CN115697408A - 超免疫igg和/或igm组合物及其制备方法及自捐献者获得超免疫人血浆的方法 - Google Patents

超免疫igg和/或igm组合物及其制备方法及自捐献者获得超免疫人血浆的方法 Download PDF

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Abstract

本公开内容涉及液体治疗性超免疫球蛋白组合物，其包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)，该人血浆来源的IgG具有按mg/mL IgG计在250和2,500之间的抗体效价和/或按mg/mL IgG计在1.5和15之间的SARS‑CoV‑2中和活性(IC50中和效价)，其用于治疗有相应需要的患者的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019，COVID‑19)。本公开内容还涉及液体治疗性或预防性超免疫免疫球蛋白组合物，其制备方法及其用于治疗或预防COVID‑19的用途，该液体治疗性或预防性超免疫免疫球蛋白组合包含具有在2,000和17,000之间的SARS‑CoV‑2效价和/或在200和70,000之间的SARS‑CoV‑2中和活性(IC50中和效价)的人血浆来源的免疫球蛋白M(IgM)。最后，本公开内容还涉及自捐献者获得超免疫人血浆用于治疗COVID‑19的方法。

Description

超免疫IGG和/或IGM组合物及其制备方法及自捐献者获得超 免疫人血浆的方法
描述
本发明涉及医药产品领域。特别地，本发明涉及液体治疗性超免疫球蛋白组合物、其制备方法及其治疗有相应需要的患者的COVID-19的用途，所述组合物包含自经历过新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的患者获得的SARS-CoV-2恢复期血浆制备的人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)和/或免疫球蛋白M(IgM)。本发明还涉及自捐献者获得超免疫人血浆以用于治疗有相应需要的患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，其中该捐献者具有COVID-19的实验室确诊诊断且处于恢复期非感染状态。
COVID-19是由新出现的冠状病毒，即严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的呼吸道感染，该病毒于2019年首次被发现(世界卫生组织临时指南2020年3月13日)。对该病毒的遗传测序表明SARS-CoV-2是与严重急性呼吸系统综合征(SARS)病毒密切相关的β冠状病毒(Team NCPERE 2020)。尽管大多数患有COVID-19的人发展为轻度或无并发症的疾病，但约14％会发展为需要住院及氧气支持的严重疾病，且5％需要入住重症监护病房(Team NCPERE 2020)。在严重的情况下，COVID-19可能会并发急性呼吸系统疾病综合征(ARDS)、脓毒症及感染性休克、多器官衰竭，包括急性肾损伤及心脏损伤(Yang等人,2020)。年龄较大及合并症已报导为死亡风险因素，且最近的多变量分析证实，年龄较大、较高的后续器官衰竭评估(SOFA)评分及入院时d-二聚体>1μg/L与较高的死亡率相关。该研究还观测到，在幸存者中病毒RNA检测的中位持续时间为20.0天(四分位距[IQR]17.0-24.0)，但在非幸存者中直至死亡均可检测到SARS-CoV-2病毒。在幸存者中观察到的最长病毒脱落持续时间为37天(Huang等人,2020；Zhou等人,2020)。
缺乏针对COVID-19治疗的疾病导向性治疗选项已导致需要采取紧急干预措施，以期获得一些潜在的有前景的效果。一些抗病毒药物目前正在评估中。这些包括日本Fujifilm生产的法匹拉韦(favipirivir，
Figure BDA0003973823730000021
)、Gilead生产的瑞德西韦(remdesivir)及市售用于人类免疫缺陷病毒(HIV)的
Figure BDA0003973823730000022
(洛匹那韦(lopinavir)/利托那韦(ritonavir))。根据Clinicaltrials.gov及其他临床试验注册机构，还对氯喹及羟氯喹作为治疗模式及暴露后预防的潜在应用进行了调查。世界卫生组织(WHO)网站上描述了这些及其他潜在的治疗剂。
治疗COVID-19的方法中的一种为被动免疫；即向患者施用来自已从COVID-19恢复且具有针对这种感染的抗体的捐献者的血浆(超免疫血浆)。这称为SARS-CoV-2恢复期人血浆，且其可用于治疗有相应需要的患者的COVID-19，以降低需要或不需要重症监护病房(ICU)入院患者的全因死亡率和/或降低临床严重程度、住院持续时间及ICU停留时间、对氧气及呼吸机支持的依赖。
自西班牙流感大流行(Luke,T.C.等人,2006)至最近爆发的严重急性呼吸系统综合征(SARS)(Soo,Y.O.等人,2004)、中东呼吸综合征(MERS)(Ko,J.H.等人,2018)及埃博拉(Mupapa,K.等人,1999)，恢复期血浆在治疗感染性疾病方面有着悠久历史。
然而，恢复期血浆存在一些缺点，包括其中抗体的性质、效价(titer)及中和能力可能因捐献者不同有很大差异。此外，存在与输注恢复期血浆量相关的风险(输血相关循环超负荷)、需要匹配捐献者/接受者血型、输血相关过敏反应的可能性以及缺乏经验证的病原体减少过程。
本申请的发明人已惊奇地发现，可通过将特异性抗体纯化及浓缩成药物制剂来克服使用来自恢复期捐献者的抗SARS-CoV-2超免疫血浆的缺点。因此，本发明公开了由恢复期或接种过疫苗的捐献者的混合血浆(pooled plasma)制成的超免疫球蛋白和/或免疫球蛋白M(IgM)组合物，其可用于治疗患有严重临床疾病的COVID-19患者，以减轻其症状、发病率及死亡率。
此外，本申请的发明人已开发出自SARS-CoV-2恢复期人血浆制备所述超免疫球蛋白和/或IgM组合物的方法，产生关于恢复期血浆的具有改良抗体效价及中和活性的高纯度IgG和/或IgM组合物。
所述方法包括已针对病毒清除率及血液分型进行验证的处理步骤，从而降低无意中转移已知感染原或引发输血反应的风险。因此，超免疫球蛋白和/或IgM组合物相对于恢复期血浆的另一优势在于处理过程中固有的病原体清除能力。用于输血及制备两者的恢复期血浆均需要测试常见病毒病原体，诸如人类免疫缺陷病毒(HIV)及乙型肝炎病毒。然而，在存在新型病毒污染物的情况下，本文描述的制备超免疫球蛋白和/或IgM组合物的方法包括经验证移除或灭活任何病毒病原体的步骤。
本申请的发明人还惊奇地发现，所述超免疫血浆可自恢复期抗SARS-CoV-2获得。对于患有严重临床疾病的患者而言，恢复期血浆针对COVID-19的治疗用途也受到关注，可减轻他们的症状、发病率及死亡率。
恢复期血浆的被动施用可能涵盖与血液物质输送相关的典型风险，包括无意中感染另一种感染性疾病病原体及与血浆成分反应。使用筛选血源性病原体且匹配捐献者与接受者的血型的现代血库技术，无意中输送已知感染性病原体或引发输血反应的风险是低的。
概述
本发明公开了液体治疗性超免疫球蛋白组合物，其包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)，所述人血浆来源的IgG的纯度为总蛋白含量的至少97％，且具有按mg/mL IgG计在250和2,500之间的SARS-CoV-2抗体效价和/或按mg/mL IgG计在1.5和15之间的SARS-CoV-2中和活性。
在一些实施方案中，所述人血浆来源的IgG的纯度为总蛋白含量的至少98％，优选地至少99％。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价按mg/mL IgG计在300和2,200之间，优选地在350和2,000之间，更优选地在400和1,900之间，甚至更优选地在450和1,800之间，仍更优选地在485和1,700之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价按mg/mL IgG计大于300，优选地大于500，优选地大于750，优选地大于1,000，优选地大于1,500，优选地大于2000。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgG计在1.8和12之间，优选地在2和10.5之间，更优选地在2.2和9.5之间，仍更优选地在2.4和8.8之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgG计大于1.5，优选地大于2，优选地大于2.5，优选地大于5，优选地大于7.5，优选地大于10，优选地大于12.5。
在一些实施方案中，人血浆来源的IgG含量在5％和20％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgG含量在9％和11％(w/v)之间。
在一些实施方案中，至少90％的人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。
在其他实施方案中，免疫球蛋白A(IgA)的含量等于或低于0.04mg/ml和/或免疫球蛋白M(IgM)的含量等于或低于0.01mg/ml。
本发明还公开了液体治疗性超免疫球蛋白组合物，其包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)，所述人血浆来源的IgG的纯度为总蛋白含量的至少97％，且具有在25,000和250,000之间的SARS-CoV-2抗体效价和/或在150和1,500之间的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)。
在一些实施方案中，所述人血浆来源的IgG的纯度为总蛋白含量的至少98％，优选地至少99％。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价在50,000和200,000之间，优选地在75,000和150,000之间，更优选地在100,000和125,000之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价大于50,000，优选地大于75,000，优选地大于100,000，优选地大于150,000。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性在200和1,250之间，优选地在250和1,000之间，更优选地在300和725之间，更优选地在400和500之间。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性大于200，优选地大于300，优选地大于400，优选地大于500，优选地大于750，优选地大于1,000。
