CN115524424B - 一种荠菜样品质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及了一种荠菜样品质量控制方法，该方法包括构建荠菜样品UPLC特征图谱和/或指标成分含量测定。本发明的方法经过方法学验证，重现性、稳定性好，回收率可靠，检测成本低，检测效率高，而且适用面广，不仅适用于荠菜药材，还适用于柿蒂饮片、制剂中间体、制剂成品尤其是荠菜配方颗粒等的质量控制，为规范荠菜的生产提供了重要保障。
Description
技术领域
本发明涉及中药分析和中药质量控制领域，具体涉及一种荠菜样品质量控制方法。
背景技术
荠菜为十字花科植物荠菜Capsella bursa-pastoris(L.)Medic.的干燥全草。别名荠菜花、荠荠菜，始载于《名医别录》，列入上品。其味甘、淡；性凉；具清热利湿，平肝明目，凉血止血，和胃消滞之功效(江苏省食品药品监督管理局.江苏省中药材标准[S].江苏凤凰科学技术出版社,2016:390-393)。主要含有氨基酸类(许瑞波，王明艳，史继斌，等.荠菜中混合氨基酸的提取工艺研究[J].食品科学，2004，(08):16—18)、有机酸类(潘明，王世宽，刘慧杰，等.超声波强化提取荠菜中有机酸的研究[J].时珍国医国药，2009，20(2):313－314)、黄酮类、糖类、无机物等化学成分。
现代药理作用与临床应用研究表明，荠菜有抗炎(岳兴如，陈耀，赵烨，等.荠菜抗炎止血药理作用研究[J].时珍国医国药，2007，18(04):871)，降血压(TobiasWeinberg.Medical shock following intravenous therapy with neoarsphenamine[J].Am.J.Syphilis，Gonorrhea，Venereal Diseases.1937，21:376-385；丛玲，许永喜，王晓燕.荠菜代茶饮治疗高血压60例[J].护理研究，2005，19(8):151)、抑制2型糖尿病血管损伤的作用(刘思妤,李懿,黄甜,et al.荠菜提取物抑制2型糖尿病小鼠血管损伤的作用研究[J].湘南学院学报(医学版),2021年23卷1期,1-7页,2021:湖南省双一流应用特色学科药学学科项目.)
关于荠菜的质量控制手段目前已有部分报道。曹小燕采用超声辅助提取荠菜多酚，作为质量控制指标成分(曹小燕,杨海涛.响应面法优化超声辅助提取荠菜多酚工艺及其抗氧活性研究[J].食品工业科技,2019(2):7.)。刘亚倩等人采用UV法测定总黄酮的质量分数，通过超声辅助法进行提取，以铝盐显色法测定样品吸光度，以芦丁为标准溶液计算荠菜中总黄酮的质量分数(刘亚倩，魏华，李贵，贺建武，陈韬，张源，周雰.荠菜总黄酮质量分数测定及超声提取工艺优化[J].吉首大学学报(自然科学版)，2016，37(01):74-79)。王荣荣等对荠菜生长过程中2″-O-α-L-阿拉伯糖异荭草苷含量变化进行了测定，确定该成分在生长过程中的变化规律及其在不同药用部位中的分布规律(王荣荣,宋宁,刘晓秋.荠菜中黄酮类成分的积累变化研究[J].中国民族民间医药,2013,22(09):14-15)。荆云等人采用硫酸-苯酚法，利用分光光度计测定荠菜中的多糖，借此得到荠菜多糖最佳提取工艺条件(荆云,卢慧娟,薛金涛,李鹏.超微粉碎联合超声辅助法提取荠菜多糖工艺研究[J].食品研究与开发,2018,39(14):30-34)。田静等人以芦丁为对照品，采用高效液相色谱法，以甲醇-1％冰醋酸为流动相，在257nm波长下测定荠菜中芦丁的含量(田静，张璐，房克慧.HPLC法测定荠菜中芦丁的含量[J].海峡药学，2014，26(12):53-55.)。
荠菜目前还未收录于2020年版中国药典，虽然有文献对荠菜药材的质量控制进行了部分研究，但都未建立全面、有效、系统的质量评价方法及标准。定性方面，多用薄层鉴别方法，受人为因素、薄层板、温湿度影响较大，方法重现性可能存在问题，目前暂未发现有人对荠菜进行特征图谱研究；定量方面，主要以多酚类，黄酮类，糖类等大类成分为指标，以紫外分光光度计为检测手段，其专属性较差，操作复杂。此外，已有的文献资料表明荠菜的质量控制研究主要是集中在药材上，对于荠菜饮片、荠菜配方颗粒质量控制的研究暂未检索到。因此制定能够全面、快速控制荠菜样品的质量控制方法是目前急需解决的问题。
发明内容
发明要解决的问题
为了解决现有技术的上述技术问题，本发明提供了一种重现性、稳定性好，回收率可靠，检测成本低，检测效率高，而且适用面广的荠菜样品质量控制方法，其不仅适用于荠菜药材，还适用于柿蒂饮片、制剂中间体、制剂成品尤其是荠菜配方颗粒等的质量控制。
用于解决问题的方案
[1]一种荠菜样品质量控制方法，其中，所述质量控制方法包括如下步骤：
1)构建荠菜样品UPLC特征图谱；
供试品溶液制备：对荠菜样品进行提取，收集提取液，制备特征图谱检测供试品溶液；
参照物溶液制备：取4-香豆酸对照品和荠菜对照药材分别制备对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液；
特征图谱构建：采用超高效液相色谱法对供试品溶液和参照物溶液进行检测；其中色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径为1.5～2μm；以甲醇为流动相A，以体积浓度(即体积百分比)为0.05～0.20％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；
和/或2)指标成分含量测定：
供试品溶液制备：对荠菜样品进行提取，收集提取液，制备指标成分含量测定供试品溶液；
参照物溶液制备：取4-香豆酸对照品、阿魏酸对照品分别制备对照品参照物溶液；
指标成分含量测定：采用超高效液相色谱法对供试品溶液和参照物溶液进行检测；其中色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径为1.5～2μm；以甲醇-体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液进行等度洗脱；其中甲醇和体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液的体积比为(15～30)：(85～70)。
[2]根据[1]所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述荠菜样品选自荠菜药材、饮片、制剂中间体和/或制剂成品。
[3]根据[1]或[2]所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述荠菜样品选自荠菜配方颗粒。
