CN115595351A - 一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用 - Google Patents

一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115595351A
CN115595351A CN202211295259.4A CN202211295259A CN115595351A CN 115595351 A CN115595351 A CN 115595351A CN 202211295259 A CN202211295259 A CN 202211295259A CN 115595351 A CN115595351 A CN 115595351A
Authority
CN
China
Prior art keywords
goose liver
protein peptide
goose
enzymolysis
peptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211295259.4A
Other languages
English (en)
Inventor
郭海港
郭琪
刘凤英
付希亮
仪笑
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Yanwang Food Technology Co ltd
Original Assignee
Shandong Yanwang Food Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Yanwang Food Technology Co ltd filed Critical Shandong Yanwang Food Technology Co ltd
Priority to CN202211295259.4A priority Critical patent/CN115595351A/zh
Publication of CN115595351A publication Critical patent/CN115595351A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
    • A61K36/258—Panax (ginseng)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/81—Solanaceae (Potato family), e.g. tobacco, nightshade, tomato, belladonna, capsicum or jimsonweed
    • A61K36/815—Lycium (desert-thorn)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/896—Liliaceae (Lily family), e.g. daylily, plantain lily, Hyacinth or narcissus
    • A61K36/8969—Polygonatum (Solomon's seal)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明公开了一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用。本发明通过高压蒸煮联合复合脂肪酶脱脂，复合蛋白酶高效酶解，壳聚糖联合活性炭吸附除杂脱色，安全、高效制备蛋白肽，蛋白肽提取率高，制备的蛋白肽蛋白质含量高，脂肪含量低，感官风味优良，而且鹅肝蛋白肽可以显著延长小鼠负重游泳时间，降低血清尿素氮和血乳酸浓度，具有显著的抗疲劳活性，还可以和人参粉、枸杞子粉、黄精粉等天然中药材制备抗疲劳功能产品，具有广阔的应用前景。

Description

一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物加工技术领域，具体涉及一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用。
背景技术
我国是农业大国，畜禽资源非常丰富，鹅肝是一种营养丰富，附加值较高的畜禽加工副产物。鹅肝含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素、磷脂等营养素，还含有人体所需的钙、铁、锌、铜、钾、磷、钠、硒等多种矿质元素，具有增强免疫力、抗氧化、抗衰老、预防肿瘤等多种生理功能。虽然鹅肝资源丰富，营养价值高，但我国鹅肝资源利用率较低，目前我国的鹅肝只有少量被加工成动物饲料、鹅肝酱和直接食用，产品附加值低，其营养价值和经济价值没有得到充分利用，造成大量鹅肝资源尤其是优质蛋白质资源的浪费。
鹅肝虽然营养丰富，蛋白含量高，但由于肝脏蛋白质种类繁多，有水溶性、盐溶性和不溶性蛋白质等，抗原性较强，不易吸收利用等特点，限制了肝脏蛋白资源的开发利用。蛋白肽具有分子量小，易于吸收利用和发挥生理作用，成为蛋白资源开发利用的重要途经。近年来肝脏蛋白及蛋白肽的研究有所报道，例如利用超声波辅助提取鹅肝蛋白质的方法，并对鹅肝蛋白的物化性质和结构进行研究(王怡婷，江苏农业科学，2019，47(18):240-246)。但由于肝脏本身腥味较重，脂肪含量较高，肝脏蛋白结构复杂等原因，现有加工工艺存在以下问题：1)使用有机溶剂脱脂，对生产加工条件要求较高，而且容易存在有机溶剂残留，危害人类健康；2)产品收率低，杂质及脂肪含量较高，感官品质较差。因此迫切需要开发安全、高效的鹅肝蛋白肽制备工艺，实现鹅肝蛋白资源的高值化开发利用。
1982年在第5次国际运动生化学术会议上，将疲劳定义为：机体生理过程不能持续其机能在某一特定的水平和/或不能维持预定的运动强度。按照属性不同可以将疲劳分成运动性疲劳和慢性疲劳。从食物当中寻找抗疲劳活性物质也是当前抗疲劳产品研究的热点之一。研究表明，食源性抗疲劳活性成分主要包括活性肽类、氨基酸类、糖类、维生素、多酚、生物碱、类胡萝卜素以及皂苷类等。鹅肝蛋白肽保留了鹅肝原有的维生素、矿物质等营养元素，可不需消化或稍加消化即可吸收，吸收利用率高，但目前鹅肝蛋白肽的活性研究主要集中在抗氧化活性上，在抗疲劳等方面的研究应用尚未见报道，这严重限制了鹅肝蛋白肽在功能食品中应用。
发明内容
针对现有技术问题，本发明提供了一种鹅肝肽及其制备方法和应用。本发明利用高压蒸煮联合复合脂肪酶脱脂、复合蛋白酶高效酶解、壳聚糖联合活性炭吸附除杂，实现鹅肝蛋白肽高效制备，该产品纯度高，品质优，具有良好的抗疲劳功能。
本发明采用如下技术方案予以实现：
本发明提供了一种鹅肝蛋白肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)取新鲜鹅肝或2～10℃下解冻的冷冻鹅肝，用水清洗去除血水和筋膜，沥干水分得鹅肝；
