CN115444791A

CN115444791A - 油橄榄叶发酵提取物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN115444791A
Application number: CN202210945956.3A
Authority: CN
Inventors: 何直源
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2022-08-08
Filing date: 2022-08-08
Publication date: 2022-12-09

Abstract

本申请公开了一种油橄榄叶发酵提取物及其制备方法和应用，所述一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法包括以下步骤：获取油橄榄叶，将所述油橄榄叶粉碎，过筛，得到待发酵粉料；对所述待发酵粉料进行灭菌处理，将灭菌处理后的待发酵粉料与大米粉、水混匀，得到固体发酵培养基；在所述固体发酵培养基中接种种子液，于30‑35℃的温度下发酵7‑12天，得到发酵产物；从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物。本申请解决了现有技术通过醇提或水提得到的油橄榄叶发酵提取物应用于皮肤的抗炎和舒缓的效果较差且生产成本较高的技术问题。

Description

油橄榄叶发酵提取物及其制备方法和应用

技术领域

本申请涉及植物提取技术领域，尤其涉及一种油橄榄叶发酵提取物及其制备方法和应用。

背景技术

上世纪中期，我国开始在西北地区推广种植油橄榄树，主要是为了加工生产橄榄油。随着油橄榄树种植面积的扩大，每年都需要进行修剪，修剪之后的油橄榄叶的量极大。随着对油橄榄叶的研究逐渐深入，我们发现油橄榄叶中含有大量活性成分，如橄榄苦苷、羟基酪醇、木酚素类、黄酮类和咖啡酰苯乙醇苷类等，越来越多研究证明油橄榄叶发酵提取物具有抗炎抑菌、抗氧化、抗病毒、降血糖血脂等多种药理活性，使得油橄榄叶发酵提取物的应用日益广泛。

然而，目前油橄榄叶发酵提取物的提取方法通常为条件温和的醇提或水提，得到的提取物应用于皮肤的抗炎和舒缓的效果并不显著，且提取率较低，即油橄榄叶的利用率较低，产生的油橄榄叶废弃物较多，这些油橄榄叶废弃物通常回收用作饲料，但对于油橄榄叶发酵提取物的厂家而言，油橄榄叶废弃物的回收价格较低，导致生产成本较高。

发明内容

本申请的主要目的在于提供一种油橄榄叶发酵提取物及其制备方法和应用，旨在解决现有技术通过醇提或水提得到的油橄榄叶发酵提取物应用于皮肤的抗炎和舒缓的效果较差且生产成本较高的技术问题。

为实现上述目的，本申请提供一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法，所述一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法包括以下步骤：

获取油橄榄叶，将所述油橄榄叶粉碎，过筛，得到待发酵粉料；

对所述待发酵粉料进行灭菌处理，将灭菌处理后的待发酵粉料与大米粉、水混匀，得到固体发酵培养基；

在所述固体发酵培养基中接种种子液，于30-35℃的温度下发酵7-12天，得到发酵产物；

从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物。

可选地，所述固体发酵培养基中各组分的质量分数为：

待发酵粉料20-30％、大米粉10-20％和余量的水。

可选地，所述种子液包括红曲霉种子液、芽孢杆菌种子液和酵母菌种子液，所述红曲霉种子液、所述芽孢杆菌种子液和所述酵母菌种子液的孢子数量比为2:2:1。

可选地，所述种子液的接种量为10-25％。

可选地，所述获取油橄榄叶，将所述油橄榄叶粉碎，过筛，得到待发酵粉料的步骤包括：

获取油橄榄叶，洗净，干燥，研磨，过筛，得到油橄榄叶粉末；

向所述油橄榄叶粉末中加入1-10倍质量的50-85v/v％的乙醇，进行提取，过滤，得到第一初级提取产物和待发酵粉料。

可选地，所述从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物的步骤包括：

对所述发酵产物进行提取，过滤后，得到发酵液；

将所述发酵液与所述第一初级提取产物按1:1-10:1的比例混合，得到第二初级提取产物；

将所述第二初级提取产物浓缩后，得到油橄榄叶发酵提取物。

向所述发酵产物中加入1-5倍质量的50-85v/v％的乙醇，在50-60℃的温度下，超声提取20-60min，过滤得到发酵液；

将所述发酵液浓缩后，得到油橄榄叶发酵提取物。

进一步地，本申请还提供一种油橄榄叶发酵提取物，所述油橄榄叶发酵提取物采用如上所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法制备得到。