[4]根据[1]～[3]任一技术方案所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述特征图谱检测供试品溶液的制备所用的提取溶剂选自水或体积浓度为20～80％的甲醇水溶液。
[5]根据[1]～[4]任一技术方案所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述特征图谱构建采用梯度洗脱，梯度洗脱表如下：
[6]根据[1]～[5]任一技术方案所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述指标成分含量测定供试品溶液的制备包括：取荠菜样品研细，加入水、甲醇或体积浓度为20～80％的甲醇水溶液提取，加热回流，放冷滤过，洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用振摇提取溶剂振摇提取。
[7]根据[6]所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述振摇提取溶剂选自乙酸乙酯、正丁醇、水饱和的正丁醇水溶液或者正丁醇的饱和水溶液。
[8]根据[1]～[7]任一技术方案所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述特征图谱构建步骤得到供试品图谱，其至少包括8个特征峰，与对照药材参照物色谱中的8个特征峰的保留时间相对应，其中峰6与对照品参照物峰的保留时间相对应，设为S峰，计算峰2～峰5、峰7～峰8与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.55(峰2)、0.64(峰3)、0.66(峰4)、0.83(峰5)、1.30(峰7)、1.34(峰8)。
[9]根据[1]～[8]任一技术方案所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述指标成分含量测定的4-香豆酸照物溶液和阿魏酸参照物溶液的浓度分别为10～30μg/mL。
[10]根据[1]～[9]任一技术方案所述的荠菜样品质量控制方法，其中，所述指标成分含量测定的色谱条件还包括：流速为0.25mL/min～0.35mL/min；和/或，柱温为25℃～35℃；和/或，检测波长为300～330nm。
发明的效果
本发明建立了一组快速、全面、专属性强的荠菜样品质量检测方法，该方法操作简便，检测时间成本低，适用范围广，为荠菜样品质量控制如荠菜药材、饮片、制剂中间体、制剂成品尤其是荠菜配方颗粒质量控制提供新的分析手段。本发明的方法经过方法学验证，重现性、稳定性好，回收率可靠，检测成本低，检测效率高，为规范荠菜相关的生产提供了重要保障。本发明采用超高液相色谱法，相比于薄层色谱法和紫外分光光度法等，更加快捷、有效且专属性更强，更有利于荠菜配方颗粒等的产业化应用。在本发明的一些优选实施方式中，本发明对色谱条件进行合理优化，建立荠菜样品的特征图谱、含量测定方法的有机组合。特征图谱属于定性方法，人为干扰较少，检测灵敏度较高，含量测定属于定量方法，能够对主要有效成分进行定量分析，两者互相补充，通过定性和定量两个方面，对荠菜配方颗粒的整体概貌、有效成分进行全面控制，确保产品质量的有效性和安全性。在本发明的一些具体实施方式中，本发明首次对荠菜配方颗粒的质量标准进行全面研究。在本发明的一些具体实施方式中，本发明首次建立了符合荠菜整体特性要求的特征图谱，选择在荠菜药材、饮片、配方颗粒等中响应值均较高的色谱峰，建立了含有8个特征峰的特征图谱，指认了1个峰，同时使用对照药材作为参照物，更能体现配方颗粒和药材的一致性。
需要说明的是，上述的记载并不是公开了本发明的全部实施方式和本发明的全部优点。
附图说明
图1：荠菜配方颗粒不同检测波长下的UPLC色谱图；
图2：荠菜配方颗粒的特征图谱构建不同梯度的分离效果；
图3：不同提取溶剂考察的荠菜配方颗粒特征图谱；
图4：不同提取方式考察的荠菜配方颗粒特征图谱；
图5：不同提取时间考察的荠菜配方颗粒特征图谱；
图6：不同提取体积考察的荠菜配方颗粒特征图谱；
图7：对照品、荠菜配方颗粒、荠菜对照药材、阴性对照色谱图；
图8：荠菜配方颗粒特征图谱整体性考察；
图9：荠菜配方颗粒特征图谱色谱柱考察；
图10：荠菜配方颗粒特征图谱柱温考察；
图11：荠菜配方颗粒特征图谱流速考察；
图12：荠菜配方颗粒特征图谱，峰6(S)：4-香豆酸；
图13：荠菜中间体特征图谱，峰6(S)：4-香豆酸；
图14：荠菜药材特征图谱，峰6(S)：4-香豆酸；
图15：荠菜饮片特征图谱，峰6(S)：4-香豆酸；
图16：阿魏酸、4-香豆酸全波长扫描图；
图17：不同提取溶剂考察的含量测定色谱图；
图18：不同提取方式考察的含量测定色谱图；
图19：不同提取体积考察的含量测定色谱图；
图20：不同提取时间考察的含量测定色谱图；
图21：不同振摇提取溶剂考察的含量测定色谱图；
图22：不同振摇提取次数考察的含量测定色谱图；
图23：4-香豆酸对照品的线性关系图；
图24：阿魏酸对照品的线性关系图；
图25：荠菜配方颗粒含量测定专属性试验；
图26：荠菜配方颗粒含量测定整体性考察；
图27：荠菜配方颗粒含量测定流速考察；
图28：荠菜配方颗粒含量测定柱温考察；
图29：荠菜配方颗粒含量测定色谱柱考察。
具体实施方式
以下对本发明的实施方式进行说明，但本发明不限定于此。本发明不限于以下说明的各构成，在发明请求保护的范围内可以进行各种变更，而适当组合不同实施方式、实施例中各自公开的技术手段而得到的实施方式、实施例也包含在本发明的技术范围中。另外，本说明书中记载的文献全部作为参考文献在本说明书中进行援引。
除非另有定义，本说明书中所用的技术和科学术语具有与本发明所属技术领域中的普通技术人员所通常理解的相同含义。
在描述本说明书的上下文中(尤其在所附权利要求的上下文中)，术语“一个”、“一种”和“该(所述，the)”和类似的语言将被解释为覆盖单数和复数，除非本文另外指示或与上下文明显矛盾。
本说明书中，使用“数值A～数值B”或“数值A-数值B”表示的数值范围是指包含端点数值A、B的范围。
本说明书中，使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。本说明书中，“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
本说明书中，所提及的“一些具体/优选的实施方式”、“另一些具体/优选的实施方式”、“一些具体/优选的技术方案”、“另一些具体/优选的技术方案”等是指所描述的与该实施方式有关的特定要素(例如，特征、结构、性质和/或特性)包括在此处所述的至少一种实施方式中，并且可存在于其它实施方式中或者可不存在于其它实施方式中。另外，应理解，所述要素可以任何合适的方式组合在各种实施方式中。
