CN115477608B - 一种微管蛋白抑制剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种微管蛋白抑制剂及其制备方法与应用，具体地，本发明提供了式I所示的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐，可用于制备微管蛋白抑制剂。本发明化合物对于癌细胞和HacaT细胞具有显著的抑制作用，其IC50显著低于现有技术中的同类化合物，因而本发明提供的化合物可用于制备防治癌症、光化性角化病和银屑病的药物；同时，比同类化合物具有更好的化学稳定性，便于贮存和运输，具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于化学医药领域，具体涉及一种微管蛋白抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
微管是构成细胞骨架的主要成分，存在于所有的真核细胞中。由于微管在细胞有丝分裂过程中承担的重要作用，微管蛋白逐渐成为医药工作者研究与开发抗癌药物的重要靶点之一。根据微管蛋白抑制剂在微管蛋白上的作用位点的不同，微管蛋白抑制剂可分为3种类型：①作用于秋水仙碱位点的微管蛋白抑制剂；②作用于长春碱位点的微管蛋白抑制剂；③作用于紫杉醇位点的微管蛋白抑制剂。目前，长春碱和紫杉醇位点微管蛋白抑制剂类药物已在肿瘤临床治疗方面占据了重要地位，紫杉醇更是已成为肺癌、乳腺癌和卵巢癌的重要一线治疗药物。然而，和其他抗肿瘤药物一样，难以耐受的副作用及用药后耐药性的出现限制了微管蛋白抑制剂的临床使用。因此，开发新型的具有更强活性、更低毒性、并且对多药耐药肿瘤细胞更有效的新型微管蛋白抑制剂具有很大的应用前景。
在中国专利申请“CN105263907A作为蛋白质酪氨酸激酶调节剂的N-(3-氟苄基)-2-(5-(4-吗啉代苯基)吡啶-2-基)乙酰胺”中公开了一种如下结构的化合物。
文献表明，该化合物表现出对微管蛋白的抑制作用，从而对癌症具有治疗和预防作用。然而该化合物仍然存在抑制作用较弱的问题。
发明内容
针对现有技术中微管蛋白抑制剂的抑制作用不够高，临床使用所面临的问题，本发明提供一种微管蛋白抑制剂及其制备方法与应用，该类化合物对微管蛋白更强的抑制作用，从而对癌细胞、人永生化表皮细胞表现出更强的抑制作用。
本发明的目的在于提供一种新的微管蛋白抑制剂。
本发明提供了式I所示的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐：
其中，n为选自2至10的整数。
进一步地，上述n为选自2至5的整数；优选地，所述化合物为如下化合物：
本发明还提供了上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐的制备方法，包括如下步骤：
(1)中间体M-1的合成：5-溴-2-氟吡啶(S-1)和丙二酸二乙酯在无机碱作用下反应，然后在醇溶液中，加碱反应得到中间体MM-1；MM-1在有机碱和缩合剂作用下与苄胺反应，得到M-1；
(2)中间体M-2的合成：对碘苯硼酸(S-2)和频哪醇反应得到中间体MM-2；MM-2与化合物A在无机碱和催化剂作用下反应得到M-2；
(3)式I化合物的合成：将M-1和M-2在无机碱和催化剂作用下反应得到式I化合物；
化学反应式如下：
进一步地，步骤(1)所述无机碱为碳酸铯，所述醇溶液为甲醇，所述碱为氢氧化钠，所述有机碱为DIPEA，所述缩合剂为TBTU；
和/或步骤(2)所述无机碱为碳酸铯，所述催化剂为L-脯氨酸和碘化亚铜；
和/或步骤(3)所述无机碱为碳酸钾，所述催化剂为四(三苯基膦)钯。
进一步地，步骤(1)所述5-溴-2-氟吡啶和丙二酸二乙酯反应的条件为：80℃反应16-20小时；所述在醇溶液中，加碱反应的条件为：60℃反应16～20小时；MM-1与苄胺反应的条件为：室温反应过夜；
和/或步骤(2)所述对碘苯硼酸和频哪醇反映的条件为：室温反应过夜；所述MM-2与化合物A反应的条件为室温反应3～5小时；
和/或步骤(3)所述反应条件为80℃反应10～12小时。
本发明还提供了一种药物组合物，它是以上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
进一步地，上述辅料或辅助性成分选自稀释剂、填充剂、着色剂、助流剂、润滑剂、粘合剂、稳定剂、助悬剂、缓冲剂中的至少一种。
