CN115651844A - 一种金银花菌的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的属于金银花菌培养技术领域，具体为一种金银花菌的培养方法，包括以下操作步骤：S1：从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体通过采用子实体分离、菌木分离和孢子分离方法获得菌种，S2：将金银花菌种分成20分，在每份的金银花菌种内加入不同的碳源中，进行筛选，静置一段时间，备用，S3：取培养皿，并对培养皿进行酒精消毒后，再将培养皿放置在紫外灯下照射，进行二次消毒，本发明保证金银花菌在确定的环境中进行温室培养，防止环境变化，造成金银花菌迅速死亡，从而增加金银花菌的存活率，进而使促进金银花菌的生长，增加后期回收率。
Description
技术领域
本发明涉及金银花菌培养技术领域，具体为一种金银花菌的培养方法。
背景技术
金银花菌(茶藨子叶状层菌)是山东著名道地药材金银花植株上的一种药 用真菌，在当地民间具有悠久的药用历史，2002年载入《山东省中药材标准》， 金银花菌子实体用于治疗咽炎、喉炎、扁桃体炎等口腔炎症，临床疗效显著， 药理实验研究证明，金银花菌具有抗炎、抗病毒、抗癌、促进肌体免疫等生物 活性，是一种珍贵的、可以代替金银花消炎作用的真菌药物资源。
现有的真菌类药物的生长繁殖需要一定的碳源、氮源、无机盐、生长因子 等，不同真菌类药物需求的营养物质的组成、生长条件是不同的，而金银花菌 在发酵培养过程中，时常会因为温度、pH、光照和氧气等培养条件的调整和改 变，导致金银花菌培养失败，为了能够稳定对金银花菌进行培养，增加金银花 菌的存活率，为此，我们提出一种金银花菌的培养方法。
发明内容
鉴于上述和/或现有一种金银花菌的培养方法中存在的问题，提出了本发 明。
因此，本发明的目的是提供一种金银花菌的培养方法，通过将金银花菌在 不同的碳源中进行基础培养，并对不同碳源培养的菌丝团进行氮源二次培养， 同时，在添加过程中加入抗菌肽液，并对金银花菌进行温室培养，并隔时添加 水分和营养液，能够解决上述提出现有的问题。
为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方 案：
一种金银花菌的培养方法，其包括：以下操作步骤：
S1：从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体通过采用子实体分离、 菌木分离和孢子分离方法获得菌种；
S2：将金银花菌种分成20分，在每份的金银花菌种内加入不同的碳源中， 进行筛选，静置一段时间，备用；
S3：取培养皿，并对培养皿进行酒精消毒后，再将培养皿放置在紫外灯下 照射，进行二次消毒；
S4：将不同碳源中溶液中的金银花菌取出，对金银花菌进行接种，每个不 同的碳源中接种5组菌丝团放入培养皿中；
S5：将各种碳源中接种5组菌丝团的内部加入氮源进行培养；
S6：在每组培养皿内加入抗菌肽液，并将培养皿放入恒温装置中，进行恒 温培养；
S7：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团喷洒一定湿度 的水溶液后放回恒温装置内；
S8：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团加入营养液后 放回恒温装置内。
作为本发明所述的一种金银花菌的培养方法的一种优选方案，其中：所述 S2中碳源包括葡萄糖加蔗糖溶液、麦芽汁加蔗糖溶液、葡萄糖加麦芽汁溶液中 的一种或多种。
作为本发明所述的一种金银花菌的培养方法的一种优选方案，其中：所述 S2中静置时间设置为15分钟。
作为本发明所述的一种金银花菌的培养方法的一种优选方案，其中：所述 S3中紫外灯消毒时间设置为40分钟。
作为本发明所述的一种金银花菌的培养方法的一种优选方案，其中：所述 S4中将金银花菌底部含有琼脂的固体培养基剔除。
作为本发明所述的一种金银花菌的培养方法的一种优选方案，其中：所述 S5中氮源包括蛋白胨加玉米浆溶液，玉米浆加麸皮溶液，蛋白藤加麸皮溶液中 的一种或多种。
作为本发明所述的一种金银花菌的培养方法的一种优选方案，其中：所述 S6中恒温装置的温度设置为25℃。
作为本发明所述的一种金银花菌的培养方法的一种优选方案，其中：所述 S7中每隔45分钟，将培养皿内的菌丝团进行加湿，湿度设置为45％。