本发明的说明书和权利要求书中的术语“包括”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含一系列步骤或单元的过程、方法或系统、产品或设备没有限定于已列出的步骤或单元，而是可选地还包括没有列出的步骤或单元，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
除非另有说明，本文中所使用的术语“对照品”是指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，通常由国家药品检定机构审查认可，其标准应不低于制品的质量标准。
除非另有说明，本文中所使用的术语“供试品”是指用作检测或鉴定的实验样品。
除非另有说明，本文中所使用的术语“精密称定或精密称取”是指称取重量应准确至所取重量的千分之一，术语“称定”是指称取重量应准确至所取重量的百分之一，术语“精密加入”是指量取体积应准确至所取体积的千分之一，术语“精密吸取”是指通过微量进样器来准确量取样品的操作方式。
除非另有说明，本文中所使用的术语“续滤液”是指过滤时弃去初滤液后继续收集的滤液。与初滤液相比，续滤液更加接近样品的真实浓度，因为过滤介质(如滤膜、滤纸等)有可能会吸附溶质，因而造成初滤液中样品浓度偏低；另外，续滤液更加干净，因为被过滤介质吸附的溶质可以形成滤饼，降低了过滤孔径，因而能够截留更微小的微粒。
除非另有说明，本文中所使用的术语“超高效液相色谱”(或称“UPLC”)是指在高效液相色谱(HPLC)的基础上开发一种全新技术，具有填料颗粒小、检测速度快、分析通量大、灵敏度高等特点。
除非另有说明，本文中所使用的术语“保留时间”是指被分离组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时为止所经历的时间，即从进样开始到出现被分离组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间；术语“相对保留时间”是指被分离组分的校正保留时间与标样的校正保留时间之比。
除非另有说明，本文中所使用的术语“参照峰”(或称“对照峰”)是指在计算相对保留时间时标样所对应的色谱峰。
除非另有说明，本文中涉及溶液浓度百分比“％”是指体积百分比。比如0.05％磷酸水溶液是指将0.5mL的磷酸加纯水至1000mL，由于量筒不建议作为混合溶液的容器，故0.05％磷酸水溶液也约等于将1000mL纯水与0.5mL的磷酸混合均匀。
本发明涉及一种荠菜样品质量检测方法，其包括特征图谱的定性方法和/或含量测定的定量方法。下面将分别对其进行说明。本发明所述的荠菜样品包括但不仅限于荠菜药材、饮片(含炮制品)、制剂中间体、制剂成品尤其是配方颗粒中的一种或多种。其中，“药材”是指未经加工或未制成成品的中药原料；“饮片”是指中药根据需要，加工成成为一定的形状，便于使用的一种可直接用于中医临床的中药；“炮制品”是指用烘、炮、炒、洗、泡、漂、蒸、煮等方法加工中草药所获得的物品，炮制品一般也是一种饮片；“配方颗粒”是由单味中药饮片按传统标准炮制后经提取浓缩制成的、供中医临床配方用的颗粒；制剂中间体在本发明指单味中药饮片按传统标准炮制后经提取浓缩制成的中间体，供制成配方颗粒使用。
<构建荠菜样品UPLC特征图谱>
本发明首次构建了符合荠菜整体特性要求的特征图谱。本发明的荠菜样品UPLC特征图谱的构建方法包括：
供试品溶液制备：用提取溶剂对荠菜样品进行提取，收集提取液，制备特征图谱检测供试品溶液。进一步地，在本发明的一些具体实施方式中，提取溶剂选自水或体积浓度为20～80％的甲醇水溶液，优选地，为了获得更高的提取效率，提取溶剂选自体积浓度为20％～60％的甲醇水溶液，更进一步优选为体积浓度为25％～40％的甲醇水溶液。关于提取方式，超声提取、振摇提取、加热回流提取的方式均可，不同提取方式的提取效率差别不大，考虑到操作的方便，在本发明的一些具体实施方式中确定提取方法为超声处理。超声的功率、频率对本发明影响不大。进一步地，超声提取的时长为15min～60min、功率为220W～300W、频率为35kHz～45kHz。对于提取体积，在本发明的一些具体实施方式中，提取溶剂相对于荠菜样品的添加量为10～60mL/g，进一步为20～50mL/g。供试品浓度太小很可能不利于色谱峰的检出，浓度太大则色谱柱超载容易导致色谱峰峰形不佳。在本发明的一些具体实施方式中，供试品溶液的制备方法如下：取荠菜样品适量，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入20～40％甲醇，密塞，超声处理(15min～60min)，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
参照物溶液制备：取4-香豆酸对照品和荠菜对照药材分别制备对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液。进一步地，在本发明的一些具体实施方式中，取4-香豆酸对照品适量，精密称定，加醇或醇或醇-水溶液，如甲醇、甲醇-水溶液，制成每1mL含4-香豆酸10～30μg的溶液，摇匀，即得4-香豆酸参照物溶液。在本发明的一些具体实施方式中，取荠菜对照药材适量，置具塞锥形瓶中，加水，加热回流，放冷，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。进一步地，加热回流的时间为30～60min，更进一步地，水的加入量为20～50mL/g。本发明同时使用对照药材作为参照物，更能体现配方颗粒和药材的一致性。
特征图谱构建：本发明采用超高效液相色谱法对供试品溶液和参照物溶液进行检测；在本发明的一些具体实施方式中，分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。进一步地，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统建立特征图谱。
本发明通过深入的研究确定同时适用于不同荠菜样品的超高效液相色谱条件，其包括：
固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径(填料粒径)为1.5～2μm的色谱柱，进一步地，为了获得更优的柱效，粒径为1.7μm，更进一步地，色谱柱柱长为100～150mm，内径为2.1mm；在本发明的一些优选实施方式中，色谱柱选自ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)。
