CN115645330A - 一种天竺葵提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有提高抗氧化作用的天竺葵提取物及其制备方法与应用。该提取物制备方法如下：1)在YPD培养基中加入天竺葵花，高压蒸汽灭菌，得到天竺葵培养基；2)将酵母菌菌种接种于YPD培养基培养，得到种子菌液；3)将所述种子菌液接种于天竺葵培养基中，培养至稳定期，得到发酵产物；4)高压均质破壁；5)在均质液中加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，将酶解体系过滤得到天竺葵提取物。酵母菌发酵提取的天竺葵提取物，与单纯水煮提取法相比，皂苷的含量由517.45ug/ml增加到2407.58ug/ml，增加了365％；总抗氧化能力由112.0u/ml增加到184.9u/ml，增加65％。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种天竺葵提取物及其制备方法与应用。
背景技术
许多植物含有皂苷类物质，具有一定的抗皮肤衰老作用，而抗氧化是其抗衰老的主要机制之一。天竺葵花提取物因有较好的抗氧化性能被国家列为化妆品原料。
中药发酵就是利用微生物的酶对中药成分进行生物转化，改进和产生新物质，起到增效作用。益生菌本身具有一定的护肤功效。用益生菌对天竺葵花进行发酵，对进一步提高天竺葵的应用具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有提高皂苷含量和抗氧化作用的天竺葵提取物及其制备方法。
本发明所提供的具有提高抗氧化作用的天竺葵提取物是按照包括下述步骤的方法制备得到的：
1)天竺葵培养基的制备：在YPD培养基中加入天竺葵花，高压蒸汽灭菌，得到天竺葵培养基；
2)菌种活化：将酵母菌菌种接种于YPD培养基，进行摇床培养，得到种子菌液；
3)发酵：将所述种子菌液接种于所述天竺葵培养基中，培养至稳定期，得到发酵产物；
4)高压均质破壁：将所述发酵产物进行高压均质处理，得到均质液；
5)离心：将所述均质液进行离心，取上清液；
6)酶解：在所述上清液中加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，得到天竺葵提取物。
上述方法步骤1)中，所述天竺葵花的用量为所述YPD培养基质量的5％-10％，具体可为10％；所述高压蒸汽灭菌的条件具体可为121℃、高压灭菌30min。
上述方法步骤2)中，所述摇床培养的具体条件可为30℃、150rpm，摇床培养10-14小时。所述种子菌液中酵母菌的含量为8×107-2×108CFU/mL。
上述方法步骤2)中，所述酵母菌可为市售途径可获得的任意酵母菌，具体可为安琪低糖高活性干酵母，购于京东商城，货号为：zuhe009966。
上述方法步骤3)中，所述种子菌液的接种量为所述天竺葵培养基体积的5-10％，具体为10％。
上述方法步骤3)中，所述发酵培养的条件具体可为30℃、100rpm摇床培养。
所述培养至稳定期的检测标准为：pH≤4.5、OD560≥1.4。
上述方法步骤4)中，所述均质的条件为：压力780Bar，均质3次。
上述方法步骤5)中，所述离心条件为：转速8000rpm，离心时间5min。
上述方法步骤6)中，所述木瓜蛋白酶的用量为所述均质液质量的0.05-0.1％，具体如0.1％。
所述酶解的条件为：pH值7.0-8.0，温度50-55℃，时间1.5-2小时。
所述灭酶的条件为：90℃保温30min。
所述木瓜蛋白酶具体可购自生工生物工程(上海)股份有限公司，产品规格：≥2000U/mg。酶活定义：在pH值7.0、温度37±0.2℃条件下，每分钟水解酪蛋白释出的可溶物在275nm波长吸光度与1微克酪氨酸的吸光度相当时，所需的酶量即为一个活力单位，用U表示。
本发明中所述的YPD培养基包括：1％酵母粉、2％胰蛋白胨、2％葡萄糖。
本发明还提供了上述天竺葵提取物的应用。
所述应用为所述天竺葵提取物在制备抗氧化产品中的应用。
所述产品可为药品和/或保健品和/或化妆品。
本发明还保护一种具有抗氧化功效的产品。
所述产品的活性成分包括本发明所提供的天竺葵提取物。
本发明所述化妆品还包含化妆品中常用的成分，其包括但不限于活性成分、稀释剂、载体、表面活性剂和辅料等本领域已知的任何成分，这些是本领域技术人员已知的，且可根据需要具体选择其类型和用量。
所述活性成分还可包括除了本发明所述天竺葵提取物外的，其它本领域已知和常用的任何活性物质，其中包括例如润肤剂、保湿剂、皮肤调理剂等。
所述化妆品不限定形态，例如，可以制成霜剂、乳剂、精华水、凝胶剂等的形式，上述各种形式的化妆品可通过本领域已知的任何合适的方法进行制备。
药效试验表明，本发明提供的天竺葵提取物具有抗氧化活性。
本发明具有如下有益效果：
本发明方法制备的天竺葵提取物，与单纯水煮提取法相比，皂苷的含量由517.533ug/ml增加到2407.533ug/ml，增加了365％；总抗氧化能力由112.0u/ml增加到184.9u/ml，增加65％。
同时我们也比较了唾液乳杆菌、植物乳杆菌发酵提取，发现唾液乳杆菌发酵后天竺葵的皂苷量仅增加42.9％，植物乳杆菌发酵后，没有增加。提示酵母菌发酵提取天竺葵是增加其皂苷含量和提高其抗氧化能力的最有效方法。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
下述实施例中使用的酵母菌为安琪低糖高活性干酵母，购自京东商城，商品名称：安琪酵母，货号为zuhe009966；使用的木瓜蛋白酶购自生工生物工程(上海)股份有限公司，产品规格：≥2000U/mg。
下述实施例中使用的YPD培养基包括：1％酵母粉、2％胰蛋白胨、2％葡萄糖。
实施例1、制备天竺葵提取物
1)天竺葵培养基制备：在YPD培养基中加入质量分数10％的天竺葵花，121℃、高压30min，得到天竺葵培养基，待用。
2)菌种活化：将酵母菌菌种接种于YPD培养基，30℃、150rpm，摇床培养14小时，得到种子菌液，其中酵母菌的含量为2×108CFU/mL。
3)发酵：将种子菌液按体积比1:10接种于天竺葵培养基中，30℃、100rpm，培养20小时至稳定期，检测标准：pH≤4.5、OD560≥1.4，得到发酵产物。
4)高压均质破壁：将所述发酵产物进行高压均质处理，压力780Bar，均质3次，得到均质液；
5)离心：将所述均质液进行8000rpm离心5min，取上清液；
6)酶解：在上清液中加入质量分数0.1％木瓜蛋白酶，pH值7.5、50℃消化2h，90℃灭酶30min，得到天竺葵提取物。
对比例1、制备天竺葵水提取物
将天竺葵干燥花用纯净水浸泡1h后，加热煮沸30min，过滤提取上清；再加热煮一次，过滤提取上清，合并两次上清，使提取液的浓度为5％，即为天竺葵水提物。
对比例2、制备天竺葵水提取物
将实施例1中的酵母菌替换为植物乳杆菌(Lactobacillus Plantarum)CGMCCNO.1258，其余同实施例1。
对比例3、制备天竺葵水提取物
将实施例1中的酵母菌替换为唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)ATCC11741，其余同实施例1。
对比例4、制备天竺葵水提取物
将实施例1中的酵母菌替换为CBS 246发酵毕赤酵母(Pichia FermentansLodder)，其余同实施例1。
对上述实施例及对比例制备的提取物的效果进行评价，具体如下：
1、皂苷测定方法及结果：
应用的分光光度法(DB/T2818-2018)。样品经乙醇提取、正丁醇萃取后，使用香草醛-高氯酸显色，在535nm下检定吸光度，根据菝葜皂苷元标准曲线，外标法计算皂苷含量。
表1皂苷含量测定结果
| 样本 | 皂苷含量(ug/ml) |
| 0.5％天竺葵水提液 | 517.45 |
| 0.5％天竺葵植物乳酸菌提取液 | 515.86 |
| 0.5％天竺葵唾液乳酸菌提取液 | 739.33 |
| 0.5％天竺葵毕赤酵母提取液 | 2143.56 |
| 0.5％天竺葵酿酒酵母提取液 | 2407.58 |
表1中，0.5％天竺葵水提液是将上述制备的5％天竺葵水提物用水稀释至浓度为0.5％，即得。
2、总抗氧化能力测定
应用总抗氧化能力试剂盒(南京建成生物工程研究所)进行测定。原理是：机体中有许多看过过氧化物质，能使Fe3+还原成Fe2+，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色法可测出其抗氧化能力的高低。
表2总抗氧化能力测定结果
| 样品 | 吸光度 | 总抗氧化能力(U/mL) |
| 天竺葵水提取 | 0.908 | 111.98 |
| 天竺葵酵母发酵液 | 1.499 | 184.87 |
Claims (10)
1.一种天竺葵提取物的制备方法，包括下述步骤：
1)在YPD培养基中加入天竺葵花，高压蒸汽灭菌，得到天竺葵培养基；
2)将酵母菌菌种接种于YPD培养基，进行摇床培养，得到种子菌液；
3)将所述种子菌液接种于所述天竺葵培养基中，培养至稳定期，得到发酵产物；
4)将所述发酵产物进行高压均质处理，得到均质液；
5)将所述均质液进行离心，取上清液；
6)在所述上清液中加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，得到天竺葵提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述天竺葵花的用量为所述YPD培养基质量的5％-10％；所述高压蒸汽灭菌的条件为121℃、高压灭菌30min。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在在于：所述步骤2)中，所述摇床培养的条件为30℃、150rpm，摇床培养10-14小时；
所述种子菌液中酵母菌的含量为8×107-2×108CFU/mL；
所述酵母菌为安琪低糖高活性干酵母。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述种子菌液的接种量为所述天竺葵培养基体积的5-10％；
所述发酵培养的条件为30℃、100rpm摇床培养；
所述培养至稳定期的检测标准为：pH≤4.5、OD560≥1.4。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤4)中，所述均质的条件为：压力780Bar，均质3次。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤5)中，所述离心条件为：转速8000rpm，离心时间5min。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤6)中，所述木瓜蛋白酶的用量为所述均质液质量的0.05-0.1％；
所述酶解的条件为：pH值7.0-8.0，温度50-55℃，时间1.5-2小时；
所述灭酶的条件为：90℃保温30min。
8.权利要求1-7中任一项所述方法制备得到的天竺葵提取物。
9.权利要求8所述的天竺葵提取物在制备具有抗氧化功效的产品中的应用；所述产品为药物和/或保健品和/或化妆品。
10.一种具有抗氧化功效的产品，其活性成分包括权利要求8所述的天竺葵提取物。
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 罗永明等: "《中药化学成分提取分离技术与方法》", vol. 1, 上海科学技术出版社, pages: 96 * |
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