CN115624107A - 一种宠物低敏核心配方及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种宠物低敏核心配方,主要由以下原料制备而成:阳梨,草莓,蓝莓,蔓越莓,无花果,裂壶藻油,羽衣甘蓝,营养添加剂。优选的,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:阳梨25%~50%,草莓10%~30%,蓝莓10%~20%,蔓越莓2%~10%,无花果5%~15%,裂壶藻油3%~8%,羽衣甘蓝0.5%~3%,营养添加剂5%~15%。优选的,营养添加剂主要由以下原料制备而成:二十二碳六烯酸,L‑抗坏血酸‑2‑磷酸酯,低聚木糖,甘露寡糖,凝结芽孢杆菌,乳酸片球菌,植物乳杆菌,动物双歧杆菌,蛋白铁,蛋白锌,蛋白锰,酵母硒和蛋白铜。本发明通过小鼠实验证明,添加了本发明提供的一种宠物低敏核心配方,减轻了小鼠的过敏反应及其症状,提高了机体的抗过敏能力。

Description

一种宠物低敏核心配方及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于宠物食品配方领域,特别涉及一种宠物低敏核心配方及其制备方法和应用。
背景技术
随着宠物犬猫在城市中的饲养量增多,宠物主人对于犬猫健康的关注度不断提升,市场对于宠物食品的营养性的要求也越来越高。
随着工业化、城市化的快速发展,强光、噪音、污染等问题导致宠物的生理和心理压力越来越大,致使宠物犬猫出现不同程度的免疫机能下降和抗氧化能力减弱,导致宠物犬猫发生过敏反应的几率快速上升。诱发爱宠过敏反应的抗原,称为过敏原。过敏原,是发生过敏反应的必要条件。引起过敏反应的抗原物质常见的有2000-3000种,医学文献记载接近2万种。它们通过吸入、食入、注射或接触等方式使机体产生过敏现象。
过敏的发生需要内因。其内因就是“过敏体质”,“过敏体质”是指某些犬猫的免疫系统存在一定缺陷,它们的免疫系统容易做出“不辨敌友、无端攻击”的举动,从而导致过敏的发生。除自身免疫系统缺陷之外,体内自由基——过氧化物的大量蓄积,损害攻击肥大细胞和嗜碱粒细胞等正常免疫细胞,也是导致犬猫出现过敏的原因之一。过敏原进入机体后,诱导淋巴B细胞产生IgE抗体。IgE与靶细胞有高度的亲和力,牢固地吸附在肥大细胞、嗜碱粒细胞表面。当相同的抗原再次进入致敏的机体,与IgE抗体结合,就会引发细胞膜的一系列生物化学反应,导致免疫细胞分泌介质前体,合成前列腺素、血栓素A2;和白细胞三烯(LTs)、血小板活化因子(PAF)等多种过敏介质。各种介质随血流散布至全身,作用于皮肤、粘膜、呼吸道等效应器官,引起小血管及毛细血管扩张,毛细血管通透性增加,平滑肌收缩,腺体分泌增加,嗜酸粒细胞增多、浸润,引起过敏症状。
目前市场上现有的低敏宠物食品采用植物酶解蛋白,或是宠物日常生活中很少接触的食材作为蛋白来源,从而降低产品中食物过敏原的存在可能。现有技术通过使用酶解植物蛋白替代动物源性蛋白质,以降低宠物食物过敏几率。这种方法生产出来的宠物食品只是单纯的在食入式过敏方面减少过敏原摄入,并没有从更多的角度帮助宠物改善过敏损伤,提升健康品质。酶解植物蛋白对于犬猫来说适口性较差,进食欲望弱。
发明内容
本发明的目的旨在针对现有技术的不足,提供一种宠物低敏核心配方及其制备方法和应用。本发明通过小鼠实验证明,添加了本发明提供的一种宠物低敏核心配方,减轻了小鼠的过敏反应及其症状,提高了机体的抗过敏能力。
本发明的技术方案是这样实现的:
一种宠物低敏核心配方,主要由以下原料制备而成:阳梨,草莓,蓝莓,蔓越莓,无花果,裂壶藻油,羽衣甘蓝,营养添加剂。
如上所述的宠物低敏核心配方,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:阳梨25%~50%,草莓10%~30%,蓝莓10%~20%,蔓越莓2%~10%,无花果5%~15%,裂壶藻油3%~8%,羽衣甘蓝0.5%~3%,营养添加剂5%~15%。
如上所述的宠物低敏核心配方,营养添加剂主要由以下原料制备而成:二十二碳六烯酸,L-抗坏血酸-2-磷酸酯,低聚木糖,甘露寡糖,凝结芽孢杆菌,乳酸片球菌,植物乳杆菌,动物双歧杆菌,蛋白铁,蛋白锌,蛋白锰,酵母硒和蛋白铜。
如上所述的宠物低敏核心配方,所述二十二碳六烯酸在宠物低敏核心配方中的质量百分数为0.1%~1%;所述L-抗坏血酸-2-磷酸酯在宠物低敏核心配方中的质量百分数为0.1%~1%;所述低聚木糖在宠物低敏核心配方中的质量配比为10-100mg/kg;所述甘露寡糖在宠物低敏核心配方中的质量配比为10-100mg/kg;所述蛋白铁在宠物低敏核心配方中的质量配比为1500-3000mg/kg,以铁计;所述蛋白锌在宠物低敏核心配方中的质量配比为1500-3000mg/kg,以锌计;所述蛋白锰在宠物低敏核心配方中的质量配比为100-200mg/kg,以锰计;所述酵母硒在宠物低敏核心配方中的质量配比为0.8mg/kg,以硒计;所述蛋白铜在宠物低敏核心配方中的质量配比为150-300mg/kg,以铜计。
如上所述的宠物低敏核心配方,所述凝结芽孢杆菌,乳酸片球菌,植物乳杆菌和动物双歧杆菌的总量在宠物低敏核心配方中的含量为30-200亿CFU/kg。
如上所述的宠物低敏核心配方,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:阳梨30%,草莓30%,蓝莓20%,蔓越莓5%,无花果5%,裂壶藻油3.5%,羽衣甘蓝1.5%,营养添加剂5%。