(2)向步骤(1)的鹅肝中加入1～3倍体积的水，置于高压釜中在0.05～0.08MPa压力下蒸煮5～10分钟，捞出蒸煮后鹅肝，将蒸煮鹅肝匀浆得鹅肝匀浆；
(3)向步骤(2)的鹅肝匀浆中加入3～5倍体积的水，控制温度30～40℃，用碳酸钠调节pH 7.5～8.5，按鹅肝重量的0.2～0.8％加入复合脂肪酶，保温酶解3～4小时，反应结束后在90～100℃保温5～10分钟灭酶，离心收集固形物得脱脂鹅肝；
(4)向步骤(3)的脱脂鹅肝中加入4～10倍体积的水，控制温度45～55℃，调节pH6.5～7.5，按鹅肝重量的0.05～0.2％加入复合蛋白酶，保温酶解4～6小时，反应结束后在90～100℃保温5～10分钟灭酶，得鹅肝酶解液；
(5)向步骤(4)的鹅肝酶解液中加入0.02～0.1％的壳聚糖，控制温度30-35℃，调节pH 4～5，搅拌10-30分钟，静置吸附3-4小时，用卧螺离心机离心分离，收集液体，再用碟式离心机离心分离，去除固相和油相，收集水相得鹅肝蛋白肽原液；
(6)向步骤(5)的鹅肝蛋白肽原液中加入1-2％的活性炭，控制温度60～70℃，调节pH 5～6，吸附1～3小时，过滤除去活性炭，得纯化鹅肝蛋白肽溶液；
(7)将步骤(6)纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液；然后将滤出液在真空度-0.06～-0.08MPa，60℃下减压浓缩至可溶性固形物含量10％～40％，将浓缩液喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(3)中复合脂肪酶由重量比为5～10:1的脂肪酶和磷脂酶组成。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(4)中复合蛋白酶由重量比为1:2～4:0.4～0.6的木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和风味酶按组成。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(4)、步骤(5)、步骤(6)中调节pH所用酸或碱为盐酸、冰乙酸、硝酸、磷酸或氢氧化钠、氢氧化钾。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(5)中壳聚糖为分子量10kDa～100kDa，脱乙酰度大于90％的壳聚糖。
本发明还提供了所述的制备方法制备得到的鹅肝蛋白肽，所述鹅肝蛋白肽的蛋白质含量＞92％，分子量小于1000道尔顿的成分占80％以上，脂肪含量小于0.4％。
本发明还提供了所述的鹅肝蛋白肽在制备抗疲劳产品中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述抗疲劳产品的组分以及其添加量分别为：鹅肝蛋白肽：5％～50％，人参粉：10％～20％，枸杞子粉：5％～15％，黄精粉：1％～5％，牛磺酸：0.01％～0.02％，其余为辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述抗疲劳产品的日常使用剂量为0.5g/kg.bw-2.0g/kg.bw。
在本发明的一种实施方式中，所述鹅肝蛋白肽能够显著延长负重游泳时间，降低血清尿素氮和血乳酸浓度。
与现有技术对比，本发明的优点和有益效果：
1、本发明采用高压蒸煮联合复合脂肪酶可以有效降低鹅肝中的脂肪含量，碳酸钠可以有效中和产生的脂肪酸并有助于油水分离，不仅可以高效脱脂，而且有效避免化学试剂脱脂引起的潜在的食品安全风险，还有利于脂肪资源的回收利用。
2、本发明采用复合蛋白酶高效酶解，壳聚糖联合活性炭吸附除杂脱色，实现高效降解鹅肝蛋白制备鹅肝蛋白肽，酶解液水解度高达28.6％，蛋白提取率高达87.3％，蛋白肽蛋白质含量高达94.2％，肽含量高达86.7％，以3～5肽为主，脂肪含量低至0.02％，是一种优质的蛋白肽，本发明技术安全、高效，可以显著提高蛋白肽提取率和产品质量，生产成本低，适合于工业化生产。
3、本发明制备的鹅肝蛋白肽蛋白质和肽含量高，基本完全保留鹅肝本身营养矿物成分，感官风味优良，可以显著提高小鼠负重游泳时间，降低血清尿素氮和血乳酸浓度，具有显著的抗疲劳活性，在抗疲劳功能产品开发方面具有广阔的应用前景。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，其中：
图1：鹅肝蛋白肽分子量与分子量分布图。
图2：小鼠负重游泳时间；横坐标为实验组，纵坐标为游泳时间(min)。
图3：小鼠血清尿素氮含量；横坐标为实验组，纵坐标为血清尿素氮含量(mmol/L)。
图4：小鼠血乳酸含量；横坐标为实验组，纵坐标为血乳酸含量(mmol/L)。
图5：小鼠肝糖原含量；横坐标为实验组，纵坐标为肝糖原含量(mmol/L)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。如无特别说明，本发明所述浓度均为质量体积浓度。
1.实验材料
冷冻鹅肝，新鲜鹅肝。
脂肪酶(100000U/g)，磷脂酶(100000U/g)，木瓜蛋白酶(200000U/g)，中性蛋白酶(200000U/g)，风味蛋白酶(20000U/g)，壳聚糖(Mw:10kDa、DD:93％；Mw:50kDa、DD:92％；Mw:100kDa，DD:90.2％)，其他试剂、原料均为食品级。
2.检测方法
蛋白质、酸溶性蛋白质(15％三氯乙酸溶解)含量采用凯氏定氮法测定。
氨基酸含量采用氨基酸分析仪测定。
脂肪含量采用索氏抽提法测定。
氨基酸态氮含量采用中性甲醛滴定法测定。
肽含量/％＝(酸溶性蛋白质含量-氨基酸含量)×100％
Figure BDA0003902358220000041
Figure BDA0003902358220000042
分子量及分子量分布采用凝胶渗透色谱法(GPC)测定。以使用TSKgel G2000 SWXL(300mm×7.8mm)色谱柱，流动相为乙腈：水：三氟乙酸＝40：60：0.05；流速为1.00mL/min，柱温：30℃，检测波长220nm，进样体积为10μL，以尿嘧啶(Mw:112.09)，还原型谷胱甘肽(Mw:307.32)，杆菌酶(Mw:1 422.69)，抑肽酶(Mw:6 511.44)，细胞色素C(Mw:12 384)，牛血清白蛋白(Mw:66446)做标准曲线，GPC软件分析测定鹅肝蛋白肽分子量。
实施例1不同酶解工艺条件对制备鹅肝肽的影响
基本工艺：取2～10℃下解冻的冷冻鹅肝100kg，用水清洗去除血水和筋膜，沥干水分；向鹅肝中加入200L水，置于高压釜中在0.05～0.06MPa压力下蒸煮10分钟，捞出蒸煮后鹅肝，用水冲洗干净，然后将蒸煮鹅肝匀浆得鹅肝匀浆。