在一些实施方案中，人血浆来源的IgG含量在5％和20％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgG含量在9％和11％(w/v)之间。
在一些实施方案中，至少90％的人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。
在其他实施方案中，免疫球蛋白A(IgA)的含量等于或低于0.04mg/ml和/或免疫球蛋白M(IgM)的含量等于或低于0.01mg/ml。
本发明还公开了如本文描述的液体治疗性超免疫球蛋白组合物，其用于治疗有相应需要的患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。
本发明还公开了用于自包含抗SARS-CoV-2 IgG抗体的起始溶液制备如本文描述的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法，所述方法包括以下的顺序步骤a)至e)：
a)将起始溶液的pH调节到约3.8至约4.5范围内，以形成包含溶解的抗体的中间溶液；
b)向步骤a)的中间溶液添加辛酸根离子源并将中间溶液的pH调节至约5.0至约5.2的范围内，以形成沉淀物及包含溶解的抗体的上清液溶液；
c)在一定时间、温度及辛酸根离子浓度的条件下孵育上清液溶液以灭活实质上所有病毒；
d)使上清液溶液与至少一种离子交换树脂在允许包括IgA或IgM的至少一些其他物质与树脂结合而不允许包括IgG的抗体与树脂结合的条件下接触；及
e)收集IgG抗体，
其中起始溶液为SARS-CoV-2恢复期人血浆。
在一些实施方案中，所述SARS-CoV-2恢复期人血浆是来自至少两名恢复期捐献者的血浆样品的池。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2恢复期人血浆经测试血源性病原体及人白细胞抗原(HLA)抗体中的至少一种呈阴性。在其他实施方案中，测试所述SARS-CoV-2恢复期人血浆的血型。
本发明还公开了液体治疗性超免疫IgM组合物，其包含人血浆来源的免疫球蛋白M(IgM)，人血浆来源的IgM的纯度为总免疫球蛋白含量的至少85％，且具有2,000和17,000之间的SAR-CoV-2效价和/或在200和70,000之间的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)。
在一些实施方案中，所述人血浆来源的IgM的纯度为总免疫球蛋白含量的至少90％，优选地至少94％，更优选地至少95％或至少96％。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价在3,000和13,000之间，优选地在4,000和12,000之间，更优选地在5,000和11,000之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价大于2,000，优选地大于4,000，优选地大于5,000，优选地大于6,000。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性在300和60,000之间，优选地在500和50,000之间，更优选地在1,000和40,000之间，更优选地在2,000和30,000之间。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性大于200，优选地大于300，优选地大于400，优选地大于500，优选地大于800，优选地大于1,000，优选地大于2,000，优选地大于大于5,000，优选地大于8,000，优选地大于10,000。
在一些实施方案中，人血浆来源的IgM含量在1％和10％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgM含量在1.5％和5％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgM含量为约2.5％(w/v)。在一些实施方案中，人血浆来源的IgM含量大于1％(w/v)，或大于2％(w/v)，或大于3％(w/v)，或大于4％(w/v)，或大于5％(w/v)。
在一些实施方案中，至少75％的人血浆来源的IgM以五聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少90％的人血浆来源的IgM以五聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少94％以五聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少95％或至少98％以五聚体形式存在。
在其他实施方案中，免疫球蛋白G(IgG)的含量等于或低于总免疫球蛋白的7％，优选地等于或低于2％，和/或免疫球蛋白A(IgA)的含量等于或低于总免疫球蛋白的7％，优选地等于或低于4％。
本发明还涉及如本文描述的液体治疗性超免疫IgM组合物，其用于治疗有相应需要的患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。
本发明还涉及用于自包含抗SARS-CoV-2 IgM抗体的起始溶液制备如本文描述的液体治疗性超免疫IgM组合物的方法，所述方法包括以下的顺序步骤a)至f)：
a)使用聚乙二醇(PEG)沉淀所述IgM；
b)使沉淀的IgM重悬；
c)吸附色谱法；
d)同种凝集素亲和色谱法；
e)纳滤；及
f)超滤/渗滤，
其中起始溶液自SARS-CoV-2恢复期人血浆获得。
在本发明的方法中，所用起始材料可来自不同来源。例如，用于所描述的IgM过程的源材料可为来自串联操作的两个Gamunex过程(如美国专利6,307,028中描述的)阴离子交换色谱柱(Q琼脂糖凝胶或ANX琼脂糖凝胶)中的任一个的柱洗提物(strip)。在该过程中，如在提及的专利中描述的，从由Grifols血浆级分分离过程产生的级分II+III糊状物纯化IgG。简言之，在阴离子交换柱流中收集IgG之后，通过应用pH 5.2的包含0.5M乙酸钠的缓冲液洗脱结合的蛋白，几乎完全为免疫球蛋白(IgM、IgG及IgA)。各柱经单独洗提，其中可进一步处理任一个或两个级分以纯化IgM。三种免疫球蛋白中每一种的丰度比在两个柱洗提物之间显著不同。
在一些实施方案中，所述SARS-CoV-2恢复期人血浆是来自至少两名恢复期捐献者的血浆样品的池。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2恢复期人血浆经测试血源性病原体和人白细胞抗原(HLA)抗体中的至少一种呈阴性。在其他实施方案中，测试所述SARS-CoV-2恢复期人血浆的血型。
在一种实施方案中，所述沉淀步骤a)在4.5和6.5之间的pH进行。
在一种实施方案中，所述PEG的浓度在5％(w/v)和11％(w/v)之间。优选地，所述PEG是PEG-3350。
在一种实施方案中，所述沉淀步骤进行不少于30分钟。
在一种实施方案中，所述吸附色谱法是陶瓷羟基磷灰石(CHT)色谱法。
在一种实施方案中，陶瓷羟基磷灰石(CHT)的装载或洗涤溶液包含NaCl，优选地浓度在0.5M和2.0M之间。
在一种实施方案中，陶瓷羟基磷灰石(CHT)的洗涤溶液包含尿素，优选地浓度在1M和5M之间。
在一种实施方案中，移除同种凝集素A/B的所述步骤d)通过使用A/B三糖作为配体的亲和色谱法进行。
在一种实施方案中，移除同种凝集素A/B的所述步骤d)使用至少两个串联的亲和柱进行，至少一个使用三糖A作为配体，并且至少一个使用三糖B作为配体，或步骤d)使用至少一个含有三糖A及三糖B作为配体的混合物的亲和柱进行。
在一种实施方案中，所述纳滤步骤e)经平均孔径为35nm或更大的过滤器进行。
在一种实施方案中，所述纳滤步骤e)使用pH在6.0和9.0之间的包含至少0.5M精氨酸-HCl的缓冲液进行。优选地，所述纳滤步骤e)使用pH在7.0和8.0之间的包含至少0.5M精氨酸-HCl的缓冲液进行。
在一种实施方案中，所述超滤步骤(f)在4.5和5.0之间的pH进行。
在一种实施方案中，所述渗滤步骤e)使用pH在3.8和4.8之间的琥珀酸盐缓冲液或含有氨基酸的缓冲液进行。
在一种实施方案中，所述氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸或羟脯氨酸或其混合物。
本发明涉及自捐献者获得超免疫人血浆以用于治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，其中所述捐献者具有COVID-19的实验室确诊诊断且所述捐献者处于恢复期非感染状态。
在一些实施方案中，所述捐献者对于COVID-19是有症状的或无症状的。
在一些实施方案中，COVID-19的症状为发烧、疲倦、干咳、局部疼痛(ache)、疼痛(pain)、鼻塞、流鼻涕、喉咙痛或腹泻中的一种或更多种。
在一些实施方案中，如通过任何核酸技术(NAT)测试和/或通过用于检测抗SARS-CoV-2抗体的任何血清学测试确定的，所述捐献者经检测对COVID-19呈阳性或阴性。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且经测试抗SARS-CoV-2抗体呈阳性但在NAT测试中呈阴性，则立即有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且仅经测试NAT测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在收集样品进行NAT测试后28天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在血清学测试后7天后有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在阴性NAT测试后14天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且仅NAT测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后28天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阳性，则所述捐献者在所有症状停止后28天或第二次NAT测试后28天有资格进行血浆捐献，以较晚者为准。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后14天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，至少针对血源性病原体及血型筛选所述血浆。