如上所述的宠物低敏核心配方,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:阳梨25%,草莓25%,蓝莓15%,蔓越莓10%,无花果10%,裂壶藻油3.5%,羽衣甘蓝1.5%,营养添加剂10%。
基于同一个发明构思,本发明还提供了一种小鼠低敏日粮,将小鼠标准日粮配方与如上所述的一种宠物低敏核心配方以质量比93:7混合而成。将冻干后的宠物低敏核心配方粉碎后,与小鼠标准日粮原料按比例混合均匀后,通过冷压挤出工艺制成小鼠低敏日粮。
本发明所述的小鼠标准日粮,由以下质量百分含量的原料组成:玉米24.43%,黑麦粉50.43%,豆粕16.17%,鱼粉3.48%,磷酸氢钙0.09%,膨润土3.48%,食盐0.17%,豆油1.74%;将所有原料按比例混合均匀后通过冷压挤出工艺制成小鼠标准日粮。
基于同一个发明构思,本发明还提供了一种宠物低敏核心配方的制备方法,包括以下步骤:
(1)将所有原料按比例混合均匀,斩拌至泥状;
(2)将混合好的原料,塑型后冷冻,送入冻干仓内冻干脱水,即得宠物低敏核心配方。
基于同一个发明构思,本发明还提供了如上所述的宠物低敏核心配方在减轻宠物的过敏反应及其症状或者提高宠物机体的抗过敏能力上的应用。
与现有技术相比,本发明的优点和积极效果如下:
1、本发明中的实施例采用OVA致敏诱导成功建立了小鼠过敏反应模型,低敏日粮单独添加对健康小鼠无显著影响,但可抑制OVA诱导的小鼠过敏反应的发生,减轻过敏反应症状,其机理一方面是通过抑制OVA诱导的Th2型细胞的激活,进而抑制B细胞释放IgE,减少肥大细胞脱颗粒,减少组胺的释放,减轻小鼠的过敏反应及其症状;另一方面可减轻过敏小鼠的氧化应激,增加其抗氧化机能,修复组织细胞的损伤,进而提高机体的抗过敏能力。由此可见,本发明提供的的宠物低敏核心配方,可以减轻宠物的过敏反应及其症状,提高宠物基体的抗过敏能力。
2、本发明中的实施例采用环磷酰胺诱导成功建立了小鼠免疫抑制的模型,低敏日粮单独添加对健康小鼠无显著影响,但可减轻由环磷酰胺诱导的小鼠免疫抑制,提高其免疫功能;提高机体营养物质表观消化率;还可减轻过敏小鼠的氧化应激,增加其抗氧化机能,修复组织细胞的损伤,进而提高机体的抗过敏能力。
附图说明
图1为实施例3各组小鼠平均日采食量;
图2为实施例3各组小鼠平均日增重;
图3为实施例3各组小鼠粗脂肪表观消化率;
图4为实施例3各组小鼠粗蛋白表观消化率;
图5为实施例3各组小鼠粗灰分表观消化率;
图6为实施例3各组小鼠钙表观消化率;
图7为实施例3各组小鼠磷表观消化率;
图8为实施例3各组小鼠干物质表观消化率;
图9为实施例3各组小鼠致敏后腹泻率;
图10为实施例3各组小鼠致敏后的直肠温度;
图11为实施例3各组小鼠的过敏反应评分;
图12为实施例3各组小鼠胸腺指数;
图13为实施例3各组小鼠脾脏指数;
图14为实施例3各组小鼠血清免疫球蛋白E水平;
图15为实施例3各组小鼠血清免疫球蛋白G水平;
图16为实施例3各组小鼠血清组胺水平;
图17为实施例3各组小鼠血液IL-4水平;
图18为实施例3各组小鼠腹腔灌洗液脱颗粒肥大细胞计数;
图19为实施例3各组小鼠血液IL-10水平;
图20为实施例3各组小鼠血液总SOD活性;
图21为实施例3各组小鼠血液GSH-Px水平;
图22为实施例3各组小鼠MDA水平;
图23为实施例4各组小鼠平均日采食量;
图24为实施例4各组小鼠平均日增重;
图25为实施例4各组小鼠营养物质表观消化率;
图26为实施例4各组小鼠胸腺指数;
图27为实施例4各组小鼠脾脏指数;
图28为实施例4各组小鼠淋巴细胞转化的刺激指数;
图29为实施例4各组小鼠迟发超敏反应耳肿胀程度;
图30为实施例4各组小鼠血清溶血素水平;
图31为实施例4各组小鼠抗体生成细胞能力;
图32为实施例4各组小鼠碳廊清指数;
图33为实施例4各组小鼠吞噬指数;
图34为实施例4各组小鼠血液IL-6水平;
图35为实施例4各组小鼠血清免疫球蛋白A水平;
图36为实施例4各组小鼠血清免疫球蛋白G水平;
图37为实施例4各组小鼠免疫球蛋白M水平;
图38为实施例4各组小鼠血液总SOD活性;
图39为实施例4各组小鼠血液GSH-Px水平;
图40为实施例4各组小鼠MDA水平。
以上附图,注:P<0.05:*,表示差异显著;P<0.01:**,表示差异极显著;NS.表示无显著性差异即P>0.05。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的内容,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
除非另有定义,本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的,不是用于限制本发明。本说明书所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1
本实施例提供一种宠物低敏核心配方,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:
阳梨30%,草莓30%,蓝莓20%,蔓越莓5%,无花果5%,裂壶藻油3.5%,羽衣甘蓝1.5%,营养添加剂5%;
其中,营养添加剂主要由以下质量含量的原料制备而成:
二十二碳六烯酸0.7%,L-抗坏血酸-2-磷酸酯0.4%,低聚木糖的添加量为100mg/kg,甘露寡糖的添加量为100mg/kg,凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌和动物双歧杆菌的益生菌添加量为150亿CFU/kg,蛋白铁的添加量(以铁计)1500mg/kg,蛋白锌的添加量(以锌计)1500mg/kg,蛋白锰的添加量(以锰计)100mg/kg,酵母硒的添加量(以硒计)0.8mg/kg,蛋白铜的添加量(以铜计)150mg/kg。营养添加剂中各原料的质量百分含量是指该原料在宠物低敏核心配方中所占的质量百分含量。营养添加剂中所涉及的添加量mg/kg是指该原料的质量在宠物低敏核心配方总的质量中的占比。