将鹅肝匀浆转移到1000L反应釜中，加入300L水，控制温度35℃，用碳酸钠调节pH8.0，加入脂肪酶、磷脂酶按重量比8:1组成的复合脂肪酶0.5kg(0.5％)，保温酶解3.5小时，反应结束后在90～100℃保温10分钟灭酶，离心收集固形物得脱脂鹅肝。
向脱脂鹅肝中加入500L水，控制温度50℃，调节pH 7.0，加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味酶按重量比1:3:0.5组成的复合蛋白酶0.1kg(0.1％)，保温酶解5小时，反应结束后在90～100℃保温10分钟灭酶，得鹅肝酶解液。
向鹅肝酶解液中加入分子量(Mw)50kDa，脱乙酰度(DD)92％的壳聚糖0.25kg，控制温度32℃，调节pH 4.5，搅拌20分钟，静置吸附3.5小时，用卧螺离心机在3800r/min离心分离，收集液体，再用三相碟式离心机离心分离，去除固相和油相，收集水相得鹅肝蛋白肽原液。测定鹅肝蛋白肽原水解度。
向鹅肝蛋白肽原液中加入活性炭5kg，控制温度65℃，调节pH 5.5，吸附1.5小时，先用孔径为0.45μm，再用孔径为0.22μm的滤膜过滤除去活性炭，得纯化鹅肝蛋白肽溶液。
将纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液。然后将滤出液在真空度-0.06～-0.08MPa，60℃下减压浓缩至可溶性固形物含量20％左右，控制喷雾干燥机入口温度170～180℃，出口温度：85～90℃，喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。
(1)复合脂肪酶加酶量对制备鹅肝肽的影响
在上述基本工艺的基础上，分别添加质量比0％，0.1％，0.2％，0.4％，0.6％，0.8％，1.0％，1.5％，2.0％的复合脂肪酶(脂肪酶：磷脂酶＝8：1)，其它工艺条件不变，分别测定鹅肝肽产量、提取率、蛋白质含量、脂肪含量等指标，研究不同复合脂肪酶加酶量对制备鹅肝肽的影响。
表1：不同复合脂肪酶加酶量对制备鹅肝肽的影响
加酶量％ 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.5 2.0
产量/kg 8.6 9.7 12.2 12.5 12.7 12.8 11.9 11.5 10.2
提取率/％ 57.3 64.7 81.3 83.3 84.7 85.3 79.3 76.7 68.0
蛋白含量/％ 70.2 85.1 92.1 92.8 93.6 94.0 91.5 89.7 78.2
肽含量/％ 62.5 77.2 81.5 83.2 83.3 85.8 80.2 77.3 69.2
脂肪含量/％ 3.52 1.21 0.12 0.08 0.05 0.02 0.40 0.53 0.89
结果如表1：复合脂肪酶加酶量在0-0.1％浓度范围内，鹅肝蛋白肽提取率较低，蛋白含量、肽含量较低，脂肪含量较高；在0.2-0.8％的浓度范围内，随着加酶量增加，鹅肝肽提取率、蛋白含量、肽含量逐步升高，脂肪含量逐渐降低；继续增加到1％～2％的浓度范围，鹅肝肽的提取率、蛋白含量、肽含量明显降低，脂肪含量稍有增加，可能是过量的复合脂肪酶导致脂肪深度降解、乳化，影响蛋白降解和脂肪去除。综合考虑，选择复合脂肪酶的加酶量为0.2-0.8％。
(2)复合蛋白酶加酶量对制备鹅肝肽的影响
在上述基本工艺的基础上，分别添加质量比0％，0.025％，0.05％，0.1％，0.2％，0.4％，0.8％，1.6％的复合蛋白酶(木瓜蛋白酶：中性蛋白酶：风味酶＝1:3:0.5)，其它工艺条件不变，分别测定鹅肝肽产量、提取率、蛋白质含量、脂肪含量等指标，研究不同复合蛋白酶加酶量对制备鹅肝肽的影响。
表2：不同复合蛋白酶加酶量对制备鹅肝肽的影响
加酶量％ 0 0.025 0.05 0.1 0.2 0.4 0.8 1.6
产量/kg 2.3 8.6 12.1 12.6 13.0 12.7 12.4 12.3
提取率/％ 15.3 57.3 80.7 84.0 86.7 84.7 82.7 82.0
蛋白含量/％ 51.3 79.1 92.2 93.1 93.9 92.5 92.3 92.2
肽含量/％ 40.5 68.2 83.4 85.2 86.3 78.3 72.1 68.5
脂肪含量/％ 0.52 0.35 0.11 0.07 0.06 0.13 0.37 0.32
结果如表2：复合蛋白酶加酶量在0-0.025％浓度范围内，鹅肝肽的提取率较低，蛋白含量、肽含量较低，脂肪含量较低；在0.05-0.2％的浓度范围内，随着加酶量增加，鹅肝肽的提取率、蛋白含量、肽含量逐步升高，脂肪含量较低；继续增加到0.4％～1.6％的浓度范围，鹅肝肽提取率、蛋白含量仍在较高的水平，脂肪含量较低，但肽含量明显降低，可能是过量的复合蛋白酶导致蛋白深度降解，产生大量的氨基酸，导致肽含量降低。综合考虑，选择复合蛋白酶的加酶量为0.05-0.2％。
(3)酶解温度对制备鹅肝肽的影响
在上述基本工艺的基础上，加入质量比1％的复合蛋白酶(木瓜蛋白酶：中性蛋白酶：风味酶＝1:3:0.5)，分别控制酶解温度35℃，40℃，45℃，50℃，55℃，60℃，65℃，其它工艺条件不变，研究不同酶解温度对制备鹅肝肽的影响。
表3：不同酶解温度对制备鹅肝肽的影响
温度/℃ 35 40 45 50 55 60 65
产量/kg 5.3 10.6 12.3 13.2 12.9 9.2 3.2
提取率/％ 35.3 70.7 82.0 88.0 86.0 61.3 21.3
蛋白含量/％ 72.3 82.5 92.4 94.1 93.5 83.7 62.3
肽含量/％ 60.5 73.4 81.9 86.5 84.2 68.3 52.7
脂肪含量/％ 0.32 0.24 0.08 0.03 0.07 0.33 0.39
结果如表3：35～50℃范围内随着温度升高，鹅肝肽的提取率，蛋白含量、肽含量逐步升高，脂肪含量较低，50～65℃范围内随着温度升高，鹅肝肽的提取率，蛋白含量、肽含量逐步降低，脂肪含量较低，最适提取温度为50℃，在45℃～55℃范围内鹅肝肽的提取率，蛋白含量、肽含量均保持在较高的水平，因此，选择反应温度45℃～55℃。
实施例2冷冻鹅肝酶解制备鹅肝蛋白肽
取2～10℃下解冻的冷冻鹅肝100kg，用水清洗去除血水和筋膜，沥干水分；向鹅肝中加入200L水，置于高压釜中在0.05～0.06MPa压力下蒸煮10分钟，捞出蒸煮后鹅肝，用水冲洗干净，然后将蒸煮鹅肝匀浆得鹅肝匀浆80kg左右。
将鹅肝匀浆转移到1000L反应釜中，加入320L水，控制温度34～36℃，用碳酸钠调节pH 8.0，加入脂肪酶、磷脂酶按重量比8:1组成的复合脂肪酶0.5kg，保温酶解4小时，反应结束后在95～100℃保温5分钟灭酶，离心收集固形物得脱脂鹅肝。
向脱脂鹅肝中加入500L水，控制温度49～51℃，调节pH 7.0，加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味酶按重量比1:3:0.5组成的复合蛋白酶0.1kg，保温酶解5小时，反应结束后在95～100℃保温5分钟灭酶，得鹅肝酶解液。
