CN115486397A - 一种提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及凡纳滨对虾的培育，具体的说是一种提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法。在凡纳滨对虾培育过程中待仔虾培养至幼体培育期(即，从体长大约0.5cm培养至体长3cm左右，俗称标粗期)时，对仔虾进行温度训练调控，养殖密度10,000PL/m³,促进凡纳滨对虾生长和/或抗逆性，待投放到大水域进行成虾养殖时，进而提高对虾养殖成功率。针对对虾养殖过程中，仔虾从条件相对稳定的养殖车间投放到环境条件尤其是昼夜温差波动较大的室外大面积池塘，由于环境适应性差容易造成存活率低、生长速度减慢的问题，通过在养殖车间对仔虾进行小幅度的温度波动训练，建立相应的温度训练技术，提高仔虾的生长速度和抗逆性。

Description

一种提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法

技术领域

本发明涉及凡纳滨对虾的培育，具体的说是一种提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法。

背景技术

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)，又称白肢虾、太平洋对虾、南美白对虾，由于其对自然环境的适应能力强、食性杂、对蛋白质饲料类型的需求不高、生长速率快、运输便利等优点，凡纳滨对虾已被认定为世界最有养殖前景和最畅销的优质对虾品种之一。

在凡纳滨对虾养殖过程中，存在各种养殖模式，如池塘养殖、小棚养殖、大水面养殖、工厂化养殖等。当前，凡纳滨对虾养殖技术已经比较完善，其中公认凡纳滨对虾标粗环节对于提高后期养殖成功率意义重大(Wasielesky等.,2013,Samocha and Lawrence,1992)。凡纳滨对虾标粗期，也称中间培育环节，已被养殖者应用多年，成为整个养殖环节中不可缺少的一环，其优势在于通过有效养殖面积的减少，暂时性地将幼虾集中性地暂养在土池或者育苗车间中，可以对外界敌害、水质指标和投喂饲料进行精准控制，从而减少人力、物力的损失和浪费，提高经济效益。同时在标粗系统中，可以采用轮捕轮放的方式最大化利用土地资源(Schveitzer等.,2017,Rezende等.,2019)。

在对虾养殖过程中，仔虾培育往往在环境相对精准可控的养殖车间进行，而仔虾投放至大水面池塘进行成虾养殖的过程中，池塘由于处于室外环境，昼夜温差大，往往造成仔虾投放后存活率降低。以往的研究中，在提高水产动物幼体的存活率和抗逆性方面，主要集中于抵抗病毒和细菌疾病方面，在鱼类的研究发现经过训练的先天免疫可能有利于增强生物机体的适应性和抗病能力(Zhang等.,2019)，但是在对虾中未见针对提高温度应激的报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法，在凡纳滨对虾培育过程中待仔虾培养至幼体培育期(即，从体长大约0.5cm培养至体长3cm左右，俗称标粗期)时，对仔虾进行温度训练调控，养殖密度10,000PL/m³,促进凡纳滨对虾生长和/或抗逆性，待投放到大水域进行成虾养殖时，进而提高对虾养殖成功率。

所述待仔虾培养至标粗期时调控养殖温度，使仔虾依次在不同温度下进行温度限制期生长和补偿期生长，进而达到提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性。

所述限制期生长与补偿期生长之间温度差为2-3℃。

所述限制期生长温度低于补偿期生长温度2-3℃；其中，每个生长期培养时间为20天。

所述温度限制期的温度设置为25℃，培养时长为20天。

所述补偿期的温度设置为28℃，培养时长为20天。

所述凡纳滨对虾在整个培养周期投喂方式均按照现有常规方式进行。

本发明所具有的优点：

针对对虾养殖过程中，仔虾从条件相对稳定的养殖车间投放到环境条件尤其是昼夜温差波动较大的室外大面积池塘，由于环境适应性差容易造成存活率低、生长速度减慢的问题，通过在养殖车间对仔虾进行小幅度的温度波动训练，建立相应的温度训练技术，提高仔虾的生长速度和抗逆性。