进一步地，上述制剂为软膏剂、片剂、胶囊、口服液、注射剂、透皮剂、气雾剂、固体制剂、脂质体或缓控释制剂。
更进一步地，上述制剂为软膏剂。
更进一步地，上述软膏剂由如下组分制成：
活性成分5～15g、硬脂酸100～200g、羊毛脂15～25g、凡士林100～150g、三乙醇胺15～25g、甘油40～60g、乳化剂3～7mL，有机溶剂15～25mL、羟苯乙酯0.5～1.5g、余量为水，总质量1000g；
优选地，所述乳化剂为乳化剂OP，所述有机溶剂为二甲亚砜。
更进一步地，上述软膏剂由如下组分制成：
活性成分10g，硬脂酸150g，羊毛脂20g，凡士林120g，三乙醇胺20g，甘油50g，乳化剂OP 5mL，二甲亚砜20mL，羟苯乙酯1g，余量为水，总质量1000g。
本发明还提供了上述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)油相制备：称取处方量的硬脂酸、羊毛脂、凡士林，融化得油相；
(2)水相制备：取羟苯乙酯、甘油、三乙醇胺、乳化剂，加入水中溶解得水相；
(3)基质制备：将水相加入油相，搅拌乳化至凝固；
(4)将有机溶剂溶解的活性成分加入基质中混匀，即可。
进一步地，步骤(1)所述油相的温度控制在70～80℃，步骤(2)所述水相的温度控制在70～80℃，步骤(3)所述基质凝固后降温到45～55℃。
本发明还提供了上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐或上述的药物组合物在制备微管蛋白抑制剂中的用途。
进一步地，上述微管蛋白抑制剂是用于治疗和/或预防癌症、皮肤病的药物。
更进一步地，上述癌症包括皮肤癌、卵巢癌、乳腺癌、神经胶质瘤、结肠癌、淋巴癌、肺癌、胃癌、食管癌中的至少一种；
和/或，所述皮肤病包括光化性角化病、尖锐湿疣、银屑病、红斑狼疮、特异性皮炎、皮肤角化症中的至少一种。
本发明还提供了上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐或上述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
进一步地，上述药物是抗皮肤癌、卵巢癌、乳腺癌、神经胶质瘤、结肠癌淋巴癌、肺癌、胃癌、食管癌的药物。
本发明还提供了上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐或上述药物组合物在制备治疗和/或预防皮肤病的药物中的用途。
进一步地，上述药物是治疗和/或预防光化性角化病、尖锐湿疣、银屑病、红斑狼疮、特异性皮炎、皮肤角化症的药物。
实验结果表明，本发明提供的化合物对微管蛋白具有比现有的微管蛋白抑制剂更强的抑制作用，从而对微管蛋白活性升高有关的疾病，例如癌症、部分皮肤病，表现出更强的治疗和预防效果。本发明化合物对于卵巢癌细胞、乳腺癌细胞、神经胶质瘤细胞、结肠癌细胞、淋巴癌细胞、永生角质细胞均具有显著的抑制作用，可用于单独或联合应用制备防治卵巢癌、乳腺癌、神经胶质瘤、结肠癌、淋巴癌、光化性角化病和银屑病的药物。相比于现有技术中作用相似的小分子化合物，本申请提供的化合物抑制微管蛋白或癌细胞的IC50显著降低。而且，本发明化合物还比同类化合物具有更好的化学稳定性，易于贮存运输，应用前景好。
本发明中提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
“立体异构体”包括对映异构体和非对映异构体。
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
术语“盐”和“可药用的盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
DIPEA：二异丙基乙胺；TBTU：O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯。
在某些实施方式中，本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用。也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于制备调控细胞功能或治疗疾病的药物或药物组合物。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药。