向鹅肝酶解液中加入分子量(Mw)50kDa，脱乙酰度(DD)92％的壳聚糖0.25kg，控制温度31～33℃，调节pH 4.5，搅拌20分钟，静置吸附3.5小时，用卧螺离心机在3800r/min离心分离，收集液体，再用三相碟式离心机离心分离，去除固相和油相，收集水相得鹅肝蛋白肽原液，测定鹅肝蛋白肽原液水解度为28.6％。
向鹅肝蛋白肽原液中加入活性炭6kg，控制温度64～66℃，调节pH 5.5，吸附1.5小时，先用孔径为0.45μm，再用孔径为0.22μm的滤膜过滤除去活性炭，得纯化鹅肝蛋白肽溶液。
将纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液。然后将滤出液在真空度-0.06～-0.08MPa，60～65℃下减压浓缩至可溶性固形物含量20％左右，控制喷雾干燥机入口温度170～180℃，出口温度：85～90℃，喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。
收集鹅肝蛋白肽12.7kg，蛋白提取率84.7％。
实施例3新鲜鹅肝酶解制备鹅肝蛋白肽
取新鲜鹅肝100kg，用水清洗去除血水和筋膜，沥干水分；向鹅肝中加入300L水，置于高压釜中在0.07～0.08MPa压力下蒸煮5分钟，捞出蒸煮后鹅肝，用水冲洗干净，然后将蒸煮鹅肝匀浆得鹅肝匀浆70kg左右。
将鹅肝匀浆转移到1000L反应釜中，加入350L水，控制温度30～32℃，用碳酸钠调节pH 8.5，加入脂肪酶、磷脂酶按重量比10:1组成的复合脂肪酶0.8kg，保温酶解3小时，反应结束后在90～95℃保温10分钟灭酶，过滤收集固形物得脱脂鹅肝。
向脱脂鹅肝中加入600L水，控制温度45～47℃，调节pH 7.5，加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味酶按重量比1:2:0.4组成的复合蛋白酶0.2kg，保温酶解4小时，反应结束后在90～95℃保温10分钟灭酶，得鹅肝酶解液；
向鹅肝酶解液中加入分子量(Mw)10kDa，脱乙酰度(DD)93％的壳聚糖0.12kg，控制温度33～35℃，调节pH 4，搅拌30分钟，静置吸附3小时，用卧螺离心机在4000r/min离心分离，收集液体，再用三相碟式离心机离心分离，去除固相和油相，收集水相得鹅肝蛋白肽原液，测定鹅肝蛋白肽原液水解度为27.5％。
向鹅肝蛋白肽原液中加入活性炭12kg，控制温度68～70℃，调节pH 5.0，吸附1小时，先用孔径1μm的滤膜，再用孔径0.22μm的滤膜过滤除去活性炭，得纯化鹅肝蛋白肽溶液。
将纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液。然后将滤出液在真空度-0.07～-0.09MPa，65～70℃下减压浓缩至可溶性固形物含量35％左右，控制喷雾干燥机入口温度180～190℃，出口温度：90～95℃，喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。
收集鹅肝蛋白肽13.1kg，蛋白提取率87.3％。
实施例4混合鹅肝酶解制备鹅肝蛋白肽
取新鲜鹅肝50kg，2～10℃下解冻的冷冻鹅肝50kg，共100kg，用水清洗去除血水和筋膜，沥干水分；向鹅肝中加入100L水，置于高压釜中在0.06～0.07MPa压力下蒸煮8分钟，捞出蒸煮后鹅肝，用水冲洗干净，然后将蒸煮鹅肝匀浆得鹅肝匀浆75kg左右。
将鹅肝匀浆转移到1000L反应釜中，加入250L水，控制温度38～40℃，用碳酸钠调节pH 7.5，加入脂肪酶、磷脂酶按重量比5:1组成的复合脂肪酶0.25kg，保温酶解3小时，反应结束后在93～98℃保温10分钟灭酶，过滤收集固形物得脱脂鹅肝。
向脱脂鹅肝中加入400L水，控制温度53～55℃，调节pH 6.5，加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味酶按重量比1:4:0.6组成的复合蛋白酶0.05kg，保温酶解6小时，反应结束后在93～98℃保温10分钟灭酶，得鹅肝酶解液。
向鹅肝酶解液中加入分子量(Mw)100kDa，脱乙酰度(DD)90.2％的壳聚糖0.4kg，控制温度30～32℃，调节pH 5，搅拌10分钟，静置吸附4小时，用卧螺离心机在3600r/min离心分离，收集液体，再用三相碟式离心机离心分离，去除固相和油相，收集水相得鹅肝蛋白肽原液，测定鹅肝蛋白肽原液水解度为26.8％。
向鹅肝蛋白肽原液中加入活性炭4kg，控制温度60～62℃，调节pH 6.0，吸附2小时，先用孔径0.8μm，再用孔径0.22μm的滤膜过滤除去活性炭，得纯化鹅肝蛋白肽溶液。
将纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液；然后将滤出液用截留分子量200的纳滤膜纳滤，至可溶性固形物含量15％左右，控制喷雾干燥机入口温度185～185℃，出口温度：85～95℃，喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。
收集鹅肝蛋白肽12.2kg，蛋白提取率81.3％。
对比例1
取2～10℃下解冻的冷冻鹅肝100kg，用水清洗去除血水和筋膜，沥干水分；向鹅肝中加入200L水，置于高压釜中在0.05～0.06MPa压力下蒸煮10分钟，捞出蒸煮后鹅肝，用水冲洗干净，然后将蒸煮鹅肝匀浆得鹅肝匀浆80kg左右。
向鹅肝匀浆中加入500L水，控制温度49～51℃，调节pH 7.0，加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味酶按重量比1:3:0.5组成的复合蛋白酶0.1kg，保温酶解5小时，反应结束后在95～100℃保温5分钟灭酶，得鹅肝酶解液。
向鹅肝酶解液中加入分子量(Mw)50kDa，脱乙酰度(DD)92％的壳聚糖0.25kg，控制温度31～33℃，调节pH 4.5，搅拌20分钟，静置吸附3.5小时，用卧螺离心机在3800r/min离心分离，收集液体，再用三相碟式离心机离心分离，去除固相和油相，收集水相得鹅肝蛋白肽原液，测定鹅肝蛋白肽原液水解度为20.5％。
向鹅肝蛋白肽原液中加入活性炭6kg，控制温度64～66℃，调节pH 5.5，吸附1.5小时，先用孔径为0.45μm，再用孔径为0.22μm的滤膜过滤除去活性炭，得纯化鹅肝蛋白肽溶液。
将纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液。然后将滤出液在真空度-0.06～-0.08MPa，60～65℃下减压浓缩至可溶性固形物含量20％左右，控制喷雾干燥机入口温度170～180℃，出口温度：85～90℃，喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。