本实施例提供的一种宠物低敏核心配方,通过以下制备方法制备而成:
(1)将所有原料按比例混合均匀,斩拌至泥状;
(2)将混合好的原料,塑型后冷冻,送入冻干仓内冻干脱水,即得宠物低敏核心配方。
实施例2:
本实施例提供一种宠物低敏核心配方,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:
阳梨25%,草莓25%,蓝莓15%,蔓越莓10%,无花果10%,裂壶藻油3.5%,羽衣甘蓝1.5%,营养添加剂10%;
其中,营养添加剂主要由以下质量含量的原料制备而成:
二十二碳六烯酸1%,L-抗坏血酸-2-磷酸酯1%,低聚木糖的添加量为100mg/kg,甘露寡糖的添加量为100mg/kg,凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌和动物双歧杆菌的益生菌添加量为150亿CFU/kg,蛋白铁(以铁计)3000mg/kg,蛋白锌(以锌计)3000mg/kg,蛋白锰(以锰计)200mg/kg,酵母硒(以硒计)0.8mg/kg,蛋白铜(以铜计)300mg/kg。营养添加剂中各原料的质量百分含量是指该原料在宠物低敏核心配方中所占的质量百分含量。营养添加剂中所涉及的mg/kg是指该原料的质量在宠物低敏核心配方总的质量中的占比。
本实施例提供的一种宠物低敏核心配方,通过以下制备方法制备而成:
(1)将所有原料按比例混合均匀,斩拌至泥状;
(2)将混合好的原料,塑型后冷冻,送入冻干仓内冻干脱水,即得宠物低敏核心配方。
实施例3低敏日粮对食源性过敏小鼠作用效果的评价
1、小鼠日粮配方:
小鼠标准日粮,由以下质量百分含量的原料组成:玉米24.43%,黑麦粉50.43%,豆粕16.17%,鱼粉3.48%,磷酸氢钙0.09%,膨润土3.48%,食盐0.17%,豆油1.74%;将所有原料按比例混合均匀后通过冷压挤出工艺制成小鼠标准日粮;
小鼠低敏日粮:小鼠标准日粮配方与实施例1宠物低敏核心配方以质量比93:7混合而成。将冻干后的宠物低敏核心配方粉碎后,与小鼠标准日粮原料按比例混合均匀后,通过冷压挤出工艺制成小鼠低敏日粮。
2、实验方法
(1)实验动物:
5周龄SPF级健康雌性Balb/c小鼠80只,体重20±2g;
(2)实验条件:
动物饲养在沈阳农业大学动物动物实验中心进行。采用5周龄的Balb/C雌性小鼠为实验动物,体重在18g~22g之间,实验室一直维持室温状态下,湿度保持在50%左右,一天之内12小时提供光线,12小时黑暗,模仿昼夜交替。
(3)实验分组
将Balb/c小鼠随机分为4组:正常对照组小鼠饲喂标准日粮;实验对照组小鼠饲喂低敏配方日粮;食源性过敏模型组小鼠按照模型制备方法给予卵白蛋白(OVA)致敏实验,饲喂标准日粮;低敏日粮干预组小鼠在致敏的同时给予低敏配方日粮;所有大鼠自由采食及饮水,实验设计见表1。
表1小鼠实验设计
分组(n=20) 处理
C(正常对照组) 饲喂标准小鼠日粮,正常饮水
H(实验对照组) 饲喂低敏配方日粮,正常饮水
M(过敏模型组) 饲喂标准小鼠日粮,OVA致敏
M+H(低敏日粮干预组) 饲喂低敏配方日粮,OVA致敏
其中M、M+H组大鼠于试验开始第31天、45天分别注射基础致敏液,第47、49、51、53、55、57天灌胃激发致敏液;N、H组大鼠注射及灌胃等量佐剂。
(4)检测指标
①日增重、采食量及料重比
试验期间,每周固定一天清晨饲喂前对每只小鼠分别进行空腹称重,计算平均日增重、平均日采食量。
②一般状态观察
试验期间观察大鼠状态,包括饮食、大小便、活动情况、毛发等,激发致敏40min后,根据过敏症状评分表,如表2所示,对每组小鼠的症状进行评分,计算小鼠腹泻率,同时测量每只小鼠的直肠温度。
表2过敏症状评分
评分 症状表现
0 无症状
1 抓挠和摩擦鼻子和头部
2 眼睛和嘴巴周围浮肿,腹泻,活动减少或原地踏步,呼吸加速
3 喘息,呼吸吃力,嘴周围青紫
4 失去意识,震颤或痉挛
5 休克、死亡
③血清过敏相关因子检测
试验结束后,小鼠眼球取血,收集血清,检测血清总免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白G(IgG)、组胺(His)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)水平,以及超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平;
④肠道组织形态学观察
试验结束后,分别采集小鼠空肠、回肠、十二指肠,福尔马林固定后,制备石蜡切片,HE染色进行肠道组织学观察。
⑤腹腔灌洗液中脱颗粒肥大细胞计数
小鼠处死后,无菌条件下向腹腔内注射6mL左右无菌PBS,按摩腹部后吸出腹腔液体,吸取200μL滴于载玻片,室温自然风干,滴加甲苯氨蓝染液200μL染色30s,流水冲洗后室温晾干,封片镜检。光镜下以肥大细胞周围有明显紫色渗出物为脱颗粒的肥大细胞,随机计数500个肥大细胞,计算其中肥大细胞脱颗粒的百分比。
⑥小鼠免疫器官指数
小鼠胸腺、脾脏,PBS冲洗后滤纸吸干称重,计算小鼠胸腺和脾脏指数。胸腺指数=胸腺重量/小鼠体重,脾脏指数=脾脏重量/小鼠体重。
⑦养分表观消化率测定