本发明中，室温是25±5℃，过夜为12±2h。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1、中间体M-1的合成
i：DMSO，Cs2CO3；ii：MeOH，NaOH；iii：DMF，DIPEA，TBTU；
步骤1：取50.0克5-溴-2-氟吡啶(S-1，0.28mol)、113.7克丙二酸二乙酯(0.71mol)用1升DMSO搅拌溶解，加入231.3克碳酸铯(0.71mol)，升温至80摄氏度反应16-20小时。TLC检测原料5-溴-2-氟吡啶基本反应完全。将反应液降至室温，加入2升水稀释，而后用500毫升乙酸乙酯分别萃取3次。合并乙酸乙酯，分别用150毫升水洗两次，减压浓缩至干。
向残留物中加入300毫升甲醇，200克质量分数30％的氢氧化钠溶液，升温至60摄氏度搅拌反应16-20小时，TLC检测原料反应完全。停止加热，反应液减压浓缩将体积减少至200毫升左右，冷却，用4M盐酸调pH值至6，1M柠檬酸水溶液调pH值至4-5，产品析出，静置1小时左右，过滤，固体用少量水洗涤2次，乙酸乙酯洗涤1次。烘干得中间体MM-1。
步骤2：取18.0克中间体MM-1(83.3mmol)、17.8克苄胺(166.6mmol)，用150毫升DMF溶解，搅拌下加入21.5克DIPEA(166.6mmol)，而后分批缓慢加入40.1克TBTU(125.0mmol)，加完后室温搅拌反应过夜。TLC检测原料反应完全，向反应液中加入500毫升乙酸乙酯、1升水，静置分层后取乙酸乙酯层，水层用150毫升乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯层，用90毫升5％碳酸钾溶液洗两次，50毫升饱和食盐水洗两次后，用35克无水硫酸钠干燥1小时。过滤除去硫酸钠，滤液减压浓缩至干，油状物用石油醚分散结晶，过滤得中间体M-1。
实施例2、中间体M-2的合成
取5.0克对碘苯硼酸(20.2mmol)溶于50毫升二氯甲烷中，加入2.4克频哪醇(20.3mmol)，室温下搅拌过夜，反应液用10毫升碳酸氢钠溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤1次，2克无水硫酸钠干燥30分钟，过滤除去硫酸钠，滤液减压浓缩至干，得到6.5克中间体MM-2(19.7mmol)。
将MM-2溶于20毫升DMSO中，加入0.5克L-脯氨酸、12.8克碳酸铯(39.3mmol)、0.5克碘化亚铜和1.6克3-氨基-1-丙醇(21.3mmol)，室温搅拌4小时，TLC检测原料反应完全，向反应体系中加入40毫升水，分别用90毫升乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯，用饱和食盐水洗涤1次，10克无水硫酸钠干燥30分钟，过滤除去硫酸钠，滤液减压浓缩至干，得到中间体M-2。
用不同的原料，通过类似的方法，可以得到下列中间体：
实施例3、本发明化合物I-1的合成
取2.00克中间体M-1(6.55mmol)，1.81克中间体M-2(6.53mmol)，用30毫升二氧六环溶解，另取1.81克碳酸钾(13.10mmol)溶于10毫升水中，滴加入反应体系，而后加入0.2克四(三苯基膦)钯，加热升温至80摄氏度反应10-12小时，TLC检测原料反应完全，将反应体系降至室温，加入50毫升乙酸乙酯、60毫升水，静置分层，水层用30毫升乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯层，用5毫升5％氢氧化钠洗3次，5毫升5％稀盐酸洗一次，再用饱和食盐水洗至中性，加入5克无水硫酸钠干燥1小时。过滤除去硫酸钠，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化得到化合物I-1。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ：8.68(d，J＝2.4Hz，1H)，8.61(t，J＝5.9Hz，1H)，7.87(dd，J＝8.1，2.5Hz，1H)，7.49-7.41(m，2H)，7.37-7.19(m，6H)，6.69-6.62(m，2H)，5.83(t，J＝5.6Hz，1H)，4.50(t，J＝5.1Hz，1H)，4.30(d，J＝5.9Hz，2H)，3.67(s，2H)，3.56-3.47(q，J＝6.6Hz，2H)，3.10(q，J＝6.6Hz，2H)，1.70(p，J＝6.6Hz，2H)。