收集鹅肝蛋白肽8.4kg，蛋白提取率56％，提取率较低。
对比例2
取2～10℃下解冻的冷冻鹅肝100kg，用水清洗去除血水和筋膜，沥干水分；向鹅肝中加入200L水，置于高压釜中在0.05～0.06MPa压力下蒸煮10分钟，捞出蒸煮后鹅肝，用水冲洗干净，然后将蒸煮鹅肝匀浆得鹅肝匀浆80kg左右。
将鹅肝匀浆转移到1000L反应釜中，加入320L水，控制温度34～36℃，用碳酸钠调节pH 8.0，加入脂肪酶、磷脂酶按重量比8:1组成的复合脂肪酶0.5kg，保温酶解4小时，反应结束后在95～100℃保温5分钟灭酶，离心收集固形物得脱脂鹅肝。
向脱脂鹅肝中加入500L水，控制温度49～51℃，调节pH 7.0，加入胰酶0.1kg，保温酶解5小时，反应结束后在95～100℃保温5分钟灭酶，得鹅肝酶解液。
向鹅肝酶解液中加入分子量(Mw)50kDa，脱乙酰度(DD)92％的壳聚糖0.25kg，控制温度31～33℃，调节pH 4.5，搅拌20分钟，静置吸附3.5小时，用卧螺离心机在3800r/min离心分离，收集液体，再用三相碟式离心机离心分离，去除固相和油相，收集水相得鹅肝蛋白肽原液，测定鹅肝蛋白肽原液水解度为17.3％。
向鹅肝蛋白肽原液中加入活性炭6kg，控制温度64～66℃，调节pH 5.5，吸附1.5小时，先用孔径为0.45μm，再用孔径为0.22μm的滤膜过滤除去活性炭，得纯化鹅肝蛋白肽溶液。
将纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液。然后将滤出液在真空度-0.06～-0.08MPa，60～65℃下减压浓缩至可溶性固形物含量20％左右，控制喷雾干燥机入口温度170～180℃，出口温度：85～90℃，喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。
收集鹅肝蛋白肽10.7kg，蛋白提取率71.3％，提取率低。
对比例3
取2～10℃下解冻的冷冻鹅肝100kg，用水清洗去除血水和筋膜，沥干水分；向鹅肝中加入200L水，置于高压釜中在0.05～0.06MPa压力下蒸煮10分钟，捞出蒸煮后鹅肝，用水冲洗干净，然后将蒸煮鹅肝匀浆得鹅肝匀浆80kg左右。
将鹅肝匀浆转移到1000L反应釜中，加入320L水，控制温度34～36℃，用碳酸钠调节pH 8.0，加入脂肪酶、磷脂酶按重量比8:1组成的复合脂肪酶0.5kg，保温酶解4小时，反应结束后在95～100℃保温5分钟灭酶，离心收集固形物得脱脂鹅肝。
向脱脂鹅肝中加入500L水，控制温度49～51℃，调节pH 7.0，加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味酶按重量比1:3:0.5组成的复合蛋白酶0.1kg，保温酶解5小时，反应结束后在95～100℃保温5分钟灭酶，得鹅肝酶解液。
将鹅肝酶解液用卧螺离心机在3800r/min离心分离，收集液体，再用三相碟式离心机离心分离，去除固相和油相，收集水相得鹅肝蛋白肽原液，测定鹅肝蛋白肽原液水解度为26.1％。
向鹅肝蛋白肽原液中加入活性炭6kg，控制温度64～66℃，调节pH 5.5，吸附1.5小时，先用孔径为0.45μm，再用孔径为0.22μm的滤膜过滤除去活性炭，得纯化鹅肝蛋白肽溶液。
将纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液。然后将滤出液在真空度-0.06～-0.08MPa，60～65℃下减压浓缩至可溶性固形物含量20％左右，控制喷雾干燥机入口温度170～180℃，出口温度：85～90℃，喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。收集鹅肝蛋白肽13.4kg，蛋白提取率89.3％。
实施例5鹅肝蛋白肽工艺质量研究
将实施例2，实施例3，实施例4，对比例1，对比例2，对比例3制备的鹅肝蛋白肽产品的感官风味、蛋白质、肽含量、分子量、脂肪含量等按照检测方法进行检测。
表4：鹅肝蛋白肽质量指标
Figure BDA0003902358220000121
结果见表4，实施例2、实施例3、实施例4的制备工艺可以高效降解鹅肝制备鹅肝蛋白肽。高压蒸煮初步脱脂，复合脂肪酶可以高效降解鹅肝脂肪和磷脂，碳酸钠不仅可以有效中和产生的脂肪酸，而且反应产生的CO2气泡利于油水分离，实现有效脱脂，可以降低脂肪对工艺和产品质量的影响，提高蛋白降解率，利于蛋白肽的分离纯化，制备的产品脂肪含量均低于0.15％，最低仅为0.02％，而且有助于提高脂肪的回收利用率。与实施例2相比，仅通过高压蒸煮未经过复合脂肪酶脱脂的对比例1，由于未能有效脱脂，导致蛋白提取率明显降低，蛋白质含量和肽含量显著低于实施例1，脂肪含量较高，影响产品感官品质。
实施例2、实施例3、实施例4的制备工艺采用的复合蛋白酶在有效脱脂的条件下可以高效降解鹅肝蛋白制备鹅肝蛋白肽，酶解液水解度较高，均大于25％，最高达28.6％，蛋白提取率高，均大于80％，最高为87.3％；制备的鹅肝蛋白肽蛋白质含量均大于92％，肽含量均大于80％，蛋白质和肽含量最高分别为94.2％和86.7％；实施例2、实施例3、实施例4制备的鹅肝蛋白肽重均分子量均低于800Da，相对分子量低于1000Da的蛋白肽占比均大于80％。
实施例2制备的鹅肝蛋白肽分子量与分子量分布见图1，数据结果见表5，由图1和表5可知，鹅肝蛋白肽分子量为665Da，相对分子量低于1000Da的蛋白肽占比为82.4％，以3～5聚合度的寡肽为主，研究表明寡肽可以不经过消化或初步消化即可被肠道吸收，且吸收速率高于游离氨基酸，具有更高的营养价值和潜在的生物活性。与实施例2相比，仅通过等量胰酶降解鹅肝蛋白制备鹅肝蛋白肽的对比例2，蛋白提取率有所降低，水解度仅为17.3％，制备的鹅肝蛋白肽蛋白质含量与肽含量也同步降低，结果表明本发明的复合蛋白酶降解鹅蛋白制备肝蛋白肽明显优于胰酶，可能是由于鹅肝蛋白结构复杂，组成多样，复合蛋白酶具有更多的酶切位点，可以有效降解鹅肝蛋白，避免单酶由于酶切位点单一导致的降解不充分，影响蛋白肽收率和含量。
表5：鹅肝蛋白肽分子量与分子量分布
Figure BDA0003902358220000131
实施例2、实施例3、实施例4的制备工艺在有效脱脂的条件下采用复合蛋白酶可以高效降解鹅肝蛋白制备鹅肝蛋白肽，蛋白提取率高，采用壳聚糖络合大分子，有效吸附未降解大分子蛋白质，提高产品低分子蛋白肽含量，澄清酶解液，利于固相、水相和油相的分离，有益于产品的分离纯化，壳聚糖络合结合活性炭吸附，可以有效脱色、脱味，显著改善产品品质。与实施例2相比，未采用壳聚糖络合大分子蛋白质的对比例3，虽然蛋白提取率和蛋白质含量变高，但肽含量较低(74.6％)，分子量较大，相对分子量小于1000Da的蛋白肽所占比例较低(61.2％)，且由于酶解液澄清度较低，固相、水相和油相分离效果较差，产品脂肪含量较高(0.45％)，影响产品品质。