流动相：以甲醇为流动相A，以体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；在本发明的一些优选实施方式中，以0.08～0.15％磷酸溶液为流动相B，有助于获得良好的峰型。在本发明的一些具体实施方式中，梯度洗脱程序如下：
采用该条件可以实现无论是针对荠菜药材、饮片、制剂中间体或者配方颗粒的样品，各色谱峰均可以充分分离且峰型良好，并且分析周期短、分离效率和分离度更高。
本发明采用的检测器可以为紫外检测器。进一步地，本发明的色谱条件还包括：检测波长为300～330nm，在该范围的检测波长下色谱峰信息较为丰富，各色谱峰的分离效果均较好，且基线较为平稳。更进一步地，本发明的色谱条件还包括：流速为0.25mL/min～0.35mL/min；和/或，柱温25℃～33℃。本发明的构建方法在该柱温或流速范围内，较小的柱温变动或流速变动均能满足系统适用性要求，如果柱温过高则有可能导致峰无法分开。在本发明的一些优选实施方式中，流速为0.28mL/min～0.32mL/min；和/或，柱温为25℃～30℃。
进一步地，本发明通过至少多批次供试品溶液的检测，并进行分析比较，选择共有峰建立UPLC特征图谱，参照对照品色谱峰进行共有峰的指认。在本发明的一些具体实施方式中，采用本发明前述的构建方法所得到的荠菜样品特征图谱至少包含8个峰，与对照药材参照物色谱中的8个特征峰的保留时间相对应，其中峰6与对照品(4-香豆酸)参照物峰的保留时间相对应，设为S峰，计算峰2～峰5、峰7～峰8与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.55(峰2)、0.64(峰3)、0.66(峰4)、0.83(峰5)、1.30(峰7)、1.34(峰8)。
本发明通过优化供试品制备、色谱分析条件，缩短了分析时间，提升了分析效率，建立了同时适用于荠菜药材、饮片、制剂中间体和配方颗粒的超高效液相色谱条件。本申请中建立的特征峰，均为荠菜药材、饮片、制剂中间体、配方颗粒等全过程中稳定存在的色谱峰，对于产品的质量控制意义更大。通过本发明的方法获得的特征图谱可以用于荠菜样品质量控制，将待测样品检测所得检测图谱与本发明的构建方法构建的特征图谱进行比较以检测荠菜样品的质量和/或真伪；进一步地，若二者的UPLC特征图谱一致，则为合格品；若二者的UPLC特征图谱不一致，则为不合格品。
<指标成分含量检测>
在本发明的一些优选实施方式中，本发明的荠菜样品质量控制方法还包括定量分析即指标成分含量检测。本发明选择4-香豆酸、阿魏酸作为指标成分。主要考虑到荠菜主要成分为有机酸类，本发明人经过研究选择特征图谱中分离度较好同时有中检院对照品提供的2个成分作为指标成分。
供试品溶液制备：对荠菜样品进行提取，收集提取液，制备指标成分含量测定供试品溶液。为了获得更高的提取效率，本发明结合加热回流提取和振摇提取。在本发明的一些具体实施方式中，取荠菜样品研细，加入水、甲醇或体积浓度为20～80％的甲醇水溶液提取，加热回流，放冷滤过，洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用振摇提取溶剂振摇提取。进一步地，加热回流的时长为20min～100min，不同的提取时间的提取效率差别较小。对于提取体积，在本发明的一些具体实施方式中，提取溶剂相对于荠菜样品的添加量可以为20～120mL/g，从充分提取与节省溶剂的角度综合考虑，进一步为30～60mL/g。在本发明的一些具体实施方式中，振摇提取溶剂可以选自乙酸乙酯、正丁醇或水饱和的正丁醇水溶液。考虑到正丁醇或者水饱和的正丁醇水溶液作为振摇提取溶剂容易产生乳化现象，优选振摇提取溶剂为乙酸乙酯。振摇提取次数不受限制，不同振摇提取次数的提取效率差别较小，如振摇提取次数可以为1～3次。在本发明的一些具体实施方式中，荠菜样品含量测定供试品溶液的制备方法如下：取荠菜样品适量，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水，加热回流，放冷，滤过，用少量水分次洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用乙酸乙酯振摇提取，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加复溶溶剂(如甲醇)溶解，转移至量瓶中，加复溶溶剂至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
参照物溶液制备：取4-香豆酸对照品、阿魏酸对照品分别制备对照品参照物溶液。进一步地，4-香豆酸照物溶液和阿魏酸参照物溶液的浓度分别为10～30μg/mL。在本发明的一些具体实施方式中，取4-香豆酸对照品、阿魏酸对照品适量，精密称定，加醇或醇或醇-水溶液，如甲醇、甲醇-水溶液，制成每1mL分别含4-香豆酸10～30μg、阿魏酸10～30μg的溶液，摇匀，即得。
指标成分含量测定：采用超高效液相色谱法对供试品溶液和参照物溶液进行检测，在本发明的一些具体实施方式中，分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液1μl，注入液相色谱仪，计算4-香豆酸和阿魏酸的含量。检测所采用的色谱条件包括：
固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径(填料粒径)为1.5～2μm的色谱柱，进一步地，为了获得更优的柱效，粒径为1.7～1.9μm，更进一步地，色谱柱柱长为100～150mm，内径为2.1mm；在本发明的一些具体实施方式中，色谱柱选自Poroshell 120EC-C18(2.1×100mm，1.9μm)，ACQUITY UPLC HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)，ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)。
流动相：以甲醇-体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液进行等度洗脱；其中甲醇和体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液的体积比为(15～30)：(85～70)，本发明人发现采用该洗脱条件可以使得目标成分分离度好且分析时间适中。进一步地，甲醇和体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液的体积比为20:80。