在一些实施方案中，所述血浆在收集后冷冻。
详述
如本文所用，章节标题仅用于组织目的且不应解释为以任何方式限制所描述的主题。本申请中引用的所有文献及类似材料，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、论文及互联网网页出于任何目的明确地通过引用以其整体并入。当并入的参考文献中的术语定义显示与本教导内容中提供的定义不同时，应以本教导内容中提供的定义为准。应了解，在本教导内容中论述的温度、浓度、时间等之前存在隐含的“约”，使得微小且非实质性的偏差在本文的教导内容的范围内。
在本申请中，除非另有特别说明，否则单数的使用包括复数。此外，“包含(comprise/comprises/comprising)”、“含有(contain/contains/containing)”、“包括(include/includes/including)”的使用不旨在限制。
如本说明书及权利要求书中所使用，除非内容另有明确规定，否则单数形式“一(a/an)”及“该(the)”包括复数参考物。
如本文所用，“约”意指相对于参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度变化多达20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。
如本文所用，术语“核酸技术或NAT”是指用于检测及定量靶核酸的任何基于扩增或基于转录的方法。许多基于扩增的方法是本领域熟知且确认的，诸如PCR、其变型RT-PCR、链置换扩增(SDA)、嗜热SDA(tSDA)、滚环扩增(RCA)、解旋酶依赖性扩增(HDA)或环介导的等温扩增(LAMP)。本领域常用的基于转录的扩增方法包括基于核酸序列的扩增(NASBA)、Qβ复制酶、自我持续序列复制或转录介导的扩增(TMA)。
如本文所用，术语“恢复期血浆”是指自先前感染的个体收集的血浆。因此，如本文所用的术语“恢复期抗SARS-CoV-2血浆”或“SARS-CoV-2恢复期人血浆”是指从已自COVID-19恢复且处于恢复期非感染状态的先前感染SARS-CoV-2的个体收集的恢复期血浆。
如本文所用，术语“超免疫”是指包含自血浆和/或血清获得的针对一种或更多种特异性抗原的升高水平的抗体(例如多克隆抗体)的产品或组合物。
如本文所用，术语“血浆来源的”是指自捐献的人血液分离或取出血浆或血浆蛋白(诸如免疫球蛋白)并制成蛋白浓缩物或新鲜冷冻血浆的由捐献的人血液制成的产品。血浆来源的产品可由来自多个捐献者(通常来自不少于1,000个捐献者)的样品的池制成。
如本文所用，术语“中和活性”或“IC50中和效价”可互换并指中和或抑制50％SARS-CoV-2感染所需的本发明液体治疗性超免疫球蛋白组合物的量。
尽管本公开内容是在某些实施方案和实施例的情形中，但本领域技术人员应理解本公开内容超出具体公开的实施方案扩展至其他替代实施方案和/或实施方案的用途及其明显的修改及等效物。此外，尽管已详细地示出及描述了实施方案的若干变化，但基于本公开内容的在本公开内容的范围内的其他修改对于本领域技术人员而言将是容易明显的。
还预期可进行实施方案的特定特征和方面的各种组合或子组合且所述组合或子组合仍落入本公开内容的范围内。应理解，所公开的实施方案的各种特征及方面可彼此组合或取代以形成本公开内容的不同模式或实施方案。因此，意图本文的公开内容不应被上述特定公开的实施方案限制。
然而，应理解，尽管指示本公开内容的优选的实施方案，但仅通过说明的方式给出该描述，因为在本公开内容的精神及范畴内的各种改变及修改对于本领域技术人员而言将变得明显。
本文呈现的描述中使用的术语不旨在以任何限制性或约束性方式进行解释。相反，术语仅结合系统、方法及相关组件的实施方案的详细描述来使用。此外，实施方案可包含若干新颖特征，其中没有一个单独负责其期望的属性或被认为是对于实践本文描述的实施方案是必不可少的。
本发明的第一方面涉及液体治疗性超免疫球蛋白组合物，其包含纯度为总蛋白含量的至少97％的人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)。
在一些实施方案中，所述组合物包含纯度为总蛋白含量的至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.8％或至少99.9％的人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)。在一些实施方案中，所述组合物包含纯度为约100％的人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)。
本发明的包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)的液体治疗性超免疫球蛋白组合物可具有在25,000和250,000之间的SARS-CoV-2抗体效价。在一些实施方案中，本发明组合物的SARS-CoV-2抗体效价在50,000和200,000之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价在75,000和150,000之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价在100,000和125,000之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价在110,000和120,000之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价大于50,000，优选地大于75,000，优选地大于100,000，优选地大于125,000，优选地大于150,000，优选地大于200,000。
在本发明的一些实施方案中，液体治疗性超免疫球蛋白组合物的SARS-CoV-2抗体效价相对于从其中制备所述组合物的混合血浆中的SARS-CoV-2抗体效价提高至少2倍。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价相对于从其中制备所述组合物的混合血浆中的SARS-CoV-2抗体效价提高至少5倍，优选地至少10倍，优选地至少15倍，优选地至少25倍，优选地至少30倍。
本发明组合物的SARS-CoV-2抗体效价可以使用例如来自Alpha DiagnosticsLtd.(Switzerland)的人抗SARS-CoV-2病毒刺突1(S1)IgG测定来确定。然而，还可使用技术人员已知的其他测定。
本发明的包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的SARS-CoV-2抗体效价还可根据mg/ml IgG标准化。因此，在一些实施方案中，本发明组合物的SARS-CoV-2抗体效价按mg/mL IgG计在250和2,500之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mL IgG计在300和2,200之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mL IgG计在350和2,000之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mL IgG计在400和1,900之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mL IgG计在450和1,800之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mLIgG计在485和1,700之间。在一些实施方案中，所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mL IgG计大于300，优选地大于500，优选地大于750，优选地大于1,000，优选地大于1,500，优选地大于2000。
本发明的包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)的液体治疗性超免疫球蛋白组合物可具有150和1,500之间的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)。在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性在200和1,250之间。在更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性在250和1,000之间。在更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性在300和725之间。在更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性在400和500之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性大于150，优选地大于200，优选地大于300，优选地大于400，优选地大于500，优选地大于750，优选地大于1,000。
在本发明的一些实施方案中，液体治疗性超免疫球蛋白组合物的SARS-CoV-2中和活性相对于制备所述组合物的混合血浆中的SARS-CoV-2中和活性提高至少2倍。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性相对于制备所述组合物的混合血浆中的SARS-CoV-2中和活性提高至少5倍，优选地至少7倍，优选地至少10倍，优选地至少13倍。
