CN115611963B - 臭椿叶中甾体类化合物的制备及应用 - Google Patents
臭椿叶中甾体类化合物的制备及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115611963B CN115611963B CN202211135132.6A CN202211135132A CN115611963B CN 115611963 B CN115611963 B CN 115611963B CN 202211135132 A CN202211135132 A CN 202211135132A CN 115611963 B CN115611963 B CN 115611963B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- ailanthus
- leaves
- ailanthus altissima
- steroid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001093951 Ailanthus altissima Species 0.000 title claims abstract description 33
- -1 steroid compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 49
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 210000000540 fraction c Anatomy 0.000 claims description 17
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 241001093963 Ailanthus Species 0.000 claims description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 6
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 claims description 4
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 claims description 4
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 3
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 claims description 2
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002027 dichloromethane extract Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 claims 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 abstract 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 abstract 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 30
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 21
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 17
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 14
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 13
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 10
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 9
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 9
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 8
- 238000002212 electronic circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 7
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 7
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 230000034994 death Effects 0.000 description 6
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- OBOXTJCIIVUZEN-UHFFFAOYSA-N [C].[O] Chemical group [C].[O] OBOXTJCIIVUZEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YLEIFZAVNWDOBM-ZTNXSLBXSA-N ac1l9hc7 Chemical compound C([C@H]12)C[C@@H](C([C@@H](O)CC3)(C)C)[C@@]43C[C@@]14CC[C@@]1(C)[C@@]2(C)C[C@@H]2O[C@]3(O)[C@H](O)C(C)(C)O[C@@H]3[C@@H](C)[C@H]12 YLEIFZAVNWDOBM-ZTNXSLBXSA-N 0.000 description 4