本发明方法操作简单，经过方法学验证，精密度高、重现性好(RSD％小于1.5％)、24小时内稳定性好，回收率可靠(97％～109％)，检测成本低，检测效率高。而且该方法可以有效地检测荠菜药材、饮片、制剂中间体、配方颗粒等中的4-香豆酸、阿魏酸含量。
实施例
以下将通过具体的实施例对本发明做出进一步的说明：
实验仪器、试剂及药品
Thermo Vanquish超高效液相色谱仪；Agilent-1290超高效液相色谱仪；KQ-250B超声清洗机(昆山超声仪器有限公司)；电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；控温水浴锅(南通华泰实验仪器有限公司)；HY-4振荡器(金坛市科兴仪器厂)；纯水系统(Millipore公司)；AS165W型离心机(亚速旺(上海)商贸有限公司)；乙腈(色谱纯，ThermoFisher公司)；甲醇(色谱纯，Thermo Fisher公司)；磷酸(色谱纯，aladdin公司)；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。
4-香豆酸(112037-202102)对照品购自中国食品药品检定研究院(供含量测定用，含量以99.7％计，使用前无须处理)；阿魏酸(110773-201915)对照品均购自中国食品药品检定研究院(供含量测定用，含量以99.4％计，使用前无须处理)。
荠菜对照药材(290015-202006)购自上海鸿永生物科技有限公司；
荠菜配方颗粒经江阴天江药业有限公司制备提供。实验中所用荠菜药材药材采购自安徽亳州、江苏淮安、广西玉林、湖南邵阳、江苏宿迁等地，饮片由我公司按照《江苏省中药饮片炮制规范》进行炮制。制剂中间体：单味中药饮片按传统标准炮制后经提取浓缩制成的中间体，供制成配方颗粒使用。
实施例一：荠菜配方颗粒特征图谱方法的建立及其方法学研究
1.检测波长的确定
取荠菜配方颗粒适量，研细，取0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇15mL，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。采集样品在210nm，254nm，365nm和310nm下的色谱图，如图1所示。
结果表明，在310nm波长下色谱峰的个数较多，基线平稳，因此选用310nm作为检测波长。
2.色谱条件的优化
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，梯度1和梯度2均以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度3以0.15％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3mL；柱温为30℃；检测波长为310nm。
结果表明(图2)，梯度3的分离效果较好，基线平稳，峰形对称，因此，本方法选择梯度3规定的洗脱条件进行后续研究。
3.参照物溶液的制备
取荠菜对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加水15mL，加热回流45分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。另取4-香豆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含4-香豆酸20μg的溶液，摇匀，即得。
4.供试品溶液的制备
4.1不同提取溶剂的考察
取荠菜配方颗粒(以下简称本品)适量，研细，取0.5g，平行5组，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇、50％甲醇、80％甲醇、甲醇、50％乙醇各15mL，密塞，分别超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液2μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，计算特征峰总峰面积/称样量，结果见表1、图3。
表1不同提取溶剂的提取效率比较(峰面积/称样量)
由上表可以看出：30％甲醇的提取效率较高，因此确定提取溶剂为30％甲醇。
4.2不同提取方法的考察
取本品适量，研细，取0.5g，平行3组，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇15mL，密塞，分别进行超声处理(功率250W，频率40kHz)、振摇提取、加热回流30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液2μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，计算特征峰总峰面积/称样量，结果见表2、图4。
表2不同提取方法的提取效率比较(峰面积/称样量)
由上表可以看出：不同提取方式的提取效率差别不大，考虑到操作的方便，因此确定提取方法为超声处理。
4.3不同提取时间的考察
取本品适量，研细，取0.5g，平行4组，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇15mL，密塞，分别超声处理(功率250W，频率40kHz)15分钟、30分钟、45分钟和60分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液2μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，计算特征峰总峰面积/称样量，结果见表3、图5。
表3不同提取时间的提取效率比较(峰面积/称样量)
由上表可以看出：超声处理不同时间，荠菜配方颗粒中特征峰总峰面积/称样量差别较小，因此为确保提取效果，确定提取时间为30分钟。
4.4不同提取体积的考察
取本品适量，研细，取约0.5g，平行3组，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇10mL、15mL、25mL，密塞，分别超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液2μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，计算特征峰总峰面积/称样量/15*提取体积，结果见表4、图6。
表4不同提取体积的提取效率比较
由上表看出：不同提取体积的提取效率差别不大，从节省溶剂和提取充分的角度考虑，因此确定提取体积为15mL。
4.5供试品溶液制备方法的确定
根据上述研究结果，确定荠菜配方颗粒特征图谱的供试品溶液制备方法为：