ESI-MS m/z:374.17[M-1]-。
实施例4、本发明化合物I-2的合成
以中间体M-1和M-3为原料，合成方法类似于实施例3，得到化合物I-2。
ESI-MS m/z:360.16[M-1]-。
实施例5、本发明化合物I-3的合成
以中间体M-1和M-3为原料，合成方法类似于实施例3，得到化合物I-2。
ESI-MS m/z:388.19[M-1]-。
实施例6、本发明化合物I-4的合成
以中间体M-1和M-3为原料，合成方法类似于实施例3，得到化合物I-2。
ESI-MS m/z:402.22[M-1]-。
以下通过具体的试验例证明本发明的有益效果。
试验例1、本发明化合物对人结肠癌细胞HT29细胞周期阻滞的活性测试
采用人结肠癌细胞HT29检测本发明化合物阻滞细胞周期的活性。在6孔细胞培养板加入2ml细胞，1E6/孔，贴壁培养12h后，加入本发明药物及对照化合物1、2，最终浓度分别为25nM和50nM。化合物作用24h后，使用胰酶消化贴壁细胞，300g离心5min，去掉培养液。加入1ml预冷的PBS清洗。300g离心5min后去掉上清，收集细胞，加入-20℃预冷的70％乙醇，混匀后放于4℃固定过夜。1000g离心5min，去掉乙醇。采用UE公司细胞周期快速检测试剂盒RedNucleus染料检测细胞周期。加入RedNucleus I染色液后，缓慢并充分混匀，室温避光孵育20min。使用艾森流式细胞仪638nm激光激发，检测波长660/20nm。使用流式细胞仪自带的周期分析软件进行分析，比较不同处理组细胞的G2/M比例。微管蛋白抑制剂作用细胞后，细胞分裂被阻滞，细胞周期G/2M期比例升高。HT29空白组G2/M期细胞比例为12.9±1.3。不同浓度化合物阻滞HT29细胞周期G2/M期比例结果如下表1：
表1不同浓度下本发明化合物对人结肠癌细胞HT29细胞周期阻滞的活性
实验结果表明：本发明化合物对人结肠癌细胞HT-29细胞周期阻滞的活性显著高于现有化合物，说明本发明化合物对真核细胞有丝分裂过程有明显的抑制活性。
试验例2、本发明化合物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制活性
分别收集对数生长期的人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人卵巢癌细胞SKOV-3，计数，用完全培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度20个/μl，分别得人乳腺癌细胞悬浮液和人卵巢癌细胞悬浮液，接种96孔板，每孔加100μL细胞悬液。细胞在37℃，100％相对湿度，5％CO2培养箱中孵育24小时后，用培养基将本发明化合物和对照化合物稀释至所设置的相应作用浓度，按25μL/孔加入细胞中。化合物作用终浓度从0nM至400nM，4倍梯度稀释，共10个浓度点。加入待测化合物后，细胞置于37℃，100％相对湿度，5％CO2培养箱中孵育72小时。吸弃培养基，然后每孔加入100μL的含10％ CCK-8的新鲜培养基，置于37℃培养箱中孵育2-4小时，轻轻震荡后在SpectraMax M5 Microplate Reader上测定450nm波长处的吸光度，以650nm处吸光度作为参比，待测化合物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制活性IC50，结果见表2：
表2本发明化合物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制活性
实验结果表明：本发明化合物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人卵巢癌细胞SKOV-3的IC50值显著低于现有化合物，说明本发明化合物对乳腺癌细胞和卵巢癌细胞具有良好的抑制效果，可以用于防治乳腺癌和卵巢癌。
试验例3、本发明化合物对人结肠癌细胞HT-29和人脑胶质瘤细胞T98G的抑制活性