综上分析，本发明通过高压蒸煮联合复合脂肪酶脱脂，复合蛋白酶高效酶解，壳聚糖联合活性炭吸附除杂，可以高效降解鹅肝制备鹅肝蛋白肽蛋白提取率高，产品蛋白质和肽含量高，分子量与分子量分布合理，产品感官风味优良，是一种优良的蛋白肽资源，而且可以有效避免化学试剂脱脂引起的潜在的食品安全风险。与现有技术相比，本发明技术安全、高效，可以显著改善蛋白肽得率和品质，具有明显的技术优势。
实施例6鹅肝蛋白肽在抗疲劳功能产品中的应用
本发明提供的鹅肝蛋白肽抗疲劳功能产品以鹅肝蛋白肽、西洋参粉、枸杞子粉、牛磺酸为主要原料，各主要原料添加量分别为：鹅肝蛋白肽：5％～50％，人参粉：10％～20％，枸杞子粉：5％～15％，黄精粉：1％～5％；牛磺酸：0.01％～0.02％。辅料为柠檬酸、三氯蔗糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、硬脂酸镁、微晶纤维素、二氧化硅、淀粉、麦芽糊精等常用的润滑剂、助流剂、稀释剂，制备不同剂型的产品，产品剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂，具体见表6。
表6：鹅肝蛋白肽抗疲劳功能产品
产品序号 鹅肝蛋白肽％ 人参粉％ 枸杞子粉％ 黄精粉％ 牛磺酸％ 辅料％ 剂型
产品1 25 15 10 3 0.015 47 粉剂
产品2 45 12 12 2 0.018 29 粉剂
产品3 40 10 15 1 0.02 34 颗粒剂
产品4 30 17 8 4 0.016 41 颗粒剂
产品5 50 20 5 5 0.01 20 胶囊剂
产品6 15 15 15 3 0.02 52 胶囊剂
产品7 5 20 15 2 0.012 58 片剂
产品8 20 18 8 4 0.018 50 片剂
实施例7鹅肝蛋白肽的抗疲劳活性研究
1.实验材料
1.1实验动物
SPF级雄性昆明小鼠，体重18-22g；数量：192只，其中96只用于负重游泳实验(12只/组*8组)，96只用于生化指标测定(12只/组*8组)。
1.2实验样品及浓度
实验样品：
鹅肝蛋白肽(实施例2)，鹅肝蛋白肽产品(实施例6产品1)，西洋参粉(阳性对照)。
样品浓度：
低剂量组：0.5g/kg.bw，中剂量组：1.0g/kg.bw，高剂量组：2.0g/kg.bw；
阳性对照：0.6mg/kg.bw。
1.3实验分组
空白对照组(NC)：蒸馏水；阳性对照组(PC)：人参粉；
鹅肝蛋白肽低剂量组(SL)，鹅肝蛋白肽中剂量组(SM)，鹅肝蛋白肽高剂量组(SH)；
蛋白肽产品低剂量组(PL)，蛋白肽产品中剂量组(PM)，蛋白肽产品高剂量组(PH)。
2.小鼠饲喂
保持动物房室温20-25℃，湿度40-70％，换气次数为10-20次/小时，光照12小时明暗交替。每笼6只小鼠，自由饮食，喂养鼠标准基础饲料，饮水瓶随时更换。将192只雄性昆明小鼠预饲喂小鼠标准基础饲料3天，3天后按照体重平均原则选择体重适宜的小鼠平均分为8组，包括空白对照组，阳性对照组鹅肝蛋白肽低剂量组(SL)，鹅肝蛋白肽中剂量组(SM)，鹅肝蛋白肽高剂量组(SH)，蛋白肽产品低剂量组(PL)，蛋白肽产品中剂量组(PM)，蛋白肽产品高剂量组(PH)，每组24只小鼠，其中每组12只用于负重游泳，12只用于生化指标检测，其中空白对照组为蒸馏水，阳性对照组为100mg/kg.bw的西洋参粉，样品低、中、高剂量组分别为0.5g/kg.bw、1g/kg.bw和2g/kg.bw，每天灌胃1次，每10天测定小鼠体重，饲喂时间30天。
3.负重游泳实验
末次给予受试样品30min后，将尾部负荷5％体重铅皮(尾部1/3—2/3)的小鼠置于游泳箱中游泳，游泳箱水深不少于30cm，保持水温在25℃±1.0℃，自由游泳，过程中使小鼠四肢保持不断运动，以小鼠头部沉入水面持续8s不能浮出为判定终点，记录小鼠从开始游泳到死亡的时间即小鼠力竭游泳时间。
4.血清尿酸氮、血乳酸和肝糖原含量测定
末次给予受试样品30min后，小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于30cm，水温30℃±1.0℃，游泳30min后，吹风机吹干，麻醉后眼球取全血，离心取血清，分别用血清尿素氮试剂盒、血乳酸试剂盒测定血清中尿素氮、乳酸含量；取小鼠肝脏，用糖原测定试试剂盒测定肝糖原含量。
5.实验结果与分析
5.1体重
小鼠体重的变化反映样品对小鼠健康状况的影响，小鼠体重增加或者减少过快，都不利于其健康。实验期间小鼠体重情况见表7。组内小鼠体重数据变化表明：随着喂养时间的延长，小鼠体重逐渐增加，所有样品组在灌胃初始10天，小鼠体重增加较快，后续20天体重随着喂养时间增加较慢；组间小鼠体重数据变化表明：初始各组体重基本相似，没有明显差异；随着喂养时间延长，在相同时间点各实验组体重略高于对照组，但无显著差异。观察小鼠行为特征，未发现异常或死亡现象，结果表明试验样品对小鼠无毒副作用，对小鼠体重无明显影响。
表7：小鼠体重
Figure BDA0003902358220000161
5.2负重游泳时间
疲劳的最主要表现是运动耐力的下降，运动耐力是反映机体疲劳最直接、最客观的指标。负重游泳实验能够直观的反应机体的运动耐力，被广泛应用于动物模型中评价新型化合物的抗疲劳特性。负重游泳时间越长，表明实验动物运动耐力越好，样品抗疲劳作用越明显。负重游泳实验结果见表8和图2，空白对照组游泳时间为8.51±1.51min，阳性对照组游泳时间为11.80±2.60min，与空白对照组有极显著差异(P＜0.01)；鹅肝蛋白肽样品随着浓度增高，游泳时间先增加后降低，样品浓度为0.5g/kg.bw的低剂量组游泳时间为9.32±1.99min，与空白对照组无显著差异(P＞0.05)，样品浓度为1g/kg.bw的中剂量组游泳时间最长，为11.12±3.22min，与空白对照组有显著差异(P＜0.05)，样品浓度为2g/kg.bw高剂量组比中剂量组时间有所降低，为10.31±2.11min，但与空白对照组也有显著差异(P＜0.05)。
不同浓度的蛋白肽产品均可以显著延长小鼠游泳时间，其中低剂量组和高剂量组游泳时间基本一致，均与空白对照组有显著差异(P＜0.05)，中剂量组游泳时间最长，为11.54±2.14min，与空白对照组有极显著差异(P＜0.01)。
综上所述，鹅肝蛋白肽和蛋白肽产品均可以显著延长小鼠负重游泳时间，均在中剂量组延长游泳时间最明显，具有良好的抗疲劳潜力。
表8：负重游泳时间
实验组 游泳时间(min) 显著性
NC 8.51±1.51
PC 11.80±2.60 **
SL 9.32±1.99
SM 11.12±3.22 *
SH 10.31±2.11 *
PL 10.54±2.03 *
PM 11.54±2.14 **
PH 10.65±2.18 *
*：与空白对照组有显著差异，P＜0.05；**：与空白对照组有极显著差异，P＜0.01。
5.3生化指标测定