进一步地，本申请还提供如上所述的油橄榄叶发酵提取物在制备具有抗炎和舒缓功能的化妆品或个人洗护用品中的应用。

进一步地，本申请还提供一种化妆品或个人洗护用品，所述化妆品或个人洗护产品中包括如上所述的油橄榄叶发酵提取物。

本申请提供了一种油橄榄叶发酵提取物及其制备方法和应用，所述油橄榄叶发酵提取物的制备方法包括步骤：获取油橄榄叶，将所述油橄榄叶粉碎，过筛，得到待发酵粉料；对所述待发酵粉料进行灭菌处理，将灭菌处理后的待发酵粉料与大米粉、水混匀，得到固体发酵培养基；在所述固体发酵培养基中接种种子液，于30-35℃的温度下发酵7-12天，得到发酵产物；从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物。通过上述技术方案，对油橄榄叶进行固态发酵，并对发酵产物进行提取，相比于条件温和的醇提或水提，为了减少提取工艺造成提取物中的活性成分失活，在实际提取过程中，收率通常3％左右，很难达到5％，本申请先发酵再提取的方式制备的油橄榄叶发酵提取物的抗炎和舒缓的效果更好，且收率可以达到8％以上，有效提高了油橄榄叶的利用率，降低生产成本，克服了现有技术通过醇提或水提得到的油橄榄叶发酵提取物应用于皮肤的抗炎和舒缓的效果较差且生产成本较高的技术问题。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，均属于本发明保护的范围。

本申请实施例提供一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法，在本申请一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法的一实施例中，所述一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法包括：

步骤S10，获取油橄榄叶，将所述油橄榄叶粉碎，过筛，得到待发酵粉料；

在本实施例中，油橄榄叶中的活性成分从开花开始逐渐积累，到油橄榄结果时达到较高的水平，在油橄榄果实成熟期，油橄榄叶中的活性成分逐渐降低，且青绿色的油橄榄叶中的活性成分比发黄后的油橄榄叶中的活性成分更高，故而在油橄榄开花到开始结果的时间段，采摘新鲜的青绿色的油橄榄叶作为原料，将采摘的所述油橄榄叶经过前处理后，破碎成粉末状，过筛，得到待发酵粉料，其中，所述前处理可以包括挑选、清洗、干燥、提取等，所述待发酵粉料的水分含量可以根据实际制备过程中的过筛情况、固体发酵培养基所需的水分含量等进行确定，本实施例对此不加以限制。