本发明组合物的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)可使用例如基于免疫荧光的中和测定来确定，其中对SARS-CoV-2对培养的真核细胞(诸如Vero(CCL-81)细胞)的感染的抑制进行测试。然而，技术人员知道可用于确定本发明组合物的SARS-CoV-2中和活性(IC50)的其他测定。
本发明的包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)还可根据mg/ml IgG标准化。因此，在一些实施方案中，本发明的组合物的SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgG计在1.5和15之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgG计在1.8和12之间。在更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgG计在2和10.5之间。在仍更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgG计在2.2和9.5之间。在甚至更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgG计在2.4和8.8之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgG计大于1.5，优选地大于2，优选地大于2.5，优选地大于5，优选地大于7.5，优选地大于10，优选地大于12.5。
本发明的包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)的液体治疗性超免疫球蛋白组合物可以由上述抗体效价和/或中和活性中的任一种定义。
在一些实施方案中，本发明的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的人血浆来源的IgG含量在5％和20％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgG含量在7％和15％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgG含量在9％和11％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgG含量为约10％(w/v)。
在一些实施方案中，本发明的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的至少90％的人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少95％的人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少98％的人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少99％的人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少99.8％的人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。
本发明的液体治疗性超免疫球蛋白组合物是高度纯化的IgG组合物，但其可包含残余量的其他免疫球蛋白，诸如免疫球蛋白A(IgA)或免疫球蛋白M(IgM)。在一些实施方案中，所述组合物中IgA的含量等于或低于0.04mg/ml。在更优选的实施方案中，所述组合物中IgA的含量等于或低于0.038mg/ml。在一些实施方案中，所述组合物中IgM的含量等于或低于0.01mg/ml。
本发明的液体治疗性超免疫球蛋白组合物可用于治疗有相应需要的患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。技术人员知道用本发明的超免疫球蛋白组合物治疗COVID-19的优选的剂量方案及施用途径(静脉内途径对于免疫球蛋白组合物是优选的)。
本发明的第二方面涉及用于自包含抗SARS-CoV-2 IgG抗体的起始溶液制备如本文描述的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法，所述方法包括以下的顺序步骤a)至e)
a)将起始溶液的pH调节至约3.8至约4.5的范围内，以形成包含溶解的抗体的中间溶液；
b)向步骤a)的中间溶液中添加辛酸根离子源并将中间溶液的pH调节至约5.0至约5.2的范围内，以形成沉淀物及包含溶解的抗体的上清液溶液；
c)在一定时间、温度及辛酸根离子浓度的条件下孵育上清液溶液以灭活实质上所有病毒；
d)使上清液溶液与至少一种离子交换树脂在允许包括IgA或IgM的至少一些其他物质与树脂结合而不允许包括IgG的抗体与树脂结合的条件下接触；及
e)收集IgG抗体，
其中起始溶液为SARS-CoV-2恢复期人血浆。
在一些优选地实施方案中，用于制备本发明的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法还包括自离子交换树脂柱洗脱IgA或IgM的非顺序步骤f)。
在其他实施方案中，用于制备如本文描述的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法如US 6307028中所公开的，其通过引用并入本文中。
在如本文描述的用于制备液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法的一些实施方案中，用作起始溶液的SARS-CoV-2恢复期人血浆是来自多于一名恢复期捐献者的血浆样品的池。在更优选的实施方案中，用作起始溶液的SARS-CoV-2恢复期人血浆是来自至少两名恢复期捐献者，优选地来自至少50名恢复期捐献者，更优选地来自至少100名恢复期捐献者，仍更优选地来自至少50名恢复期捐献者，甚至更优选地来自至少100名恢复期捐献者的血浆样品的池。
在一些实施方案中，所述SARS-CoV-2恢复期人血浆经测试血源性病原体及人白细胞抗原(HLA)抗体中的至少一种呈阴性。可使用用于测试血源性病原体的任何已知方法。类似地，可使用用于测试人白细胞抗原(HLA)抗体的存在的任何已知方法。
在其他实施方案中，测试所述SARS-CoV-2恢复期人血浆的血型。
本发明的另一方面涉及用于获得SARS-CoV-2恢复期人血浆的方法，所述血浆在用于制备如本文描述的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法中用作起始溶液。
在一些实施方案中，遵照技术人员已知的任何方法获得SARS-CoV-2恢复期人血浆。在其他实施方案中，遵照如US 63/034289(通过引用并入本文)中公开的方法获得SARS-CoV-2恢复期人血浆。
因此，在一些实施方案中，用于获得SARS-CoV-2恢复期人的方法包括选择至少一个具有COVID-19的实验室确诊诊断且处于恢复期非感染状态的捐献者。在一些实施方案中，所述捐献者对于COVID-19是有症状的或无症状的。在一些实施方案中，COVID-19的症状是发烧、疲倦、干咳、局部疼痛、疼痛、鼻塞、流鼻涕、喉咙痛或腹泻中的一种或更多种。
在一些实施方案中，如通过任何核酸技术(NAT)测试和/或通过用于检测抗SARS-CoV-2抗体的任何血清学测试和/或通过用于检测SARS-CoV-2抗原的任何抗原测试确定的，所述捐献者经测试对COVID-19呈阳性或阴性。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且经测试抗SARS-CoV-2抗体呈阳性但在NAT测试中呈阴性，则立即有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且仅经测试NAT测试或抗原测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在收集血浆进行NAT测试后28天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在血清学测试后7天后有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且NAT测试或抗原测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在阴性NAT测试后14天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且仅NAT测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后28天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阳性，则所述捐献者在所有症状停止后28天或在第二次NAT测试后28天有资格进行血浆捐献，以较晚者为准。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后14天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，至少针对血源性病原体及血型筛选所述血浆。在其他实施方案中，所述血浆经测试人白细胞抗原(HLA)抗体呈阴性。
在一些实施方案中，所述血浆在收集后冷冻。在一些实施方案中，所述血浆通过血浆置换术收集。
在一些实施方案中，用于获得SARS-CoV-2恢复期人的方法包括用亚甲基蓝处理所述血浆。
本发明的第三方面涉及液体治疗性超免疫球蛋白组合物，其包含人血浆来源的免疫球蛋白M(IgM)，所述人血浆来源的IgM的纯度为总免疫球蛋白含量的至少85％，且具有在2,000和17,000之间的SARS-CoV-2效价和/或在200和70,000之间的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)。