血尿素氮：正常生理状态下，血尿素的生成和排泄是处于平衡状态，当剧烈运动之后，机体长时间不能通过糖、脂肪和蛋白质分解代谢获得足够的能力时，血尿素水平会明显增加，血尿素氮的含量直接代表了血尿素的水平。因此，血尿素氮可以评定运动负荷量的大小，体内血尿素氮水平和运动耐受力呈显著负相关，即血尿素氮水平越低，其运动耐受力越好。血乳酸：剧烈运动时，机体相对缺氧，糖酵解加快，产生大量乳酸，使肌肉中H+浓度上升，pH值下降导致疲劳。乳酸在体内的积累取决于乳酸的产生与消除速度。因此减少乳酸的产生或加快乳酸的消除，都可延缓疲劳发生和/或加速疲劳的消除。血乳酸水平可以反映有氧代谢能力、疲劳的产生和消除速度。肝糖原：长时间紧张运动中体力的衰竭总是和肌糖原的耗竭同时发生，当剧烈运动时，机体血糖不足，肝糖原会分解为葡萄糖，转化为能量，维持血糖水平以满足机体需要。因此糖原含量的高低能说明疲劳发生的程度，通常肝糖原的含量高低受运动强度的影响，机体内肝糖原含量越高，其运动耐受力越强，在机体剧烈运动消耗能量的情况下，及时为机体供能以维持血糖水平，延缓疲劳发生。反之，若肝糖原被大量消耗时，疲劳便会发生。因此，血清尿酸氮、血乳酸、肝糖原含量是衡量机体运动耐受力，抗疲劳的重要指标，本发明研究了鹅肝蛋白肽和蛋白肽产品对小鼠血清尿酸氮、血乳酸、肝糖原含量的影响，具体实验数据见表9。
表9：生化指标
Figure BDA0003902358220000181
*：与空白对照组有显著差异，P＜0.05；**：与空白对照组有极显著差异，P＜0.01。
由表9和图3-5可知，血清尿素氮：空白对照组血清尿素氮浓度为13.42±1.82mmol/L，阳性对照组血清尿素氮浓度为11.65±0.92mmol/L，与空白对照组有极显著差异(P＜0.01)；随着鹅肝蛋白肽浓度增高，血清尿素氮浓度先降低后升高，低剂量组血清尿素氮浓度与空白对照组无显著差异(P＞0.05)，中剂量组血清尿素氮浓度为11.70±1.51mmol/L，高剂量组血清尿素氮浓度为12.03±1.54mmol/L，与空白对照组均有显著差异(P＜0.05)。不同浓度的蛋白肽产品均可以显著降低小鼠血清尿素氮浓度，低剂量组和高剂量与空白对照组有显著差异(P＜0.05)，中剂量组血清尿素氮浓度最低，为11.36±1.71mmol/L，与空白对照组有极显著差异(P＜0.01)。上述结果表明鹅肝蛋白肽和蛋白肽产品均表现出显著的降低血清尿酸氮活性。
血乳酸：空白对照组血乳酸浓度为6.88±0.90mmol/L，阳性对照组血乳酸为5.74±0.52mmol/L，与空白对照组有极显著差异(P＜0.01)；随着鹅肝蛋白肽浓度增高，血乳酸浓度先降低后升高，低剂量组血乳酸浓度为6.46±0.73mmol/L，与空白对照组无显著差异(P＞0.05)，中剂量组血乳酸浓度最低，为5.83±1.04mmol/L，高剂量组血乳酸浓度稍有升高，为6.03±0.82mmol/L，与空白对照组均有显著差异(P＜0.05)。不同浓度的蛋白肽产品均可以显著降低小鼠血乳酸浓度，低剂量组和高剂量血乳酸浓度分别为5.94±0.99mmol/L和5.88±0.96mmol/L，与空白对照组有显著差异(P＜0.05)，中剂量组血乳酸浓度最低，为5.72±0.89mmol/L，与空白对照组有极显著差异(P＜0.01)。上述结果表明鹅肝蛋白肽和蛋白肽产品均表现出显著的降低血乳酸活性。
肝糖原：空白对照组肝糖原浓度为673.29±83.33mg/g，阳性对照组肝糖原浓度为688.32±86.34mg/g，与空白对照组无显著差异(P＜0.05)，表明阳性对照西洋参不能提高小鼠肝糖原含量；不同浓度的鹅肝蛋白肽均不能提高肝糖原含量。不同浓度的蛋白肽产品均可以显著提高肝糖原含量，低剂量组肝糖原含量为756.13±76.48mg/g，与空白对照组有显著差异(P＜0.05)，中、高剂量组肝糖原含量分别为924.89±120.27mg/g、797.43±110.35，与空白对照组有极显著差异(P＜0.01)。上述结果表明鹅肝蛋白肽不能提高肝糖原含量，蛋白肽产品均能显著的提高肝糖原含量。
参照《保健食品检验与评价技术规范》，鹅肝蛋白肽可以显著提高小鼠游泳时间，显著降低血清尿素氮和血乳酸浓度，具有的抗疲劳功能；蛋白肽产品可以显著提高小鼠游泳时间，显著降低血清尿素氮和血乳酸浓度，提高肝糖原含量，具有显著的抗疲劳活性。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所表述的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种鹅肝蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)取鹅肝清洗后，去除血水和筋膜，沥干；
(2)向步骤(1)的鹅肝中加入水，高压下蒸煮，匀浆得鹅肝匀浆；
(3)向步骤(2)的鹅肝匀浆中加水后，加入复合脂肪酶酶解，高温灭酶，离心收集固形物得脱脂鹅肝；
(4)向步骤(3)的脱脂鹅肝中加水后，加入复合蛋白酶酶解，高温灭酶得鹅肝酶解液；
(5)向步骤(4)的鹅肝酶解液中加入壳聚糖，调节pH至弱酸性，搅匀、静置吸附，离心收集液体，再离心收集水相得鹅肝蛋白肽原液；
(6)向步骤(5)的鹅肝蛋白肽原液中加入活性炭，吸附过滤得纯化鹅肝蛋白肽溶液；
(7)将步骤(6)的纯化鹅肝蛋白肽溶液超滤，收集滤出液后，浓缩、干燥得鹅肝蛋白肽。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中复合脂肪酶由重量比为5～10:1的脂肪酶和磷脂酶组成，其添加量为鹅肝重量的0.2％～0.8％；酶解温度为30℃～40℃，酶解pH为7.5～8.5，酶解时间为3～4小时。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中复合蛋白酶由重量比为1:2～4:0.4～0.6的木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和风味酶按组成，其添加量为鹅肝重量的0.05％～0.2％；酶解温度为45℃～55℃，酶解pH为6.5～7.5，酶解时间为4～6小时。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中壳聚糖为分子量10kDa～100kDa、脱乙酰度大于90％的壳聚糖，其添加量为鹅肝酶解液重量的0.02％～0.1％；反应温度为30℃～35℃，pH为4.0～5.0。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中活性炭的添加量为鹅肝蛋白肽原液重量的1％-2％；吸附温度为60℃～70℃，pH为5.0～6.0，时间为1～3小时。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(7)中纯化鹅肝蛋白肽溶液用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液，然后将滤出液在真空度-0.06～-0.08MPa，60℃下减压浓缩至可溶性固形物含量10％～40％，喷雾干燥得鹅肝蛋白肽。