作为本发明所述的一种金银花菌的培养方法的一种优选方案，其中：所述 S8中营养液设置为真菌多糖、糖醇钙、硒与维生素E中的一种或多种组合。
与现有技术相比：
通过将金银花菌在不同的碳源中进行基础培养，并对不同碳源培养的菌丝 团进行氮源二次培养，增加金银花菌的存活适应性，同时，在添加过程中加入 抗菌肽液，对金银花菌进行消毒除菌，增加金银花菌的存活率，并对金银花菌 进行温室培养，并隔时添加水分和营养液，保证金银花菌在确定的环境中进行 温室培养，防止环境变化，造成金银花菌迅速死亡，从而增加金银花菌的存活 率，进而使促进金银花菌的生长，增加后期回收率。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的实施方 式作进一步地详细描述。
实施例1，本发明提供一种金银花菌的培养方法，包括以下操作步骤：
S1：从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体通过采用子实体分离、 菌木分离和孢子分离方法获得菌种；
S2：将金银花菌种分成20分，在每份的金银花菌种内加入葡萄糖加蔗糖溶 液、麦芽汁加蔗糖溶液、葡萄糖加麦芽汁溶液中，进行筛选，静置一段时间， 备用，静置时间设置为15分钟；
其中碳源是液体发酵培养基的基础，它既能被菌丝利用合成细胞，又是真 菌产生各种代谢产物和细胞内物质的主要原料；
含有碳元素且能被微生物生长繁殖所利用的一类营养物质统称为碳源，常 用的碳源有糖类、油脂、有机酸及有机酸酯和小分子醇，根据微生物所能产生 的酶系不同，不同的微生物可利用不同的碳源，碳源对微生物生长代谢的作用 主要为提供细胞的碳架，提供细胞生命活动所需的能量，提供合成产物的碳架， 碳源在制作微生物培养基或细胞培养基时有重要的作用，为微生物或细胞的正 常生长，分裂提供物质基础；
葡萄糖，有机化合物，分子式C6H12O6，是自然界分布最广且最为重要的一 种单糖，它是一种多羟基醛，纯净的葡萄糖为无色晶体，有甜味但甜味不如蔗 糖，易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚，天然葡萄糖水溶液旋光向右，故属 于右旋糖，葡萄糖在生物学领域具有重要地位，是活细胞的能量来源和新陈代 谢中间产物，即生物的主要供能物质，植物可通过光合作用产生葡萄糖，在糖 果制造业和医药领域有着广泛应用；
蔗糖，是食糖的主要成分，是双糖的一种，由一分子葡萄糖的半缩醛羟基 与一分子果糖的半缩醛羟基彼此缩合脱水而成，蔗糖有甜味，无气味，易溶于 水和甘油，微溶于醇，有旋光性，但无变旋光作用，蔗糖几乎普遍存在于植物 界的叶、花、茎、种子及果实中，在甘蔗、甜菜及槭树汁中含量尤为丰富，蔗 糖味甜，是重要的食品和甜味调味品，分为白砂糖、赤砂糖、绵白糖、冰糖、 粗糖；
麦芽汁是将优质的大麦麦芽经过筛选、清洗、糖化、糊化等多道工序精制 抽提而成的饮品，又名麦芽抽提物，同时，其间还须经水解、酶解，以将优质 麦芽中所含的蛋白大分子充分断裂成小分子多肽和部分游离氨基酸分子，从而 更利于微生物的吸收和利用；
S3：取培养皿，并对培养皿进行酒精消毒后，再将培养皿放置在紫外灯下 照射，进行二次消毒，紫外灯消毒时间设置为40分钟；
S4：将不同碳源中溶液中的金银花菌取出，对金银花菌进行接种，将金银 花菌底部含有琼脂的固体培养基剔除，每个不同的碳源中接种5组菌丝团放入 培养皿中；
S5：将各种碳源中接种5组菌丝团的内部加入蛋白胨加玉米浆溶液氮源进 行培养；
其中氮源作为构成生物体的蛋白质、核酸及其他氮素化合物的材料，把从 外界吸入的氮素化合物或氮气，称为该生物的氮源，能把氮气作为氮源的只限 于固氮菌、某些放线菌和藻类等，高等植物和霉菌以及一部分细菌，仅能以无 机氮素化合物为氮源，动物和一部分细菌，不用有机氮化合物作为氮源就不能 生长；
氮源主要用于构成食用菌菌体细胞物质(如氨基酸、蛋白质、核酸等)和 含氮代谢物，其功能主要是作为酶的组成成分或维持酶的活性，调节渗透压、 pH值、氧化还原电位等134，不同的氮源对菌丝体干重的影响有明显的不同， 茶蕙子叶状层菌对有机氮的利用总体上优于无机氮，其原因可能是荼蕙子叶状 层菌菌丝可直接利用有机氮中含有的各种氨基酸，而利用无机氮时，菌丝体必 须用无机氮合成其生长需要的氨基酸，而有些氨基酸可能不能被茶麓子叶状层 菌生物合成，从而影响菌丝体的生长，而有机氮源中含有丰富的蛋白质、肽类、 脂肪酸、维生素、游离氨基酸且氨基酸的种类较齐全，茶蕉子叶状层菌能直接利用氨基酸和其他有机含氮化合物中的各种不同结构的骨架来合成菌体生长所 需要的蛋白质和其他细胞物质，而无需从糖代谢的分解产物中来合成各种所需 的物质；
蛋白胨，是有机化合物，蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后 干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息，蛋白质经酸、碱或蛋 白酶分解后也可形成蛋白胨，在胃内蛋白质的初步消化产物之一就是蛋白胨， 蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类，它可以作为微生物培养 基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等 领域中的用量均很大，可以用来治疗消化道疾病，不同的生物体需要特定的氨 基酸和多肽，因此存在着各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括 动物蛋白，酪蛋白、肉类、植物蛋白、微生物蛋白，酵母等三种，能为微生物 提供C源、N源、生长因子等营养物质；
玉米浆是制玉米淀粉的副产物，原料为玉米糁、水、玉米汁，制造玉米淀 粉须将玉米粒先用亚硫酸浸泡，浸泡液浓缩即制成黄褐色的液体，叫玉米浆， 含有丰富的可溶性蛋白、生长素和一些前体物质，含大约40％～50％固体物质， 味道微咸，是微生物生长很普遍应用的有机氮源，它还能促进青霉素等抗生素 的生物合成；
S6：在每组培养皿内加入抗菌肽液，并将培养皿放入恒温装置中，进行恒 温培养，恒温装置的温度设置为25℃；
S7：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团喷洒一定湿度 的水溶液后放回恒温装置内，每隔45分钟，将培养皿内的菌丝团进行加湿，湿 度设置为45％；
S8：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团加入真菌多糖 营养液后放回恒温装置内。
实施例2，本发明提供一种金银花菌的培养方法，包括以下操作步骤：
S1：从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体通过采用子实体分离、 菌木分离和孢子分离方法获得菌种；
S2：将金银花菌种分成20分，在每份的金银花菌种内加入葡萄糖加蔗糖溶 液、麦芽汁加蔗糖溶液、葡萄糖加麦芽汁溶液中，进行筛选，静置一段时间， 备用，静置时间设置为15分钟；
S3：取培养皿，并对培养皿进行酒精消毒后，再将培养皿放置在紫外灯下 照射，进行二次消毒，紫外灯消毒时间设置为40分钟；
S4：将不同碳源中溶液中的金银花菌取出，对金银花菌进行接种，将金银 花菌底部含有琼脂的固体培养基剔除，每个不同的碳源中接种5组菌丝团放入 培养皿中；
S5：将各种碳源中接种5组菌丝团的内部加入玉米浆加麸皮溶液氮源进行 培养；
S6：在每组培养皿内加入抗菌肽液，并将培养皿放入恒温装置中，进行恒 温培养，恒温装置的温度设置为25℃；
S7：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团喷洒一定湿度 的水溶液后放回恒温装置内，每隔45分钟，将培养皿内的菌丝团进行加湿，湿 度设置为45％；
S8：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团加入糖醇钙营 养液后放回恒温装置内。
实施例3，本发明提供一种金银花菌的培养方法，包括以下操作步骤：
S1：从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体通过采用子实体分离、 菌木分离和孢子分离方法获得菌种；
S2：将金银花菌种分成20分，在每份的金银花菌种内加入葡萄糖加蔗糖溶 液、麦芽汁加蔗糖溶液、葡萄糖加麦芽汁溶液中，进行筛选，静置一段时间， 备用，静置时间设置为15分钟；
S3：取培养皿，并对培养皿进行酒精消毒后，再将培养皿放置在紫外灯下 照射，进行二次消毒，紫外灯消毒时间设置为40分钟；
S4：将不同碳源中溶液中的金银花菌取出，对金银花菌进行接种，将金银 花菌底部含有琼脂的固体培养基剔除，每个不同的碳源中接种5组菌丝团放入 培养皿中；
S5：将各种碳源中接种5组菌丝团的内部加入蛋白藤加麸皮溶液氮源进行 培养；
S6：在每组培养皿内加入抗菌肽液，并将培养皿放入恒温装置中，进行恒 温培养，恒温装置的温度设置为25℃；
S7：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团喷洒一定湿度 的水溶液后放回恒温装置内，每隔45分钟，将培养皿内的菌丝团进行加湿，湿 度设置为45％；
S8：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团加入硒与维生 素E营养液后放回恒温装置内。
通过将实施例1-3中培养的金银花菌取出，并对金银花菌的状态进行检测 和分析：
通过上表可知，实施例1制备的金银花菌质量最好，且后期存储后，存活 率较高，能够有效存储，并对金银花菌进行入药进行治疗和利用；
通过将金银花菌在不同的碳源中进行基础培养，并对不同碳源培养的菌丝 团进行氮源二次培养，增加金银花菌的存活适应性，同时，在添加过程中加入 抗菌肽液，对金银花菌进行消毒除菌，增加金银花菌的存活率，并对金银花菌 进行温室培养，并隔时添加水分和营养液，保证金银花菌在确定的环境中进行 温室培养，防止环境变化，造成金银花菌迅速死亡，从而增加金银花菌的存活 率，进而使促进金银花菌的生长，增加后期回收率。
虽然在上文中已经参考实施方式对本发明进行了描述，然而在不脱离本发 明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效物替换其中的部件。 尤其是，只要不存在结构冲突，本发明所披露的实施方式中的各项特征均可通 过任意方式相互结合起来使用，在本说明书中未对这些组合的情况进行穷举性 的描述仅仅是出于省略篇幅和节约资源的考虑。因此，本发明并不局限于文中 公开的特定实施方式，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。
Claims (9)
1.一种金银花菌的培养方法，其特征在于：包括以下操作步骤：
S1：从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体通过采用子实体分离、菌木分离和孢子分离方法获得菌种；
S2：将金银花菌种分成20分，在每份的金银花菌种内加入不同的碳源中，进行筛选，静置一段时间，备用；
S3：取培养皿，并对培养皿进行酒精消毒后，再将培养皿放置在紫外灯下照射，进行二次消毒；
S4：将不同碳源中溶液中的金银花菌取出，对金银花菌进行接种，每个不同的碳源中接种5组菌丝团放入培养皿中；
S5：将各种碳源中接种5组菌丝团的内部加入氮源进行培养；
S6：在每组培养皿内加入抗菌肽液，并将培养皿放入恒温装置中，进行恒温培养；
S7：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团喷洒一定湿度的水溶液后放回恒温装置内；
S8：每隔一段时间，将培养皿取出，并对培养基内的菌丝团加入营养液后放回恒温装置内。
2.根据权利要求1所述的一种金银花菌的培养方法，其特征在于，所述S2中碳源包括葡萄糖加蔗糖溶液、麦芽汁加蔗糖溶液、葡萄糖加麦芽汁溶液中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的一种金银花菌的培养方法，其特征在于，所述S2中静置时间设置为15分钟。
4.根据权利要求1所述的一种金银花菌的培养方法，其特征在于，所述S3中紫外灯消毒时间设置为40分钟。
5.根据权利要求1所述的一种金银花菌的培养方法，其特征在于，所述S4中将金银花菌底部含有琼脂的固体培养基剔除。
6.根据权利要求1所述的一种金银花菌的培养方法，其特征在于，所述S5中氮源包括蛋白胨加玉米浆溶液，玉米浆加麸皮溶液，蛋白藤加麸皮溶液中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的一种金银花菌的培养方法，其特征在于，所述S6中恒温装置的温度设置为25℃。
8.根据权利要求1所述的一种金银花菌的培养方法，其特征在于，所述S7中每隔45分钟，将培养皿内的菌丝团进行加湿，湿度设置为45％。
9.根据权利要求1所述的一种金银花菌的培养方法，其特征在于，所述S8中营养液设置为真菌多糖、糖醇钙、硒与维生素E中的一种或多种组合。
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