在一种可实施的方式中，所述待发酵粉料的水分含量为8-12％，即可以通过干燥的方式将所述待发酵粉料的水分含量控制在大于或等于8％，且小于或等于12％的范围内。

在一种可实施的方式中，所述过筛的目数为80-120目，例如80目、100 目、120目等。

步骤S11，获取油橄榄叶，洗净，干燥，研磨，过筛，得到油橄榄叶粉末；

步骤S12，向所述油橄榄叶粉末中加入1-10倍质量的50-85v/v％的乙醇，进行提取，过滤，得到第一初级提取产物和待发酵粉料。

在本实施例中，具体地，在油橄榄开花到开始结果的时间段，采摘新鲜的青绿色的油橄榄叶作为原料，将采摘的所述油橄榄叶清洗干净，常温下通风干燥，将干燥后的油橄榄叶研磨成粉末，过筛后，得到油橄榄叶粉末，向所述油橄榄叶粉末中加入50-85v/v％的乙醇，例如50v/v％的乙醇、70v/v％的乙醇、85v/v％的乙醇等，提取所述油橄榄叶粉末中的活性成分，提取后进行过滤，得到滤液和滤渣，所述滤液可直接作为第一初级提取产物，或者可以将所述滤液进行浓缩后得到的粉料作为第一初级提取产物，所述滤渣可以直接作为待发酵粉料，或者可以将所述滤渣进行浓缩后得到的粉料作为待发酵粉料，其中，所述50-85v/v％的乙醇的添加量为所述油橄榄叶粉末质量的1-10 倍，例如，1倍、5倍、10倍等，对所述油橄榄叶粉末进行提取的方式可以为浸提、超声提取、微波提取、回流提取等，可以根据现有技术结合实际测试结果等进行确定和调整，本实施例对此不加以限制。

需要说明的是，由于过滤后的滤渣还可以进一步进行发酵提取，故而提取所述第一初级提取产物时，可以无需过多考虑提取率的问题，进而可以严格控制提取的工艺条件，例如，可以在常温常压下，以一定浓度的乙醇进行浸提，如此得到的第一初级提取产物中的副产物较少，橄榄苦苷的含量较高。

步骤S20，对所述待发酵粉料进行灭菌处理，将灭菌处理后的待发酵粉料与大米粉、水混匀，得到固体发酵培养基；

在本实施例中，具体地，对所述待发酵粉料进行灭菌处理，以消除原料中的微生物对后续发酵过程的影响，将灭菌处理后的待发酵粉料与灭菌后的大米粉和水混合，搅拌均匀，得到固体发酵培养基，其中，所述灭菌处理可以为高温瞬时杀菌、紫外线灭菌等，可以根据大数据和实际测试结果等，选择活性成分损失较小的灭菌方式。

可选地，所述固体发酵培养基中各组分的质量分数为：

待发酵粉料20-30％、大米粉10-20％和余量的水。

在本实施例中，具体地，所述固体发酵培养基包括20-30％的待发酵粉料，例如20％、24.5％、30％等，10-20％的大米粉，例如10％，16.5％、20％等，余量用水进行补足。

步骤S30，在所述固体发酵培养基中接种种子液，于30-35℃的温度下发酵7-12天，得到发酵产物；

在本实施例中，具体地，将预先制备的种子液接种与所述固体发酵培养基中，将接种后的固体发酵培养基放入恒温箱中，设置恒温箱温度为30-35℃，发酵7-12天，取出，得到发酵产物，其中，所述种子液可以购买市售菌种，在使用前按照使用说明进行活化、培养等得到，每毫升所述种子液中应含有 10⁵-10⁷个孢子。

可选地，所述种子液的接种量为10-25％，例如，10％、18％、25％等。

步骤S40，从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物。

在本实施例中，具体地，用水或醇对所述发酵产物进行活性成分的提取，提取后过滤得到发酵液，对所述发酵液进行后处理，得到油橄榄叶发酵提取物，其中，对所述发酵产物进行活性成分的提取的方式可以为浸提、超声提取、微波提取、回流提取等，可以根据现有技术结合实际测试结果等进行确定和调整，本实施例对此不加以限制，所述后处理包括过滤、浓缩等。

所述从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物的步骤包括：

步骤A10，向所述发酵产物中加入1-5倍质量的50-85v/v％的乙醇，在 50-60℃的温度下，超声提取20-60min，过滤得到发酵液；

步骤A20，将所述发酵液浓缩后，得到油橄榄叶发酵提取物。

在本实施例中，具体地，向所述发酵产物中加入50-85v/v％的乙醇，例如 50v/v％的乙醇、75v/v％的乙醇、85v/v％的乙醇等，在50-60℃的温度下，超声提取20-60min，例如20min、45min、60min等，过滤得到发酵液，其中，所述50-85v/v％的乙醇的添加量为所述油橄榄叶粉末质量的1-5倍，例如，1 倍、3倍、5倍等，将所述发酵液进行浓缩处理，得到成品的油橄榄叶发酵提取物。

步骤B10，对所述发酵产物进行提取，过滤后，得到发酵液；

步骤B20，将所述发酵液与所述第一初级提取产物按1:1-10:1的比例混合，得到第二初级提取产物；

步骤B30，将所述第二初级提取产物浓缩后，得到油橄榄叶发酵提取物。

在本实施例中，具体地，用水或醇对所述发酵产物进行活性成分的提取，提取后过滤得到发酵液，将所述发酵液与所述第一初级提取产物按1:1-10:1 的体积比或质量比进行混合，例如1:1、3:1、10:1等，得到第二初级提取产物，将所述第二初级提取产物进行浓缩处理，得到成品的油橄榄叶发酵提取物。

在本实施例中，所述第一初级提取产物的提取工艺条件温和，活性成分的降解程度较低，橄榄苦苷为所述第一初级提取产物中的主要活性成分，所述第一初级提取产物中橄榄苦苷的得率约2-5％，而发酵提取主要是对橄榄叶中的多酚类物质进行转化和提取，发酵液中羟基酪醇的提取率可以达到 80-95％，总多酚的提取率可以达到85％以上，将第一初级提取产物与发酵液混合制备的油橄榄叶发酵提取物的抗炎和舒缓效果优于所述第一初级提取产物。

在本实施例中，提供了一种油橄榄叶发酵提取物及其制备方法和应用，所述油橄榄叶发酵提取物的制备方法包括步骤：获取油橄榄叶，将所述油橄榄叶粉碎，过筛，得到待发酵粉料；对所述待发酵粉料进行灭菌处理，将灭菌处理后的待发酵粉料与大米粉、水混匀，得到固体发酵培养基；在所述固体发酵培养基中接种种子液，于30-35℃的温度下发酵7-12天，得到发酵产物；从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物。通过上述技术方案，对油橄榄叶进行固态发酵，并对发酵产物进行提取，相比于条件温和的醇提或水提，为了减少提取工艺造成提取物中的活性成分失活，在实际提取过程中，收率通常3％左右，很难达到5％，本申请先发酵再提取的方式制备的油橄榄叶发酵提取物的抗炎和舒缓的效果更好，且收率可以达到8％以上，有效提高了油橄榄叶的利用率，降低生产成本，克服了现有技术通过醇提或水提得到的油橄榄叶发酵提取物应用于皮肤的抗炎和舒缓的效果较差且生产成本较高的技术问题。

进一步地，本申请还提供一种油橄榄叶发酵提取物，所述油橄榄叶发酵提取物采用如上所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法制备得到。本申请提供的油橄榄叶发酵提取物，具有优越的抗炎和舒缓功能，可应用于制备具有抗炎和舒缓功能的化妆品或个人洗护用品中，解决了现有技术通过醇提或水提得到的油橄榄叶发酵提取物应用于皮肤的抗炎和舒缓的效果较差且生产成本较高的技术问题。与现有技术相比，本发明实施例提供的油橄榄叶发酵提取物的有益效果与上述实施例的油橄榄叶发酵提取物的制备方法的有益效果相同，在此不做赘述。

进一步地，本申请还提供一种化妆品或个人洗护用品，所述化妆品或个人洗护产品中包括如上所述的油橄榄叶发酵提取物。解决了现有技术通过醇提或水提得到的油橄榄叶发酵提取物应用于皮肤的抗炎和舒缓的效果较差且生产成本较高的技术问题。与现有技术相比，本发明实施例提供的油橄榄叶发酵提取物的有益效果与上述实施例的油橄榄叶发酵提取物的制备方法的有益效果相同，在此不做赘述。

为了进一步理解本申请，下面结合实施例对本申请提供的一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法进行具体地描述。本发明实施例均采用商品化的市售原料。

