CN115703766A - Glp-1受体激动剂及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种作为GLP‑1受体激动剂的新颖的苯并咪唑化合物、以及制备该类化合物的方法与对有需要的哺乳动物给予该化合物的方法。本发明化合物表现出较强的GLP‑1受体激动效应，以及较好的代谢稳定性，针对GLP‑1受体具有较强的专属性和药用安全性。

Description

GLP-1受体激动剂及其用途

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体的涉及一种作为GLP-1受体激动剂的新颖的苯并咪唑化合物、以及制备该类化合物的方法与对有需要的哺乳动物给予该化合物的方法。

技术背景

糖尿病是以高血糖为特征的代谢疾病，以胰岛素产生、胰岛素作用或二者的缺陷或功能减退所引起的高血糖含量为特征，可进一步引发眼、肾、心脏、血管、神经等器官和组织的慢性损害或功能障碍。根据发病机制不同，糖尿病分为I型及II型。I型糖尿病(T1D)在身体免疫系统破坏胰脏β细胞时发展，该细胞为体内产生具有调节血糖作用的胰岛素的唯一细胞，I型糖尿病的治疗主要通过注射或泵给予胰岛素。II型糖尿病(通常称为T2DM)经常始于胰岛素抗性或当胰岛B细胞功能下降导致胰岛素生产不足以维持可接受的葡糖糖含量，是糖尿病的主要类型。

目前有不同的药理学方法用于治疗高血糖症以及T2DM(Diabetes Care 2014,37,1367-1374)，这些药物通过不同的作用机制可以分为六大类：(1)双胍类(如二甲双胍)，其主要通过降低肝脏葡萄糖生产而起作用，常引起胃肠紊乱及乳酸中毒而限制进一步用途。(2)α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖(acarbose))，其作用机制为降低肠道葡萄糖吸收，但可引起胃肠紊乱。(3)噻唑烷二酮类(例如吡格列酮(pioglitazone)、罗格列酮(rosiglitazone))，它们主要在肝、肌肉及脂肪组织的过氧化物酶体增生物活化受体γ上起作用，调节脂质代谢，提高这些组织对胰岛素作用的反应。但常使用此类药物可诱发水肿、贫血及增重。(4)胰岛素单独或与其它作用机制药物联用，可导致低血糖症和肥胖的风险。(5)钠-葡萄糖连接的转运蛋白共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂(如达格列净(dapagliflozin)、恩格列净(empagliflozin)、卡格列净(canagliflozin)、依格列净(ertugliflozin)等)，此类药物主要抑制葡萄糖在肾脏中重吸收从而降低血液中葡萄糖含量，但此类药物可能与酮酸中毒及尿道感染有关。(6)胰岛素促泌素类，通过在胰脏β细胞上起作用而提高胰岛素分泌，包括磺酰脲类(格列吡秦(glipizide)、格列美吡拉(glimepiride)、格列本脲(glyburide))，氯茴苯酸类(例如那格列奈(nateglidine)、雷帕格列奈(repaglinide))，二肽基肽酶4(DPP-IV)抑制剂(西他列汀(sitagliptin)、维格列汀(vildagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、杜特列汀(dutogliptin)、林那列汀(linagliptin)、沙格列汀(saxogliptin))，胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)激动剂(例如利拉鲁肽(liraglutide)、阿必鲁肽(albiglutide)、艾塞那肽(exenatide)、利塞那肽(lixisenatide)、杜拉鲁肽(dulaglutide)、希马鲁肽(semaglutide))。磺酰脲类及氯茴苯酸类具有有限的功效及耐受性，常诱发低血糖症及引起增重，DPP-IV抑制剂具有有限的功效，而GLP-1受体激动剂均为大分子肽类药物，通常为皮下注射给药，虽然2019年上市了诺和诺德开发的口服索马鲁肽，但其受到给药时间、剂量、胃肠受扰动等多种不利限制，口服生物利用度低。

T2DM最常与高血糖症和胰岛素抗性相关联，同时与其它疾病包括肥胖症、冠状动脉疾病、肝脏胰岛素抗性、葡萄糖耐受不良、糖尿病神经病变、糖尿病肾病变、糖尿病视网膜病变、血脂异常症、高血压、高胰岛素血症和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)有关。以减重手术为高功效消除肥胖症的治疗方法费用昂贵且有风险，而药理学干预通常不太有效且与副作用大，因此具有更高效、较少的副作用及方便给药的减肥药物急需开发。NAFLD为代谢综合征的肝脏表现，包括脂肪变性、非酒精性脂肪变性肝炎(NASH)、纤维变性、硬化及最终肝细胞癌。NAFLD/NASH的严重性基于脂质的存在、发炎性细胞浸润、肝细胞气球样变及纤维化程度，尽管并非患有脂肪变性的所有个体皆进展成NASH，但是大部分确实如此。除了GLP-1受体激动剂及SGLT2抑制剂以外，其它糖尿病相关药物具有的功效有限且未能解决β细胞功能衰退及相关的肥胖症，GLP-1受体激动剂已有药物被批准用于治疗肥胖症，目前也有多种T2DM相关联的适应症正处于临床实验中。

GLP-1受体属于G蛋白偶联受体B家族，其天然激动剂配体GLP-1为肠内L细胞响应食物摄取所分泌的30种氨基酸长度的肠降血糖素。GLP-1以生理及葡萄糖依赖性方式刺激胰岛素分泌、降低升糖素分泌、抑制胃排空、降低食欲及刺激β细胞增生。在非临床试验中，GLP-1通过刺激对葡萄糖依赖性胰岛素分泌重要的基因转录及通过促进β细胞新生而促进持续的β细胞能力(Biodrugs.2003；17(2):93-102)。在健康的个体中，GLP-1扮演调节餐后血糖含量的重要角色，通过刺激以胰脏的葡萄糖依赖性胰岛素分泌，导致末稍的葡萄糖吸收增加，同时其抑制胰高血糖素分泌，造成肝脏葡萄糖排出量减少，延迟胃排空及减慢小肠运动而延迟食物吸收。在患有T2DM的人中，正常餐后GLP-1上升不出现或降低(Diabetes.2001.50；609-613)。GLP-1受体激动剂通过降低空腹和餐后葡萄糖(FPG和PPG)以改善T2DM患者的血糖控制主要为3种药理学活性：(i)增加的葡萄糖依赖性胰岛素分泌(经改善的第一及第二期)，(ii)在高血糖状况下的胰高血糖素抑制活性，(iii)延迟胃排空速率，导致膳食衍生的葡萄糖的吸收推迟(Physiol.Rev.2007,87,1409；Nat.Rev.Endocrinol.2012,8,728)。