- 150000001336 alkenes Chemical group 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 3
- OSFBJERFMQCEQY-UHFFFAOYSA-N propylidene Chemical class [CH]CC OSFBJERFMQCEQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 3
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 241001093962 Simaroubaceae Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical compound C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 2-(diethylamino)ethyl n'-phenylcarbamimidothioate;dihydrobromide Chemical compound Br.Br.CCN(CC)CCSC(N)=NC1=CC=CC=C1 XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical class C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010027514 Metrorrhagia Diseases 0.000 description 1
- 206010059013 Nocturnal emission Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000006359 acetalization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011157 data evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 201000007741 female breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000002276 female breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000001896 rotating frame Overhauser effect spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
- C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
- C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
- C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
- C07J7/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa
- C07J7/0025—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa substituted in position 16
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
臭椿叶中甾体类化合物的制备及应用，属于医药技术领域，具体涉及从苦木科臭椿属植物臭椿(Ailanthus altissima(Mill.)Swingle)叶中提取分离的4个新的甾体类化合物chouchunsteride A‑D，它们具有相同甾体母核，通过反复的硅胶、ODS柱层析、HPLC柱色谱分离得到。并通过测试它们对Hep3B,HepG2肝癌细胞的抑制作用，对这些化合物抗肿瘤活性进行了考察。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从植物臭椿叶中制备甾体类化合物的方法及这类化合物在抗肿瘤方面的应用。
背景技术
臭椿(Ailanthus altissima(Mill.)Swingle)为苦木科(Simaroubaceae)臭椿属(Ailanthus Desf.)植物，广泛分布于我国陕西省、甘肃省、四川省、云南省等地。其根皮入药具有清热燥湿、收涩固肠的功效，主治赤白久痢、肠风下血、带下血崩、梦遗滑精等症。现代化学与药理学研究表明，臭椿中含有苦味素、甾体、香豆素、生物碱、木质素等成分，具有抗癌、抗病毒、抗炎、抗氧化等多种活性。
我国癌症数据评估：据2015年中国居民主要疾病死亡汇率及死因构成报告显示，因癌症死亡人数达到1643.5万(占比26.4％)，位居第一位。据权威机构发布的《2020-2026年中国肿瘤治疗精准医疗行业市场分析预测及投资价值咨询报告》显示：2018年全球新增癌症患者达1810万人，因癌症死亡人数为960万人。我国是人口大国，也是癌症高发国家，2018年我国新发病例数380.4万例，占全球癌症新发病人数的20％以上，肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、女性乳腺癌是我国主要的常见恶性肿瘤，约占全部新发病例的77％。其中，我国肝癌发病和死亡人数约占全球一半，肝癌位居我国恶性肿瘤致死率第2～3位，5年生存率仅为14.1％。中国人群的肝癌存在生存率低、死亡率高的情况，如何有效降低肝癌相关负担仍是中国公共卫生和慢性病防控领域亟待解决的重大问题。目前，超过60％的抗癌药物来自天然产物，天然产物为化疗药物的发现提供了重要来源，为维护人类健康做出了巨大贡献。因此，在天然产物中寻找具有抗癌潜力的药物具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供4种从苦木科臭椿属植物臭椿(Ailanthus altissima(Mill.)Swingle) 叶中分离得到的甾体类化合物，结构如下所示：