实施例1

在油橄榄开花到开始结果的时间段，采摘新鲜的青绿色的油橄榄叶作为原料，洗净，干燥，研磨，过筛，得到待发酵粉料；对所述待发酵粉料进行灭菌处理，称取待发酵粉料10kg、大米粉6kg和水24kg，混匀，得到固体发酵培养基；在所述固体发酵培养基中接种2.4L红曲霉种子液(约10⁶个孢子 /mL)、2.4L芽孢杆菌种子液(约10⁶个孢子/mL)和1.2L酵母菌种子液(约 10⁶个孢子/mL)，于30-35℃的温度下发酵8天，得到发酵产物；向所述发酵产物中加入80v/v％的乙醇150L，在50-60℃的温度下，超声提取40min，过滤得到发酵液；将所述发酵液减压浓缩，制得油橄榄叶发酵提取物，干燥后可得到1027.3g提取物粉末。

实施例2

在油橄榄开花到开始结果的时间段，采摘新鲜的青绿色的油橄榄叶作为原料，洗净，干燥，研磨，过筛，得到油橄榄叶粉末；向10kg油橄榄叶粉末中加入80v/v％的乙醇100L，常温常压下，搅拌均匀，浸提6h后，过滤，得到滤渣，对所述滤渣进行干燥，得到9.6kg待发酵粉料，对所述待发酵粉料进行灭菌处理，称取大米粉6kg和水24kg，混匀，得到固体发酵培养基；在所述固体发酵培养基中接种2.4L红曲霉种子液(约10⁶个孢子/mL)、2.4L芽孢杆菌种子液(约10⁶个孢子/mL)和1.2L酵母菌种子液(约10⁶个孢子/mL)，于30-35℃的温度下发酵8天，得到发酵产物；向所述发酵产物中加入80v/v％的乙醇150L，在50-60℃的温度下，超声提取40min，过滤得到发酵液；将所述发酵液减压浓缩，制得油橄榄叶发酵提取物，干燥后可得到823.6g提取物粉末。

实施例3

在油橄榄开花到开始结果的时间段，采摘新鲜的青绿色的油橄榄叶作为原料，洗净，干燥，研磨，过筛，得到油橄榄叶粉末；向10kg油橄榄叶粉末中加入80v/v％的乙醇100L，常温常压下，搅拌均匀，浸提6h后，过滤，得到滤渣，对所述滤渣进行干燥，得到9.6kg待发酵粉料，对所述待发酵粉料进行灭菌处理，称取大米粉6kg和水24kg，混匀，得到固体发酵培养基；在所述固体发酵培养基中接种2.4L红曲霉种子液(约10⁶个孢子/mL)、2.4L芽孢杆菌种子液(约10⁶个孢子/mL)和1.2L酵母菌种子液(约10⁶个孢子/mL)，于30-35℃的温度下发酵8天，得到发酵产物；向所述发酵产物中加入80v/v％的乙醇150L，在50-60℃的温度下，超声提取40min，过滤得到发酵液；将所述发酵液与所述第一初级提取产物等比例混合(多余的发酵液可直接减压浓缩或保存备用)，将所述混合液减压浓缩制得油橄榄叶发酵提取物，干燥后得到1082.5g提取物粉末。

对比例1

在油橄榄开花到开始结果的时间段，采摘新鲜的青绿色的油橄榄叶作为原料，洗净，干燥，研磨，过筛，得到油橄榄叶粉末；向10kg油橄榄叶粉末中加入80v/v％的乙醇100L，常温常压下，搅拌均匀，浸提6h后，过滤，得到滤液，将所述滤液减压浓缩制得油橄榄叶发酵提取物，干燥后得到221.8g 提取物粉末。

对比例2

在油橄榄开花到开始结果的时间段，采摘新鲜的青绿色的油橄榄叶作为原料，洗净，干燥，研磨，过筛，得到油橄榄叶粉末；向10kg油橄榄叶粉末中加入80v/v％的乙醇100L，在50℃下超声提取40min，过滤，得到滤液，将所述滤液减压浓缩制得油橄榄叶发酵提取物，干燥后得到426.1g提取物粉末。

安全性斑贴测试

选取30名志愿者分别测试上述实施例3的油橄榄叶发酵提取物，受试者将20μL产品涂于手臂内侧，外用胶带贴敷于外部，在0.5h，24h和48h观察皮肤反应，根据《化妆品卫生规范》中皮肤反应分级标准记录结果。试验结果显示，30例受试者中无皮肤不良反应。

油橄榄叶发酵提取物的抗炎试用试验

将实施例1-3和对比例1-2制备得到的油橄榄也提取物，根据现有技术的乳液配方，按照相同的原料比例混合配制成油橄榄叶乳液。在皮肤科医生的协助下，共选择100名面部长痘或相关炎症情况的志愿者，分成5组，每名志愿者早晚各使用一次实施油橄榄乳液，涂抹于面部，覆盖痘痘以及面部其他位置，在试用第3天、第7天和第14天做回访记录，皮肤科医生结合志愿者自身感受，对测试效果进行统计，试验结果如表1所示。

表1抗炎试用试验结果表

从表1可知，实施例1-3制备的油橄榄叶发酵提取物具有优异的抗炎功能，且抗炎效果明显优于对比例1-2。

油橄榄叶发酵提取物的刺激舒缓效果测试

使用乳酸制造刺激模型，在志愿者两侧鼻唇沟处同时敷贴浸透10％乳酸溶液的滤纸，等刺激分值≥2分时，左右两侧同时使用不同的测试样品，一侧用清水处理，一侧用实施例1-3和对比例1-2的样品处理；在样品使用前(0min) 和使用后0.5min、5min，由志愿者主观评价两侧鼻唇沟处的瘙痒、灼热、刺痛感觉，评分等级如表2所示。通过样品间刺激程度的对比，评价测试样品对刺激的即时舒缓功效及样品间的差异，测试结果如表3所示。

表2评分等级

表3刺激舒缓测试结果表

从表3可知，实施例1-3制备的油橄榄叶发酵提取物具有优异的舒缓功能，且舒缓效果明显优于对比例1-2。

以上仅为本申请的优选实施例，并非因此限制本申请的专利范围，凡是利用本申请说明书所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本申请的专利处理范围内。

Claims

1.一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法，其特征在于，所述一种油橄榄叶发酵提取物的制备方法包括以下步骤；

从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物。

2.如权利要求1所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法，其特征在于，所述固体发酵培养基中各组分的质量分数为：

待发酵粉料20-30％、大米粉10-20％和余量的水。

3.如权利要求2所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法，其特征在于，所述种子液包括红曲霉种子液、芽孢杆菌种子液和酵母菌种子液，所述红曲霉种子液、所述芽孢杆菌种子液和所述酵母菌种子液的孢子数量比为2:2:1。

4.如权利要求3所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法，其特征在于，所述种子液的接种量为10-25％。

5.如权利要求1所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法，其特征在于，所述获取油橄榄叶，将所述油橄榄叶粉碎，过筛，得到待发酵粉料的步骤包括：

6.如权利要求5所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法，其特征在于，所述从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物的步骤包括：

对所述发酵产物进行提取，过滤后，得到发酵液；

7.如权利要求1所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法，其特征在于，所述从所述发酵产物中提取得到油橄榄叶发酵提取物的步骤包括：

将所述发酵液浓缩后，得到油橄榄叶发酵提取物。

8.一种油橄榄叶发酵提取物，其特征在于，所述油橄榄叶发酵提取物采用如权利要求1至7任一项所述的油橄榄叶发酵提取物的制备方法制备得到。

9.如权利要求8所述的油橄榄叶发酵提取物在制备具有抗炎和舒缓功能的化妆品或个人洗护用品中的应用。

10.一种化妆品或个人洗护用品，其特征在于，所述化妆品或个人洗护产品中包括如权利要求8所述的油橄榄叶发酵提取物。