附图说明

图1为本发明实施例提供的温度训练后仔虾在副溶血弧菌VPE1攻毒过程中抗氧化酶(T-SOD)活性含量的变化效果图。

图2为本发明实施例提供的温度训练后仔虾在副溶血弧菌VPE1攻毒过程中氧化损伤标志物(MDA)含量的变化效果图。

图3为本发明实施例提供的温度训练后仔虾在VPE1攻毒过程中肝胰腺组织形态变化效果图；其中，B：分泌细胞(B细胞)；R：储存细胞(R cells)；BM：基底膜；“*”：肝胰腺管腔的多边形结构。用苏木精和伊红染色。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。

本发明基于凡纳滨对虾标粗过程中的生产实践需要和工厂化养殖设施条件，设计运用了合理的温度训练(限制和补偿)水平在不对凡纳滨对虾产生氧化应激损伤的情况下，来促进凡纳滨对虾生长或抗逆性，以提高后期养殖成功率。

实施例

仔虾温度训练的生长实验设计：

从育苗场购买凡纳滨对虾的仔虾(PL)5期(PL5＝5日龄)进行标粗养殖实验，仔虾初始体长度0.45-0.55厘米，健康、均匀、有活力。标组阶段采取温度小幅度波动的策略(简称温度训练)进行培育，根据温度值分为温度限制阶段和补偿阶段。

仔虾培育的温度训练，设置两个温度限制处理组(TEMP25＝25℃、TEMP31＝31℃)；

将上述饲养仔虾平均分为3组，每组90,000尾；

处理组一，在所设置的温度环境中将上述饲养仔虾在25℃下饲养20天(温度限制期)，然后将温度调整为常规的28℃饲养20天(补偿期),设置三个重复。

处理组二，在所设置的温度环境中将上述饲养仔虾在31℃下饲养20天(温度限制期)，然后将温度调整为常规的28℃饲养20天(补偿期),设置三个重复。

对照组为TEMP28＝28℃，仔虾在28℃环境中养殖40天,设置三个重复。

上述各组其他操作均与生产实践保持一致，每个处理设三个重复。使用500w的加热棒来维持温度(±0.5℃)。

养殖管理：在实验的早期阶段(第1-5天)，以卤虫无节幼体为饲料，每天两次(2g/10,000PL)；在第6-22天，每天两次喂食卤虫，并在上面列出的时间每天喂六次配合饲料。喂食时间为9:00和21:00。在6:00、12:00、15:00、18:00、21:00、0:00每天投喂六次蝦片(中国，台湾)和配合饲料；第23-40天，每天11:00投喂卤虫1次，每天7:00、15:00、19:00、23:00投喂配合饲料4次。实验中使用的配合饲料和生物饲料由黄河三角洲海洋科技有限公司(中国，山东)提供。确定初始投喂量按虾体重的10％，再根据投喂时间(40-50min)调整。为防止水质干扰实验，每天更换约10％的水量。同时，每三天测量一次水质，包括溶解氧、pH、氨氮、亚硝酸盐和弧菌浓度。养殖密度为10,000PL/m³，盐度20ppt，pH值控制在7.9–8.4，溶解氧含量＞6mg/L，氨氮含量＜0.1mg/L，亚硝酸盐氮＜0.1mg/L，弧菌浓度＜3×10⁴CFU/mL。

对仔虾进行测定：

1)仔虾温度训练的生长实验结果

在温度限制阶段结束时(第20天)，TEMP25组仔虾的体重显著低于对照组和TEMP31组(P＜0.05)，而补偿阶段结束时(第40天)，TEMP25组仔虾的体重显著高于对照组(P＜0.05)，与TEMP31组无显著差异。在整个实验阶段，TEMP25组和对照组的成活率SR值和饲料转化率FCE与对照组均无显著差异(P＞0.05),而TEMP31组的饲料转化率FCE显著低于对照组和TEMP25组。

在限制期开始时(第0-10天)，TEMP25组仔虾的特殊生长率SGR值显著低于对照组(P＜0.05)，在限制期结束时(第10-20天)，TEMP25组与对照组之间均无显著差异(P＞0.05)。补偿期开始时(第20-30天)，TEMP25组的SGR显著高于对照组(P＜0.05)，补偿期结束时(第30-40天)，TEMP25组与对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。整个过程中，TEMP31组的特殊生长率与对照组无显著差异。