7.权利要求1-6任一项所述的制备方法制备得到的鹅肝蛋白肽，其特征在于：所述鹅肝蛋白肽的蛋白质含量＞92％，分子量小于1000道尔顿的成分占80％以上，脂肪含量小于0.4％。
8.权利要求7所述的鹅肝蛋白肽在制备抗疲劳产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述抗疲劳产品的组分及其添加量分别为：鹅肝蛋白肽：5％～50％，人参粉：10％～20％，枸杞子粉：5％～15％，黄精粉：1％～5％，牛磺酸：0.01％～0.02％，其余为辅料。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述抗疲劳产品的日常使用剂量为0.5g/kg.bw-2.0g/kg.bw。
CN202211295259.4A 2022-10-21 2022-10-21 一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用 Pending CN115595351A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211295259.4A CN115595351A (zh) 2022-10-21 2022-10-21 一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211295259.4A CN115595351A (zh) 2022-10-21 2022-10-21 一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115595351A true CN115595351A (zh) 2023-01-13

Family

ID=84849201

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211295259.4A Pending CN115595351A (zh) 2022-10-21 2022-10-21 一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115595351A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117363679A (zh) * 2023-10-11 2024-01-09 中国海洋大学 一种河豚鱼精巢蛋白肽及其应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117363679A (zh) * 2023-10-11 2024-01-09 中国海洋大学 一种河豚鱼精巢蛋白肽及其应用
CN117363679B (zh) * 2023-10-11 2024-03-26 中国海洋大学 一种河豚鱼精巢蛋白肽及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101487542B1 (ko) 면역 증강용 인삼 다당체 제조방법 및 이 제조방법에 의해 제조된 면역 증강용 인삼 다당체
CN108853486B (zh) 一种具有增强免疫力功能的配方产品
Loman et al. Soybean bio-refinery platform: enzymatic process for production of soy protein concentrate, soy protein isolate and fermentable sugar syrup
CN115595351A (zh) 一种鹅肝蛋白肽及其制备方法和应用
CN1108109C (zh) 一种提取大豆分离蛋白的工艺
CN110772630A (zh) 活化胰岛素受体及调控血糖的复合苦瓜肽口服液及制备方法
EP3537886B1 (en) A method for the manufacture of a processed soy protein product
US7465467B2 (en) Process for the extraction, purification and enzymatic modification of soy 7S globulin α' subunit for use as hypocholesterolemizing agent
AU2003208346A1 (en) A process for the extraction, purification and enzymatic modification of soy 7S globulin alpha' subunit for use as hypocholesterolemizing agent
JP4368569B2 (ja) 腎機能低下の予防剤及び改善剤
CN113943769B (zh) 一种糯米糠蛋白、多肽及可溶性膳食纤维的联产提取方法
CN1054353A (zh) 纯麦精的生产方法
CN1864545A (zh) 青稞sod的制备以及含青稞sod的调理食品
CN113768028A (zh) 一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法及其应用
CN111802505A (zh) 一种产业化鲍鱼肽的提取方法
CN111264677A (zh) 一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用
CN115057921B (zh) 一种灰海马抗氧化抗疲劳活性胶原蛋白肽及规模化制备方法
EP4342477A1 (en) Immunostimulator and glucan composition production method
US20240226135A1 (en) Immunostimulator and method of producing glucan composition
CN1127913C (zh) 一种调节免疫功能的营养保健品
CN113637719A (zh) 一种鸡血白蛋白低聚肽及其制备方法
KR20070063112A (ko) 2차 담즙산염 흡착능을 가지는 황산화다당 분획물 및 그제조방법
CN117486971A (zh) 一种抗氧化肽、核桃肽及其制备方法和应用
CN116751256A (zh) 一种源自翅果油树种仁油粕的多肽及辅助抗炎抗氧化组合物
CN115786434A (zh) 一种鸽肉抗氧化肽与抗疲劳肽及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination