CN115475193B - 一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物,它是由下列重量份的原料药制成:荷叶1‑5份、全瓜蒌1‑5份、绞股蓝1‑5份、冬瓜皮1‑5份、丹参1‑5份、杠板归1‑5份。本发明还提供了上述药物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的用途。其优点在于:通过高脂喂养的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型发现,本发明中药组合物具有明显的抗非酒精性脂肪肝作用,显著降低非酒精性脂肪性肝病小鼠的体重、肝重、白色脂肪;组织学上,消脂方明显改善肝组织脂肪变性和肝脏脂滴密度;明显降低非酒精性脂肪肝小鼠血清和肝脏的TC、TG含量,降低肝脏损伤指标ALT;明显改善非酒精性脂肪肝小鼠血糖水平、胰岛素抵抗。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其应用,具体地说,是以中草药为原料制成的中成药。
【背景技术】
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是一种代谢失调性疾病,以非酒精因素导致的肝脏内脂质堆积和肝细胞大泡性脂肪病变为特征的临床综合征,常伴有血脂紊乱,胰岛素抵抗等,严重可进展为非酒精性脂肪肝炎、肝硬化和肝癌。据全球流行病学调查,NAFLD在全球的发病率为10%~30%,亚洲国家平均为11%~16%,其中我国的患病率约为15%。NAFLD的发病机制非常复杂,涉及多个途径,包括胰岛素抵抗、炎症、脂肪毒性、脂肪代谢紊乱、氧化应激等。非酒精性脂肪肝目前没有特效药物,现有的降糖和降脂药物存在明显的副作用包括食欲不佳、腹胀、腹泻等消化道病症以及肝脏转氨酶上升和亚急性黄疸等。
中国专利文献CN201410539945.0,公告日2014年10月14日,公开了一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其应用,该中药组合物由下列重量份数比的重要原料制成:绞股蓝330-340份、炒白术330-340份、丹参330-340份、泽泻490-510份、制半夏330-340份、荷叶330-340份、玄明粉160-170份、炒陈皮330-340份、山楂330-340份;
中国专利文献CN201310404423.5,公告日2013年12月25日,公开了一种治疗高脂血症的中药丸剂,该中药丸剂是由下述重量配比的原料制成的:全瓜蒌、胆南星、法半夏、炒泽泻、茯苓、生山楂、制首乌、金樱子、丹参、草决明、合欢皮、荷叶、绞骨兰、制黄精。
诸如此类治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物有很多,但是都有或多或少的缺点,例如,药味过多,取材难,价格昂贵;药效不明显,治疗效果差等。因此,亟需一种治疗非酒精性脂肪肝效果明显、药味数少、便于制备的药物。
【发明内容】
本发明的目的是针对现有技术中的不足,提供一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物。
本发明的再一目的是,提供一种上述药物的用途。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案是:
一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物,是由以下重量份的原料药制成:荷叶1-5份、全瓜蒌1-5份、绞股蓝1-5份、冬瓜皮1-5份、丹参1-5份、杠板归1-5份。
优选地,所述的中药组合物是由以下重量份的原料药制成:荷叶2-4份、全瓜蒌2-4份、绞股蓝2-4份、冬瓜皮2-4份、丹参2-4份、杠板归2-4份。
更优选地,所述的中药组合物是由以下重量份的原料药制成:荷叶3份、全瓜蒌3份、绞股蓝3份、冬瓜皮3份、丹参3份、杠板归3份。
所述的药物的药剂是胶囊、颗粒、片剂、口服液、合剂或糖浆剂。
为实现上述第二个目的,本发明采取的技术方案是:
所述的药物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
优选地,所述的非酒精性脂肪肝为单纯性脂肪性肝病、非酒精性脂肪肝炎和脂肪肝浸润。
本发明优点在于:
本发明中药组合物(消脂方)能够有效地改善非酒精性脂肪肝病,具体表现为:在小鼠模型实验中,能够降低非酒精性脂肪肝小鼠的肝脏脂滴密度和肝脏TC、TG;降低肝脏损伤指标ALT;降低小鼠体重、肝重;改善血糖水平;改善小鼠胰岛素抵抗。
【附图说明】
图1非酒精性脂肪肝小鼠体重变化图;
图2非酒精性脂肪肝小鼠给药后摄食量变化图;
图3非酒精性脂肪肝小鼠肝重统计图;
图4非酒精性脂肪肝小鼠血清和肝脏TC、TG变化统计图;
图5非酒精性脂肪肝小鼠肝脏对比图;
图6非酒精性脂肪肝小鼠肝脏损伤HE染色结果图;
图7非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂滴堆积油红O染色图;
图8非酒精性脂肪肝小鼠腹股沟白色脂肪组织对比图;
图9非酒精性脂肪肝小鼠背部棕色脂肪组织对比图;
图10非酒精性脂肪肝小鼠血清AST、ALT检测统计图;
图11非酒精性脂肪肝小鼠糖耐量变化图;
图12非酒精性脂肪肝小鼠胰岛素耐量变化图。
【具体实施方式】
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(一)
荷叶3份、全瓜蒌3份、绞股蓝3份、冬瓜皮3份、丹参3份、杠板归3份,常规方法煎煮。
实施例2治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(二)
荷叶3份、全瓜蒌2份、绞股蓝4份、冬瓜皮1份、丹参5份、杠板归3份,常规方法煎煮。
实施例3治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(三)
荷叶2份、全瓜蒌4份、绞股蓝1份、冬瓜皮5份、丹参3份、杠板归2份,常规方法煎煮。
实施例4治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(四)
荷叶4份、全瓜蒌1份、绞股蓝5份、冬瓜皮3份、丹参2份、杠板归4份,常规方法煎煮。
实施例5治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(五)
荷叶1份、全瓜蒌5份、绞股蓝3份、冬瓜皮2份、丹参4份、杠板归1份,常规方法煎煮。
实施例6治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(六)
荷叶5份、全瓜蒌3份、绞股蓝2份、冬瓜皮4份、丹参1份、杠板归5份,常规方法煎煮。
实施例7治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(七)
荷叶3份、全瓜蒌4份、绞股蓝1份、冬瓜皮5份、丹参3份、杠板归2份,常规方法煎煮。
实施例8治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(八)
荷叶2份、全瓜蒌1份、绞股蓝5份、冬瓜皮3份、丹参2份、杠板归4份,常规方法煎煮。
实施例9治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(九)
荷叶4份、全瓜蒌5份、绞股蓝3份、冬瓜皮2份、丹参4份、杠板归1份,常规方法煎煮。
实施例10治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(十)
荷叶1份、全瓜蒌3份、绞股蓝2份、冬瓜皮4份、丹参1份、杠板归5份,常规方法煎煮。
实施例11治疗非酒精性脂肪肝药物的制备(十一)
荷叶5份、全瓜蒌2份、绞股蓝4份、冬瓜皮1份、丹参5份、杠板归3份,常规方法煎煮。
需要说明的是,实施例1-11所述的常规方法煎煮是中药汤剂常规的制作方法,即将所述的原料药加水煎煮成汤剂。
实施例12治疗非酒精性脂肪肝药物片剂/胶囊的制备
取实施例1-11任一所述的药物,加9-11倍量水,煎煮2-3.5小时,滤出药汁。再加9倍量水,煎煮2.5小时,滤出药汁,合并二次煎液,静置,滤取上清液,浓缩,放冷,加浓缩液3倍量酒精,搅拌沉淀过夜。取上清液,浓缩至稠浸膏;加入制药辅料,真空干燥,粉碎制粒,压制成片剂或填充装胶囊。
实施例13治疗非酒精性脂肪肝药物颗粒的制备
取实施例1-11任一所述的药物,加8-10倍量水,煎煮3小时,滤出药汁。再加10倍量水,煎煮2.5小时,滤出药汁,合并二次煎液,静置,滤取上清液,浓缩,放冷,加浓缩液2倍量酒精,搅拌沉淀过夜。取上清液,浓缩至稠浸膏;加适当制药辅料,制粒,干燥,整粒,得20g颗粒,分装10g/袋。
实施例14治疗非酒精性脂肪肝药物合剂/口服液/糖浆剂的制备
取实施例1-11任一所述的药物,加8-11倍量水,煎煮3小时,滤出药汁。再加8倍量水,煎煮3小时,滤出药汁,合并二次煎液,静置,滤取上清液,浓缩,放冷,加浓缩液3.5倍量酒精,搅拌沉淀过夜。取上清液,浓缩至稠浸膏;加适当制药辅料,制成合剂、口服液或糖浆剂。
实施例15动物实验
1.实验材料
1.1药物
高脂饲料+消脂方(HFD+XZF)组:荷叶3份、全瓜蒌3份、绞股蓝3份、冬瓜皮3份、丹参3份、杠板归3份(购自上海中医药大学曙光医院);
正常饲养(NCD)组:生理盐水;
高脂饲料(HFD)组:生理盐水。
1.2动物
24只雄性C57BL/6小鼠,体重20~25g,6周龄,购自杰斯捷公司。
1.3试剂及仪器
石蜡、二甲苯、伊红、苏木精、中性树胶、油红染液、日立全自动生化分析仪。
2.方法
2.1制作消脂方冻干粉
将900g XZF在2000ml蒸馏水中正常条件下浸泡1h,然后加热回流1h,过滤纯化提取液,再次浓缩残液。提取液在减压下固化浓缩,然后进一步冷冻干燥成细粉,得到187g消脂方冻干粉,最终获得率20.78%。
2.2造模及分组给药
采用高脂饲料(HFD)喂养小鼠,HFD中脂肪提供60%饲料总热量。长期(高于2个月)喂食HFD的小鼠将自然进展为肝脏脂肪变性;经适应性喂养7天后,小鼠随机纳入正常饲养(NCD)组8只、高脂饲料(HFD)组8只,高脂饲料+消脂方(HFD+XZF)组8只。喂食HFD饲料8周诱导肥胖后继续喂食HFD饲料,同时(HFD+XZF)组灌胃给药,NCD组、HFD组生理盐水灌胃,连续8周。每周记录一次食物的重量来测量食物的摄入量,每周检测记录一次小鼠的体重变化。消脂方剂量以人/小鼠转换系数转换=180g/60kg*9.1约等于27.3g/kg/d=5.67g/kg/d冻干粉(生理盐水溶解)。
2.3取材
取材前过夜禁食但不禁水,取材当日以1%戊巴比妥钠50mg/kg、体积50μL/10g腹腔注射麻醉小鼠并称重记录,待小鼠充分麻醉后,小鼠眼球取血,收集全血,室温放置半小时,3000rpm离心15min,收集的血清-80℃下保存。取血后老鼠脱颈处死,于正中线逐层剪开胸壁,将左肝叶平均分为两块,各放入4%多聚甲醛中固定,剩余肝脏放入EP管中液氮冷冻保存备用。将小鼠腹股沟处两条长条状白色脂肪组织与背部蝶状棕色脂肪组织取出,分别放入4%多聚甲醛和EP管中液氮保存备用。
2.4组织H&E染色和油红染色
(1)H&E染色
将石蜡切片脱蜡至水,按以下步骤处理切片,二甲苯浸泡30min,100%酒精10min,95%酒精10min,ddH2O(两次蒸馏过的超纯水)10min,苏木精10min,流水冲洗5min,伊红90s,流水冲洗10min,95%酒精20s,100%酒精20s,二甲苯20s,中性树胶封片。
(2)油红染色
新鲜冰冻切片固定:将冰冻切片复温干燥,固定液中固定15min,自来水洗后晾干。切片入油红染液浸染8-10min(加盖避光)。背景分化:取出切片,停留3s后依次浸入两缸60%异丙醇分化,各3s、5s。切片依次浸入2缸纯水中浸洗,各10s。苏木素染色:取出切片,停留3s后浸入苏木素复染3-5min,3缸纯水浸洗,各5s、10s、30s。分化液(以60%酒精为溶剂)分化2-8s,2缸蒸馏水洗各10s,返蓝液返蓝1s,将切片轻轻浸入2缸自来水中浸洗,各5s、10s,镜检染色效果。封片:甘油明胶封片剂封片。
2.5胰岛素耐量实验
胰岛素用生理盐水稀释,注射剂量为浓度0.2U/kg。0、15、30、60、90、120、150min测血糖;上午禁食4小时,正常饮水。下午试验,称体重,标记序号,注射胰岛素前测血糖,胰岛素按体重计算注射量,在0、15、30、45、60、90、120、150min分别测血糖,实验完毕,每笼补充上饲料。
2.6葡萄糖耐受实验
用生理盐水配制10%葡萄糖溶液,注射剂量为1g/kg。前一天下午5点禁食不禁水16h,即次日上午9点。注射前测血糖,腹腔注射葡萄糖,每g注射0.01ml,每只间隔0、15、30、60、90、120、150min分别测血糖,实验完毕后,每笼补充饲料。
2.7检测指标
(1)小鼠的摄食量、体重的测量:每周记录一次食物的重量来测量食物的摄入量,每周检测记录一次小鼠的体重变化。
(2)生化指标检测:使用日立全自动生化分析仪测定小鼠血清中血脂及肝功相关指标。
2.8统计学方法
所有统计分析均使用GraphpadPrism 8软件进行。结果以均数±标准差表示。配对和未配对数据采用Student-t检验进行评估。多组比较采用单向AONVA评估。P<0.05为差异有统计学意义。(*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001;#P<0.05;##P<0.01;###P<0.001)
3.结果
3.1消脂方对体重和摄食量的影响
如图1、图2所示,与NCD对照组相比,在不影响摄食量的情况下,HFD模型组小鼠体重明显增加(P<0.01),而与HFD模型组相比,HFD+XZF小鼠体重明显下降(P<0.01)。结果说明,消脂方能够降低高脂饮食诱发的小鼠体重。
3.2消脂方对于非酒精性脂肪肝的肝重影响
如图3所示,与HFD模型组相比,消脂方处理可以显著降低HFD小鼠的肝重(P<0.01),表明其具有治疗脂肪肝的效果。
3.3消脂方分别对非酒精性脂肪肝的血清和肝脏的甘油三酯和总胆固醇的影响
如图4所示,与HFD模型组相比,消脂方治疗8周可以显著降低小鼠的血清和肝脏的甘油三酯(TG)的含量(P<0.05、P<0.01)、血清和肝脏的总胆固醇的含量(TC)(P<0.001、P<0.001)。
3.4消脂方对于肝脏形态的影响
如图5、图6、图7所示,与NCD对照组相比,HFD模型组小鼠出现了明显的肝脏的脂肪变性、小叶炎症,肝细胞气球样变以及脂滴堆积;与HFD模型组相比,HFD+XZF组小鼠肝脏脂肪变性、小叶炎症,肝细胞气球样变和脂滴堆积明显减少。结果表明,消脂方能够改善高脂饮食引起的小鼠肝脏脂肪变性和损伤。
3.5消脂方对于白色脂肪和棕色脂肪组织的影响
如图8、图9所示,与NCD对照组相比,HFD组白色脂肪组织(说明书中呈现灰色)和棕色脂肪组织(说明书中呈现灰色)的规模明显增加(P<0.001),与模型组相比,消脂方治疗明显降低了小鼠的白色脂肪组织(P<0.001)和棕色脂肪组织的规模(P<0.05),表明消脂方可以通过减少脂肪的含量减轻体重。
3.6消脂方对于肝功能的影响
如图10所示,与NCD对照组相比,HFD小鼠肝功ALT明显升高,AST未见明显变化;与HFD模型组相比,HFD+XZF组小鼠ALT明显降低,AST未见明显变化,表明消脂方有护肝作用。
3.7消脂方对于葡萄糖耐受实验(GTT)和胰岛素抵抗实验(ITT)的影响
如图11、图12所示,HFD喂养小鼠GTT(0、15、30、60、90、120min)和ITT(0、15、30、150min)值明显高于正常饲料喂养小鼠,在腹腔糖耐量实验中表现出明显的胰岛素抵抗。消脂方给药后,小鼠糖耐量以及胰岛素敏感性得到明显改善。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明方法的前提下,还可以做出若干改进和补充,这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物,其特征在于,是由下列重量份的原料药制成:荷叶1-5份、全瓜蒌1-5份、绞股蓝1-5份、冬瓜皮1-5份、丹参1-5份、杠板归1-5份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,是由下列重量份的原料药制成:荷叶2-4份、全瓜蒌2-4份、绞股蓝2-4份、冬瓜皮2-4份、丹参2-4份、杠板归2-4份。
3.根据权利要求2所述的中药组合物,其特征在于,是由下列重量份的原料药制成:荷叶3份、全瓜蒌3份、绞股蓝3份、冬瓜皮3份、丹参3份、杠板归3份。
4.根据权利要求1-3所述的中药组合物,其特征在于,所述的中药组合物剂型是胶囊、颗粒、片剂、口服液、合剂或糖浆剂。
5.根据权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
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