在一些实施方案中，所述组合物包含纯度为总免疫球蛋白含量的至少90％、至少94％、至少95％、至少96％的人血浆来源的免疫球蛋白M(IgM)。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价在3,000和15,000之间，优选地在4,000和12,000之间，更优选地在5,000和11,000之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2抗体效价大于2,000，优选地大于4,000，优选地大于5,000，优选地大于6,000。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性在300和60,000之间，优选地在500和50,000之间，更优选地在1,000和40,000之间，更优选地在2,000和30,000之间。
在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性大于200，优选地大于300，优选地大于400，优选地大于500，优选地大于800，优选地大于1,000，优选地大于2,000，优选地大于5,000，优选地大于8,000，优选地大于10,000。
在本发明的一些实施方案中，液体治疗性超免疫球蛋白组合物的SARS-CoV-2中和活性相对于制备所述组合物的混合血浆中的SARS-CoV-2中和活性提高至少2倍。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性相对于制备所述组合物的混合血浆中的SARS-CoV-2中和活性提高至少5倍，优选地至少7倍，优选地至少10倍，优选地至少15倍，优选地至少20倍，更优选地至少25倍，更优选地至少30倍。
本发明组合物的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)可使用例如基于免疫荧光的中和测定来确定，其中对SARS-CoV-2对培养的真核细胞(诸如Vero(CCL-81)细胞)的感染的抑制进行测试。然而，技术人员知道可用于确定本发明组合物的SARS-CoV-2中和活性(IC50)的其他测定。例如，细胞病变-细胞毒性发光测定(CCLA)、斑块形成单位(PFU)或中值组织培养感染剂量(TCID50)等。
本发明的包含人血浆来源的免疫球蛋白M(IgM)的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)还可根据mg/ml IgM标准化。因此，在一些实施方案中，本发明的组合物的SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgM计在1.5和15之间。在其他实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgM计在1.8和12之间。在更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgM计在2和10.5之间。在仍更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgM计在2.2和9.5之间。在甚至更优选的实施方案中，所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgM计在2.4和8.8之间。在一些实施方案中，SARS-CoV-2中和活性按mg/mL IgM计大于1.5，优选地大于2，优选地大于2.5，优选地大于5，优选地大于7.5，优选地大于10，优选地大于12.5。
在一些实施方案中，本发明的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的人血浆来源的IgM含量在1％和10％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgM含量在1.5％和5％(w/v)之间。在更优选的实施方案中，人血浆来源的IgM含量为约2.5％(w/v)。
在一些实施方案中，本发明的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的至少75％的人血浆来源的IgM以五聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少90％的人血浆来源的IgM以五聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少94％的人血浆来源的IgM以五聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少95％的人血浆来源的IgM以五聚体形式存在。在更优选的实施方案中，至少96％的人血浆来源的IgM以五聚体形式存在。
本发明的液体治疗性超免疫球蛋白组合物是高度纯化的IgM组合物，但其可包含残余量的其他免疫球蛋白，诸如免疫球蛋白A(IgA)或免疫球蛋白G(IgG)。在一些实施方案中，所述组合物中IgA的含量等于或低于总免疫球蛋白含量的7％。在更优选的实施方案中，所述组合物中IgA的含量等于或低于4％。在一些实施方案中，所述组合物中IgG的含量等于或低于总免疫球蛋白含量的7％。在更优选的实施方案中，所述组合物中IgG的含量等于或低于2％。
本发明的包含血浆来源的IgM的液体治疗性超免疫球蛋白组合物可用于治疗有相应需要的患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。技术人员知道用本发明的超免疫球蛋白组合物治疗COVID-19的优选的剂量方案及施用途径(静脉内途径对免疫球蛋白组合物是优选的)。
本发明的第四方面涉及用于自包含抗SARS-CoV-2 IgM抗体的起始溶液制备如本文描述的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法，所述方法包括以下的顺序步骤a)至f)：
a)使用聚乙二醇(PEG)沉淀所述IgM；
b)使沉淀的IgM重悬；
c)吸附色谱法；
d)同种凝集素亲和色谱法；
e)纳滤；及
f)超滤/渗滤，
其中起始溶液自SARS-CoV-2恢复期人血浆获得。
在本发明的方法中，所用起始材料可来自不同来源。例如，用于所描述的IgM过程的源材料可为来自串联操作的两个Gamunex过程(如美国专利6,307,028中描述的)阴离子交换色谱柱(Q琼脂糖凝胶或ANX琼脂糖凝胶)中的任一个的柱洗提物。在该过程中，如在提及的专利中描述的，从由Grifols血浆级分分离过程产生的级分II+III糊状物纯化IgG。简言之，在阴离子交换柱流中收集IgG之后，通过应用pH 5.2的包含0.5M乙酸钠的缓冲液洗脱结合的蛋白，几乎完全为免疫球蛋白(IgM、IgG及IgA)。各柱经单独洗提，其中可进一步处理任一个或两个级分以纯化IgM。三种免疫球蛋白中每一种的丰度比在两个柱洗提物之间显著不同。
在如本文描述的用于制备液体治疗性超免疫IgM组合物的方法的一些实施方案中，用作起始溶液的SARS-CoV-2恢复期人血浆是来自多于一名恢复期捐献者的血浆样品的池。在更优选的实施方案中，用作起始溶液的SARS-CoV-2恢复期人血浆是来自至少两名恢复期捐献者，优选地来自至少50名恢复期捐献者，更优选地来自至少100名恢复期捐献者，仍更优选地来自至少50名恢复期捐献者，甚至更优选地来自至少100名恢复期捐献者的血浆样品的池。
在一些实施方案中，所述SARS-CoV-2恢复期人血浆经测试血源性病原体及人白细胞抗原(HLA)抗体中的至少一种呈阴性。可使用用于测试血源性病原体的任何已知方法。类似地，可使用用于测试人白细胞抗原(HLA)抗体的存在的任何已知方法。
在其他实施方案中，测试所述SARS-CoV-2恢复期人血浆的血型。
本发明的另一方面涉及用于获得SARS-CoV-2恢复期人血浆的方法，所述血浆在用于制备如本文描述的液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法中用作起始溶液。
在一些实施方案中，遵照技术人员已知的任何方法获得SARS-CoV-2恢复期人血浆。在其他实施方案中，遵照如US 63/034289中公开的方法获得SARS-CoV-2恢复期人血浆，如将在下文说明的。
因此，在一些实施方案中，用于获得SARS-CoV-2恢复期人的方法包括选择至少一个具有COVID-19的实验室确诊诊断且处于恢复期非感染状态的捐献者。在一些实施方案中，所述捐献者对于COVID-19是有症状的或无症状的。在一些实施方案中，COVID-19的症状为发烧、疲倦、干咳、局部疼痛、疼痛、鼻塞、流鼻涕、喉咙痛或腹泻中的一种或更多种。
在一些实施方案中，如通过任何核酸技术(NAT)测试和/或通过用于检测抗SARS-CoV-2抗体的任何血清学测试和/或通过用于检测SARS-CoV-2抗原的任何抗原测试确定的，所述捐献者经测试对COVID-19呈阳性或阴性。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且经测试抗SARS CoV-2抗体呈阳性但在NAT测试中呈阴性，则立即有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且仅经测试NAT测试或抗原测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在收集样品进行NAT测试后28天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在血清学测试后7天后有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且NAT测试或抗原测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在阴性NAT测试后14天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且仅NAT测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS CoV-2抗体呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后28天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阳性，则所述捐献者在所有症状停止后28天或在第二次NAT测试后28天有资格进行血浆捐献，以较晚者为准。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后14天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，至少针对血源性病原体及血型筛选所述血浆。在其他实施方案中，所述血浆经测试人白细胞抗原(HLA)抗体呈阴性。
