CN115466271A - 六环石蒜碱衍生物、其药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，六环石蒜碱衍生物、其药物组合物及其制备方法和用途。涉及一类如通式(Ⅰ)所示的六环石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐，其制备方法、药物组合物及其应用。所述的六环石蒜碱衍生物具有明显的抗肿瘤和抗病毒活性，可用于治疗肿瘤及病毒性疾病。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一类新的六环石蒜碱衍生物及其制备方法，含有它们的药物组合物，和其在制备抗肿瘤和抗病毒药物中的用途。
背景技术
石蒜碱(Lycorine)于1877年首次从石蒜科植物洋水仙(Narcissuspseudonarcissus)中分离得到，其在石蒜科植物中有广泛的分布。因独特的结构和丰富的药理活性，石蒜碱备受药物化学家和药理学家青睐。石蒜碱的药理作用包含了抗癌、抗病毒、抗寄生虫、抗菌、抗炎、抑制乙酰胆碱酯酶等。其中，抗癌和抗病毒活性尤其受到广泛关注。
石蒜碱具有抗癌谱广的特点，体内外实验表明，石蒜碱对多种癌症有较好的抑制活性，包括白血病、多发性骨髓瘤、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、大细胞肺癌、结肠癌、肝癌、黑色素瘤和胶质瘤、骨肉瘤等，且IC50值通常低于7.5μM。石蒜碱同时具有毒性小的优势，其在有效浓度时，对正常细胞的毒性很小，同时在小鼠模型中，5-20mg/kg/day的石蒜碱不引起明显的体重改变，且HE染色法结果显示实验结束后正常组织无明显病理学改变。对于抗耐药癌细胞，石蒜碱也展示出较好的抑制活性，例如对阿霉素有耐药性的癌细胞、耐各种促凋亡剂的多形性成胶质瘤细胞U373和小细胞肺癌细胞A549。
在抗病毒方面，研究表明，体内外实验表明石蒜碱有广谱的抗病毒活性，包括单纯疱疹病毒、逆转录病毒HIV-1、冠状病毒SARS-CoV、SARS-CoV-2、脊髓灰质炎病毒(PV)、西尼罗河病毒(WNV)、登革热病毒、黄热病病毒、肠道病毒EV71、流感病毒、丙肝病毒和寨卡病毒。发明人前期亦公开了一类石蒜碱衍生物具有抗病毒活性(授权公告号CN 110759927 B，申请日期：2018.07.27)。
虽然石蒜碱兼具抗肿瘤和抗病毒活性，但是由于作用不强、药理机制不明确、代谢性质不佳等问题，石蒜碱的进一步临床开发一直受限。现有的结构修饰并未得到理想的提高抗肿瘤活性的衍生物，抗病毒的有利修饰位点也待进一步开发。本发明聚焦石蒜碱的1,2位羟基，展开深入的结构优化探索，获得一类全新的六环衍生物，未见文献及专利报道。该类化合物的抗肿瘤活性有着显著的提高，同时也展示了良好的抗病毒潜力。
参考文献:
[1]曾炳麟,赵茹,潘显道.石蒜碱药理活性及构效关系研究进展[J].天然产物研究与开发,2021,33(02):342-351.
[2]Wang HQ,et al.Lycorine derivative LY-55inhibits EV71 and CVA16replication through downregulating autophagy[J].Front Cell Infect Microbiol,2019,9:277-277.
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一类石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐和其制备方法，及其药物组合物在制备抗肿瘤及抗病毒药物中的用途。
为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是提供了一类具有下列通式(Ⅰ)所示的石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐：
其中：X为O或S；
R为C6-10芳环或取代芳环，C3-10芳杂环或取代芳杂环，取代或未取代的C1-10直链烷基或支链烷基，取代或未取代的C3-7环烷基或杂环烷基。
所述芳杂环和杂环烷基至少含有一个选自N、O、S中的杂原子；
所述的取代芳环或取代杂芳环的取代基选自卤素、硝基、氨基、酰基、氰基、甲巯基、卤代甲基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基；
所述的取代直链烷基、取代支链烷基、取代环烷基和取代杂环烷基的取代基选自炔基、烯基、卤素、甲巯基，苯基；
所述芳环选自苯基和吡啶基，取代基在苯基上的取代位置为对位、间位、邻位，取代基数目为单取代、双取代或多取代。
所述取代直链烷基、取代支链烷基或取代环烷基的取代基数目为单取代、双取代或多取代。
最优选的六环石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐，选自如下化合物：
本发明技术方案的第二方面是提供了上表所述的化合物的制备方法：
石蒜碱在碱的作用下，在非质子性溶剂中，与取代的异氰酸酯或异硫氰酸酯反应，直接得到式(I)所示化合物；
石蒜碱先和R’取代的异硫氰酸酯反应得到中间体，再和取代的异氰酸酯或异硫氰酸酯反应，得到式(I)所示化合物。
其中，R的定义如本发明第一方面所述，R’为取代或未取代的苯基，取代基选自卤素、氨基、酰基、甲巯基、卤代甲基、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基，取代基在苯基上的取代位置为对位、间位、邻位，取代基数目为单取代、双取代或多取代。
所述的碱选自K2CO3、NaOH、KOH、NaH、LDA、KHMDS、NaHMDS、正丁基锂、叔丁醇钾、叔丁醇钠。优选地选自NaH、LDA、KHMDS、NaHMDS、正丁基锂，更有选NaH。
所述的非质子性溶剂选自DMSO、DMF、丙酮、乙腈、乙醚、四氢呋喃、氯仿、四氯化碳、二氯甲烷。优选地选自DMSO、DMF、四氢呋喃。更有选DMF。
本发明的化合物分子中含有碱性基团，可如本专业公认的那样，通过酸处理，转化成药学上可接受的盐。这类成盐的例子包含无机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐或磷酸氢盐等以及有机酸盐如甲酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、丁二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、葡糖酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等。
