0003811544390000501
Figure FDA0003811544390000511
Figure FDA0003811544390000521
Figure FDA0003811544390000531
Figure FDA0003811544390000541
Figure FDA0003811544390000551
Figure FDA0003811544390000561
Figure FDA0003811544390000571
Figure FDA0003811544390000581
Figure FDA0003811544390000591
Figure FDA0003811544390000601
Figure FDA0003811544390000611
Figure FDA0003811544390000621
Figure FDA0003811544390000631
Figure FDA0003811544390000641
29.一种药物组合物，其包含权利要求1-28任一项所述式Ⅰ化合物，或其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
30.权利要求1-28任一项所述式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐在制备治疗和/预防IRAK4介导的疾病或病症的药物中的应用，或者TLR(除TLR3R以外)、IL-1α或IL-1β受体家族介导的疾病或病症的药物中的应用。
31.权利要求1-28任一项所述式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐在制备治疗和/预防癌症、神经退化性病症、病毒性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病、遗传性病症、激素相关疾病、代谢病症、与器官移植相关疾病、免疫缺陷病症、破坏性骨病、增生性病症、感染性疾病、与细胞死亡相关的病况、凝血酶诱发的血小板凝集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病况、心血管病症或CNS病症疾病的药物中的应用。
32.权利要求1-28任一项所述式Ⅰ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐在制备治疗和/预防脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、阴道癌、宫颈癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、皮肤癌、骨癌、甲状腺癌、肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、颈部或头部肿瘤、表皮过度增生、牛皮藓、前列腺增生、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏和非霍奇金氏、乳腺癌、滤泡癌、未分化性瘤、乳头装瘤、精原细胞瘤、黑素瘤、ABC DLBCL、霍奇金氏淋巴瘤、原发性皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、冒烟型惰性多发性骨髓瘤、白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤DLBCL、慢性淋巴细胞性白血病CLL、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt’sLymphoma)/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstroms′s macroglobulinemia WM)脾边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、或浆细胞瘤或血管内大B细胞淋巴瘤、阿尔茨海默症、帕金森氏病、肌肉萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病(Huntington′s disease)、大脑缺血或有创伤性损伤、谷氨酸神经毒性、低氧症、癫痫症、糖尿病治疗、代谢综合症、肥胖、器官移植或移植物抗宿主疾病造成的神经退化性疾病、眼病，如眼过敏、结膜炎、干眼症或春季结膜炎、影响鼻部的疾病，包括过敏性鼻炎；自身免疫性血液病症，如溶血性贫血、再生不全性贫血、纯红细胞贫血和特发性血小板减少、全身性红斑性狼疮症、类风湿性关节炎、多软骨炎、硬皮病、皮肌炎、多肌炎、慢性活性肝炎、重症肌无力、史蒂芬－约翰逊综合症、特发性口炎性腹泻、字体免疫性发炎性肠病、肠易综合症、乳糜泻、齿根骨膜炎、肺透明膜病、肾病、肾小球疾病、酒精性肝病、多发性硬化症、内分泌性眼病、格雷弗氏病(Grave′s disease)、肉瘤病、干眼症、春季结膜角膜炎、间质性肺纤维化、牛皮藓性关节炎、全身性幼年型特发性关节炎、肾炎、血管炎、间质性膀胱炎、憩室炎、肾小球肾炎、慢性肉芽肿性疾病、子宫内膜异位、钩端螺旋体病肾病、青光眼、视网膜疾病、老化、头痛、疼痛、复杂区域疼痛综合症、心肥大、肌肉萎缩、分解代谢症、肥胖、胎儿生长缓慢、高胆固醇血症、心脏病、慢性心脏衰竭、间皮瘤、无汗性外胚层发育不良、白塞氏病、色素失禁症、佩吉特氏病(Paget′s disease)、胰脏炎、遗传性周期性发热综合症、哮喘、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合症、嗜伊红血球增多、过敏反应、全身性过敏反应、鼻窦炎、眼过敏、二氧化硅诱发的疾病、COPD、肺病、囊肿性纤维化、酸诱发的肺损伤、肺动脉高压、多发性神经病、白内障、与全身性硬化症结合的肌肉炎症、包涵体肌炎、重症肌无力、甲状腺炎、阿狄森氏病(Addison′s disease)、扁平苔藓、1型糖尿病、2型糖尿病、阑尾炎、异位性皮炎、哮喘、过敏、细支气管炎、支气管炎、滑囊炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、慢性移植排斥反应、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、泪腺炎、皮炎、皮肌炎、多肌炎、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上踝炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、胃肠炎、亨诺-许兰紫斑病(Henoch-Schonlein purpura)、肝炎、化脓性汗腺炎、免疫球蛋白A肾病、间质性肺病、喉炎、乳腺炎、脑膜炎、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、肝纤维化、肾纤维化、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、心脏纤维化、银屑病、克罗恩病、炎症性肠病、卵巢炎、睾丸炎、骨炎、耳炎、胰脏炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、局部肺炎、肺炎、多发性肌炎、直肠炎、前列腺炎、肾盂肾炎、鼻炎、输卵管炎、窦炎、口腔炎、关节膜炎、肌腱炎、扁桃腺炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、阴道炎、血管炎、外阴炎、斑秃、多形性红斑、疱疹样皮炎、硬化病、白斑病、超敏性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、副肿瘤性天疱疮、获得性大疱性表皮松懈、急性和慢性痛风、慢性痛风性关节炎、牛皮藓、牛皮藓性关节炎、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、隐热蛋白相关周其综合症或骨关节炎病症疾病的药物中的应用。
33.一种物质A在制备IRAK4蛋白降解剂中的应用，所述物质A包括如权利要求1-28任一项所述式Ⅰ化合物、其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物、水合物、溶剂化物、代谢物、前药或其药学上可接受的盐，或如权利要求29所述药物组合物。
34.一种式Ⅶ或Ⅷ化合物，其立体异构体、对映异构体、非对映异构体、氘代化物或其盐：
Figure FDA0003811544390000661
Z为
Figure FDA0003811544390000662
Figure FDA0003811544390000663
Z’为
Figure FDA0003811544390000671
Figure FDA0003811544390000672
其中，m、n、A、A’、R1、R2、R3和R4如权利要求1-28任一项；
较佳地，所述式Ⅶ化合物为式Ⅶ-1所示化合物
Figure FDA0003811544390000673
更佳地，所述式Ⅶ化合物为如下任一化合物：
Figure FDA0003811544390000674
Figure FDA0003811544390000675
Figure FDA0003811544390000681
Figure FDA0003811544390000691
Figure FDA0003811544390000701
Figure FDA0003811544390000711
和/或，所述式Ⅷ化合物为如下任一化合物：
Figure FDA0003811544390000712
Figure FDA0003811544390000713
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