近年来，研究者发现可以通过小分子化合物来调控GLP-1受体的功能，进而开发了小分子GLP-1受体激动剂，包括一些低分子量的黄酮类化合物和含氮杂环化合物以及模拟多肽结构的化合物Boc-4和S4P等(Journal ofDiabetes Research,2012,2012:344-350)。但是现有的小分子激动剂结构类型有限，针对GLP-1受体的专属性不强、安全性不高等，有必要开发新结构类型并特异性针对GLP-1受体的激动剂。辉瑞制药公司报道了一系列具有6-羧基芳基并咪唑结构的GLP-1受体激动剂，其中活性化合物PF-06882961(WO2018109607A1)和PF-07081532(WO2019239319A1)，目前处于临床研究中。

发明内容

本发明提供一种作为GLP-1受体激动剂的新颖的苯并咪唑化合物，该化合物表现出较强的GLP-1受体激动效应和较好的代谢稳定性，针对GLP-1受体具有较强的专属性和药用安全性。

本发明提供了一种式(Ⅰ)或式(Ⅱ)或(Ⅲ)的化合物或其立体异构体，或其药学上可接受的盐，

其中，环A选自取代或未取代的：苯基、吡啶基、喹啉、

每个R¹和R²独立地选自H、卤素、-CN、-OH、C_2-6炔基、C_2-6烯基、C_1-6烷基、-OC_1-6烷基、卤代C_1-6烷基；

R³选自C_1-6烷基、

其中所述烷基可被1至3个卤素、-CN、-OC_1-6烷基取代；

Z₁选自CH或N；

n、m各自独立的选自0、1、2、3、4。

在一些优选的实施例中，环A选自苯基、喹啉；每个R¹独立选自卤素、-CN；每个R²独立地选自H、卤素。

在一些优选的实施例中，R³选自

在一些实施例方案中，选自下列化合物之一：

本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，其包含上述所示的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的赋形剂。

本发明的另一个方面，提供了一种治疗心脏代谢疾病及相关疾病的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物给予治疗有效量的上述化合物或其药学上可接受的盐或上述化合物的药物组合物，其中所述的疾病为T1D、T2DM、糖尿病前期、特发性T1D、LADA、EOD、YOAD、MODY、营养不良相关性糖尿病、妊娠糖尿病、高血糖症、胰岛素抗性、肝脏胰岛素抗性、葡萄糖耐受不良、糖尿病神经病变、糖尿病肾病变、肾疾病、糖尿病视网膜病变、脂肪细胞功能障碍、内脏脂肪细胞囤积、睡眠窒息症、肥胖症、进食障碍、使用其它药剂导致的体重增加、过度嗜糖、血脂异常症、高胰岛素血症、NAFLD、NASH、纤维变性、硬化、肝细胞癌、心血管疾病、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、外周血管疾病、高血压、内皮功能障碍、受损的血管顺应性、充血心力衰竭、心肌梗塞、中风、出血性中风、缺血性中风、创伤性脑损伤、肺性高血压、血管成形术后再狭窄、间歇性跛行、餐后脂血症、代谢性酸中毒、酮体症、关节炎、骨质疏松症、帕金森病、左心室肥大、外周动脉疾病、黄斑变性、白内障、肾小球硬化、慢性肾衰竭、代谢综合征、综合征X、经前综合征、心绞痛、血栓症、动脉粥样硬化、短暂性脑缺血发作、血管再狭窄、葡萄糖代谢不良、受损的空腹血糖病况、高尿酸血症、痛风、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织异常、牛皮癣、足部溃疡、溃疡性结肠炎、高apo B脂蛋白血症、阿尔茨海默病、精神分裂症、认知功能受损、炎性肠病、短肠综合征、克隆病、结肠炎、肠易激综合征、多囊性卵巢综合征的预防或治疗及成瘾的治疗。

具体实施例

实施例1

2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,6-二氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(1)的合成

步骤1：4-[2-(4-溴-2,6-二氟苯基)乙酰胺]-3-({[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}氨基)苯甲酸甲酯(1-3)的合成

将1-2(200.00mg，0.847mmol)溶于5mLDMF中，向其中加入化合物1-1(211.75mg，0.847mmol)，DIEA(543.09mg，4.210mmol)，HATU(805.60mg，2.120mmol)，在室温下反应两小时。TLC监控反应完成后，向体系中加入20mL水，用20mL乙酸乙酯萃取，有机相用20mL饱和氯化钠洗涤，分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得黑色油状粗品化合物1-3(300mg，产率：80％)，未经进一步纯化直接投下一步反应，[M+H]⁺：469.05。

步骤2：甲基-2-[(4-溴-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(1-4)的合成

将1-3(300.00mg，0.641mmol)溶于6mL冰醋酸中，在60℃下反应2小时。TLC监控反应完成后，旋干冰醋酸，柱层析纯化(V_PE:V_EA＝2:1)，得化合物1-4黄色固体(200.00mg，产率：69％)，[M+H]⁺：451.04。

步骤3：甲基-2-{[2,6-二氟-4-(四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]甲基}-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(1-5)的合成

将1-4(200.00mg，0.444mmol)加入到单口瓶中，再加入B₂(Pin)₂(135.48mg，0.533mmol)，pd(dppf)Cl₂(36.26mg，0.044mmol)，醋酸钾(117.60mg，1.200mmol)，1,4-二氧六环(5mL)，在100℃下反应过夜。LCMS显示反应完毕后，降温过滤，收集滤液旋干得到1-5粗品300mg，未经进一步纯化直接投下一步反应，[M+H]⁺：499.21。

步骤4：甲基2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,6-二氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸盐(1-7)的合成

将粗品1-5(300.00mg，0.602mmol)加到单口瓶中，再加入化合物1-6(120.00mg，0.366mmol)，pd(dppf)Cl₂(29.86mg，0.037mmol)，碳酸铯(390.96mg，1.200mmol)，1,4-二氧六环(6mL)，在90℃下反应过夜。LCMS显示反应完成后，过滤，滤液浓缩柱层析纯化(V_PE:V_EA＝2:1)，得白色固体1-7(120mg，产率：33％)，[M+H]⁺：621.13。

步骤5：2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,6-二氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(1)的合成

将1-7(120.00mg，0.193mmol)加入到单口瓶中，向其中加入甲醇5mL，水2mL，氢氧化锂(12.00mg，0.500mmol)，在室温下反应过夜。LCMS显示反应完成后，旋干甲醇，用1N HCl调节体系PH至5，析出固体，过滤，收集滤饼，得白色固体1(60mg，产率：51％)，[M+H]⁺：607.12。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.78(s，1H)，8.24(d，1H)，7.76(dd，1H)，7.73(s，1H)，7.63(dd，1H)，7.59–7.49(m，4H)，7.43(dd，1H)，7.33(dd，1H)，7.10–7.01(m，2H)，5.11(td，1H)，4.79(dd，1H)，4.66(dd，1H)，4.59–4.38(m，3H)，4.34(dt，1H)，2.79–2.66(m，1H)，2.43–2.32(m，1H).