所述臭椿叶中甾体类化合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取干燥的臭椿叶以70-80％工业乙醇提取，浓缩提取液得浸膏，浸膏采用二氯甲烷与正丁醇萃取；
(2)将二氯甲烷与正丁醇萃取液浓缩所得浸膏经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇100:1-1:1进行梯度洗脱，共收集到5个流分A-E；
(3)将流分C进一步经HP-20大孔吸附树脂柱色谱以乙醇-水梯度洗脱，得3个流分C1、 C2、C3；
(4)将所得流分C3进一步经ODS柱色谱以甲醇-水系统20:80-90:10梯度洗脱得到了4 个流分C3.1-C3.4；
(5)将所得流分C3.2经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇系统50:1-1:1进行梯度洗脱，所得流分C3.2.1-C3.2.8；
(6)所得流分C3.2.2经制备与半制备HPLC以乙腈-水(45:55-50:50)纯化得到化合物1，同样的方法对流分C3.2.3经制备与半制备HPLC以乙腈-水(50:50-30:70)纯化得到化合物2-4。
所述步骤(1)中，所述提取为回流提取，提取3-5次，每次2-3小时。
所述步骤(1)中，所述臭椿叶是指苦木科臭椿属植物臭椿(Ailanthus altissima(Mill.) Swingle)的干燥叶子。
所述步骤(3)中，所述乙醇-水溶液中，乙醇体积浓度为20％-90％。
所得化合物经过系统结构鉴定结果如下：
利用高分辨质谱，一维NMR、二维NMR及计算ECD对化合物1-4进行结构鉴定，相应附图如图1-43所示。
chouchunsteride A(1):白色粉末，UV(MeOH)λmax(logε)：242 nm(0.25)；高分辨质谱HRESIMS给出准分子离子峰[M+H]+(m/z):387.2526(calcdfor C24H35O4:387.2530),结合1H NMR以及13C NMR核磁共振谱得出分子式为C24H34O4，计算不饱和度为7。1H NMR高场区仅观察到一个烯烃质子信号：δH 5.80(1H,d,J＝1.8Hz)；此外还观察到一个连氧碳上的质子信号：δH 3.97(1H,dd,J＝3.0,2.6Hz)，以及三个甲基信号：δH1.46 (3H,s)，1.20(3H,s)，0.87(3H,s)；剩余质子信号均为脂肪族碳上的质子信号且化学位移均在 3以内。依据上述信号推测化合物1可能为甾体类化合物。13C NMR中共给出24个碳信号，包括α，β不饱和酮碳基片段中的3个碳信号：δC 198.9，167.5，127.1；一个酯羰基信号：δC177.6；两个连氧碳信号：δC 88.4，68.4；三个甲基碳信号：26.8，17.2，13.2；剩余碳信号均为脂肪族碳。根据HMBC谱与1H-1H COSY中的相关信号表明化合物1具有甾体四环骨架。对数据的进一步分析发现，δC 198.9(C-3),127.1(C-4)与167.5(C-5)低场区信号以及H-4与C- 2,C-6和C-10；H-1与C-3之间的HMBC相关表明，α，β-不饱和羰基连接在A环上。HMBC 谱中H-21与C-17,C-20,C-22，H-22与C-24，H-23与C-20的相关信号与C-20(δC 88.7)的去屏蔽信号证实该化合物的17位侧链为五元内酯环。此外H-7与C-5,C-9,C-14间的HMBC相关信号证明该化合物的7位被羟基取代。化合物1的相对构型可通过NOESY谱进行确定。 H-7/H-18，H-18/H-8，H-8/H-19间的NOE相关信号证明H-7,8以及18,19-CH3均为β-构型； H-9/H-14，H-14/H-17间的NOE相关信号证明H-9,14,17均为α-构型。对于21-CH3而言，由于其处于17侧链上而C-17与C-20间为可自由旋转的碳碳单键，无法通过NOESY谱确定其相对构型。因此结合生源以及文献报道的数据将其暂定为β-构型。化合物的绝对构型是通过比较计算和实测ECD确定的。化合物实测ECD曲线与计算的7R,8S,9S,10R,13S,14S,17S, 20S构型ECD曲线能够较好的吻合，因此确定化合物的绝对构型为7R,8S,9S,10R,13S,14S,17S,20S，并命名为chouchunsteride A。
chouchunsteride B(2):白色粉末，UV(MeOH)λmax(logε)：240.5 nm(0.10)；高分辨质谱HRESIMS给出准分子离子峰[M+Na]+(m/z):355.2246(calcd for C21H32NaO3:355.2244),结合1H NMR以及13C NMR核磁共振谱得出分子式为C21H32O3，计算不饱和度为6。1H NMR高场区仅观察到一个烯烃质子信号：δH 5.73(1H,br s)；此外还观察到两个连氧碳上的质子信号：δH 4.50(1H,ddd,J＝7.8,5.7,2.2Hz)，4.14(1H,dd,J＝9.8,6.0Hz)；以及三个甲基信号：δH 1.31(3H,d,J＝6.0Hz)，1.19(3H,s)，0.92(3H,s)；剩余质子信号均为脂肪族碳上的质子信号且化学位移均在3以内。依据上述信号推测化合物2可能为甾体类化合物。