本发明技术方案的第三方面是提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包含本发明第一方面所述的石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的化合物可以例如胶囊剂，片剂，粉剂，粒剂，糖浆或类似剂型形式口服给药，或通过注射，软膏，栓剂或类似剂型非肠胃给药。这些药物制剂可通过使用本领域熟知的辅助剂，如粘合剂，赋形剂，稳定剂，崩解剂，矫味剂，润滑剂等等以普通方法生成，虽然剂量随症状和病人的年龄，疾病或失调的性质及严重性和给药的途径和方式而变，但对成年病人口服给药的情况来说，本发明化合物正常给药为每天总剂量1至200mg，优选为5至50mg，以为单剂量，或者为分剂量形式；例如每日二次或三次；对于静脉注射的情况，每天可以分一至三次给用0.1至100mg，优选为5至50mg的剂量。
本发明技术方案的第四方面是提供了第一方面所述石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐或第三方面所述药物组合物在制备抗肿瘤和抗病毒药物中的应用；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、肝癌、脑胶质瘤、胃癌、结肠癌和血液系统肿瘤；所述的抗病毒选自抗手足口病病毒EV71与CAV16。
有益技术效果
本发明重点提供具有通式(Ⅰ)所示的石蒜碱六环衍生物，主要在石蒜碱的1,2位羟基上引入了不同的取代基团并成环。通过初步的抗肿瘤和抗病毒活性筛选显示，此类衍生物比石蒜碱的抗肿瘤活性提高，提示此类衍生物具有较好的抗肿瘤前景。
附图说明
图1X射线单晶衍射确证实施例13的结构
图2石蒜碱及其系列衍生物抑制乳腺肿瘤生长情况(注：图中编号LY60：实施例2、LY68：实施例3、LY54：实施例11、LY56：实施例23)
图3石蒜碱衍生物体内抗肿瘤结果
具体实施方式
缩写词：
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲基亚砜
HMDS：六甲基二硅胺
LDA：二异丙基氨基锂
LY：石蒜碱
5-FU：5-氟尿嘧啶
本发明公开了一类六环石蒜碱衍生物，含有它们的盐、溶剂合物、前药与药物组合物的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
向反应瓶中依次加入石蒜碱(230mg,0.8mmol)，DMF(5mL),异硫氰酸乙酯(175μL,2.0mmol)，冰浴下加入NaH(83mg,2.1mmol)，在氩气保护下室温搅拌，后升温至50℃反应。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(51mg，产率18％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.82(s,1H,H-11),6.54(s,1H,H-8),5.93-5.88(m,2H,H-12),5.62-5.60(m,1H,H-3),5.48-5.45(m,1H,H-1),4.73-4.69(m,1H,H-2),4.11-4.02(m,2H,H-7,N-CH2),3.56(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.38-3.27(m,2H),2.88-2.78(m,2H),2.66-2.55(m,2H),2.46-2.39(m,1H),1.29(td,J＝7.2,1.2Hz,3H,CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ185.97,149.79,146.62,146.59,129.20,125.49,111.84,107.30,105.64,101.06,76.20,60.35,58.84,56.07,52.89,44.16,41.39,29.24,12.25.HRMS(ESI)m/z calcd forC19H21N2O3S[M+H]+357.1267,found357.1237.
实施例2
向反应瓶中依次加入石蒜碱(861mg,0.5mmol)，DMF(18mL),异硫氰酸正丁酯(925μL,7.5mmol)，冰浴下加入NaH(312mg,7.8mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约60mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(403mg，产率35％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.83(s,1H,H-11),6.55(s,1H,H-8),5.94(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.90(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.63-5.61(m,1H,H-3),5.48(dd,J＝8.1,2.6Hz,1H,H-1),4.72-4.68(m,1H,H-2),4.11-4.07(m,2H,H-7,N-CH2),3.57(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.30-3.22(m,2H),2.87-2.86(m,1H),2.80(d,J＝10.5Hz,1H),2.71-2.57(m,2H),2.46-2.39(m,1H),1.73-1.66(m,2H,CH2),1.47-1.37(m,2H,CH2),0.99(t,J＝7.3Hz,CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.39,149.84,146.65,146.62,129.26,125.52,111.70,107.33,105.66,101.09,76.17,60.41,59.13,56.13,52.93,46.13,44.21,29.26,28.97,20.02,13.81.HRMS(ESI)m/z calcd for C21H25N2O3S[M+H]+385.1580,found 385.1597.