在一些实施方案中，所述血浆在收集后冷冻。在一些实施方案中，所述血浆通过血浆置换术收集。
在一些实施方案中，用于获得SARS-CoV-2恢复期人血浆的方法包括用亚甲基蓝处理所述血浆。
在本发明的方法中，所用起始材料可来自不同来源。例如，用于所描述的IgM过程的源材料可为来自串联操作的两个Gamunex过程(如美国专利6,307,028中描述的)阴离子交换色谱柱(Q琼脂糖凝胶或ANX琼脂糖凝胶)中的任一个的柱洗提物。在该过程中，如在提及的专利中描述的，从由Grifols血浆级分分离过程产生的级分II+III糊状物纯化IgG。简言之，在阴离子交换柱流中收集IgG之后，通过应用pH 5.2的包含0.5M乙酸钠的缓冲液洗脱结合的蛋白，几乎完全为免疫球蛋白(IgM、IgG及IgA)。各柱经单独洗提，其中可进一步处理任一个或两个级分以纯化IgM。三种免疫球蛋白中每一种的丰度比在两个柱洗提物之间显著不同。
本发明的第五方面涉及自捐献者获得超免疫人血浆以用于治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，其中所述捐献者具有COVID-19的实验室确诊诊断，且所述捐献者处于恢复期非感染状态。
在一些实施方案中，所述捐献者对于COVID-19是有症状的或无症状的。
在一些实施方案中，COVID-19的症状为发烧、疲倦、干咳、局部疼痛、疼痛、鼻塞、流鼻涕、喉咙痛或腹泻中的一种或更多种。
在一些实施方案中，如通过任何核酸技术(NAT)测试和/或通过用于检测抗SARS-CoV-2抗体的任何血清学测试确定的，所述捐献者经测试对COVID-19呈阳性或阴性。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且经测试抗SARS-CoV-2抗体呈阳性但在NAT测试中呈阴性，则立即有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且仅经测试NAT测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在收集样品进行NAT测试后28天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在血清学测试后7天后有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者无症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在阴性NAT测试后14天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后28天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阳性，则在所有症状停止后28天或第二次NAT测试后28天，所述捐献者有资格进行血浆捐献，以较晚者为准。
在一些实施方案中，若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后14天有资格进行血浆捐献。
在一些实施方案中，至少针对血源性病原体及血型筛选所述血浆。
在一些实施方案中，所述血浆在收集后冷冻。
下文中，参考说明性实施例对本发明进行更详细的描述，其不构成对本发明的限制。
实施例
实施例1.用于收集SARS-CoV-2恢复期血浆的血浆捐献者的选择
使用US 63/034289(通过引用并入本文)中描述的方法，选择用于获得用以制备本发明超免疫球蛋白组合物的SARS-CoV-2恢复期血浆的血浆捐献者。
简言之，由预筛选过程批准的健康良好的个体被允许前往捐献中心进行最终评估及捐献。该预筛选过程确保仅已自疾病恢复或暴露于病原体但仍无症状的个体才有资格进入所述中心且有可能进行捐献。因此，仅在登记前通过核酸扩增测试(NAT)、阳性抗原测试或通过SARS-CoV-2抗体测试获得COVID-19感染的实验室证据且随后处于恢复期非感染状态的个体才可以在捐献中心内安全地处理。
因此，有症状的捐献者若其随访NAT为阴性，则必须在捐献之前至少14天症状已完全消失，或若其未进行随访测试，则必须在捐献之前至少28天症状已完全消失。类似地，NAT或抗原测试呈阳性的无症状捐献者，若随访NAT呈阴性则需要在初次测试后等待14天，若未进行随访测试则必须在初次测试后等待28天。仅通过抗SARS-CoV-2抗体测试进行测试的无症状捐献者需要在捐献前等待7天，但若其也具有阴性NAT，则可立即捐献。
捐献者还必须是人类白细胞抗原(HLA)抗体呈阴性的。
表1概述了基于症状及测试结果的血浆捐献者的资格的上述标准。
表1.血浆捐献者的资格的标准
Figure BDA0003973823730000251
实施例2.SARS-CoV-2恢复期人血浆的制备
在如实施例1中说明的或遵照任何其他标准选择了捐献者后，通过血浆置换术收集血浆。
每个血浆单元必须满足法规规定的制备源血浆的要求，包括针对各种感染性病原体的筛选。此外，每个单元均经过测试，以确认其对SARS-CoV-2病毒呈阴性，且对SARS-CoV-2抗体呈阳性。
每个血浆样品还经测试对人类白细胞抗原(HLA)抗体呈阴性且被测试血型。随后，对血浆池进行建模以保持与总体捐献者ABO血型分布一致的分布，以保持各批次间的抗A(anti-A)及抗B(anti-B)水平一致。
当将大批次的血浆混合在一起来制备免疫球蛋白产品时，这些参数通常会受到稀释的限制，但对于较小批量，单个捐献者可能对最终产品产生较大的影响。
因此，对于每个血浆池，O型及B型捐献者限于来自任何单个捐献者的不超过两个单位，以降低最终产品中具有高抗A效价的可能性。
在本实施例中，表2中列出用于制备SARS-CoV-2恢复期人血浆池批次的500个血浆单位的ABO血液分型结果。两项已发表的研究的结果被包括作为比较。这些结果显示COVID-19恢复期血浆捐献者的ABO血型分布与其他血液及血浆捐献者研究报道的分布类似。
Figure BDA0003973823730000261
表2：与公布的值相比，来自本发明测试批次的恢复期血浆的ABO血型分布
实施例3.自SARS-CoV-2恢复期血浆制备液体治疗性超免疫球蛋白组合物
随后遵照与Gamunex-C辛酸盐/色谱法过程(Lebing,W.等人,2003,US6307028，其各自通过引用并入本文)相同的步骤处理实施例2中获得的血浆池，步骤包括经验证移除和/或灭活病毒的多个步骤(Gamunex-C[免疫球蛋白注射(人)10％辛酸盐/色谱纯化(Immune Globulin Injection(Human)10％Caprylate/Chromatography Purified)]-包装插页.2020)。
所得产品为高度纯化的IgG溶液(SARS-CoV-2人免疫球蛋白(hIVIG))，其在低pH用甘氨酸配制为约10％蛋白含量。
实施例4.SARS-CoV-2人免疫球蛋白(hIVIG)产品的表征
对自SARS-CoV-2恢复期人血浆获得的本发明的超免疫球蛋白组合物(hIVIG)进行表征以评估抗SARS-CoV-2特异性抗体的恢复。因此，用IgG特异性酶联免疫吸附测定(ELISA)及中和抗体测定对hIVIG产品进行测试。
hIVIG产品的表征还包括先前的常规批次测试，以表征产品并确定其适合使用。该表征包括分析甘氨酸、pH、蛋白浓度、渗透压、通过电泳分析组成及通过尺寸排阻色谱的分子量概况分析(profiling)。还对辛酸钠、残留IgA及IgM、前激肽释放酶激活物(PKA)、因子Xa、抗A、抗B及抗D进行分析。此外，对所有批次进行无菌及致热原物质的药典测试。
这些测试显示测试的批次在针对使用辛酸盐/色谱法过程(诸如Gamunex-C)制备的其他免疫球蛋白产品描述的纯度、配方、分子概况及纯度的批次标准内。各批次还通过了USP热原及无菌测试。
令人惊讶的是，这些测试显示97％和100％之间的蛋白含量为IgG。此外，IgG几乎完全以单体及二聚体形式存在，且聚集体及片段低于检测极限。在最终产品中发现极低浓度的过程杂质(辛酸钠)及血浆蛋白杂质，远低于批次要求。
残留IgA及IgM的量也低于批次要求(分别少于0.13mg/ml和少于0.030mg/ml)及Gamunex-C产品的已知浓度。
IgM已鉴别为抗A及抗B血管内溶血活性的主要来源(Flegel,W.A.,2015)。本发明的hIVIG产品显示含有少于0.01mg/ml，这大大降低这种不良事件的危险。相比之下，当患者用恢复期血浆治疗时，他们必须与捐献者血型相匹配，以减少溶血的机会。
类似地，在IgA缺乏(IgA deficient)并可能先前已接受血液产品治疗且形成IgA抗体的患者中，移除IgA为hIVIG产品提供优于恢复期血浆的潜在治疗优势。本发明的hIVIG产品显示含有少于0.04mg/ml的IgA。
抗SARS-CoV-2 ELISA
使用来自Alpha Diagnostic的人抗SARS-CoV-2病毒刺突1(S1)IgG测定来确定抗SARS-CoV-2 IgG效价。使用多次连续稀释及通过绘制光密度对数随稀释对数的变化而构建的曲线来测试20个hIVIG批次。效价定义为该曲线等于低套组标准(low kit standard)时的稀释度。效价也表示为与内部(in-house)对照的比，内部对照由市售的嵌合单克隆SARS-CoV-2 S1抗体(Sino Biologicals,Beijing,China)以旨在获得与COVID-19捐献者血浆中可见的效价相似的效价的水平掺入非COVID-19捐献者的血浆中组成。
所产生的20个hIVIG批次及其相应的血浆池的结果列于表3中。所述结果表明，当将混合血浆加工成最终产品时，ELISA活性(ELISA效价，1:X)增加高达近30倍。自混合血浆至最终产品，IgG浓度也增加超过10倍。当抗SARS-CoV-2抗体效价根据IgG浓度标准化时，数据在250和2,500之间变化，这导致起始材料及最终产品的值相似。这可通过IgM及IgA对ELISA活性的贡献来解释，IgM及IgA在IgG纯化期间已移除，且再次证明hIVIG最终产品的高纯度。
Figure BDA0003973823730000281
表3：抗SARS-CoV-2效价及比活性(n＝20，±标准偏差)
抗SARS-CoV-2中和抗体测定