在试验结束前6天,每组各选取体重基本相同的健康大鼠8只置于消化代谢笼内采用全收粪法进行消化试验,用于测定养分表观消化率。消化试验期间将大鼠放置于清洗干净并消毒过的消化代谢笼内单笼饲养,每天定时定量饲喂已称重的饲粮,自由饮水。试验共进行4d,每天09:00收集前1天的粪便,记录粪便的重量。准确记录每只大鼠每天的投料量和剩料量,并计算耗料量;在收集粪样过程中,将饲粮、毛发等去除干净。待4d的收粪期结束后,将鲜粪混匀,置于65~70℃鼓风干燥箱中烘至恒重,于空气中放置24h与空气中水分平衡后,粉碎制样,过40目标准筛,检测常规养分含量。参照《饲料分析及饲料质量检测技术》的方法对饲粮和粪样中各养分含量进行测定。
养分表观消化率计算公式如下:某养分表观消化率(%)=100×(饲粮中该养分的含量-粪中该养分的含量)/饲粮中该养分含量。
⑧数据统计分析
试验数据用Excel进行初步计算整理,处理后的数据用SPSS19.0软件单因素方差进行分析,结果用平均数±标准差表示,数据图采用GraphPadPrism5.0软件绘制。数据P<0.05具有统计学意义。
3、实验结果与分析
(1)低敏日粮对小鼠体重和采食量的影响
试验过程中,对小鼠日采食量及日增重进行监测,计算各组小鼠的平均日采食量及日增重,由图1可见,各组小鼠日采食量无显著差异(P>0.05);由图2可见,与正常对照组小鼠相比,试验对照组小鼠平均日增重极显著增加(P<0.01),过敏模型组小鼠平均日增重极显著降低(P<0.01),而低敏日粮预防组与模型组相比小鼠日增重极显著增加(P<0.01)。以上结果说明,在日采食量无差异的情况下,模型组小鼠对养分的吸收利用率显著降低,导致日增重减少,而饲喂低敏配方日粮可以提高小鼠对养分的吸收利用率,提高日增重。
(2)低敏日粮对小鼠营养表观消化率的影响
由图3-图8所示,与正常对照组相比,模型组小鼠营养物质的表观消化率均无显著变化(P<0.05),试验对照组小鼠粗蛋白的表观消化率显著降低(P<0.05),钙的表观消化率较对照组显著增加(P<0.05);与模型组相比,低敏日粮干预组小鼠粗蛋白表观消化率极显著降低(P<0.01),钙的表观消化率极显著增加(P<0.01)。本部分结果说明低敏日粮对小鼠的营养物质表观消化率无显著影响,结果体重增加结果推测,可能是通过提高了机体对营养物质的利用率而使其在不提高采食量的前提下,使体重增加。
(3)低敏日粮对OVA诱导小鼠过敏反应的影响
激发致敏后观察小鼠排便情况,如图9所示,其中正常对照组和试验对照组小鼠几乎无腹泻的发生,而模型组和低敏日粮干预组小鼠均观察到腹泻现象,随着致敏次数的增加腹泻率呈现先升高后降低的趋势,其中第三次致敏后腹泻率最高,模型组小组腹泻率达到86%,而低敏日粮干预组与对照组相比,腹泻率显著下降,第三次致敏后为45.56%,较模型组下降40.44%,第五次致敏后,低敏日粮干预组小鼠腹泻率为31.57%,较模型组的51.5%降低了19.93%。以上结果说明低敏日粮可以显著改善小鼠的肠道过敏状态,降低腹泻的发生。
最后一次致敏后分别在20min,40min,60min观察小鼠的直肠温度,从图10可见,正常对照组和试验对照组小鼠直肠温度始终维持在36.9度左右,无显著变化;模型组和低敏日粮干预组小鼠随着时间的增加直肠温度呈下降趋势,致敏20min后模型组小鼠体温为36.3度,低敏日粮干预组小鼠体温为36.5度,差异不显著,致敏40min和60min后,低敏日粮干预组小鼠体温较模型组分别高0.33度和0.44度。
5次激发过敏后分别观察小鼠的综合表现,进行过敏反应评分,如图11可见,正常对照组和试验对照组小鼠无过敏现象发生,综合评分为0,模型组和低敏日粮干预组小鼠过敏反应评分随着致敏次数的增加呈现先增加后降低的趋势,但是低敏日粮干预组小鼠的过敏反应评分较模型组有所降低。以上结果表明,低敏日粮单独饲喂时,对健康小鼠的一般状态无显著影响,但是可以显著降低过敏小鼠的腹泻率,提高直肠温度,减轻过敏反应症状。
(4)低敏日粮对小鼠免疫器官指数的影响
动物机体的免疫器官包括中枢免疫器官和周围免疫器官,免疫细胞在中枢免疫器官内发育成熟后迁移到外周免疫组织内行使免疫功能。其中胸腺属于中枢免疫器官,是T淋巴细胞分化、发育、成熟的场所;脾脏是动物机体内最大的免疫器官,属于周围免疫器官,是发生免疫应答的主要场所,为淋巴细胞增殖和免疫应答的发生提供物质基础,具有重要的防御功能。这两个器官的发育状态影响着机体免疫功能的正常运转。当机体收到刺激引起免疫功能低下时,免疫器官中免疫细胞的正常分化、成熟则会减少,从而导致器官萎缩,质量下降。胸腺指数和脾脏指数可直接反应这两个器官的免疫功能,并在一定程度上间接反映机体整体免疫功能的强弱,常作为观察机体免疫功能强弱变化的指标。由图12和图13可见,与正常对照组小鼠相比,试验对照组小鼠胸腺指数和脾脏指数均无显著变化,模型组小鼠胸腺及脾脏指数则均极显著降低(p<0.01),说明模型组小鼠胸腺、脾脏收到OVA刺激,影响了其正常免疫功能,而低敏日粮干预组小鼠胸腺、脾脏指数较模型组小鼠均极显著增加(p<0.01),说明低敏日粮可以提高肠道过敏小鼠胸腺和脾脏内淋巴细胞的正常分化成熟,并确保其正常的免疫。
(5)低敏日粮抑制小鼠过敏反应的机理