实施例3
向反应瓶中依次加入石蒜碱(861mg,3mmol)，DMF(18mL),异硫氰酸异丁酯(920μL,7.5mmol)，冰浴下加入NaH(312mg,7.8mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约60mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(380mg，产率33％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.84(s,1H,H-11),6.57(s,1H,H-8),5.92(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.89(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.64-5.62(m,1H,H-3),5.49(dd,J＝7.9,2.4Hz,1H,H-1),4.70-4.67(m,1H,H-2),4.10(d,J＝14.4Hz,1H,H-7),3.97(dd,J＝13.8,9.4Hz,N-CH2),3.58(d,J＝14.4Hz,1H,H-7),3.33-3.29(m,1H),3.02(dd,J＝13.8,5.9Hz,N-CH2),2.93-2.83(m,2H),2.67-2.61(m,2H),2.49-2.42(m,1H),2.15-2.11(m,1H,CH-(CH3)2)1.02(d,J＝6.7Hz,3H,CH3),0.97(d,J＝6.7Hz,3H,CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ187.01,149.40,146.70,128.90,125.44,111.66,107.31,105.63,101.11,76.02,60.43,59.46,55.97,53.46,52.92,43.92,29.19,26.58,20.36,19.81.HRMS(ESI)m/z calcd forC21H25N2O3S[M+H]+385.1580,found 385.1575.
实施例4
向反应瓶中依次加入石蒜碱(215mg,0.75mmol)，DMF(5mL),异硫氰酸叔丁酯(350μL,2.15mmol)，冰浴下加入NaH(78mg,1.95mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得类白色固体(52mg，产率18％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.81(s,1H,H-11),6.55(s,1H,H-8),5.93(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.89(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.62-5.61(m,1H,H-3),5.33(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H,H-1),4.86-4.83(m,1H,H-2),4.10(d,J＝14.2Hz,2H,H-7),3.56(d,J＝14.2Hz,1H,H-7),3.32-3.30(m,1H),2.96-2.94(m,1H),2.85(d,J＝10.3Hz,1H),2.66-2.62(m,2H),2.47-2.40(m,1H),1.71(s,9H,CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ185.54,147.80,146.62,146.60,129.29,125.72,114.42,107.42,105.22,101.06,77.39,77.07,76.75,75.41,61.58,60.57,57.28,56.44,53.11,42.93,29.23,28.24.HRMS(ESI)m/z calcd for C21H25N2O3S[M+H]+385.1580,found385.1576.
实施例5
向反应瓶中依次加入石蒜碱(215mg,0.75mmol)，DMF(5mL),异硫氰酸环己酯(300μL,2.15mmol)，冰浴下加入NaH(78mg,1.95mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(153mg，产率50％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.82(s,1H,H-11),6.55(s,1H,H-8),5.94(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.90(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.59-5.57(m,1H,H-3),5.40(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H,H-1),4.75-4.72(m,1H,H-2),4.31-4.23(m,1H,N-CH),4.10(d,J＝14.5Hz,2H,H-7),3.59(d,J＝14.5Hz,1H,H-7),3.31-3.30(m,1H),2.88(s,2H),2.66-2.57(m,2H),2.49-2.42(m,1H),2.21-2.18(m,1H),1.98-1.72(m,4H),1.62-1.12(m,5H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ185.84,148.04,146.59,146.57,129.16,125.59,114.47,107.34,105.58,101.09,76.65,60.17,57.96,57.88,56.14,52.95,43.76,31.57,30.59,29.26,25.66,25.61,25.53.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H27N2O3S[M+H]+411.1737,found 411.1730.
实施例6
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),3-(甲硫基)丙基异硫氰酸酯(200μL,1.5mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(89mg，产率43％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.84(s,1H,H-11),6.56(s,1H,H-8),5.94(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.91(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.68-5.66(m,1H,H-3),5.51(dd,J＝8.3,2.8Hz,1H,H-1),4.76-4.72(m,1H,H-2),4.13-4.05(m,2H,H-7,N-CH),3.60(d,J＝13.8Hz,1H,H-7),3.47-3.40(m,1H),3.35-3.31(m,1H),2.92-2.83(m,2H),2.69-2.63(m,2H),2.62-2.58(m,2H),2.48-2.45(m,1H),2.15(s,3H,CH3),2.13-2.06(m,1H),2.01-1.94(m,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ186.65,146.69,146.67,125.38,111.87,107.34,105.65,101.13,76.28,60.40,59.67,55.99,52.93,45.37,44.03,31.37,29.26,26.25,15.72.HRMS(ESI)m/zcalcd for C21H25N2O3S2[M+H]+417.1301,found 417.1297.