实施例2

2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2-氟代苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(2)的合成

步骤1：4-[2-(4-溴-2-氟苯基)乙酰胺]-3-({[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}氨基)苯甲酸甲酯(2-3)的合成

将1-2(200.00mg，0.847mmol)溶于5mLDMF中，向其中加入化合物2-1(196.50mg，0.847mmol)，DIEA(543.09mg，4.210mmol)，HATU(805.60mg，2.120mmol)，在室温下反应两小时。TLC监控反应完成后，向体系中加入20mL水，用20mL乙酸乙酯萃取一次，有机相用20mL饱和氯化钠水溶液洗，分液后有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得黑色油状粗品2-3(300.00mg，产率：77％)，未经进一步纯化直接投下一步反应，[M+H]⁺：451.05。

步骤2：甲基-2-[(4-溴-2-氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(2-4)的合成

将粗品2-3(300.00mg，0.667mmol)溶于6mL冰醋酸中，在60℃下反应2小时。TLC监控反应完成后，旋干冰醋酸，柱层析纯化(V_PE:V_EA＝2:1)，得黄色固体2-4(200mg，产率：69％)，[M+H]⁺：433.05。

步骤3：(3-氟-4-{[6-(甲氧羰基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-烷基]甲基}苯基)硼酸(2-5)的合成

将2-4(200.00mg，0.444mmol)加入到单口瓶中，向其中加入B₂(Pin)₂(135.48mg，0.533mmol)，pd(dppf)Cl₂(36.26mg，0.044mmol)，醋酸钾(117.60mg，1.200mmol)，1,4-二氧六环(5mL)，在100℃下反应过夜。LCMS显示反应完毕后，体系降温过滤，收集滤液，旋干，得粗品2-5(300mg，产率：按100％计算)，未经进一步纯化直接投下一步反应，[M+H]⁺：481.22。

步骤4：甲基-2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2-氟代苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸盐(2-7)的合成

将2-5(300.00mg，0.754mmol)加到单口瓶中，向其中加入化合物1-6(120.00mg，0.366mmol)，pd(dppf)Cl₂(29.86mg，0.037mmol)，碳酸铯(390.96mg，1.200mmol)，1,4-二氧六环(6mL)，在90℃下反应过夜。LCMS显示反应完成后，过滤，滤液旋干柱层析(V_PE:V_EA＝2:1)纯化，得白色固体2-7(120mg，产率：26％)，[M+H]⁺：603.14。

步骤5：2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2-氟代苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(2)的合成

将2-7(120.00mg，0.193mmol)加入到单口瓶中，向其中加入甲醇5mL，水2mL，氢氧化锂(12.00mg，0.500mmol)，在室温下反应过夜。LCMS显示反应完成后，旋干甲醇，用1N HCl调节体系PH至5，析出固体，过滤，收集滤饼，得白色固体2(50mg，产率：42％)，[M+H]⁺：589.13。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.75(s，1H)，8.24(s，1H)，7.78(d，1H)，7.68(t，1H)，7.62(dd，2H)，7.57(d，2H)，7.49(s，1H)，7.42(dd，2H)，7.25(p，1H)，7.02(d，2H)，5.04(d，1H)，4.72(dd，1H)，4.59(dd，1H)，4.49(q，2H)，4.41–4.35(m，1H)，4.33(d，1H)，2.70(p，1H)，2.37(p，1H).

实施例3

2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,5-二氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(3)的合成

步骤1：4-[2-(4-溴-2,5-二氟苯基)乙酰胺]-3-({[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}氨基)苯甲酸甲酯(3-3)的合成

将1-2(200.00mg，0.847mmol)溶于5mLDMF中，向其中加入化合物3-1(211.75mg，0.847mmol)，DIEA(543.09mg，4.210mmol)，HATU(805.60mg，2.120mmol)，在室温下反应两小时。TLC监控反应完成后，向体系中加入20mL水，用20mL乙酸乙酯萃取一次，有机相用20mL饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得黑色油状粗品3-3(300mg，产率：94％)，未经进一步纯化直接投下一步反应，[M+H]⁺：469.05。

步骤2：甲基-2-[(4-溴-2,5-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(3-4)的合成

将3-3(300.00mg，0.641mmol)溶于6mL冰醋酸中，在60℃下反应2小时。TLC监控反应完成后，旋干冰醋酸，柱层析纯化(V_PE:V_EA＝2:1)，得黄色固体3-4(200mg，产率：69％)，[M+H]⁺：451.04。

步骤3：甲基-2-{[2,5-二氟-4-(四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]甲基}-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(3-5)的合成

将3-4(200.00mg，0.444mmol)加入到单口瓶中，向其中加入B₂(Pin)₂(135.48mg，0.533mmol)，pd(dppf)Cl₂(36.26mg，0.044mmol)，醋酸钾(117.60mg，1.200mmol)，1,4-二氧六环(5mL)，100℃下反应过夜。LCMS显示反应完毕后，体系降温过滤，收集滤液，旋干得粗品3-5(300mg，产率：按100％计算)，[M+H]⁺：499.21。

步骤4：甲基-2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,5-二氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸盐(3-7)合成

将3-5(300.00mg，0.602mmol)加到单口瓶中，向其中加入化合物1-6(120.00mg，0.366mmol)，pd(dppf)Cl₂(29.86mg，0.037mmol)，碳酸铯(390.96mg，1.200mmol)，1,4-二氧六环(6mL)，在90℃下反应过夜。LCMS显示反应完成后，过滤，滤液旋干柱层析(V_PE:V_EA＝2:1)纯化，得白色固体3-7(120mg，产率：32％)，[M+H]⁺：621.13。

步骤5：2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,5-二氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(3)的合成

将3-7(120.00mg，0.193mmol)加入到单口瓶中，向其中加入甲醇5mL，水2mL，氢氧化锂(12.00mg，0.500mmol)，在室温下反应过夜。LCMS显示反应完成后，旋干甲醇，用1N HCl调节体系PH至5，析出固体，过滤，收集滤饼，得白色固体3(60mg，产率：51％)，[M+H]⁺：607.12。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.77(s，1H)，8.25(d，1H)，7.78(dd，1H)，7.67(t，1H)，7.64–7.58(m，2H)，7.48–7.39(m，2H)，7.36(dd，1H)，7.10–6.98(m，3H)，5.06(d，1H)，4.74(dd，1H)，4.61(dd，1H)，4.55–4.41(m，3H)，4.41–4.26(m，2H)，2.76–2.65(m，1H)，2.38(t，1H).