13C NMR中共给出21个碳信号，包括α,β不饱和酮碳基片段中的3个碳信号：δC 199.7， 171.2，124.1；两个连氧碳信号：δC 73.1，66.7；三个甲基碳信号：23.8，17.5，14.2；剩余碳信号均为脂肪族碳。根据HSQC谱对该化合物的碳氢数据进行了全归属。依据HMBC谱中H-4与C-2,C-6,C-10，H-18与C-1,C-5,C-9,C-10间的相关信号以及1H-1HCOSY谱中H-1/H- 2间的相关信号可确定A环具有一个α,β不饱和酮碳基片段并通过C-5,C-10与B环相连。 HMBC谱中H-8与C-6,C-10,C-11,C-13,C-15的相关信号以及1H-1H COSY谱中H-6/H-7， H-7/H-8，H-8/H-9，H-9/H-11，H-11/H-12，H-8/H-14的相关信号证明化合物2的B环以及C 环均为6元环且B、C环通过C-8,C-9相连。H-19与C-12,C-13,C-14,C-17，H-16与C-13， H-20/C-13,16,17，H-21/C-17间的HMBC相关证明D环为五元环，且17位具有一个2-羟基-乙基片段。化合物2的相对构型是通过NOESY确定的，而20位羟基处于柔性链中，由于碳碳单键可进行自由旋转而无法利用空间相关谱如NOESY或ROESY谱进行确定。而20位的间位17位也存在一个仲醇羟基，构成了1,3-二羟基片段，符合制备丙叉衍生物的基本要求，因此可通过制备丙叉衍生物的方法确定20位羟基相对构型。根据该化合物丙叉产物2a的 NOESY光谱中，H-9/H-14、H-14/H-16、H-14/H-17存在NOESY相关以及H-8/H3-18、H-8/H3- 19、H3-19/H-20的NOESY相关确定H-9、H-14、H-16和H-17的为α-构型，而H-8、H3-18、 H3-19和H-20的相对构型为β-构型，通过对比实测和计算ECD谱图确定了化合物的绝对构型为8S,9S,10R,13S,14S,16S,17S,20S，并命名为chouchunsteride B。
化合物1,2与2的缩醛化产物2a的核磁数据归属如表1所示。
表1化合物1,2,2a的1H(600MHz)和13C(150MHz)在CDCl3中的NMR数据
chouchunsteride C(3):白色粉末，UV(MeOH)λmax(logε):240.5 nm(0.20)；高分辨质谱HRESIMS给出准分子离子峰[M+Na]+(m/z):353.2088(calcd for C21H30NaO3:353.2087),结合1H NMR以及13C NMR核磁共振谱得出分子式为C21H30O3，计算不饱和度为7。1H NMR高场区仅观察到一个烯烃质子信号：δH 5.74(1H,d,J＝1.7Hz)；此外还观察到一个连氧碳上的质子信号：δH 4.59(1H,ddd,J＝7.5,6.5,4.3Hz)，以及三个甲基信号：δH 2.22(3H,s)，1.21(3H,s)，1.01(3H,s)；剩余质子信号均为脂肪族碳上的质子信号且化学位移均在3以内。依据上述信号推测化合物3可能为甾体类化合物。13CNMR中共给出21 个碳信号，包括α,β不饱和酮碳基片段中的3个碳信号：δC 199.5，170.8，124.2；一个酮碳基信号：δC 213.1；一个连氧碳信号：δC 72.3；三个甲基碳信号：32.7，17.5，14.9；剩余碳信号均为脂肪族碳。依据HMBC谱以及1H-1H COSY中的相关信号，化合物3可能具有与化合物 2相似的平面结构。对数据的进一步分析发现化合物3可能为化合物2的20位羟基被氧化为酮碳基的产物。HMBC谱中H-21/C-17,20，H-16/C-20的相关信号也证明该化合物的20位为酮碳基。化合物3为母核含有21个碳原子的甾体衍生物，母核中的手性中心通常较为固定。但17位侧链可能有α或者β两种构型，此外16位也少见有羟基取代的报道。NOESY谱中，依据H-16/H-14，H-14/H-17间的相关信号确定17位侧链为少见的β构型，16位羟基为β构型。化合物的绝对构型是通过比较计算和实测ECD确定的。化合物实测ECD曲线与计算的8S,9S,10R,13S,14S,16S,17R构型ECD曲线能够较好的吻合，因此确定化合物的绝对构型为8S,9S,10R,13S,14S,16S,17R，并命名为chouchunsteride C。
chouchunsteride D(4):白色粉末(甲醇)，UV(MeOH)λmax(logε): 202.0nm(0.51)；高分辨质谱HRESIMS给出准分子离子峰[M+H]+(m/z):333.2416(calcd for C21H33O3:333.2424),结合1H NMR以及13C NMR核磁共振谱得出分子式为C21H32O3，计算不饱和度为6。1H NMR高场区仅观察到一个烯烃质子信号：δH 5.35(1H,dd,J＝5.3,2.6Hz)；此外还观察到两个连氧碳上的质子信号：δH 4.58(1H,ddd,J＝7.1,6.8,4.5Hz)，3.52(1H,m)以及三个甲基信号：δH 2.22(3H,s)，1.03(3H,s)，0.97(3H,s)；剩余质子信号均为脂肪族碳上的质子信号且化学位移均在3以内。依据上述信号推测化合物4可能为甾体类化合物。13C NMR 中共给出21个碳信号，包括一个酮碳基信号：δC 213.3；一对双键碳信号：δC 140.8，121.2；两个连氧碳信号：δC 72.3，71.7；三个甲基碳信号：32.6，19.4，14.6；剩余碳信号均为脂肪族碳。根据HSQC谱对该化合物的碳氢数据进行了全归属。依据HMBC谱以及1H-1H COSY中的相关信号，化合物4可能具有与化合物4相似的平面结构。对数据的进一步分析发现化合物4可能具有孕甾烷特征的5,6位双键，A环的3位不存在α,β不饱和酮碳基片段，而被羟基取代。HMBC谱中H-6/C-4，H-18/C-1,5,9,10以及1H-1H COSY谱中H-1/H-2,H-2/H-3,H- 3/H-4的相关信号证实了上述观点。通过NOESY谱并结合生源可确定化合物4的相对构型。其3位碳的化学位移为71.7，与文献中报道的同类化合物3位化学位移基本一致，因此确定 3位羟基为β构型。通过对比实测和计算ECD谱图确定了化合物的绝对构型为3S,8S,9S,10R,13S,14S,16S,17R，并命名为chouchunsteride D。