食物过敏原经树突细胞呈递后,促进Th0型细胞向Th2型细胞分化,被激活的Th2型细胞大量释放IL-4,IL-5,IL-13等细胞因子,释放的这些因子会激活B细胞,促进B细胞发生类别转换,生成大量浆细胞,进而分泌IgE、IgG等抗体,这些抗体可与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠ受体结合形成复合物时,机体处于致敏状态,过敏原再次进入机体时,会结合上肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的复合物,同时激活两种细胞脱颗粒,并释放组胺、IL-4、TNF-α等过敏介质和炎性因子,对相应的器官和组织产生刺激作用,引起过敏反应及炎性反应。由图14-图18可见,与正常对照组小鼠相比,试验对照组小鼠血清IgE、IgG、His、IL-4水平无显著差异(P>0.05),脱颗粒肥大细胞数显著减少(P<0.05),过敏模型组小鼠血清IgE、IgG、His、IL-4水平均极显著上升,(P<0.01),脱颗粒肥大细胞数显著增加(P<0.05或P<0.01),说明OVA诱发了小鼠过敏反应的发生。而低敏日粮干预组小鼠血清IgE、IgG、His、IL-4水平较模型组均显著降低(P<0.05或P<0.01),脱颗粒肥大细胞数显著减少(P<0.01),说明低敏配方日粮可显著抑制由OVA诱导的Th2型细胞的激活,进而抑制B细胞释放IgE及IgG,减少肥大细胞脱颗粒,减少组胺的释放,减轻小鼠的过敏反应及其症状。
在过敏反应发生机制中,Th1/Th2细胞的失衡及相应细胞因子的失衡也是过敏反应发生的机制之一。在Th1/Th2平衡的调控中,Treg细胞发挥了重要作用,主要通过分泌IL-10、TGF-β发挥其复兴免疫调控作用,其中IL-10是一种具有免疫抑制功能的抗炎因子,其分泌水平在一定程度上与过敏反应程度呈反比。本试验中,由图19可见,模型组小鼠血清IL-10水平显著低于正常对照组和试验对照组(P<0.01),但与低敏日粮干预组相比无显著差异,说明低敏功能粮发挥其抗过敏反应的机制不是通过Treg介导的IL-10水平增加而发挥作用的。
(6)低敏日粮对小鼠抗氧化能力的影响
SOD是动物机体内重要的抗氧化酶,可清除自由基,对抗和阻断脂质过氧化物及超氧阴离子对细胞造成的损伤,增强细胞活力;GSH-PX是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶,与SOD共同属于动物机体抗氧化系统的重要成员;MDA是一种重要的脂质过氧化物,具有细胞毒性,导致组织细胞损伤。由图20-图22可见,与正常对照组相比,试验对照组血清总SOD、GSH-PX及MDA水平均无显著差异(P>0.05),模型组小鼠T-SOD、GSH-PX水平显著降低(P<0.05或P<0.01),MDA水平显著升高(P<0.01),说明OVA致敏小鼠机体机体发生了氧化应激,同时抗氧化能力下降;而低敏日粮干预组小鼠血清T-SOD、GSH-PX活性较模型组显著增加(P<0.05或P<0.01),MDA水平显著下降(P<0.01),说明低敏配方功能粮可显著抑制由OVA导致的小鼠氧化应激的发生,并能增加机体的抗氧化能力。
4、结论
综上结果可见,本试验采用OVA成功诱导了小鼠的过敏反应,低敏日粮单独添加对健康小鼠无显著影响,但可抑制OVA诱导的小鼠过敏反应的发生,减轻过敏反应症状,其机理一方面是通过抑制OVA诱导的Th2型细胞的激活,进而抑制B细胞释放IgE,减少肥大细胞脱颗粒,减少组胺的释放,减轻小鼠的过敏反应及其症状;另一方面可减轻过敏小鼠的氧化应激,增加其抗氧化机能,修复组织细胞的损伤,进而提高机体的抗过敏能力。
实验例4低敏配方日粮对小鼠免疫力的影响
1、小鼠日粮配方:
小鼠标准日粮,由以下质量百分含量的原料组成:玉米24.43%,黑麦粉50.43%,豆粕16.17%,鱼粉3.48%,磷酸氢钙0.09%,膨润土3.48%,食盐0.17%,豆油1.74%;将所有原料按比例混合均匀后通过冷压挤出工艺制成小鼠标准日粮;
小鼠低敏日粮:小鼠标准日粮与实施例1宠物低敏核心配方以质量比93:7混合而成。将冻干后的宠物低敏核心配方粉碎后,与小鼠标准日粮原料按比例混合均匀后,通过冷压挤出工艺制成小鼠低敏日粮。
2、实验方法
(1)试验动物:
5周龄SPF级健康雌性昆明小鼠108只,体重24±2g;
(2)实验条件
动物饲养在沈阳农业大学动物动物实验中心进行。采用5周龄的昆明雌性小鼠为试验动物,体重在22g~26g之间,实验室一直维持室温状态下,湿度保持在50%左右,一天之内12小时提供光线,12小时黑暗,模仿昼夜交替。
(3)实验分组
将昆明小鼠随机分为4组:正常对照组小鼠饲喂标准日粮;试验对照组小鼠饲喂低敏配方日粮;免疫低下模型组小鼠按照模型制备方法给予环磷酰胺(CTX)建立小鼠免疫抑制模型,饲喂标准日粮;低敏日粮干预组小鼠在造模同时给予低敏配方日粮;所有小鼠自由采食及饮水,试验设计见表3。
表3实验分组
分组(n=20) 处理
C(正常对照组) 饲喂标准小鼠日粮,正常饮水
H(试验对照组) 饲喂低敏配方日粮,正常饮水
M(免疫抑制模型组) 饲喂标准小鼠日粮,正常饮水,CTX造模
M+H(低敏日粮干预组) 饲喂低敏配方日粮,正常饮水,CTX造模
本试验一共进行65天,其中M、M+H组小鼠于试验开始第45-48天腹腔注2射环磷酰胺(CTX)(70mg/kg·d);C、H组小鼠腹腔注射等剂量生理盐水,每天一次,共4次。于第54天腹腔注射20%鸡红细胞悬液预处理,第58天进行血清溶血素、抗体生成细胞检测:于第59天进行碳廓清试验:第60天开始进行腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验:于第61天进行ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验;于第57、58、62天进行预处理,并于第62天进行二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发变态反应试验。
(4)检测指标
①日增重、采食率及料重比
试验期间,每周固定一天清晨饲喂前对每只小鼠分别进行空腹称重,计算平均日增重、平均日采食量。