实施例7
向反应瓶中依次加入石蒜碱(230mg,0.8mmol)，DMF(5mL),异硫氰酸苯甲酯(265μL,2.0mmol)，冰浴下加入NaH(83mg,2.1mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(33mg，产率10％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38-7.32(m,5H,Ar-5H),6.82(s,1H,H-11),6.54(s,1H,H-8),5.92(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.89(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.56-5.51(m,2H,H-3,N-CH2-Ph),5.43(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H,H-1),4.48-4.44(m,1H,H-2),4.20(d,J＝15.8Hz,1H,N-CH2-Ph),4.07(d,J＝14.2Hz,1H,H-7),3.57(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.31-3.26(m,1H),2.81(s,2H),2.63-2.59(m,2H),2.45-2.41(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.91,149.93,146.68,146.63,134.95,129.23,129.07,128.42,128.27,125.44,111.56,107.34,105.65,101.10,76.45,60.43,58.23,56.09,52.92,50.38,44.27,29.28.HRMS(ESI)m/zcalcd for C24H23N2O3S[M+H]+419.1424,found 419.1415.
实施例8
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),异硫氰酸苯酯(145μL,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得类白色固体(91mg，产率45％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.49-7.38(m,5H,Ar-H),6.91(s,1H,H-12),6.59(s,1H,H-8),5.96(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.93(d,J＝1.4Hz,1H,H-12)5.77(dd,J＝8.0,1.9Hz,1H,H-1),5.42(s,1H,H-3),5.08(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H,H-2),4.15(d,J＝14.6Hz,1H,H-7),3.67(d,J＝14.6Hz,1H,H-7),3.36(s,1H),3.04(s,2H),2.66(s,2H),2.57(s,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.64,146.85,146.82,137.78,129.52,128.56,127.35,125.34,113.02,107.39,105.65,101.21,77.26,63.56,60.41,55.90,53.04,43.79,29.18.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H21N2O3S[M+H]+405.1267,found 405.1275.
实施例9
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),4-氟苯基异硫氰酸酯(230mg,1.5mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得类白色固体(99mg，产率47％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.39(m,2H,Ar-H),7.21-7.14(m,2H,Ar-H),6.89(s,1H,H-11),6.58(s,1H,H-8),5.96(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.93(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.76(d,J＝8.4Hz,1H,H-1),5.39(s,1H,H-3),5.04-5.01(m,1H,H-2),4.14(d,J＝13.9Hz,1H,H-7),3.62(d,J＝13.9Hz,1H,H-7),3.36-3.31(m,1H),2.96(s,2H),2.66-2.64(m,2H),2.52-2.48(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ187.05,162.14(d,J＝254.4Hz),149.55,146.76,146.69,133.82(d,J＝3.4Hz),129.46(d,J＝8.9Hz),129.28,125.30,116.56(d,J＝22.6Hz),112.37,107.41,105.55,101.16,77.02,63.68,60.43,56.17,53.00,44.17,29.25.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H20FN2O3S[M+H]+423.1173,found 423.1162.
实施例10
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),4-氯苯基异硫氰酸酯(212mg,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(68mg，产率31％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44-7.39(m,4H,Ar-H),6.89(s,1H,H-11),6.59(s,1H,H-8),5.96(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.93(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.77(d,J＝8.1Hz,1H,H-1),5.40-5.38(m,1H,H-3),5.07-5.04(m,1H,H-2),4.14(d,J＝14.0Hz,1H,H-7),3.62(d,J＝14.0Hz,1H,H-7),3.37-3.33(m,1H),3.01(s,2H),2.65-2.64(m,2H),2.56-2.54(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.60,146.80,136.26,134.25,129.71,128.69,128.68,125.20,112.62,107.40,105.54,101.19,76.86,63.40,60.35,55.86,52.97,43.76,29.18.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H20ClN2O3S[M+H]+439.0897,found 439.0856.
实施例11
向反应瓶中依次加入石蒜碱(861mg,3mmol)，DMF(18mL),4-溴苯基异硫氰酸酯(1.6g,7.5mmol)，冰浴下加入NaH(312mg,7.8mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约60mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用适量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(1.1g，产率76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.61-7.58(m,2H,Ar-H),7.37-7.33(m,2H,Ar-H),6.88(s,1H,H-11),6.59(s,1H,H-8),5.96(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.93(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.75(dd,J＝8.1,1.4Hz,1H,H-1),5.39-5.37(m,1H,H-3),5.07-5.04(m,1H,H-2),4.13(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.62(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.36-3.31(m,1H),2.97(s,2H),2.63(s,2H),2.53-2.48(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.62,146.81,146.75,136.87,132.73,128.98,125.23,122.32,112.36,107.43,105.54,101.19,76.96,63.43,60.41,56.09,52.99,44.07,29.23.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H20BrN2O3S[M+H]+483.0373,found 483.0377.
实施例12
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),4-碘苯基异硫氰酸酯(326mg,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得类白色固体(172mg，产率65％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.80(d,J＝8.2Hz,2H,Ar-H),7.23(d,J＝8.2Hz,2H,Ar-H),6.89(s,1H,H-11),6.59(s,1H,H-8),5.97(s,1H,H-12),5.94(s,1H,H-12),5.76(d,J＝8.2Hz,1H,H-1),5.41(s,1H,H-3),5.09-5.06(m,1H,H-2),4.15(d,J＝12.8Hz,1H,H-7),3.67(d,J＝12.8Hz,1H,H-7),3.37(s,1H),3.03(s,2H),2.66(s,2H),2.56(s,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.48,146.85,138.71,137.55,129.09,125.19,112.59,107.43,105.56,101.22,93.87,76.86,63.34,60.40,55.95,53.00,43.88,29.21.HRMS(ESI)m/zcalcd for C23H20IN2O3S[M+H]+531.0234,found 531.0226.