取本品适量，研细，取0.5g，置具塞锥形瓶中，加入30％甲醇15mL，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.方法学研究
5.1专属性考察
取荠菜配方颗粒供试品溶液、对照品溶液、缺荠菜的阴性溶液、对照药材溶液注入液相色谱仪，结果见图7。
实验结果表明：阴性溶液在与供试品溶液色谱图中各特征峰的保留时间处没有色谱峰，说明溶剂及辅料对荠菜配方颗粒的测定无干扰，以本法测定荠菜配方颗粒具有专属性。
5.2整体性考察
在确定的色谱条件上，延长洗脱时间，考察在既定的色谱条件系统下，是否会残留杂质峰对后续样品造成影响，结果见图8。
由实验结果可知，延长一倍洗脱时间，无明显杂峰，表明该色谱条件基本满足了信息量最大的原则，对后续样品的分析亦无影响。
5.3精密度考察
取同一批号荠菜配方颗粒样品，按供试品溶液制备方法制备成供试液，连续进样6次，每次2μL，记录其特征峰保留时间，按照正文要求计算相对保留时间，结果见表5。
表5精密度实验结果(相对保留时间)
结果表明，各特征峰的相对保留时间的RSD均小于1％，精密度良好。
5.4中间精密度考察
取同一批号荠菜配方颗粒样品，按供试品溶液制备方法制备成供试液，由两个实验员A、B分别按照正文项下的要求处理3份，分别在Thermo-UPLC、Agilent-UPLC上进样2μL，记录其特征峰保留时间，按照正文要求计算相对保留时间，结果见表6。
表6中间精密度考察(相对保留时间)
结果表明：样品的特征峰相对保留时间的RSD除峰1外均小于1％，中间精密度试验良好。
5.5稳定性考察
取同一批号荠菜配方颗粒样品，按供试品溶液制备方法制备成供试液，分别于0、2、6、10、14、16、20、24小时进样2μl，记录其特征峰保留时间，按照正文要求计算相对保留时间，结果见表7。
表7稳定性考察(相对保留时间)
结果表明，各特征峰的相对保留时间的RSD均小于1％，供试液在24小时内稳定性良好。
5.6重复性考察
取同一批号荠菜配方颗粒样品，平行6组，按供试品溶液制备方法制备成供试液，分别进样2μL，记录其特征峰保留时间，按照正文要求计算相对保留时间，结果见表8。
表8重复性试验(相对保留时间)
结果表明，方法的重复性试验良好。
5.7耐用性考察
1)色谱柱考察
取同一批号荠菜配方颗粒样品，按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别采用ACQUITY UPLC HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)，ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)，Acclaim RSLC 120C18(2.1×100mm，2.2μm)3种色谱柱，分别进样2μl，记录相应色谱图，结果见图9。
结果表明：不同色谱柱对各特征峰的相对保留时间影响相对较大，因此，荠菜配方颗粒特征图谱检测推荐使用色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)。
2)柱温考察
取同一批号荠菜配方颗粒样品，按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，考察25℃、30℃、35℃三个温度，分别进样2μl，记录其特征峰保留时间，按照正文要求计算相对保留时间，结果见表9、图10。
表9柱温考察(相对保留时间)
结果表明，柱温在25℃～30℃区间对样品的测定结果均符合正文规定的保留时间要求，耐用性好。
3)流速考察
取同一批号荠菜配方颗粒样品，按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，考察每分钟0.25mL、0.30mL、0.35mL三个流速，分别进样2μL，记录其特征峰保留时间，按照正文要求计算相对保留时间，结果见表10、图11。
表10流速考察(相对保留时间)
结果表明，流速在0.25mL/min～0.35mL/min区间对样品的测定结果均符合正文规定的保留时间要求，耐用性良好。
6.样品测定
取3批荠菜配方颗粒样品、16批荠菜药材和饮片、3批荠菜中间体，按照前述特征图谱构建项下操作，测定结果见下表以及图12～15。
表11配方颗粒测定结果(相对保留时间)
表12药材测定结果(相对保留时间)
表13饮片测定结果(相对保留时间)
表14中间体测定结果(相对保留时间)
实施例二：荠菜配方颗粒指标成分含量测定方法的建立及其方法学研究
1.检测波长的确定
实验对4-香豆酸、阿魏酸对照品溶液进行全波长扫描，记录其紫外吸收图，见图16。
由结果可知，4-香豆酸在310nm左右波长处有较大吸收，阿魏酸在该波长下响应也较大，因此选择310nm作为4-香豆酸和阿魏酸的含量测定的检测波长。
2.色谱条件的确定
在荠菜配方颗粒特征图谱的色谱条件研究基础上，建立了荠菜配方颗粒中4-香豆酸和阿魏酸的含量测定方法，色谱条件如下：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm)；以甲醇-0.15％磷酸溶液(20:80)为流动相；流速为每分钟0.3mL；柱温为30℃；检测波长为310nm。理论板数按4-香豆酸峰计算应不低于5000。
3.参照物溶液的制备
取4-香豆酸对照品、阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL分别含4-香豆酸20μg、阿魏酸20μg的溶液，摇匀，即得。
4.供试品溶液的制备
4.1不同提取溶剂的考察
取本品适量，研细，取0.5g，平行5组，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水、30％甲醇、50％甲醇、80％甲醇、甲醇各25mL，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，滤过，水提取样品滤液直接用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，其余样品蒸干后用水25mL复溶，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯层液液，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液1μL，注入液相色谱仪，计算4-香豆酸和阿魏酸的含量，结果见表15、图17。
表15不同提取溶剂的比较
由上表可以看出：水作为提取溶剂的提取效率较高，操作更方便，因此确定提取溶剂为水。
4.2不同提取方法的考察