由上述结果可见，适宜的温度训练(25℃培养20天，后转入28℃培养20天，)比一直置于28℃培养40天，在养殖结束时具有更高的体重。而且温度的波动并未对成活率、饲料转化率等产生影响。而向高温方向的温度训练(31℃培养20天，后转入28℃培养20天)未表现出显著测补偿生长效应。

表1生长实验仔虾在不同时间体重、特殊生长率(SGR)、饲料转化率(FCE)和成活率(SR)的变化

2)温度训练对仔虾消化酶活性的影响

冷冻的仔虾样品在冰上解冻。用无菌生理盐水冲洗样品，在滤纸上吸干并称重。然后将样品放入10mL离心管中，离心管中存在约九倍体积的匀浆介质(0.86％冷生理盐水)。再将混合物在冰上研磨，然后在0-4℃下以2000rpm离心15分钟。将上清液倒入1.5mL离心管中，根据试剂盒生产商(中国，南京建城生物工程研究所)的说明进行酶活性测定。测量的消化酶包括α-淀粉酶和脂肪酶。

在温度限制阶段，实验进行到第10天，TEMP25组仔虾的α-淀粉酶活性显著低于对照组和TEMP31组(P＜0.05)，在第20天，TEMP25组和对照组无显著差异(P＞0.05)，都显著低于TEMP31组(P＜0.05)。在补偿阶段，实验进行到第30天，TEMP25组的α-淀粉酶活性有所提高，TEMP31组的α-淀粉酶活性有所降低，都显著低于对照组，在第40天，TEMP25组的α-淀粉酶活性显著高于对照组(P＜0.05)，与TEMP31组无显著差异。在整个实验过程中(第10-40天)对照组和TEMP25组的脂肪酶活性均无显著性差异(P＞0.05)，而TEMP31组只有在第20天和对照组的脂肪酶活性存在显著性差异，其他时间点的脂肪酶活性与对照组均无显著性差异(P＞0.05；表2)。从整个实验过程来看，TEMP25组的α-淀粉酶活性和脂肪酶活性出现先降低后升高的趋势，即酶活性在限制阶段被抑制，补偿阶段升高；TEMP31组在限制阶段一直处于较高的水平，温度补偿阶段有所下降。酶活性的变化趋势与体重增长趋势大致保持一致。

表2.温度训练不同时间点仔虾消化酶活性的变化

3)温度训练对仔虾应对副溶血弧菌感染的影响

温度限制(25℃或31℃培养20天)和补偿培养(28℃培养20天)结束后，即实验的第40天开始，对温度训练组和对照组(28℃培养40天)进行副溶血弧菌攻毒实验。每组600只虾被随机分成三个30L的PVC水箱(每个水箱装20L砂滤、消毒海水)。每组有3个重复，每个重复200只虾，副溶血弧菌VPE1浸浴攻毒剂量为5×10^-7cfu/mL。在72小时攻毒实验期间分别在四个时间点(0、12、24、48)采集样本。并选择攻毒48小时后的仔虾肝胰腺样品进行组织病理学检查。

由于仔虾难以统计存活率，对其抗氧化酶系活性和组织切片进行了分析(参见图1，图2，图3)。结果发现温度训练组(TEMP25组和TEMP31)的总超氧化物歧化酶T-SOD活性变化趋势与对照组(TEMP28)的变化基本一致，TEMP25组在第12、24、48H均显著低于对照组，TEMP25组氧化损伤标志物丙二醛MDA含量在第24H、48H显著低于对照组(P＜0.05)，而TEMP31组MDA含量在24H之内显著高于对照组和TEMP25组，在48H时显著低于对照组。表明经过温度训练处理过的仔虾在面对病原时，并没有表现出强烈的氧化应激，同时对于体内的氧化损伤程度也较低，而TEMP25训练组比TEMP31训练组有更好的表现。