②小鼠免疫器官指数
取小鼠胸腺、脾脏,PBS冲洗后滤纸吸干称重,计算小鼠胸腺和脾脏指数。胸腺指数=胸腺重量/小鼠体重,脾脏指数=脾脏重量/小鼠体重
③养分表观消化率测定
在试验结束前15天,每组各选取体重基本相同的健康小鼠10只置于消化代谢笼内采用全收粪法进行消化试验,用于测定养分表观消化率。参照《饲料分析及饲料质量检测技术》的方法对饲粮和粪样中各养分含量进行测定。
养分表观消化率计算公式如下:某养分表观消化率(%)=100×(饲粮中该养分的含量-粪中该养分的含量)/饲粮中该养分含量。
④低敏日粮对小鼠细胞免疫的影响
a.ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验
处死前24h仅供水。每组随机抽取小鼠5只,重复5次测定。
按下表4所示,进行分组和加样。将制备好的脾细胞悬液接种到96孔板上,每孔100μL,再加入含ConA的RPMI1640培养液100μL(ConA的终浓度为5mg/mL),每个样本设3个重复。同时设空白组和不加ConA的细胞悬液对照组,同样3个复孔。于37℃5%CO2培养箱培养68h后,各孔加入2g/L的MTT 50μ继续培养4h,弃去上清,每孔加DMSO100μL,充分溶解沉淀后读取光密度值(OD570)。以刺激指数(SI)为指标,判断淋巴细胞转化程度。
SI=(实验孔OD值-空白孔OD值)/(对照空OD值-空白孔OD值)
表4分组和加样表
空白孔 对照孔 实验孔
脾淋巴细胞悬液 \ 100μL 100μL
ConA \ \ 100μL
RPMI1640完全培养基 200μL 100μL \
b.二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型变态反应
小鼠腹部脱毛,除空白组外,其他5组小鼠在第57天时,在腹部和左耳廓剃毛处给予1%DNFB丙酮溶液0.05mL/cm2涂抹致敏,第58天再给予1%DNFB丙酮溶液0.05mL/cm2增强,第62天再给予1%DNFB丙酮溶液0.05mL/cm2,致敏1h后在小鼠左耳廓内外两面都均匀涂抹1%DNFB丙酮溶液0.05mL/cm2,剂量为20μL,激敏攻击4h后处死小鼠,左右耳对应部位分别用直径6mm的打孔器取相同面积的耳片,用分析天平称取双耳片重量,计算耳肿胀度。
耳肿胀度=左耳重量(mg)-右耳重量(mg)
⑤低敏日粮对小鼠体液免疫的影响
a.血清溶血素试验
小鼠眼球采血后静置1h,3500r/min10min分离血清,取10μL用生理盐水稀释300倍后取1mL5%鸡红细胞悬液(CRBC)0.5mL,再加入lmL用SA液稀释成的1:8的补体(豚鼠血清),空白管以生理盐水代替血清,混匀,置于37℃水浴30min,转移至冰浴5min终止反应,3000r/min离心5min取上清1mL加3mL蒸馏水混匀,另取0.25mL 5%鸡红细胞悬液加3.75mL蒸馏水作为空白管,混匀,放置10min。以空白管作为空白调零,于540nm处测吸收度OD值,结果用OD值表示。
半数溶血值(HC50)=[样品吸光度值/SRBC或鸡红细胞半数溶血时吸光值]×稀释倍数
b.抗体生成细胞检测
按上述方式制备5%鸡红细胞悬液及脾细胞悬液。取5mL离心管分为对照管于实验管。对照管内加入1mL脾细胞悬液、1mL 5%CRBC、1mL用SA液稀释成的1:8的补体。实验管加入1mL脾细胞悬液、1mL 5%CRBC、1mLSA液。混匀,置于37℃水浴锅温浴1h后,冰浴终止反应。3000r/min离心5min取上清于413nm处,测OD值。
⑥低敏日粮对单核-巨噬细胞吞噬能力的影响
a.碳廓清试验
试验结束前24h,小鼠空腹。第59d,尾静脉注入用生理盐水稀释4倍的印度墨汁(0.1mL/10g),2min和12min后分别从内眦静脉丛取血0.02mL,加到盛有2mL0.1%Na2CO3溶液的EP管中混匀。取样加入96孔板,每孔200μL。用0.1%Na2CO3溶液作为空白对照,用酶标仪在600nm波长处测量光密度值(OD)。
第二次采血完成后,将小鼠颈椎脱臼处死,取肝脏、脾脏和胸腺,分别称重、记录。以碳廓清能力反映单核/巨噬细胞吞噬异物的能力,通常以消除了动物肝、脾重量影响的校正廓清指数(α)表示小鼠碳廓清能力,按照下式计算校正廓清指数(α)
K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)=lg(OD1/OD2)/(t2-t1)
α=体重/(肝重+脾重)×K1/3
注:K为廓清指数;α为校正廓清指数;OD2为t2时测得光密度值;OD1为t1时测得光密度值;t1为第1次采血时间2min;t2为第2次采血时间12min。
b.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
按上述步骤制备20%鸡红细胞悬液。
于试验第60d,取20%鸡红细胞悬液1mL,腹腔注射进入小鼠体内。30min后脱臼处死,经腹腔注入0.9%生理盐水2mL,轻轻晃动鼠板1min后,吸出洗液1mL,各取0.5mL滴于2片载玻片上,37℃条件下保湿孵育30min。生理盐水漂洗后自然晾干,采用1:1丙酮-甲醇溶液进行固定,然后用4%(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色5min,蒸馏水漂洗晾干置油镜下计数巨噬细胞,分别计算吞噬指数和吞噬百分率。
吞噬百分率(%)=(被吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数)×100%