取本品适量，研细，取约0.5g，平行3组，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水25mL，分别进行超声处理(功率250W，频率40kHz)、振摇提取、加热回流30分钟，放冷，滤过，用少量水分次洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯层液，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液1μL，注入液相色谱仪，计算4-香豆酸和阿魏酸的含量，结果见表16、图18。
表16不同提取方法的比较
由上表可以看出：加热回流提取效率较高，因此确定提取方法为加热回流。
4.3不同提取体积的考察
取本品适量，研细，取约0.5g，平行3组，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水15mL、25mL、50mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，用少量水分次洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯层液，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液1μL，注入液相色谱仪，结果见图19。通过计算4-香豆酸和阿魏酸的含量，可以得出不同提取体积的提取效率相当，从充分提取与节省溶剂的角度综合考虑，确定提取体积为25mL。
4.4不同提取时间的考察
取本品适量，研细，取约0.5g，平行4组，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水25mL，分别加热回流30分钟、45分钟、60分钟、90分钟，放冷，滤过，用少量水分次洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯层液，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液1μL，注入液相色谱仪，结果见图20。通过计算4-香豆酸和阿魏酸的含量，可以得出不同的提取时间的提取效率差别较小，30分钟已经提取完全，从提取完全和节省时间的角度考虑，因此确定提取时间为30分钟。
4.5不同振摇提取溶剂的考察
取本品适量，研细，取约0.5g，平行2组，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水25mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，取水适量，少量多次洗涤滤渣，滤液分别用乙酸乙酯、水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并有机溶剂，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液1μL，注入液相色谱仪，结果见图21。计算4-香豆酸和阿魏酸的含量，可以得出不同振摇提取溶剂的提取效率差别较小，考虑到正丁醇作为振摇提取溶剂容易产生乳化现象，因此确定振摇提取溶剂为乙酸乙酯。
4.6不同振摇提取次数的考察
取本品适量，研细，取约0.5g，平行3组，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水25mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，用少量水分次洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用乙酸乙酯振摇提取1次、2次、3次，每次20mL，合并乙酸乙酯层液，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液1μL，注入液相色谱仪，结果见图22。通过计算4-香豆酸和阿魏酸的含量，可以得出不同振摇提取次数的提取效率差别较小，从节省时间与振摇提取充分的角度综合考虑，因此确定振摇提取次数为2次。
经过考察，最终确定荠菜颗粒含量测定的供试品制备方法为：
取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水25mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，用少量水分次洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.方法学验证
5.1线性
分别精密吸取4-香豆酸对照品溶液(浓度39.76μg/mL)和阿魏酸对照品溶液(浓度40.20μg/mL)0.1μL、0.2μL、0.5μL、1.0μL、1.5μL、2.0μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，求得4-香豆酸和阿魏酸的回归方程，结果见表17和图23、图24。
表17对照品进样量与峰面积关系
结果表明：4香豆酸进样量在0.0040μg～0.0795μg范围内，阿魏酸进样量在0.0040μg～0.0804μg范围内，进样量与峰面积值呈良好的线性关系。
5.2精密度试验
5.2.1仪器精密度试验
精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，连续进样6次，记录其峰面积，计算相对标准偏差，结果见表18。
表18仪器精密度试验
结果表明：仪器精密度试验良好。
5.2.2重复性试验
取荠菜配方颗粒适量，研细，取约0.5g，精密称定，平行6份，分别按正文供试品溶液制备方法制成供试品溶液，分别进样1μL，测定4-香豆酸和阿魏酸的峰面积，计算其含量及RSD，结果表明：重复性试验良好(4-香豆酸RSD％＝0.86％；阿魏酸RSD％＝1.06％)。
5.2.3中间精密度试验
取荠菜配方颗粒适量，研细，取约0.5g，由两个实验员A、B分别按照正文项下的要求处理3份，分别在Thermo-UPLC、Agilent-UPLC上进样1μL，测定4-香豆酸和阿魏酸的峰面积，计算其含量及RSD，结果见表19、表20。
表19中间精密度试验(4-香豆酸)
结果表明：4-香豆酸含量测定方法中间精密度良好。
表20中间精密度试验(阿魏酸)
结果表明：阿魏酸含量测定方法中间精密度良好。
5.3准确度试验
取已知含量的样品(4-香豆酸含量0.20mg/g，阿魏酸含量0.18mg/g)适量，研细，取约0.25g，平行3份，精密称定，分别加入0.25g样品所含各成分的50％、100％、150％的对照品。按正文供试品溶液制备方法制成加样回收供试品溶液，分别进样1μL，以下列公式计算回收率、平均回收率、RSD。