VPE1攻毒前(0H)，即生长实验结束时(第40天)，各组基底膜清晰，分泌细胞(B细胞)和储存细胞(R细胞)数量大体相同，星形多边形管腔未见明显变形，说明温度训练对凡纳对虾肝胰腺的形态和显微结构未有显著影响。而攻毒后仔虾的肝胰腺形态与正常肝胰腺相比，出现不同程度的病理变化。感染12H后，对照组和TEMP31组的肝小体出现不同程度变形，扭曲不规则，部分B细胞出现坏死，TEMP31组的变形情况更为严重。相比之下TEMP25组肝小体排列紧密，管腔形状规则，B细胞未出现坏死情况。在第24H，三组R细胞数量均大幅减少，对照组的肝胰腺肿大，出现空泡，星状多边形结构近于消失，而TEMP31组相较对照组损伤程度更为严重，部分肝细胞结构模糊，出现解体，TEMP25组虽也出现空泡化特点，但其星状多边形结构还较为明显。在第48小时，TEMP31组相较于TEMP25组和对照组，损伤进一步加大，空泡化更为严重，肝胰腺肿大程度更高。

上述免疫学指标和组织结构分析表明，经过25℃温度训练后，凡纳滨对虾在应对副溶血弧菌感染过程中，表现出更强的抗逆性。

4)温度训练后大规格苗种户外养殖成活率和生长状况

在露天池塘进行了温度训练后大规格苗种的放苗成活率和生长状况的养殖试验。

露天池塘长60m，上宽12m，池深1.4m，水深1m，有效水面1亩。每池放苗3.0万尾，共计6个池塘(TEMP25训练组2个池塘，TEMP28对照组2个池塘，TEMP31训练组2个池塘)。放苗时水体温度22℃，实验持续20天，露天天气最高温26℃，最低温18℃。各池正常养殖管理，日换水量在1/4左右，从第10天开始换水量增加至1/3左右。投饵从放苗后第3天开始，投饵率(投饵量占养殖水产动物总体重的百分率)8％。结果显示经过25℃温度训练培育的大规格对虾苗种在放苗前期的20天内，在生长和存活率方面显著优于28℃对照组和31℃训练组。

表3经过不同温度训练后大规格苗种的养殖存活率和生长情况

组别	TEMP25	TEMP28	TEMP31
				放苗后10天体重/g	0.78±0.12<sup>a</sup>	0.55±0.091<sup>b</sup>	0.53±0.11<sup>c</sup>
放苗后20天体重/g	2.47±1.06<sup>a</sup>	2.25±0.84<sup>b</sup>	2.19±1.12<sup>b</sup>
				放苗后10天存活率(％)	89±6.5<sup>a</sup>	86±5.6<sup>b</sup>	79±8.7<sup>b</sup>
放苗后20天存活率(％)	88±8.9<sup>a</sup>	82±5.4<sup>b</sup>	78±9.2<sup>c</sup>

Claims (7)

1.一种提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法，其特征在于：在凡纳滨对虾培育过程中待仔虾培养至幼体培育期时，对仔虾进行温度训练调控，促进凡纳滨对虾生长和/或抗逆性，待投放到大水域进行成虾养殖时，进而提高对虾养殖成功率。

2.按权利要求1所述的提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法，其特征在于：所述待仔虾培养至标粗期时调控养殖温度，使仔虾依次在不同温度下进行温度限制期生长和补偿期生长，进而达到提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性。

3.按权利要求2所述的提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法，其特征在于：所述限制期生长与补偿期生长之间温度差为2-3℃。

4.按权利要求2所述的提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法，其特征在于：所述限制期生长温度低于补偿期生长温度2-3℃；其中，每个生长期培养时间为20天。

5.按权利要求1-4任意一项所述的提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法，其特征在于：所述温度限制期的温度设置为25℃，培养时长为20天。

6.按权利要求1-4任意一项所述的提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法，其特征在于：所述补偿期的温度设置为28℃，培养时长为20天。

7.按权利要求1-4任意一项所述的提高凡纳滨对虾仔虾生长速度和抗逆性的方法，其特征在于：所述凡纳滨对虾在整个培养周期投喂方式均按照现有常规方式进行。

Images