实施例13
向反应瓶中依次加入石蒜碱(861mg,3mmol)，DMF(18mL),4-乙基苯基异硫氰酸酯(1140μL,7.5mmol)，冰浴下加入NaH(312mg,7.8mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约60mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用适量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(544mg，产率42％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.34-7.29(m,4H,Ar-H),6.90(s,1H,H-11),6.58(s,1H,H-8),5.96(s,1H,H-12),5.92(s,1H,H-12),5.75(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H,H-1),5.42-5.41(m,1H,H-3),5.05-5.03(m,1H,H-2),4.14(d,J＝13.8Hz,1H,H-7),3.64(d,J＝13.8Hz,1H,H-7),3.35-3.33(m,1H),3.00-2.97(m,2H),2.72-2.67(m,2H),2.53-2.52(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.69,146.73,144.71,135.30,128.92,127.12,125.41,112.87,107.36,105.61,101.13,76.75,63.64,60.40,56.05,53.01,43.97,29.16,28.54,15.22.HRMS(ESI)m/z calcd for C25H25N2O3S[M+H]+433.1580,found433.1576.该结构已通过X-射线单晶衍射确证结构(附图1)。
实施例14
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),4-甲氧基苯基异硫氰酸酯(175μL,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得类白色固体(128mg，产率59％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.34-7.30(m,2H,Ar-H),6.99-6.95(m,2H,Ar-H),6.90(s,1H,H-11),6.58(s,1H,H-8),5.96(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.93(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.75(dd,J＝8.0,2.1Hz,1H,H-1),5.43-5.41(m,1H,H-3),5.01-4.98(m,1H,H-2),4.14(d,J＝13.4Hz,1H,H-7),3.84(s,3H,OCH3),3.67(d,J＝13.4Hz,1H,H-7),3.36-3.34(m,1H),3.06-2.99(m,2H),2.66(s,2H),2.56(s,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ187.02,159.43,146.83,146.80,130.45,128.71,125.42,114.74,113.09,107.39,105.66,101.20,63.71,60.42,55.93,55.54,53.05,43.83,29.20.HRMS(ESI)m/z calcd for C24H23N2O4S[M+H]+435.1373,found435.1381.
实施例15
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),4-甲硫基苯基异硫氰酸酯(272mg,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(74mg，产率33％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝8.4Hz,2H,Ar-H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H,Ar-H),6.89(s,1H,H-11),6.59(s,1H,H-8),5.96(s,1H,H-12),5.94(s,1H,H-12),5.75(d,J＝7.6Hz,1H,H-1),5.43(s,1H,H-3),5.05-5.02(m,1H,H-2),4.16(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.71(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.39(s,1H),3.09(s,2H),2.74-2.65(m,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.58,146.94,139.64,134.45,128.27,127.60,126.92,125.21，118.80,107.39,105.66,101.30,76.56,63.44,60.43,55.57,53.06,43.39,29.13,15.56.HRMS(ESI)m/zcalcd for C24H23N2O3S2[M+H]+451.1154,found 451.1134.
实施例16
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),3,4-二甲氧基苯基异硫氰酸酯(244mg,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(90mg，产率39％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.01(d,J＝2.1Hz,1H,Ar-H),6.96-6.91(m,2H,Ar-H),6.89(s,1H,H-11),6.58(s,1H,H-8),5.96(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.92(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.74(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H,H-1),5.43-5.41(m,1H,H-3),5.04-5.01(m,1H,H-2),4.13(d,J＝14.0Hz,1H,H-7),3.91(s,3H,OCH3),3.89(s,3H,OCH3),3.62(d,J＝14.0Hz,1H,H-7),3.35-3.32(m,1H),2.99-2.93(m,2H),2.64-2.63(m,2H),2.52-2.46(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.81,149.35,149.04,149.01,146.73,146.68,130.63,129.29,125.43,119.48,112.68,111.19,110.95,107.40,105.56,101.14,76.86,63.82,60.47,56.21,56.06,53.03,44.14,29.24.HRMS(ESI)m/z calcd for C25H24N2O5S[M+H]+465.1479,found465.1472.
实施例17
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),3,4-亚甲基二氧苯基异硫氰酸酯(224mg,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得类白色固体(83mg，产率37％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.88-6.81(m,4H,Ar-H),6.57(s,1H,H-8),6.02(s,2H,O-CH2-O),5.95(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.94(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.73(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H,H-1),5.44(s,1H,H-3),4.97-4.94(m,1H,H-2),4.14(d,J＝14.0Hz,1H,H-7),3.68(d,J＝14.0Hz,1H,H-7),3.37(s,1H),3.05(s,2H),2.68-2.59(m,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ187.03,148.26,147.76,146.98,146.91,131.55,125.35,121.15,113.23,108.79,108.56,107.37,105.64,101.92,101.21,63.78,60.40,55.75,53.01,43.69,29.18.HRMS(ESI)m/z calcd for C24H21N2O5S[M+H]+449.1166,found 449.1151.