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。
与对照组比较,实验组的吞噬百分率或吞噬指数有显著性差异可判定为阳性。
⑦血清过敏相关因子检测
试验结束后,小鼠眼球取血,收集血清,检测血清总免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、白介素-6(IL-6)、水平,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平。
(5)数据统计分析
试验数据用Excel进行初步计算整理,处理后的数据用SPSS19.0软件单因素方差进行分析,结果用平均数±标准差表示,数据图采用GraphPadPrism5.0软件绘制。数据P<0.05具有统计学意义。
3、试验结果与分析
(1)低敏日粮对小鼠体重和采食量的影响
试验过程中,对小鼠日采食量及日增重进行监测,计算各组小鼠的平均日采食量及日增重,由图23-图24可见,各组小鼠日采食量无显著差异(P>0.05);与正常对照组小鼠相比,试验对照组小鼠平均日增重极显著增加(P<0.01),过敏模型组小鼠平均日增重极显著降低(P<0.01),而低敏日粮预防组与模型组相比小鼠日增重极显著增加(P<0.01)。以上结果说明,在日采食量无差异的情况下,模型组小鼠对养分的吸收利用率显著降低,导致日增重减少,而饲喂低敏配方日粮可以提高小鼠对养分的吸收利用率,提高日增重。
(2)低敏日粮对小鼠营养物质表观消化率的影响
由图25可见,与正常对照组相比,模型组小鼠粗灰分、粗蛋白、磷表观消化率显著降低(P<0.05或P<0.01),试验对照组小鼠粗水、粗灰分、磷的表观消化率均无显著差异(P>0.05),干物质、粗脂肪、粗蛋白、钙极显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,低敏日粮干预组小鼠干物质、粗脂肪、粗蛋白、钙、磷的表观消化率显著升高(P<0.05或P<0.01),虽然粗水、粗灰分没有显著差异,但具有上升趋势。本部分结果说明低敏日粮对小鼠的营养物质表观消化率具有显著影响,添加低敏日能够提高正常小鼠和免疫抑制小鼠的营养物质表观消化率。再综合体重增加的结果推测,可能是通过提高了机体对营养物质的利用率而使其在不提高采食量的前提下,使体重增加。
(3)低敏日粮对小鼠免疫器官指数的影响
由图26和图27可见,与正常对照组小鼠相比,试验对照组小鼠胸腺指数和脾脏指数均无显著变化,模型组小鼠胸腺指数极显著降低(P<0.001),而脾脏指数极显著升高(P<0.001),说明模型组小鼠胸腺、脾脏均受到环磷酰胺的刺激,使其正常免疫功能受到影响,进而抑制了胸腺的发育,使胸腺指数降低,而脾脏在外界的免疫应激下可能引起了代偿性增大,使其脾脏指数升高,低敏日粮干预组小鼠胸腺指数较模型组小鼠显著增加(P<0.05),脾脏指数较模型组小鼠显著降低(P<0.05)。说明低敏日粮可以提高免疫抑制小鼠胸腺和脾脏内淋巴细胞的正常分化成熟,并确保其正常的免疫应答机能。
(4)低敏日粮对小鼠细胞免疫的影响
由图28可见,与正常组对照组小鼠相比,模型组小鼠T淋巴细胞转化能力明显减弱(P<0.05)。试验对照组小鼠T淋巴细胞转化能力无明显影响(P>0.05)。与模型组小鼠相比,低敏日粮干预组小鼠能够明显增强免疫功能低下小鼠T淋巴细胞转化能力(P<0.05)。
由图29可见,与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠耳肿胀度极显著降低(P<0.01),试验对照组小鼠无显著差异(P>0.05);与模型组小鼠相比,低敏日粮干预组小鼠耳肿胀度显著升高(P<0.05)。以上两个结果说明低敏日粮对免疫抑制小鼠的细胞免疫功能具有有效的调节作用。
(5)低敏日粮对小鼠体液免疫的影响
血清中血清溶血素能够反应B细胞的功能,其介导的是体液免疫,可体现血清中IgM的含量和脾脏中产生IgM的细胞数。由图30可见,与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠溶血值极显著降低(P<0.05),试验组小鼠无显著差异(P>0.05),与模型组小鼠相比,低敏日粮干预组小鼠血清溶血值显著升高(P<0.05)。说明低敏日粮能够显著提高免疫功能抑制小鼠血清溶血素水平,进而提高小鼠体液免疫功能。
由图31可见,与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠抗体生成细胞能力极显著降低(P<0.001),试验对照组小鼠无显著差异(P>0.05),与模型组小鼠相比,低敏日粮组小鼠抗体生成细胞能力极显著升高(P<0.01)。说明低敏日粮能够显著提高免疫功能抑制小鼠抗体生成细胞能力,进而提高小鼠体液免疫功能。
(6)低敏日粮对单核-巨噬细胞吞噬能力的影响
由图32可见,与正常对照组相比,模型组、试验组小鼠碳廓清指数均无显著差异(P>0.05),但模型组具有下降趋势;与模型组小鼠相比,低敏日粮干预组无显著差异(P>0.05),但具有上升趋势。由图33可见,与正常对照组相比,模型组小鼠吞噬指数无显著差异(P>0.05)但具有下降趋势,试验组小鼠极显著升高(P<0.01);与模型组小鼠相比,低敏日粮干预组极显著升高。这一结果说明低敏日粮有效增强了由环磷酰胺所致免疫抑制小鼠吞噬细胞吞噬活性,有效调节了小鼠非特异性免疫功能。
(7)低敏日粮抑制小鼠过敏反应发生的机理