分别收集对数生长期的人结肠癌细胞HT-29和人脑胶质瘤细胞T98G，计数，用完全培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度20个/μl，分别得人结肠癌细胞悬浮液和人脑胶质瘤细胞悬浮液，接种96孔板，每孔加100μL细胞悬液。细胞在37℃，100％相对湿度，5％CO2培养箱中孵育24小时后，用培养基将待测化合物稀释至所设置的相应作用浓度，按25μL/孔加入细胞中。化合物作用终浓度从0nM至400nM，4倍梯度稀释，共10个浓度点。加入待化合物后，细胞置于37℃，100％相对湿度，5％CO2培养箱中孵育72小时。吸弃培养基，然后每孔加入100μL的含10％ CCK-8的新鲜培养基，置于37℃培养箱中孵育2-4小时，轻轻震荡后在SpectraMax M5 Microplate Reader上测定450nm波长处的吸光度，以650nm处吸光度作为参比，待测化合物对人结肠癌细胞HT-29和人脑胶质瘤细胞T89G的抑制活性IC50，结果见表3：
表3本发明化合物对人结肠癌细胞HT-29和人脑胶质瘤细胞T98G的抑制活性
实验结果表明：本发明化合物对人结肠癌细胞HT-29和人脑胶质瘤细胞T98G的IC50值显著低于现有化合物，说明本发明化合物对结肠癌细胞和脑胶质瘤细胞具有良好的抑制效果，可以用于防治结肠癌和神经胶质瘤。
试验例4、本发明化合物对人组织淋巴瘤细胞U937的抑制实验
收集对数生长期人组织细胞淋巴瘤细胞U937(购自ATCC)，用完全培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度60个/μl，得细胞悬浮液，接种96孔板，每孔板加100μL细胞悬浮液。细胞在37℃，100％相对湿度，5％ CO2培养箱中孵育24小时后，用培养基将本发明待测化合物稀释至所设置的相应作用浓度，按25μL/孔加入96孔板中。化合物作用终浓度从0nM至400nM，4倍梯度稀释。加入待测化合物后，细胞置于37℃，100％相对湿度，5％ CO2培养箱中孵育72小时。然后每孔加入100μL含10％ CCK-8的新鲜培养基，置于37℃培养箱中孵育2-4小时，轻轻震荡后在SpectraMax M5 Microplate Reader上测定450nm波长处的吸光度，以650nm处吸光度作为参比，计算待测化合物对人组织细胞淋巴瘤细胞U937的抑制活性IC50，结果见表4：
表4本发明化合物对人组织细胞淋巴瘤细胞U937的抑制活性
| 化合物编号 | IC50(nM) |
| I-1 | 4.79 |
| I-2 | 6.31 |
| I-3 | 7.92 |
| I-4 | 9.87 |
| 对照化合物1 | 20.54 |
| 对照化合物2 | 59.83 |
试验结果表明：本发明化合物对人组织细胞淋巴瘤细胞抑制的IC50值显著低于现有化合物，说明本发明化合物对淋巴瘤细胞具有良好的抑制效果，可以用于防治淋巴癌。
试验例5、本发明化合物对HacaT细胞的抑制实验
收集对数生长期HacaT细胞(购自ATCC)，用完全培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度20个/μl，得细胞悬浮液，接种96孔板，每孔板加100μL细胞悬浮液。细胞在37℃，100％相对湿度，5％ CO2培养箱中孵育24小时后，用培养基将本发明待测化合物稀释至所设置的相应作用浓度，按25μL/孔加入96孔板中。化合物作用终浓度从0nM至400nM，4倍梯度稀释。加入待测化合物后，细胞置于37℃，100％相对湿度，5％ CO2培养箱中孵育72小时。然后每孔加入100μL含10％ CCK-8的新鲜培养基，置于37℃培养箱中孵育2-4小时，轻轻震荡后在SpectraMax M5 Microplate Reader上测定450nm波长处的吸光度，以650nm处吸光度作为参比，计算待测化合物对HacaT细胞的抑制活性IC50，结果见表5：
表5本发明化合物对HacaT细胞的抑制活性
| 化合物编号 | IC50(nM) |
| I-1 | 42.95 |
| I-2 | 49.13 |
| I-3 | 45.72 |
| I-4 | 59.98 |
| 对照化合物1 | 176.15 |
| 对照化合物2 | 109.41 |
试验结果表明：本发明化合物对HacaT细胞抑制的IC50值显著低于现有化合物，说明本发明化合物对人永生化表皮细胞具有良好的抑制效果，可以用于防治光化性角化病和银屑病。
试验例6、本发明化合物稳定性试验
在中国专利申请“CN114516832A一种微管蛋白抑制剂及其制备方法与应用”中曾公开一种如下结构的化合物：