实施例4

2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2-氟代苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(4)的合成

步骤1：6-氯-1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(4-3)的合成

将4-1(300.00mg，1.970mmol)溶解在DMF(5mL)中，0℃下加NaH(87.00mg，2.170mmol)，搅拌10min，加，4-2(465.00mg，2.17mmol)，体系在室温30℃下搅拌反应2h。反应完全后加水(5mL)淬灭，过滤，水(2mL)洗涤滤饼，滤饼烘干得到白色固体产物4-3(571mg，产率：98％)，[M+H]⁺：295.01。

步骤2：甲基-2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2-氟代苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(4-4)的合成

将4-3(310.00mg，1.050mmol)，2-5(420.00mg，0.875mmol)，pd(dppf)Cl₂(64.00mg，0.088mmol)，Na₂CO₃(278.00mg，2.630mmol)，溶于1,4-二氧六环(5mL)中，在氮气环境下100℃搅拌5h。反应液通过硅藻土(10g)过滤，用EA(5mL)洗涤滤饼，浓缩干滤液得到粗产品，通过柱层析纯化(V_PE:V_EA＝1:1)得到白色固体产物4-4(150mg，产率：53％)，[M+H]⁺：613.06。

步骤3：2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2-氟代苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(4)的合成

将4-4(150.00mg，0.245mmol)加入到THF(5mL)中，加入H₂O(1mL)和LiOH(20.00mg，0.490mmol)。体系在室温35℃下搅拌20h，反应完全后将THF浓缩干，加入H₂O(5mL)，用1NHCl溶液调节pH至6～7，用EA(5mL×3)萃取，饱和氯化钠(10mL)洗涤，浓缩有机相，通过prep-TLC纯化(V_DCM:V_MeOH＝10:1)得到白色固体产物4(50mg，产率：34％)，[M+H]⁺：599.03。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.25(s，1H)，8.07(d，1H)，8.00-7.95(m，2H)，7.80-7.76(m，2H)，7.67(d，1H)，7.61(d，1H)，7.48–7.40(m，2H)，7.30–7.23(m，2H)，6.57(d，1H)，5.60(s，2H)，5.06-5.04(m，1H)，4.76–4.72(m，1H)，4.62-4.54(m，1H)，4.50–4.37(m，3H)，4.36-4.35(m，1H)，2.71-2.67(m，1H)，2.34-2.33(m，1H).

实施例5

2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,5-二氟苯基)甲酯]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(5)的合成

步骤1：甲基-2-[(4-{1-[(四氯-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基}-2，5-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(5-1)的合成

将4-3(64mg，0.216mmol)，3-5(90mg，0.216mmol)，Cs₂CO₃(211mg，0.648mmol)，pd(dppf)Cl₂(18mg，0.0216mmol)加入到dioxane/H₂O(4mL：1mL)，置换氮气，体系在110℃下搅拌10h，反应完全后，用硅藻土过滤，EA(20mL)洗涤滤饼，滤液浓缩后用EA溶解过滤，再浓缩滤液，粗品通过柱层析纯化(V_PE：V_EA＝3:1)，得到产物为淡黄色油状物5-1(80mg，产率：60％)，[M+H]⁺：631。

步骤2：2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,5-二氟苯基)甲酯]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(5)的合成

室温下，将5-1(80mg，0.127mmol)加入到THF/H₂O(5mL：5mL)体系，加入LiOH(10mg，0.381mmol)，室温下搅拌。反应完全后，浓缩干THF，调节pH＝4，EA(10mL×3)萃取，浓缩后得到产物粗品，用MeOH打浆，得到产物5(30mg，产率：40％)，[M+H]⁺：617.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.12(d,J＝8.2Hz,1H),7.84(dd,J＝18.2,8.6Hz,2H),7.72(d,J＝3.5Hz,1H),7.67–7.60(m,2H),7.47(d,J＝10.0Hz,1H),7.38(t,J＝8.8Hz,1H),7.25(d,J＝4.2Hz,2H),6.60(d,J＝3.5Hz,1H),5.60(s,2H),5.08(d,J＝7.5Hz,1H),4.78(dd,J＝15.7,7.0Hz,1H),4.64(d,J＝15.4Hz,1H),4.59–4.43(m,3H),4.41–4.33(m,1H),2.73(s,1H),2.42(d,J＝9.1Hz,1H).

实施例6

2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,3,6-三氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(6)的合成

步骤1：4-[2-(4-溴-2,3,6-三氟苯基)乙酰胺]-3-({[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}氨基)苯甲酸甲酯(6-3)的合成

将1-2(265mg，1.12mmol)溶于5mLDMF中，向其中加入化合物6-1(300mg，1.12mmol)，DIEA(433mg，3.36mmol)，HATU(638mg,1.68mmol)，室温反应两小时。TLC监控反应完成。向体系中加入20mL水，用20mL乙酸乙酯萃取，有机相用20mL饱和氯化钠水溶液洗涤一次，分出有机相无水硫酸钠干燥后旋干，得淡黄色固体粗品6-3(520mg，产率：95％)，未经进一步纯化直接投下一步反应，[M+H]⁺：487.3。

步骤2：甲基-2-[(4-溴-2,3,6-三氟丙基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(6-4)的合成

将6-3(520mg,crude)溶于10mL冰醋酸中，60℃反应2小时。TLC监控反应完成。缩干冰醋酸，柱层析纯化(V_PE：V_EA＝2:1)，得黄色固体6-4(246mg，产率：49％)，[M+H]⁺：469.3。

步骤3：甲基-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-2-{[2,3,6-三氟-4-(四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(6-5)的合成

将6-4(200mg，0.426mmol)加入到单口瓶中，向其中加入B₂(Pin)₂(129.79mg，0.511mmol)，Pd(dppf)Cl₂(31.17mg，0.0426mmol)，醋酸钾(117.6mg，1.2mmol)，dioxane5mL，100℃反应过夜。LCMS显示反应完毕。体系降温过滤，收集滤液，旋干得粗品6-5(400mg，产率：100％)，未经进一步纯化直接投下一步反应，[M+H]⁺：517.2。

步骤4：甲基2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,3,6-三氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸盐(6-7)的合成

将6-5(400mg，crude)加到单口瓶中，向其中加入1-6(120mg，0.366mmol)，Pd(dppf)Cl₂(29.86mg,0.0366mmol)，碳酸铯(390.96mg，1.20mmol)，dioxane 6mL，90℃过夜。LCMS显示反应完成，过滤，滤液柱层析纯化(V_PE：V_EA＝3:1)，得白色固体6-7(100mg，产率：36％)，[M+H]⁺：639.3。

步骤5：2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]-2,3,6-三氟苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(6)的合成

将6-7(100mg,0.157mmol)加入到单口瓶中，向其中加入甲醇5mL，水2mL，氢氧化锂(12mg,0.500mmol)，室温过夜。LCMS显示反应完成，旋干甲醇，用1N HCl调节体系PH至5，析出固体，过滤，收集滤饼，得白色固体6(60mg，产率：73％)，[M+H]⁺：625.2。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.84(t,J＝8.0Hz,1H),7.63-7.57(m,2H),7.48-7.35(m,3H),7.13-7.04(m,3H),5.12(d,J＝8.0Hz,1H),4.79(dd,J＝16.0,8.0Hz,1H),4.64(t,J＝16.0Hz,2H),4.52(s,1H),4.49(d,J＝8.0Hz,1H)，4.35–4.30(m,1H),2.78-2.71(m,1H),2.42-2.34(m,1H).

实施例7

2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(7)的合成

步骤1：6-溴-1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-2,3-二氢-1H-吲哚(7-2)的合成

将7-1(100mg,0.51mmol)溶于5mLDMF中，加入NaH(50mg,1.26mmol),0℃反应10min，加化合物4-2(113mg,0.51mmol),室温反应过夜。TLC监控反应完成。向体系中加入20mL水，用20mL乙酸乙酯萃取，有机相用20mL饱和氯化钠水溶液洗涤一次，有机相干燥旋干，得淡黄色油粗品7-2(140mg，产率：81％)，未经纯化直接投下一步反应，[M+H]⁺：340.3。

步骤2：甲基-2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(7-3)的合成

将7-2(140mg，crude)加到单口瓶中，向其中加入1-5(200mg，crude),Pd(dppf)Cl₂(22mg，0.028mmol)，碳酸铯(270mg，0.83mmol),dioxane/H₂O(4mL/1mL)，100℃过夜。LCMS显示反应完成，过滤，滤液柱层析纯化，得白色固体7-3(80mg，产率：31％)，[M+H]⁺：632.3。

步骤3：2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(7)的合成

将7-3(80mg，0.127mmol)加入到单口瓶中，向其中加入甲醇5mL，水2mL，氢氧化锂(12mg,0.500mmol)，室温过夜。LCMS显示反应完成，旋干甲醇，用1N HCl调节体系PH至5，析出固体，过滤，收集滤饼，得白色固体7(50mg，产率：64％)，[M+H]⁺：618.2。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(s,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.82(d,J＝18.0Hz,1H),7.36(t,J＝8.0Hz,1H),7.16–7.12(m,5H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),6.62(s,1H),5.22(s,1H),4.69-4.40(m,6H),4.34(s,2H),3.46(t,J＝8.4Hz,2H),3.05(t,J＝8.0Hz，2H),2.78-2.73(m,1H),2.47-2.43(m,1H).

实施例8

2-[(4-{1-[(4-氰基-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(8)的合成

步骤1：4-(6-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基}甲基)-3-氟苯甲腈(8-2)的合成

将4-1(50mg，0.327mmol)溶解在DMF(3mL)中，0℃下加NaH(14mg，0.359mmol)，体系在0℃下搅拌10min后下滴加8-1(77mg，0.359mmol),室温反应1h。反应完全后加水淬灭，过滤，水洗涤滤饼，滤饼烘干得到白色固体产物8-2(110mg，产率：100％)。

步骤2：甲基-2-(4-{1-[(4-氰基-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(8-3)的合成

将8-2(63mg，0.222mmol)，1-5(150mg，0.222mmol)，Pd(dppf)Cl₂(16mg，0.032mmol)，Cs₂CO₃(93mg，0.671mmol)溶于dioxane/H₂O(5mL/1mL)中，在氮气环境下80℃下搅拌2h。反应液通过硅藻土过滤，EA洗涤滤饼，浓缩干滤液得到产物粗品，柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝1:1)得到黄色油状物8-3(64mg，产率：47％)，[M+H]⁺：622.62。

步骤3：2-[(4-{1-[(4-氰基-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(8)的合成

将化合物8-3(59mg，0.095mmol)加入到ACN(10mL)，加H₂O(2mL)和LiOH(20mg，0.476mmol)，室温30℃搅拌16h。反应完全后加入H₂O(5mL)，用1N HCl调节pH<3，EA萃取，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到产物粗品用prep-TLC纯化得白色固体产物8(20mg，产率：35％)，[M+H]⁺：608.59。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.14-8.12(m,2H),7.92-7.85(m,4H),7.76-7.34(m,2H),7.66(dd,J＝7.6Hz，J＝1.6Hz，1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),5.72(s,2H),5.13(d,J＝7.6Hz,1H),4.77-4.72(m,1H),4.65-4.60(m,1H),4.55-4.49(m,2H),4.44-4.33(m,2H),2.74-2.68(m,1H),2.45-2.41(m,1H).

实施例9

2-[(2,6-二氟-4-{6-[(7-氟喹啉-6-基)甲氧基]吡啶-2-基}苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(9)的合成

步骤1：7-氟喹啉-6-甲醛(9-2)的合成

室温下，将9-1(200mg，0.889mmol)溶于THF(5mL)，降温到-78℃，氮气环境下缓慢滴加n-BuLi(0.65mL,9.8mmol),-78℃搅拌0.5h。然后加入DMF(78mg,1.067mmol)，反应完全后加饱和氯化铵溶液淬灭，EA 30mL萃取，分出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩干滤液得到产物粗品，通过柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝3:1)得到白色固体产物9-2(62mg，产率：40％)，[M+H]⁺：176.16。

步骤2：(7-氟喹啉-6-基)甲醇(9-3)的合成

将9-2(310mg，1.771mmol)加入到MeOH(10mL)中，0℃缓慢加入硼氢化钠(74mg,1.949mmol))，加完后室温搅拌1h。反应完全后加水淬灭，过滤，水洗涤滤饼，滤饼烘干得到黄色固体产物9-3(281mg，产率：90％)，[M+H]⁺：178.79。

步骤3：6-{[(6-溴吡啶-2-基)氧]甲基}-7-氟喹啉(9-5)的合成

将9-3(100mg，0.565mmol)溶解在DMF(5mL)中，0℃下加NaH(27mg，0.678mmol)，体系在0℃下搅拌10min，0℃下滴加9-4(109mg，0.565mmol),室温反应1h。反应完全后加水淬灭，过滤，水洗涤滤饼，滤饼烘干得到白色固体产物9-5(80mg，产率：43％)，[M+H]⁺：334.16。

步骤4：甲基-2-[(2,6-二氟-4-{6-[(7-氟喹啉-6-基)甲氧基]吡啶-2-基}苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(9-6)的合成