还在美国国家卫生院整合研究机构(National Institutes of HealthIntegrated Research Facility,Frederick,MD)进行使用基于免疫荧光的中和测定来测试hIVIG产品的抗SARS-CoV-2抗体。该测定通过使用测试材料的系列稀释液来测试对SARS-CoV-2(Washington分离物,CDC)对培养的Vero(CCL-81)细胞的感染的抑制来定量抗SARS-CoV-2中和效价。
通过使用针对SARS-CoV-1核蛋白产生的特异性抗体检测SARS-CoV-2核蛋白，使用基于细胞的免疫吸附测定定量感染来评定功效。
二级检测抗体与荧光团缀合，这允许在高通量光学成像系统上对个体感染细胞进行定量。每个样品稀释液在四个孔(两个板，每板两个)中计数最少16,000个细胞。数据基于4参数回归曲线(使用约束拟合)作为50％中和效价(IC50)报告于表3中。
结果显示抗体中和活性(IC50)自血浆池至最终产品增加超过10倍。中和活性的这种增加表明与等量的恢复期血浆相比，用hIVIG产品治疗的患者将接受较高的中和活性。或者，与用恢复期血浆治疗相比，用hIVIG治疗的患者接受较少治疗量(treatment volume)，且潜在地降低输血相关循环超负荷的机会。
与血浆相比，最终产品中的比中和活性(specific neutralizing activity，根据IgG浓度标准化)略有降低。如前所述，这可能是由在IgG纯化期间已移除的IgM及IgA的贡献引起的。
使用SARS-CoV-2恢复期人血浆制备本发明的hIVIG产品的优势(与直接施用来自个体的血浆或施用单克隆抗体相比)为自恢复期捐献者池获得的抗体的多样性，其可提供较宽范围的抗病毒活性。这种多样性对于克服病毒突变是重要的。抗体多样性通过攻击不同的病毒表位及利用不同细胞机制提供较广范围的抗病毒活性。对游离病毒的中和主要为防止感染的空间阻断的结果，而另外的抗病毒活性可能来自效应功能的激活，诸如补体介导的细胞毒性或抗体依赖性细胞毒性。
实施例5.自SARS-CoV-2恢复期血浆制备液体治疗性超免疫IgM组合物
将实施例2中获得的血浆池以与Gamunex过程类似的方式进行处理。Q-琼脂糖凝胶阴离子交换(Q-洗提)的洗脱液的IgM效价高于ANX洗提的效价，且随后按以下步骤处理：
a)在5.0-6.0的pH使用10％(w/w)的PEG-3350沉淀所述IgM；
b)将沉淀的IgM在包含5mM磷酸钠、20mM tris、1M NaCl pH 8.0的缓冲液中重悬；
c)使用陶瓷羟基磷灰石(CHT)色谱进行吸附色谱；
d)同种凝集素亲和色谱；
e)纳滤；及
f)超滤/渗滤。
如表3所示，所获得的产品显示典型的IgG、IgA及IgM免疫球蛋白水平，以及其在所获得的产品中的含量。
Figure BDA0003973823730000301
表3.最终IgM主体(bulk)中IgA、IgG及IgM的含量。IgM Clin Avg是指大流行前的血浆(pre-pandemic plasma)的4次较大规模运行的平均值
测试混合血浆(Q-洗提)及IgM主体与SARS-CoV-2抗原的S1蛋白的结合，且结果显示与混合血浆相比，主体中与SARS-CoV-2 S1蛋白结合的IgM抗原增加约35-40。这在表4中示出。
Figure BDA0003973823730000302
表4.起始混合血浆及最终IgM主体中抗SARS-CoV-2抗原的S1蛋白(anti S1protein of SARS-CoV-2antigen)的效价。大流行前的IgM是指自大流行前的血浆制备的实验室规模(bench scale)的IgM
实施例6.SARS-CoV-2人免疫球蛋白M产品的表征
IgM产品的表征包括表征产品且确定其适合使用的先前的常规批次测试。
下表5显示IgM概况。通过SEC-HPLC鉴定聚集体、寡聚体、五聚体及<五聚体。
IgM批次 聚集体(％) 寡聚体(％) 五聚体(％) <五聚体(％)
第2批 0.4 4.1 94.6 0.9
第3批 11.1 12.4 75.6 0.9
第4批 0.5 4.5 94.1 0.9
IgM Clin Avg 0.5 2.4 96.7 0.5
表5.最终主体中的IgM概况。IgM Clin Avg是指大流行前的血浆的4次较大规模运行的平均值
如表6及表7所示，IgM主体还显示对所有MaverickTM(Genalyte Inc.,USA)SARS-CoV-2蛋白组的反应性信号(与恢复期混合血浆的各批次相比为18-97倍)。Maverick SARS-CoV-2多抗原血清学组v2为一种光子环免疫测定(PRI)，旨在使用MaverickTM诊断系统对人EDTA二钾血浆中针对SARS-CoV-2的总抗体(包括IgG及IgM)进行定性检测。
Figure BDA0003973823730000311
表6.IgM主体对来自SARS-CoV-2的抗原的结果
Figure BDA0003973823730000312
表7.与恢复期血浆池中的各批次的IgM结果的比
抗SARS-CoV-2中和抗体测定
如表3所示，使用不同实验室及不同技术对三个不同批次的IgM产品进行抗SARS-CoV-2抗体测试。实验室1使用细胞病变-细胞毒性发光测定(CCLA)；实验室2使用斑块形成单位(PFU)技术，而实验室3使用中值组织培养感染剂量(TCID50)。
在所有情况下，半最大抑制浓度(IC50)计算为免疫球蛋白稀释度。
Figure BDA0003973823730000321
表8.本发明的超免疫IgM组合物的SARS-CoV-2感染中和。
使用恢复期人血浆制备本发明的IgM产品的优势(与直接施用来自个体的血浆或施用单克隆抗体相比)为自恢复期捐献者的池获得的抗体的多样性，这可提供较宽范围的抗病毒活性。这种多样性对于克服病毒突变是重要的。抗体多样性通过攻击不同病毒表位及利用不同细胞机制提供较广范围抗病毒活性。对游离病毒的中和主要是防止感染的空间阻断的结果，而另外的抗病毒活性可能来自效应功能的激活，诸如补体介导的细胞毒性或抗体依赖性细胞毒性。

Claims (67)

1.一种液体治疗性超免疫球蛋白组合物，所述组合物包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)，所述人血浆来源的IgG的纯度为总蛋白含量的至少97％，且具有按mg/mL IgG计在250和2,500之间的SARS-CoV-2抗体效价，和/或按mg/mL IgG计在1.5和15之间的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgG的纯度为总蛋白含量的至少98％，优选地至少99％。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mLIgG计在300和2,200之间。
4.根据权利要求1或2中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mLIgG计在350和2,000之间。
5.根据权利要求1或2中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mLIgG计在400和1,900之间。
6.根据权利要求1或2中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mLIgG计在450和1,800之间。
7.根据权利要求1或2中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mLIgG计在485和1,700之间。
8.根据权利要求1或2中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价按mg/mLIgG计大于250，优选地大于300，优选地大于500，优选地大于750，优选地大于1,000，优选地大于1,500，优选地大于2,000。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mLIgG计在1.8和12之间。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mLIgG计在2和10.5之间。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mLIgG计在2.2和9.5之间。
12.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mLIgG计在2.4和8.8之间。
13.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性按mg/mLIgG计大于1.5，优选地大于2，优选地大于2.5，优选地大于5，优选地大于7.5，优选地大于10，优选地大于12.5。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgG含量在5％和20％(w/v)之间。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgG含量在9％和11％(w/v)之间。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中至少90％的所述人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，其中免疫球蛋白A(IgA)的含量等于或低于0.04mg/ml。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的组合物，其中免疫球蛋白M(IgM)的含量等于或低于0.01mg/ml。
19.一种液体治疗性超免疫球蛋白组合物，组合物包含人血浆来源的免疫球蛋白G(IgG)，所述人血浆来源的IgG的纯度为总蛋白含量的至少97％，且具有在25,000和250,000之间的SARS-CoV-2抗体效价，和/或在150和1,500之间的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)。
20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgG的纯度为总蛋白含量的至少98％，优选地至少99％。
21.根据权利要求19或20中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价在50,000和200,000之间。
22.根据权利要求19或20中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价在75,000和150,000之间。
23.根据权利要求19或20中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价在100,000和125,000之间。
24.根据权利要求19或20中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价大于50,000，优选地大于75,000，优选地大于100,000，优选地大于150,000。
25.根据权利要求19或24中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性在200和1,250之间。
26.根据权利要求19至25中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性在250和1,000之间。
27.根据权利要求19至25中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性在300和725之间。
28.根据权利要求19至25中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性在400和500之间。
29.根据权利要求19至25中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性大于150，优选地大于200，优选地大于300，优选地大于400，优选地大于500，优选地大于750，优选地大于1,000。
30.根据权利要求19至29中任一项所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgG含量在5％和20％(w/v)之间。
31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgG含量在9％和11％(w/v)之间。
32.根据权利要求19至31中任一项所述的组合物，其中至少90％的所述人血浆来源的IgG以单体及二聚体形式存在。
33.根据权利要求19至32中任一项所述的组合物，其中免疫球蛋白A(IgA)的含量等于或低于0.04mg/ml。
34.根据权利要求19至33中任一项所述的组合物，其中免疫球蛋白M(IgM)的含量等于或低于0.01mg/ml。
35.根据权利要求19至34中任一项所述的组合物，用于治疗有相应需要的患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。
36.一种用于制备液体治疗性超免疫球蛋白组合物的方法，所述方法自包含抗SARS-CoV-2 IgG抗体的起始溶液制备根据权利要求1至35中任一项所述的液体治疗性超免疫球蛋白组合物，所述方法包括以下的顺序步骤a)至e)：
a)将所述起始溶液的pH调节至约3.8至约4.5的范围内，以形成包含溶解的抗体的中间溶液；
b)向步骤a)的所述中间溶液中添加辛酸根离子源并将所述中间溶液的pH调节至在约5.0至约5.2的范围内，以形成沉淀物及包含溶解的抗体的上清液溶液；
c)在一定时间、温度及辛酸根离子浓度条件下孵育所述上清液溶液以灭活实质上所有病毒；
d)使所述上清液溶液与至少一种离子交换树脂在允许包括IgA或IgM的至少一些其他物质与所述树脂结合而不允许包括IgG的抗体与所述树脂结合的条件下接触；及
e)收集所述IgG抗体，
其中所述起始溶液为SARS-CoV-2恢复期人血浆。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述SARS-CoV-2恢复期人血浆是来自至少两名恢复期捐献者的血浆样品的池。
38.根据权利要求36或37中任一项所述的方法，其中所述SARS-CoV-2恢复期人血浆经测试血源性病原体及人白细胞抗原(HLA)抗体中的至少一种呈阴性。
39.根据权利要求36至38中任一项所述的方法，其中对所述SARS-CoV-2恢复期人血浆的血型进行测试。
40.液体治疗性或预防性超免疫IgM组合物，所述组合物包含人血浆来源的免疫球蛋白M(IgM)，所述所述人血浆来源的IgM的纯度为总免疫球蛋白含量的至少85％，且具有在2,000和17,000之间的SARS-CoV-2效价，和/或在200和70,000之间的SARS-CoV-2中和活性(IC50中和效价)。
41.根据权利要求40所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgM的纯度为总免疫球蛋白含量的至少90％，优选地至少94％。
42.根据权利要求40或41所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2效价在3,000和13,000之间，优选地在4,000和12,000之间。
43.根据权利要求40-42中任一项所述的组合物，其中所述中和活性在300和60,000之间，优选地在500和50,000之间。
44.根据权利要求43所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性在1,000和40,000之间，优选地在2,000和30,000之间。
45.根据权利要求40-44中任一项的组合物，其中所述SARS-CoV-2抗体效价大于2,000，优选地大于4,000，优选地大于5,000，优选地大于6,000。
46.根据权利要求40-45中任一项所述的组合物，其中所述SARS-CoV-2中和活性大于200，优选地大于300，优选地大于400，优选地大于500，优选地大于800，优选地大于1,000，优选地大于2,000。
47.根据权利要求40-46中任一项所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgM含量在1％和10％(w/v)之间。
48.根据权利要求47所述的组合物，其中所述人血浆来源的IgM含量在1.5％和5％(w/v)之间。
49.根据权利要求40-48中任一项所述的组合物，其中至少75％的所述人血浆来源的IgM以五聚体形式存在。
50.根据权利要求40-49中任一项所述的组合物，其中免疫球蛋白G(IgG)的含量等于或低于总免疫球蛋白含量的4％。
51.根据权利要求40-50中任一项所述的组合物，其中免疫球蛋白A(IgA)的含量等于或低于总免疫球蛋白含量的7％。
52.根据权利要求40-51中任一项所述的组合物，用于治疗或预防有相应需要的患者的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。
53.一种用于制备液体治疗性或预防性超免疫IgM组合物的方法，所述方法自包含抗SARS-CoV-2IgM抗体的起始溶液制备根据权利要求40至52中任一项所述的液体治疗性或预防性超免疫IgM组合物，所述方法包括以下的顺序步骤a)至f)：
a)使用聚乙二醇(PEG)沉淀所述IgM；
b)使沉淀的IgM重悬；
c)进行吸附色谱法；
d)进行同种凝集素亲和色谱法；
e)进行纳滤；及
f)进行超滤/渗滤，
其中所述起始溶液自SARS-CoV-2恢复期人血浆获得。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述SARS-CoV-2恢复期人血浆是来自至少两名恢复期捐献者的血浆样品的池。
55.一种自捐献者获得超免疫人血浆以用于治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的方法，其中所述捐献者具有COVID-19的实验室确诊诊断且所述捐献者处于恢复期非感染状态。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述捐献者对于COVID-19是有症状的或无症状的。
57.根据权利要求55或56所述的方法，其中所述COVID-19的症状为发烧、疲倦、干咳、局部疼痛、疼痛、鼻塞、流鼻涕、喉咙痛或腹泻中的一种或更多种。
58.根据权利要求55-57中任一项所述的方法，其中根据用于检测抗SARS-CoV-2抗体的任何核酸技术(NAT)测试和/或任何血清学测试确定的，所述捐献者经测试对COVID-19呈阳性或阴性。
59.根据权利要求55-58中任一项所述的方法，其中若所述捐献者无症状且经测试抗SARS-CoV-2抗体呈阳性但在NAT测试中呈阴性，则立即有资格进行血浆捐献。
60.根据权利要求55-59中任一项所述的方法，其中若所述捐献者无症状且仅经测试NAT测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在收集样品进行NAT测试后28天有资格进行血浆捐献。
61.根据权利要求55-59中任一项所述的方法，其中若所述捐献者无症状且仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，则所述捐献者在血清学测试后7天后有资格进行血浆捐献。
62.根据权利要求55至61中任一项所述的方法，其中若所述捐献者无症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在阴性NAT测试后14天有资格进行血浆捐献。
63.根据权利要求55至62中任一项所述的方法，其中若所述捐献者有症状且仅NAT测试呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或仅抗SARS-CoV-2抗体呈阳性，或NAT测试呈阳性且随后抗SARS-CoV-2抗体呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后28天有资格进行血浆捐献。
64.根据权利要求55至63中任一项所述的方法，其中若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阳性，则所述捐献者在所有症状停止后28天或第二次NAT测试后28天有资格进行血浆捐献，以较晚者为准。
65.根据权利要求55至64中任一项所述的方法，其中若所述捐献者有症状且NAT测试呈阳性且随后NAT测试呈阴性，则所述捐献者在所有症状停止后14天有资格进行血浆捐献。
66.根据权利要求55至65中任一项所述的方法，其中至少针对血源性病原体及血型筛选所述血浆。
67.根据权利要求55至66中任一项所述的方法，其中所述血浆在收集后冷冻。
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