将本发明化合物I-1与上述对照化合物分别在25℃/60％RH条件下和40℃/75％RH条件下敞口放置1周，通过HPLC检测样品的化学稳定性。测试结果记录如下表6。
表6本发明化合物及对照化合物稳定性
结果表明，本发明化合物I-1在两种条件下分别放置1周和4周，化学纯度没有发生剧烈变化，化学稳定性良好。而对照化合物3在两种条件下放置1周时化学纯度略有下降，放置4周后化学纯度出现明显下降。说明本发明化合物I-1的稳定性显著优于对照化合物3。
综上，本发明化合物可以用作制备微管蛋白抑制剂；本发明化合物对于乳腺癌细胞、卵巢癌、结肠癌细胞、人脑胶质瘤细胞和淋巴癌细胞均具有显著的抑制作用，其IC50显著低于现有技术中的同类化合物，因而其用于制备防治癌症的药物具有极高的应用潜力。本发明化合物还对HacaT细胞具有显著的抑制作用，其IC50显著低于现有技术中的同类化合物，因而其还能用于制备防治光化性角化病和银屑病的药物。同时，本发明化合物还比同类化合物具有更好的化学稳定性，易于贮存运输，应用前景好。
Claims (14)
1.式I所示的化合物、或其药学上可接受的盐：
其中，n为选自2至10的整数。
2.根据权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述n为选自2至5的整数。
3.根据权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物为如下化合物：
4.权利要求1-3任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)中间体M-1的合成：5-溴-2-氟吡啶(S-1)和丙二酸二乙酯在无机碱作用下反应，然后在醇溶液中，加碱反应得到中间体MM-1；MM-1在有机碱和缩合剂作用下与苄胺反应，得到M-1；
(2)中间体M-2的合成：对碘苯硼酸(S-2)和频哪醇反应得到中间体MM-2；MM-2与化合物A在无机碱和催化剂作用下反应得到M-2；
(3)式I化合物的合成：将M-1和M-2在无机碱和催化剂作用下反应得到式I化合物；
化学反应式如下：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述无机碱为碳酸铯，所述醇溶液为甲醇，所述碱为氢氧化钠，所述有机碱为DIPEA，所述缩合剂为TBTU；
和/或步骤(2)所述无机碱为碳酸铯，所述催化剂为L-脯氨酸和碘化亚铜；
和/或步骤(3)所述无机碱为碳酸钾，所述催化剂为四(三苯基膦)钯。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述5-溴-2-氟吡啶和丙二酸二乙酯反应的条件为：80℃反应16-20小时；所述在醇溶液中，加碱反应的条件为：60℃反应16～20小时；MM-1与苄胺反应的条件为：室温反应过夜；
和/或步骤(2)所述对碘苯硼酸和频哪醇反映的条件为：室温反应过夜；所述MM-2与化合物A反应的条件为室温反应3～5小时；
和/或步骤(3)所述反应条件为80℃反应10～12小时。
7.权利要求1-3任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐在制备微管蛋白抑制剂中的用途。
8.权利要求1-3任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物是抗卵巢癌、乳腺癌、神经胶质瘤、结肠癌或淋巴癌的药物。
10.权利要求1-3任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防皮肤病的药物中的用途。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述药物是治疗和/或预防光化性角化病或银屑病的药物。
12.一种药物组合物，其特征在于：它是以权利要求1-3任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其特征在于：所述辅料或辅助性成分选自稀释剂、填充剂、着色剂、助流剂、润滑剂、粘合剂、稳定剂、助悬剂、缓冲剂中的至少一种。
14.根据权利要求13所述的药物组合物，其特征在于：所述制剂为口服液、注射剂、固体制剂、脂质体或缓控释制剂。
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