化合物3,4的核磁数据归属如表2所示。
表2化合物3,4的1H(600MHz)和13C(150MHz)在CDCl3中的NMR数据
对本发明所述的四个甾体类化合物对肿瘤细胞Hep3B和HepG2的细胞毒活性及作用机制进行了考察，体外细胞实验结果表明化合物1对HepG2细胞具有显著的细胞毒活性，IC50值为4.03μM。因此本发明所述的甾体类化合物具有进一步开发治疗肺癌药物的前景。
一种药物组合物，包含所述从臭椿叶中分离得到的甾体类化合物中任一种或多种或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料和载体。
一种臭椿叶提取物，包含所述四种甾体类化合物中任一种或多种。
本发明还提供所述从臭椿叶中分离得到的甾体类化合物或所述药物组合物或所述臭椿叶提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的优点在于，所述化合物均为立体构型确定的光学纯化合物，同时其抗癌活性强，具有进一步开发的价值。
附图说明
图1化合物1的UV谱；
图2化合物1的HRESIMS谱；
图3化合物1的1H NMR谱(600MHz,CDCl3)；
图4化合物1的13C NMR谱(150MHz,CDCl3)；
图5化合物1的HSQC谱(600MHz,CDCL3)；
图6化合物1的HMBC谱(600MHz,CDCL3)；
图7化合物1的1H-1H COSY谱00MHz,CDCL3)；
图8化合物1的NOESY谱(600MHz,CDCL3)；
图9化合物1的DEPT谱(600MHz,CDCl3)；
图10化合物1的ECD谱；
图11化合物2的UV谱；
图12化合物2的HRESIMS谱；
图13化合物2的1H NMR谱(600MHz,CDCl3)；
图14化合物2的13C NMR谱(150MHz,CDCl3)；
图15化合物2的HSQC谱(600MHz,CDCl3)；
图16化合物2的HMBC谱(600MHz,CDCl3)；
图17化合物2的1H-1H COSY谱(600MHz,CDCl3)；
图18化合物2的NOESY谱(600MHz,CDCl3)；
图19化合物2的ECD谱；
图20化合物2a的1H NMR谱(600MHz,CDCl3)；
图21化合物2a的13C NMR谱(150MHz,CDCL3)；
图22化合物2a的HSQC谱(600MHz,CDCl3)；
图23化合物2a的HMBC谱(600MHz,CDCl3)；
图24化合物2a的NOESY谱(600MHz,CDCl3)；
图25化合物3的UV谱；
图26化合物3的HRESIMS谱；
图27化合物3的1H NMR谱(600MHz,CDCl3)；
图28化合物3的13C NMR谱(150MHz,CDCl3)；
图29化合物3的HSQC谱(600MHz,CDCl3)；
图30化合物3的HMBC谱(600MHz,CDCl3)；
图31化合物3的1H-1H COSY谱(600MHz,CDCl3)；
图32化合物3的NOESY谱(600MHz,CDCl3)；
图33化合物3的ECD谱；
图34化合物4的UV谱；
图35化合物4的HRESIMS谱；
图36化合物4的1H NMR谱(600MHz,CDCl3)；
图37化合物4的13C NMR谱(150MHz,CDCl3)；
图38化合物4的HSQC谱(600MHz,CDCl3)；
图39化合物4的HMBC谱(600MHz,CDCl3)；
图40化合物4的1H-1H COSY谱(600MHz,CDCl3)；
图41化合物4的NOESY谱(600MHz,CDCl3)；
图42化合物4的ECD谱；
图43化合物1-4的实测ECD与计算ECD谱。
具体实施方式
下面所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
臭椿叶中甾体类化合物1-4的制备方法，具体操作如下：
(1)取干燥的臭椿叶50kg，以75％工业乙醇回流提取3次，每次3小时。浓缩提取液得乙醇粗提物4000g，浸膏采用二氯甲烷及正丁醇萃取。
(2)将上述萃取液合并浓缩得浸膏(2500g)，所得浸膏经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇 100:1-1:1(v/v)进行梯度洗脱，共收集到5个流分A-E。
(3)流分C(72g)经HP-20柱色谱以乙醇-水系统20％,40％,60％,80％,90％梯度洗脱，得到了3个流分C1、C2、C3。
(4)将流分C3进一步经ODS柱色谱以甲醇-水系统20:80-90:10(v/v)梯度洗脱得到了4 个流分C.3.1-C3.4。
(5)将流分C3.2(6g)经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇系统50:1-1:1(v/v)进行梯度洗脱，得流分C3.2.1-C3.2.8。
(6)将流分C3.2.2经制备及半制备HPLC以乙腈-水(50:50,v/v,2.5mL/min)纯化得到化合物1(6mg)。流分C3.2.3经以乙腈-水(43:57,v/v,2.5mL/min)纯化得到化合物2(5mg)、化合物3(7.2mg)、化合物4(3mg)。
实施例2
所述臭椿叶中甾体类化合物1-4在体外对癌细胞Hep3B、HepG2的抗肿瘤活性考察。