实施例18
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),4-三氟甲基苯基异硫氰酸酯(305mg,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得类白色固体(78mg，产率34％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(d,J＝8.6Hz,2H,Ar-H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H,Ar-H),6.90(s,1H,H-11),6.60(s,1H,H-8),5.97(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.94(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.79(d,J＝8.1Hz,1H,H-1),5.40(s,1H,H-3),5.19-5.16(m,1H,H-2),4.15(d,J＝15.3Hz,1H,H-7),3.66(d,J＝15.3Hz,1H,H-7),3.36(s,1H),3.02(s,2H),2.66(s,2H),2.53(s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ186.41,146.88,140.90,130.34,130.08,127.42,126.70,126.67,126.64,126.61,125.07,124.73,122.57,107.44,105.52,101.24,76.91,63.26,60.41,55.96,52.99,43.95,29.20.HRMS(ESI)m/z calcd for C24H20FN2O3S[M+H]+473.1141,found465.1145.
实施例19
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),4-硝基苯基异硫氰酸酯(225mg,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌，后升温至50℃反应。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(54mg，产率24％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29-8.25(m,2H,Ar-H),7.87-7.83(m,2H,Ar-H),6.86(s,1H,H-11),6.62(s,1H,H-8),5.98(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.95(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.84(s,1H,H-1),5.55(d,J＝7.7Hz,1H,H-3),5.53-5.28(m,1H,H-2),4.18(d,J＝13.8Hz,1H,H-7),3.74-3.71(m,1H,H-7),3.40-3.39(m,1H),3.10(s,2H),2.72-2.63(m,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.67,146.95,143.49,143.16,125.16,118.69,111.99,107.56,105.15,101.32,77.37,77.25,77.05,76.73,71.40,60.31,56.77,55.87,53.12,43.42,29.14.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H20N3O5S[M+H]+451.1145,found 451.1133.
实施例20
向反应瓶中依次加入石蒜碱(143mg,0.5mmol)，DMF(5mL),4-氰基苯基异硫氰酸酯(200mg,1.25mmol)，冰浴下加入NaH(52mg,1.3mmol)，在氩气保护下室温搅拌，，后升温至50℃反应。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得类白色固体(60mg，产率29％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.76(d,J＝8.6Hz,2H,Ar-H),7.72(d,J＝8.6Hz,2H,Ar-H),6.88(s,1H,H-11),6.60(s,1H,H-8),5.97(s,1H,H-12),5.95(s,1H,H-12),5.78(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H,H-1),5.40-5.39(m,1H,H-3),5.22-5.19(m,1H,H-2),4.14(d,J＝14.0Hz,1H,H-7),3.64(d,J＝14.0Hz,1H,H-7),3.35-3.34(m,1H),3.04-3.00(m,1H),2.67-2.64(m,2H),2.53(s,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ186.15,146.90,146.82,141.82,133.33,127.44,125.00,118.05,112.02,111.72,107.49,105.45,101.26,76.99,63.03,60.37,55.98,52.95,43.91,29.24.HRMS(ESI)m/z calcd for C24H20N3O3S[M+H]+430.1220,found430.1210.
实施例21
中间体合成：
向反应瓶中依次加入石蒜碱(861mg,3mmol)，DMF(20mL),苯基异硫氰酸酯(340μL,2.85mmol)，冰浴下加入NaH(114mg,2.85mmol)，在氩气保护下室温搅拌至原料反应完全。冰浴下滴加15mL饱和NaHCO3,搅拌片刻后加入乙酸乙酯和水萃取，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得到590mg白色固体(600mg，产率48％)。
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ10.04(s,1H,NH),7.82(s,1H,Ar-H),7.37-7.11(m,4H,Ar-H),6.90(s,1H,H-11),6.63(s,1H,H-8),6.04(s,1H,H-2),5.94(s,2H,H-12),5.62-5.59(m,1H,H-3),4.80-4.72(m,1H,H-1),4.38(s,1H,OH),4.11(d,J＝14.1Hz,H-7),3.43(d,J＝14.1Hz,H-7),3.31-3.27(m,1H),2.87-2.81(m,1H),2.67-2.53(m,3H),2.35-2.28(m,1H).13C NMR(100MHz,Acetone)δ188.22,147.17,146.92,131.01,129.66,129.39,125.89,123.54,122.74,107.91,106.01,101.76,68.92,68.81,61.76,57.82,54.36,43.07,29.34.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H23N2O4S[M+H]+423.1373,found 423.1358.
目标化合物合成：
将上述产物(163mg,0.4mmol)溶于4mL DMF中，加入3-吡啶基异硫氰酸酯(68μL,0.6mmol)，冰浴下加入NaH(42mg,1.04mmol),氩气保护下室温搅拌至原料反应完全。冰浴下向反应也中滴加15mL饱和NaHCO3，加入乙酸乙酯和水萃取，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝25：1)得到黄色固体(32mg，产率20％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(d,J＝2.5Hz,1H,Ar-H),8.64-8.62(m,1H,Ar-H),7.92-7.89(m,1H,Ar-H),7.44-7.41(m,1H,Ar-H),6.90(s,1H,H-11),6.60(s,1H,H-8),5.97(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.94(d,J＝1.5Hz,1H,H-12),5.81(d,J＝8.00Hz,1H,H-1),5.41(s,1H,H-3),5.16-5.13(m,1H,H-2),4.15(d,J＝14.4Hz,1H,H-7),3.66(d,J＝14.4Hz,1H,H-7),3.38-3.33(m,1H),3.03(s,2H),2.66-2.65(m,2H),2.56-2.54(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ187.06,149.28,148.34,146.85,146.82,135.15,134.74,125.09,123.89,112.31,107.42,105.51,101.21,77.11,63.22,60.37,55.92,52.95,43.89,29.23.HRMS(ESI)m/z calcd for C22H20N3O3S[M+H]+406.1220,found 406.1223.
实施例22
向反应瓶中依次加入石蒜碱(430mg,1.5mmol)，DMF(10mL),4-氯苯基异氰酸酯(480μL,3.75mmol)，冰浴下加入NaH(156mg,3.9mmol)，在氩气保护下室温搅拌，后升至50℃反应。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(152mg，产率24％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57-7.53(m,2H,Ar-H),7.37-7.33(m,2H,Ar-H),6.86(s,1H,H-11),6.59(s,1H,H-8),5.96(d,J＝1.3Hz,1H,H-12),5.93(d,J＝1.3Hz,1H,H-12),5.69-5.67(m,H-3),5.49(dd,J＝7.6,1,6Hz,1H,H-1),5.14-5.1(m,1H,H-2),4.13(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.62(d,J＝14.1Hz,1H,H-7),3.35-3.31(m,1H),2.95(s,2H),2.65-2.60(m,2H),2.49-2.47(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ154.38,148.54,146.69,146.67,135.96,130.12,129.33,129.27,125.64,121.91,112.51,107.46,105.29,101.16,71.35,60.39,57.30,56.26,53.15,44.04,29.11.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H20ClN2O4[M+H]+423.1106,found 423.1104.
实施例23
向反应瓶中依次加入石蒜碱(287mg,1mmol)，DMF(8mL),4-甲基苯基异氰酸酯(320μL,2.5mmol)，冰浴下加入NaH(208mg,2.6mmol)，在氩气保护下室温搅拌，后升至50℃反应。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约25mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(92mg，产率23％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝6.6Hz,2H,Ar-H),7.13(d,J＝6.6Hz,2H,Ar-H),6.81(s,1H,H-11),6.52(s,1H,H-8),5.89(s,1H,H-12),5.86(s,1H,H-12),5.69(s,1H,H-3),5.41(d,J＝7.3Hz,1H,H-1),5.05(s,1H,H-2),4.07(d,J＝14.2Hz,1H,H-7),3.53(d,J＝14.2Hz,1H,H-7),3.27-3.23(m,1H),2.86(s,2H),2.53-2.52(m,2H),2.38(s,1H),2.28(s,3H,CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ154.71,146.66,146.63,134.85,134.68,129.84,125.88,121.30,113.20,107.41,105.41,101.13,71.25,60.42,57.58,56.28,53.20,44.10,29.07,20.89.HRMS(ESI)m/z calcd for C24H23N2O4[M+H]+403.1652,found403.1653.
实施例24
向反应瓶中依次加入石蒜碱(230mg,0.8mmol)，DMF(5mL),4-氟苯基异氰酸酯(230μL,2mmol)，冰浴下加入NaH(83mg,2.1mmol)，在氩气保护下室温搅拌，后升至50℃反应。TLC检测反应至原料消失，且目标化合物为主斑点(展开剂：乙酸乙酯，Rf＝0.4)，冰浴下向反应液中滴加约15mL饱和NaHCO3，室温搅拌片刻后过滤，滤饼用适量水洗涤，后过滤再用少量乙酸乙酯搅洗，过滤，得黄色固体(36mg，产率11％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54-7.50(m,2H,Ar-H),7.11-7.06(m,2H,Ar-H),6.86(s,1H,H-11),6.59(s,1H,H-8),5.95(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.92(d,J＝1.4Hz,1H,H-12),5.63-5.61(m,1H,H-3),5.49(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H,H-1),5.10-5.07(m,1H,H-2),4.13(d,J＝13.7Hz,1H,H-7),3.61(d,J＝13.7Hz,1H,H-7),3.35-3.30(m,1H),2.93(s,2H),2.64-2.59(m,2H),2.49-2.43(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ160.04(d,J＝251.2Hz),154.76,148.42,146.61,133.25(d,J＝2.8Hz),129.32,125.71,123.39(d,J＝8.5Hz),116.02(d,J＝22.2Hz),112.75,107.40,105.31,101.11,77.35,77.24,77.04,76.72,71.36,60.38,57.81,56.27,53.13,44.12,29.08.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H20FN2O4[M+H]+407.1402,found407.1398.