结果表明：4-香豆酸回收率在97.66％～107.88％之间，平均回收率101.14％，RSD％＝3.65％，准确度试验结果良好。阿魏酸回收率在97.23％～108.98％之间，平均回收率101.23％，RSD％＝4.10％，准确度试验结果良好。
5.4专属性试验
荠菜配方颗粒中所添加的辅料为麦芽糊精和二氧化硅及硬脂酸镁。本次实验考察缺荠菜的阴性样品对荠菜配方颗粒含量测定的影响。取缺荠菜的阴性样品按供试品制备方法制备阴性样品溶液。
取荠菜配方颗粒供试品溶液、阴性对照溶液与4-香豆酸和阿魏酸对照品溶液注入液相色谱仪。
实验结果表明(图25)：阴性色谱图中在与对照品相应的保留时间处没有色谱峰，说明辅料及溶剂对4-香豆酸和阿魏酸的测定无干扰，以本法测定荠菜配方颗粒中4-香豆酸和阿魏酸的含量具有专属性。
5.5整体性试验
在确定的色谱条件上，保持有机相比例最高时的洗脱梯度，洗脱时间延长一倍，考察在既定的色谱条件系统下，是否会残留杂质峰对后续样品造成影响。
由实验结果可知(图26)，延长洗脱时间一倍，无明显杂质峰干扰，表明该色谱条件，对后续样品的分析亦无影响。
5.6耐用性试验
5.6.1稳定性试验
取本品，按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、16、20、24小时进样1μL，测定峰面积值，计算其RSD。
表21稳定性试验测定结果
结果表明(表21)：样品供试液在24小时内稳定性良好。
5.6.2不同流速考察
取本品，按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，考察0.25mL/min、0.30mL/min、0.35mL/min流速下4-香豆酸和阿魏酸的含量结果，结果见表22，图27。
表22不同流速考察
结果表明：三种流速下，4-香豆酸和阿魏酸色谱峰的分离度均较好，含量相近，耐用性较好。
5.6.3不同柱温考察
取本品，按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，考察25℃、30℃、35℃三个温度下4-香豆酸和阿魏酸的含量结果，结果见表23、图28。
表23不同柱温的考察
结果表明：三种柱温下，4-香豆酸和阿魏酸的色谱峰的分离度均较好，含量相近，耐用性较好。
5.6.4色谱柱考察
取本品，按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别考察Poroshell120EC-C18(2.1×100mm，1.9μm)，ACQUITY UPLC HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)，ACQUITYUPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)3种不同色谱柱条件下，荠菜配方颗粒中4-香豆酸和阿魏酸的含量，结果见表24、图29。
表24不同色谱柱的比较
结果表明：三种不同型号色谱柱对4-香豆酸和阿魏酸的分离效果均较好，对其含量结果影响较小，此方法具有普遍适应性。
6.样品含量测定
取3批荠菜配方颗粒，16批荠菜药材和饮片，3批荠菜中间体，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液供试液，测定样品中4-香豆酸和阿魏酸的含量，实验结果见表25～28。
表25荠菜配方颗粒含量测定结果
表26荠菜药材含量测定结果
表27荠菜饮片含量测定结果
表28荠菜中间体含量测定结果
Claims (5)
1.一种荠菜样品质量控制方法，其特征在于，所述质量控制方法包括如下步骤：
1)构建荠菜样品UPLC特征图谱；
供试品溶液制备：对荠菜样品使用选自水或体积浓度为20～80％的甲醇水溶液的提取溶剂进行提取，收集提取液，制备特征图谱检测供试品溶液；
参照物溶液制备：取4-香豆酸对照品和荠菜对照药材分别制备对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液；
特征图谱构建：采用超高效液相色谱法对供试品溶液和参照物溶液进行检测；其中色谱条件包括：使用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，粒径为1.7μm；以甲醇为流动相A，以体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱表如下：
检测波长为310nm；
和2)指标成分含量测定：
供试品溶液制备：对荠菜样品进行提取，收集提取液，制备指标成分含量测定供试品溶液；所述指标成分含量测定供试品溶液的制备包括：取荠菜样品研细，加入水、甲醇或体积浓度为20～80％的甲醇水溶液提取，加热回流，放冷滤过，洗涤残渣及容器，合并洗液与滤液，用振摇提取溶剂振摇提取；所述振摇提取溶剂为乙酸乙酯；
参照物溶液制备：取4-香豆酸对照品、阿魏酸对照品分别制备对照品参照物溶液；
指标成分含量测定：采用超高效液相色谱法对供试品溶液和参照物溶液进行检测；其中色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径为1.5～2μm；以甲醇-体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液进行等度洗脱；其中甲醇和体积浓度为0.05～0.20％磷酸溶液的体积比为(15～30):(85～70)，检测波长为300～330nm。
2.根据权利要求1所述的荠菜样品质量控制方法，其特征在于，所述荠菜样品选自荠菜药材、荠菜饮片或荠菜配方颗粒。
3.根据权利要求1或2所述的荠菜样品质量控制方法，其特征在于，所述特征图谱构建步骤得到供试品图谱，其至少包括8个特征峰，与对照药材参照物色谱中的8个特征峰的保留时间相对应，其中峰6与对照品参照物峰的保留时间相对应，设为S峰，计算峰2～峰5、峰7～峰8与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为：峰2为0.55、峰3为0.64、峰4为0.66、峰5为0.83、峰7为1.30、峰8为1.34。
4.根据权利要求1或2所述的荠菜样品质量控制方法，其特征在于，所述指标成分含量测定的4-香豆酸参照物溶液和阿魏酸参照物溶液的浓度分别为10～30μg/mL。
5.根据权利要求1或2所述的荠菜样品质量控制方法，其特征在于，所述指标成分含量测定的色谱条件还包括：流速为0.25mL/min～0.35mL/min；和/或，柱温为25℃～35℃。
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