细胞因子在机体免疫应答反应扮演着重要的角色,它不仅能够单独起效,还可与其他细胞因子之间发生相互诱生、相互影响而在免疫反应过程中发挥生物学效应。由图34所见,与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠血清中IL-6水平明显降低(P<0.01),试验对照组小鼠血清中IL-6水平无明显影响(P>0.05);与模型组小鼠相比,低敏日粮干预组小鼠血清中IL-6水平明显升高(P<0.01)。说明低敏日粮能够明显提高免疫功能低下小鼠血清中IL-6水平。
由图35-37可见,与正常对照组小鼠相比,试验对照组小鼠血清中IgA、IgG、IgM水平无显著差异(P>0.05),模型组小鼠血清中IgE、IgG、IgM水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),说明环磷酰胺成功诱发小鼠发生免疫抑制,使机体免疫球蛋白水平降低。而低敏日粮干预组小鼠血清IgA、IgG、IgM水平较模型组均显著升高(P<0.05或P<0.01),说明低敏配方日粮可促进由环磷酰胺诱导小鼠免疫抑制模型血清中IgA、IgG、IgM的形成,提高其体液免疫作用。
(8)低敏日粮对小鼠抗氧化能力的影响
SOD是动物机体内重要的抗氧化酶,可清除自由基,对抗和阻断脂质过氧化物及超氧阴离子对细胞造成的损伤,增强细胞活力;GSH-PX是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶,与SOD共同属于动物机体抗氧化系统的重要成员;MDA是一种重要的脂质过氧化物,具有细胞毒性,导致组织细胞损伤。由图38-图40可见,与正常对照组相比,试验对照组血清总SOD水平极显著升高(P<0.01),GSH-PX及MDA水平均无显著差异(P>0.05),模型组小鼠T-SOD、GSH-PX水平无显著差异(P>0.05),MDA水平极显著升高(P<0.01),而低敏日粮干预组小鼠血清T-SOD、GSH-PX活性较模型组显著增加(P<0.05),MDA水平极显著下降(P<0.01),说明低敏配方功能粮可显著抑制由环磷酰胺导致的小鼠氧化应激的发生,并能增加机体的抗氧化能力。
4、结论
综上结果可见,本试验采用环磷酰胺成功诱导了小鼠免疫抑制的发生,低敏日粮单独添加对健康小鼠无显著影响,但可减轻由环磷酰胺诱导的小鼠免疫抑制,提高其免疫功能;提高机体营养物质表观消化率;还可减轻过敏小鼠的氧化应激,增加其抗氧化机能,修复组织细胞的损伤,进而提高机体的抗过敏能力。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种宠物低敏核心配方,其特征在于,主要由以下原料制备而成:阳梨,草莓,蓝莓,蔓越莓,无花果,裂壶藻油,羽衣甘蓝,营养添加剂。
2.根据权利要求1所述的宠物低敏核心配方,其特征在于,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:阳梨25%~50%,草莓10%~30%,蓝莓10%~20%,蔓越莓2%~10%,无花果5%~15%,裂壶藻油3%~8%,羽衣甘蓝0.5%~3%,营养添加剂5%~15%。
3.根据权利要求1所述的宠物低敏核心配方,其特征在于,营养添加剂主要由以下原料制备而成:二十二碳六烯酸,L-抗坏血酸-2-磷酸酯,低聚木糖,甘露寡糖,凝结芽孢杆菌,乳酸片球菌,植物乳杆菌,动物双歧杆菌,蛋白铁,蛋白锌,蛋白锰,酵母硒和蛋白铜。
4.根据权利要求3所述的宠物低敏核心配方,其特征在于,所述二十二碳六烯酸在宠物低敏核心配方中的质量百分数为0.1%~1%;所述L-抗坏血酸-2-磷酸酯在宠物低敏核心配方中的质量百分数为0.1%~1%;所述低聚木糖在宠物低敏核心配方中的质量配比为10-100mg/kg;所述甘露寡糖在宠物低敏核心配方中的质量配比为10-100mg/kg;所述蛋白铁在宠物低敏核心配方中的质量配比为1500-3000mg/kg,以铁计;所述蛋白锌在宠物低敏核心配方中的质量配比为1500-3000mg/kg,以锌计;所述蛋白锰在宠物低敏核心配方中的质量配比为100-200mg/kg,以锰计;所述酵母硒在宠物低敏核心配方中的质量配比为0.8mg/kg,以硒计;所述蛋白铜在宠物低敏核心配方中的质量配比为150-300mg/kg,以铜计。
5.根据权利要求3所述的宠物低敏核心配方,其特征在于,所述凝结芽孢杆菌,乳酸片球菌,植物乳杆菌和动物双歧杆菌的总量在宠物低敏核心配方中的含量为30-200亿CFU/kg。
6.根据权利要求2所述的宠物低敏核心配方,其特征在于,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:阳梨30%,草莓30%,蓝莓20%,蔓越莓5%,无花果5%,裂壶藻油3.5%,羽衣甘蓝1.5%,营养添加剂5%。
7.根据权利要求2所述的宠物低敏核心配方,其特征在于,主要由以下质量百分含量的原料制备而成:阳梨25%,草莓25%,蓝莓15%,蔓越莓10%,无花果10%,裂壶藻油3.5%,羽衣甘蓝1.5%,营养添加剂10%。
8.一种小鼠低敏日粮,其特征在于,将小鼠标准日粮配方与权利要求1~7所述的一种宠物低敏核心配方以质量比93:7混合而成。
9.根据权利要求1~7所述的一种宠物低敏核心配方的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将所有原料按比例混合均匀,斩拌至泥状;
(2)将混合好的原料,塑型后冷冻,送入冻干仓内冻干脱水,即得宠物低敏核心配方。
10.根据权利要求1~7任一项所述宠物低敏核心配方在减轻宠物的过敏反应及其症状或者提高宠物机体的抗过敏能力上的应用。
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