药理实验
实验例1：MTT法测定六环石蒜碱衍生物的细胞毒活性
用DMEM+10％FBS培养细胞，培养条件为37℃，5％CO2。细胞融合度达到80-90％时，用0.25％胰酶消化细胞。配制成一定浓度的单细胞悬液，根据细胞生长速度的差异，按2000-4000细胞/100μL/孔接种于96孔板中。24h后加入含不同浓度的药物及相应溶剂对照的新鲜培养基，每种受试化合物设6个剂量组(100，10，1，0.1，0.01，0.001μmol/L)。于37℃，5％CO2继续培养48h后，每孔加入10μL新鲜配制的含5mg/mLMTT的无血清培养基。孵箱放置4-6h后，吸弃上清，加入150μL DMSO，摇床振荡10min，分别在720、570nm下检测吸光度。按下列公式计算细胞活率：
细胞活率(％)＝化合物570-化合物720/DMSO570-DMSO720后通过通过Graphpad Prim9计算IC50。
表1石蒜碱衍生物MTT筛选结果
注：A549人非小细胞肺癌细胞；HepG2人肝癌细胞；Hs683神经胶质瘤细胞；HGC27人胃癌细胞；HCT116人结肠癌细胞；4T1小鼠乳腺癌细胞。
实验例2：体外抗EV71病毒实验
RD细胞接种到96孔板中(104个细胞/孔)，感染100个TCID50的EV71病毒。2小时后，给予不同浓度的衍生物。给药48小时后，加入MTT，酶标仪测定细胞存活率，计算EC50值；未感染的细胞，同样给予不同浓度的衍生物，用于测定CC50值。
表2化合物体外抗EV71结果
实验例3：实施例2、3、11、13对乳腺癌模型小鼠的治疗效果
选取实施例2(LY60)、实施例3(LY68)、实施例11(LY54)、实施例23(LY56)进行体内筛选。将4T1小鼠乳腺癌细胞置于DMEM+10％FBS的培养基中，于37℃，5％CO2的条件下进行培养。按2×105/100μL/只的剂量对Balb/c小鼠进行腹腔注射，7天后肿瘤大约增长至100mm3左右。将小鼠分为空白对照组(PEG400)，实验和阳性对照组(5-Fu,给药剂量40mg/kg)，阳性对照组(石蒜碱LY，按给药剂量分为10mg/kg和20mg/kg组)，待测化合物组(实施例2、3、11、13，分别按给药剂量分为10mg/kg和20mg/kg组)，共12组。每两天测量一次肿瘤大小，给药后第12天(注射细胞后第19天)称重，取材，共计给药6次。实验结束小鼠颈椎脱位处死，剥离肿瘤组织并称重，计算肿瘤抑制率。
表3石蒜碱及其衍生物对小鼠乳腺癌4T1的生长抑制作用
*石蒜碱和实施例13化合物按20mg/kg给药时小鼠死亡。
Claims (10)
1.一类具有下列通式(Ⅰ)所示的六环石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐：
其中：X为O或S；
R为取代或未取代的C6-10芳环，取代或未取代的C3-10芳杂环，取代或未取代的C1-10直链烷基或支链烷基，取代或未取代的C3-7环烷基，取代或未取代的C3-7杂环烷基；
所述芳杂环和杂环烷基至少含有一个选自N、O、S中的杂原子；
所述的芳环或芳杂环的取代基选自卤素、硝基、氨基、酰基、氰基、甲巯基、卤代甲基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基；
所述的C1-10直链烷基或支链烷基、C3-7环烷基、C3-7杂环烷基的取代基选自炔基、烯基、卤素、甲巯基，苯基。
2.根据权利要求1的石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述芳环选自苯基和吡啶基，取代基在苯基上的取代位置为对位、间位、邻位，取代基数目为单取代、双取代或多取代。
3.根据权利要求1的石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐，其特征在于，取代直链烷基、取代支链烷基或取代环烷基的取代基数目为单取代、双取代或多取代。
4.根据权利要求1的石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的化合物选自如下：
5.制备权利要求1至4任一项所述化合物的方法为：
方法1：
方法1：石蒜碱在碱的作用下，在非质子性溶剂中，与取代的异氰酸酯或异硫氰酸酯反应，直接得到式(I)所示化合物；
方法2：石蒜碱先和R’取代的异硫氰酸酯反应得到中间体，再和取代的异氰酸酯或异硫氰酸酯反应，得到式(I)所示化合物；
其中，R的定义如权利要求书1至4任一项所述，R’为取代或未取代的苯基，取代基选自卤素、氨基、酰基、甲巯基、卤代甲基、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基，取代基在苯基上的取代位置为对位、间位、邻位，取代基数目为单取代、双取代或多取代。
6.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含权利要求1-4任一项的石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。
7.根据权利要求6的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物选自片剂、胶囊剂、丸剂、注射剂、滴眼剂、喷雾剂、软膏剂。
8.根据权利要求6的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物选自控释给药剂型、缓释给药剂型、各种微粒给药系统。
9.如权利要求1-4任一项所述的石蒜碱衍生物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物或抗病毒药物中的应用。
10.根据权利要求9的应用，其特征在于，所述的肿瘤选自肺癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、脑胶质瘤等，但不限于上述肿瘤；所述的抗病毒选自抗手足口病病毒EV71、抗柯萨奇病毒A16。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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