利用MTT法，考察化合物1-4对肿瘤细胞Hep3B和HepG2的细胞毒活性实验。将细胞放置于96孔板中，用培养液静置培养12小时,使用不同浓度的化合物处理Hep3B和HepG2 细胞，并用索拉非尼做阳性对照组。作用72小时后，加入20μL MTT试剂并在37℃放置4 小时，用酶标仪在490nm波长下对不同浓度处理的细胞进行检测。结果表明，化合物1对 HepG2细胞有显著的细胞毒活性，IC50值为4.03μM，化合物2与化合物4显示出较好的细胞毒活性，对Hep3B细胞的IC50值分别为47.08μM和31.51μM(表3)。
表3细胞毒活性
细胞毒性用3次实验的平均值±SD表示；以索拉非尼为阳性对照。
Claims (9)
1.一种臭椿叶中甾体类化合物，其特征在于，其为如下所示化合物：
。
2.根据权利要求1所述的臭椿叶中甾体类化合物，其特征在于，所述化合物由苦木科臭椿属植物臭椿（Ailanthus altissima (Mill.) Swingle）叶中分离得到。
3.一种权利要求1或2所述臭椿叶中甾体类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）取干燥的臭椿叶以70-80%工业乙醇提取，浓缩提取液得浸膏，浸膏采用二氯甲烷与正丁醇萃取；
（2）将二氯甲烷与正丁醇萃取液浓缩所得浸膏经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇100:1-1:1进行梯度洗脱，共收集到5个流分A-E；
（3）将流分C进一步经HP-20大孔吸附树脂柱色谱以乙醇-水梯度洗脱，得3个流分C1、C2、C3；
（4）将所得流分C3进一步经ODS柱色谱以甲醇-水系统20:80-90:10梯度洗脱得到了4个流分C3.1-C3.4；
（5）将所得流分C3.2经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇系统50:1-1:1进行梯度洗脱，所得流分C3.2.1- C3.2.8；
（6）所得流分C3.2.2经制备与半制备HPLC以乙腈-水45:55-50:50纯化得到化合物1。
4.根据权利要求3所述的臭椿叶中甾体类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述提取为回流提取，提取3-5次，每次2-3小时。
5.根据权利要求3所述的臭椿叶中甾体类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述臭椿叶是指苦木科臭椿属植物臭椿（Ailanthus altissima (Mill.) Swingle）的干燥叶子。
6.根据权利要求3所述的臭椿叶中甾体类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述乙醇-水溶液中，乙醇体积浓度为20%-90%。
7.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述臭椿叶中甾体类化合物或该化合物在药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料和载体。
8.一种权利要求1或2所述臭椿叶中甾体类化合物在制备抗HepG2肿瘤药物中的应用。
9.一种权利要求7所述药物组合物在制备抗HepG2肿瘤药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211135132.6A CN115611963B (zh) | 2022-09-19 | 2022-09-19 | 臭椿叶中甾体类化合物的制备及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211135132.6A CN115611963B (zh) | 2022-09-19 | 2022-09-19 | 臭椿叶中甾体类化合物的制备及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115611963A CN115611963A (zh) | 2023-01-17 |
| CN115611963B true CN115611963B (zh) | 2024-04-26 |
Family
ID=84859248
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211135132.6A Active CN115611963B (zh) | 2022-09-19 | 2022-09-19 | 臭椿叶中甾体类化合物的制备及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115611963B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112079897A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-12-15 | 济南大学 | 两种甾体类化合物及其制备方法和应用 |
| CN112209986A (zh) * | 2020-09-21 | 2021-01-12 | 西北农林科技大学 | 一种甾体类化合物、制备方法及应用 |
-
2022
- 2022-09-19 CN CN202211135132.6A patent/CN115611963B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112079897A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-12-15 | 济南大学 | 两种甾体类化合物及其制备方法和应用 |
| CN112209986A (zh) * | 2020-09-21 | 2021-01-12 | 西北农林科技大学 | 一种甾体类化合物、制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| MICROBIOLOGICAL SYNTHESIS OF 16XETOPREGNANES FROM STEROIDAL SAPOGENINS.Tetrahedron.1973,823-826. * |