将9-5(57mg，0.321mmol)，1-5(160mg，0.321mmol)，RuPhos Pd G₂(25mg，0.032mmol),RuPhos(15mg，0.032mmol)，K₂CO₃(133mg，0.966mmol)溶于dioxane/H₂O(5mL/1mL)，在氮气环境下80℃搅拌2h。反应液通过硅藻土过滤，用EA(10mL)洗涤滤饼，浓缩干滤液得到产物粗品，柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝1:1)得到白色固体产物9-6(84mg，产率：42％)，[M+H]⁺：625.62。

步骤5：2-[(2,6-二氟-4-{6-[(7-氟喹啉-6-基)甲氧基]吡啶-2-基}苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(9)的合成

将9-6(84mg，0.135mmol)加入到THF(5mL)中，加入H₂O(1mL)和LiOH(28mg，0.673mmol)，室温35℃搅拌20h，反应完全后将THF浓缩干，加入H₂O(5mL)，用1N HCl调节pH<3，EA萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物粗品，用EA(2mL)搅拌2h，过滤干燥滤饼得到白色固体产物9(4mg，产率：5％)，[M+H]⁺：611.59。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.93(d,J＝4.4Hz,1H),8.42(d,J＝8.4Hz,1H),8.27(s,1H),8.25(s,1H),7.92-7.73(m,6H),7.56-7.52(m,2H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),5.75(s,2H),5.13-5.11(m,1H),4.83-4.77(m,1H),4.69-4.33(m,5H),2.77-2.72(m,1H),2.42-2.37(m,1H).

实施例10

2-({2,6-二氟-4-[2-(7-氟喹啉-6-基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(10)的合成

步骤1：2-溴-6-[(7-氟喹啉-6-基)(羟基)甲基]苯酚(10-3)的合成

将9-1(500mg，2.21mmol)加入(10mL)Et₂O中，在氮气氛围下，-78℃滴加n-BuLi的THF溶液(1.3mL，1.99mmol)，反应1h后，加入化合物10-2(222mg，1.11mmol)，继续反应3h，TLC显示原料9-1完全反应，升温至室温，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应液，加入EA萃取，浓缩得到产物粗品，柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝15:1)得到黄色固体产物10-3(210mg，产率：27％)，[M+H]⁺：348.2。

步骤2：6-(4-溴-2H-1,3-苯并二氧杂环-2-基)-7-氟喹啉(10-4)的合成

将10-3(210mg，0.61mmol)，NaIO₄(324mg，1.51mmol)溶于MeOH(2.5mL)，H₂O(0.5mL)中，氮气氛围室温下反应24h。TLC显示原料10-3反应完全，反应液通过硅藻土过滤，EA洗涤滤饼，浓缩干滤液得到产物粗品，柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝50:1)得到白色固体产物10-4(180mg，产率：86％)，[M+H]⁺：346.2。

步骤3：甲基-2-({2,6-二氟-4-[2-(7-氟喹啉-6-基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸盐(10-6)的合成

将10-4(180mg，0.52mmol)，1-5(239mg，0.57mmol)，Pd(dppf)Cl₂(53mg，0.05mmol),Cs₂CO₃(340mg，1.04mmol)溶于Dioxane/H₂O(10mL/2mL)中，氮气氛围下，90℃回流10h。TLC显示原料10-4反应完全，将反应液通过硅藻土过滤，用EA洗涤滤饼，浓缩干滤液得到产物粗品，柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝1:1)得到白色固体产物10-6(55mg，产率：18％)，[M+H]⁺：638.2。

步骤4：2-({2,6-二氟-4-[2-(7-氟喹啉-6-基)-2H-1,3-苯并二氧杂环-4-基]苯基}甲基)-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1，3-苯二唑-6-羧酸(10)的合成

将10-6(55mg，0.09mmol)加入到MeOH(2mL)中，加入H₂O(0.5ml)和KOH(10mg，0.18mmol)。体系在40℃下搅拌5h，反应完全后将MeOH浓缩干，加入H₂O(2mL)，用1N HCl调节pH至6～7，EA萃取浓缩得到产物粗品通过prep-TLC纯化(V_DCM：V_MeOH＝10:1)得到白色固体产物(15mg，产率：28％)，[M+H]⁺：624.2

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.01(s,1H),8.57(d,J＝8.4Hz,1H),8.42(d,J＝7.8Hz,1H),8.15(s,1H),7.93(d,J＝11.9Hz,1H),7.73(s,1H),7.69(s,1H),7.59(dd,J＝13.9,8.7Hz,3H),7.48(s,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),7.09(dt,J＝15.7,7.7Hz,2H),5.40(brs,1H)，4.48-4.30(m,4H),4.01(s,1H),3.74(s,1H),2.03(brs,1H),1.93(brs,1H).

实施例11

2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H，2H，3H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲酯]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(11)的合成

步骤1：6-氯-1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H，2H，3H-吡咯并[2,3-b]吡啶(11-2)的合成

将化合物4-3(100mg，0.340mmol)溶于三乙基硅烷(5mL)，70℃搅拌12h。加水淬灭，用EA萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得无色油状产物11-2(115mg)，未进一步纯化直接投下一步反应。

步骤2：甲基-2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H，2H，3H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲酯]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(11-3)的合成

将11-2(115mg，0.387mmol)，1-5(212mg，0.426mmol)，Pd(dppf)Cl₂(28mg，0.039mmol),Cs₂CO₃(379mg，1.162mmol)溶于Dioxane/H₂O(10mL/2mL)，体系在氮气环境下100℃反应16h。反应液通过硅藻土过滤，用EA洗涤滤饼，浓缩干滤液得到产物粗品，柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝1:1)得到白色固体产物11-3(16mg，产率：7％)，[M+H]⁺：634.06。

步骤3：2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H，2H，3H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(11)的合成

将11-3(16mg，0.025mmol)加入到THF(2mL)中，加入H₂O(0.5mL)和LiOH(5mg，0.126mmol)，体系在室温35℃下搅拌20h，反应完全后将THF浓缩干，加入H₂O(5mL)，用1NHCl调节pH至3～5，用EA萃取，浓缩得到产物粗品，prep-TLC纯化(V_hexane：V_EA＝2:1)得到白色固体产物11(1.5mg，产率：9％)，[M+H]⁺：620.03。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝1.6Hz,1H),7.78-7.75(m,3H),7.56(d,J＝2.4Hz,1H),7.52-7.39(m,3H)，7.30(dd,J＝8.4Hz,J＝2.0Hz,1H),7.22(d,J＝7.2Hz,1H),6.51(s，1H),5.12-5.09(m,1H),4.82-4.76(m,1H),4.67-4.63(m,2H),4.55-4.51(m,2H),4.44-4.40(m,1H),4.38-4.23(m,1H),3.54(t,J＝8.4Hz,2H),3.04(t,J＝8.4Hz,2H),2.76-2.68(m,1H)，2.42-2.33(m,1H).

实施例12

2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(12)的合成

步骤1：甲基-2-[(4-{1-[(四氯-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(12-1)的合成

将化合物4-3(53mg，0.181mmol)，1-5(90mg，0.181mmol)，Pd(dppf)Cl₂(13mg，0.018mmol),Cs₂CO₃(177mg，0.542mmol)溶于Dioxane/H₂O(10mL/2mL)，体系在氮气环境下100℃反应5h。反应液通过硅藻土过滤，用EA洗涤滤饼，浓缩干滤液得到产物粗品，柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝1:1)得到白色固体产物12-1(40mg，产率：35％)，[M+H]⁺：632.01。

步骤2：2-[(4-{1-[(4-氯-2-氟苯基)甲基]-1H吡咯[2,3-b]吡啶-6-基}-2,6-二氟苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(12)的合成

将12-1(40mg，0.063mmol)加入到MeOH(5mL)中，加入H₂O(1mL)和LiOH(13mg，0.317mmol)。体系在室温35℃下搅拌20h，反应完全后将MeOH浓缩干，加入H₂O(5mL)，用1NHCl调节pH至3～5，用EA萃取，浓缩得到产物粗品，prep-TLC纯化(V_hexane：V_EA＝2:1)得到白色固体产物12(18mg，产率：46％)，[M+H]⁺：618.03。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝1.6Hz,1H),8.12(d,J＝8.4Hz,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),7.86(d,J＝8.0Hz,1H)，7.78-7.76(m,2H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.48(dd,J＝10.0Hz,J＝2.0Hz，1H),7.32-7.24(m,2H),6.59(d,J＝3.6Hz,1H),5.62(s,2H),5.13(d,J＝6.8Hz,1H),4.82-4.77(m,1H),4.65-4.58(m,1H),4.52-4.34(m,4H),2.77-2.73(m,1H),2.43-2.41(m,1H).

实施例13

2-[(2,6-二氟-4-{1-[(7-氟喹啉-6-基)甲基]-1H吡咯并[2,3-b]吡啶-6-烷基}苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(13)的合成

步骤1：(7-氟喹啉-6-基)甲醇(13-2)的合成

将13-1(500mg，2.86mmol)，溶液(10mL)MeOH中，在冰水浴下，分批少量加入NaBH₄(326mg，8.57mmol)，反应10分钟后，TLC显示原料反应完全，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用DCM萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液浓缩得到黄白色固体13-2(490mg，产率：97％)，[M+H]⁺：178.16。

步骤2：6-(6-溴-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-1-基}甲基)-7-氟喹啉(13-4)的合成

将13-2(490mg，2.77mmol)，13-3(597mg，3.05mmol)，Ph₃P(943mg，3.60mmol)，溶于THF(8mL)中，体系在氮气氛围冰水浴下搅拌，缓慢滴加DEAD的THF溶液(650mg，3.74mmol)，反应6h后，TLC显示原料13-2大部分反应完全，反应液通过饱和氯化铵溶液淬灭，用EA萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液浓缩得到产物粗品通过柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝10:1)得到白色固体产物13-4(370mg，产率：38％)，[M+H]⁺：356.21。

步骤3：甲基-2-[(2,6-二氟-4-{1-[(7-氟喹啉-6-基)甲基]-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-6-烷基}苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸盐(13-6)的合成

将13-4(370mg，1.04mmol)，1-5(478mg，1.15mmol)，Pd(dppf)Cl₂(85mg，0.11mmol)，Cs₂CO₃(680mg，2.08mmol)溶于Dioxane/H₂O(5mL/1mL)中，体系在氮气氛围下，90℃回流8h。TLC显示原料13-4几乎反应完全，将反应液通过硅藻土过滤，用EA洗涤滤饼，浓缩干滤液得到产物粗品，柱层析纯化(V_hexane：V_EA＝1:1)得到白色固体产物13-6(210mg，产率：31％)，[M+H]⁺：648.36。

步骤4：2-[(2,6-二氟-4-{1-[(7-氟喹啉-6-基)甲基]-1H吡咯并[2,3-b]吡啶-6-烷基}苯基)甲基]-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酸(13)的合成

将13-6(210mg，0.32mmol)加入到MeOH(3mL)中，加入H₂O(0.6mL)和KOH(36mg，0.65mmol)。体系在40℃下搅拌6h，TLC显示原料13-6反应完全后，将MeOH浓缩干，加入H₂O(3mL)，用1N HCl调节pH至6～7，用EA萃取，浓缩得到产物粗品，prep-TLC纯化(V_DCM：V_MeOH＝10:1)得到白色固体产物13(120mg，产率：58％)，[M+H]⁺：634.11。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.89(d,J＝4.1Hz,1H),8.33(d,J＝8.3Hz,1H),8.22(s,1H),8.13(d,J＝8.2Hz,1H),7.92(t,J＝7.9Hz,3H),7.86(d,J＝8.2Hz,1H),7.81(d,J＝11.4Hz,1H),7.81–7.71(m,2H),7.57–7.44(m,2H),6.63(d,J＝3.5Hz,1H),5.83(s,2H),5.42(d,J＝5.8Hz,1H),4.51(dd,J＝15.5,9.4Hz,2H),4.45–4.27(m,1H),4.03(s,1H),3.80(dq,J＝18.0,10.0,7.9Hz,2H),2.08(s,1H),1.95(s,1H).

生物测试例

本发明化合物对GLP-1受体激动效能的测试实验。

细胞、试剂和耗材如下：

实验方法

CRE-Luc/GLP1R/HEK293激动剂模式下化合物EC₅₀测定(通过Fire-Lumi^TM荧光素酶检测试剂盒进行检测)。收集对数生长期HEK293/CRE-Luc/GLP1R细胞，计数，用完全培养基(D MEM+10％FBS+400μg/mL G418+200μg/mL HygromycinB)重新悬浮细胞，调整细胞浓度至合适浓度，接种384孔板，每孔加20μL细胞悬液。细胞在37℃，100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育过夜。用培养基将待测化合物稀释至所设置的相应作用浓度，每孔20μL加入细胞。待测化合物的作用终浓度及稀释梯度视具体要求而定，如100μM,4倍稀释，9个浓度，2个复孔。细胞置于37℃，100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育6h。加入40μL/well One-Glodetection solution。轻轻震荡后在ENVISION 2104酶标仪上测定luminescience。使用专业软件Graphpad prisma拟合曲线并计算EC₅₀。

实验结果表明本发明化合物表现出较强的GLP-1受体激动效应；

其中式(Ⅰ)结构通式中的部分化合物以及其与最接近的结构式(对照组1；制备方法参照专利CN112533674A)的实验结果如表1所示：

表1式(Ⅰ)结构通式中的部分化合物对GLP-1受体激动作用

其中式(Ⅱ)结构通式中的部分化合物以及其与最接近的结构式(对照组2；制备方法参照专利CN113227068A)的实验结果如表2所示：

表2式(Ⅱ)结构通式中的部分化合物对GLP-1受体激动作用

其中式(Ⅲ)结构通式中的部分化合物以及其与最接近的结构式(对照组3；制备方法参照专利WO2022068772A1)的实验结果如表3所示：

表3式(Ⅲ)结构通式中的部分化合物对GLP-1受体激动作用。

肝微粒稳定性实验

制备获取所需的种属肝微粒体(例如小鼠、大鼠、犬、猴子或者人)。以DMSO为稀释剂，配制10mM浓度的试样原液和阳性对照原液。然后用70％乙腈将所有原液稀释至0.25mM的工作浓度。本研究使用的辅助因子为NADPH再生体系，该体系由6.5mM NADP、16.5mM G-6-P、3U/mL G-6-P D组成。淬火试剂为含甲苯磺丁脲和心得安的乙腈溶液。本研究使用的缓冲液为100mM磷酸钾缓冲液。含0.2mg/mL肝微粒体蛋白和1μM试验品/阳性对照的混合物在100mM磷酸钾缓冲液中孵育。

每一种孵育液80μL加入300μL淬火试剂中沉淀蛋白，制备0分钟的样品。样品涡旋后，加入20μL的NADPH再生体系。每个孵育液520μL加入130μL的NADPH再生体系引发反应。650μL的最终孵育条件为：0.2mg/mL微粒体蛋白、1μM条带/阳性对照、1.3mM NADP、3.3mM葡萄糖6磷酸、0.6U/mL葡萄糖6磷酸脱氢酶。将混合物放入37℃的水浴中，轻轻摇晃。分别于0、5、10、30、60分钟取100μL的混合物，置于包含300μL淬火试剂沉淀蛋白的96孔板上，离心(5000×g，10分钟)。取80μL上清液加入预先添加160μL超纯水的96孔检测板，用LC-MS/MS进行分析。数据处理获得消除半衰期(T_1/2，T_1/2＝0.693/K)和体外清除率(Cl_int)。

本发明的部分化合物在SD大鼠肝微粒体稳定性结果具体见下表(表4)；

表4：本发明的部分化合物在SD大鼠肝微粒体稳定性结果

实验发现本发明化合物在肝微粒体中T_1/2(min)>80min，优选的T_1/2(min)>100min，具有良好的肝微粒代谢稳定性。

药代动力学实验

被研究化合物单次口服或者静脉给药(溶媒5％DMSO+10％Solutol(HS-15)+85％saline)于动物(例如小鼠、大鼠、犬或者猴子)，在固定的时间点取血。血样采集后，立即温和地颠倒试管至少5次，保证混合充分后放置于冰上。血液用肝素抗凝，然后8000rpm离心5分钟，将血清与红细胞分离。用移液器吸岀血清转移至2mL的聚丙烯管，标明化合物的名称和时间点，在进行LC-MS分析前保存在-40℃冰箱，待测。髙浓度样品用空白血浆稀释测定时。样品处理后，用LCMS/MS对血浆中的物质进行定量分析。通过进行了验证的药动学计算机程序，用以这种方式获得的血浆浓度/时曲线来计算药动学参数。实验发现本发明化合物均具有较好的药代动力学性质。

SD雄性大鼠以表5组别剂量口服给药后(各组为等摩尔剂量给药，溶媒为5％DMSO+10％Solutol(HS-15)+85％saline，每组3只)，在固定的时间点取血检测。本发明的部分化合物的在大鼠血浆中的原型游离分子药代动力学参数如下表5；

表5：本发明的部分化合物的在大鼠血浆中的原型游离分子药代动力学参数。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.一种式(Ⅰ)或式(Ⅱ)或(Ⅲ)的化合物或其立体异构体，或其药学上可接受的盐，

其中，环A选自取代或未取代的：苯基、吡啶基、喹啉、

每个R¹和R²独立地选自H、卤素、-CN、-OH、C_2-6炔基、C_2-6烯基、C_1-6烷基、-OC_1-6烷基、卤代C_1-6烷基；

R³选自C_1-6烷基、

其中所述烷基可被1至3个卤素、-CN、-OC_1-6烷基取代；

Z₁选自CH或N；

n、m各自独立的选自0、1、2、3、4。

2.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体，或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中，环A选自苯基、喹啉；每个R¹独立选自卤素、-CN；每个R²独立地选自H、卤素。

3.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体，或其药学上可接受的盐，其特征在于，

其中R³选自

4.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体，或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自以下任一结构：

5.一种药物组合物，其包含权利要求1至4中任一项的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的赋形剂。

6.一种治疗心脏代谢疾病及相关疾病的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物给予治疗有效量的权利要求1至4中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或如权利要求5所述的药物组合物，其中所述的疾病为T1D、T2DM、糖尿病前期、特发性T1D、LADA、EOD、YOAD、MODY、营养不良相关性糖尿病、妊娠糖尿病、高血糖症、胰岛素抗性、肝脏胰岛素抗性、葡萄糖耐受不良、糖尿病神经病变、糖尿病肾病变、肾疾病、糖尿病视网膜病变、脂肪细胞功能障碍、内脏脂肪细胞囤积、睡眠窒息症、肥胖症、进食障碍、使用其它药剂导致的体重增加、过度嗜糖、血脂异常症、高胰岛素血症、NAFLD、NASH、纤维变性、硬化、肝细胞癌、心血管疾病、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、外周血管疾病、高血压、内皮功能障碍、受损的血管顺应性、充血心力衰竭、心肌梗塞、中风、出血性中风、缺血性中风、创伤性脑损伤、肺性高血压、血管成形术后再狭窄、间歇性跛行、餐后脂血症、代谢性酸中毒、酮体症、关节炎、骨质疏松症、帕金森病、左心室肥大、外周动脉疾病、黄斑变性、白内障、肾小球硬化、慢性肾衰竭、代谢综合征、综合征X、经前综合征、心绞痛、血栓症、动脉粥样硬化、短暂性脑缺血发作、血管再狭窄、葡萄糖代谢不良、受损的空腹血糖病况、高尿酸血症、痛风、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织异常、牛皮癣、足部溃疡、溃疡性结肠炎、高apo B脂蛋白血症、阿尔茨海默病、精神分裂症、认知功能受损、炎性肠病、短肠综合征、克隆病、结肠炎、肠易激综合征、多囊性卵巢综合征的预防或治疗及成瘾的治疗。