| Regio- and stereoselectivity of P450-catalysed hydroxylation of steroids controlled by laboratory evolution.NATURE CHEMISTRY.2011,738-743. * |
| Two novel furostanol saponins from the rhizomes of Dioscorea panthaica Prain et Burkill and their cytotoxic activity.Tetrahedron.2001,501-506. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115611963A (zh) | 2023-01-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lu et al. | Steroidal alkaloid saponins and steroidal saponins from Solanum surattense | |
| CN114031579B (zh) | 芫花花蕾中瑞香烷型二萜类化合物的制备和应用 | |
| Tian et al. | New bufadienolides and C23 steroids from the venom of Bufo bufo gargarizans | |
| CN110627861B (zh) | 一种知母甾体皂苷化合物及其制备方法和应用 | |
| Li et al. | Cytotoxic cardenolides from the stems of Periploca forrestii | |
| Teng et al. | Hebecarposides A− K, antiproliferative lanostane-type triterpene glycosides from the leaves of Lyonia ovalifolia var. hebecarpa | |
| CN110343116B (zh) | 一种野菊花提取物及其制备方法和在制备治疗鼻咽癌药物中的应用 | |
| CN114195641A (zh) | 七元vibsane二萜类化合物及其制备和应用 | |
| Xue et al. | Cardenolide glycosides from root of Streptocaulon juventas | |
| Chen et al. | New cytotoxic 19-norbufadienolide and bufogargarizin isolated from Chan Su | |
| Zou et al. | A cytotoxic saponin from Albizia julibrissin | |
| Liu et al. | Monomeric and dimeric ent-kauranoid-type diterpenoids from rabdosia japonica and their cytotoxicity and anti-HBV activities | |
| Song et al. | Steroid glycosides from the roots of Marsdenia tenacissima | |
| CN111548327B (zh) | 降碳贝壳杉烷型二萜及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途 | |
| CN115611963B (zh) | 臭椿叶中甾体类化合物的制备及应用 | |
| Zhang et al. | Structures and inhibitory activity against breast cancer cells of new bufadienolides from the eggs of toad Bufo bufo gargarizans | |
| Yu-Ze et al. | Five new polyhydroxylated furostanol saponins from the rhizomes of Tupistra chinensis | |
| CN113735918B (zh) | 一种半日花烷型二萜苷化合物及其制备方法 | |
| Jiang et al. | Two new diterpenoid alkaloids from Aconitum palmatum | |
| Yu-Ze et al. | Steroidal constituents from Helleborus thibetanus and their cytotoxicities | |
| CN111303238B (zh) | 甾体皂苷类化合物及其制备方法和医药用途 | |
| Choudhary et al. | Revisiting diterpene lactones of Suregada multiflora | |
| CN109879926B (zh) | 连钱草中的三萜苷类化合物及其提取分离方法 | |
| CN109897084B (zh) | 一种强心苷类化合物及其制备方法与应用 | |
| Liu et al. | Steroidal glycosides from Cynanchum forrestii Schlechter |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |